التأثير المفيد / غير المواتي للكيرسيتين على أغشية خلايا الورم الأرومي العصبي SK-N-SH الجزء 2

من فضلك اضغطoscar.xiao@wecistanche.comللمزيد من المعلومات

2.2.2. نشاط مضادات الأكسدة من كيرسيتين

لاختبار فعالية كيرسيتين في حماية الأغشية من الإجهاد التأكسدي ، أجريت تجارب تعرض فيها النماذج الدهنية للغشاء للأوزون في غياب （الشكل 4 أ） ووجود كيرسيتين بتركيز 6.25 ميكرومتر (الشكل 4 ب).

تحت تأثير الأوزون ، يتغير مسار كل من التبعيات ، أي π {{0}} f (A) و Cs -1= f (rn). تميزت متساوي الحرارة التي تم الحصول عليها لانتشار الطبقة الأحادية على الطور الفرعي المحتوي على الأوزون بانحدار أصغر والتحول نحو قيم A الأدنى. علاوة على ذلك ، انخفضت قيم Cs -1 تحت تأثير الأوزون. كانت هذه التغييرات أكبر عند تركيز الأوزون بحوالي 0.4 جزء في المليون.سينتانشلم تؤد الزيادة الأخرى في تركيز الأوزون إلى زيادة التغيرات في خصائص الطبقة الأحادية (الشكل 4 أ).

الشكل 4. متساوي ضغط السطح ومعامل الانضغاط المقابل (داخلي) للنموذج الدهني لطبقات الورم الأرومي العصبي المنتشرة على الطور الفرعي تحتوي على التركيزات المشار إليها للأوزون المذاب في المخزن المؤقت. متساوي الحرارة: (أ) في حالة عدم وجود مضادات الأكسدة ؛ （ب） في وجود كيرسيتين （6.25 ميكرومتر） يضاف إلى المخزن المؤقت المحتوي على الأوزون.

عندما تم إدخال كيرسيتين بتركيز 6.25 ميكرومتر في الطور الفرعي ، لم يؤثر الأوزون بشكل كبير على مسار درجة حرارة r (A) ؛ ومع ذلك ، تغيرت قيم معامل الانضغاط في وجود الأوزون بشكل مشابه كما في حالة غياب كيرسيتين (الشكل 4 ب داخلي).

الرجاء الضغط هنا لمعرفة المزيد

يتم عرض القيم العددية للمعلمات التي تميز الطبقات الأحادية المحددة بناءً على متساوي الحرارة التي تم الحصول عليها في الجدول 3.

الجدول 3. احتوت المعلمات السطحية للطبقات الأحادية Alim و Cs-I المحسوبة للطبقات الأحادية من نموذج غشاء الورم الأرومي العصبي المنتشر على الطور الفرعي على التركيزات المشار إليها من الأوزون المذاب في المخزن المؤقت في غياب وفي وجود كيرسيتين (6.25 ميكرومتر). تمثل البيانات المتوسط ​​من ثلاث تجارب ± SD. تشير الأحرف المختلفة إلى اختلافات كبيرة (p أقل من أو يساوي 0. 05).

في وجود الأوزون ، لوحظ انخفاض طفيف في مساحة السطح لكل جزيء (Alim) في طبقة أحادية معبأة بكثافة. الحد الأقصى لخفض هذه المعلمة هو 3.2 في المائة مقارنة بعنصر التحكم (أحادي الطبقة على المخزن المؤقت النقي). يتم أيضًا تقليل المعلمة Cs-I ، لتصل إلى قيم الهضبة عند تركيزات الأوزون أعلى من 0. 6 جزء في المليون O. يصل الحد الأقصى لخفض هذه المعلمة إلى 24 بالمائة فيما يتعلق بالتحكم.

عند وجود كيرسيتين بتركيز 6.25 ميكرومتر في الطور الفرعي ، تنخفض قيم أليم (1-2 بالمائة) بشكل طفيف ، بينما يكون الانخفاض في قيمة C -1 حوالي 27 بالمائة.

طبيعة تغيرات عالم في وجود الأوزون والأوزون بالاشتراك مع كيرسيتين دورات مختلفة. عند تركيز أوزون يبلغ حوالي 0 .3 جزء في المليون ، في حالة عدم وجود الكيرسيتين ، ينخفض ​​Aim بشكل مفاجئ إلى حوالي 88.3 A2. ثم تصل إلى الحد الأدنى لقيمة الهضبة مما يعطي اعتمادًا مميزًا على شكل S (الشكل 5 أ ، النقاط الحمراء). في وجود الكيرسيتين ، هناك انخفاض طفيف رتيب وسلس في Alim ، حيث يصل تركيز الأوزون الأعلى إلى هضبة تبلغ حوالي 93.5 A2 (الشكل 5 أ ، النقاط الخضراء).

الشكل 5. اعتماد المنطقة لكل جزيء على تركيز الأوزون (أ) واعتماد معامل الضغط على تركيز الأوزون (ب) لغشاء الورم الأرومي العصبي على الطور الفرعي: بدون نقاط الكيرسيتين الحمراء ؛ مع نقاط كيرسيتين الخضراء. لا تقدم الخطوط أي نموذج مادي ، وقد تم تركيبها رياضيًا وتم رسمها لتسهيل تتبع تغييرات المعلمات. تتغير قيم معامل ضغط الطبقة القصوى بالمثل مع تركيز الأوزون لكليهما: في غياب ووجود كيرسيتين (الشكل 5 ب).

3. مناقشة

تمت دراسة آلية عمل الكيرسيتين بشكل مكثف لسنوات عديدة ، لكن نتائج التجارب غالبًا ما تكون متناقضة وتشير إلى أنه في بعض الحالات ، يكون هذا المركب مفيدًا ، وفي حالات أخرى ، غير مناسب للخلايا. ويظهر تحليل الدراسات المتوفرة أن تأثير هذا المركب على الخلايا مرتبط بوجهين ، أي تفاعله مع الأغشية ونشاط مضادات الأكسدة. ومع ذلك ، في الخلايا ، لا يمكن التمييز بين هذين الأسلوبين من عمل كيرسيتين وتقييم مدى ملاءمة هذا المركب كمادة محتملة ، على سبيل المثال ، وجود نشاط مضاد للورم. لهذا السبب ، تم التخطيط للتجارب بطريقة تتيح تقييمًا نوعيًا وكميًا لتأثير هذا المركب على الخواص الميكانيكية للأغشية ، فضلًا عن نشاطه المضاد للأكسدة في النظام النموذجي ، مما يلغي آثار نشاط مسارات التمثيل الغذائي الأخرى.

بناءً على التجارب التي تم إجراؤها ، تم التأكيد على أنه حتى عند أدنى تركيزات (6.25 ميكرومتر) ، يعدل كيرسيتين (كما يتضح من الزيادة في Alimvalue) الطبقة الأحادية النموذجية ، محاكية الجزء الدهني من غشاء خلايا الورم الأرومي العصبي. يشير إلى إمكانية تفاعل الكيرسيتين مع أغشية هذه الخلايا عند الوصول إلى الدماغ ، حتى عند التركيزات المنخفضة. هذا مهم بشكل خاص للخلايا العصبية التي تحتوي أغشيتها على كميات كبيرة نسبيًا من الدهون.

يمكن أن يحسن القدر من المناعة

تبلغ النسبة التقريبية للبروتين الدهني للخلايا العصبية 80:20 بالمائة ، وعلى سبيل المثال ، بالنسبة لغشاء كرات الدم الحمراء ، تبلغ هذه النسبة 50:50 بالمائة [29]. يرتبط هذا المستوى من الدهون في غشاء الخلايا العصبية بدور هذه الخلايا في نقل الإشارات الكهربائية. في الوقت نفسه ، حتى التغييرات الطفيفة في الخواص الفيزيائية والكيميائية ، مثل المرونة والصلابة لغشاء الخلية ، يمكن أن تزعج هذه الوظيفة بشكل كبير.

يتم نقل جهد الفعل على طول غشاء الخلية العصبية بفضل عمل القنوات الأيونية ، وبعد ذلك ، بفضل عمل المضخات الأيونية ، يتم استعادة إمكانات الراحة. يعتمد الأداء السليم لهذه البروتينات (على وجه الخصوص ، الذي يحدده شكلها) بشكل وثيق على البيئة الدهنية. علاوة على ذلك ، قد تؤدي التغييرات في الخواص الميكانيكية للغشاء إلى اضطراب عمل القنوات التي تعتمد آلية بواباتها بدقة على الخواص الميكانيكية للغشاء.

تم تأكيد هذه الأطروحات من خلال الدراسات التي أظهرت أن تأثير الكيرسيتين على غشاء الخلية مرتبط ، من بين أمور أخرى ، بنقل أيونات Ca2 زائد و / أو Ca2 بالإضافة إلى التمثيل الغذائي [30،31]. وبالتالي ، فإن إدخال جزيئات الكيرسيتين في بيئة الغشاء (خاصة الخلايا العصبية) قد يكون له عواقب وخيمة على عملها.

للتحقق مما إذا كان عمل الكيرسيتين المحدد في الأنظمة النموذجية يلعب دورًا مفيدًا أو غير مواتٍ في الخلايا ، تمت مقارنة النتائج التي تم الحصول عليها للأغشية النموذجية مع تأثير هذا المركب على خلايا الورم الأرومي العصبي بالكامل. بالنسبة لخلايا SK-N-SH ، تم إجراء اختبار MTT ،استخراج Cistanche لمكافحة الزهايمرإعطاء معلومات حول قابلية الخلية للحياة للخلايا والتي بدورها تتناسب طرديًا مع إنزيمات نازعة الهيدروجين في الميتوكوندريا.

أظهرت النتائج المتحصل عليها أن وجود الكيرسيتين بتركيزات 100 و 200 ميكرومتر زاد من عدد الخلايا القابلة للحياة. تم الحصول على نتائج مماثلة بواسطة Bao et al. [32] ، التحقيق في تأثير الكيرسيتين على خلايا الكمبيوتر -12. كما تم فحص تسرب LDH في البيئة خارج الخلية ، والذي يعطي معلومات حول تمزق غشاء الخلية ، في نفس مستويات كيرسيتين. أظهرت النتائج التي تم الحصول عليها أن أغشية الخلايا المختبرة لم تتضرر في ظل هذه الظروف. بوتس وآخرون. [2] ، بدراسة آثار الكيرسيتين على الخلايا الظهارية للرئة ، لوحظت نتائج مماثلة. لذلك ، يمكن استنتاج أنه عند هذه التركيزات ، يكون للكيرسيتين تأثير إيجابي على الخلايا ، مما يزيد من قابليتها للحياة.

يتعلق الجانب الثاني المهم في آلية عمل كيرسيتين بخصائصه المضادة للأكسدة. لتقييم التأثير المرتبط بالبوليفينول المدروس ، أجريت تجارب تم فيها التحقق مما إذا كان كيرسيتين يلعب دورًا وقائيًا في الخلايا المعرضة للإجهاد التأكسدي. تم إنشاء الإجهاد التأكسدي عن طريق إدخال H ، O2 في بيئة الخلية.cistanche لتحسين الذاكرةكما هو موضح في هذه الدراسة ، يتسبب بيروكسيد الهيدروجين في موت الخلايا بشكل كبير ، معبرًا عنه كضرر للميتوكوندريا.

عندما تم زراعة خلايا SK-N-SH لمدة 3 ساعات في وسط يحتوي على 3 و 5 ملي مولار H O ، انخفضت صلاحية الخلية إلى ما يقرب من 44 في المائة من الخلايا غير المعالجة (مقايسة MTT). أظهرت الدراسات أن المعالجة المسبقة للخلايا باستخدام الكيرسيتين لمدة 24 ساعة تسبب زيادة في عدد الخلايا الحية مقارنة بالخلايا المعالجة بـ H2O2. Suematsu وآخرون. [13] ذكرت تأثيرات مماثلة.

قمنا أيضًا بقياس مستوى MDA ، وهو مؤشر حيوي للإجهاد التأكسدي كمنتج نهائي لأكسدة الدهون [33]. أدت المعالجة المسبقة للخلايا بتركيزات عالية من كيرسيتين ، متبوعة بإضافة بيروكسيد الهيدروجين ، إلى زيادة طفيفة في محتوى MDA مقارنة بالخلايا المعرضة لـ H O وحده. قد يكون هذا بسبب أن كيرسيتين (بتركيزات أعلى) يمكن أن يخضع أيضًا لتفعيل اختزال الأكسيد ويكون موضوعًا لدورة الأكسدة والاختزال ، مما ينتج عنه أنواع الأكسجين التفاعلية داخل الخلايا [34].

لم تكن هناك تغيرات كبيرة في تدمير الغشاء (كما يتضح من مستوى LDH غير المتغير) للخلايا المعالجة بالكيرسيتين و H2O2 مقارنة بالحالة التي تعرضت فيها الخلايا للإجهاد التأكسدي فقط. لذلك ، يمكن الاستنتاج أنه على الرغم من زيادة بيروكسيد الدهون (بتركيزات عالية من كيرسيتين) ، لم يكن هذا مهمًا بما يكفي لتدمير الأغشية وتعطيل استمراريتها.

تمت مواجهة الملاحظات التي تم الحصول عليها للنظام الأصلي مع تلك التي تم الحصول عليها لنظام نموذجي حيث يمكن التحكم بالضبط في كل من تركيز كيرسيتين ومستوى الإجهاد. تم التحقق من كيفية مقاومة الجزء الدهني من غشاء الورم الأرومي العصبي للإجهاد التأكسدي. تم إنشاء ظروف الإجهاد عن طريق إدخال الأوزون في المخزن المؤقت ، حيث يخضع الأوزون في البيئة المائية لتفاعلات تحلل تشكل جذورًا مؤكسدة ، من بين أمور أخرى ، جذور الهيدروكسيل وجذور الأنيون الفائق [35]. يتوافق الخليط الذي تم الحصول عليه من أنواع الأكسجين التفاعلية مع تلك التي تحدث بشكل طبيعي في الخلايا ، بسبب حالة اختلال التوازن في حالة الأكسدة والاختزال [36-38].

تحت تأثير الإجهاد ، تغير شكل متساوي الحرارة ، مما يشير إلى انخفاض كبير في المساحة لكل جزيء واحد في الطبقة الأحادية المكدسة بكثافة. حدثت هذه التغييرات بسبب أكسدة الروابط غير المشبعة في سلاسل الأحماض الدهنية. زاد هذا التأثير مع زيادة تركيز الأوزون إلى حوالي {{0}. 3 جزء في المليون ، ثم ظل معامل الأيزوثرم هذا عند نفس المستوى على الرغم من الزيادة في ROS. هذا يعني أنه عند تركيز الأوزون بحوالي 0.3 جزء في المليون ، تم أكسدة جميع الأحماض الدهنية غير المشبعة الموجودة في الطبقة الأحادية (في نموذج الورم الأرومي العصبي ، كان إجمالي كمية الأحماض الدهنية غير المشبعة 52 بالمائة)

الطبقات الأحادية المؤكسدة لها صلابة كبيرة ،cistanche في الصينيةكما تمثله قيمة Cs -1 (كلما زادت قيمة هذه المعلمة ، زادت صلابة الطبقة). في وجود الكيرسيتين ، حتى عند التركيز المنخفض 6.25 ميكرومتر） ، تم تقليل تعديلات الغشاء المعرض للأوزون ، كما هو متصور من خلال التغييرات في قيمة Alim ، بشكل كبير (الشكل 5 أ) ، مما يثبت نشاط مضادات الأكسدة لهذا المركب . وتجدر الإشارة ، مع ذلك ، إلى أنه على الرغم من أن كيرسيتين تخلصت من الجذور وحماية الأحماض الدهنية غير المشبعة من الأكسدة ، إلا أنها لم تعكس التغيرات في صلابة الأغشية (الشكل 5 ب).

وهكذا ، فقد تبين أن كيرسيتين يُظهر تأثيرًا مضادًا للأكسدة ، ولكن مجرد وجوده بين جزيئات الدهون يؤثر (يحدد) معاملات المرحضة ، أي على الرغم من حماية سلاسل الأحماض الدهنية من الأكسدة ، فإن صلابة الغشاء انخفضت بشكل ملحوظ (Cs- أقدر أقل بنحو 25 في المائة مقارنة بعنصر التحكم).

تشير هذه النتائج إلى أن تغير الغشاء هو العامل الرئيسي في التأثيرات الخلوية الناتجة عن وجود مادة الكيرسيتين. ومع ذلك ، فإن عواقب هذا التغيير (تعديل الإشارات ، والنقل) تختلف اعتمادًا على عدد جزيئات البوليفينول ، والتكوين الأولي للغشاء ، ووظيفة الخلية. وهذا ما يفسر لماذا يظهر تأثير وقائي للكيرسيتين في ظروف مختلفة وفي دراسات مختلفة ، بينما في حالات أخرى يكون عكس ذلك تمامًا.

في حالة الإجهاد التأكسدي العالي ، فإن التأثير المضاد للأكسدة يساعد الخلية من خلال حماية مكوناتها من التلف. ومع ذلك ، إذا تم تعديل الأغشية بشكل كبير عن طريق تحديد موقع هذا المركب في بيئتها مما يؤدي إلى توزيع الإشارات أو مسارات النقل عن طريق تغير صلابة الأغشية ، فقد يؤدي ذلك إلى تأثيرات غير مواتية. يجب أيضًا أن نتذكر أن العديد من العمليات في الخلية تحدث في وقت واحد ، سواء تلك المتعلقة بالأغشية أو تلك التي تولد الإجهاد التأكسدي. التأثير الذي يمكن ملاحظته وقياسه من خلال تحديد مستوى مؤشرات معينة هو دائمًا إجمالي. ومن ثم ، هناك حالات يُنظر فيها إلى تأثير الكيرسيتين على أنه إيجابي وغير موات.

4. المواد والطرق

4.1 المواد

تم إنشاء تكوين نموذج الجزء الدهني من غشاء خلايا الورم الأرومي العصبي بناءً على عمل مؤلفي [39-41]. الفوسفوليبيدات: 1- oleoyl -2- palmitoyl-sn-glycerol -3- phosphocholine؛ 1- hexacosanoyl-d 4-2- hydroxy-sn-glycerol -3- phosphocholine؛ 1 ، 2- dioleoyl-sn-glycerol -3- phosphocholine ؛ - - فوسفاتيديليثانولامين (دماغ) ؛ سفينغوميلين (دماغ) - (أفانتي بولار ليبيدز إنك ، ألاباستر ، ألابستر ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم مطاردة الكوليسترول (سيغما الدريتش ، دارمشتات ، ألمانيا). كانت نسبة الفوسفوليبيد إلى الكوليسترول 79 في المائة إلى 21 في المائة. كانت نسبة الأحماض الدهنية المشبعة إلى غير المشبعة 48 في المائة إلى 52 في المائة.

المذيبات (الكلوروفورم ، الإيثانول) للنقاوة الكيميائية - بوتش (جليفيتشي ، بولندا) ؛ ماء طازج منزوع الأيونات من إنتاج HLP 5 Hydrolab (سترازين ، بولندا). تم شراء وسط الاستزراع والمصل والمضادات الحيوية من CytoGen GmbH. تم الحصول على الكواشف الكيميائية المستخدمة في التجارب من Sigma Aldrich.

4.2 ثقافة الخلية

تمت زراعة خط خلايا الورم الأرومي العصبي البشري SK-N-SH (المجموعة الأوروبية لثقافات الخلايا المصدق عليها (ECACC) في 1 0 بالمائة من مصل بقري جنيني (FBS) في Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) ، مع استكماله بنسبة 0.01 بالمائة من البنسلين - الستربتومايسين عند درجة 37 في جو رطب ويحتوي على 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون.

4.3 قياس صلاحية الخلية (فحص MTT)

تم زرع الخلايا في لوحة بئر {0} بكثافة 1 × 104 خلية لكل بئر بحجم 0.1 مل. تمت معالجة الخلايا لمدة 24 ساعة بتركيزات مختلفة من كيرسيتين (3. 75-200 ميكرومتر）. بعد هذا الوقت ، تمت إضافة 3 ملي مولار و 5 ملي مولار بيروكسيد الهيدروجين لمدة 3 ساعات. نظرًا لعدم وجود اختلافات بين تأثيرات تركيزات HO2 عند 3 و 5 ميكرومتر ، للدراسات الإحصائية ، تم التعامل معها على أنها نفس المعالجات وتم وصفها بأنها معالجة 3-5 uM H2O2.

بعد ذلك 5 0 ميكرولتر MTT （3- 【4 ، 5- ثنائي ميثيل ثيازول -2- ييل】 -2 ، 5 محلول ثنائي فينيل رباعي بروميد） (محلول مخزون معقم من 5 ملغ / مل) إلى الخلايا واحتضانها لمدة ساعتين عند 37 درجة في جو مرطب بنسبة 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون. بعد ذلك ، تمت إضافة 0.4 مل من ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) إلى كل بئر وحفظها لمدة 10 دقائق. بعد الطرد المركزي ، تم قياس الكثافة الضوئية للمادة الطافية عند 570 نانومتر باستخدام قارئ لوحة ميكروليتر (BioTek Instruments ، VT ، الولايات المتحدة الأمريكية).

4.4 فحص تلف الغشاء العظمي (فحص LDH)

تم استخدام مقايسة اللاكتات ديهيدروجينيز (LDH) كعلامة لكامل غشاء الخلية.

تم زرع خلايا بحجم 1 × 1 {{1 0} * خلية لكل بئر في 96- صفيحة بئر وحضنت في وجود كيرسيتين （3. 75-200 ميكرومتر） لمدة 24 ساعة بعد ذلك ، تمت إضافة 3 ملي مولار و 5 ملي مولار ماء لمدة 3 ساعات. للأنابيب التي تحتوي على 0. 5 مل من 0.75 ملي بيروفات الصوديوم و 10 ميكروليتر NADH 140 ميكرومتر） （مسخن عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق） ، تمت إضافة 150 ميكرولتر من المادة الطافية واحتضانها لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة. ثم تمت إضافة 0.5 مل من 2 ، 4- ثنائي نيتروفينيل هيدرازين إلى العينة ، وبعد ساعة تم قياس الامتصاص عند 450 نانومتر.

4.5 تحديد بيروكسيد الدهون (تركيز MDA)

تم تقدير بيروكسيد الغشاء الدهني عن طريق تفاعل حمض الثيوباربيتوريك (TBA) مع malondialdehyde (MDA). تم زرع الخلايا في {0} ألواح بئر تحتوي على كيرسيتين و H و O2 (بتركيزات وأوقات موصوفة أعلاه) بكمية 1 × 1 0 4 خلايا لكل بئر بحجم { {1 0}}. 25 مل. بعد المعالجة ، تم جمع العينات وطردها (1 000 × & ، 5 دقائق). إلى الكريات ، 0. تمت إضافة 5 مل من 0.5 في المائة من TCA ، ودوامة لمدة دقيقة واحدة ، ثم فصلها عن طريق الصوتنة لمدة 5 دقائق. بعد الطرد المركزي عند 10000 × جم لمدة 10 دقائق ، تمت إضافة 0.4 مل من المادة الطافية إلى 1.25 مل 20 بالمائة TCA مع 0.5 بالمائة TBA وتسخينها في قالب حراري جاف (100 درجة) لمدة 30 دقيقة. بعد التبريد ، تم قياس الامتصاصية عند 532 نانومتر باستخدام معامل الانقراض المولي لـ MDA الذي يساوي 155 ميغا -1 سم -1.

4.6 الأغشية النموذجية

الأوزون العازلة. تم تشبع المخزن المؤقت للفوسفات ({{0}. 01 M ، pH 7.4) بالأوزون الناتج عن مولد الأوزون FM 500 (Grekos ، بولندا). تم تحديد تركيز الأوزون في المخزن المؤقت وفقًا لـ Bader و Hoigne [42].

تساوي ضغط السطح.cistanche نمو القضيبتم استخدام حوض Langmuir (KSV ، فنلندا) لتسجيل متساوي الضغط السطحي بمعدل ضغط ثابت يقابل 5 مم / دقيقة من سرعة الحاجز. تم تكوين أحادي الطبقة الدهنية عن طريق نشر كمية محددة من محلول الكلوروفورم الدهني بتركيز 1 مجم / مل على الطور الفرعي المكون من محلول مائي 0 01 M عازلة الفوسفات ، الرقم الهيدروجيني 7.4 مع أو بدون كيرسيتين ، ومع أو بدون أوزون. تم قياس التوترات السطحية باستخدام لوحة Pt-Wilhelmy. أجريت التجارب عند 25 درجة ± 1 درجة.

4.7 تحليل احصائي

تم إجراء ثلاثة إلى ستة تحليلات مستقلة لكل متغير تم اختباره ومتوسط ​​(± SD). تم تقدير الفروق الهامة مقارنة بالضوابط من خلال استغلال إجراء SAS ANOVA. تم إجراء التحليل الإحصائي عن طريق اختبار المدى المتعدد Duncan ، مع أخذ p<0.05. statistical="" tests="" were="" carried="" out="" using="" statistica="" 13.3(cracow,="">

مساهمات المؤلف: المفاهيم ، BK ، BD ، ومنهجية ER-S. ، BKBD ؛ البرمجيات ، BK ، BDvalidation ، BK ، BD ، ER-S. ، ABwriting - إعداد المسودة الأصلية BK ، BD ، ER-S. ، الكتابة - المراجعة والتحرير ، BK ، BD ، ER-S. ، ABvisualization ، BK ، BDsupervision ، BK، BD، ER-S.، AB قرأ جميع المؤلفين النسخة المنشورة من المخطوطة ووافقوا عليها.

التمويل:لم يتلق هذا البحث أي تمويل خارجي.

بيان مجلس المراجعة المؤسسية: لا ينطبق.

بيان الموافقة المستنيرة: لا ينطبق.

بيان توافر البيانات: البيانات الواردة في المادة. تضارب المصالح: يعلن المؤلفون عدم وجود تضارب في المصالح.

تم استخراج هذه المقالة من جزيئات 2021 ، 26 ، 4945. https://doi.org/10.3390/molecules26164945 https://www.mdpi.com/journal/molecules