مستوى التمرين المناسب يخفف من خلل التنسج المعوي وزيادة حمض الفاليريك لتحسين المرونة العصبية والوظيفة الإدراكية بعد الجراحة في الفئران - الجزء 4

التنميط الميكروبيوتا الأمعاء

تم جمع البراز الطازج من الفئران لتحديد ملامح الكائنات الحية الدقيقة في الأمعاء. تم وضع الفئران بشكل فردي في قفص معقم لجمع البراز والسماح لها بالتبرز بحرية. تم جمع البراز على الفور في أنابيب إيبندورف المعقمة على الثلج الجاف ثم تخزينها عند درجة -80 درجة حتى مزيد من المعالجة. تم استخراج الحمض النووي للبكتيريا باستخدام مجموعة عزل الحمض النووي للتربة Power Lyzer Power وفقًا لبروتوكولاتنا السابقة [11].

تظهر الأبحاث الحديثة أن ميكروبيوم الأمعاء له تأثير مهم جدًا على ذاكرتنا. على وجه التحديد، يمكن للبكتيريا الموجودة في الكائنات الحية الدقيقة في الأمعاء أن تؤثر على الجهاز العصبي للدماغ البشري، وبالتالي تغيير وظيفة الذاكرة. وهذا اكتشاف مفاجئ لأنه يعني أنه يمكننا تعزيز ذاكرتنا عن طريق تغيير الميكروبيوم المعوي لدينا.

لذا، باعتبارك شخصًا يحاول تحسين ذاكرته، ما الذي يمكنك فعله لتحسين الميكروبيوم المعوي لديك؟ الجواب بسيط: التركيز على نظام غذائي متوازن. إن النظام الغذائي المتوازن لا يساعد فقط على تنظيم توازن الكائنات الحية الدقيقة في الأمعاء، بل يحسن أيضًا جميع جوانب وظائف الجسم.

أولا، نحن بحاجة إلى التركيز على نظام غذائي متنوع غني بالألياف الغذائية. يمكن أن يساعد النظام الغذائي الغني بالألياف في الحفاظ على تنوع ميكروبيوم الأمعاء، وهو عامل رئيسي في تعزيز الصحة الجيدة. وفي الوقت نفسه، نحتاج أيضًا إلى التأكد من أننا نستهلك ما يكفي من البروتين عالي الجودة والدهون الصحية في وجباتنا. هذه العناصر الغذائية يمكن أن تعزز وظيفة الذاكرة والتوصيل العصبي.

بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن تؤدي التمارين المنتظمة والحد من التوتر أيضًا إلى تعزيز التوازن والتنوع في ميكروبيوم الأمعاء. سواء كان ذلك التنفس العميق أو التأمل أو ممارسة اليوجا، فهذه كلها طرق فعالة لتقليل التوتر. يمكن أن تعمل التمارين الرياضية على تحسين انقباض الأمعاء، وزيادة حيوية الأمعاء، وتعزيز إزالة السموم الدورية، مما يساعد على تعزيز التوازن والتنوع في الكائنات الحية الدقيقة المعوية.

وبشكل عام، لا ينبغي لنا أن نركز فقط على نظامنا الغذائي وصحتنا البدنية، ولكن أيضًا على الكائنات الحية الدقيقة في أمعائنا. إن تغيير عاداتنا الغذائية وتقليل التوتر يمكن أن يعزز التوازن والتنوع في الكائنات الحية الدقيقة في الأمعاء، مما يمكن أن يساعدنا على تحسين وظيفة الذاكرة والجهاز العصبي. لذا، دعونا نهتم بصحة أمعائنا معًا ونحسن ذاكرتنا ولياقتنا البدنية!

يمكن ملاحظة أننا بحاجة إلى تحسين الذاكرة، ويمكن لـ Cistanche deserticola أن يحسن الذاكرة بشكل كبير لأن Cistanche deserticola هي مادة طبية صينية تقليدية لها العديد من التأثيرات الفريدة، أحدها هو تحسين الذاكرة. تأتي فعالية Cistanche deserticola من العديد من المكونات النشطة التي يحتوي عليها، بما في ذلك حمض التانيك، والسكريات، وجليكوسيدات الفلافونويد، وما إلى ذلك. ويمكن لهذه المكونات تعزيز صحة الدماغ بعدة طرق.

انقر فوق معرفة طرق تحسين وظائف المخ

تم إعداد مكتبات التسلسل لمنطقة V3 – V4 شديدة التغير وفقًا لتعليمات نظام Illumina MiSeq. باختصار، تم استخدام 12.5 نانوغرام من الحمض النووي كقالب DNA لأول 16 S rRNA PCR. كانت الاشعال المستخدمة على النحو التالي: F: 5′-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGACAGCCTACGGGNGGCWGCAG -3′ و R: 5′-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAGGACTACHVGGGTATCTAATCC-3 ′.
تم بعد ذلك تنظيف الأمبليكونات باستخدام خرزات AMPure XPmagnetic ثم استخدامها لمؤشر PCR باستخدام Nextera XTIndex Kit. تم استخدام مجموعة مقايسة Qubit dsDNA HS و TapeStation عالية الحساسية D1000ScreenTape (Agilent، Blacksburg، VA، USA) لقياس تركيزات منتجات PCR وتطبيع الكمية لإعداد المكتبة.

تم تشغيل التسلسل على أداة Illumina MiSeq بواسطة مجموعة كاشف MiSeq v2 (500 دورة). تم تحليل البيانات باستخدام برنامج MiSeqReporter لسير عمل Metagenomics v2.5.1.3 (Illumina، San Diego، CA، USA). تم تقسيم القراءات المقترنة التي تم الحصول عليها عن طريق التسلسل المزدوج الطرفي إلى تسلسل من خلال برنامج Pandaseq. تم الحصول على القراءات الطويلة ذات المناطق ذات المتغير العالي.

تم قطع القراءات التي كان متوسط ​​درجة الدكتوراه في النافذة (حجمها 5 نقاط أساس، وطول خطوة واحدة) أقل من 20. وتم تجاهل القراءات التي تحتوي على "N" غامضة أو بطول < 220 نقطة أساس. بعد مراقبة جودة البيانات الأصلية، تم ترتيب تسلسلات عالية الجودة بدون الوهم وفقًا للوفرة من الكبيرة إلى الصغيرة ثم تم تجميعها بتشابه بنسبة 97٪ في وحدات التصنيف التشغيلية (OTU). تم اعتبار كل OTU يمثل نوعًا ما. لتجنب انحراف التحليل الناجم عن الأحجام المختلفة لبيانات تسلسل العينات، تم إدخال عدد القراءات إلى OTU وفقًا للحد الأدنى لرقم التسلسل المطابق لـ OTU عندما كان عمق التسلسل كافيًا. تم تحليل تنوع ألفا عن طريق التسوية العشوائية.

تم استخراج ARead من كل OTU كتسلسل تمثيلي. تمت مقارنة التسلسل التمثيلي مع قاعدة بيانات مشروع قاعدة بيانات الريبوسوم. تم تصنيف الأنواع لكل OTU، وتم الحصول على جداول وفرة الأنواع للتحليل اللاحق. تم تنفيذ انتقاء OTU باستخدام Uclust على منصة البرنامج QIIME v1.9.1.

تم استخدام تنوع ألفا بما في ذلك مؤشر Chao1 ومؤشر تغطية البضائع لتحليل تنوع الأنواع في العينة. تم استخدام تحليل تنوع بيتا لمقارنة الاختلافات في تنوع الأنواع بين العينات وتتميز بتحليل الإحداثيات الرئيسي (PCoA) على أساس مسافة براي-كيرتس. تم اختبار الفروق بين المجموعات عن طريق تحليل التشابه (ANOSIM).

التنميط البلازما SCFA

تم قياس تركيزات البلازما SCFA باستخدام 789 0 -5977 قياس الطيف الكتلي للغاز (GC-MS، Agilent، Blacksburg، VA، USA). تم جمع عينات البلازما من الفئران في نقاط زمنية موصوفة أعلاه، وتم تخزينها عند −8 { {20}} درجة بسرعة، ثم يتم إذابته إلى درجة حرارة الغرفة للمعالجة. باختصار، تم خلط عينة من البلازما بحجم 100 ميكروليول مع 900 أوليثانول (تحتوي على 0.5% من حمض الهيدروكلوريك، V/V). تم تطبيق العلاج بالموجات فوق الصوتية لمدة 40 دقيقة ثم تم طرد العينات عند 14 000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق. تم قياس طاف العينات عن طريق تحليل GC-MS على جهاز Agilent 7890–5977 GC-MS مع تأين تأثير الإلكترون و العمود الشعري DB-FFAP (30 م × 0.25 مم × 0.25 ميكرومتر).

القياس الكمي لحمض الفاليريك القشري

تم تحديد كمية حمض الفاليريك في القشرة الدماغية التي تم حصادها بعد 24 ساعة من الحقن الأخير لحمض الفاليريك داخل الصفاق بطريقة مشابهة لتلك المذكورة من قبل [51، 52]. باختصار، 0.1 جرام تم تجانس القشرة الدماغية في 500 ميكرولتر من الأسيتونيتريل المائي. تم استخلاص الطاف باستخدام محلول استخلاص 8 مل (هكسان: ثنائي إيثيل إيثر=1:1) وطرده عند 1800 جم لمدة 5 دقائق. تم جمع 7.5 مل من المادة الطافية، وخلطها مع 93 ميكرولتر 20 ملي كوه في الميثانول، وتجفيفها عند 40 درجة تحت غاز النيتروجين. تمت إعادة تكوين المادة المتخلفة المجففة في 50 ميكرولتر 2.5% 18-Crown-6 في أسيتونيتريل وتمت اشتقاقها بشكل أكبر باستخدام 9-كلوروميثيل أنثراسين في أسيتونيتريل مع إضافة هيدروكسيد رباعي ميثيل الأمونيوم.

أخيرًا، تم تحميل محلول اشتقاق 30 ميكرولتر إلى عمود Acclaim C18 (3 ميكرومتر، 4.6 × 100 مم، Thermo Scientific) وفصله في تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء Ultimate 3000 (HPLC، Thermo Scientific) المجهز بكاشف مرئي للأشعة فوق البنفسجية. تم اكتشاف ذروة حمض الفاليريك المشتق عند طول موجة قدره 254 نانومتر. 2- تمت إضافة حمض إيثيل بيوتيريك (2- EA) كعنصر تحكم مرجعي داخلي. تم قياس منطقة الذروة لحمض الفاليريك بـ mAU*min و تم تطبيع مساحة الذروة لكل عينة مع مساحة 2-EA في العينة. تم عرض النتائج النهائية كنسب مجموعة حمض الفاليريك إلى مجموعة NS.

حصاد أنسجة المخ

تم وزن الفئران وتخديرها باستخدام الأيزوفلورين عند 6 ساعات و24 ساعة و48 ساعة و72 ساعة و96 ساعة و7 أيام بعد الجراحة وتم إمدادها بـ 4 درجات NS لحصاد أنسجة المخ. واستخدمت هذه الحصين لتحليل ELISA أو فحص الحمض النووي الريبي (RNA). تم استخدام الدماغ بالكامل في Bregma من −3 إلى −6 مم للتلوين المناعي. تم تنفيذ جميع إجراءات التشريح على الجليد.

إعداد مكتبة mRNA وتسلسل Illumina Hiseq

The hippocampi harvested at 24 h after surgery from the control group, surgery group, and Exe+Sur group in the first experiment were placed in liquid nitrogen for 1 h and then stored in a −80 °C freezer quickly for no >أسبوع 1. تم إجراء تنقية الحمض النووي الريبي (RNA)، والنسخ العكسي، وبناء المكتبة، والتسلسل في WuXi NextCODE في شنغهاي وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة (Illumina).

تم إعداد مكتبات التسلسل التي تركز على mRNA من إجمالي الحمض النووي الريبي (RNA) باستخدام مجموعة إعداد عينات Illumina TruSeq® RNA. تمت تنقية PolyA mRNA من الحمض النووي الريبي (RNA) الكلي باستخدام حبات مغناطيسية oligo-dTattached ثم تم تجزئتها بواسطة المخزن المؤقت للتجزئة. أخذ هذه الأجزاء القصيرة كقوالب، تم تصنيع [كدنا] أول حبلا باستخدام النسخ العكسي والاشعال العشوائي، متبوعًا بتوليف ثاني حبلا cDNA. بعد ذلك تم إخضاع [كدنا] المركب للإصلاح النهائي والفسفرة وإضافة القاعدة "A" وفقًا لبروتوكول بناء مكتبة Illumina.

تمت إضافة محولات تسلسل Illumina إلى أجزاء cDNA. بعد تضخيم PCR لإثراء الحمض النووي، تم استخدام AMPure XPBeads (Beckman) لتنظيف الأجزاء المستهدفة البالغة 200–300 سنة مضت. بعد إنشاء المكتبة، تم اختبار مقياس التألق Qubit 3.0 dsDNA HS Assay (Thermo Fisher Scientific) تم استخدامه لتحديد تركيزات مكتبات التسلسل الناتجة، بينما تم تحليل توزيع الحجم باستخدام Agilent BioAnalyzer 2100 (Agilent). تم إجراء التسلسل باستخدام نظام Illumina باتباع البروتوكولات المقدمة من Illumina لتسلسل مزدوج 2 × 150 في WuXi NextCODE في شنغهاي، الصين.

تعبير الحصين mRNA عن طريق تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي (Q-PCR)

الحصين التي تم حصادها في 24 ساعة بعد الجراحة من المجموعة الضابطة، مجموعة التمرين، مجموعة الجراحة، مجموعة Exe + Sur، مجموعة Trans-Control + Sur، مجموعة Trans-Exe + Sur، مجموعة Exe + Sur + NS، و Exe + Sur + تم وضع مجموعة Val في النيتروجين السائل لمدة ساعة واحدة، ثم تم تخزينها في الفريزر بدرجة حرارة 80 درجة لمدة لا تزيد عن 3 أيام. تم إجراء استخراج الحمض النووي الريبي (RNA)، والنسخ العكسي من الحمض النووي الريبي (RNA) إلى [كدنا] (cDNA)، وq-PCR كما وصفنا سابقًا [49، 53]. باختصار، تم استخراج الحمض النووي الريبي (RNA) بواسطة مجموعة RNeasy Micro. تم الانتهاء من النسخ العكسي باستخدام 5X All-in-One MasterMix. وأخيرا، تم استخدام نظام الاتصال في الوقت الحقيقي CFX (Bio-Rad) للقياس الكمي. كانت الاشعال لـ qPCR هي: C3ar 1- F: TGGGCTGGTGTGGGTAG و C3ar 1- R: GATGGCGAAGGCGGTTCTCAC. تم حساب التعبير الجيني النسبي لـ C3ar1 باستخدام دورة العتبة المقارنة ΔΔCt وجين التدبير المنزلي -actin لتطبيع التعبير الجيني. يتم التعبير عن مستويات mRNA للجينات المستهدفة بزيادات أضعاف بالنسبة للمجموعة ذات الصلة، على التوالي.

تحديد السيتوكينات وGDNF في الحصين

تم اكتشاف IL{{0}} و IL-6 و C3 و GDNF في الحصين باستخدام ELISAkits. لاختبار IL-1 و IL و-6 وGDNF، تم تجانس أنسجة المخ على الجليد في المخزن المؤقت RIPA الذي يحتوي على 25 مللي مولار Tris-HCl مع درجة الحموضة 7.6، 150 ملي مولار كلوريد، 1% ديوكسيكولات الصوديوم، 0.1%. SDS وكوكتيل مثبط الأنزيم البروتيني يحتوي على 10 ملغم/مل أبروتينين، 5 ملغم/مل بيبستاتين، 5 ملغم/مل ليوبيبتين و1 ملم فلوريد فينيل ميثان سلفونيل.

لاختبار C3، تم تجانس أنسجة المخ على الجليد في المخزن المؤقت PTR (المتوفر في المجموعة). تم جمع المادة الطافية للكشف عن ELISA بعد أن تم الطرد المركزي للمتجانس عند 13 ، 000 جم لمدة 20 دقيقة عند 4 درجات وتم تحديد تركيز البروتين بواسطة اختبار البروتين BCA (Bio-Rad، Hemel Hempstead، Herts، UK). تم الكشف عن IL-1 و IL6 و C3 و GDNF في طاف الدماغ وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة الخاصة بـ ELISA، وتم تطبيع كميتها في كل عينة في الدماغ من خلال محتوى البروتين الإجمالي وتم التعبير عنها كـ pg/ ملغ من البروتين.

النشاف الغربي

تم إجراء النشاف الغربي كما هو موضح سابقًا [49]. باختصار، تم تحديد تركيزات البروتين في العينات باستخدام مقايسة البروتين BCA. تم إخضاع عشرين ميكروغرامًا من كل عينة لتحليل النشاف الغربي باستخدام الأجسام المضادة الأولية التالية: بروتين كثافة أرنب متعدد النسيلة بعد المشبكية 95 (PSD95) عند تخفيف 1:1000، ومضاد أرنب بوليكلونل مضاد للتشابك 1 عند تخفيف 1:1000 ومضاد أرنب - - الأجسام المضادة توبولين في التخفيف 1: 1000. تم مسح الصور ضوئيًا بواسطة Image Master IIscanner (GE Healthcare، Milwaukee، WI، USA) وتم تحليلها باستخدام برنامج ImageQuant TL v2003.03 (GE Healthcare). تم تطبيع إشارات الفرقة الخاصة بالبروتينات المهتمة إلى إشارات التوبولين المقابلة وتم التعبير عنها كأجزاء من عينة التحكم من نفس المواد الهلامية.

تلطيخ المناعي

تم إجراء العلامات المناعية والقياس الكمي للتلطيخ كما وصفنا من قبل [6، 54]. باختصار، تم تثبيت الدماغ في بارافورمالدهيد 4٪ عند 4 درجة لمدة 24 ساعة ثم تم تحضينه في 30٪ سكروز طوال الليل عند 4 درجات قبل تجميده في مركب درجة حرارة القطع المثالية. تم قطع المقاطع الإكليلية السميكة 20- ميكرومتر بالتتابع من بريجما من −3 إلى −6 مم باستخدام ناظم البرد والمثبت على شرائح المجهر.

بعد غسلها في محلول ملحي تريس (TBS)، تم حظر المقاطع في 10٪ من مصل الحمير بالإضافة إلى 1٪ من ألبومين المصل البقري (BSA) في TBS الذي يحتوي على 0.3٪ تريتون-X100 لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة ثم حضنت في درجة حرارة الغرفة. 4 درجات خلال الليل مع الأجسام المضادة الأولية التالية: الجسم المضاد وحيد النسيلة المضاد لـ C3 للأرنب (1:50)، والجسم المضاد أحادي النسيلة المضاد لـ GFAP (1:200)، والجسم المضاد أحادي النسيلة المضاد لـ C3ar للفئران (1:50) والجسم المضاد أحادي النسيلة المضاد لـ Iba {{ 21}} الأجسام المضادة (1:200).

تم شطف المقاطع باستخدام TBS باستخدام 0.1% Triton-x 100. الجسم المضاد IgG المضاد للحمار والأرنب مترافق مع Alexa Fluor 594 (1:200)، والجسم المضاد IgG المضاد للحمار والماعز مترافق مع Alexa Fluor 488 (1:200) ، تم تحضين الجسم المضاد IgG المضاد للفئران للحمار المقترن بـ AlexaFluor 594 (1:200) أو الجسم المضاد IgG للحمار المضاد للأرانب المقترن بـ AlexaFluor 647 (1:200) مع المقاطع لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة في الظلام.

تم غسل المقاطع في TBS، واحتضانها باستخدام Hoechst 33342 (1: 1000) للتلوين النووي، وشطفها وتركيبها باستخدام Vectashield Mountingmedium (H -1000؛ Vector Labs، Burlingame، CA). تم الحصول على صور التلطيخ المناعي بواسطة z-stack باستخدام نظام الفحص المجهري LSM710 (ZEISS)، وتم تضمين التحكم السلبي مع حذف الحضانة مع الجسم المضاد الأولي في جميع التجارب.

تم إجراء القياس الكمي كما هو موضح سابقًا [6، 54]. باختصار، تم تصوير منطقة التلفيف المسنن (DG) بأكملها والتي تم تغطيتها بواسطة 2-3 حقول غير متداخلة من كل قسم من أقسام الحصين الستة المتسلسلة لفأر واحد. تم اعتبار عدد وحدات البكسل المحيطة بالصورة ذات الكثافة أعلى من مستوى العتبة المحدد مسبقًا بمثابة منطقة ملطخة بشكل إيجابي لعلامة مهتمة وتم قياسها باستخدام theImage-pro plus 6.0 (Media Cybernetics, Inc., Rockville, MD, USA) و يتم تقديمها كنسبة مئوية من المساحة الإيجابية في المساحة الإجمالية. ثم تم حساب متوسط ​​ستة قياسات لكل فأر لتعكس مستوى تلطيخ إيجابي. تم إجراء جميع التحليلات الكمية بطريقة عمياء.

إدارة BrdU وتلطيخ الفلورسنت المناعي

بعد سبعة أيام من الجراحة، تم إعطاء الفئران 7 حقن متتالية داخل الصفاق تبلغ 80 ملغم/كغم 5′-برومو-2′- ديوكسيوريدين (BrdU) ظهرًا مرة واحدة يوميًا كما هو موضح سابقًا [14]. تم التضحية بالفئران بعد 5 أيام لحصاد الحصين. تم تثبيت الحصين في بارافورمالدهيد 4٪ 0. 1 م من محلول ملحي بالفوسفات عند 4 درجة لمدة 24 ساعة ومضمن في البارافين. تم قطع أقسام الدماغ الإكليلية بسمك خمسة ميكرون بالتتابع من Bregma −2 إلى −4 ملم. تم إجراء استرجاع المستضد عن طريق احتضان المقاطع باستخدام عازلة سترات الصوديوم التي تحتوي على 1 0 ملي مولار من سيترات الصوديوم، 0.05٪ توين 20 (الرقم الهيدروجيني 6.0) عند 95-100 درجة لمدة 20 دقيقة.

تم تمسخ الحمض النووي عن طريق الحضانة مع 1 N HCl على الجليد لمدة 3 دقائق، و2 N HCL في درجة حرارة الغرفة لمدة 3 دقائق، وعند 37 درجة لمدة 6 دقائق. تم حظر المقاطع باستخدام 5٪ من مصل الحمير في محلول ملحي بالفوسفات (PBS) يحتوي على 0.5٪ triton-X 100 لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. تم بعد ذلك تحضين المقاطع طوال الليل عند 4 درجات باستخدام الأجسام المضادة الأولية التالية: الجسم المضاد الجرذاني النسيلة المضاد لـ BrdU (1:100)، والجسم المضاد وحيد النسيلة المضاد لـ GFAP في الماعز (1:200). تم تحضين المقاطع بجسم IgGantibody المضاد للفئران المترافق مع Alexa Fluor 594 (1:200) أو IgGantibody المضاد للحمير والماعز مترافق مع Alexa Fluor 488 (1:200) لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة في غرفة مظلمة. بعد غسلها في برنامج تلفزيوني، تمت مقاومة المقاطع باستخدام Hoechst 33342 (1: 1000)، وشطفها وتركيبها باستخدام وسط تركيب Vectashield (Vector Labs).

تم الحصول على الصور باستخدام مجهر مضان مزود بكاميرا جهاز مقترن بالشحن (High MagOlympus BX51) ونظام الفحص المجهري متحد البؤر LSM710 (ZEISS). تم تضمين التحكم السلبي مع حذف الحضانة مع الجسم المضاد الأولي في جميع التجارب. لكل دماغ فأر، تم استخدام ستة أقسام الحصين متتابعة لحساب الخلايا. تم حساب عدد جميع الخلايا الملطخة بشكل إيجابي لعلامة مهتمة أو مزيج من علامتين في المنطقة شبه الحبيبية للمدير العام لكل قسم. تم إجراء التحليلات الكمية بطريقة عمياء.

وصمة عار جولجي

تم إجراء تلطيخ Golgi باستخدام مجموعة FD Rapid GolgiStainTM. بعد تسعة عشر يومًا من الجراحة، تم غمر أدمغة 6 فئران في كل مجموعة في محلول التشريب (المحلول A وB: 1:1) لمدة أسبوعين ثم تم نقلها إلى المحلول C لمدة 3 أيام. تم قطع أقسام الدماغ الإكليلية بسماكة 100 ميكرومتر وحوالي .72.7 مم من bregma على الاهتزاز (Microslicer® 10110، Ted Pella، Inc. California، USA).

كما هو موضح من قبل [55، 56]، تم اختيار أكثر من 1 0 من الخلايا العصبية الفردية بشكل جيد في منطقة DG في الحصين بشكل عشوائي من كل فأر، وتم التقاط صور مسح ضوئي متعددة الطبقات متسلسلة عند فاصل زمني 2.0 ميكرومتر على طول المحور z (3DHISTECH، MIDI البانورامي، المجر) مع 20 × هدف. تم تركيب ملفات المسح الضوئي متعددة الطبقات لتصبح ملف مسح ضوئيًا واضحًا يمكن عرضه باستخدام Caseviewer (3DHISTECH، المجر) على جهاز كمبيوتر. تم قياس إجمالي عدد الفروع والطول التشعبي بواسطة برنامج فيجي (Fiji-win64، NIH، USA). تم تقدير مدى تعقيد الأشجار التغصنية الكلية (التقاطعات) باستخدام تحليل شول. قياس كثافة الفورسبين، تم اختيار 5 خلايا عصبية من كل حيوان.

تم تصوير خمسة مجالات مجهرية تم اختيارها عشوائيًا في التشعبات القمية أو القاعدية من ملفات المسح. تم حساب أرقام العمود الفقري في 40 ميكرومترًا بواسطة مراقب كان أعمى عن تعيين المجموعة. تم التعبير عن النتائج بعدد العمود الفقري / 10 ميكرومتر. تم حساب متوسط ​​بيانات أرقام الفروع التغصنية والطول والتقاطعات بالإضافة إلى كثافة العمود الفقري من ماوس واحد لتعكس مستوى الماوس.

تحليل احصائي

لم يتم إجراء حساب حجم العينة لكل تجربة. كان تحديد حجم العينة يعتمد في الغالب على تجربتنا: فقد تم استخدام أحجام عينات أكبر في تجارب اختبار التعلم والذاكرة مقارنة بتلك الخاصة بالدراسات البيوكيميائية. تم تضمين جميع البيانات التي تم جمعها في التحليلات. شملت البيانات المفقودة الحيوانات التي استوفت معايير الاستبعاد المحددة مسبقًا للتدريب على التمارين والحيوانات التي ماتت قبل فترة المراقبة المقصودة. تم ذكر عدد الحيوانات التي ساهمت ببيانات للتحليل لكل حالة تجريبية في وسائل الإيضاح.

يتم عرض النتائج كوسيلة ± SD (بيانات التوزيع الطبيعي) أو المدى المتوسط ​​± الربعي (وليس بيانات التوزيع الطبيعي) مع عرض بيانات الحيوانات الفردية في الرسم البياني الشريطي والوسائل ± SD في مخططات الخط. تم تحليل البيانات من الدورات التدريبية لـ BarnesMaze من خلال تحليل التباين المتكرر ثنائي الاتجاه (ANOVA) متبوعًا باختبار توكي.

تم تحليل بيانات الكائنات الحية الدقيقة في القناة الهضمية كما هو موضح في قسم تعريف الكائنات الحية الدقيقة في القناة الهضمية. تم تحليل البيانات الأخرى بواسطة ANOVA أحادي الاتجاه متبوعًا باختبار Tukey إذا كانت البيانات موزعة بشكل طبيعي، بواسطة ANOVA أحادي الاتجاه في المرتبة متبوعًا بطريقة اختبار Tukey Student-Newman-Keuls إذا لم يتم توزيع البيانات بشكل طبيعي، بواسطة ANOVA ثنائي الاتجاه. ، عن طريق اختبار t أو اختبار مجموع الرتبة. تم تعريف الفرق الكبير على أنه P <0.05 بناءً على اختبار الفرضيات ثنائي الذيل.

لم يتم إجراء تعديلات لمقارنات متعددة. تم إجراء جميع التحليلات الإحصائية باستخدام SigmaStat (Systat Software، Inc.، Point Richmond، CA، USA).

مراجع

1. مولر جي تي، كلويتمانز بي، راسموسن إل إس، هوكس بي، راسموسن إتش، كانيت جي، وآخرون. الخلل المعرفي بعد العملية الجراحية على المدى الطويل في دراسة ISPOCD1 لكبار السن. محققو ISPOCD. دراسة دولية للخلل المعرفي بعد العملية الجراحية. لانسيت.1998;351:857–61.

2. Monk TG، Weldon BC، Garvan CW، Dede DE، van der Aa MT، Heilman KM، et al. المتنبئون بالخلل المعرفي بعد إجراء عملية جراحية كبرى غير متعلقة بالقلب. التخدير. 2008;108:18-30.

3. نيومان إم إف، كيرشنر جيه إل، فيليبس بيوت بي، جافير في، جروكوت إتش، جونز آر إتش، وآخرون. التقييم الطولي للوظيفة المعرفية العصبية بعد جراحة مجازة الشريان التاجي. ن. إنجل جي ميد. 2001;344:395–402.

4. Hall M، Schwartzman A، Zhang J، Liu X. بيانات الجراحة الإسعافية من المستشفيات ومراكز الجراحة المتنقلة: 2010. تقرير الإحصاءات الصحية الوطنية لعام 2017.

5. لي واي، تشن د، وانغ إتش، وانغ زي، سونغ إف، لي إتش، وآخرون. التأثيرات الوريدية مقابل التخدير المتطاير على الإدراك بعد العملية الجراحية لدى المرضى المسنين الذين يخضعون لجراحة البطن بالمنظار. التخدير. 2021;134:381–94.

For more information:1950477648nn@gmail.com