هل حمامات البخار مفيدة أم ضارة لمرض الكلى المتعدد الكيسات السائد؟ الفحص باستخدام نموذج الفأرة

خلفية مجردة: 

تعمل بروتينات الصدمة الحرارية (Hsps)، التي يتم التعبير عنها عن طريق المعالجة الحرارية، على حماية الكلى عن طريققمع موت الخلايا المبرمجوالحفاظ على حيوية الأنابيب الكلوية. علاوة على ذلك، فقد تمت الإشارة مؤخرًا إلى أن التعبير عن Hsps يمكن أن يكون هدفًا علاجيًا للصبغي الجسديمسيطرمرض الكلية متعددة الكيسات(أدبكد). قمنا بدراسة تأثير العلاج بالساونا الجافة علىأدبكدالفئران النموذجية.

انقر هنا للحصول على مستخلص سيستانش عضوي طبيعي يحتوي على 25% من الإكيناكوسيد و9% أكتيوسايد لوظيفة الكلى.

البريد الإلكتروني:Wallence.Suen@Wecistanche.Com

واتساب/هاتف:+86 15292862950

تسوق لمزيد من تفاصيل المواصفات:

https٪3a٪2f٪2fwww.xjcistanche.com٪2fcistanche-shop

الطرق والنتائج:

تم تصنيف الفئران (ذكور الفئران ذات الدفع DBA/2FG) إلى ثلاث مجموعات: عناصر التحكم، TS: فئران pcy المعرضة للساونا لفترات طويلة مع ماء مُدار يحتوي على 4٪ سكروز، SW: فئران pcy تحتوي على ماء يحتوي على 4٪ سكروز. تعرضت مجموعة TS لجلسات الساونا مرتين في الأسبوع لمدة أربعة أسابيع. وصلت مجموعة TS وتم الحفاظ عليها عند درجة حرارة مستقيمية تبلغ حوالي 39.0 درجة، حتى تم إزالتها بعناية من جهاز الأشعة تحت الحمراء البعيدة. بعد 4 أسابيع من العلاج بالساونا، تم تحديد مستويات الكرياتينين ونيتروجين اليوريا في الدم (BUN) بطريقة إنزيمية. تم تحليل بروتين الصدمة الحرارية (HSP) أو نمو الخلايا والبروتينات المرتبطة بالحجم بواسطة النشاف الغربي. أظهرت مجموعة TS مستويات الكرياتينين وBUN أعلى بشكل هامشي مما فعلته مجموعات التحكم وSW، ومع ذلك، لم تكن الاختلافات كبيرة. ومع ذلك، انخفض تضخم الكيس في مجموعة TS بشكل ملحوظ مقارنة بالمجموعة الضابطة. انخفض تعبير HSP90 بشكل طفيف في مجموعتي TS وSW بالنسبة إلى مجموعة التحكم (p < 0.01 أو p <0.001، مقابل التحكم)، كما كان تعبير Erk ، والذي يرتبط بتطور الكيس وانتشاره (P <0.05، TS مقابل التحكم). كان مستوى التعبير والتفسفر Hsp27 في مجموعة SW مشابهًا لمستوى المجموعة الضابطة. ومع ذلك، زادت مجموعة TS مستويات Hsp27 والفسفرة (NS). كان التعبير عن pro-caspase -3 في مجموعة TS أقل بشكل هامشي من ذلك الموجود في المجموعة الضابطة. ومع ذلك، لم يظهر نشاط كاسباس -3 في جميع المجموعات أي اختلافات.

الخلاصة: أشارت نتائج هذه الدراسة إلى أن 4 أسابيع من العلاج بالساونا يمكن أن تسبب جفافًا عابرًا واختلالًا كلويًا مرتبطًا به وتؤدي إلى خطر تحفيز نمو الكيس عن طريق زيادة تعبير Hsp27. علاوة على ذلك، خلصنا إلى أنه يمكن منع الجفاف ونمو الكيس عن طريق تناول كمية مناسبة من الماء مباشرة بعد العلاج بالساونا.

الكلمات الدالة:جسمي متعدد الكيسات المهيمنةمرض كلوي, ساونا , كمية ماء , Hsp90 , Hsp27

I. مقدمة

العامل الوراثي المسيطرمرض الكلية متعددة الكيسات(ADPKD) هو اضطراب وراثي يتميز بنمو العديد من الخراجات في كلتا الكليتين. يحدث ADPKD في الغالب بسبب الطفرات فيمرض الكلية متعددة الكيسات1 (PKD1) وجينات PKD2، التي تشفر البوليسيستين 1 (PC1) وPC2، على التوالي. على مدار عقود من المرض، يصاب المرضى بكيسات كلوية كبيرة مملوءة بالسوائل مما يضعف وظائف الكلى. حاليًا، يقدر عدد المرضى الذين يعانون من ADPKD في اليابان بـ 31,000، وهو ما يمثل حوالي 3-5% من جميع مرضى غسيل الكلى). ما يقرب من 50٪ من المرضى الذين يعانون من ADPKD يصابون بمرض الكلى في المرحلة النهائية بحلول عمر 602). تمت الموافقة على تولفابتان، وهو مضاد مستقبلات فازوبريسين 2 (V2)، كأول عامل علاجي لـ ADPKD، وبدأ استخدامه السريري في مايو 2014 في اليابان). على الرغم من أنه دواء فعال يقلل من معدل نمو الأكياس، إلا أنه لا يوجد حاليًا علاج لـ ADPKD، وليس من الممكن إيقاف تكوين الكيس في الكلى.

العلاج الحراري، بما في ذلكالعلاج بالمياه المعدنية(BT) والعلاج بالمنتجع الصحي(ST)، كثيرا ما يستخدم على مستوى العالم كعلاج طبيعي أو علاج بديل. في الحالات السريرية، الهدف الرئيسي للعلاج الحراري هو تحقيق نتائج علاجية فعالة دون الإضرار بالأنسجة الطبيعية. أظهرت مراجعة منهجية حديثة أن BT وST يوفران تخفيفًا كبيرًا للألم وتحسين نوعية الحياة في الأمراض المزمنة في الجهاز العضلي الهيكلي أو النسيج الضام). يحفز التحفيز الحراري بروتينات الصدمة الحرارية (Hsps) التي تعتبر ضرورية لبقاء الخلية من خلال وظيفتها كمرافقات بروتينية. دور Hsps في صحة الكلى وأمراضها متغير. قد يكون تحريض Hsps مفيدًا أو ضارًا للكلى، اعتمادًا على نوع Hsps المحدد ونوع الخلية والسياق). في أنسجة الكلى، تعد Hsps جزءًا مهمًا من نظام الدفاع داخل الخلايا، والذي يتم تنشيطه بواسطة أنواع مختلفة من الإجهاد الخلوي. تعمل مختلف Hsps داخل الخلية على تثبيت هياكل الخلية وتعزيز مقاومة الخلايا لموت الخلايا المبرمج والنخر 6) ، 7). في السنوات الأخيرة، تم الإبلاغ عن أن Hsps يلعب دورًا ضارًا في ADPKD، وبالتالي فهو أهداف علاجية 8)، 9). ومن ثم، فإننا نهدف إلى دراسة تأثير حمامات البخار على حيوانات نموذج ADPKD، عندما يتكرر الحمل الحراري الذي يرفع درجة حرارة المستقيم بمقدار درجتين تقريبًا ويحافظ عليها لمدة 30 دقيقة تقريبًا.

ثانيا المواد والطرق

1. نموذج الفأر النموذجي لمرض الكلى المتعدد الكيسات السائد (ADPKD) أجريت جميع الإجراءات الحيوانية وفقًا للمبادئ التوجيهية لرعاية واستخدام حيوانات المختبر التي وافقت عليها جامعة كوماموتو للعلوم الصحية (رقم 18-07). تم استخدام الفئران DBA / 2FG-pcy (pcy) الذكور 1 0) ، 11) (عمرها 8 أسابيع ، n=12) (كيودو ، كوماموتو ، اليابان) بأوزان أولية للجسم تبلغ 20.9 ± 0.7 جم الفئران النموذجية ADPKD في هذه التجربة. تم استخدام فئران DBA الذكور (8 أسابيع، n=3) كمرجع لنموذج الماوس ADPKD. ويبين الشكل 1 المظهر والكلية المستأصلة كأمثلة نموذجية للفئران pcy (الشكل 1A، B). تم إيواء جميع الحيوانات تحت رطوبة ودرجة حرارة خاضعة للرقابة مع دورة الضوء / الظلام 12:12- ساعة وتم منحها حرية الوصول إلى طعام الفأر القياسي ومياه الصنبور.

تم تقسيم تسعة فئران pcy (عمرها 8 أسابيع) بشكل عشوائي إلى المجموعات الثلاث التالية - المجموعة الضابطة: الفئران pcy كمجموعة تحكم (n=3)، مجموعة TS: الفئران pcy المعرضة للتحفيز الحراري الجهازي المتكرر (n {{3} }); ومجموعة SW: الفئران pcy التي تم تزويدها بالمياه التي تحتوي على 4٪ سكروز (ن=3). تم تزويد الفئران في مجموعة TS بالمياه التي تحتوي على 4٪ سكروز طوال الليل، بعد التحفيز الحراري النظامي لمنع الجفاف. في دراسة سابقة، وجدنا أن فقدان وزن الجسم كان حوالي 3-4% بعد التحفيز الحراري الجهازي12). عندما تم إعطاء 4% من ماء السكروز للفئران، زادت كمية المياه المستهلكة بشكل ملحوظ من 5.6 ± 0.6 مل إلى 7.4 ± 0.7 مل (p < 0.001 ، الشكل 1C). بين عشية وضحاها كان تناول الماء بالسكروز بنسبة 4٪ بمثابة كمية عالية من السوائل تعادل 14 ± 7٪ من وزن الجسم. استهلكت مجموعة SW الماء طوال الليل بنفس التردد الذي استهلكته مجموعة TS.

2. التحفيز الحراري الجهازي (الساونا)

تم تحديد شدة الحرارة للساونا في دراسة سابقة13). ومع ذلك، تجاوزت درجة حرارة المستقيم لدى بعض الفئران pcy 42 درجة بسبب صغر حجم جسمها مقارنة بفئران DBA العادية وفئران 129X1/SvJ. ولذلك، تمت محاولة رفع درجة حرارة المستقيم بمقدار درجة واحدة، ولكن نظرًا لمحدودية التحكم في نظام الساونا الجافة بالأشعة تحت الحمراء البعيدة (المقدمة من جامعة كاجوشيما)، تم ضبط درجة حرارة المستقيم على الارتفاع إلى حوالي 39 درجة. لم تكن هناك تقارير عن تواتر sau nas لـ ADPKD؛ ولذلك، تم اعتماد الحد الأدنى الفعال لتكرار الساونا (مرتين/أسبوع) الذي تم تحديده في دراسة حول العلاقة بين حمام الساونا وأمراض القلب والأوعية الدموية والأسباب الأخرى للوفيات التي أجراها لاوكانين وآخرون.14). على وجه التحديد، تلقت الفئران علاج الساونا عند 43 درجة لمدة عشر دقائق ثم عند 37 درجة لمدة 35 دقيقة لرفع درجة حرارة المستقيم من 37.1 ± 0.1 درجة إلى 39.3 ± 0.3 درجة باستخدام نظام الساونا الجافة بالأشعة تحت الحمراء البعيدة. تم الحفاظ على درجة حرارة المستقيم لدى الفئران عند 39.0 درجة تقريبًا حتى تم إخراجها من جهاز الساونا. تعرضت مجموعة TS للساونا لمدة أربعة أسابيع، مرتين في الأسبوع.

3. الإجراء التحليلي

تم الحصول على البيانات الفسيولوجية من جميع الفئران في نهاية فترة الدراسة التي استمرت أربعة أسابيع. تم جمع عينات البول لمدة أربع وعشرين ساعة في أقفاص التمثيل الغذائي، وتم تحديد كمية السوائل. تم جمع عينات الدم من الوريد الأجوف السفلي، وتم قياس مستويات الكرياتينين في البلازما ونيتروجين اليوريا في الدم (BUN) باستخدام محلل الكيمياء الحيوية الأوتوماتيكي Hitachi 7180 (شركة Hitachi High-Technologies، طوكيو، اليابان)، مع Aqua-auto Kainos CRE -مجموعة اختبار II أو مجموعة اختبار UN-II (كاينوس، طوكيو، اليابان) باستخدام الطريقة الأنزيمية.

4. الدراسات النسيجية

تم إصلاح الكلى بمحلول بارافورمالدهيد فوسفات 4٪ وجزءا لا يتجزأ من البارافين. تم تقسيم عينات الكلى على فترات 2- ميكرومتر وتم صبغها بالهيماتوكسيلين والأيوسين (H&E)، وتم تحديد كمية كيسات الأنابيب على قسمين لكل فأر (الكلية اليمنى) باستخدام ImageJ (المعاهد الوطنية للصحة، بيثيسدا، ماريلاند، الولايات المتحدة الأمريكية). تم استبعاد المناطق التي تحتوي على تمزقات الأنسجة والفقاعات التي تم تحديدها عند التكبير العالي (× 40) من التحليل، كما ورد سابقًا.

5. النشاف الغربي

تم إجراء التحليل الكهربائي لهلام دوديسيل كبريتات بولي أكريلاميد الصوديوم (SDS-PAGE) والنشاف باستخدام الإجراءات القياسية. تم إخضاع قسامات تحتوي على 15 ميكروغرام من البروتين إلى SDS-PAGE. تم استخدام الأجسام المضادة المرفوعة ضد البروتينات التالية: Hsp27 (1:1,000, sc-9012, تقنية سانتا كروز الحيوية)، phosphoHsp27 (1:1,000, #2401S، تشوير الخلية التكنولوجيا)، إجمالي-Akt (1:1، 000، #9272، تقنية تشوير الخلية)، phospho-Akt (1:1، 000، #9275، تقنية تشوير الخلية)، Erk1/2 (1:1،000، #9102، تقنية تشوير الخلية)، phospho-Erk1/2 (1:1، 000، #9101، تقنية تشوير الخلية)، mTOR (1:1،{ {39}}، #2972، تقنية تشوير الخلية)، phospho-mTOR (1:1، 000، #2971، تقنية تشوير الخلية)، كاسباس 3 (1:500، ab4051، أبكام، كامبريدج، المملكة المتحدة) ، كاسباس المشقوق -3 (1:1، 000، #9661، تقنية تشوير الخلية)، و -actin (1:1، 000، الشوري -130656، سانتا كروز التكنولوجيا الحيوية). تم اكتشاف البقع باستخدام نظام الكشف عن النشاف الغربي ECL Prime (GE Healthcare، UK) وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. أظهرت البيانات القياس الكمي النسبي ضد الأكتين، والذي تم استخدامه كعنصر تحكم داخلي.

6. التحليل الإحصائي

للتحليل الإحصائي، تمت مقارنة البيانات بين المجموعتين TS وSW باستخدام اختبار مان ويتني يو. تمت مقارنة المجموعات باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) متبوعًا باختبار توكي لتحديد الاختلافات. واعتبرت الاختلافات ذات دلالة إحصائية عند p <0.05. يتم التعبير عن البيانات على أنها متوسط ​​± الانحراف المعياري (SD) أو متوسط ​​± الخطأ المعياري للوسط (SEM). تم استخدام GraphPad Prism 6 (برنامج GraphPad، سان دييغو، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية) للتحليل الإحصائي.