النشاط المضاد للأكسدة ، والملف الفينولي ، وإمكانيات الحماية الكلوية لمستخلصات Anastatica Hierochuntica الإيثانولية والمائية ضد CCl 4- السمية الكلوية المستحثة في الفئران

جهة الاتصال: ali.ma@wecistanche.com

طارق المندارج وآخرون

الملخص:يستخدم Kaff-e-Maryam (Anastatica hierochuntica L.) على نطاق واسع لعلاج مجموعة من المشاكل الصحية ، وعلى الأخص لتخفيف الولادة وتخفيف الاضطرابات المتعلقة بالجهاز التناسلي. هدفت هذه الدراسة إلى تقييم تأثير A. hierophantic ethanolic (KEE) ، والاستخراج المائي (KAE) CCl 4- تسبب في الإجهاد التأكسدي والسمية الكلوية في الفئران باستخدام العلامات البيوكيميائية لـكلويالمهاموالحالة المضادة للأكسدة وكذلك الفحوصات النسيجية المرضية لأنسجة الكلى. يحتوي hierophantic على 67.49 مجم GAE جم 1 من إجمالي المركبات الفينولية (TPC) ، 3.51 ميكروغرام جم من إجمالي الكاروتينات (TC) ، و 49.78 و 17.45 مجم QE جم 1 من إجمالي مركبات الفلافونويد (TF) وإجمالي الفلافونول (TFL) ، على التوالى. نتج عن ذلك 128.71 ميكرو مول من TE g 1 من DPPH-RSA و 141.92 ميكرو مول من TE g من ABTS-RSA. قدم ألف الهيروفانتية متفوقةالنشاط المضاد للأكسدةعن طريق تثبيط جذور حمض اللينوليك ومعادن الأكسدة المخلبية. نتج عن تحليل HPLC 9 و 21 من الأحماض الفينولية و 6 و 2 من مركبات الفلافونويد فيKEEو KAE مع غلبة الأحماض الجيبية والحقنية ، على التوالي. الحقن العضلي للفيتامين. E plus Se والإعطاء عن طريق الفم لـ KEE و KAE و KEE plus KAE عند 250 مجم كجم من وزن الجسم استعاد بشكل كبير كرياتينين المصل واليوريا والبوتاسيوم ومستويات الألبومين الكلية. بالإضافة إلى ذلك ، قاموا بتقليل مستويات malondialdehyde (MOD) ، واستعادة الجلوتاثيون المنخفض (GSH) ، ومستويات ديسموتاز الأكسيد الفائق (SOD). قامت KEE و KAE و KEE plus KAE بحمايةالكلىمن CCl 4- السمية الكلوية لأنها تخفف بشكل أساسي من الإجهاد التأكسدي. المجموعنفرونكان القسم حوالي 83.27 في المائة و 97.62 في المائة و 78.85 في المائة لـ KEE و KAE و KEE plus KAE ، على التوالي. كلا فيت. خففت مستخلصات E plus Se و A. hierophantic التغيرات النسيجية المرضية في الفئران المعالجة بـ CCl 4-. في الختام ، تمتلك A. hierophantic ، وخاصة KAE ، القدرة المحتملة على استعادة الاستقرار التأكسدي والتحسينالكلىوظيفة بعد CCl4إصابة الكلى الحادأفضل من KEE. لذلك ، فإن A. hierophantic لديها القدرة على أن تكون عاملاً علاجيًا مفيدًا في علاج السمية الكلوية التي يسببها الدواء.

الكلمات الدالة:كاف مريم بوليفينول. النشاط الحيوي. المستقلبات الثانوية؛علامات الكلى؛ إنزيمات مضادات الأكسدة.كلوياختلال وظيفي

Cistanche NZ لمنع أمراض الكلى ، انقر هنا للحصول على العينة

1 المقدمة

مرض كلويهو السبب الرئيسي التاسع للوفاة مع أكثر من 1 من كل 7 ، أي 15 بالمائة من البالغين في الولايات المتحدة أو 37 مليون شخص ، يُقدر أنهم مصابونفشل كلوي مزمن(كد) [1]. من اللافت للنظر أن السبب الأكثر شيوعًا لمرض الكلى المزمن كما هو مسجل في عام 2015 هو داء السكري يليه ارتفاع ضغط الدم والتهاب كبيبات الكلى [2]. تشمل الأسباب الأخرى لمرض الكلى المزمن مجهول السبب (غالبًا ما يرتبط بالكلى الصغيرة على الموجات فوق الصوتية الكلوية) [3]. في السابق ، تم استخدام CCl4 لإزالة الشحوم من المعادن ، والتنظيف الجاف ، واكتشاف الأقمشة ، وسوائل مطفأة الحريق ، وتبخير الحبوب [4]. يسبب اضطرابات شديدة في الكبد والرئتين والخصيتين وكذلك في الدم عن طريق توليد الجذور الحرة النشطة [5]. وفقًا لنتائج Ogeturk et al. [6] ، يؤدي التعرض لهذا المذيب إلى تلف الكلى الحاد والمزمن. يُعتقد أن بيروكسيد الدهون الناجم عن الجذور الحرة هو أحد الأسباب الرئيسية لتلف غشاء الخلية ، مما يؤدي إلى مجموعة متنوعة من الحالات المرضية [7]. إن توليد الجذور التفاعلية متورط في السمية الكلوية المستحثة بـ CCl 4- ، والتي تشارك في بيروكسيد الدهون وتراكم البروتينات المختلة وظيفيًا ، مما يؤدي إلى إصابات في الكلى [8]. نمت الاستخدامات التقليدية المذهلة للنباتات الطبية في السنوات الأخيرة ، وأكدت العديد من التحقيقات دورها العلاجي ضد العديد من الأمراض [9-12].

2. المواد والأساليب

2.1. إعداد عينة

تم شراء عينة من نبات Kaff-e-Maryam (A. hierophantic L.) من سوق محلي في مدينة بريدة ، منطقة القصيم ، المملكة العربية السعودية. تمت المصادقة على المادة النباتية من قبل قسم الإنتاج النباتي ووقاية النبات ، كلية الزراعة والطب البيطري ، جامعة القصيم ، المملكة العربية السعودية. تم غسل العينة بماء الصنبور النظيف لإزالة الرمل والأوساخ من الأوراق ثم تم تجفيف مادة النبات المجففة بالهواء (عند 28 ± 1 درجة مئوية لمدة 48 ساعة) ميكانيكياً وحفظها في أكياس بولي إيثيلين غير شفافة عند 4 ± 1 درجة مئوية. حتى الاستخدام.

2.2. تحضير المستخلصات الإيثانولية والمائية

تم استخراج ما يقرب من 200 جم من A. hierophantic المجفف مع 300 مل من الإيثانول بنسبة 70 بالمائة في جهاز استخلاص Soxhlet لتحضير الاستخلاص الإيثانولي (KEE). تم تركيز المستخلص بواسطة مبخر دوار عند 40 ْم لتبخير المذيب المتبقي ، ثم حتى يجف تحت تيار N2. تم إجراء الاستخلاص المائي (KAE) كما وصفه Asuzu [23] مع تعديلات طفيفة. تمت إضافة مائتي جرام من المواد النباتية المجففة إلى 500 مل من الماء المقطر المعقم الساخن. يُرج الخليط جيدًا بعد ذلك ويُترك للوقوف لمدة ساعة واحدة. ثم تم إرفاق مكثف ارتجاعي بالقارورة ثم تم تسخينه حتى الغليان برفق لمدة 10 دقائق ، ثم تبريده ، ورجه جيدًا ، ثم ترشيحه من خلال ورق الترشيح Whatman رقم 1. تم تبخير ناتج الترشيح بواسطة مبخر دوار ، ثم حتى يجف تحت تيار N2. تمت صياغة المستخلصات الكحولية والمائية (250 مجم مل -1) حديثًا في ماء مقطر لاستخدامها عن طريق الفم.

2.3 إجمالي محتوى الفينول (TPC)

تم تحديد محتوى TPC من A. hierophantic وفقًا للطريقة المعدلة بواسطة Bettaieb et al. [24]. تمت مقارنة النتائج بمنحنى معياري لحمض الغال (GA) تم إجراؤه في نطاق 50-500 مجم مل (R 2=0. 99) ، وتم حساب TPC على أنه مجم من مكافئ حمض الغال (GAE) ) لكل جرام من A. hierophantic (مجم من GAE g 1).

2.4 إجمالي الكاروتينات (TC) ، إجمالي الفلافونويد (TF) ، وإجمالي الفلافونول (TFL)

كما أوردت القبة وآخرون. [10] ، تم استخلاص 5 جم من A. hierophantic بشكل متكرر باستخدام خليط الأسيتون والإيثر البترولي (1: 1 ، حجم / حجم). تم تحديد إجمالي محتوى الكاروتينات (TC) بشكل طيفي عند 451 نانومتر. تم التعبير عن TC كـ mg g 1 DW. تم تقييم محتوى TF لـ A. hierophantic وفقًا للبروتوكول الموصوف بواسطة Mohdaly et al. [25]. تم حساب محتوى TF على أنه معادل ملغ كيرسيتين (QE) لكل 100 جم 1 DW. في نفس السياق ، تم تنفيذ محتوى TFL [26]. تم تسجيل الامتصاصية عند 440 نانومتر ، وتم حساب TFL كمكافئ ملغ كيرسيتين (QE) لكل 100 جم 1 DW.

2.5 تحديد قدرة مضادات الأكسدة

مقايسة الكسح الجذري لـ DPPH: تم اختبار RSA بطريقة طيفية اعتمادًا على تبييض محلول DPPH الأرجواني اللون وفقًا لتقنية معدلة بواسطة Lu et al. [27]. تم تقديم السعة المضادة للفطريات على شكل µmol من مكافئات Trolox (TE) لكل جرام من A. hierophantic (µmoL TE g − 1). نشاط الكسح الجذري ABTS: تم اختبار RSA لـ A. hierophantic ضد جذور ABTS بالطريقة المعدلة لـ Lu et al. [27]. تم التعبير عن النتائج كـ µmoL TE g 1. مقايسة التبييض بحمض الكاروتين واللينوليك: تم تقييم النسبة المئوية لمضادات الأكسدة في A. [28] ؛ تم إعطاء النتائج كنسبة مئوية مرتبطة بـ BHA. التأثير المخلب لـ A. hierophantic على الأيونات الحديدية: تم قياس النشاط المخلب لـ A. hierophantic وفقًا لما حدده Zhao et al. [29]. تم قياس نسبة تثبيط ferrozine – Fe2 بالإضافة إلى التكوين المعقد كعمل مخلب معدني وتم تقديمه على شكل مجم مل عند استخدام حمض إيثيلين ديامينيتراسيتيك (EDTA) كعنصر تحكم إيجابي.

2.6. تجزئة مركب بوليفينول لمستخلصات أ

تم إجراء تحديد البوليفينول من المستخلصات الإيثانولية والمائية بواسطة نظام HPLC HP1100 (Agilent Technologies ، Palo Alto ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) مجهز بأخذ العينات التلقائي ، ومضخة رباعية ، وكاشف صفيف الصمام الثنائي (Hewlett Packard 1050) باستخدام عمود (Altima) C 18 150 × 4.6 مم ، 5 ميكرومتر) بعمود حماية Altima C18 5 مم (Alltech ، Nettetal ، ألمانيا) وفقًا لـ Goupy et al. [30]. كان نظام المذيبات المستخدم عبارة عن تدرج من A (حمض أسيتيك 2.5 بالمائة) و ​​B (حمض أسيتيك 8 بالمائة) و ​​C (أسيتونتريل). كان معدل زميل المذيب 1 مل دقيقة ، وتم إجراء الفصل عند 35 درجة مئوية. كان حجم الحقن 10 ميكرولتر. تمت معايرة المركبات الفينولية عن طريق المعايرة القياسية الخارجية وتم التعبير عنها كمجم جم جم -1 DW من مكافئ (زائد) -كاتشين لـ flavan -3- ols والكومارين المكافئ للمركبات العطرية القطبية. تم تحديد تباين بنسبة 8 في المائة على خمسة مستخلصات من الفينول من نفس العينة. كانت جميع القيم تعني الحقن المكرر. تم تحديد البوليفينول ومشتقاته وتحديد كميته عند 280 و 320 نانومتر ، بينما تم تحديد مركبات الفلافونويد عند 360 نانومتر.

2.7. تصميم تجريبي

تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان المؤسسية (IAEC) في جامعة قطر (رقم {0}}) ، المملكة العربية السعودية ، والتي ينظمها الغرض من الرقابة والإشراف على التجارب على الحيوانات (CPCSEA) لجنة تابعة للجنة الوطنية لأخلاقيات البيولوجيا (NCBE) ، اللائحة التنفيذية لقانون أخلاقيات البحث على الكائنات الحية. تم استخدام ما مجموعه 36 من ذكور الجرذان البيضاء في الدراسة الحالية وتم تقسيمها إلى 6 مجموعات من 6 حيوانات لكل منها وتم التعامل معها على النحو التالي: تلقت المجموعة الأولى (مجموعة التحكم) حقنة داخل الصفاق (ip) من زيت الزيتون (1. 0 مل كلغ − 1 مرتين في الأسبوع) و 0. 5 مل من الماء المقطر شفويا / يوميا لمدة 21 يوما متتالية. تلقت المجموعة الثانية حقنة IP من خليط طازج من أحجام متساوية من CCl4 وزيت الزيتون (بجرعة 1. 0 مل كلغ 1 مرتين في الأسبوع) و 0. 5 مل من الماء المقطر عن طريق الفم / يوميًا وفقًا لـ Al-Qabba et al. [10] مع تعديلات طفيفة. تلقت المجموعة الثالثة (مجموعة مرجعية) حقنة عضلية (im) من 50 مجم كجم -1 فيتامين. E plus Se (Selepherol ، Vetoquinol Co. ، Magny-Vernois ، فرنسا) مرتين في الأسبوع ، وفقًا لـ Asuka et al. [31] والدسوقي وآخرون. [32] ، و 0.5 مل من الماء المقطر شفويا / يوميا. استخدمت المجموعة الرابعة كاختبار وتلقت 250 مجم كجم من KEE شفويا / يوميا مع CCl4 ip مرتين في الأسبوع. تلقت المجموعة الخامسة 250 مجم كجم من KAE عن طريق الفم / يوميًا مع CCl4 ip مرتين في الأسبوع. تلقت المجموعة السادسة 250 مجم كجم من KEE plus KAE (1: 1) عن طريق الفم / يوميًا مع CCl4 ip مرتين في الأسبوع. بعد أربع وعشرين ساعة من آخر علاج (يوم 21) ، تم تخدير الفئران بالمزيج (كحول: كلوروفورم: أثير ، 1: 2: 3). تم جمع عينات الدم من ثقب القلب لجميع الحيوانات ، وفصل المصل بالطرد المركزي عند 4000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق وحفظها عند -20 درجة مئوية للفحص الكيميائي الحيوي.

2.7.1. تحليل الكيمياء الحيوية في الكلى

تم تحديد تركيزات مصل الكرياتينين واليوريا والبروتين الكلي والألبومين من خلال طرق القياس الطيفي الآلي (محلل آلي BM / Hitachi -911 ؛ Boehringer Mannheim ، ألمانيا) وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. تم تحديد مستويات البوتاسيوم عن طريق قياس الضوء اللهب عند 766 نانومتر.

2.7.2. تقدير نشاط مضادات الأكسدة الكلوية

بعد جمع عينات الدم ، تم التضحية بالحيوانات من جميع الفئات ؛ حقاالكلىتم عزلها وشطفها بسرعة بمحلول ملحي بارد. ثم يتم قص الأنسجة وشطفها في محلول ملحي بارد وتجفيفها وتجفيفها ووضعها على الجليد على الفور. باستخدام مجانس الأنسجة الكهربائية ، تم وزن أجزاء من الأنسجة (1. 0 جم) وتجانسها مع 9 أحجام من الجليد البارد 0. 05 M عازلة الفوسفات عند درجة الحموضة 7.4. تمت إزالة حطام الخلية بالطرد المركزي عند 12 ، 000 دورة في الدقيقة (4 درجات مئوية) لمدة 20 دقيقة لجمع المواد الطافية لتحديد تركيز malondialdehyde (MDA) [33] ، ونشاط ديسموتاز الفائق (SOD) [34] ، وتم تقليله محتوى الجلوتاثيون (GSH) [35]. تركيز البروتين فيالكلىتم تحديد التجانس باستخدام طريقة برادفورد [36].

2.7.3. نسبة حماية الكلية

نسب حماية الكلية (F) من فيتامين. تم حساب E plus Se و KEE و KAE و KEE plus KAE لكل معلمة كيميائية حيوية بشكل منفصل وفقًا لـ Wakchaure et al. [37] باستخدام المعادلة التالية:

حيث T=تعني قيمة مجموعة العلاج و C=تعني قيمة مجموعة التحكم الإيجابية و N=تعني قيمة مجموعة التحكم السلبية. علاوة على ذلك ، تمت مقارنة النسبة المئوية الكلية لحماية الكلى (نسبة TFP) بالفيتامين. يتبع E plus Seas:

2.7.4. دراسات الأنسجة

تم جمع عينات التشريح من اليسارالكلىمجموعات منفصلة من الجرذان ومثبتة في محلول ملحي بنسبة 10 في المائة لمدة 24 ساعة. الغسل بماء الصنبور أعقبه الجفاف بتخفيفات متسلسلة للكحول (ميثيل ، إيثيل ، وإيثيل مطلق). تم مسح العينات في زيلين ودمجها في البارافين لمدة 24 ساعة عند 56 درجة مئوية في فرن الهواء الساخن. تم تحضير كتل نسيج شمع نحل البارافين للتقطيع بسماكة 4- ميكرون باستخدام مشراح مزلقة. تم جمع شرائح الأنسجة على شرائح زجاجية ، منزوعة الكافيين ، وملطخة بالهيماتوكسيلين ويوزين للفحص المنتظم تحت مجهر كهربائي خفيف [38].

2.8. تحليل احصائي

تظهر النتائج على أنها تعني ± خطأ معياري (SE). تم فحص أهمية الاختلافات بين الوسائل في المجموعات المختلفة باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) متبوعًا باختبار Duncan ، وتم إعطاء قيمة p بين الوسائل في p <0. 05="" المستوى="" [39="">

3. النتائج

3.1. قدرة المواد الكيميائية النباتية ومضادات الأكسدة لـ A. hierophantic

تم إجراء التحليل الكمي للمواد الكيميائية النباتية A. hierophantic وأنشطة مضادات الأكسدة ذات الصلة باستخدام DPPH و ABTS ، وأنشطة التبييض بحمض الكاروتين واللينوليك والقدرة الخلبية (CA). كما يتضح من الجدول 1 ، كان محتوى TPC 67.49 مجم GAE g 1. كان محتوى TC 3.51 ميكروغرام جم. كانت محتويات TF و TL 49.78 و 17.45 مجم QE جم على التوالي. علاوة على ذلك ، تم استخدام DPPH-RSA و ABTS-RSA لقياس تطور أنشطة مضادات الأكسدة. أشارت النتائج إلى 128.71 ميكرو مول من TE g و 141.92 ميكرو مول من TE g 1 لـ DPPH-RSA و ABTS-RSA على التوالي. بالإضافة إلى ذلك ، فإنالنشاط المضاد للأكسدةتم عرض (AOA) لـ A. hierophantic في الجدول 1. تم حساب نسبة تثبيط جذور حمض اللينوليك بنسبة 45.74 بالمائة مقارنة بـ BHA باستخدام مقايسة التبييض بالكاروتين (-CB). علاوة على ذلك ، أظهر تقييم نشاط استخلاب المعادن 42.89 مجم جم / 1 ، والذي يبدو أنه بارع في التداخل مع تكوين مركب Fe2 plus -ferrozine ، مما يشير إلى قدرته على تخليب معادن الأكسدة.

3.2 القياس الكمي للمركبات الفينولية A. hierophantic

تم إجراء التحليل الكمي للمركبات الفينولية لـ KEE و KAE بواسطة تحليل HPLC ، وتم تحديد البيانات في جدول 2. تم تحديد تسعة أحماض فينولية منفصلة وستة مركبات فلافونويد بكميات يمكن اكتشافها من KEE لـ A. hierophantic. كانت الأحماض الفينولية الأكثر وفرة هي أحماض الهيدروكسي سيناميك مثل حمض سينابيك (28.7 0 4 مجم 1 0 0 جم -1) يليها حمض الكافيين (6.621 مجم 1 0 { {61} جم − 1) ، وحمض روزمارينيك (2.884 مجم 100 جم -1) ، وحمض الفيروليك (1.854 مجم 100 جم -1) ، وحمض سيناميك (0.094 مجم 100 جم -1) ؛ وحمض الهيدروكسي بنزويك مثل حمض p-hydroxybenzoic (3.440 مجم 100 جم -1) وحمض بروتوكاتيكويك (1.811 مجم 100 جم -1) وحمض الفانيليك (3.326 مجم 100 جم -1) وحمض السيرنجيك (1.083 مجم 100 جم) −1). مركبات الفلافونويد مثل ميريستين (16.269 مجم 100 جم -1) ، دي كاتشين (2.410 مجم 100 جم -1) ، كايمبفيرول (0.434 مجم 100 جم -1) ، روتين (0.539 مجم 100 جم -1) ، أبجينين {{56} } تم اكتشاف كميات لا تقدر بثمن جلوكوزيد (0.192 مجم 100 جم) وكيرسيتين (0.184 مجم 100 جم). تم أيضًا تحديد المركبات الفينولية في KAE لـ A. hierophantic ، وتم إدراج البيانات في جدول 2. تم تسجيل حمض Syringic كأعلى حمض الفينول بين 21 مركبًا فينوليًا تم تحديده. كان الكاتيكول والبيروجالول 2.526 و 1.589 مجم 100 جم على التوالي. بيانات

أشار إلى أن بعض الأحماض الفينولية مثل الكافيين والكاتشين والكلوروجينيك والإبيكاتشين والفانيليك الإلكتروني والبروتينوكسيبنزويك والبروتوكاتيكويك تم اكتشافها بكميات معتدلة من 0. 725، 0. 256، { {6}}. 136 و 0. 193 و {{1 {12}}}. 443 و 0. 223 و 0.454 مجم 100 جم − 1 على التوالي. في نفس السياق ، كميات منخفضة من 3،4 ، 5- time ethoxy cinnamic ، 4- aminobenzoic، benzoic، cinnamic، coumarin، ellagic، ferulic، gallic، iso-ferulic، -coumaric، p-coumaric ، وحمض الساليسيليك بعد تحديده. تم قياس كمية Epicatechin و D-catechin مثل مركبات الفلافونويد في KAE من A. hierophantic أيضًا.

3.3 مصل الكرياتينين واليوريا والبوتاسيوم ومستويات البروتين الكلي والألبومين

أدى حقن CCl4 إلى زيادة مستويات الكرياتينين واليوريا و k في الدم بشكل كبير في جرذان GII بالمقارنة مع الجرذان الضابطة (GI). بالمقابل ، انخفض إجمالي مستويات البروتين والألبومين بشكل ملحوظ في الفئران المعالجة بـ CCl 4- (الجدول 3). فيت. قللت المستخلصات الهيروفانتية (G III و IV و V و VI) من E plus Se و A. ). تمت زيادة مستوى المصل k بشكل ملحوظ في الفئران المعالجة CCl 4- (GII) بالمقارنة مع GI (الجدول 3). حقن فيت. تم أيضًا تحسين E plus Se وإدارة المستخلصات المائية والكحولية الهيروفانتية (G IV و V و VI) بشكل إيجابي على مستوى k بالمقارنة مع GI (الجدول 3).

3.4. المؤشرات الحيوية المضادة للأكسدة الكلوية

كما هو مبين في الجدول 4 ، أدى استخدام CCl4 إلى خفض مستويات SOD و GSH بشكل كبير وزيادة مستوى MDA في GIIالكلىتجانس الأنسجة. ومع ذلك ، عند مقارنتها مع الجهاز الهضمي ، عولجت الفئران بكل من فيتامين. أظهرت مستخلصات E plus Se و A. hierophantic (GIII و VI و V و VI) تحسنًا كبيرًا في نشاط إنزيمات مضادات الأكسدة SOD و GSH ، بالإضافة إلى انخفاض في مستويات MDA (الجدول 4). تفوق المستخلص الكحولي الهيروفانتي (GIV) على المستخلص المائي الهيروفانتي (GV) والمُستخلصات الكحوليّة الهيروفانتية والمُستخلصات المائية في تخفيف مستويات مضادات الأكسدة ، ومكافحة عملية الأكسدة التلقائية أدت إلى انخفاض مستويات MDA عند مقارنتها بـ GI.

3.5 نسبة حماية الكلية

نسبة حماية الكلية (نسبة إلى مجموعة التحكم السلبية (GI) والإيجابية (GII)) لـالكلىيوضح الجدول 5 وظائف مثل الكرياتينين واليوريا و k و TP والألبومين وكذلك الأنشطة المضادة للأكسدة في تجانس الكلى (MDA ، SOD ، GSH). سجلت نسبة حماية الكلية أعلى قيمة مثل الكرياتينين واليوريا و k في GIII ، TP ، والألبومين في GV و MDA و GSH في GIII و SOD في GV (الجدول 5). النسبة المئوية الكلية للحماية من الكلى بالنسبة لفيتامين. سجل علاج E plus Se مستويات قصوى في المجموعة المعالجة KAE (GV ، 97.62 بالمائة) ، ثم KEE (GIV ، 83.27 بالمائة) ، ثم KEE plus KAE (GVI ، 78.85 بالمائة) ، كما هو موضح في الجدول 5.

3.6 آثار مستخلصات A. hierophantic على الهندسة المعمارية الكلوية

تم دعم نتائج الفحوصات البيوكيميائية بالفحص التشريحي المرضي. يوضح الجدول 6 والشكل 1 درجة التغيرات النسيجية في الهيكل الأساسي للفئرانالكلىفي مجموعات تجريبية مختلفة عولجت بمستخلصات A. hierophantic. في التحقيق الحالي ، فإنالكلىمن المجموعة الضابطة (GI) وجد أن لديها بنية نسيجية طبيعية (الشكل 1 (I.1)). أظهرت الهندسة المعمارية للفئران المعالجة بـ CCl 4- تسلل الخلايا الالتهابية البؤرية (زائد زائد) بين الأنابيب في القشرة ، واحتقان (زائد) الأوعية الدموية بين الأنابيب (الشكل 1 (II.2) ) ، تشكيلات متعددة من الحمضات (زائد زائد) في تجويف بعض الأنابيب ، ونزيف بؤري (زائد زائد) بين الأنابيب المتدهورة في الجزء القشري النخاعي (الشكل 1 (II.3) ، الجدول 6). في GIII ، حقن فيتامين. E plus Se ، إدارة المستخلص الكحولي لـ A. hierophantic (GIV) ، والمستخلص المائي من A. hierophantic (GV) ، ومزيج من مستخلصات A. احتقان معتدل (زائد) في الأوعية الدموية بين الأنابيب في القشرة (الشكل 1 (III.4-VI.8) ، الجدول 6) مع كبسولة بومان المتطورة مع الكبيبات والأنابيب الملتفة المتضخمة. بالإضافة إلى ذلك ، سجل المستخلص المائي لـ A. hierophantic (GV) تسلل الخلايا الالتهابية البؤرية (زائد زائد) في الجزء القشري النخاعي (الشكل 1 (V.7) ، الجدول 6).

4. مناقشة

المواد الكيميائية النباتية هي في الغالب كاسحات فعالة للجذور الحرة وتعتبر من العوامل النباتية المضادة للأكسدة الفائقة. يعتقد أن المواد البوليفينولية لها خصائص مضادة للسرطان ومضادة للطفرات في البشر [40]. كان محتوى TPC القيم في A. hierophantic أعلى قليلاً من المحتوى الذي حصل عليه محمد وآخرون. [21] على شكل 51.97 مجم من GAE g × 1 في A. عشب هيروفانتك وبواسطة AlGamdi et al. [41] ، الذي وجد 4 مليمول لتر × 1 GAE في بذور A. hierophantic. في الآونة الأخيرة ، زين وآخرون. [42] أشار إلى وجود العفص في A. hierophantic كمركب نشط بيولوجيًا وأوصى بنشاطه الحيوي ، والذي يحتاج إلى فحص عميق. كان محتوى الكاروتين ، كجزء من إجمالي الكاروتينات ، 2.27 ميكروغرام جم × 1 كما ذكر محمد وآخرون. [21] ، وحتى النتائج الحالية قدمت الكاروتينات الإجمالية على أنها 3.51 ميكروغرام جم × 1. نتائج مماثلة في محتويات avonoid و avonol قد أشار إليها محمد وآخرون. [21]. المكونات النشطة بيولوجيا ، مثل المركبات الفينولية ، موجودةالنشاط المضاد للأكسدةكتفكك تفاعلات سلسلة أكسدة الدهون بإعطاء الهيدروجين للجذور الحرة النشطة. تم توضيح إمكانية الكسح للفينول لتثبيط الجذور من خلال مجموعات الهيدروكسيل الفينولية الخاصة بهم [8،10،22]. تم وصف حمض الفينول هذا بأنه مكون فعال مضاد للأكسدة ، بما في ذلك بيروكسيد الهيدروجين ، وجذر الهيدروكسيل ، وأنيون الأكسيد الفائق [43]. A. يبدو أن نشاط استخلاب المعادن الهيروفانتية فعال في التدخل في البناء المركب "Fe2 plus -ferrozine" ، مما يشير إلى قدرته على التقاط الأيونات "الحديدية" قبل "ferrozine". يشار مباشرة إلى وجود علاقة إيجابية بين زيادة محتوياتها من المركبات الفينولية مع قدرتها المضادة للأكسدة [42]. Andjelkovi´c et al. [44] أنشأ نشاط العديد من الأحماض الفينولية لتشكيل معقدات مع المعادن. تعطي TPC القيمة والأنشطة المضادة للأكسدة ذات الصلة باستخدام طرق قياس مختلفة لوحة واضحة من النشاط الحيوي لـ A. hierophantic كعشب طبي لتطبيقات الأطعمة أو المشروبات.

مكونات فعالة مضادة للأكسدة ، بما في ذلك بيروكسيد الهيدروجين وجذر الهيدروكسيل وأنيون فوق أكسيد [43،45،47]. كانت المركبات المحددة والكمية بواسطة HPLC في KAE لـ A. hierophantic أعلى من عدد المركبات المحددة في KEE ، ولكن تم تقديم المركبات المحددة في KEE لـ A. hierophantic بكميات أعلى [22]. تعكس النتائج أن المستهلكة A. hierophantic يمكن أن تقدم العديد من المكونات في كل من الأشكال القطبية وغير القطبية. تم تقديم هذه النتائج بالمثل من قبل AlGamdi et al. [41] كما حددوا وحددوا 20 مركب بوليفينول في بذور A. hirerochuntica. احتوى المستخلص على أحماض كلوروجينيك وأحماض هيدروكسي بنزويك ، لكن المكونات الرئيسية كانت فلافون C- جليكوسيدات ، C-diglycosides ، O-glycosides ، و O-glycoside-C-glycosides التي تحدث في الغالب على شكل اتحادات لوتولين. بالإضافة إلى ذلك ، تم عرض 14 من أصل 20 مركبًا في خلاصة A.النشاط المضاد للأكسدةباستخدام نظام الكشف عن مضادات الأكسدة HPLC على الإنترنت [41]. ومن المثير للاهتمام ، أن البيانات الحالية أكدت أن A. hierophantic غنية بالمركبات الكيميائية النباتية وهي مصدر جيد لمضادات الأكسدة الطبيعية ذات الفوائد الصحية المحتملة ، كما لم يتم إبرازها من قبل في البذور [41]. ومن ثم ، فإن الشاي المحضر من مسحوق النبات الكامل هو الشكل التقليدي للاستهلاك ؛ أوضحت البيانات مركبات نشطة بيولوجيًا جديدة تم تحديدها في KEE و KAE من A. hirerochuntica ، والتي تختلف عن تلك الموجودة في AlGamdi et al. [41]

في العديد من الدراسات ، تم استخدام CCl 4- السمية الكلوية المستحثة كنظام نموذجي لاختبار التأثير الوقائي للكلية للمستخلصات النباتية / العقاقير [48،49]. نظرت الدراسة الحالية في تأثير مستخلصات A. hierophantic على CCl 4- المستحثالكلىالضرر ، فضلا عن قدرتها على حماية الكلية ومضادات الأكسدة في الفئران. في الدراسة الحالية ، زادت مجموعة علاج CCl4 (GII) بشكل ملحوظ من مستويات الكرياتينين واليوريا و k وخفضت تركيزات البروتين والألبومين الكلية مقارنةً بـ GI. قد يكون هذا بسبب تسمم CCl4 هو مصدر رئيسي لإنتاج الجذور الحرة في العديد من الأعضاء ، بما في ذلك الكبد والكلى والرئتين والدماغ والدم [50]. وقد لوحظ أيضًا أنه بعد حقن CCl4 في الفئران ، فإن تركيز CCl4 يتوزع بالتساوي في الكلى أكثر منه في الكبد [51] ، منذالكلىلديه تقارب كبير مع CCl4 ويحتوي على السيتوكروم P450 ، في الغالب في القشرة. الجذور الحرة الأكثر شيوعًا من CCl هي جذور ثلاثي كلورو ميثيل (CCl3 •) وجذر ثلاثي كلورو ميثيل بيروكسيل (CCl3O2 •) [52]. ترتبط هذه الجذور ببروتين داخل الخلايا ، ودهون غشاء الخلية ، والحمض النووي ، مما يتسبب في تمسخ البروتين ، وبيروكسيد الدهون ، وتلف الحمض النووي المؤكسد الذي يؤدي إلى موت الخلايا [53]. وعلى النقيض من ذلك ، فإن علاج الفئران باستخدام فيتامين (4-) ​​CCl. خففت مستخلصات E plus Se (GIII) و A. hierophantic (GVI: VI) هذه الارتفاعات بكفاءة في مستويات الكرياتينين واليوريا بالإضافة إلى زيادة ألبومين المصل والبروتينات الكلية لتكون قريبة جدًا من مستوياتها في الجهاز الهضمي. قد يكون هذا بسبب الخصائص المضادة للأكسدة والمحتوى الفينولي الغني لمستخلصات A. hierophantic والقدرة المضادة للأكسدة والنشاط المخلب للفيتامين. E plus Se ، الذي ينظف الجذور الحرة وبالتالي يمنع تلف الكلى. المواد الكيميائية النباتية هي أكثر أنواع كاسحات الجذور الحرة فاعلية وتعتبر من العوامل المضادة للأكسدة الفائقة من النباتات [54]. كانت المركبات الفينولية الأكثر وفرة هي أحماض هيدروكسي سيناميك ، مثل حمض سينابيك ، من بين المركبات الفينولية التسعة المحددة في KEE ، بينما كان حمض السرينجيك هو أعلى حمض الفينول بين 21 حمض فينول تم تحديده في KAE. تم تحديد ستة مركبات فلافونويد في KEE واثنين في KAE باستخدام تحليل HPLC [55]. علاوة على ذلك ، كمضاد للأكسدة ، فيتامين. يعتقد أن E تحمي الأنسجة من الضرر الناجم عن نواتج الأيض الأكسجين التفاعلية. السيلينيوم معروف أيضًا بكونه معدنًا نادرًا أساسيًا لصحة الإنسان ، حيث يحمي الخلايا من الآثار الضارة للجذور الحرة [22].

في الدراسة الحالية ، خفضت إدارة CCl4 بشكل ملحوظ GSH و SOD وزادت مستويات MDA فيالكلىمتجانسة بالنسبة إلى GI. فيت. خففت مستخلصات E plus Se و A. hierophantic التأثيرات المتنوعة لـ CCl من خلال استعادة النشاط المتغير لعوامل مضادات الأكسدة مثل SOD و GSH وقد تعطل عملية إنتاج MDA ، كما تم الإبلاغ عنه مؤخرًا [15،21،40،41] . GSH هو أحد مضادات الأكسدة غير الأنزيمية الموجودة في جميع خلايا الثدييات. مع شكله المؤكسد ، GSSG ، GSH يعمل كعامل مساعد للعديد من إنزيمات إزالة السموم (GPx ، GST ، وغيرها) ضد الإجهاد التأكسدي ويحافظ على توازن الأكسدة الخلوي [47]. هذه النتيجة تتبع نتائج خان وصديق [56] ومكني وآخرون. [57] ، الذي ذكر أن CCl4 أدى إلى انخفاض مستوى GSH في كلى الفئران. العلاج بفيتامين. أظهرت المستخلصات الهيروفانتية E plus Se و A. حماية ضد انخفاض مستوى GSH الناجم عن CCl. في نفس السياق ، يحفز SOD تفكيك جزيئين من أنيون فائق الأكسيد (* O2) إلى بيروكسيد الهيدروجين (H2O2) والأكسجين الجزيئي (O2) ، مما يجعل أنيون الأكسيد الفائق الضار أقل خطورة [58،59]. تسمم CCl4 يغير مستوى التعبير الجيني عن طريق استنفاد الكلوي SOD [60]. انخفاض نشاط SOD هو مؤشر حساس للضرر الخلوي. تعمل مستخلصات A. hierophantic المختبرة على تحسين السمية الكلوية عن طريق التخفيف من مستوى SOD. يشارك في عمليات إنزيمية مختلفة لتقليل تركيز تفاعلات إزالة السموم [61]. MDA هو المنتج الأول لأكسدة الدهون وهو أحد العلامات المهمة للإجهاد التأكسدي. A. قللت المستخلصات الهيروفانتية من الزيادة في مستويات MDA واستعادت القوة الكلية المضادة للأكسدة في كليتي الفئران المعالجة CCl 4-. قد تكون هذه التأثيرات الوقائية بسبب النشاط المضاد للأكسدة القوي لمستخلصات A. hierophantic [15،21،40،41]. تشير هذه النتائج أيضًا إلى أن مستخلصات A. hierophantic قد تخفف من الإجهاد التأكسدي عن طريق تقليل مستويات بيروكسيد الدهون في كليتي الفئران المكشوفة CCl 4- ومنع تلف الكلى. تتفق هذه النتائج مع نتائج الأنشطة المضادة للأكسدة للزنك على CCl 4- التي تسبب السمية الكلوية الحادة [62،63].

قدمت A. hirerochuntica مقتطفات قيمة nephroprotection المقدرة فيما يتعلقالكلىاختبارات الوظائف (الكرياتينين ، واليوريا ، والبوتاسيوم ، والألبومين) وأنشطة مضادات الأكسدة لمجانس الكلى (GSH ، SOD ، MDA) في GIV و V و IV على التوالي. النسبة المئوية الكلية للحماية من الكلى بالنسبة لفيتامين. سجل علاج E plus Se مستويات قصوى في المجموعة المعالجة KAE (GV ، 97.62 بالمائة) ، ثم KEE (GIV ، 83.27 بالمائة) ، ثم KEE plus KAE (GVI ، 78.85 بالمائة) ، على التوالي ، بترتيب تنازلي. قد يكون هذا بسبب الاختلافات في كمية ونوعية محتويات الفينول ومضادات الأكسدة لمستخلصات A. hirerochuntica ، والتي لها علاقة بالقدرة المضادة للأكسدة [15،19،22،40،42].

النتائج النسيجية المرضية فيالكلىتتوافق مع التقديرات البيوكيميائية للمجموعات التجريبية التي تم فحصها. تسبب تناول CCl4 (GII) في حدوث آفة كبيبية وأنبوبية مع احتقان وعائي في الكلى. دوجوكان وآخرون. [64] اكتشف نمطًا نسجيًا مشابهًا في الأنسجة الكلوية للجرذان استجابةً للعلاج المطول بـ CCl4. يعتبر أيضًا أن التغيرات النسيجية ناتجة عن الحمل الزائد الوظيفي للكليونات ، مما يؤدي إلى ضعف وظائف الكلى [65] ، و / أو بسبب تدمير الأنسجة الناتج عن توليد الجذور الحرة عبر استقلاب CCl4 [56،66] . تأثير فيتامين. كان مستخلص E plus Se و A. hierophantic لإصلاح واستعادة تأثيرات تدمير الكلى لـ CCl4 ملحوظة. قد يكون هذا بسبب فيتامين. يعمل E plus Se (كمضاد أكسدة قوي) على ROS الناجم عن CCl4 [67]. A. تقوم خلاصات الهيروفانتية بقمع CCl 4- السمية الكلوية الحادة بسبب الدور المضاد للأكسدة وخصائص إزالة الجذور الحرة للمركبات الفينولية الموجودة في مستخلصات A. hirerochuntica [22]. تتوافق نتائجنا مع نتائج الباحثين الآخرين الذين أظهروا أن المشتقات النباتية المختلفة لها تأثيرات دوائية من خلال القضاء على إساءة استخدام CCl4 واستعادة الوضع الطبيعي [6].

5. الاستنتاجات

أظهرت نتائج هذه الدراسة بوضوح أن نبات A. hierophantic غني بالمركبات الفينولية القطبية وغير القطبية ذات القدرة الفائقة المضادة للأكسدة ، والتي ترتبط ارتباطًا مباشرًا بالمحتوى الكيميائي النباتي. A. hierophantic (خاصة المستخلص المائي) يحمي الفئران من الإجهاد التأكسدي الحاد 4- الناجم عن CClالكلىالإصابة ، كما يتضح من انخفاض كبير في مستويات MDA وزيادة نشاط GSH و SOD ، وكذلك توقف التغيرات الكيميائية الحيوية والنسيجية في الكلى. تنشأ الفعالية الوقائية من خصائص الكسح المضادة للأكسدة والجذور الحرة للمركبات الفينولية الموجودة في مستخلصات A. hierophantic. تساعد هذه الخصائص في تفسير الفعالية الطبية للنبات كدواء عشبي. هناك حاجة إلى مزيد من البحث لوصف المبادئ النشطة في A. hierophantic تمامًا ، وتهدف هذه الدراسة إلى تحفيز المزيد من الأبحاث ذات الصلة الشاملة لتقديم بيانات وتوصيات كافية لتحديد آلياتها وجرعاتها الآمنة.

الكاتب الاشتراكات:وضع المفاهيم ، TIA ، YMA و HB ؛ المنهجية والتحقيق و HAA-R ؛ معالجة البيانات ، TIA و YMA ؛ الكتابة - إعداد المسودة الأصلية ومراجعتها وتحريرها ؛ HB و HAA-R. قرأ جميع المؤلفين النسخة المنشورة من المخطوطة ووافقوا عليها.

التمويل:يتقدم الباحثون بالشكر لعمادة البحث العلمي جامعة القصيم على تمويلها لنشر هذا المشروع.

بيان توفر البيانات:البيانات المقدمة في هذه الدراسة متاحة عند الطلب من المؤلف المقابل.

الاختصارات ABTS:2،2'-azino-bis (3- ethylbenzene thiazoline -6- sulfonic acid) ؛ AOA:النشاط المضاد للأكسدة؛ BHA: هيدروكسيانيزول بوتيل ؛ BHA: هيدروكسيانيزول بوتيل ؛ DPPH: 1 ، 1- ثنائي فينيل -2- بيكريل هيدرازين ؛ DW: الوزن الجاف ؛ GA: حمض الغاليك GAE: مكافئ حمض الغال ؛ GSH: الجلوتاثيون المختزل ؛ HPLC-DAD: كشف صفيف كروماتوجرافي سائل عالي الأداء ؛ KAE: A. مستخلص مائي هيروفانتية ؛ KEE: أ. مستخلص إيثانولي هيروفانتيك ؛ MDA: malonaldehyde ؛ QE: ما يعادل كيرسيتين ؛ RAA: النشاط النسبي المضاد للأكسدة ؛ ROS: أنواع الأكسجين التفاعلية ؛ RSA: نشاط التطهير الجذري ؛ Se: السيلينيوم. SE: خطأ معياري ؛ SOD: ديسموتاز الفائق ؛ TC: مجموع الكاروتينات. TC: مجموع الكاروتينات. TF: مجموع مركبات الفلافونويد. TE: مكافئات ترولوكس ؛ TFL: مجموع الفلافونول. TPC: مجموع المركبات الفينولية.

References

1. الإحصاء ، مرض الكلى المزمن KD في الولايات المتحدة. 2021. متاح على الإنترنت: (تم الوصول إليه في 20 يوليو / تموز 2021).

2. كو ، إي. Glidden ، DV ؛ جوهانسن ، كوالا لمبور ؛ سارناك ، م. Tighiouart، H.؛ غرايمز ، ب. رابطة Hsu ، CY بين التحكم الصارم في ضغط الدم أثناء مرض الكلى المزمن وانخفاض معدل الوفيات بعد ظهور مرض الكلى في نهاية المرحلة. الكلى Int. 2015 ، 87 ، 1055-1060.

3 - توملين ، جا ؛ ماديو ، عضو البرلمان ؛ هينيجار ، ر. كلين. جيه. شركة نفرول. 2007 ، 2 ، 1054-1061.

4. أولاه ج. ريدي ، نائب الرئيس ؛ براكاش ، جي إس ؛ التفاعلات ، FC Kirk-Othmer Encyclopedia of Chemical Technology. العدسات اللاصقة 1978 ، 720-742.

5. أوزتورك ، ف. ؛ أوكار ، م. أوزتورك ، إيك ؛ فاردي ، ن. Batcioglu ، K. السمية الكلوية التي يسببها رابع كلوريد الكربون والتأثير الوقائي للبيتين في جرذان Sprague-Dawley. طب المسالك البولية 2003 ، 62 ، 353–356.

6. Ogeturk، M .؛ كوس ، أنا. كولاكوغلو ، إن. زارارسيز ، أنا. إلهان ، ن. Sarsilmaz، M. يحمي إستر فينيثيل حامض الكافيين الكلى من سمية رابع كلوريد الكربون في الفئران. ياء إثنوفارماكول. 2005 ، 97 ، 273-280.

7. سلاتر ، آليات الجذور الحرة TF في إصابة الأنسجة. في وظيفة الخلية والمرض. Cañedo، LE، Todd، LE، Packer، L.، Jaz، J.، Eds .؛ سبرينغر: بوسطن ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية ، 1988 ؛ ص 209 - 218.

8. خان ، م. رضوي ، دبليو. خان ، GN ؛ خان ، RA ؛ شاهين ، س. السمية الكلوية التي يسببها رابع كلوريد الكربون في الفئران: الدور الوقائي لـ Digerati muricata. ياء إثنوفارماكول. 2009 ، 122 ، 91-99.

9. أفصار ت. خان ، م. رزاق ، س. الله ، س. Mirza ، B. نشاط خافض للحرارة ومضاد للالتهاب ومسكن للألم من Acacia hydaspica R. Parker وتحليله الكيميائي النباتي. تكملة BMC. بديل. ميد. 2015 ، 15 ، 1-12.

10- القبة ، مم. الموافي، ماجستير؛ الثواب ، س. الفهيد ، ح. الجطيلي ، ت. Barakat، H. Phenolic pro le، النشاط المضاد للأكسدة ، وتحسين فعالية براعم Chenopodium quinoa ضد CCl4 الإجهاد التأكسدي في الفئران. المغذيات 2020، 12، 2904.

11 - الزهراني ، م. الثواب ، س. الجطيلي ، ت. الفهيد ، ح. أشيش ، IS ؛ Barakat، H. التأثير الوقائي للمشروبات التي تحتوي على المورينغا ضد فرط شحميات الدم وارتفاع السكر في الدم في الفئران من النوع 2 التي يسببها مرض السكري. الدقة الغذائية. 2021 ، 5 ، 279-289.

12. خليفة الأول. نواز ، أ. صبحي ر. الثواب ، س. بركات ، هـ. أنثوسيانين بولي آسيلات بشكل بنّاء مع بقايا ثنائية محفزة لـ 3CLpro من 2019- nCoV من الأنثوسيانين الأحادي: دراسة نشاط العلاقة الهيكلية مع 10 أنثوسيانين باستخدام مناهج in-silico. جيه مول. رسم بياني. نموذج. 2020 ، 100 ، 107690.

13. يوسف، ج. مهدي ، زد. نور ، RM استخدام الطب التكميلي والبديل أثناء الحمل وتأثيره على نتائج الولادة. مديح. هناك. كلين. الممارسة. 2016 ، 25 ، 155–163.

14. صلاح ، ش. عبده ، HS ؛ عبد العظيم أ. عبد الرحيم ، الآثار المضادة للأكسدة لبعض النباتات الطبية كعوامل خافضة لسكر الدم على الانحراف الكروموسومي وأيض الأحماض النووية غير الطبيعية الناتجة عن إجهاد السكري في ذكور الجرذان البيضاء البالغة. داء السكري مليت. 2011 ، 1 ، 6-14.

15. Daur، I. الخواص الكيميائية للعشب الطبي Kaff Maryam (Anastatica hierochuntica L.) وعلاقته باستخدام الطب الشعبي. Afr. J. ميكروبيول. الدقة. 2012 ، 6 ، 5048-5051.