مضادات الأكسدة ومضادات الالتهابات ومقاومة الشيخوخة من مستخلص Kalmia Angustifolia وتحديد بعض المركبات الرئيسية الجزء 2

الرجاء التواصلoscar.xiao@wecistanche.comللمزيد من المعلومات

3. النتائج

3.1. تقييم جدوى الخلية

تم تقييم سلامة المستخلص باستخدام اختبار MTT ، الذي يقيم النشاط الأيضي للخلية [27 ، 28]. لذلك ، فإنه يعطي نظرة ثاقبة على صلاحية الخلايا ، وبشكل أكثر دقة في قابلية بقاء الخلايا الكيراتينية البشرية الأولية في هذه الدراسة. أظهرت النتائج أنه بعد معالجة 48 ساعة ، يكون مستخلص K. Angustifolia آمنًا عند 2 0 0 ميكروغرام / مل مع بقاء الخلية بنسبة 88 ± 12 بالمائة (الشكل 1). تسبب K. Angustifolia في تسمم الخلايا بتركيز 400 ميكروغرام / مل ، مع بقاء الخلية بنسبة 51 ± 8 في المائة. باختصار ، يحافظ مستخلص K.angustifolia على مستوى عالٍ من حيوية الخلية بتركيزات من 0 إلى 200 ميكروغرام / مل.

الشكل 1. تم إجراء تقييم السمية الخلوية لمستخلص K. Angustifolia على الخلايا الكيراتينية البشرية الأولية عن طريق قياس النشاط الأيضي بمقايسة MTT. تم إجراء جميع التجارب في ثلاث نسخ على الأقل وكانت النتائج المعروضة ممثلة لتجربتين مختلفتين على الأقل (N =2 ، n =3). يتم تقديم البيانات كوسيلة للثلاث نسخ ± SD يتم تعيين الخط الأفقي بنسبة 50 بالمائة من صلاحية الخلية. تم تحديد الأهمية الإحصائية باستخدام ANOVA أحادي الاتجاه متبوعًا باختبار Dunnett اللاحق (قيمة p<0.05 compared="" to=""><>

الرجاء الضغط هنا لمعرفة المزيد

3.2 قدرة مضادات الأكسدة

تم تقييم إمكانات مضادات الأكسدة بمقايستين مختلفتين ، مقايسة ORAC والمقايسة القائمة على الخلية باستخدام DCFH-DA. الأول يقيس تثبيط جذور البيروكسيل بواسطة المستخلص المدروس. تشير النتائج إلى أن مستخلص K.angustifolia له قدرة قوية مضادة للأكسدة ، بقيمة ORAC تبلغ 16 ± 3 ميكرولتر TE / ملغ الجدول 1.cistanche wirkungهذه النتيجة قابلة للمقارنة مع عناصر التحكم الإيجابية كيرسيتين وكاتشين ، والمعروفة باسم مركبات مضادات الأكسدة القوية ، والتي قدمت قيم ORAC من 21 ± 2 و 20 ± 2 ميكرولتر TE / ملغ على التوالي ، مما يؤكد قدرة مضادات الأكسدة في المستخلص المدروس.

الجدول 1. نشاط مضادات الأكسدة كما تم قياسه بواسطة مقايسة ORAC لمستخلص K.angustifolia. يتم تقديم البيانات كوسيلة للنسخ الثلاثية ± SD تم إجراء جميع التجارب في ثلاث نسخ والنتائج المقدمة تمثل تجربتين مختلفتين على الأقل (N =2 ، n =3). تم استخدام كيرسيتين وكاتشين كعناصر تحكم إيجابية.

تم تأكيد إمكانات مضادات الأكسدة لـ Kangustifolia أيضًا باستخدام الفحص المستند إلى الخلايا DCFH-DA على الخلايا الليفية لجلد الإنسان WS1 (الشكل 2). أظهرت النتائج أن مستخلص K. Angustifolia كان مضادًا قويًا للأكسدة بتركيزات منخفضة تصل إلى 3.13 ميكروغرام / مل ، مع تثبيط 83.7 ± 0 .8٪ من أكسدة DCFH. هذه النتيجة قابلة للمقارنة مع التحكم الإيجابي كيرسيتين بتركيز 1.56 ميكروغرام / مل ، والذي قدم نسبة تثبيط لأكسدة DCFH تبلغ 87.41 ± 0. 0 3 بالمائة. ومع ذلك ، فإن تحديد تركيز المثبط نصف الأقصى (IC5 0) أظهر أن كيرسيتين أكثر كفاءة مرتين تقريبًا مقارنة بمستخلص K. Angustifolia بقيم ICso ذات الصلة البالغة 0. 168 ± { {25}} .009 ميكروغرام / مل و 0.37 ± 0.02 ميكروغرام / مل.

الشكل 2. النشاط المضاد للأكسدة لمقتطفات K. Angustifolia على خط خلية الخلايا الليفية WS1 لجلد الإنسان المعالج باستخدام رباعي البوتيل هيدروبيروكسيد (t-BuOOH) ، والذي تم تحديده بواسطة اختبار قائم على الخلية باستخدام DCFH-DA. تم إجراء جميع التجارب في ثلاث نسخ على الأقل وكانت النتائج المعروضة ممثلة لتجربتين مختلفتين على الأقل (N =2 ، n =3). يتم تقديم البيانات كوسيلة من ثلاث نسخ ± SD يتم تعيين الخط الأفقي عند تثبيط بنسبة 50 بالمائة. تم تحديد الأهمية الإحصائية باستخدام ANOVA أحادي الاتجاه متبوعًا باختبار Dunnett اللاحق (قيمة p<0.05 compared="" to="" control="" of="" cells="" treated="" with="" only="" t-buooh（200μm）;*=""><0.05）or bonferroni's="" post="" hoc="" test=""><0.05 compared="" to="" positive="" control="" quercetin="" （1.56="" μg/ml）;#="" p-value=""><>

3.3 القدرة المضادة للالتهابات

تم تقييم النشاط المضاد للالتهابات لمستخلص K.angustifolia بناءً على قدرته على تقليل إنتاج النتريت في الضامة التي يتم تنشيطها باستخدام LPS (الشكل 3).بيوفلافونويدس الحمضياتأظهرت النتائج المعروضة في الشكل 3 أن مستخلص Kangustifolia منع بشكل كبير من الإفراط في الإنتاج بتركيز منخفض يصل إلى 20 ميكروغرام / مل. لوحظ تثبيط أكبر عند تركيزات 40 و 80 ميكروغرام / مل ، مع نسب تثبيط من إنتاج أكسيد النيتروجين بنسبة 25 ± 3 في المائة و 49 ± 2 في المائة على التوالي. هذا مشابه لعنصر التحكم الإيجابي L-NAME بتركيز 250 ميكرومتر (67 ميكروغرام / مل) ، والذي منع الإنتاج الزائد لـ NO بنسبة 37 ± 2 بالمائة.

3.4. التحليلات النسيجية

تم تقييم القدرة المضادة للشيخوخة لمستخلص K.فوائد cynomoriumأكدت التحليلات النسيجية لأقسام ماسون ثلاثية الألوان (الشكل 4 أ) سلامة بدائل الجلد لكل حالة ، حيث قدم كل بديل للجلد مرحاضًا جلديًا وبشرة متباينة. من هذه المقاطع النسيجية ، أجريت قياسات سمك البشرة الحية والأدمة (الشكل 4 ب). بالنسبة للبشرة الحية ، لم يلاحظ أي زيادة معنوية في مستخلص K.angustifolia ، مع تغير أضعاف بمقدار 1. 0 (يُعرّف على أنه نسبة سمك البديل المعالج إلى سمك عنصر التحكم بدون علاج). أما بالنسبة للأدمة ، فقد لوحظت زيادة كبيرة في سمك الجلد (مع تغير أضعاف 1.36) لمستخلص K.angustifolia عند 25 ميكروغرام / مل ، مما يشير إلى أن المستخلص له تأثير على طبقة الجلد وبشكل أكثر دقة على الخلايا الليفية ، ويمكن أن تعزز أيضًا تخليق مكونات المصفوفة خارج الخلية.

تم اختبار عنصر تحكم DMSO بنسبة {0}. 2 بالمائة (u / o) لكل تجربة منذ أن تم إذابة المستخلص في 0.2 بالمائة DMSO ، ولكن لم يلاحظ أي فرق مقارنة بالمجموعة الضابطة دون معالجة (البيانات لا معروض). علاوة على ذلك ، تم اختبار تركيزات 50 ميكروغرام / مل و 100 ميكروغرام / مل من K. معروض). وهكذا ، كان 25 ميكروغرام / مل هو التركيز الأمثل وأجريت تحليلات أخرى بهذا التركيز.

الشكل 4. تأثير مستخلص K.angustijolia على أنسجة بدائل الجلد المعاد بناؤها. (أ) التحليلات النسيجية لأقسام بدائل الجلد الملون بثلاث ألوان ماسون. الطبقة القرنية باللون الأزرق الداكن ، والبشرة الحية باللون البنفسجي ، والأدمة باللون الأزرق الفاتح. الهدف 10 × ، شريط المقياس: 100 ميكرومتر. (ب) تغير ثنية في سمك البشرة الحية والأدمة. يتم تعريف تغيير الطية على أنه نسبة قيمة سمك البدائل المعالجة إلى قيمة سماكة التحكم (بدون معالجة). تم تحليل بديلين لكل حالة وتأكيدهما بثلاث مجموعات مختلفة من الخلايا (N =3 ، n =6). يتم تقديم البيانات كوسيلة لمجموعات الخلايا الثلاثة المختلفة ± SD تم تحديد الأهمية الإحصائية باستخدام اختبار t ، ** قيمة p<>

3.5 تلطيخ المناعي

تمت ملاحظة أربعة بروتينات تقل كمياتها بشكل عام في شيخوخة الجلد مع تلطيخ التألق المناعي: الإيلاستين ، والكولاجين من النوع الأول (الكولاجين -1) ، ونوع الكولاجين بالكامل ، والكولاجين -3） ، والأكوابورين -3 （ الشكل 5）. يبدو أن مستخلص K. Angustifolia عند 25 ميكروغرام / مل يزيد من تعبير الإيلاستين (الشكل 5E) في حجرة الجلد بالمقارنة مع عنصر التحكم (الشكل 5 أ). في حالة التحكم (بدون علاج) ، تم التعبير عن بروتين الإيلاستين بشكل ضعيف. تم إجراء شبه كمي لشدة التألق على المقاطع الملطخة بالفلورة المناعية من أجل الحصول على نظرة ثاقبة للزيادة في التألق بعد العلاجات.صفير الصحراءأكد تحليل كثافة البكسل النتائج الموضحة في الشكل 5. أظهرت بدائل الجلد المعالجة بمستخلص K. فيما يتعلق بالكولاجين -1 ، عزز علاج K. Angustifolia تعبيره (الشكل 5F) ، مقارنةً بالسيطرة (الشكل 5B). في الواقع ، أدت المعالجة بالمستخلص عند 25 ميكروغرام / مل إلى أعلى زيادة في كثافة البكسل للكولاجين -1 ، بزيادة قدرها 46 بالمائة. ومع ذلك ، بالنسبة للكولاجين -3 ، ظل التعبير مشابهًا (الشكل 5G) ، مقارنةً بنظيره (الشكل 5C). أخيرًا ، يبدو أيضًا أن التعبير عن aquaporin -3 ، وهو بروتين غشائي موجود في الخلايا الكيراتينية للبشرة ، يشبه العلاجات التالية عند 25 ميكروغرام / مل (الشكل 5H) مقارنةً بعنصر التحكم (الشكل 5 د). لم تكن هناك زيادة ملحوظة في شدة البكسل لتعبير الكولاجين -3 والأكوابورين -3 بعد العلاج بمستخلص K. Angustifolia عند 25 ميكروغرام / مل.

الشكل 5. يتم تصور علامات الشيخوخة عن طريق تلطيخ التألق المناعي. تعبير الإيلاستين (A ، E) ، والكولاجين -1 (B ، F) ، والكولاجين -3 (C ، G) ، والأكوابورين -3 (D ، H) ، والتي تنخفض عادةً أثناء الجلد الشيخوخة ، تظهر في بدائل الجلد الصحية غير المعالجة (AD) وتعالج بمستخلص K.angustifolia بمعدل 25 ميكروغرام / مل (EH). كانت النوى ملطخة بـ DAPI (أزرق). يمثل الخط المنقط الفصل بين البشرة والأدمة. تم تحليل بديلين لكل حالة وتأكيدهما بثلاث مجموعات خلايا مختلفة (N=3 ، n=2 ؛ شريط المقياس: 100 um).

3.6 عزل وتحديد بعض المركبات الرئيسية لمستخلص K. Angustifolia

تم إجراء تنقية المستخلص على عمود Diaion9 مفتوح عن طريق التصفية التصفية باستخدام MeOH / H O بنسب متزايدة من MeOH (0-100 بالمائة). أدى هذا التنقية الأول إلى الحصول على أربعة كسور (كسور AD). تعرض الجزء B إلى عمود كروماتوجراف على هلام السيليكا ، مما أدى إلى عزل الكاتشين والإبيكاتشين (الجزء B1). تم تحديد هوية المركبات عن طريق تحليل الرنين المغناطيسي النووي وبالمقارنة مع المعايير التجارية. تم التعرف على الكاتشين واليبيكاتشين بالفعل في K. Angustifolia [9]. تمت تنقية الجزء C أيضًا بواسطة كروماتوجرافيا عمود هلام السيليكا وأسفرت هذه العملية عن 7 كسور منفصلة (C1 إلى C7). أدى تنقية جزء C3 الذي تم إجراؤه على عمود كروماتوغرافيا octadecylsilane إلى عزل مركب أصفر باهت. تم تحديد الصيغة الجزيئية (C20Hj8O) لهذا المركب من طيف HR-ESI-MS الخاص به على أساس ذروة أيون شبه جزيئية عند m / z 434.3511 [M plus H] t. بناءً على أطياف الرنين المغناطيسي النووي NMR 'H و 13 C ، تم تحديد المركب المعزول على أنه أفيكاليا (جزء C3B). على حد علمنا ، تم الإبلاغ عن هذا المركب لأول مرة في K. Angustifolia ولكنه شائع في العديد من النباتات [29]. تعرض الكسر C4 أيضًا لتنقية عمود كروماتوغرافيا octadecylsilane ، وقد أدى ذلك إلى عزل proanthocyanidin A2 (epicatechin dimer ؛ جزء C4A) و dimer epicatechin آخر تم تحديده على أنه epicatechin - (2 - O -7 ، {{ 25}}) - ent-epicatechin (فأس proanthocyanidin ؛ جزء C4C). تم تحديد هذين المركبين على أساس بيانات NMR [30،31]. على حد علمنا ، هذه هي المرة الأولى التي يتم فيها التعرف على proanthocyanidin Ax في K. Angustifolia ، ولكن تم بالفعل تحديد proanthocyanidin A2 [9].طريقة استخراج الفلافونويد pdfنتج عن التنقية المتتالية لجزء دون سيليكا جل مركب على شكل بلورات بيضاء (جزء D4). تتوافق بيانات الرنين المغناطيسي النووي من جميع النواحي مع البيانات المبلغ عنها للبيوتين في الأدبيات [32]. تم التعرف على الأسوتين في جنس Kalmia [33].

3.7 الأنشطة البيولوجية للمركبات المحددة لمستخلص K.angustifolia

تم إجراء تحقيق في المركبات النشطة لـ Kangustifolia من خلال تقييم إمكانات مضادات الأكسدة والمضادة للالتهابات لكل مركب محدد (الجدول 2). بالنسبة للنشاط المضاد للأكسدة ، تم إجراء فحص ORAC والمقايسة القائمة على الخلية باستخدام DCFH-DA. ووفقًا لهذه الاختبارات ، فإن الكاتيكين ، وأفيكاليا ، وبروانثوسيانيدين A2 ، وبروانثوسيانيدين آكس ، قدم نشاطًا قويًا مضادًا للأكسدة ، بينما قدم الإبيكاتشين نشاطًا معتدلًا مضادًا للأكسدة. كانت قيم ORAC على التوالي 6.7 ± 0. 3،4.1 ± 0. 3 ، 4.5 ± 0. 8،5.3 ± 0. 6 ، و 4.6 ± {{ 23}}. 6 μmolTE / μmol ، بينما كانت ICs 0 للمقايسة القائمة على الخلية 0. 8 ± 0. 3 ، 0. 4 {{{{0}. 33}} ± 0. 0 3 ، 0. 3 0 ± 0. 0 3 ، 0. 24 ± 0. 0 2 و 1.22 ± 0. 0 6 uM قدمت عناصر التحكم الإيجابية ، كيرسيتين ، وترولوكس ، قيم ORAC البالغة 7.6 ± 0.7 و 0.91 ± 0.11 مول TE / مول على التوالي ، و ICso 0.21 ± 0.024 ± 0.002 ميكرومتر.

الجدول 2. الأنشطة المضادة للأكسدة والمضادة للالتهابات من K. Angustifolia تحديد المركبات. يتم تقديم البيانات كوسيلة من ثلاث نسخ ± S.ID. تم إجراء جميع التجارب في ثلاث نسخ والنتائج المعروضة تمثل تجربتين مختلفتين على الأقل (N =2 ، n =3). تم استخدام Quercetin و Trolox كعناصر تحكم إيجابية.

بالنسبة للإمكانات المضادة للالتهابات ، التي تم تقييمها من خلال تثبيط NO الإفراط في الإنتاج في الضامة RAW 264.7 المحفزة بـ LPS ، لم تقدم أي من المركبات المعزولة إمكانات مضادة للالتهابات يمكن أن تكون مسؤولة عن النشاط المضاد للالتهابات لـ Kanqustifolia.

4. مناقشة

أثبتت القليل من المكونات النشطة الطبيعية فعاليتها في الحد من شيخوخة الجلد من خلال دراسات فعالية شاملة ، مما يحد من التطور بناءً على الأدلة العلمية لمنتجات العناية بالبشرة التي يمكن أن تقلل بشكل كبير من شيخوخة الجلد. تعد النماذج المختبرية أدوات رائعة لإثبات سلامة المنتجات وفعاليتها في مجال مستحضرات التجميل ، مما يجعل من الممكن تجنب استخدام النماذج الحيوانية ، والتي هي مثيرة للجدل للغاية بل وحتى محظورة أو مقيدة في بعض البلدان أو الدول مثل الاتحاد الأوروبي وكندا والهند والبرازيل (سبع ولايات) ونيوزيلندا وأستراليا والولايات المتحدة (كاليفورنيا ، نيفادا ، إلينوي) [34-37]. كان الهدف من هذه الدراسة هو تقييم سلامة وفعالية مستخلص كانغوستيفوليا باستخدام بدائل الجلد المعاد بناؤها من أجل تحديد الاستخدام المحتمل لـ K ، Angustifolia في مستحضرات التجميل. تسلط هذه الدراسة الضوء على إمكانات مكافحة الشيخوخة لمستخلص K. Angustifolia.

من أجل استخدامها في منتجات العناية بالبشرة ، يجب أولاً إثبات سلامة المكونات للبشرة ، وبالتالي لخلايا الجلد. تقييم السمية لكل مكون تجميلي من المستحضر هو الأساس لتقييم سلامة مستحضرات التجميل. في هذه الدراسة ، تبين أن المستخلص آمن للاستخدام على الخلايا الكيراتينية بتركيز يصل إلى 200 ميكروغرام / مل. تم أيضًا دعم سلامة مستخلص Kangustifolia عند 25 ميكروغرام / مل من خلال التحليلات النسيجية لبدائل الجلد المعاد بناؤها. أظهرت هذه التحليلات أنه تم الحفاظ على سلامة جميع طبقات الجلد المعاد بناؤها (البشرة والأدمة) بتركيز 25 ميكروغرام / مل. حتى عند معالجتها بالمستخلص ، كان سمك البشرة الحية مشابهًا لبدائل الجلد غير المعالجة (الضوابط) وتم تحسين سماكة الجلد. عولجت بدائل الجلد ثلاث مرات على مدار أسبوع واحد ، مما يشير إلى سلامة مستخلص Kangustifolia مع العلاجات المتكررة. وبالتالي ، يمكن استخدام K Angustifolia في مستحضرات التجميل الجلدية لأنه يبدو أنه يحافظ على حيوية الخلية. يجب أيضًا إجراء تجارب إضافية ، مثل الامتصاص عن طريق الجلد ، لتأكيد استخدام هذا المقتطف باتباع إرشادات المثيل المناسبة [38].

معلمة أخرى مهمة في تطوير منتجات العناية بالبشرة هي بلا شك فعالية المكونات النشطة التي تدعمها الأدلة العلمية. يمكن إجراء تجارب وتحليلات متعددة لتقييم هذا الجانب. باستخدام المستخلصات النباتية ، يتم تقييم قدرتها المضادة للأكسدة بشكل شائع من أجل إثبات فعاليتها 39-41]. شيخوخة الجلد هي ظاهرة معقدة تنطوي على آليات مختلفة ، وقد تم اقتراح العديد من النظريات لشرح الأساس الجزيئي [1]. أحد هذه التفسيرات هو الإجهاد التأكسدي. تؤدي العديد من العوامل البيئية التي تؤدي إلى شيخوخة الجلد ، مثل الإشعاع الشمسي وتلوث الهواء ودخان السجائر ، إلى توليد أنواع أكسجين تفاعلية (ROS) تضاف إلى أنواع الأكسجين التفاعلية التي تنتج بشكل طبيعي داخل الخلايا [42-44]. تؤدي هذه الزيادة في مستويات الأكسجين التفاعلية إلى اختلال التوازن بين الجذور الحرة ومضادات الأكسدة الطبيعية ، مما يؤدي إلى الإجهاد التأكسدي وتلف الأنسجة ، ومن هنا تأتي أهمية المركبات المضادة للأكسدة في منتجات البشرة المضادة للشيخوخة [45]. تساعد مضادات الأكسدة في منتجات العناية بالبشرة على تعزيز قدرة الجلد المضادة للأكسدة لمواجهة الآثار الضارة للإجهاد التأكسدي. أظهر تقييم النشاط المضاد للأكسدة لمستخلص K. Angustifolia ، الذي تم تقييمه بمقايسة ORAC ، أن المستخلص يحتوي على إمكانات مضادة للأكسدة مماثلة لمادة الكيرسيتين والكاتشين الضابطة الإيجابية ، وهما مركبان قويان مضادان للأكسدة ، مما يشير إلى قدرة ممتازة على مضادات الأكسدة. النتائج التي تم الحصول عليها لعناصر التحكم الإيجابية تتوافق مع دراسة سابقة أجراها Ou et al. ، والتي تبين أن الاختبار موثوق [24]. نبات آخر من عائلة Ericaceae يوجد أيضًا في الغابة الشمالية ويستخدم لإمكاناته المضادة للأكسدة وهو Rhododendron groenlandicum. تم تقييم قدرة مضادات الأكسدة لـ R.groenlandicum في دراسة سابقة أبلغ عنها Dufour et al. وقدمت المستخلصات المدروسة قدرة مضادة للأكسدة مقارنة بقيمة ORAC لمستخلص K. تم تأكيد النشاط المضاد للأكسدة لمستخلص K. Angustifolia المقاس بمقايسة ORAC بمقايسة DCFH-DA ، وهو أكثر تمثيلاً للبيئة البيولوجية. كانت نتائج الفحص المستند إلى الخلية باستخدام DCFH-DA لتحديد نشاط مضادات الأكسدة الخلوية وفقًا لنتائج ORAC. في ضوء هذه النتائج ، يجب أن يكون مستخلص K. Angustifolia مكونًا نشطًا رائعًا في مستحضرات التجميل كمركب مضاد للأكسدة. يجب استخدامه بتركيز لا يقل عن 3.13 ميكروغرام / مل إذا تم البحث عن إمكانات مضادات الأكسدة مع مراعاة مستوى الأمان في المستخلص.

يمكن أن يرجع النشاط المضاد للأكسدة لمستخلص K.angustifolia إلى المركبات الفينولية الموجودة في مكوناته ، مثل (plus) -catechin ، (-) - epicatechin ، و proanthocyanidin A2 ، والتي تم عزلها من المستخلص ، و p-coumaric حمض ، كيرسيتين 3- O-galactoside (بيروكسيد) ، كيرسيتين 3- O-rhamnoside (quercitrin) و myricetin ، والتي تم تحديدها في دراسات أخرى ، ولكن ستكون هناك حاجة إلى مزيد من التحقيق لتأكيد هذه الفرضية [9 ، 10،39 ، A6]. في هذه الدراسة ، تم تحديد مركبين لأول مرة في Kangustifolia يمكن أن يكونا أيضًا مسؤولين عن النشاط المضاد للأكسدة في المستخلص. قدم كل من Avicularia ، و flavonoid ، و proanthocyanidin Ax ، وهو نوع بروانثوسيانيدين من النوع A ، وكلاهما موجود في مستخلص K.

التفسير الآخر للشيخوخة هو الالتهاب المزمن. أدى تراكم الأدلة من دراسة عملية شيخوخة الجلد إلى فرضية وجود التهاب جزيئي مع تقدم العمر. أحد التفسيرات هو أن الضرر الذي يلحق بالخلايا ، والذي يسببه على سبيل المثال زيادة في نسبة الأكسجين التفاعلية (ROS) ، يتعرف عليه الجهاز المناعي ، مما يتسبب في ارتشاح وتنشيط الخلايا المناعية مثل البلاعم [1]. لوحظ زيادة في السيتوكينات المؤيدة للالتهابات ، مثل IL -1 و IL -6 و TNF- ، بشكل عام مع شيخوخة الجلد [46]. وبالتالي ، فإن القدرة المضادة للالتهابات هي ميزة مثيرة للاهتمام لعنصر نشط مضاد للشيخوخة. أظهر النشاط المضاد للالتهابات الذي تم تقييمه حسب مستوى إنتاج NO إمكانات جيدة مضادة للالتهابات لمستخلص K.angustifolia بتركيزات 40 و 80 ميكروغرام / مل ، مقارنةً بالتركيز المنخفض للتحكم الإيجابي ، L-NAME. نظرًا لأن التركيزات الأعلى من المستخلص يمكن مقارنتها بـ 250 ميكرومتر L-NAME ، فإنه يشير إلى أنه يمكن أيضًا استخدام K. Angustifolia في مستحضرات التجميل كمكون مضاد للالتهابات. نجح في تثبيط جزء من الإنتاج ، وبالتالي أظهر نشاطًا مضادًا للالتهابات. لم تظهر أي من المركبات المحددة في مستخلص K. Angustifolia نشاطًا مضادًا للالتهابات يمكن أن يفسر نشاط المستخلص. ستكون هناك حاجة إلى مزيد من التحقيق في تكوين المستخلص من أجل تقييم المركبات المضادة للالتهابات.

تقدم المركبات المضادة للأكسدة ميزات مثيرة للاهتمام لمنتجات التجميل الجلدية. في الواقع ، من المعروف أن أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) ، الناتجة عن العديد من العوامل البيئية التي تسبب شيخوخة الجلد ، يمكن أن تؤدي إلى تدهور مكونات مهمة من المصفوفة خارج الخلايا الجلدية مثل الكولاجين والإيلاستين [47-49]. يرجع الانخفاض في كميتها عمومًا إلى زيادة البروتينات المعدنية للمصفوفة (MMPs) وانخفاض تركيبها [48،50]. التوازن الجيد بين الإنتاج الداخلي لمضادات الأكسدة والمواد المؤكسدة يسمح بالحفاظ على توازن الجلد. ومع ذلك ، مع شيخوخة الجلد ، يحدث عدم توازن ومن ثم يكون استخدام مضادات الأكسدة الخارجية مناسبًا. وبالتالي ، فإن القدرة المضادة للأكسدة لمستخلص K. Angustifolia أدت إلى دراسة قدرتها على مكافحة الشيخوخة.

مع شيخوخة الجلد ، غالبًا ما يمكن ملاحظة انخفاض في سمك البشرة الحية والأدمة. يرجع السبب الأول إلى انخفاض تكاثر الخلايا الكيراتينية ، بينما يرجع السبب الثاني إلى تدهور المصفوفة خارج الخلية وانخفاض تركيبها [4751-53]. وبالتالي ، يتم السعي إلى زيادة سمك كل منها باستخدام منتجات مكافحة الشيخوخة. لم يلاحظ أي زيادة معنوية في سماكة البشرة الحية مع مستخلص K، Angustifolia عند 25 ميكروغرام / مل. ومع ذلك ، زيادة كبيرة （القيمة الاحتمالية<0.05） in="" the="" dermal="" thickness="" was="" observed.="" an="" increase="" could="" suggest="" matrix="" reorganization,="" or="" even="" an="" increase="" in="" the="" synthesis="" of="" dermal="" extracellular="" matrix="" components,="" such="" as="" elastin="" or="" collagens,="" which="" is="" an="" interesting="" property="" for="" an="" anti-aging="" extract.="" the="" immunofluorescence="" staining="" of="" several="" proteins="" was="" performed="" to="" further="" investigate="" the="" effect="" of="" the="" extract="" on="" the="" extracellular="">

عادة ما تنخفض مستويات الإيلاستين والكولاجين -1 والكولاجين -3 في شيخوخة الجلد ، مما يؤدي إلى تكوين التجاعيد وفقدان قوة الشد وزيادة الهشاشة وضعف التئام الجروح [ 54]. يرجع الانخفاض في مكونات المصفوفة خارج الخلية إلى زيادة تحلل هذه البروتينات وانخفاض في التعبير الجيني ، وبالتالي في تركيبها [1، 53-55]. ينتج تدهورها بشكل أساسي عن الإيلاستازات (مثل الإيلاستاز العدلات البشرية ، والنيبريليسين) و MMPs (مثل MMP -1 و MMP -3). يحدث تحفيز MMP في شيخوخة الجلد من خلال تنشيط مسارات التحويل المختلفة [46،56]. في عملية شيخوخة الجلد ، يمكن أن تؤدي العديد من المنتجات ، مثل ROS وعامل نخر الورم (TNF-) ، إلى تنشيط مسار العامل النووي كابا ب (NF-kB) أو كيناز البروتين المنشط للميتوجين (MAP) المسارات ، بما في ذلك الكينازات المنظمة للإشارة خارج الخلية (ERK) ، كينازات البروتين المنشط بالميتوجين p38 (p38) و kinases c-Jun N- الطرفية (JNK) [57،58]. سيؤدي هذا التنشيط بعد ذلك إلى التعبير عن عامل النسخ NF-kB أو بروتين منشط عامل النسخ 1 (AP -1) ، والذي يلعب دورًا في نسخ MMPs. يؤدي تنشيط NF-kB أو AP -1 إلى زيادة التعبير عن MMPs وبالتالي يزيد من تدهور مكونات الجلد. في هذه الدراسة ، أظهرت الزيادة في تعبير الإيلاستين والكولاجين -1 مع العلاج أن Kangustifolia يمكنه مواجهة بعض الخصائص الرئيسية لشيخوخة الجلد بكفاءة. تعد المستويات المعززة من الإيلاستين المسجلة بعد علاج K. Angustifolia مقنعة بشكل خاص لأنه من الموثق جيدًا نسبيًا أن هذا البروتين عادة ما يكون ضعيفًا أو حتى لا يتم تصنيعه في الأدمة المعاد بناؤها باستخدام ظروف الاستزراع المكملة بحمض الأسكوربيك ، كما هو الحال في نموذج الجلد لدينا (كما هو موضح مع عنصر التحكم بدون علاج ، الشكل 5 أ). في الواقع ، على الرغم من أن الأسكوربات يعزز إنتاج المصفوفة خارج الخلية ، وخاصة تخليق الكولاجين بواسطة الخلايا الليفية الجلدية ، فقد أظهرت بعض الدراسات أن له أيضًا تأثيرًا مثبطًا على عملية تكون الأُرْجُم ، مما يؤدي إلى انخفاض تراكم الإيلاستين [59 ، 60]. وبالتالي ، إذا كانت 25 ميكروغرام / مل من المستخلص كافية وقوية بما يكفي للتغلب على تأثير الأسكوربات في نموذج الجلد لدينا ، يجب أن يكون K. Angustifolia مرشحًا محتملًا كبيرًا في منتجات العناية بالبشرة لمواجهة شيخوخة الجلد عند هذا التركيز. يمكن أن يساعد الجلد على استعادة قوته وثباته ومرونته ، وبالتالي تقليل ظهور التجاعيد ، ولكن يجب إجراء المزيد من الدراسات السريرية لتأكيد هذه الافتراضات.

5. الاستنتاجات

في هذه الدراسة ، أثبتنا أن النموذج البديل للبشرة الذي تم تطويره في مركز الأبحاث الخاص بنا هو أداة مفيدة لتقييم فعالية مكافحة الشيخوخة في مجال مستحضرات التجميل الجلدية. لقد أظهرنا ليس فقط أن مستخلص Kangustifolia يبدو آمنًا للاستخدام في مستحضرات التجميل ، ولكن أيضًا لديه قدرة قوية مضادة للأكسدة ونشاط جيد مضاد للالتهابات. تشير هذه الدراسة إلى أن مستخلص K.angustifolia عند 25 ميكروغرام / مل يمكن أن يكون له تأثير محتمل في مكافحة الشيخوخة على الحيز الجلدي لأن المستخلص يزيد من سماكة الجلد ويعزز التعبير عن الإيلاستين والكولاجين -1. سيكون من المفيد إجراء مزيد من الدراسات حول الآليات التي تنطوي عليها إمكانات مكافحة الشيخوخة في المستخلص. سمح لنا عزل وتوصيف العديد من المركبات في مستخلص Kangustifolia بإثبات أن فعالية مكافحة الشيخوخة يمكن أن تأتي جزئيًا من إمكانات مضادات الأكسدة لهذه المركبات. ومع ذلك ، فإن تركيبة Kangustifolia لم يتم دراستها كثيرًا وتحتاج إلى مزيد من التحقيق فيها لفهم مدى نشاطها البيولوجي وتحديد المركبات النشطة. وبالتالي ، تشير هذه الدراسة إلى أن Kangustifolia سيكون مكونًا طبيعيًا نشطًا مثيرًا للاهتمام لمستحضرات التجميل الجلدية. K. Angustifolia له تأثيرات واعدة كمضادات للأكسدة ومضادة للشيخوخة ، خاصة على مصفوفة الجلد خارج الخلية.

تم استخلاص هذه المقالة من مضادات الأكسدة 2021 ، 10 ، 1373. https://doi.org/10.3390/antiox10091373 https://www.mdpi.com/journal/antioxidants