مكافحة الشيخوخة وآثار تثبيط التيروزيناز من مستخلص البوتانول بزهرة كاسيا ناسور الجزء 1

خلاصة

خلفية: تم استخدام المنتجات الطبيعية المصنوعة من مصادر نباتية في مجموعة متنوعة من تطبيقات التجميل كمصدر للتغذية وكعامل مبيض. تم استخدام أزهار كاسيا ناسور L ، عائلة فاباسي ، كدواء تقليدي لأمراض الجلد والتئام الجروح ، وقد ورد أنها تمتلك خصائص مضادة للأكسدة. تمت دراسة التأثير المضاد للشيخوخة لمستخلص زهرة النسور على الخلايا الليفية لجلد الإنسان.

يمكن أن يزيد الجليكوزيد من cistanche أيضًا من نشاط SOD في أنسجة القلب والكبد ، ويقلل بشكل كبير من محتوى lipofuscin و MDA في كل نسيج ، ويزيل بشكل فعال العديد من جذور الأكسجين التفاعلية (OH- ، H₂O₂ ، إلخ) والحماية من تلف الحمض النووي الناتج عن ذلك. بواسطة OH- الجذور. جليكوسيدات Cistanche phenylethanoid لديها قدرة قوية على إزالة الجذور الحرة ، وقدرة تخفيض أعلى من فيتامين C ، وتحسن نشاط SOD في تعليق الحيوانات المنوية ، وتقليل محتوى MDA ، ولها تأثير وقائي معين على وظيفة غشاء الحيوانات المنوية. يمكن أن يعزز عديد السكاريد القارص نشاط SOD و GSH-Px في كريات الدم الحمراء وأنسجة الرئة للفئران المسنة تجريبياً الناتجة عن D-galactose ، وكذلك تقليل محتوى MDA والكولاجين في الرئة والبلازما ، وزيادة محتوى الإيلاستين ، تأثير الكسح الجيد على DPPH ، وإطالة وقت نقص الأكسجة في الفئران الشائخة ، وتحسين نشاط SOD في مصل الدم ، وتأخير التنكس الفسيولوجي للرئة في الفئران الشائخة تجريبياً مع التنكس المورفولوجي الخلوي ، أظهرت التجارب أن Cistanche لديه قدرة جيدة على مضادات الأكسدة وله القدرة على أن يكون دواءً لمنع وعلاج أمراض شيخوخة الجلد. في الوقت نفسه ، يتمتع إشنكوسايد في Cistanche بقدرة كبيرة على البحث عن الجذور الحرة لـ DPPH ويمكنه البحث عن أنواع الأكسجين التفاعلية ، ومنع تدهور الكولاجين الناجم عن الجذور الحرة ، وله أيضًا تأثير إصلاح جيد على تلف أنيون الثايمين الجذور الحرة.

انقر فوق مزايا Desert Cistanche

【لمزيد من المعلومات: george.deng@wecistanche.com / WhatApp: 86 13632399501】

طُرق: اكتمل استخلاص البيوتانول من زهور المطثية الناسور وتم تصنيف المركبات الفعالة. تم تقييم السمية الخلوية للخلايا الليفية بواسطة مقايسة SRB لاختيار جرعات غير سامة لإجراء مزيد من التجارب. تم بعد ذلك قياس تركيب الكولاجين وحمض الهيالورونيك (HA) باستخدام مجموعة الكولاجين و ELISA ، على التوالي. علاوة على ذلك ، تم أيضًا تقييم نشاط الإنزيم ، بما في ذلك إنزيم كولاجيناز ومصفوفة البروتين {1}} (MMP -2) والتيروزيناز.

نتائج: وجد أن مستخلص الزهرة لم يؤثر على نمو خلايا الجلد الليفية (IC50> 200 ميكروغرام / مل). أظهرت النتائج أن مستخلص الزهرة زاد بشكل كبير من تخليق الكولاجين و HA بطريقة تعتمد على الجرعة. كما أدى مستخلص الزهرة (50-200 ميكروغرام / مل) إلى تثبيط نشاط كولاجيناز و MMP -2 بشكل ملحوظ. علاوة على ذلك ، يمكن أن يمنع مستخلص الزهرة هذا نشاط التيروزيناز الذي يسبب فرط تصبغ ، مما يؤدي إلى شيخوخة الجلد.

الاستنتاجاتأظهرت خلاصة زهرة الناسور تأثيرًا وقائيًا عند استخدامها لأغراض مكافحة الشيخوخة في الخلايا الليفية لبشرة الإنسان وقد تكون خيارًا مناسبًا لمنتجات التجميل التي تهدف إلى توفير تأثيرات تبييض ، والتي تم تصنيفها على أنها منتجات للعناية ببشرة الوجه المضادة للشيخوخة. .

الكلمات الدالة: كولاجيناز ، تخليق الكولاجين ، جليكوزامينوجليكان ، حمض الهيالورونيك ، ماتريكس ميتالوبروتيناز

خلفية

شيخوخة الجلد هي تطور كيميائي حيوي معقد ناتج عن العديد من العوامل الداخلية والخارجية مثل العمر والهرمونات والتعرض للأشعة فوق البنفسجية [1]. يحدث التقدم في طبقات البشرة والأدمة ويرتبط بشكل أساسي بتدهور المصفوفة خارج الخلية (ECM) [2]. الإنزيمات المشاركة في تدهور ECM هي مصفوفة البروتينات المعدنية (MMPs) مثل الجيلاتيناز (MMP -2) وكولاجيناز [3]. يفقد الجلد قوته الشد بسبب تأثير تدهور ECM بواسطة MMPs. في هذه العملية ، يحدث تجعد الجلد وتظهر الخشونة والجفاف أيضًا بشكل ملحوظ جنبًا إلى جنب مع بعض التشوهات الصبغية مثل نقص أو فرط التصبغ [2 ، 4]. لعلاج فرط التصبغ ، تم فحص مثبطات التيروزيناز. Tyrosinase هو إنزيم يحد من المعدل يقوم بتحويل التيروزين إلى الميلانين [5]. وبالتالي تلعب مثبطات التيروزين دورًا مهمًا كعوامل لتفتيح البشرة [6] بينما ينظم تركيب حمض الهيالورونيك (HA) ترطيب الجلد وحدوث التجاعيد. HA ، جليكوزامينوجليكان غير مكبريت (GAG) ، يتكون من وحدات متكررة من السكاريد بما في ذلك حمض D-glucuronic و N-acetyl-Dglucosamine [7]. ينظم HA أيضًا إصلاح الأنسجة ، بما في ذلك تعزيز استجابة الجهاز المناعي عن طريق تنشيط الخلايا الالتهابية واستجابة لإصابة الخلايا الليفية [8-10].

تم استخدام المنتجات الطبيعية المصنوعة من مصادر نباتية مثل Glycyrrhiza glabra [11] أو الشاي الأخضر [12] في تطبيقات التجميل كمصدر للتغذية وكعامل مبيض. أشارت كمية كبيرة من الأدلة إلى الآثار المفيدة للمواد الكيميائية النباتية التي يتم تناولها عن طريق الفم أو موضعيًا من المستخلصات النباتية ، وخاصة في تحسين حالات الجلد. بعض الأمثلة على الآثار المفيدة هي أنه يمكن تقليل شيخوخة الجلد والتهاب الجلد. تم العثور على C. الناسور (الدش الذهبي) ، عائلة فاباسي ، في العديد من البلدان الآسيوية مثل تايلاند والصين وميانمار والهند. في دراسات سابقة ، وجد أن خلاصة زهرة الناسور تحتوي على خصائص مضادة للأكسدة ، ومضادة للسرطان ، ومضادة للجراثيم ، ومضادة للفطريات ، ومضادة لمرض السكر [13 ، 14]. من المعروف أن تأثير بكتيريا المطثية الناسور في الطب الهندي القديم يلعب دورًا في علاج الاضطرابات المختلفة بما في ذلك الأمراض الجلدية والجذام والقيء الدموي والحكة والسكري [15 ، 16]. أظهرت أجزاء مختلفة من الناسور المطثية خواصًا دوائية [17]. تم استخدام الزهور والبذور والفاكهة واللب لعلاج الأمراض الجلدية بما في ذلك الجذام [18]. تم التعرف على اللب لخصائصه المضادة لمرض السكر [15] واستخدم في منشط تم استخدامه في علاج النقرس والروماتيزم [19]. تستخدم الأوراق والقرون الناضجة تقليديًا كملين [20 ، 21]. كما تم الإبلاغ عن المواد الكيميائية النباتية الفينولية والفلافونويد للناسور المطثية أنها مفيدة في علاج الأمراض الجلدية [14]. لذلك ، في هذه الدراسة ، نحن مهتمون بأدوار مستخلص زهرة الناسور في تطبيقات التجميل. تم فحص التأثيرات الوقائية لتدهور مادة ECM جنبًا إلى جنب مع إنزيمات شيخوخة الجلد التي تشمل أنشطة كولاجيناز و MMP -2 ، بالإضافة إلى التيروزيناز. علاوة على ذلك ، تم تحديد تخليق الكولاجين و HA.

طُرق

المواد الكيميائية والكواشف

تم توفير Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) و DQ gelatin و Penicillin-streptomycin من Gibco (Grand Island ، NY ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم توفير مصل بقري الجنين (FBS) من Thermo Scientific (الولايات المتحدة الأمريكية). تم شراء Sirius Red / Fast Green Collagen Staining Kit من Chondrex ، Inc. (Redmond ، WA ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم الحصول على كاشف Sulforhodamine B وحمض الهيالورونيك وتيروزيناز الفطر من Sigma-Aldrich (سانت لويس ، ميسوري ، الولايات المتحدة الأمريكية).

المواد النباتية

تم الحصول على زهور C. الناسور من Lampang Herb Conservation ، مقاطعة لامبانج ، تايلاند. تم اعتماد نموذج القسيمة (023197) من قبل Wannaree Charoensup ، عالم النبات في معشبة فلورا في تايلاند ، كلية الصيدلة ، جامعة شيانغ ماي ، تايلاند.

تحضير مستخلص زهرة ناسور كاسيا

تم تجفيف أزهار C. الناسور في غرفة جيدة التهوية ثم تم طحن 500 جرام من الزهور المجففة إلى مسحوق. بعد ذلك ، ينقع المسحوق في 50 بالمائة من الإيثانول ثم يُرج عند 70 دورة في الدقيقة لمدة 24 ساعة. بعد 24 ساعة ، تم بعد ذلك ترشيح العينات من خلال ورق الترشيح لفصل المتبقي. ينقع المتبقي في 50 في المائة من الإيثانول ويرج عند 70 دورة في الدقيقة لمدة 24 ساعة وتكرر هذه الخطوة مرتين. تم تجميع العينات المرشحة معًا وتبخيرها بواسطة مبخر فراغ دوار (BUCHI ، سويسرا) للحصول على كسور الماء. تمت إضافة الهكسان إلى جزء الماء بنسبة الهكسان 2: 1. تم اهتزاز العينات والسماح لها بالانفصال لأكثر من 30 دقيقة. تم فصل العينات إلى جزئين ، وهما كسور الهكسان والماء. بعد ذلك ، تم جمع جزء الماء وأضيف 10 في المائة من الفحم النباتي لمدة 30 دقيقة مع التقليب الخفيف عند درجة حرارة الغرفة. تم ترشيح العينات من خلال ورق الترشيح والسليت لفصل الفحم. تم خلط العينات مع البيوتانول المشبع بنسبة البيوتانول المشبع 2: 1 وتم السماح للعينات بالانفصال خلال فترة 12 ساعة وتكررت هذه الخطوة 3 مرات. تم فصل العينات إلى جزئين ، والتي تضمنت الماء وكسور البيوتانول. تمت إضافة الماء أيضًا إلى كسور البيوتانول إلى حجم متساوٍ وتم السماح لهذه الأجزاء بالتبخر من خلال استخدام مبخر فراغ دوار. تم تجفيف العينات المتبخرة بالتجميد للحصول على مسحوق مستخلص زهرة الناسور.

القياس الكمي للمحتوى الفينولي الكلي في مستخلص زهرة الناسور باستخدام مقياس الطيف الضوئي المرئي للأشعة فوق البنفسجية

تم تحديد المحتوى الفينولي الكلي في مستخلص زهرة C. الناسور باستخدام مقايسة Folin-Ciocalteu. باختصار ، 0 تم خلط 4 مل من مستخلص زهرة الناسور مع 0. 3 مل من 1 0 بالمائة من كاشف Folin-Ciocalteau وحضنت في مكان مظلم عند درجة حرارة الغرفة لمدة 3 دقائق . بعد ذلك ، 0 تمت إضافة 3 مل من محلول كربونات الصوديوم وتم تحضين المحلول مرة أخرى في الظلام عند درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. تم تقييم الامتصاصية عند 765 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي المرئي للأشعة فوق البنفسجية. تم حساب تركيز إجمالي محتوى الفينول ومقارنته بمنحنى معياري لحمض الغال (GA) عند 0-20 ميكروغرام / مل. تم الإبلاغ عن المحتوى الفينولي الكلي كمليجرام من مكافئات GA لكل جرام من الناسور المطثية. مستخلص الأزهار (ملغ مستخلص GAE / g).

القياس الكمي للمركبات الفينولية في مستخلص زهرة C. الناسور باستخدام تحليل HPLC

تم تحليل أنواع مختلفة من المركبات الفينولية في مستخلصات زهرة C. الناسور باستخدام تحليل HPLC ثم تمت مقارنتها مع حمض الغاليك القياسي ، ومضادات الاكسدة ، وحمض البروتوكاتيكويك ، وحمض الفانيليك ، وحمض الكلوروجينيك ، وحمض الفيروليك ، وحمض الكوماريك. تم إذابة مستخلصات الأزهار في 5 0 بالمائة من الإيثانول وتم تقييمها أيضًا بواسطة HPLC (Agilent Technologies ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) باستخدام عمود C18 معكوس الطور (WATER ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية). يتكون الطور المتحرك من ميثانول (أ) و 0 .1 في المائة من حامض الخليك ثلاثي الفلور (TFA) في الماء (ب) مع ظروف التدرج. تم ضبط معدل التدفق عند 1.0 مل / دقيقة وتم تسجيل الطول الموجي للكشف عند 280 باستخدام كاشف الأشعة فوق البنفسجية. تم حساب مستويات تركيز المركبات الفينولية ومقارنتها بالمنحنى القياسي مع الأخذ في الاعتبار التركيزات القياسية ومناطق الذروة (مستخلص مجم / جم).

القياس الكمي لمحتوى الفلافونويد الكلي في مستخلص زهرة الناسور باستخدام مقايسة لونية

تم تحديد إجمالي محتوى الفلافونويد بمقايسة قياس لونية كلوريد الألومنيوم (AlCl3) كما تم وصفه سابقًا [22]. باختصار ، 0 تم خلط 25 مل من مستخلص الزهرة مع 0. 125 مل من 5 في المائة من نتريت الصوديوم (NaNO2) وتم تحضين المحلول لمدة 5 دقائق عند درجة حرارة الغرفة. ثم ، 0 تم خلط 125 مل من 10 بالمائة AlCl3 في الخليط وحفظها في الظلام لمدة 5 دقائق. بعد ذلك ، تمت إضافة 1 مل من هيدروكسيد الصوديوم (NaOH) وتم تحضين المحلول لمدة 15 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة في الظلام. تم قياس الامتصاصية عند 510 نانومتر باستخدام مقياس الطيف المرئي للأشعة فوق البنفسجية. تم حساب محتوى الفلافونويد الكلي ومقارنته مع قيم الكاتشين القياسية وتم التعبير عنه بمكافئ كاتشين ملغ لكل جرام من المستخلص (ملغ / جم مستخلص).

مزارع الخلايا

تم عزل الخلايا الليفية الأولية لجلد الإنسان جوًا معقمًا من ندبة في البطن بعد إجراء جراحي يتضمن ولادة قيصرية في الجناح الجراحي في مستشفى CM Maharaj ، جامعة شيانغ ماي (شيانغ ماي ، تايلاند) (رمز الدراسة: BIO -2558-03549 معتمد من قِبل Medical لجنة أخلاقيات البحث ، جامعة شيانغ ماي). تمت إزالة الدهون من مادة البداية ونقعها في DMEM الذي يحتوي على مضادات البنسلين والستربتومايسين. بعد ذلك ، تم غمر الجلد في DMEM الذي يحتوي على 1 في المائة من البروتياز (ديسباس ، جيبكو ، جراند آيلاند ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية) لمدة 48 ساعة عند 4 درجات. تمت إزالة طبقات البشرة وعزل الخلايا الليفية الطبيعية من الأدمة. تمت زراعة الخلايا الليفية في DMEM مع 10 في المائة من FBS ، و 2 ملي مولار من الجلوتامين ، و 50 وحدة / مل من البنسلين ، و 50 ميكروغرام / مل من الستربتومايسين. تم الحفاظ على الخلايا في حاضنة ترطيب بنسبة 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون عند 37 درجة.

فحص جدوى الخلية

تم قياس مقايسة قابلية بقاء الخلية لمستخلص زهرة C. الناسور ضد خلايا الجلد الليفية باستخدام مقايسة sulforhodamine B (SRB) كما تم وصفه سابقًا [23]. باختصار ، تم زرع الخلايا (8 × 1 0 3 خلايا / بئر) في 96- صفيحة جيدة واحتضانها عند 37 درجة ، و 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون لمدة 24 ساعة. بعد ذلك ، عولجت الخلايا بتركيزات مختلفة (0 - 200 ميكروغرام / مل) من مستخلص زهرة الناسور لمدة 48 ساعة أو بدونها. بعد 48 ساعة ، تمت إضافة 10 بالمائة (وزن / حجم) حمض ثلاثي كلورو أسيتيك (TCA) إلى الخلايا ، ثم تم تحضين الخلايا عند 4 درجات لمدة ساعة واحدة. تمت إزالة الوسيط وشطف الخلايا بماء الصنبور بطيء الجاري. تمت إضافة 0.057 بالمائة (وزن / حجم) محلول SRB (100 ميكرولتر) إلى كل بئر وحضنت الخلايا لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. تمت إزالة محلول SRB ثم تم غسل الخلايا 4 مرات باستخدام 1 في المائة (حجم / حجم) حمض أسيتيك وتم السماح لها بالتجفيف عند درجة حرارة الغرفة. تمت إذابة الصبغة باستخدام 10 ملي مولار من محلول قاعدة تريس (درجة الحموضة 10.5) وتم قياس الامتصاصية عند 510 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية.

فحص توليف الكولاجين

تم تحديد الكولاجين الكلي داخل الخلايا في خلايا الخلايا الليفية باستخدام Sirius Red / Fast Green Collagen Staining Kit (Chondrex ، Inc ، Redmond ، WA ، الولايات المتحدة الأمريكية) وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة. باختصار ، تم زرع خلايا الخلايا الليفية الجلدية في 24 لوحة جيدة لمدة 24 ساعة عند 37 درجة ، 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون. بعد ذلك ، تمت معالجة الخلايا مسبقًا باستخدام وسيط DMEM الخالي من المصل لمدة 24 ساعة. تمت إزالة الوسيط وحضنت الخلايا بعد ذلك مع أو بدون مستخلص زهرة الناسور C. (0-150 ميكروغرام / مل) لمدة 48 ساعة. بعد 48 ساعة ، تمت إزالة الوسط المستنبت. بعد ذلك ، تم غسل الخلايا باستخدام PBS وتثبيتها باستخدام مثبت Kahle لمدة 10 دقائق. تمت إزالة المثبت وغسل الخلايا ببرنامج تلفزيوني. تمت إضافة محلول صبغة Sirius Red / Fast Green إلى كل بئر وتم تحضين العينات لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. تمت إزالة الصبغة وغسل الخلايا أربع مرات بماء DI أو حتى يصبح السائل عديم اللون. أخيرًا ، تمت إضافة المخزن المؤقت للاستخراج وقياس الامتصاص عند 540 نانومتر و 605 نانومتر باستخدام مقياس طيف ضوئي مرئي للأشعة فوق البنفسجية.

فحص نشاط الكولاجيناز

تم قياس نشاط كولاجيناز باستخدام مقايسة الجيلاتين DQ ™ الفلورية المعدلة كما تم وصفه سابقًا [24]. باختصار ، تمت إضافة تركيزات مختلفة من مستخلص زهرة C. الناسور (0 - 200 ميكروغرام / مل) إلى 96 طبقًا جيدًا. تمت إضافة وحدة واحدة / مل من الكولاجيناز في كل بئر (100 ميكرولتر / بئر). بعد ذلك ، تمت إضافة 15 ميكروغرام / مل من الجيلاتين (DQ gelatin) وحضنت المخاليط لمدة 10 دقائق. تم تحديد معدل تحلل البروتين عن طريق قياس الامتصاصية بفواصل زمنية مدتها دقيقتان لمدة 20 دقيقة باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية بطول موجة إثارة يبلغ 485 نانومتر وطول موجة انبعاث يبلغ 528 نانومتر. تم تقدير نشاط الإنزيم عن طريق فحص ميل الانحدار الخطي بين الوقت والامتصاص خلال فترة 2-6 دقيقة.

فحص نشاط MMP -2

تم تحديد نشاط MMP {0} بواسطة الجيلاتين zymography كما تم وصفه سابقًا [25]. تمت زراعة خلايا الخلايا الليفية في وسط خالٍ من مصل DMEM لمدة 24 ساعة. بعد ذلك ، تم جمع المادة الطافية للثقافة. تم تعريض المادة الطافية للثقافة إلى 1 0 بالمائة من مادة الهلام بولي أكريلاميد التي تحتوي على 0. 1 بالمائة وزن / حجم من الجيلاتين في ظل ظروف غير مخفضة. تم غسل المواد الهلامية مرتين باستخدام 2.5 بالمائة حجم / حجم من Triton X -100 لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة لإزالة SDS. تم تقطيع لوح الهلام إلى شرائح تتوافق مع الممرات ثم تم وضع الشرائح في خزانات مختلفة واحتضانها بمحلول تنشيط (50 ملي مولار من حمض الهيدروكلوريك ، 200 ملي كلوريد الصوديوم ، 10 ملي كلوريد الكالسيوم ، الرقم الهيدروجيني 7.4) تحتوي على تركيزات مختلفة من C مستخلص زهرة الناسور (0-200 ميكروجرام / مل) عند 37 درجة لمدة 18 ساعة. بعد ذلك ، تم غسل شريط من المواد الهلامية وتلطيخها باستخدام Coomassie Brillant Blue R (0.1 بالمائة وزن / حجم) ثم تم تقطيعها في 30 بالمائة ميثانول و 10 بالمائة حمض أسيتيك. ظهر نشاط MMP -2 كشريط واضح على خلفية زرقاء. تم تقدير نطاقات الهضم بواسطة برنامج Image J.

مقايسة تخليق حمض الهيالورونيك (HA) بواسطة ELISA

تم تحديد تأثير مستخلص زهرة C. الناسور على تخليق HA باستخدام مجموعة ELISA كما هو موصوف سابقًا [26]. تم زرع خلايا الخلايا الليفية (5. 0 × 1 0 4 خلايا / بئر) في 24- ألواح بئر لمدة 24 ساعة عند 37 درجة ، 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون. عولجت الخلايا مسبقًا في وسط خالٍ من المصل لمدة 6 ساعات ثم عولجت بتركيزات مختلفة من مستخلص زهرة الناسور (0-200 ميكروغرام / مل) أو بدونها لمدة 48 ساعة. تم جمع الوسط المستنبت وقياس تخليق HA بواسطة ELISA. تم قياس الامتصاصية عند 450 و 570 نانومتر باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة. تم حساب تركيز HA في المادة الطافية المستزرعة المكتسبة من الخلايا الليفية المعالجة ومقارنتها بالمنحنى القياسي لـ HA.

مقايسة تثبيط التيروزيناز

تم تحديد مقايسة تثبيط التيروزيناز على النحو الموصوف سابقًا [27]. تمت إضافة تركيزات مختلفة من مستخلص زهرة الناسور 96- إلى صفيحة البئر. تم إجراء التفاعل في محلول صوديوم (درجة حموضة 6.4) يحتوي على 100 وحدة / مل تيروزيناز فطر. تمت إضافة ركيزة L-DOPA (1 ملي مولار) إلى خليط التفاعل ثم تم تحضينها لمدة 10 دقائق عند درجة حرارة الغرفة. تم قياس تغير الامتصاصية عند 490 نانومتر كل 1.5 دقيقة لمدة 15 دقيقة باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة. تم حساب النسبة المئوية لتثبيط التيروزيناز بالصيغة التالية:

مقايسة نشاط مضادات الأكسدة

تم تحديد النشاط المضاد للأكسدة لمستخلص زهرة C. الناسور باستخدام 1 ، 1- diphenyl -2- picrylhydrazyl (DPPH) - نشاط الجذور الحرة ، كما تم وصفه سابقًا [28]. تم تحضير تركيزات مختلفة من مستخلص الزهرة (0 - 1 0 0 ميكروغرام / مل) في الميثانول. تمت إضافة 1 مل من 0.002 بالمائة من DPPH إلى 1 مل من محلول مستخلص الزهرة وتم حفظ الخليط في الظلام لمدة 30 دقيقة. تم قياس الامتصاصية عند 517 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي. تم حساب النسبة المئوية للتثبيط ومقارنتها مع فيتامين E القياسي (1 - 100 ميكروغرام / مل) باستخدام الصيغة التالية:

تم تأكيد النشاط المضاد للأكسدة لمستخلصات زهرة C. الناسور باستخدام مقايسة ABTS ، كما تم وصفه سابقًا [29]. تم تحضير ABTS [2، 2′- azino-bis (ethylbenzthiazoline -6- حمض السلفونيك)] عن طريق خلط 7 ملي مولار من محلول مخزون ABTS مع 2.45 ملي مولار من بيرسلفات البوتاسيوم (K2S2O8) (1/1 ، ت / ت). تم تحضين الخليط في الظلام لمدة 12-16 ساعة حتى اكتمال التفاعل. تم إجراء الاختبار على 99 0 ميكرولتر من محلول ABTS و 10 ميكرولتر من مستخلص الزهرة (0-4 ميكروغرام / مل). بعد 6 دقائق ، تم تسجيل الامتصاصية على الفور عند 734 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي. تم حساب نسبة تثبيط نشاط ABTS لمستخلص الزهرة باستخدام المعادلة التالية:

تحليل احصائي

يتم تقديم جميع البيانات على أنها متوسط ​​قيم الانحراف المعياري (SD). تم تحليل التحليل الإحصائي بواسطة برنامج Prism الإصدار 6. 0 باستخدام ANOVA أحادي الاتجاه مع اختبار Dunnett. تم تحديد الدلالة الإحصائية في * p <0. 0 5 ، ** p <0. 0 1 ، *** p <0.001 أو **** p <0.0001.

نتائج

التوصيف الكيميائي النباتي لمستخلص زهرة C. الناسور

بعد الخطوة التي تضمنت تجفيف العينات بالتجميد ، تم وزن مستخلص زهرة الناسور وإخضاعها لدراسات بيولوجية وكيميائية نباتية. 18. 0 تم الحصول على 8 جم من مستخلص زهرة الناسور من 5 0 0 جم من المادة الخام وكانت النسبة المئوية من محصول مستخلص الزهرة 3.62. تم تحديد بصمة HPLC لمستخلصات زهرة الناسور من خلال تحليل HPLC (الشكل 1). تم تصنيف ملف تعريف HPLC الذي أظهر ذروة المركبات الفينولية من حيث المكونات الفردية في كل وقت احتفاظ. يوضح الجدول 1 توصيف المركبات الفينولية لمستخلص زهرة الناسور. كان المحتوى الفينولي الكلي في مستخلص الزهرة 275.32 ± 14.21 مجم من خلاصة GAE / g. تم العثور على مشتقات حمض الهيدروكسي بينزويك ، بما في ذلك حمض الفانيليك وحمض البروتوكاتيكويك ، لتكون {{2 0}. 95 ± 0. 0 9 و 2.56 ± 0. خلاصة 42 مجم / جم ، على التوالي ، بينما تم تسجيل حمض الغاليك عند {{3 0}}. 6 0 ± 0. 02 مجم / جم خلاصة. تم اكتشاف مشتقات حمض الهيدروكسيسيناميك ، بما في ذلك حمض الكوماريك وحمض الفيروليك وحمض الكلوروجينيك عند 0.39 ± 0.08 و 0.80 ± 0.09 و 0.83 ± 0.03 مجم / جم على التوالي. كان محتوى الفلافونويد 27.62 ± 3.56 ملجم / جم مستخلص. تم قياس الكاتشين ، كمشتق من الفلافونول ، عند 1.10 ± 0. 00 ملجم / جم.

【لمزيد من المعلومات: george.deng@wecistanche.com / WhatApp: 86 13632399501】