Atriplex Canescens: مضيف جديد لـ Cistanche Deserticola

اتصال:tina.xiang@wecistanche.com

Fangming Wang a، Bingyu Zhuo b، Shuai Wang c، Jin Lou c، Yuan Zhang b، Qingliang Chen a، Ziyi Shi a، Yuelin Song b، Pengfei Tu a، *

مختبر رئيسي للولاية للأدوية الطبيعية والمحاكاة الحيوية وقسم الأدوية الطبيعية ، كلية العلوم الصيدلانية ، مركز العلوم الصحية بجامعة بكين ، بكين ، 100191 ، الصين

(ب) مدرسة المواد الطبية الصينية ، جامعة بكين للطب الصيني ، بيجين ، 102488 ، الصين

c Quheng Foundation، Asia Sci-Tech Center، 4760 Jiangnan Avenue، Binjiang، Hangzhou، Zhejiang، 310053، الصين

A B S T R A C T

سيستانش الصحراءتم استخدامه تاريخيًا في الطب الصيني التقليدي لتكملة وظيفة الكلى (اليانغ) ، وإفادة الدم والجوهر ، وترطيب الأمعاء من أجل إخراج البراز. مضيفها. Haloxylon amodendron هو مصنع رائد مهم يستخدم لمصدات الرياح وتثبيت الكثبان الرملية ، وهي استراتيجيات تستخدم للتحكم في التصحر. لوقت طويل ، كان يُعتقد أن المطثية العسيرة deserticola يمكنها فقط تطفل H. amodendron. في هذه الدراسة ، تم إجراء التحديد المورفولوجي وتحديد الترميز الجيني وتجارب التلقيح ، ووجدنا أخيرًا أنجيم الصحراءيمكن أيضا أن تتطفل على canescens Atriplex. A.canescens هو نوع من Chenopodiaceae مع مجموعة واسعة من القدرة على التكيف. بالمقارنة مع H. amodendron ، فإنه يحتوي على كتلة حيوية أكبر ونطاق أوسع من التكيف البيئي ، مما يجعله أكثر ملاءمة للإنتاج الصناعي لـ C. بالإضافة إلى ذلك ، وجدنا أيضًا أن تركيز المكونات النشطة كان أعلى في C. تشير هذه النتيجة أيضًا إلى أن تطبيق C.

الكلمات الرئيسية: Cistanche deserticola Parasitism التعرف على الحمض النووي المستند إلى الباركود الطب الصيني التقليدي Cistanche salsa

1 المقدمة

تم تسجيل استخدام Cistanche في الطب الصيني التقليدي لأول مرة في Shennong Herbal Script ، لتأثيره في تنغيم الكلى يانغ ، وتعزيز جوهر الدم ، وترطيب الأمعاء لتسهيل مرور البراز. كما تم تسجيله في أعمال الطب العشبي القديم باسم "الجينسنغ الصحراوي". السيقان الجافة السمين والأوراق المتقشرةسيستانش الصحراءكان YC Ma و Cistanche tubulosa (Schenk) Wight أول مفصل تم وصفه في عام 2005 في دستور الأدوية الصيني. يزرع Cistanche بشكل أساسي في Xingjiang ومنغوليا الداخلية وقانسو في الصين ، وعلى مستوى العالم ، يوجد في المناطق شبه القاحلة والقاحلة في جميع أنحاء شبه الجزيرة الأيبيرية الأوروبية وشمال إفريقيا والجزيرة العربية وإيران وأفغانستان وباكستان وشمال الهند ومنغوليا وآخرون آل. [1]. إنه مقاوم للظروف البيئية القاسية ، مثل المناخات شديدة الجفاف ، والتغيرات الشديدة في درجات الحرارة ، والتربة المزعجة [2]. وفقًا للفهرس التصنيفي للنباتات الصينية العليا ، هناك ستة أنواع من أنواع Cistanche في الصين. ومع ذلك ، أكدت دراسة أخرى وجود أربعة أنواع فقط ومتغير واحد من Cistanche ، وهي ،جيم الصحراءYC Ma، C. tubulosa (Schenk) R. وايت ، سي سالسا (كامي) جي بيك ، سي سينينسيس جي بيك ، سي سالسا فار. albiflora PF Tu et al ، [3].

جيم الصحراءيعتبر المصدر التقليدي الوحيد لـ Cistanche وله تاريخ طويل من الاستخدام في الطب ، منذ عهد أسرة هان الشرقية (25 بعد الميلاد -220 م) [4]. Ming Dynasty) ، تم توثيقه لتنغيم اليانغ بسلاسة (على عكس الأعشاب الأخرى التي لها تأثير أقوى). تم عزل مجموعة من المكونات الكيميائية الفعالة ، بما في ذلك جليكوسيدات فينيليثانويد ، إيريديويد ، قشور ، ألديتول ، سكريات قليلة السكرية ، عديد السكاريد ، وأشباه القلويات ، منجيم الصحراءبالطرق الكيميائية النباتية الحديثة [5]. أظهرت الدراسات الدوائية أن الفينيثيل جليكوزيد هو المكون النشط الرئيسي ، وقد تم الإبلاغ عن أنه يحسن الوظيفة الجنسية ، ويمارس التأثيرات الوقائية العصبية ، ويحسن التعلم والذاكرة ، ويحمي الكبد. كما أنه يمارس تأثيرات علاجية ضد الخرف ، ومرض الزهايمر ، ومرض باركنسون ، والتعب ، والأورام بالإضافة إلى خصائصه المضادة للالتهابات والمناعة [6 ، 7].

جيم الصحراءهو نبات طفيلي إلزامي يعيش حصريًا على جذور هالوكسيلون أموديندرون [8]. ذكرت دراسة أن المطثية العسيرة لا توجد حتى في هالوكسيلون بيرسيكوم [9]. في السنوات الأخيرة ، تم إيلاء قدر متزايد من الاهتمام لـ C ، Deserticola. لأنه ليس فقط مصدرًا للمكونات ذات القيمة الطبية ولكنه يساهم أيضًا بشكل كبير في مكافحة التصحر [10]. amodendron هو المضيف الوحيد الذي تم استخدامه في الدراسات التي شملت C. في أبريل 2017 ، قام وانغ شواي ، موظف في صندوق الرعاية العامة Zhejiang Ouheng ، بتلقيح بذور C. تزهر حتى مايو 2019. ومع ذلك ، تم شراء البذور من السوق ، ومن المشكوك فيه ما إذا كانت بذورًا حقيقية لـ C. بالإضافة إلى ذلك ، فإن هذه الظاهرة تكسر المعارف التقليدية وتحتاج إلى مزيد من الدراسة.

A. canescens هي شجيرة معمرة C4 موطنها صحاري جنوب غرب أمريكا وتتكيف بسرعة مع ظروف الملوحة والمعادن الثقيلة والجفاف ودرجات الحرارة المرتفعة [11]. نظرًا لكونه مستساغًا وغنيًا بالعناصر الغذائية ، فإنه يستخدم كعلف لمعظم الماشية والحيوانات الكبيرة [12]. علاوة على ذلك ، فهي مفيدة بشكل خاص للتحكم في التعرية واستصلاح الأراضي الهامشية بسبب قدرتها الممتازة على التكيف ونظام الجذر الشامل. تم تقديمه لأول مرة في الصين من الولايات المتحدة الأمريكية في عام 1989 واستخدم على نطاق واسع للحفاظ على التربة والمياه ، وتثبيت الرمال ، واستعادة الأراضي المالحة [13]. على الرغم من أن الدراسة تشير إلى نموجيم الصحراءعلى A. canescens يقلب الفهم الطفيلي الحصري لـ C. مقارنة مع H.

من أجل ضمان دقة الاكتشاف العرضي ، تم إجراء تجارب تحديد النباتات والتلقيح الاصطناعي. يتضمن تعريف النبات التقليدي التقييم الحسي (مثل اللمس والرائحة والبصر والذوق) ، وتحليل الخصائص المورفولوجية (مثل الميكروسكوبية والعيانية) ، والتنميط الكيميائي (مثل الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء ، وكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة ، والغاز اللوني) [14]. من السهل نسبيًا استبعاد C. tubulosa و C. Sinensis بسبب الاختلاف في الحجم واللون وترتيب حزم الأوعية الدموية في الساق. التحدي الحقيقي هو التمييز بين C. وفقًا لـ Flora of China ، يبلغ طول bract لـ C. salsa حوالي 1/3 من الكورولا ، بينما يكون مساويًا في C. يتشابه المقطع العرضي للسيقان اللحمية بين C. يكمن الاختلاف الرئيسي في غمد الحزمة الوعائية لأنه مذنب لـ C.

في السنوات الأخيرة ، تم استخدام تقنية ترميز الحمض النووي الشريطي بشكل متكرر لتحديد الأنواع. إنها عملية تستخدم تسلسل DNA قصيرًا من الجينوم القياسي ، والذي يتم حفظه بشكل عام ولا يتأثر بالعوامل الخارجية ، مثل العمر ونوع الأنسجة النباتية. التسلسلات الشائعة المرشحة للرموز الشريطية للحمض النووي للنبات هي rbcL و matK و psbA-trnH و ITS و ITS2 [15]. أشارت العديد من الدراسات إلى أن ITS / ITS2 هي أكثر أدوات تحديد هوية النباتات فعالية. كما تم اقتراح أن يتم دمج منطقة ITS2 في الباركود الأساسي بسبب قدرتها التمييزية الأعلى من تلك الخاصة بالباركود البلاستيد. تم قبول إمكانية استخدام ITS2 كرمز شريطي عالمي جديد لتحديد مجموعة واسعة من أصناف النباتات [16 ، 17 ، 18 ، 19 ، 20 ، 21]. على الرغم من أن العديد من الدراسات حاولت تحديد الرمز الشريطي للنبات أحادي الاتجاه ، إلا أن أيًا من المواقع المتاحة لا تعمل في جميع الأنواع ، لذا فإن طريقة تحديد المواقع المتعددة ضرورية للتمييز بين الأنواع النباتية [22 ، 23 ، 24 ، 25 ، 26 ، 27 ، 28]. في هذه الدراسة ، تم استخدام ITS2 ، rbcL ، psbA-trnL كرموز شريطية.

بالإضافة إلى تقنيات التحديد المورفولوجي والجزيئي ، يأتي الدليل المباشر من تجارب التلقيح. يجب إجراء تجارب التلقيح لإثبات أن C. بالإضافة إلى تحديد الهوية ، تصبح مراقبة الجودة اعتبارًا أساسيًا. هناك حاجة إلى مزيد من التحقيقات من أجل التأكد من الفرق بين جودة المطثية الجافة المتطفلة على جذر H.

2. المواد والأساليب

2.1. المواد النباتية

تنمو القشرة في التربة الرملية الناعمة ذات التملح المعتدل ، وتتطفل بشكل عام على الجذور الجانبية العميقة {{0} سم للمضيف. المناخ في منطقة النمو المناسبة جاف ، وأقل تمطرًا ، وبه تبخر كبير ، وساعات سطوع طويلة للشمس ، وفرق كبير في درجات الحرارة بين النهار والليل. تعد مقاطعة Minqin ومدينة Baiving مواقع تجميع هذه العينات ، وهي قريبة جغرافيًا ، وتتمتع بمناخ قاري جاف معتدل ، بمتوسط ​​هطول سنوي يبلغ 113.2 ملم ومتوسط ​​رطوبة نسبية سنوي يبلغ 44 في المائة. يتم عرض معلومات محددة ومفصلة عن جمع العينات في الجدول 1. تم تجميد جميع العينات وحفظها بدرجة -20 في مختبر مفتاح الولاية لمختبر الأدوية الطبيعية والبيولوجية ، بكين ، الصين.

2.2. تلطيخ الأنسجة والمراقبة

تم الحصول على عينات طازجة وتخزينها في محلول يتكون من 70 في المائة من الإيثانول وحمض الخليك الجليدي والفورمالدهيد بنسبة 90: 5: 5 وتم تجفيفها باستخدام تدرج إيثانول (75 في المائة ، 95 في المائة ، 100 في المائة ، 100 في المائة) لمدة 1 ساعة. تعرضت المقاطع المجففة لتدرج زيلين (25 بالمائة ، 50 بالمائة ، 75 بالمائة ، 100 بالمائة ، 100 بالمائة) لمدة ساعة واحدة للحصول على مقاطع شفافة. تعرضت المقاطع الشفافة لتسلل البارافين ، حيث تمت إضافة حجم من البارافين مساوٍ لحجم الزيلين إلى الزيلين المحتوي على العينة ، ثم تم سحب نصف المحلول الناتج ، وأضيف حجمًا متساويًا من البارافين مرة أخرى. تكررت هذه العملية 10 مرات ، وأخيراً ، تم طرح جميع الحلول واستبدالها بكمية متساوية من البارافين ؛ تكررت هذه الخطوة الأخيرة مرتين ، وتم تحضين المحلول الناتج بعد كل خطوة لمدة ساعة واحدة عند 75 درجة. بعد تسلل البارافين ، تم إخضاع المقاطع للتضمين ، حيث تم وضع العينات في خزان حديدي يحتوي على البارافين السائل ، وتمت إضافة البارافين السائل الإضافي بسرعة لملء الخزان بالكامل وتركه حتى يصلب. تم قطع كتلة الشمع الناتجة وتقطيعها. تم وضع المقاطع المضمنة في ماء دافئ ، ثم صيدها ، ووضعها على شريحة ، واحتضانها عند 45 درجة لمدة 30 دقيقة. تم إزالة شمع المقاطع الموجودة على الشريحة عن طريق النقع المتسلسل في 100 بالمائة زيلين ، و 100 بالمائة زيلين ، و 50 بالمائة زيلين ، و 50 بالمائة زيلين ، و 100 بالمائة إيثانول ، و 100 بالمائة إيثانول ، و 95 بالمائة إيثانول ، و 75 بالمائة إيثانول ثم نقعها في سافرين O لمدة 40 دقيقة. تبع ذلك جولة أخرى من النقع المتسلسل السريع في 75 بالمائة من الإيثانول و 95 بالمائة من الإيثانول ، ثم تُغطس الشرائح باللون الأخضر السريع لمدة دقيقة واحدة. أخيرًا ، تم إخضاع الأقسام لنقع تسلسلي واحد في 95 بالمائة إيثانول ، 95 بالمائة إيثانول ، 100 بالمائة إيثانول ، 100 بالمائة إيثانول ، 50 بالمائة زيلين ، 50 بالمائة زيلين ، و 100 بالمائة زيلين. بعد تلطيخ المقاطع ، تم وضع قطرة من صمغ الراتينج على الشريحة ، ووضع غطاء زجاجي فوقها. تركت الشرائح دون عائق لمدة أسبوع ، ولوحظت أقسام الأنسجة باستخدام مجهر أوليمبوس البصري والتصوير.

2.3 استخراج الحمض النووي وتضخيم PCR

تم استخراج الحمض النووي الجيني الكلي من عينات الزهور باستخدام مجموعة استخراج الحمض النووي الجيني للنبات (شركة سولاربيو للعلوم والتكنولوجيا المحدودة ، بكين ، الصين) وفقًا لبروتوكولات الشركة المصنعة. يتم عرض الاشعال لتضخيم الجينات وتسلسلها وظروف التفاعل في الجدول 2. وتكرر كل تضخيم الجينات ثلاث مرات لكل عينة.

2.4 تحليل التسلسل

من أجل الحصول على تسلسلات دقيقة ، تم استنساخ منتجات PCR النهائية ، بعد التنقية باستخدام مجموعات Transgene Quick Gel Extraction Kits ، بشكل منفصل في ناقلات استنساخ pEASY-Blunt ، وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. بعد الاستنساخ ، تم تحويلها إلى خلايا Trans5a المختصة كيميائيًا. تم اختيار ثلاث مستعمرات من كل عينة بشكل عشوائي وتسلسلها باستخدام بادئات M13. تم تسلسل هذه المستعمرات ثنائية الاتجاه عن طريق تسلسل Sanger ، باستخدام أطقم تسلسل الدورة BigDye Terminator V3.1 على محللات DNA ABI Prism 37 0 0. تمت محاذاة التسلسلات التي تم الحصول عليها باستخدام Clustal X (v1.8.7) [29] وتمت مزامنتها يدويًا في BioEdit (الإصدار 1.3.0) [30. باستخدام بيانات التسلسل المحاذاة ، قمنا بإعادة بناء التطور باستخدام برنامج MEGA 7 باستخدام ربط الجوار طريقة (نيوجيرسي). تم استخدام نموذج معامل كيمورا 2- (K2P) وكان التمهيد 1000 تكرار [31].

2.5 تلقيح C. Deserticola

تمت إضافة ثلاثة جرامات من بذور C. تتكون المجموعة الضابطة من 3 جرام من بذور C. salsa مضافة إلى أوعية مماثلة تحتوي على تربة رملية. أخيرًا ، زرعت A. canescens في كل وعاء ، ووضعت الأواني في الهواء الطلق. عندما يكون محتوى رطوبة التربة أقل من 13 بالمائة (جم / جم) ، تسقى الأواني. أجريت التجربة في حديقة Zhongguancun Life Science Park ، بكين ، الصين (خط عرض 39 درجة 56 درجة شمالاً ، خط طول 116 درجة 20 درجة شرقاً ؛ 20 متراً فوق مستوى سطح البحر) من مايو إلى يوليو. تتراوح درجة حرارة النهار بين 16 و 35 درجة ، ودرجة حرارة الليل بين 12 و 16 درجة. الرطوبة النسبية للهواء أكبر من 50 بالمائة. ضوء الشمس وفير. بعد حوالي 80 يومًا ، تمت إزالة التربة من الأواني وتم تحديد معدل التلقيح.

2.6. تحديد تركيز المكونات الطبية

يشمل تحديد تركيز المكونات الطبية جزأين ، أحدهما إجراء كروماتوغرافيا السائل ، والآخر هو تحضير مادة مرجعية ومادة اختبار ، ومزيد من التفاصيل كالتالي:

أنا). تحديد إشنكوسايد وفيرباسكوسايد

تم وزن Echinacoside و verbascoside وإضافتهما في 5 0 بالمائة من الميثانول لإنتاج محلول 0 .2 مجم / مل ، والذي تم استخدامه كمحلول مرجعي. الأول هو طحن C. والترشيح. كان العمود الكروماتوغرافي عبارة عن عمود Agilent ZORBAX SB-C18 (4.6 مم × 150 مم ، 5 ميكرومتر) ، مع الميثانول (أ) -0. 1 في المائة من محلول حمض الفورميك (ب) كمرحلة متحركة ، شطف متدرج ({{14} } دقيقة ، 26.5 بالمائة أ ؛ 17-20 دقيقة ، 26.5 بالمائة → 29.5 بالمائة أ ؛ 20-27 دقيقة ، 29.5 بالمائة أ) ، معدل التدفق 1.0 مل / دقيقة ، درجة حرارة العمود 35 درجة مئوية ، الطول الموجي للكشف كان 330 نانومتر ، وكان حجم الحقن 10 مايكرولتر.

ب). تحديد البيتين ، المانيتول ، الفركتوز ، الجلوكوز ، والسكروز

تم وزن البيتين والمانيتول والفركتوز والجلوكوز والسكروز بدقة وإضافتها إلى الماء لعمل محلول {0}}. 25 مجم / مل ، والذي تم استخدامه كمحلول مرجعي. تم خلط خمسة مليمترات من محلول اختبار Cistanche المذكور أعلاه مع 50 بالمائة من الميثانول في دورق حجمي سعة 25 مل ، ورج جيدًا ، ثم تمت ترشيحه بغشاء مسامي 0.2 ميكرومتر. كان العمود الكروماتوغرافي SHODEXASHAIPAK NH2P -50 4 عمود جل بلمر E 250 مم × 4.6 مم ، 5 ميكرومتر） ، تم تطفل الطور المتحرك على أ.كانيسينز ، وجدنا أنه يحتوي على غلاف حزمة وعائي مذنب ، يشبه ذلك من جيم الصحراء (الشكل 2).

أسيتونتريل ماء (77:23) ، كان معدل التدفق 0. 7 مل / دقيقة ، كانت درجة حرارة العمود 25 درجة ، باستخدام كاشف تشتت الضوء التبخيري (ELSD) ، كانت درجة حرارة أنبوب الانجراف 100 درجة ، والحامل كان معدل تدفق الغاز 3 لتر / دقيقة ، وكان حجم الحقن للمادة المرجعية والعينة 5 مايولتر.

3. النتائج

3.1. التعريف المورفولوجي للزهور

لتأكيد أنواع Cistanche التي تتطفل على A. canescens ، تم إجراء التحليل المورفولوجي لعينات الزهور (الشكل 1 والشكل S1). كان الشكل العام لزهور النبات الطفيلي مشابهًا لمورفولوجيا C. Deserticola. علاوة على ذلك ، كانت الكورولا أكثر سمكًا من تلك الموجودة في C.salsa على مضيفات مختلفة.

وفقًا لـ Flora of China ، هناك اختلافات واضحة في قرعة الأزهار C. في C. بناءً على تحليلنا الإحصائي ، تطفلت بكتلات Cistanche على A. canescens وتلك الخاصة بـ C. أظهر Cistanche على A. canescens سمات مورفولوجية لـ C. deserticola ، مما يشير إلى أن C.

3.2 التحديد المجهري لعينات الأنسجة الملطخة

يتشابه قطع الجذع اللحمي لـ C. الحزم الوعائية لكلا النباتين مرتبة في حلقات متموجة أو عميقة ، ومن الواضح أن اللبوات مرئية. يكمن الاختلاف الرئيسي في الشكل الجانبي لغمد الحزمة الوعائية ؛ إنه مذنب في C. deserticola ومثلث أو نصف دائري في C. عند إجراء تحليل البنية المجهرية على Cistanche

3.3 التعريف الجزيئي

بالإضافة إلى التعريف المورفولوجي ، أجرينا أيضًا تحديدًا جزيئيًا واخترنا ثلاث أجزاء جينية ، وهي ITS2 و rbcL و psbA-trnL. تم إنشاء شجرة تطورية باستخدام معلومات التسلسل لكل جزء (الشكل 3) ، وأظهرت جميع الأشجار النشوء والتطور الثلاثة أن Cistanche تطفل على A. canescens كان له علاقة نسالة وثيقة مع C. تشير هذه النتائج إلى أن C.

وقد لوحظت الاختلافات الجينية التفصيلية بين أنواع Cistanche المختلفة عند محاذاة التسلسل المتعدد (الشكل 4). وجدنا ثلاثة أشكال متعددة للنيوكليوتيدات (SNPs) في جسم الجين ITS2 بين C. يحتوي على اثنين من SNPs واثنين من عمليات الإدراج والحذف (indel) الطفرات. بالمقارنة مع ITS2 و rbL ، كانت الاختلافات في جسم الجين psbA-trnL بين C. Deserticola و C. salsa أكثر وضوحًا ، مع سبعة اختلافات متسلسلة ، حيث كانت أربعة منها عبارة عن SNPs وثلاثة طفرات InDel. على وجه الخصوص ، يمكن استخدام سلسلة من تكرارات الثايمين ، بدءًا من القاعدة 414 من التسلسل المحاذي ، لتطوير علامات تكرار تسلسل بسيط (SSR) لتمييز C.

3.4. تلقيح C. Deserticola

لاختبار ما إذا كان يمكن أن تتطفل C. لم يلاحظ أي تطفل في المجموعات الضابطة. تثبت هذه النتيجة بشكل مباشر أن C.

3.5 تحديد تركيز المكونات الطبية الهامة

لقد قدرنا تركيز المكونات الطبية الهامة في المطثية الجافة المتطفلة على A. canescens. يظهر مخطط الكروماتوغرام المحدد في المادة التكميلية. للحصول على نتائج دقيقة ، تم إجراء أربع تجارب مستقلة. استنادًا إلى قياساتنا (الجدول 3) ، وجدنا أن تركيز فيرباسكوسايد وإشنكوسايد كان أعلى بمرتين 0 من تركيز دستور الأدوية الصيني (وفقًا لدستور الأدوية الصيني ، النسبة المئوية لمجموع تركيزات إشيناكوسيد و verbascoside في C. deserticola يجب أن يكون أقل من 0. 30٪). كانت التركيزات أيضًا أعلى بشكل ملحوظ من تلك الموجودة في C. كان تركيز المانيتول والبيتين والفركتوز ومكونات الكربوهيدرات الأخرى أيضًا مرتفعًا جدًا ، وكانت الجودة الإجمالية أفضل من تلك الموجودة في C. وبالتالي ، تشير هذه النتائج إلى أنه يمكن استخدام A. canescens لزراعة C.

4. مناقشة

في السابق ، كان يعتبر C. ومع ذلك ، في هذه الدراسة ، باستخدام تقنيات التحديد المورفولوجي والجزيئي ، أوضحنا أن بكتيريا المطثية الحلزونية يمكنها أيضًا تطفل أ. على الرغم من أن H.modendron و A. canescens و H. persicum تنتمي جميعها إلى عائلة Chenopodiaceae ، فمن المثير للاهتمام والغريب أن C. يُظهر A. canescens ، التي نشأت في الولايات المتحدة الأمريكية ، مقاومة قوية للاضطرابات البيئية ولها كتلة حيوية كبيرة نسبيًا. يعتبر A. canescens مضيفًا قابلاً للتطبيق لـ C. أولاً ، يمكنها البقاء على قيد الحياة في مجموعة واسعة من الظروف البيئية. ثانيًا ، قد تكون الكتلة الحيوية ومعدل نمو C. ثالثًا ، نظرًا للمجموعة الواسعة من القدرة على التكيف مع A. canescens ، يمكن توسيع منطقة الزراعة بشكل أكبر. وبالتالي ، فإن A. canescens لها مزايا مميزة على H. amodendron باعتبارها المضيف وستساعد في الإنتاج الصناعي لـ C. من الصعب التمييز بين C. Deserticola و C. salsa ، وقد أدى التحديد المورفولوجي في الماضي إلى نتائج مربكة. مع التقدم في مجال البيولوجيا الجزيئية ، تم استخدام تقنيات تحديد الجزيئات على نطاق واسع في طب الأعشاب الصيني. نظرًا لأن معظم الأدوية العشبية الصينية تقدم القليل من المعلومات الجينومية ، فقد ظهرت تقنية تشفير الحمض النووي الشريطي كأسلوب لتحديد الهوية. في هذه الدراسة ، تم تطبيق تقنية الترميز المورفولوجي و DNA barcoding بشكل شامل لتحديد أنواع Cistanche غير المعروفة. لم يتم محاولة ذلك من قبل ، وتظهر نتائجنا أن هذا النهج ممكن. نظرًا لأن C. وفقًا لنتائجنا ، كان تركيز المكونات النشطة أعلى في C. وهكذا ، وضعت نتائجنا أساسًا نظريًا متينًا للإنتاج الواسع النطاق لفطر C.

5. الاستنتاجات

لفترة طويلة ، تم اعتبار C. في السابق ، وجد أن بذور C. باستخدام طرق التحديد المورفولوجي والجزيئي ، تأكدنا من أن أنواع Cistanche التي تتطفل على A. canescens كانت C. تم تأكيد هذه النتيجة بشكل أكبر من خلال تجربة التلقيح. لقد حددنا تركيز المكونات الطبية المهمة ، وتشير نتائجنا إلى أن تركيز وجودة المكونات كانا أكبر في C ، حيث تم تطفل الجرجير على A. canescens مقارنةً بالتطفل على H. amodendron. يمكن أن يؤدي اكتشاف عوائل جديدة إلى تعزيز الإنتاج الصناعي لـ C.

الإعلانات

بيان مساهمة المؤلف

فانغمينغ وانغ: تصور وصمم التجارب ؛ أجرى التجارب ؛ تحليل البيانات وتفسيرها ؛ كتب الورقة.

Bingyu Zhuo و Yuan Zhang و Qingliang Chen و Ziyi Shi و Yuelin Song: أجروا التجارب.

Shuai Wang & Jin Lou: الكواشف أو المواد أو أدوات التحليل أو البيانات المساهمة.

Pengfei Tu: تصور وصمم التجارب.

بيان التمويل

تم دعم Fangming Wang من قبل البرنامج الوطني للبحث والتطوير في الصين (2019YFC1710903).

تم دعم الدكتور Pengfei Tu من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (8177140819).

بيانات توفر البيانات

سيتم توفير البيانات عند الطلب.

بيان إعلان المصالح

الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح.

مراجع

[1] DY Tan، QS Guo، CL Wang، Study on the status quo of Cistanche deserticola واستغلالها واستخدامها في الصين، For. ريسور. ماناج. 33 (2004) 29-32. [2] XY Qiao ، HL Wang ، YH Guo ، دراسة حول ظروف إنبات بذور Cistanche ، Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 32 (2007) 1848-1850.

[3] PF Tu ، YP He ، ZC Lou ، دراسة استقصائية عن أصل وحماية الموارد لسيستانش ، تشين. التقليد. عشب. المخدرات 25 (1994) 205-208.

[4] LD Karalliedde ، CT Kappagoda ، تحدي الأدوية الصينية التقليدية لممارسي الطب الوباثي ، Am. J. Physiol. سيرك القلب. فيسيول. 297 (2009) 1967-1969.

[5] Y. Jiang ، PF Tu ، تحليل المكونات الكيميائية في أنواع Cistanche ، J. Chromatogr. 1216 (2009) 1970-1979.

[6] T. وانغ ، XY Zhang ، WY Xie ، Cistanche deserticola YC Ma ، "الجينسنغ الصحراوي": مراجعة ، Am. J. تشين. ميد. 40 (2012) 1123-1141.

[7] دستور الأدوية NCOC ، دستور الأدوية لجمهورية الصين الشعبية ، The Chemical Industry Press ، بكين ، 2020.

[8] GX Meng ، XS Cui ، Y. Wu ، YH Guo ، تأثيرات Leveillula saxaouli على النمو ، الكلوروفيل ، والكربوهيدرات في Haloxylon amodendron ، الشمال. هورتيك. 14 (2012) 141-143.

[9] YC Chen ، M. Li ، MZ Wu ، YX Song ، تركيب وتكوين الجذور في نوعين من Haloxylon Bunge ، Plant Physiol. 49 (2013) 1273-1276.

[10] PF Tu، Y. Jiang، YH Guo، YZ Tian، et al.، تطوير الصناعة البيئية لـ Cistanches herba لتعزيز الحضارة البيئية لمنطقة الصحراء الغربية ، Mod. ذقن. ميد. 4 (2015) 297-301.

[11] إس سي ساندرسون ، إتش سي ستوتز ، أعداد كروموسوم عالية في صحراء موجافيان وسونوران أتريبليكس canescens (Chenopodiaceae) ، Am. جيه بوت. 81 (1994) 1045-1053.

[12] JL Peterson، DN Ueckert، RL Potter، JE Huston، Ecotypic variation في مجموعة مختارة من مجموعات شجيرة الملح ذات الأجنحة الأربعة في غرب تكساس ، J. Range Manag. 40 (1987) 361-366.

[13] DS Kong ، الخصائص المورفولوجية والتكيف البيئي الفسيولوجي لأتريبليكس ، مراجعة ، تشين. J. Ecol. 32 (2013) 210-216.

[14] م. بشير ، فايزة ، إس إس أو محمد ، و. ألينا ، مراجعة: بصمات الحمض النووي الشريطية والكروماتوجرافي للمصادقة على النباتات في المنتجات الطبية العشبية. دليل. المتممة القائمة ، البديل. ميد. 2017 (2017) 1–28.

[15] XW Li، Y. Yang، et al.، ترميز الحمض النووي للنبات: من الجين إلى الجينوم ، بيول. القس 90 (2015) 157–166.

[16] SL Chen ، H. Yao ، JP Han ، et al. ، التحقق من صحة منطقة ITS2 كرمز شريطي جديد للحمض النووي لتحديد أنواع النباتات الطبية ، PloS One 5 (2010) ، e 8613.

[17] K. Luo ، SL Chen ، KL Chen ، وآخرون ، تقييم الباركود DNA للنبات المرشح باستخدام عائلة Rutaceae ، Sci. علوم الحياة في الصين. 53 (2010) 701-708.

[18] T. Gao، H. Yao، JY Song، et al.، تحديد النباتات الطبية في الأسرة البقولية باستخدام الباركود المحتمل للحمض النووي ITS2، J. Ethnopharmacol. 130 (2010) 116-121.

[19] T. Gao ، H. Yao ، JY Song ، et al. ، تقييم جدوى استخدام الرموز الشريطية للحمض النووي المرشح في تمييز الأنواع من عائلة Asteraceae الكبيرة ، BMC Evol. بيول. 10 (2010) 324.

[20] XH Pang، JY Song، YJ Zhu، et al.، استخدام الترميز الشريطي للحمض النووي لتحديد الأنواع داخل Euphorbiaceae، Planta Med. 76 (2010) 1784-1786.

[21] XH Pang، JY Song، YJ Zhu، et al.، تطبيق الباركود DNA للنبات لتحديد أنواع Rosaceae، Cladistics 27 (2011) 165-170.

[22] PD Hebert، EH Penton، JM Burns، DH Janzen، W. Hallwachs، عشرة أنواع في واحد: تشفير الحمض النووي الشريطي يكشف عن الأنواع المشفرة في فراشة القبطان الاستوائية الجديدة Astraptes fulguration، Proc. ناتل. أكاد. علوم. USA 101 (2004) 14812–14817.

[23] إم دبليو تشيس ، آر إس كوان ، وآخرون ، اقتراح لبروتوكول موحد للباركود لجميع نباتات الأرض ، تاكسون 56 (2007) 295-299.

[24] WJ Kress ، DL Erickson ، رمز شريطي DNA عالمي ثنائي الموقع للنباتات البرية: يكمل الجين rbcL المشفر منطقة المباعد trnH-psbA غير المشفرة ، PloS One 2 (2007) e508.

[25] DL Erickson، J. Spouge، A. Resch، et al.، DNA barcoding in Land plants: تطوير معايير لتقدير أقصى قدر من النجاح ، Taxon 57 (2008) 1304–1316. [26] إن سي كين ، كيو كرونك ، علم النبات بلا حدود: التركيز على الترميز الشريطي ، مول. ايكول. 17 (2008) 5175-5176.

[27] R. Lahaye، M. van der Bank، D. Bogarin، et al.، DNA barcoding the floras of hotspots hotspots، Proc. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 105 (2008) 2923-2928.

[28] N. Kane، S. Sveinsson، H. Dempewolf، et al.، Ultra-barcoding in cacao (Theobroma spp.؛ Malvaceae) باستخدام جينومات البلاستيدات الخضراء الكاملة والحمض النووي الريبوزومي النووي ، Am. جيه بوت. 99 (2012) 320-329.

[29] JD Thompson، TJ Gibson، F. Plewniak، F. Jeanmougin، DG Higgins، The CLUSTAL _ واجهة windows: إستراتيجيات مرنة لمحاذاة التسلسل المتعدد بمساعدة أدوات تحليل الجودة ، Nucleic Acids Res. 25 (1997) 4876-4882.

[30] TA Hall، BioEdit: محرر وتحليل لمحاذاة التسلسل البيولوجي سهل الاستخدام لنظام windows 95/98 / NT، Nucl. سيمب الأحماض. سر. 41 (1999) 95-98. [31] S. Kumar ، M. Nei ، J. Dudley ، K. Tamura ، MEGA: برنامج محوره عالم الأحياء للتحليل التطوري لتسلسل الحمض النووي والبروتين ، موجز. بيوينفورم. 9 (2008) 299-306.

[32] PF Tu، B. Wang، T. Deyama، ZG Zhang، ZC Lou، Analysis of phenylethanoid glycosides of Herba cistanche بواسطة RP-HPLC، Acta Pharm. سينيكا. 32 (1997) 294-300.