التأثيرات المضادة للحساسية والمضادة للالتهابات لنيفرين على خلايا RBL -2 H3

الرجاء التواصلoscar.xiao@wecistanche.comللمزيد من المعلومات

الملخص:تلعب الخلايا البدينة دورًا مهمًا جدًا في حساسية الجلد والالتهابات ، بما في ذلك التهاب الجلد التأتبي والصدفية. في الماضي ، وجد أن المرجع له تأثيرات مضادة للالتهابات ومضادة للشيخوخة على الجلد ، ولكن تأثيره على الخلايا البدينة لم يتم دراسته بالتفصيل بعد. في هذه الدراسة ، استخدمنا الخلايا البدينة (خلايا RBL -2 H3) ونماذج الفئران لدراسة التأثيرات المرجعية المضادة للحساسية والالتهابات. أولاً ، وجدنا أن المرجع يثبط تحلل الخلايا البدينة والتعبير عن السيتوكينات. بالإضافة إلى ذلك ، لاحظنا أنه عندما تم تحفيز الخلايا البدينة بواسطة A23187 / phorbol 12- myristate -13- acetate (PMA) ، تم إعاقة ارتفاع الكالسيوم داخل الخلايا بالرجوع. يتم أيضًا تقليل فسفرة مسار MAPK / NF-KB عن طريق المعالجة المسبقة للإشارة. تظهر نتائج الدراسات في الجسم الحي أن المرجع يمكن أن يحسن مظهر التهاب الجلد وتسلل الخلايا البدينة الناجم عن ثنائي نيتروكلوروبنزين (DNCB). علاوة على ذلك ، يتم أيضًا استعادة تعبيرات البروتينات الحاجزة في الجلد.سيستانشأخيرًا ، وجد أن المرجع يمكن أن يقلل من سلوك الخدش الناتج عن المركب 48/80. مجتمعة ، تشير نتائجنا إلى أن المرجع هو منتج طبيعي جيد جدًا مضاد للحساسية ومضاد للالتهابات. يساهم تأثيره على الخلايا البدينة في آليتها الدوائية.

الكلمات الدالة:المرجعي؛ منتج طبيعي؛ الخلايا البدينة؛ التهاب الجلد. متلهف، متشوق

الرجاء الضغط هنا لمعرفة المزيد

1 المقدمة

أكدت العديد من الدراسات أن أمراض الحساسية هي نتيجة ليس فقط تنشيط المناعة الفطري ولكن أيضًا التنشيط التكيفي. من بينها ، تلعب الخلايا البدينة دورًا مهمًا للغاية في مجموعة متنوعة من أمراض الحساسية مثل التهاب الأنف التحسسي والربو والتهاب الجلد التحسسي. تعبر الخلايا البدينة عن مستقبلات IgE (FceRI) على أغشية الخلايا الخاصة بها ، ومستقبلات FceRI لها تقارب كبير مع الأجسام المضادة IgE [1،2]. عندما يرتبط IgE الخاص بمستضد بـ FceRI ، يحدث تفاعل ويحدث تفاعل تحسسي. يمكن أن يؤدي تجميع FceRI إلى تنشيط مستقبلات كينازات التيروزين ، وبدء تفاعلات المصب ، وتعزيز الفسفرة للبروتينات الرئيسية المختلفة (مثل بروتين كيناز الميثوجين المنشط ؛ MAPKs) ، مما يؤدي في النهاية إلى تدفق أيونات الكالسيوم (Ca2 plus) ، وهو حدث رئيسي في تحلل الخلايا البدينة [3].cistanche أسترالياتقوم الخلايا البدينة المنشطة بإزالة الحبيبات وإطلاق وسطاء كيميائيين. يمكن أن تسبب هذه الوسائط الكيميائية المستخدمة في تفاعلات الحساسية التهابًا [4] ، لذا فإن علاج أعراض الحساسية يشمل مثبطات تحلل الخلايا البدينة. لذلك ، غالبًا ما يستخدم تثبيط تحلل الخلايا البدينة بوساطة IgE لتحديد المركبات الجديدة للوقاية من أمراض الحساسية وعلاجها. لقد ثبت أن الأجسام المضادة IgE المضادة للدينيتروفينيل (DNP) ومولدات المضادات يمكن أن تحفز تفاعلات فرط الحساسية السلبية للجلد (PCA) كنموذج نموذجي في الجسم الحي لفرط الحساسية الفورية وكدواء بحثي لاحتمالية الحساسية المضادة للمستضد [5،6 ]. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أيضًا أن يحدث تحلل الخلايا البدينة بسبب المنشطات غير المناعية ، مثل المركبين 48/80 و A23187. A23187 حامض أيون الكالسيوم ، معروف منذ فترة طويلة بأنه يحفز إفراز الخلايا البدينة بإطلاق الوسطاء المُشكَّل مسبقًا ، مثل الهيستامين من حبيباتهم ، كمثال [4] المركب 48/80 عبارة عن بوليمر مختلط من p-methoxy-N-methylphenethylamine متشابك بواسطة الفورمالديهايد ، والذي يستخدم على نطاق واسع للتحفيز المستقل للخلايا البدينة [7،8] لذلك ، تم استخدام كميات مناسبة من المركب 48/80 و A23187 بشكل شائع ككواشف لدراسة آلية تفاعلات الحساسية. وفقًا للتقييمات الإحصائية ، يعاني حوالي 15-20 بالمائة من السكان من التهاب الجلد التأتبي. سواء كان الأطفال أو البالغين هم الذين يعانون من هذا المرض ، فإن التهاب الجلد التأتبي يمكن أن يسبب ضغوطًا نفسية للمرضى ويثقل كاهل عائلاتهم وتكاليف صحتهم الاجتماعية [9]. لسوء الحظ ، لا توجد طريقة علاج مناسبة لعلاج التهاب الجلد التحسسي. لا تزال خيارات العلاج الحالية تتجنب مسببات الحساسية المسببة للأمراض ، ويعتبر الاستخدام المستمر للستيرويدات هو المعيار الذهبي للعلاج. لقد دفعت المواد المسببة للحساسية التي لا مفر منها والآثار الجانبية للأدوية إلى تطوير عاجل لأدوية علاجية جديدة. تعتبر المركبات الطبيعية المعزولة من الأعشاب والنباتات الطبية مصادر محتملة للعوامل العلاجية للوقاية من الأمراض الالتهابية وعلاجها وتحسين نوعية الحياة للمرضى الذين يعانون من اضطرابات الحساسية.

يمكن للسيستانش مكافحة الشيخوخة

يأتي المرجع من لب اللوتس (جنين البذرة) من نبات Nelumbo nucifera وهو قلويد بيسبنزيليزوكينولين رئيسي. هناك دليل على أن المرجع يحتوي على مجموعة واسعة من الخصائص الدوائية ، مثل التأثيرات المضادة للسرطان ، ومضادات الأكسدة ، ومضادات الالتهاب ، والوقاية العصبية ، في العديد من الأمراض [10-15].فوائد cistancheخان وآخرون. وجد أن المرجع ينتج تأثيرات مضادة للشيخوخة عن طريق تثبيط الزيادة التي تتوسطها الأشعة فوق البنفسجية في مستويات ROS و malondialdehyde (MDA) في الخلايا الكيراتينية البشرية والأرومات الليفية [16،17] مؤخرًا ، وجدنا أن المرجع لديه إمكانية كدواء بديل لعلاج التأتبي التهاب الجلد أو الأمراض الالتهابية الأخرى المتعلقة بالجلد [18]. ومع ذلك ، ما إذا كان المرجع يلعب تأثيرًا مضادًا لحساسية الجلد في الخلايا البدينة لا يزال غير مؤكد. في هذه الدراسة ، كنا نهدف إلى التحقيق في تأثيرات المرجع على أمراض الحساسية الناتجة عن الخلايا البدينة ، باستخدام سلالات الخلايا البدينة البشرية (خلايا RBL -2 H3) ومركب 48 / 80- والتأق الناجم عن DNCB نموذج الفئران.

La refiene proviene del núcleo de loto (el embrión de la semilla) de la planta Nelumbo nucifera y es un importante alcaloide de bisbencilisoquinolina. Existe evidencia de que la Referencia tiene una amplia gama de propiedades farmacológicas، como efectos anticancerígenos، antioxidantes، antiinflamatorios y neuroprotectores، en muchas enfermedades [10-15]. Beneficios de la cistanche Khan et al. أنتج encontró que la Referencia efectos anti-fotoenvejecimiento al inhibir el aumento de los niveles de ROS y malondialdehído (MDA) mediado por UV en queratinocitos y fibroblastos humanos [16،17] Recientemente، descubrimos que laفة المرجع de atópica dermatitis u otras enfermedades inflamatorias relacionadas con la piel [18]. الحظر المفروض على الخطيئة ، سيغوي سيندو حتى الآن للإحالة على الخطيئة ضد الإنذار المبكر. En este estudio، nuestro objetivo fue Investar los efectos de Referencia en las enfermedades alérgicas mediadas por mastocitos، utilizando líneas de mastocitos humanos (células RBL -2 H3) y un modelo y Ratones conafil80 .

2. النتائج

2.1 اختبار نيفرين السمية الخلوية على الفئران الصارية CelLs (RBL -2 H3)

نظرًا لأن خلايا سرطان الدم القاعدية عند الفئران (RBL) -2 ، فإن خلايا H3 ، وهي نظير للخلايا البدينة المطلقة للهيستامين ، هي خلايا مناسبة لفحص تأثيرات الالتهاب الناتج عن الخلايا البدينة [19] ، استخدمنا هذه الخلايا لفحص مضادات الحساسية آثار المرجع. أولاً ، اختبرنا ما إذا كان المرجع يمكن أن ينتج سمية خلوية في الخلايا البدينة. عندما يتم معالجة الخلايا مسبقًا بمرجع من 1 إلى 30 ميكرومتر لمدة 24 ساعة ، لن تتأثر قابلية الخلايا للخلايا بالعلاج المرجعي (الشكل 1).

2.2.Neferine يقلل من تأثير إزالة التحبيب لـ RBL -2 H3 المحفز بواسطة منشطات مختلفة

تُستخدم خلايا RBL -2 H3 بشكل شائع للدراسات في المختبر حول إزالة التحبيب [20-22] تحفيز خلايا RBL -2 مع مضاد ثنائي نتروفينول (DNP) IgE وألبومين مصل بشري مترافق مع DNP (HSA) يؤدي إلى إزالة الحبيبات. بالإضافة إلى ذلك ، من المعروف أن الخلايا البدينة تتحلل استجابةً للمركبات الاصطناعية ، مثل المركب 48/80 وحامل أيون الكالسيوم A23187 ، وقد تم استخدام هذه المركبات ككواشف ملائمة للدراسات المباشرة لآليات الاستجابة للحساسية في المختبر [23 ، 24]. أظهرت النتائج أن السيتوبلازم RBL -2 H3 الذي لم يتم تنشيطه بواسطة المنشط يحتوي على حبيبات إفرازية محدودة.cistanche الكوليستروللم تؤثر معالجة المرجع 10μM وحده على نشاط RBL -2 H3 (الشكل 2 أ ، ب). ومع ذلك ، فإن إضافة المنشطات المختلفة ، بما في ذلك المركب 48/80 ، A23187 ، ومضاد DNP / IgE plus DNP / HSA ، ملأت السيتوبلازم بحبيبات إفرازية. تحت المجهر الإلكتروني ، يمكن ملاحظة أن هناك عددًا كبيرًا من الحبيبات الإفرازية في السيتوبلازم ، وبعض الحبيبات الإفرازية تندمج مع غشاء الخلية ، مما يؤدي إلى التحلل (الشكل 2C-E). بعد المعالجة بالمرجع 10 ميكرومتر ، تم تقليل الحبيبات الإفرازية في السيتوبلازم بشكل كبير (الشكل 2F-H). تشير هذه النتائج إلى أن المرجع يمكن أن يمنع بشكل فعال تنشيط وإزالة التحبيب لـ RBL -2 H3 الذي يحفزه المنشط.

2.3.Neferine يثبط PMA / A 23187- ارتفاع الكالسيوم داخل الخلايا المستحث في RBL -2 H3

تلعب أيونات الكالسيوم دور المرسل الثانوي في عملية تنشيط الخلية. A23187 هي الطريقة الأكثر فعالية لزيادة تغلغل أيونات الكالسيوم من خلال أغشية الخلايا وتحفيز تنشيط الخلايا البدينة. يمكن لـ Phorbol myristate acetate (PMA) تنشيط بروتين كيناز Cand وزيادة أيونات الكالسيوم داخل الخلايا لتعزيز تأثير A23187. تعتبر الزيادة في أيونات الكالسيوم في الخلايا البدينة عاملاً مهمًا في تحفيز تنشيط الخلايا البدينة بحيث تؤثر على تحلل الخلايا البدينة وتطلق المزيد من السيتوكينات والكيموكينات الالتهابية.الآثار الجانبية cistanche deserticola ،لذلك ، سعت هذه الدراسة إلى استكشاف ما إذا كان المرجع يمكن أن يثبط تركيز أيون الكالسيوم في RBL -2 H3 عندما يثبط الالتهاب. تم تقسيم المجموعة التجريبية إلى مع أو بدون معالجة مرجعية لمدة 20 دقيقة ، وتمت إضافة 1 ملي مولار CaClz و PMA / A23187 لتحفيز وتنشيط RBL -2 H3. أظهرت النتائج التجريبية أن معالجة RBL -2 H3 بتركيزات مرجعية مختلفة وحدها لم تؤثر على زيادة تركيز أيون الكالسيوم داخل الخلايا. في مجموعة تدفق الكالسيوم المُستحث بواسطة PMA / A 23187- ، زاد تركيز أيون الكالسيوم داخل الخلايا بشكل ملحوظ. تمت معالجة خلايا RBL -2 H3 مسبقًا لمدة 20 دقيقة بالإشارة （3 ميكرومتر و 10 ميكرومتر） ، وتم تقليل تركيز أيون الكالسيوم بشكل كبير (الشكل 3).

2.4.Neferine يقلل من تعبير mRNA من السيتوكينات المؤيدة للالتهابات في PMA / A23187 تحفيز بواسطة RBL -2 H3

ستؤدي الاستجابة المناعية للجلد إلى زيادة عدد الخلايا البدينة في الجسم ، وستقوم الخلايا البدينة بعد ذلك بإنتاج السيتوكينات المؤيدة للالتهابات وتسريع تقدم المرض. السيتوكينات المسببة للالتهابات ، وخاصة TNF-a و IL -6 و IL -1 و IL -8 ، لا تسبب الالتهاب فحسب ، بل تسبب أيضًا ارتشاح الكريات البيض وتشكيل الورم الحبيبي وتليف الأنسجة. يعمل PMA / A23187 على الخلايا البدينة ويحثها على إنتاج IL -16 و IL -6 و TSLP و TNF- ، مما يسبب الالتهاب المرتبط بالحساسية. لذلك ، قمنا بمعالجة RBL -2 H3 مسبقًا بمرجع لمدة 20 دقيقة وحفزنا باستخدام PMA / A23187 لمدة 6 ساعات لاكتشاف ما إذا كان المرجع يمكنه تنظيم تعبير mRNA لـ IL -1 ، IL {{ 19}} و TSLP و TNF-a. أظهرت النتائج أنه في المجموعة التي عولجت بالإشارة فقط ، لم يتأثر تعبير السيتوكين mRNA ، وزاد التعبير عن mRNA في المجموعة التي تسببت في الالتهاب بواسطة PMA / A23187 بشكل ملحوظ. في المجموعة التي تمت معالجتها بالإشارة ، لوحظ أن مستويات تعبير الرنا المرسال لكل من IL -1 و IL -6 و TSLP و TNF-a قد تم قمعها بشكل كبير (الشكل 4).

2.5.Neferine يمنع PMA / A 23187- الفسفرة المستحثة لمسار MAPK في RBL -2 H3

أشارت الدراسات السابقة إلى أن الخلايا البدينة تحتاج إلى إطلاق أيونات الكالسيوم داخل الخلايا لتنشيط MAPK بالإضافة إلى أن مسار إشارات MAPK ينظم التعبير عن الخلايا الوحيدة والخلايا اللمفاوية التائية والخلايا اللمفاوية البائية والسيتوكينات والكيموكينات ويحفز المناعة الذاتية. تشبه هذه الآلية مسار تنشيط PMA / A23187. في هذه الدراسة ، اكتشفنا ما إذا كان المرجع يمكنه المشاركة في تنظيم مسارات MAPK. عالجنا تركيزات مختلفة من المرجع (1،3 و 10 ميكرومتر) إلى RBL -2 H3 لمدة 20 دقيقة ثم تم تحفيزها باستخدام PMA / A23187 لمدة 30 دقيقة للحث على الالتهاب. أظهرت النتائج أنه عندما عولج RBL -2 H3 بتركيزات مختلفة من المرجع وحده ، لم يتأثر تنشيط بروتينات p38 و JNK و ERK. في المجموعة التي عولجت بـ PMA / A23187 وحده ، وجدنا أن البروتينات p38 و JNK و ERK قد تم تنشيطها ولها فسفرة كبيرة. في المجموعة المعالجة بالإشارة ، لوحظ أنه بالنسبة لتركيزات أعلى من المرجع ، تم تقليل الفسفرة لبروتينات p38 و JNK و ERK بشكل كبير (الشكل 5A-C).

2.6.Neferine يمنع PMA / A 23187- الفسفرة المستحثة لمسار NF-B في RBL -2 H3

يعتمد التعبير عن السيتوكينات المؤيدة للالتهابات على تنشيط عامل النسخ NF-kB في الخلايا البدينة. عندما تم فسفرة بروتين IKB وتحلل ، تم إطلاق NF-kB وهاجر إلى النواة ، مرتبطًا بعناصره المستجيبة للحمض النووي المقابلة وتعزيز نسخ الوسطاء الالتهابيين. تم إنتاج العديد من السيتوكينات والكيموكينات ، والتي تنظم الاستجابة المناعية والتمايز والالتهاب. لذلك ، اكتشفنا ما إذا كانت المعالجة المسبقة بالإشارة تؤثر على فسفرة البروتين الناجم عن PMA / A23187. تعاملنا مع تركيزات مختلفة من المرجع （1،3 و 10 ميكرومتر） إلى RBL -2 H3. بعد 20 دقيقة ، حفز PMA / A23187 RBL -2 H3 لمدة ساعة أو ساعتين للحث على الالتهاب. أظهرت النتائج أن معالجة RBL -2 H3 بتركيزات مرجعية مختلفة وحدها لم تؤثر على فسفرة IKBa و NF-KB. عندما تم استخدام PMA / A23187 للتحفيز ، لوحظت زيادة كبيرة في فسفرة IkBo و NF-KB. في المجموعة المعالجة بالإشارة ، وجد أن الفسفرة لـ IkBa (الشكل 6A) و NF-KB (الشكل 6B) قد انخفض بشكل كبير.

2.7.تأثير نفرين على 2 ، 4- ثنائي نيتروكلوروبنزين (DNCB) التهاب الجلد التحسسي

نموذج حيواني لأبحاث الأمراض ، DNCB ممثل مهيج يسبب التهاب الجلد التأتبي [25]. تستخدم تجربتنا 1 في المائة من ثنائي نيتروكلوروبنزين (DNCB) مذاب في 75 في المائة كحول للحث على المرحلة الأولى من استجابة التحسس. المرجع (3 مجم / كجم و 1 0 مجم / كجم) وديكساميثازون (Dexa ، {{1 {15}}}. 2 مجم / كجم) مذابة في DMSO تم إعطاؤها داخل الصفاق في اليوم الخامس لمدة عشرة أيام . في اليوم الثامن والأول والرابع عشر ، تم تطبيق 0.5 بالمائة من DNCB كمرحلة ثانية من إحداث الالتهاب. تم تقسيم الفئران إلى أربع مجموعات - المجموعة الضابطة ، ومجموعة DNCB ، ومجموعة المعالجة المرجعية ، والمجموعة المعالجة بالديكساميثازون - وبعد ذلك ، بعد المقارنة بين المجموعات ، لوحظت الفروق. لاحظنا أن DNCB تسبب في تفاعل التهاب الجلد التأتبي على جلد الفئران. بعد تطبيق DNCB ، وجد أن جلد الفئران زاد من الاحمرار والقشور. كل هذا بسبب تكاثر الخلايا الكيراتينية غير الطبيعي ، والتسلل ، وتكدس الخلايا المناعية. المجموعة التي عولجت بالمرجع 3 ملغ / كغ وديكساميثازون 0.2 ملغ / كغ لمدة أربعة أيام خففت من الاحمرار. واصلنا مراقبة حالة الجلد الظهري للفئران حتى اليوم الخامس عشر. وبالمقارنة مع المجموعة الضابطة ، كانت مجموعة DNCB تعاني من حالات جلدية حمراء ومنتفخة بشدة ، وكان هناك وبر وجروح يبدو أنها ناجمة عن الحكة والألم . يمكننا أن نجد اتجاهاً نحو تناقص الدرجة بعد العلاجات المرجعية والديكساميثازون (الشكل 7 أ). تم استخدام صبغة التولويدين الزرقاء لمراقبة عدد الخلايا البدينة المتجمعة. ظهرت الخلايا البدينة أرجوانية عند ملاحظتها تحت المجهر. يمكن إثبات كميًا أن العديد من الخلايا البدينة قد تسللت وتراكمت في الأدمة في المجموعة التجريبية DNCB ، وزادت بشكل ملحوظ مقارنة بالمجموعة الضابطة. في المجموعة التي عولجت بالإشارة وديكساميثازون ، انخفض التسلل والتجميع وعدد الخلايا البدينة (الشكل 7 ب ، ج).

2.8.Neferine يحسن التعبير mRNA للجزيئات ذات الصلة بالحاجز بعد علاج DNCB

يمكن أن يتسبب الالتهاب المرتبط بالجلد الناجم عن مرض الزهايمر في إحداث خلل في وظيفة حاجز الجلد. إذا كان الحاجز الجلدي معيبًا ، فمن الأسهل على المستضدات أو المهيجات اختراق البشرة ودخول الجسم للحث على ردود الفعل المرتبطة بالمناعة. في الوقت نفسه ، سيتم قمع إنتاج بروتينات التمايز ، بما في ذلك filaggrin و loricrin و involucrin. لذلك ، فإن استعادة حاجز الجلد التالف مهم جدًا لمنع وعلاج مرض الزهايمر [26]. في دراستنا ، استخدمنا المراجع للتدخل في النموذج الحيواني لالتهاب الجلد التأتبي الناجم عن DNCB. بعد التضحية بالفئران ، تم تأريض أنسجة الجلد الظهرية لتحليل RI-qPCR لتقييم ما إذا كان المرجع يمكنه تحسين تقليل تعبير mRNA في filaggrin و loricrin و involucrin بعد علاج DNCB. أظهرت النتائج أن المجموعة التجريبية DNCB قد قللت بشكل كبير من تعبير الرنا المرسال عن الفيلاغرين واللوريكرين والانفولوكرين مقارنة بالمجموعة الضابطة. تمت زيادة تعبير mRNA عن filaggrin و loricrin و involucrin بشكل ملحوظ في المجموعة التي عولجت بالإشارة و dexamethasone مقارنة بمجموعة DNCB (الشكل 8).

أثبتنا أيضًا أن المرجع له تأثير خدش مضاد للحساسية. استخدمنا عامل تحبيب الخلايا البدينة ، المركب 48/80 ، للحث على سلوك الخدش في الفئران BALB / c. كما هو مبين في الشكل 9 ، وجدنا أن المعالجة المرجعية تثبط سلوك الخدش الناتج عن المركب 48/80 50 ميكروغرام / الموقع）. أدى الإعطاء المتكرر لجرعات مرجعية أقل وأعلى (3 و 10 مجم / كجم) لمدة 5 أيام متتالية إلى تقليل عدد الخدوش الناتجة عن المركب 48/80 بشكل كبير.