آثار مكافحة انتشار Cistanches Salsa على تطور تضخم البروستاتا الحميد

تأثير CSE على الالتهاب في الجرذان التي يسببها BPH

قد يلعب أكسيد النيتريك ونشاط COX دورًا مهمًا في تحديد العلاقة بين الالتهاب ونمو البروستاتا (Sciarra وآخرون 2008) ، في خلايا البروستات الالتهابية ، iNOS هو العامل الرئيسي الذي ينشط أنواع النيتروجين التفاعلية التي يمكن أن تدمر الخلايا. يعزز أكسيد النيتريك أيضًا نشاط COX ، وهو العامل الثاني. تم اكتشاف نشاط COX -2 في جميع الخلايا الالتهابية في الظهارة والمساحات الخلالية لأنسجة البروستاتا البشرية ، كما أنه يزداد في الآفات الالتهابية التكاثرية ، مما يؤدي إلى إنتاج البروستاجلاندين المؤيد للالتهابات. لاستقصاء تأثير CSE على الالتهاب ، قمنا بفحص التعبير البروتيني لـ iNOS و COX -2 في أنسجة البروستاتا للفئران التي يسببها BPH. كما هو مبين في الشكل 4 ، كشف تحليل اللطخة الغربية عن زيادة في تعبيرات البروتين iNOS و COX -2 في المجموعة التي يسببها BPH مقارنة بمستوياتها في المجموعة الضابطة. وبالمقارنة مع المجموعة التي يسببها تضخم البروستاتا الحميد ، أظهرت المجموعات المعالجة بالفيناسترايد و CSE انخفاضًا في تعبيرات البروتين iNOS و COX -2 ، مما يشير إلى آثارها المضادة للالتهابات في BPH.

الشكل 3: تأثير إدارة Cistanche salsa extract (CSE) على تكاثر الخلايا البروستاتية. تلطيخ الهيماتوكسيلين والأيوزين لأنسجة البروستاتا من تضخم البروستاتا الحميد (BPH) الناتج عن نماذج الفئران (A) سماكة نسيج الظهارة من البروستاتا (TETP) (B) ؛ التكبير الأصلي 40x （مقياس بار 200 ميكرومتر） و 400x （شريط مقياس 20 ميكرومتر） ، على التوالي. （C） مستضد نووي خلوي منتشر PCNA تم تحديد مستويات التعبير عن البروتين عن طريق النشاف الغربي باستخدام أجسام مضادة محددة. -وقد استخدم الأكتين باعتبارها الرقابة الداخلية. تم إجراء تحليل قياس الكثافة باستخدام Bio-rad Quantity One @ Software. تمثل البيانات الموضحة متوسط ​​± SEM لـ 6 فئران لكل مجموعة. "" ص<0.01,><0.001 vs.con=""><><><0.001 vs.bph="">

جودة عالية

تأثير CSE على موت الخلايا المبرمج في الفئران التي يسببها BPH

يشير موت الخلايا المبرمج إلى موت الخلايا الذي يحدث كجزء طبيعي ومسيطر عليه من نمو الكائن الحي. تم ربط الاضطرابات في موت الخلايا المبرمج بعدد من الأمراض والظروف البشرية ، بما في ذلك BPH (Sciarra et al.2007). يعد تنشيط بروتياز السيستين الخاص بالأسبارتات ، والمعروف أيضًا باسم الكاسبيسات ، حدثًا كيميائيًا حيويًا مهمًا في موت الخلايا المبرمج (Fadeel and Orrenius 2005). و PARP -1 (ركيزة داخلية من كاسباس -3) مقارنة بالمجموعة التي يسببها BPH.

يتم تنظيم أحداث Apoptotic بإحكام من قبل أعضاء عائلة Bcl -2 من البروتينات (Cory and Adams 2002). لتحديد ما إذا كان CSE قد تسبب في موت الخلايا المبرمج عن طريق تغيير التعبير عن بروتينات Bcl -2 و Bax في أنسجة البروستاتا للحيوانات التي يسببها تضخم البروستاتا الحميد ، تم فحص مستويات هذه البروتينات عن طريق تحليل لطخة غربية. كما هو مبين في الشكل 5 ب ، أظهرت المجموعة المعالجة بـ CSE انخفاضًا في التعبير البروتيني للبروتينات المضادة للاستماتة Bcl -2 و Bcl-xL ولكن زيادة التعبير عن البروتين Bax المؤيد للاستماتة ، مقارنةً بالمجموعة التي يسببها BPH . وبالتالي ، انخفضت نسبة Bcl -2 إلى Bax بشكل ملحوظ بعد العلاج باستخدام CSE ، مما يشير إلى تورط عائلة Bcl -2 من البروتينات في موت الخلايا المبرمج الناجم عن CSE أثناء BPH (الشكل 5C).

تشير هذه النتائج إلى أن موت الخلايا المبرمج الناجم عن CSE يلعب دورًا في تأثيرات هذا المركب على BPH ، وأن هذه التأثيرات يتم توسطها من خلال تنظيم التعبير البروتيني المضاد والمؤيد للاستماتة.

مناقشة

يعتبر تضخم البروستاتا الحميد مرضًا مزمنًا يتسم بفترة نمو طويلة وتطور. يتطور تضخم البروستاتا الحميد من تضخم بسيط للعقيدات الدقيقة إلى تضخم حجم مجهري ، والذي يصبح بعد ذلك مشكلة إكلينيكية (Sciarra et al.2007). على الرغم من أن التسبب في تضخم البروستاتا الحميد لا يزال غير معروف إلى حد كبير ، إلا أن مستويات الأندروجين المرتفعة والشيخوخة هما عاملان من عوامل الخطر المحددة التي يُفترض أنها تشارك في تطوير BPH (بوتو وآخرون 2005 ؛ جان وآخرون 1995 ؛ ميغز وآخرون 2001) . اقترحت العديد من الدراسات أيضًا أن التستوستيرون و DHT يلعبان أدوارًا رئيسية في BPH (Carson and Rittmaster 2003؛ Gittelman et al.2006). هناك قدر كبير من البيانات التي تظهر أن هرمون التستوستيرون يتم تحويله إلى DHT بواسطة 5a-reductase النوع 1 والنوع 2 ، وأن DHT يحفز نمو البروستات ويلعب أدوارًا أكثر أهمية في التسبب في BPH ، جنبًا إلى جنب مع 5a-reductase type 2 (Bartsch وآخرون 2002a؛ Isaacs and Coffey 1989) بالإضافة إلى ذلك ، أفادت غالبية الدراسات الحالية أن 5a-reductase type 2 هو إنزيم متماثل سائد في أنسجة البروستاتا وأنه مسؤول عن ثلثي DHT المنتشر (Bartsch et آل 2002 ب ؛ سيلفر وآخرون 1994 أ). ومع ذلك ، لا يزال دور 5o-reductase النوع 1 والنوع 2 في تطوير BPH مثيرًا للجدل (Berman and Russell 1993 ؛ Bonnet وآخرون 1993 ؛ Shirakawa وآخرون 2004 ؛ Silver وآخرون 1994b ؛ Thigpen وآخرون 1993 ) ، وهناك حاجة إلى مزيد من الدراسات البيولوجية والدوائية في نماذج حيوانية مختلفة لحل هذه المشكلة. في هذه الدراسة ، قام علاج CSE بقمع تعبير mRNA لنوع 5a-reductase 1 والنوع 2 مقارنةً بالمجموعة التي يسببها BPH. تشير هذه البيانات إلى أن CSE يرتبط بشكل تنافسي بنوع 5a-reductase 1 والنوع 2 ويمنع استقلاب التستوستيرون إلى DHT.

الشكل 4. تأثير إدارة Cistanche salsa extract (CSE) على التعبير عن سينثاز أكسيد النيتريك المحرض (iNOS) وانزيمات الأكسدة الحلقية (COX) -2 في أنسجة البروستاتا في نماذج الفئران التي يسببها تضخم البروستاتا الحميد (BPH). تم تحديد مستويات التعبير عن بروتينات iNOS و COX -2 عن طريق النشاف الغربي باستخدام أجسام مضادة محددة. -وقد استخدم الأكتين باعتبارها الرقابة الداخلية. تم إجراء تحليل قياس الكثافة باستخدام Bio-rad Quantity One @ Software. تمثل البيانات المعروضة ± SlEM لـ 6 فئران لكل مجموعة. "" p<0.01 vs.con=""><><0.01 vs.="" bph="">

يصاحب تضخم البروستاتا الحميد نمو الأنسجة غير المنضبط ، وأثناء هذه العملية ، تنتج البيئة المكروية الالتهابية حول خلايا البروستاتا عن نشاط NO و COX -2 (Nelson et al. 2003). في جميع الخلايا الالتهابية التي تصل إلى البروستاتا ، iNOS موجود ، ويمكنه تنشيط النيتروجين التفاعلي الذي يمكن أن يدمر الخلايا (Baltaci وآخرون ، 2001). تعبر الخلايا الالتهابية في ظهارة البروستاتا عن هذا الإنزيم. يعزز NO أيضًا نشاط COX -2 ، وهو وسيط التهابي ثان. تم اكتشاف COX -2 في جميع الخلايا الالتهابية في الظهارة والخلالية

الفضاء ، ويزداد في الآفات الالتهابية التكاثرية ، مما يؤدي إلى إنتاج البروستاجلاندين المؤيد للالتهابات (Sciarra et al.2008). بسبب هذه التقارير ، قمنا أيضًا بفحص ما إذا كان تعبير iNOS و COX -2 قد زاد وما إذا كان CSE يخفف من تعبير هذه البروتينات في نموذج الفئران من BPH. في هذه الدراسة ، قمع CSE بشكل ملحوظ التعبير عن iNOS و COX -2 ، وتشير هذه البيانات إلى أن CSE يمكن أن يكون عاملاً فعالاً للعلاج الدوائي لـ BPH عن طريق تنظيم التعبير البروتيني المرتبط بالالتهاب.

الشكل 5. تأثير إدارة Cistanche salsa extract (CSE) على التعبير عن البروتينات المرتبطة بموت الخلايا المبرمج في أنسجة البروستاتا في نماذج الفئران التي يسببها تضخم البروستاتا الحميد (BPH). (أ) مستويات التعبير عن PARP -1 و procaspase {{4 }} تم تحديد البروتينات عن طريق النشاف الغربي باستخدام أجسام مضادة محددة. (ب) تم تحديد مستويات التعبير لبروتينات عائلة Bcl -2 عن طريق النشاف الغربي باستخدام أجسام مضادة محددة. -وقد استخدم الأكتين باعتبارها الرقابة الداخلية. (ج) تم إجراء تحليل قياس الكثافة لنطاقي Bax و Bcl -2 ، وتم رسم البيانات (الكثافة النسبية المقيسة إلى -اكتين) كنسبة Bcl -2 / Bax. تم إجراء تحليل قياس الكثافة باستخدام Bio-rad Quantity One @ Software. تمثل البيانات الموضحة متوسط ​​± SEM لستة فئران لكل مجموعة "<><><0.001 vs.con="" group;=""><><0.001vs.bph>

في تضخم البروستاتا الحميد ، تتمتع خلايا البروستاتا التي تعبر عن COX -2 بمعدل تكاثر أعلى ، ويتم تنظيم الجين المضاد للاستماتة Bcl -2 (وانج وآخرون 2004) ، مما يوفر ارتباطات بين الالتهاب وموت الخلايا المبرمج ونمو البروستاتا اختلال التوازن. بروتينات عائلة Bcl -2 هي الوسطاء الرئيسيون للاستجابة الأبوطوزية. يعزز بروتين Bax ، وهو عضو في عائلة Bcl -2 ، موت الخلايا المبرمج عن طريق تكوين جهاز homodimer وإطلاق السيتوكروم ج من الميتوكوندريا استجابة للإجهاد (Walensky 2006). في العديد من الأنظمة ، أعضاء Bcl {{7} } معدل موت الخلايا المبرمج العائلي ، حيث تعمل نسبة Bcl -2 / Bax كمؤشر على قابلية الخلية للاستماتة (Salakou et al. 2007). في هذه الدراسة ، أظهرنا أن CSE خفض بشكل ملحوظ مستويات Bcl المضاد للاستماتة -2 تعبير البروتين وزيادة مستويات التعبير عن بروتين Bax في نموذج BPH للجرذان. تشير هذه البيانات إلى أن تضخم البروستاتا الحميد تم تثبيته بواسطة آلية مضادة للاستماتة تتضمن انخفاضًا في نسبة Bcl -2 إلى Bax في المجموعة المعالجة بـ CSE ، وتشير إلى أن CSE تسبب على الأرجح في موت الخلايا المبرمج من خلال مسار الميتوكوندريا.

في هذه الدراسة ، أدى علاج CSE إلى تنشيط الكاسبيز -3 وتقليل التعبير البروتيني عن ركازته ، PARP -1 ، في المجموعة التي يسببها BPH. من المعروف أن الكاسبيسات هي عائلة من بروتياز السيستين التي تشق البروتينات المستهدفة في بقايا الأسبارتات المحددة ، وأنها تشكل المكونات الرئيسية لمسار موت الخلايا المبرمج. تم تحديد مسارين متميزين لموت الخلايا المبرمج: موت الخلايا المبرمج ببدء الميتوكوندريا ، والذي يحدث من خلال كاسباس -9 ، وطريق مسار مستقبل الموت الذي يتطلب الكاسبيز -8 (Mao et al. 2010). Caspase -3 هو جزيء مستجيب رئيسي في مسار موت الخلايا المبرمج المعتمد على كاسباس والذي يشق عددًا من البروتينات الخلوية ، مما يؤدي إلى تغييرات موت الخلايا المبرمج. وبالتالي ، فإن تنشيط النشاط الأنزيمي للكاسبيز -3 قد يوفر آلية لبدء برنامج موت الخلايا المبرمج (بوتوكار وآخرون ، 2003). سابقًا ، كان Kyprianou et al هو رائد البحث عن آليات العمل الجديدة لمضادات مستقبلات الأدرينالية. (1998) ، الذي كان أول من أبلغ عن التأثيرات المؤيدة للاستماتة لدوكسازوسين. أظهرت هذه الدراسة أن العلاج بدوكسازوسين زاد بشكل كبير من نشاط موت الخلايا المبرمج للخلايا اللحمية. ذكرت نفس المجموعة أن تأثيرات مضادات مستقبلات o الأدرينالية (تيرازوسين ودوكسازوسين) على موت الخلايا المبرمج تم توسطها من خلال زيادة التعبير عن TGF- وكاسبيز 3 (غلاسمان وآخرون 2001) ؛ تم تأكيد هذه البيانات من قبل Ilio et al. (2001) وثبت أنه صحيح حتى في خلايا سرطان البروستاتا (Benning and Kyprianou 2002). علاوة على ذلك ، فيناسترايد ، وهو مثبط 5o-reductase الذي يحول التستوستيرون إلى ثنائي هيدروتستوستيرون في انسجة البروستاتا والخلايا الظهارية ، قلل من تنظيم تعبير Bcl -2 و Bcl-xL ، مما يجعل خلايا البروستاتا أكثر عرضة للاستماتة (Huynh 2002). وبالمثل ، تم اكتشاف زيادة تنظيم البروتينات السيئة ، والتي تربط Bcl -2 و Bcl-xL معًا ، مما يتسبب في النهاية في تأثير مؤيد للاستماتة. ذكرت دراسة أخرى أن موت الخلايا المبرمج الناجم عن فيناسترايد قد تم بوساطة تنشيط الكاسبيز ، مما يوفر دليلًا إضافيًا على الآليات الجزيئية الدقيقة لعمله (Bozec وآخرون 2005). مثل هذه الدراسات ، تشير بياناتنا إلى أن التأثير المضاد للتكاثر لـ CSE يمكن أن يكون مرتبطًا ليس فقط بقمع إنتاج DHT في الدم ولكن أيضًا لتحريض موت الخلايا المبرمج ، بما في ذلك تنظيم البيئة المكروية الالتهابية في أنسجة البروستاتا التي يسببها BPH.

بناءً على الدراسة الحالية ، فإن CSE لديها القدرة على تقليل وزن البروستاتا وإنتاج DHT في المصل في الفئران التي يسببها BPH. قد تكون هذه التأثيرات من محرك البحث المخصص ناتجة عن انخفاض معدل Bcl -2 / نسبة Bax وتفعيل caspase -3 ، مما يؤدي إلى تحريض موت الخلايا المبرمج عن طريق تقليل تنظيم تعبيرات iNOS و COX -2. تشير نتائج هذه الدراسة إلى أن CSE قد يكون عاملًا علاجيًا محتملاً لعلاج تضخم البروستاتا الحميد.