ثنائي هيدروفلافونات البنزيلات وأشباه القلويات المشتقة من الإيزوكينولين من لحاء Diclinanona Calycina (Annonaceae) وسميتها الخلوية

للمزيد من المعلومات الرجاء الاتصالtina.xiang@wecistanche.com

الملخصDiclinanona calycina RE فرايز المعروف شعبيا باسم "enviro" ، هو نوع من عائلة Annonaceae المتوطنة في البرازيل. في بحثنا المستمر عن المركبات النشطة بيولوجيًا من نباتات الأمازون القشرية ، تم فحص لحاء D. calycina بواسطة تقنيات كروماتوغرافيا كلاسيكية أسفرت عن ثلاثة عشر مركبًا (قلويدات وفلافونويد) موصوفة لأول مرة في D. calycina وكذلك في جنس Diclinanona. تم إنشاء هيكل هذه المركبات المعزولة من خلال تحليل شامل باستخدام التحليل الطيفي 1D / 2D-NMR بالاشتراك مع MS. تم تحديد القلويات المعزولة على أنها تنتمي إلى الفئات الفرعية: isoquinoline بسيط ، thali على الإنترنت (1) ؛ أبورفين ، أنونين (2) ؛ أوكسوبورفين ، ليريودنين (3) ؛ benzyltetrahydroisoquinolines ، (S) - (plus) -reticuline (4) ؛ dehydro-oxonorreticuline (3، 4- dihydro -7- hydroxy -6- methoxy -1- isoquinolinyl) (3- hydroxy -4- methoxyphenyl) -methanone) (5 ) ؛ (زائد) -1 S، 2R-reticuline Ng-oxide (6) ؛ و (زائد) -1 S، 2S-reticuline N -oxide (7)؛ tetrahydro protoberberine، coreximine (8)؛ و Pavine ، bisnorargemonine (9). بينما المركبات الفلافونويدتنتمي إلى benzylatedديهيدروفلافونو isorhamnetin (10) و dichamanetin (11) ومزيج من uvarinol (12) و isouvarinol (13). تم وصف المركب 5 لأول مرة في الأدبيات كمنتج طبيعي. تم تقييم النشاط السام للخلايا للمركبات المعزولة الرئيسية ضد سلالات الخلايا السرطانية وغير السرطانية. من بين المركبات التي تم اختبارها ، تم العثور على النتائج الواعدة بالنسبة للديشامانيتين ثنائي هيدروفلافون البنزيل (10) ، ومزيج أوفارينول (12) وإيزوفارينول (13) ، والذي أظهر نشاطًا سامًا معتدلًا للخلايا ضد المركب المختبَر.الخلايا السرطانيةخطوط(<20.0 ug·ml-)="" and="" low="" cytotoxicity="" against="" the="" non-cancerous="" cell="" line="" mrc-5(="">25. 0 ug · mL-I). أظهر Dichamanetin (11) نشاطًا سامًا للخلايا ضد HL -60 و HCT116 بقيم IC50 تبلغ 15.78 ميكروغرام مل- I (33.70 umol·LI) و 18.99 ميكروغرام مل- 40.56 ميكرومول. L-） ، على التوالي ، بينما أظهر خليط uvarinol （12 و isouvarinol (13) نشاطًا سامًا للخلايا ضد HL -60 ، بقيمة IC5 تبلغ 9.74 ugs.mL -1 ، و HCT116 ، مع IC50 بقيمة 17.31 ميكروغرام. مل- أنا. يمكن أن تعزى هذه الأنشطة السامة للخلايا إلى وجود مجموعة أو أكثر من مجموعات هيدروكسي بنزيل الموجودة في هذه الجزيئات بالإضافة إلى الموضع الذي ترتبط فيه هذه المجموعات. تم تحديد الأنشطة السامة للخلايا لشبكية ، أنونين ، وليريودنين سابقًا ، مع كون ليريودنين هو المركب الأكثر فاعلية.

الكلمات الدالة: Diclinanona calycina ؛ قلويدات وثنائي هيدروفلافونات البنزيلات ؛ النشاط السام للخلايا

انقر لمعرفة المزيد عن المنتجات

1 المقدمة

Annonaceae هي عائلة كبيرة من الأشجار والشجيرات الاستوائية وشبه الاستوائية ، وتضم حوالي 112 جنسًا و 2440 نوعًا [1]. العديد من الأنواع معروفة بثمارها الصالحة للأكل وخصائصها الطبية] 2]. أدى البحث الكيميائي النباتي السابق مع بعض أنواع القشطة إلى عزل وتوصيف فئات مختلفة من المستقلبات الثانوية ، مثل monoterpenes ، diterpenes ، triterpenes ، lignans ،مركبات الفلافونويد، فينيل بروبانويدات مشتقة من الأسارون ، أسيتوجينين ، وقلويدات نموذجية مشتقة من الأيزوكينولين [3-7]. أظهرت بعض هذه المستقلبات الثانوية المعزولة من أنواع Annonaceae أنشطة بيولوجية مهمة ، مثل الخصائص المضادة للالتهابات وتثبيط اليورياز [8،9] ، مبيد المثقبيات [10،11] ، مبيد الليشمانيات [11،12] ، مضاد للملاريا [4،13] ، مضادات الميكروبات [4،14،15] ، مضادات الأكسدة ومضادات الروماتيزم [9،15] وعلى وجه الخصوص النشاط السام للخلايا ضد سلالات الخلايا السرطانية البشرية المختلفة [4،6،11 ، 16-21].

على الرغم من أن عائلة Annonaceae تعتبر عائلة بدائية ومدروسة جيدًا ، إلا أنه تم إجراء القليل من الدراسات الكيميائية النباتية و / أو الدوائية مع أنواعها [3]. ركزت الدراسات الكيميائية النباتية و / أو الدوائية بشكل أساسي على أنواع من أجناس Annona و Asimina و Cananga ، نظرًا لأهميتها الاقتصادية الكبيرة ، وعلى بعض الأنواع من أجناس Duguetia و Guatteria و Xylopia [5]. على الرغم من النمو الكبير في العشرين عامًا الماضية فيما يتعلق بالدراسات الكيميائية النباتية والدوائية ، لا يزال عدد الأنواع التي تم فحصها صغيرًا جدًا بالنسبة لعدد كبير من الأنواع المعترف بها. حاليًا ، وفقًا لقواعد البيانات العلمية Web of Science و Scopus و SciFinder ، فإن حوالي 15 بالمائة فقط من أنواع Annonaceae الموصوفة لديها أي دراسة كيميائية نباتية و / أو دوائية مقابلة.

من بين الأنواع التي تمت دراستها قليلاً تلك التي تنتمي إلى جنس Diclinanona Diels. ينتمي هذا الجنس إلى قبيلة Annoneae ، من الفصيلة الفرعية Annonoideae ، ويوجد فقط في أمريكا الجنوبية الاستوائية (بشكل رئيسي في منطقة الأمازون). إنه جنس يتكون من ثلاثة أنواع فقط ، Diclinanona calycina (Diels) RE Fries Diclinanona matogrossensis Maas و Diclinanona tessmannii Diels ، والتي تحدث كأشجار [22-24]. D.calycina (مرادف Xulopia calycina Diels) هو 8 إلى شجرة يبلغ ارتفاعها 30 متراً ، تُعرف شعبياً باسم "إنفيريرا" و "إنفيرو" ، منتشرة في جميع أنحاء حوض الأمازون في البرازيل ، والبيرو ، وفنزويلا [23]. يشبه D.calycina ظاهريًا Xylopia بسبب أزهاره ذات البتلات المستطيلة والضيقة ، ولكنه يختلف في أحاديه الأحادية الخشبية ، وغير السائلة ، والكروي ، والسميكة الجدران [23،24].

تشير الدراسات السابقة مع D. calycina إلى الدراسات الدوائية فقط. تصف الدراسة الأولى التحقيق في النشاط المضاد للميكروبات للمستخلصات الميثانية والكلوروفورم والمائية ضد الكائنات الحية الدقيقة المتفطرة اللطيفة والإشريكية القولونية والمكورات العقدية sanguis و Streptococcus oralis و Staphylococcus aureus و Candida albicans باستخدام طريقة الانتشار الهلامي [25]. يشير التقرير الثاني إلى التحقيق في النشاط المضاد للميكروبات للعضوية (ثنائي كلورو ميثان: ميثانول 1: 1) والمستخلصات المائية ضد الكائنات الحية الدقيقة Enterococcus faecalis باستخدام مقايسة مرق التخفيف الدقيق (MDBA) ومقايسة انتشار القرص (DDA) [26]. وبالتالي ، في بحثنا المستمر عن منتجات طبيعية نشطة بيولوجيًا جديدة من Annonaceae من غابات الأمازون المطيرة ، تهدف هذه الدراسة إلى التحقيق في الخصائص الكيميائية النباتية والدوائية لحاء D.calycina. في هذا التقرير ، ثلاثة عشر مركبًا (تسعة قلويدات وأربعة بنزيلاتديهيدروفلافون) تم عزلها وتحديدها لأول مرة في D.calycina ، وكذلك في جنس Diclinanona. بالإضافة إلى ذلك ، تم فحص السمية الخلوية للمركبات الرئيسية ضد B 16- F10 و HepG2 و K562 و HL {{ 4}} خطوط الخلايا السرطانية باستخدام مقايسة الامار الزرقاء.

2. النتائج والمناقشة

2.1. التوضيح البنيوي للمركبات

بعد اكتشاف وجود مركبات تحتوي على النيتروجين في المستخلص الميثانولي باستخدام كاشف Dragendorff ، تم إخضاعه للعلاج الحمضي القاعدي وفقًا لمنهجية Costa et al. [12] ينتج عنه كسور قلويد ومحايدة. لوحظ وجود تركيز عالٍ من المركبات المحتوية على النيتروجين في الجزء القلوي الذي خضع للتحليل الكروماتوجرافي. أدت عمليات الفصل الكروماتوغرافية المتتالية ، كما هو موضح في قسم الاستخراج والعزل ، إلى عزل وتحديد ثلاثة عشر مكونًا كيميائيًا (1-13 ، الشكل 1) ، وتسعة قلويدات مشتقة من الأيزوكينولين 1-9 ، وأربعة مركبات ثنائي هيدروفلافونات البنزيل. 10-13. تم إنشاء هياكل هذه المركبات المعزولة (الشكل 1) من خلال تحليل مكثف باستخدام التحليل الطيفي 1D و 2D NMR بالاشتراك مع MS (البيانات التكميلية) ، وكذلك المقارنة مع البيانات من الأدبيات.

تم الحصول على المركب 5 كمسحوق بني غير متبلور وتم اختباره إيجابيًا لكاشف Dragendorff. أظهر جزيء بروتوني عند m / z328 [M plus H] 'في LR-ESI (زائد) MS متوافق مع الصيغة الجزيئية C18H1NO5. كانت أطياف 'H و 13 C-NMR من 5 (الجدول 1) متوافقة مع أطياف شبكية (4) [27 ، باستثناء عدم وجود مجموعة الميثيل المرتبطة بالنيتروجين (CH 3- N) وإشارة مجموعة الميثين في الموضع 1 ، والتي تم استبدالها بإشارة عند c 165.1 في طيف 13C-NMR النموذجي لمجموعة imine المرتبطة بمجموعة كربونيل في 192.8 قبل الميلاد. في طيف "H-NMR ، ثلاثة هيدروجين لأسفل عند H 6.88 （1H ، d ، J =8. 4 هرتز ، H -5 '） ، 5H7.57 （1H ، d ، J {{33} }. 0 Hz، H -2 '） و δH 7.6 0 （1H، dd، J =8. 4 و 2.0 هرتز ، H -6'） ، عن وجود نظام اقتران ABX. أشارت إشارتان مفردتان عند 6H 6.90 (1H ، s ، H -8) و 6.71 (1H ، s ، H -5) إلى وجود حلقة فينيل رباعية الاستبدال 5-. بالإضافة إلى ذلك ، أظهر طيف H-NMR 5 أيضًا إشارات لمجموعتين من methoxy يتردد صداها عند 3.93 bH (3H ، s) و 6 H 3.95 （3H ، s） ، وإشارات لمجموعتين من الميثيلين يتردد صداها عند δμ 2.79 （2H ، t ، J =7. 8 هرتز） و 6 H 3.89 (2H ، t ، / =7. 8 هرتز) ، منسوب إلى H -4 و H -3 ، على التوالي (الجدول 1) . أشارت هذه البيانات إلى أن القلويد 5 له هيكل عظمي بنزيل تتراهيدروأيزوكينولين [28-30].

تم إنشاء هذه المجموعات على أساس خريطة الارتباط الثنائي والثلاثي -13 من تجربة HMBC-NMR (الشكل 2 والجدول 1). أظهر هذا التحليل أن الهيدروجين عند δH 3.89 （H -3） أظهر ارتباطًا ثلاثي النطاق 'H {9}} C مع الكربون عند 6c13 0. 1 4a） و 165. { {42}} （C -1） ورابطتين lH -13 C مع الكربون atδc 25.4 (C -4) ، مما يؤكد وجود مجموعة imine في الجزيء. من ناحية أخرى ، أظهرت الإشارات عند δH 7.57 （H -2 '） و δH 7.60 （H -6' ارتباطًا ثلاثي الروابط lH -13 C مع الكربون عند δc 124.3 （ C -6 '） ، 5c 151،4 C -4'） و δc192.8 （C -7） ، و 5 c116.0 （C -2 '） ، 6c 151.4 (C -4 ') و c 192.8 (C -7') ، على التوالي ، لإنشاء مجموعة carbonyl في الجزيء (الشكل 2 والجدول 1). لذلك ، بناءً على بيانات NMR هذه ، مركب 5

تم تأسيسها على أنها بنزيل تيتراهيدرو أيزوكينولين قلويد 34- ثنائي هيدرو -7- هيدروكسي -6- ميثوكسي -1- إيزوكوينولينيل) (3- هيدروكسي -4- ميثوكسيفينيل)-ميثانون ، والذي كان يسمى ديهيدرو-أوكسونوريتيكولين. تم وصف هذا القلويد لأول مرة في الأدبيات كمنتج طبيعي. تم وصف سجله الأول والوحيد من قبل Dörnyei et al. في عام 1982 31 كمنتج من أصل اصطناعي. يتم وصف بيانات H-NMR فقط مع بعض التعددية غير المحددة. وهكذا ، تم إنشاء التخصيصات الكاملة لجميع التحولات الكيميائية 1H- و 13 C-NMR بواسطة رابطة واحدة (HSOC) واثنتين وثلاثية (HMBC) 'H {17}} تجارب الارتباط C-NMR ، وتم وصفها في الجدول 1.

تم تحديد المركبات 6 و 7 على أنها قلويدات benzyltetrahydroisoquinoline (زائد) -1 S ، 2R-reticuline-N -oxide ، و (زائد) -1 S ، 2S-reticuline-N -oxide ، على التوالي. تمت مقارنة بيانات H-NMR لهذه القلويات مع البيانات التي وصفها Lee et al. [28] باستخدام نفس المذيب منزوع الأكسجين (CD3OD) ولوحظ بعض التناقضات (الجدول 1) ، خاصة فيما يتعلق بـ H -1 و H -8 و H و C-NO. لا توجد بيانات 13C-NMR موصوفة لهذه القلويات في الأدبيات. استنادًا إلى البيانات المحدودة 1H- و 13 C-NMR ، بالإضافة إلى أوجه الغموض التي لوحظت لهذه الجزيئات ، تم إجراء تجارب H و 13 C 1D و 2 D NMR لتحديد تعييناتها الصحيحة وتعددها.

تم تحديد الموضع الصحيح للهيدروجين H {0} و H -1 لكلا الأيزومرين 6 و 7 بناءً على خريطة ارتباط H -13 C ثلاثية الروابط من HMBC تجربة -NMR （Figure2. بالنسبة للأيزومر 6 ، أظهر التحليل أن الهيدروجين عند δH 5.78 （H -8 أظهر ارتباط ثلاثي الروابط 'H -13 C مع الكربون عند 6c 79.8 （C -1） ، 120 .6 （4a） و δc 149.4 （C -6） ، بينما أظهر الهيدروجين عند δH 4،13 （H -1 ارتباط ثلاثي الروابط H -13 C مع الكربون في 60.7 درجة مئوية -3） ، 6 ج 115.7 درجة مئوية -8） ، δc 120.6 درجة مئوية -4 أ） ، 131.2 درجة مئوية -1 '） ، وبالتالي إنشاء المواضع الصحيحة للهيدروجين H -8 و H -1 للأيزومر 6. يمكن تأكيد هذا الإسناد بشكل أكبر من خلال تحليل الهيدروجين عند δH 6.76 （H -5） الذي أظهر رابطة ثلاثية H -13 ارتباط C مع الكربون atδc 27.0 C -4） و δc 127.1 （C -8 a） و δc 145.7 （C -7） （Figure2）. بالنسبة إلى الأيزومر 7 ، كشف التحليل أن الهيدروجين عند δH 6.30 （H -8 أظهر ارتباطًا ثلاثي الأبعاد 'H -13 C مع الكربون عند δc 79.4 （C -1） ، c 122.8 （ 4a） و δc 148.9 （C -6） ، بينما أظهر الهيدروجين عند δH 4.46 （H -1 ارتباطات ثلاثية الروابط H -13 C مع الكربون عند δc 62.9 C { {82}}）، 5c 115.5 （C -8）، bc 122.8 （C -4 a）، 131.4 （C -1 '） ، وبالتالي تحديد المواضع الصحيحة للهيدروجين H -8 و H -1 للأيزومر 7. تم تأكيد هذا الإسناد أيضًا من خلال تحليل الهيدروجين عند δH 6.71 （H -5） الذي أظهر lH ثلاثي الروابط -13 C الارتباطات مع الكربون عند δc26.3 C -4） و δc 126.9 （C -8 a） و 6 c 146.1 （C -7） (الشكل 2). تم إجراء تجربة NOESY أيضًا لتأسيس الكيمياء الفراغية الصحيحة للأيزومرين 6 و 7. في هذه التجربة ، أشار الارتباط القوي لـ NOE لـ H -1 （δH 4.13） و H ، CN (5 3. 15) إلى -توجيه الأكسجين في الأيزومير 6. من ناحية أخرى ، لا توجد علاقة NOE واضحة بين H -1 (6H 4.46) و HAC-N (5H 3.20) في تجربة 2D-NOESY لمدة 7 ، يشير إلى اتجاه الأكسجين في الأيزومر 7 (الشكل 2). لوحظت هذه الاختلافات الصغيرة في التحولات الكيميائية لهذه الأيزومرات بشكل واضح بسبب الكيمياء الفراغية للنيتروجين المتأثرة بمواقف الأكسجين. تدعم مقارنات بيانات 'H-و 13 C-NMR التي تم الحصول عليها للمركبات 6 و 7 مع بيانات الجزيئات ذات الهياكل القريبة مثل هيكسابتالين A و hexapetaline B [30] البيانات الموضحة في الجدول 1 دون غموض.

تم تحديد المركبات 1-4 و 8-13 على أنها thalifoline (1) [32] ، و anonaine (2) [33] liriodenine (3) [10،34] ، (S) - (plus) -reticuline ( 4) [27] ، كوركسيمين (8) [34،35] ، بيسنورارجيمونين (9) [36] ، إيزوشامانيتين (10) [37] ، ديشامانيتين (11) [37] ومزيج من يوفارينول (12) وإيزوفارينول (13) [37] بناءً على ملامحهم الطيفية والمقارنة مع القيم في الأدبيات. أطياف lH-و 13 C 1D و 2 D-NMR ، بالإضافة إلى أطياف الكتلة لجميع المركبات المعزولة ، متاحة كمواد تكميلية.

من وجهة نظر chemophenetic (مصطلح جديد للنظم الكيميائية النباتية / علم النبات الكيميائي) ، من المهم ملاحظة أن وجود مركبات الفلافانون C-benzylated و C-benzylated dihydrochalcones هي نوع خاص من مركبات الفلافونويد المشتقة من الفلافانون الشهير بينوسيمبرين وقد تم وصفها بشكل خاص في أنواع جنس Uoaria التي تنتمي إلى عائلة Annonaceae [3 ، 38-42]. يشير وجود هذه المركبات في D. calycina إلى علاقات كيميائية كيميائية وثيقة مع Uoaria من ناحية أخرى ، يجب إجراء مزيد من التحقيقات مع أجزاء أخرى من النبات ، وكذلك الأنواع الأخرى من Diclinanona لتأكيد هذه العلاقة الكيميائية. تنتشر الفلافانونات والكالكون في النباتات العليا ، ولكن إضافة مجموعات البنزيل نادرة جدًا ويبدو أنها محدودة في القواقع إلى جنس Uoaria [3 ، 39-42] والآن إلى جنس Diclinanona. من المفترض أن مجموعات البنزيل تنشأ من مسار مسار C 6- C1 ، لكن وظيفة o-hydroxy غير معتادة. يمكن ربط عدم وجود بدائل في الحلقة B في كل مركبات الفلافونويد من Uoaria و Diclinanona بالملاحظة السابقة المتعلقة بمركبات الفلافونويد في Popowia cauliflora [38].

تم بالفعل تسجيل القلويات المشتقة من isoquinoline المعزولة والموصوفة في هذا العمل في عدة أنواع من Annonaceae في أجناس مختلفة. بعض هذه العلامات ، مثل liriodenine و anonaine ، تعتبر علامات كيميائية ، ووجود هذه القلويات في D. 33-35 ، 43].

من الجدير بالذكر أنه وفقًا لزيدورن [44] ، تُعرَّف الدراسات الكيميائية الوراثية على أنها دراسات تهدف إلى وصف مجموعة من المستقلبات الثانوية المتخصصة في تصنيف معين ، كما لوحظ بالفعل في العديد من الأعمال المنشورة [5-7 ، 15،20 ، 27 ، 33-35 ، 43-46]. وهكذا ، تساهم الدراسات الكيميائية الوراثية في الوصف الظاهري للتصنيف ، على غرار الأساليب التشريحية والصرفية والكرارية ، والتي تم الاعتراف بالفعل بأنها ذات أهمية كبيرة لإنشاء أنظمة "طبيعية" ، والتي لا تزال ذات أهمية قصوى بالنسبة إلى وصف الكائنات المصنفة بمساعدة الطرق الجزيئية الحديثة [44].

2.2. الفحص السام للخلايا

تم تقييم النشاط السام للخلايا في المختبر للمركبات المعزولة (الجدول 2) ، باستثناء المركبات 2 و 3،5 و 8 (نظرًا لانخفاض محصولها) ، مقابلالخلايا السرطانيةخطوط HL -60 (ابيضاض الدم النخاعي البشري) ، و MCF -7 (سرطان الثدي البشري) ، و HepG2 (سرطان الخلايا الكبدية البشرية) ، و HCT116 (سرطان القولون البشري) ، وخط الخلايا غير السرطانية MRC {{5} } (الخلايا الليفية للرئة البشرية) باستخدام مقايسة ألامار الزرقاء بعد 72 ساعة من الحضانة.

Among the compounds evaluated (Table2), the most promising results were verified for benzylated dihydroflavones dichamanetin (10), and the mixture of uvarinol (12)and isouvarinol (13), which showed moderate cytotoxic activity against the tested cancer cell lines and low cytotoxicity against the non-cancerous cell line MRC-5(>25. 0 ug.mL -1). أظهر Dichamanetin (11) نشاطًا سامًا للخلايا ضد HL -60 و HCT116 بقيم IC5 0 البالغة 15.78 ميكروغرام · مل -1 33.7 0 μmol·L -1） و 18.99 ميكروغرام مل -1 40.56 ميكرولتر -1） ، على التوالي. أظهر خليط uvarinol (12) و isouvarinol (13) نشاطًا سامًا للخلايا ضد HL -60 ، بقيمة ICs0 9.74ug∶mL -1 ، و HCT116 ، بقيمة ICs0 17.31 ug∶mL { {30}}. من بين ثنائي هيدروفلافونات البنزيل ، أظهر فقط isorhamnetin (10) نشاطًا سامًا للخلايا ضد HepG2 بقيمة IC50 تبلغ 19.79 ميكروغرام: مل -1 (54.65 umol.L -1). وفقًا للأدبيات ، فإن ثنائي هيدروفلافونات البنزيلات موصوفة بخصائص سامة للخلايا [39-42]. من بين أولئك الموصوفين في هذا العمل ، إيزورهامنتين (10) وديشامانيتين (11) وأوفارينول (12) موصوفون ضمن الخصائص السامة للخلايا ضد خطوط الخلايا السرطانية البشرية لسرطان البلعوم الأنفي (KB) وسرطان الدم اللمفاوي P -388 (PS) بقيم IC50 5.3 و 4.1.4.8 و 1.8 و 5.9 و 9.7 ، ug.mL -1 على التوالي [39،40]. يمكن أن تُعزى هذه الأنشطة المختلفة إلى وجود مجموعة أو أكثر من مجموعات هيدروكسي بنزيل الموجودة في الجزيئات بالإضافة إلى الموضع الذي ترتبط فيه هذه المجموعات. ومع ذلك ، هناك حاجة إلى مزيد من التحقيق لتأكيد هذه الملاحظة.

تم وصف النشاط السام للخلايا في المختبر للقلويدات anonaine المشتقة من isoquinoline (2) و liri-adenine (3) و (S) - (plus) -reticuline (4) مؤخرًا بواسطة Menezes et al. [2 {{16) }}] ، سوزا وآخرون. [6] وكوستا وآخرون. [43] مع التركيز على liriodenine ، والذي أظهر نشاطًا قويًا سامًا للخلايا ضد سلالات الخلايا السرطانية B {{1 {18}}} F1 0 (سرطان الجلد في الفئران) ، HepG2 (سرطان الخلايا الكبدية البشرية) ، HL {{13 }}. ، و K562 بقيم IC50 منخفضة من 19.0 ميكرولتر -1 [20]. (S) - (زائد) - أظهر الريتيولين نشاطًا معتدلًا فقط ضد HepG2 بقيم IC50 البالغة 15.35 ميكرولتر لتر -1 【 6،20.

3. المواد والطرق

3.1. الإجراءات التجريبية العامة

تم تسجيل الدوران البصري في الميثانول (MeOH) باستخدام مقياس قطبي P {0} (Jasco ، طوكيو ، اليابان) عند 589 نانومتر. تم الحصول على تجارب 1D و 2 D NMR في CDCl. (كلوروفورم د) أو CDCl بالإضافة إلى قطرة من قرص مضغوط ، OD (ميثانول-دو ، قرص مضغوط ، COCD3 (أسيتون-د 6) عند 298 كلفن على مطياف AVANCE I HD NMR (بروكر ، بيليريكا ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية) يعمل عند 11.75 ت. (العقرب 13C عند 5 00 و 125 ميجاهرتز ، على التوالي) وعلى مطياف NMR من Bruker AVANCE I 6 0 0 يعمل عند 14.1 تسلا ('H and13Cat 6 0 { {63}} و 15 0 ميغا هرتز على التوالي). يتم تقديم جميع التحولات الكيميائية lH- و 13 C-NMR （δ） في جزء في المليون بالنسبة لإشارة tetramethylsilane عند 0. 00 جزء في المليون كمرجع داخلي ، و ثوابت اقتران (D) معطاة بالهرتز. تم تجهيز مطياف الرنين المغناطيسي النووي بمسبار كشف عكسي متعدد النوى 5- مم (تجارب 1D و 2 D NMR) مع تدرج z. رابطة واحدة (HSQC) واثنان و تم تحسين تجارب الارتباط ثلاثي السندات (HMBC) 1H -13 C-NMR لمتوسط ​​اقتران ثابت 'JcH و LRJ (cH من 140 و 8 هرتز ، على التوالي. لتحليل قياس الطيف الكتلي منخفض الدقة (LC-MS) تم إعادة تعليق عينات من المركبات المعزولة في الميثانول (درجة HPLC) ، مما أدى إلى تكوين الكتلة محاليل ك (1 مجم · مل -1). تم تخفيف قسامات (5 ميكرولتر) من محاليل المخزون إلى 5 ميكروغرام - مل وتحليلها عن طريق التسريب المباشر في مطياف الكتلة رباعي الأقطاب ، نموذج TSO Quantum Access (Thermo Scientific ، سان خوسيه ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، مجهزًا بالتأين بالرش الكهربائي (ESI) أو مصادر التأين الكيميائي للضغط الجوي (APCI). شروط ESI-MS: جهد الرش ، 5 كيلو فولت ؛ غاز الغمد ، 10 وحدات عشوائية (ARB) ؛ غاز مساعد ، 5arb ؛ غاز الكسح ، 0arb ؛ درجة حرارة الشعيرات الدموية ، 250 درجة ؛ الجهد الشعري ، 40 فولت ؛ عدسة أنبوبية ، 70 فولت ؛ نطاق الكتلة ، m / z 100 إلى 1000. شروط APCI-MS: تيار التفريغ ، 5 μA ؛ درجة حرارة المرذاذ ، 350 درجة ؛ ضغط غاز الغمد ، 25 وحدة تعسفية （arb） ؛ ضغط غاز اكتساح الأيونات ، 0.0 ARB ؛ ضغط الغاز aux ، 10 أرب ؛ درجة حرارة الشعيرات الدموية ، 250 درجة مئوية ؛ إزاحة عدسة الأنبوب ، 70 فولت ؛ إزاحة الكاشطة ، 0 فولت ؛ مدى الكتلة ، m / z 100 إلى 1000. تم استخدام الأرجون كغاز تصادم ، وتم الحصول على أطياف MS / MS باستخدام طاقات تصادم تتراوح من 25 إلى 30 فولت. تم استخدام هلام السيليكا 60 (Sigma-Aldrich ، سان لويس ، MO ، الولايات المتحدة الأمريكية ، 70-230 شبكة) لكروماتوجرافيا العمود (CC) ، بينما تم استخدام هلام السيليكا 60 F254 (Macherey-Nagel ، Düren ، ألمانيا ، 0.25 مم ، الألومنيوم) تم استخدامه للتحليل والتحضير باستخدام كروماتوغرافيا رقيقة (PTLC) (Macherey-Nagel ، 1.00 مم ، زجاج). تم تصور المركبات عن طريق التعرض تحت ضوء UV254 / 365 ، عن طريق الرش بكاشف p-anisaldehyde متبوعًا بالتسخين على لوح ساخن ، وعن طريق رش كاشف Dragendorff.

3.2 المواد النباتية

في هذا التحقيق ، تم جمع المادة النباتية (لحاء) D.calycina في 27 مايو 2017 في محمية Adolpho Ducke (الإحداثيات الجغرافية: 02 درجة 53'36.1S و 59 درجة 58'28.9 "غربًا) ، ماناوس ، ولاية أمازوناس ، البرازيل ، وحددها البروفيسور الدكتور أنطونيو كارلوس ويبر ، خبير تصنيف نباتات في قسم البيولوجيا في الجامعة الفيدرالية لأمازوناس (DB / UFAM). تم إيداع عينة قسيمة رقم 10810 في معشبة DB / UFAM. تم تسجيل الوصول (العينة) في Sistema Nacional de Gestao do Patrimonio Genetico e do Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) مع السجل A70EDCD.

3.3 الاستخراج والعزلة

تم تجفيف لحاء D.calycina مبدئيًا في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة ثم تجفيفه في فرن يعمل بالهواء لمدة 48 ساعة عند درجة حرارة 40 درجة ، ثم سحق في مطحنة بأربعة سكاكين (Marconi ، Piracicaba ، SP ، البرازيل) للحصول على مادة المسحوق (1340 جم). بعد ذلك ، تم إجراء نقع شامل بالهكسان (8 × 4 لتر) متبوعًا بـ MeOH (8 × 4 لتر). تم تركيز المحاليل الاستخراجية التي تم الحصول عليها في مبخر دوار عند ضغط منخفض (40-50 درجة) لإعطاء مستخلص الهكسان (24.85 جم) و MeOH (199.43 جم) على التوالي.

أشار تحليل TLC الذي تم الكشف عنه باستخدام كاشف Dragendorff إلى وجود نسبة عالية من alka-loids في مستخلص MeOH. لذلك ، تم تعريض قسمة من مستخلص MeOH (188.3 0 جم) في البداية لاستخراج قاعدة حمضية لإعطاء كسور قلويدية (5.46 جم) ومحايدة (4.47 جم). بعد ذلك ، تعرض جزء من الكسر القلوي (5. 0 جم) لعمود كروماتوغرافي بهلام السيليكا (CC) تمت معالجته مسبقًا بمحلول NaHCO3 بنسبة 10 بالمائة [12] ، تمت التصفية منه باستخدام الهكسان (100 بالمائة) ، الهكسان- CHCl ، (90: 10،80: 20،70: 30،60: 40،50: 50،40: 60،30: 70،20: 80، 10: 90، v / o)، CH2Cl2 (100 بالمائة)، CH2Cl 2- EtOAc (90: 10،80: 20،70: 30،60: 40،50: 50،40: 60،30: 70،20: 80 و 10: 90،0 / u) ، EtOAc (100 بالمائة) ، EtOAc-MeOH (95:05 ، 90: 10،85: 05 ، 80: 10،75: 25 ، 70: 30 ، 60: 40 ، 50: 50 ، 40: 60 ، 30: 70 ، 20 : 80 ، و 10:90 ، v / o) ، وأخيرًا MeOH يعطي 250 جزءًا (30 مل لكل منهما). بعد تقييم TLC باستخدام خليط من CH2Cl 2- MeOH بنسب 95:05 ، 90:10 ، 85:15 ، و 80:20 كنظام eluent (v / o) ، تم تجميع العينات المماثلة لإعطاء 16 جزءًا (F1 إلى F16).

تم تعريض الجزء F5 (181.2 مجم) من CC الأولي مع هكسان- CH ، Cl2 (50:50 إلى 10: 90 ، ت / س) لجيل جديد من السيليكا باستخدام نفس المنهجية المذكورة أعلاه مع الهكسان (100 بالمائة) ، الهكسان -CH و Cl2 (90: 10،80: 20،70: 30،60: 40،50: 50،40: 60،30: 70،20: 80 ، و 10: 90 ، v / o) ، CH ، Cl ، (100 بالمائة) ، CHCl 2- EtOAc (90: 10،80: 20،70: 30،60: 40،50: 50،40: 60،30: 70،20: 80، 10:90 ، o /) ، EtOAc (100 بالمائة) ، EtOAc-MeOH (85: 15 ، 70: 30 ، 50: 50 ، 30:70 ، 15:85 ، / س) ، MeOH (100 بالمائة) يوفر 118 جزءًا ( 15 مل لكل منهما) تم تجميعها في 12 جزءًا فرعيًا (F5.1 إلى F5.12) ، وفقًا لتقييم تحليل TLC باستخدام خليط من MeOH CH2Cl 2- بنسب 95:05 و 90: 10. تم تعريض 1 (28.9 مجم) مع الهكسان (100 بالمائة) إلى TLC تحضيري مخفف بـ CH ، Cl-MeOH (95: 05 ، ت / ت ، شطفان) يوفر 2 (1.4 مجم) و 3 (1.7 مجم) ، على التوالى. الكسور F5.4 (21.5 مجم) مفلت مع hexane-CH ، C (80: 20 ، vo) ، F5.5 (16.7 مجم) مع hexane-CH ، Cl (80: 20.70: 30.60 ؛ 40. و 50:50 ، v /) ، و F5.6 (15.4 مجم) تمت التصفية التتابعية به مع Hexane-CHCl2 (50: 50 ، 40: 60 ، و 30:70 ، ت / س) تم تجميعها (53.6 مجم) وتعرضت أيضًا لـ TLC التحضيري التصفية مع CH ، Cl-MeOH (95:05 ، ت / ش ، شطفان) ينتج 3 (8.9 مجم).

الكسر F6 (2 0 99.1 مجم) من CC الأولي تمت إزالته باستخدام hexane-CHCl (1 0: 9 0 ، v /)) ، CH2Cl ، (1 0 0 في المئة) ، وتعرض CH ، Cl 2- EtOAc (90:10 إلى 10:90 ، o / o) إلى هلام السيليكا الجديد CC باستخدام نفس المنهجية المذكورة أعلاه مع نفس أنظمة المذيبات التي توفر 140 جزءًا (30) مل لكل). بعد تقييم TLC باستخدام خليط من CH2Cl 2- MeOH بنسب 95:05 و 90:10 و 85:15 كنظام eluent (o / o) ، تم تجميع العينات المتشابهة لإعطاء 13 جزءًا فرعيًا (F6 .1 إلى F6.13). تعرض الطرح F6.6 (1541.3 مجم) إلى هلام السيليكا الجديد CC باستخدام نفس المنهجية المذكورة أعلاه مع نفس أنظمة المذيبات التي توفر 120 جزءًا (30 مل لكل منهما) تم تحليلها بواسطة TLC (باستخدام نفس المنهجية أعلاه) توفير 12 جديدًا الكسور الفرعية (F6.6.1 إلى F6.6.12). تعرض Subfrac-tion F6.6.2 (17.0 مجم) المزال مع hexane-CH ، Cl ، (60:40 و 50: 50 ، حجم / ت) إلى TLC تحضيري مخفف بـ CH2Cl 2- MeOH (90:10 ، v / o ، شطف واحد) ينتج عنه 3 (1.4 مجم). تمت التصفية من الكسر F6.6.3 (643.3 مجم) باستخدام hexane-CH2Cl2 (50:50 ، 40:60 ، 30:70 ، 20:80 ، 10:90 ، o / v) و CH2Cl2 (100 بالمائة) و ​​CH2Cl 2- EtOAc (90:10 و 80: 20 ، o / o) تم فصله إلى TLC تحضيري مخفف بـ CH2Cl 2- MeOH (90 : 10 ، vfo ، شطف واحد) ينتج عنه جزء جديد F6.6.3.1 (161.8 مجم) تعرض لـ TLC تحضيري جديد مع EtOAc-MeOH (90:10 ، ت / س ، شطف واحد) يوفر 4 (148.2) ملغم). تعرض الطرح F6.6.4 (90.2 مجم) المزال مع CH2Cl 2- EtOAc (70:30 و 60: 40 ، o / o) إلى TLC تحضيري مخفف بـ CH2Cl-MeOH (90:10 ، v / o ، شطف واحد) ينتج عنه 1 (1.4 مجم) و 4 (50.1 مجم) ، على التوالي. تعرض الطرح F6.6.5 (83.4 مجم) المزال مع CH ، Cl-EtOAc (60:40 و 50:50 ، o / o) أيضًا إلى TLC تحضيري مخفف بـ CH ، Cl {135}} MeOH (90:10 ، ufo ، شطف واحد) يعطي مرة أخرى 1 (1.5 مجم) و 4 (45.5 مجم) ، على التوالي. تعرض الطرح F6.6.6 (101.4 مجم) المزال مع CH ، Cl 2- EtOAc (50:50 و 40:60 ، v /)) إلى TLC تحضيري مضاف مع CH ، Cl-MeOH (90: 10 ، vfo ، شطف واحد) يعطي 8 (3.4 مجم) وجزء فرعي آخر F6.6.6.1 (48.8 مجم). تعرض هذا الجزء الفرعي (F6.6.6.1) إلى TLC تحضيري مخفف مبدئيًا بـ EtOAc-MeOH (85 : 15 ، فو ، شطف واحد) وخلفي CHCl-MeOH (90: 10 ، حجم / حجم ، شطف واحد) مما يؤدي مرة أخرى إلى 4 (37.4 مجم). بالنسبة لهذه العملية ، تمت تصفية اللوحة الكروماتوجرافية مبدئيًا بالطور المتحرك EtOAc-MeOH (85:15 ، ت / س ، شطف واحد). بعد هذا الشطف ، تم تجفيف الصفيحة الكروماتوغرافية لإعادة تحريك المذيب ثم تعريضها لعملية شطف جديدة مع المرحلة المتحركة CH ، Cl ، -MeOH (90: 10 ، vf ، شطف واحد) مما ينتج عنه 4. جزء F6.6.7 ( 109.0 مجم) تمت إزالته بـ CH ، Cl 2- EtOAc (40: 60،30: 70،20: 80 و 10: 90 ، vfo) تعرض لـ TLC تحضيري مزوَّد بـ CH ، Cl 2- MeOH (90:10 ، vo ، شطف واحد) إعطاء جزء فرعي آخر F6.6.7.1 (24.8 مجم) الذي تعرض لـ TLC تحضيري جديد تمت إزالته مبدئيًا باستخدام EtOAc-MeOH (85:15 ، ت / س ، شطف واحد) وبعد ذلك CH2Cl 2- MeOH (90: 10، vfo، شطف واحد) ينتج 9 (11.1 مجم). كان إجراء العزل المستخدم لـ 9 هو نفسه كما هو موصوف سابقًا لـ 4. تعرض الطرح F6.6.10 (92.0 مجم) المزال مع EtOAc-MeOH (60:40 و 50:50 ، ت / س) إلى TLC تحضيري مخفف بـ CH ، Cl ، -MeOH (90:10 ، حجم / س ، شطف واحد) ينتج عنه 5 (1.7 مجم) و 6 (7.8 مجم) على التوالي. تعرض الطرح F6.6.11 (326.0 مجم) المزال مع EtOAc-MeOH (50: 50 ، 40: 60 ، 30: 70 ، 20: 80 ، و 10: 90 ، حجم / س) إلى TLC تحضيري مخفف بـ CHCl- MeOH (90: 10 ، حجم / س ، شطف واحد) vielding1 (2.4 مجم) و 7 (12.5 مجم) ، على التوالي.

تعرض الجزء F7 (692.4 مجم) من CC المخفف بـ EtOAc (100 بالمائة) و ​​CHCl 2- EtOAc (95: 05،90: 10،85: 15 ، و 75: 25 ، ofo) لهلام سيليكا جديد باستخدام نفس المنهجية الموصوفة لـ CC الأولي مع نفس أنظمة المذيبات التي توفر 110 كسورًا (30 مل لكل منهما). : 15 كنظام eluent (o / o) ، تم تجميع sam-ples المماثلة لإعطاء 12 جزءًا فرعيًا (F7.1 إلى F7.12). F7.8 (147.4 مجم) تمت التصفية التتابعية باستخدام CH ، Cl 2- تعرض EtOAc (50: 50 ، 40: 60 ، 30: 70 ، نسبة تذبذب / في المائة) إلى TLC تحضيري تمت التصفية منه باستخدام CHCl-MeOH (95:05 ، vfo ، شطف واحد) يوفر 10 (5.4 مجم) و 11 ( 120.6 مجم) على التوالي. F7.9 (144.2 مجم) تمت التصفية التتابعية باستخدام CHCl 2- EtOAc (30:70 ، 20:80 ، 10:90 ، نسبة مئوية / نسبة مئوية) تعرض أيضًا لـ TLC تحضيري مخفف بـ CH ، Cl ، -MeOH ( 95: 05 ، فو ، شطف واحد) يوفر 11 (91.2 مجم) وخليط من 12 و 13 (39.4 مجم) ، على التوالي.

ثاليفولين (1): مسحوق بني غير متبلور ؛ H-NMR و 13 C-NMR وفقًا للأدبيات [32] ؛ LR-ESI (plus) -MS [M plus H] * plus m / z 208.

أنونين (2): مسحوق بني غير متبلور ؛ 1H-NMR و 13 C-NMR وفقًا للأدبيات [33] ؛ LR-ESI (plus) -MS [M plus H] plus m / z 266.

Liriodenine (3): بلورات صفراء (CH ، Cl-MeOH 3: 1) ؛ 1H-NMR و 13 C-NMR وفقًا للأدبيات [10،34] ؛ LR-ESI (plus) -MS [M plus H] plus m / z 276.

(S) - (زائد) - ريتولين (4): مسحوق بني غير متبلور ؛ [] p25 زائد 71،6 0 (c 0.05 جم / 100 مل ، MeOH) ؛ 1H-NMR و 13 C-NMR وفقًا للأدبيات [27 ؛ LR-ESI (plus) -MS [M plus H] plus m / z 30.

3 ، 4- Dihydro -7- hydroxy -6- methoxy -1- isoquinolinyl) (3- hydroxy -4- methoxyphenyl) -methanone (Dehydro-oxonorreticuline) (5 ): مسحوق بني غير متبلور. بيانات H و 13 C-NMR ، انظر الجدول 1 ؛ LR-ESI (plus) -MS [M plus H] plus m / z 328.

(زائد) {0} S، 2R-Reticuline N -oxide (6): مسحوق بني غير متبلور ؛ [ليرة لبنانية زائد 136.4 (c0.146 جم / 100 مل ، MeOH) ؛ 1 بيانات اليد 13C-NMR ، انظر الجدول 1 ؛ LR-APCI (plus) -MS [M plus H] plus m / 2346

(زائد) {0} S، 2S-Reticuline N.-oxide (7): مسحوق بني غير متبلور ؛ [] p25 زائد 394.5 (c 0.03g / 100 mL ، MeOH) ؛ 'بيانات H و 13 C-NMR ، انظر الجدول 1 ؛ LR-APCI (زائد) -MS [M plus H] بالإضافة إلى m / z346.

Coreximine (8): مسحوق غير متبلور أصفر فاتح ؛ [] p25 plus 2 0 1.1 (c 0.08g / 100mL، MeOH) 'H-NMR و 13 C-NMR وفقًا للأدبيات [34،35] ؛ LR- ESI (plus) -MS [M plus H] plus m / z 328.

Bisnorargemonine (9): مسحوق بني غير متبلور. 1H-NMR و 13 C-NMR وفقًا للأدبيات [36] ؛ LR-APCI (plus) -MS [M plus H] plus m / z 328.

Isochamanetin (1 0): مسحوق أصفر غير متبلور ؛ [p 25-12. 4 (c 0.5 g / 100 mL، MeOH) 'H-NMRand 13C-NMRin وفقًا للأدب [37؛ LR-APCI (-) - MS [MH] -m / z361.

Dichamanetin (11): مسحوق أصفر غير متبلور ؛ [] D 25-10. 7 (ج 0. 5 جم / 100 مل ، MeOH) ؛ 1H-NMR و 13 C-NMR وفقًا للأدبيات [37] ؛ LR-ESI (-) - MS [MH] -m / z467.

خليط من uvarinol (12) و isouvarinol (13): مسحوق أصفر غير متبلور ؛ H-NMR و 13 C-NMR وفقًا للأدبيات [37] ؛ LR-ESI (-) - MS [MH] - m / z 573.

3.4. في فحص المختبر السام للخلايا

3.4.1 الخلايا

HL -60 (ابيضاض الدم النخاعي البشري) و MCF -7 (سرطان الثدي البشري) و HepG2 (سرطان الخلايا الكبدية البشرية) و HCT116 (سرطان القولون البشري) و MRC -5 (الأرومة الليفية في الرئة البشرية) تم الحصول على خطوط الخلايا من American Type Culture Collection (ATCC ، Manassas ، VA ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، وتم تربيتها على النحو الموصى به بواسطة دليل ATCC لثقافة الخلايا الحيوانية. تم اختبار جميع خطوط الخلايا للميكوبلازما باستخدام مجموعة صبغة الميكوبلازما (Sigma-Aldrich) للتحقق من صحة استخدام الخلايا الخالية من التلوث.

3.4.2. فحص السمية الخلوية

لمقايسة السمية الخلوية ، تم قياس قابلية بقاء الخلية بطريقة ألامار الزرقاء ، كما هو موضح سابقًا [{0}]. بالنسبة لجميع التجارب ، تم طلاء الخلايا 96- بألواح جيدة. تم إذابة المكونات الكيميائية في ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO ، Vetec Ouimica Fina Ltda. ، Duque de Caxias ، RJ ، البرازيل) وتم إضافتها إلى كل بئر واحتضانها لمدة 72 ساعة. دوكسوروبيسين (دوكسوروبيسين هيدروكلوريد ، نقاء أكبر من أو يساوي 95 في المائة ، مختبر IMA SAIC ، بوينس آيرس ، الأرجنتين） تم استخدامه كعنصر تحكم إيجابي. في نهاية العلاج ، 20 ميكرولتر من محلول المخزون (0.312 مجم / مل) من ريسازورين تمت إضافة (Sigma-Aldrich Co.) إلى كل بئر وتم قياس الامتصاصية عند 570 نانومتر و 600 نانومتر باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة SpectraMax190 (الأجهزة الجزيئية ، Sunnyvale ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم الحصول على التركيز نصف المثبط (IC50) عن طريق الانحدار غير الخطي مع فواصل ثقة 95 بالمائة (CI95 بالمائة) باستخدام برنامج GraphPad Prism (برنامج بديهي للعلوم ؛ سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية).

4 - نتائج

أدى التحقيق الكيميائي النباتي لحاء دودة الكاليسينا إلى عزل وتحديد ثلاثة عشر مركبًا (1-13) ؛ تسعة قلويدات مشتقة من isoquinoline (1-9) وأربعةمركبات الفلافونويد(10-13). تنتمي القلويدات إلى الفئات الفرعية التالية: إيزوكوينولين بسيط ، ثالي أونلاين (1) ؛ أبورفين ، أنونين (2) ؛ أوكسوبورفين ، ليريودنين (3) ؛ benzyl-tetrahydroisoquinolines، (plus) -reticuline (4)، de hydro-oxonorreticuline (3، 4- dihydro -7- hydroxy -6- methoxy -1- isoquinolinyl) ({{13} } هيدروكسي -4- ميثوكسيفينيل) -ميثانون) (5) ، 1S ، 2R- شبكي ، أكسيد النيتروجين (6) ، و 1S ، 2S- شبكي ، أكسيد النيتروجين (7) ؛ تتراهيدرو بروتوبربيرين ، كوركسيمين (8) ؛ وبافين ، بيسنورارجيمونين (9). بينما تنتمي مركبات الفلافونويد إلى ثنائي هيدروفلافون البنزيل ، إيزورهامنتين (10) ، ديشامانيتين (11) ، ومزيج من يوفارينول (12) وإيزوفارينول (13). تم وصف المركبات المعزولة لأول مرة في D.calycina وكذلك في جنس Diclinanona.

تم تقييم النشاط السام للخلايا للمركبات المعزولة (باستثناء anonaine و liriodenine و 1 و 2- dihydro-oxonorreticuline و coreximine) ضد السرطان (HL -60 و MCF -7 و HepG2 و HCT116) وخطوط الخلايا غير السرطانية (MRC -5). من بينها ، لوحظت أكثر النتائج الواعدة بالنسبة للبنزيلات ثنائي هيدروفلافون ديشامانيتين (10) ، و

تم اختبار خليط من uvarinol (12) و isouvarinol (13) الذي أظهر نشاطًا سامًا معتدلًا للخلايا ضد خطوط الخلايا السرطانية التي تم اختبارها （<20.0μg.ml-1）and low="" cytotoxicity="" against="" the="" non-cancerous="" cell="" line="" mrc-5(="">25. 0 ug · mL- '). أظهر Dichamanetin (11) نشاطًا سامًا للخلايا ضد HL -60 و HCT116 بقيم IC50 15.78ug · mL -1 （33.70 ميكرولتر- L -1） و 18.99 ميكروغرام · مل- I （40.56 ميكرولتر .L -1） ، على التوالي ، بينما أظهر خليط uvarinol （12） و isouvarinol (13) نشاطًا سامًا للخلايا ضد HL -60 ، بقيمة IC50 تبلغ 9.74 ميكروغرام مل- I ، و HCT116 ، مع IC50 بقيمة 17.31 ميكروغرام · مل -1. تم وصف هذه النتائج على خطوط الخلايا السرطانية أيضًا لأول مرة بالنسبة للديهيدروفلافون البنزيل. تم تحديد الأنشطة السامة للخلايا من شبكي ، أنونين ، وليريودنين سابقًا ، حيث يعتبر الليودينين هو المركب الأكثر فاعلية.

تشير النتائج التي تم الحصول عليها في هذا العمل إلى أن أنواع عائلة Annonaceae هي مصدر واعد للمركبات النشطة بيولوجيًا ذات الخصائص السامة للخلايا ، وتقترح استمرار بحثها في نماذج أخرى من المقايسات البيولوجية.

مراجع

1. كوفرور ، TLP ؛ بيري ، دكتوراه في الطب ؛ شاترو ، لو ؛ سوندرز ، RMK ؛ سو ، YCF ؛ ريتشاردسون ، جي إي ؛ Erkens ، RHJ التاريخ التطوري المبكر لعائلة النباتات المزهرة Annonaceae: التنويع المطرد والتشتت الجغرافي المداري. J. Biogeogr. 2011 ، 38 ، 664-680. [CrossRef]

2. Corrêa ، النائب Dicionário das Plantas Úteis do Brasil e das Exóticas Cultivadas ؛ IBDF وزارة الزراعة في ريو دي جانيرو ، البرازيل ، 1984.

3. Leboeuf، M .؛ الكهف ، أ. بوميك ، PK ؛ موخيرجي ، ب. ؛ Mukherjee ، R. الكيمياء النباتية من Annonaceae. كيمياء النبات 1982 ، 21 ، 2783-2813. [CrossRef]

4 - روبريخت ، جي كي ؛ هوي ، Y.-H. ؛ McLaughlin ، JL Annonaceous acetogenins: مراجعة. ج. نات. همز. 1990 ، 53 ، 237-278. [CrossRef]

5. Lúcio، ASSC؛ ألميدا ، جرجس ؛ دا-كونها ، EVL ؛ تافاريس ، جي إف ؛ Filho، JMB Alkaloids of the Annonaceae: حدوث وتجميع لأنشطتها البيولوجية. في القلويات. Knolker ، H.-J. ، إد ؛ إلسفير: أمستردام ، هولندا ، 2015 ؛ الفصل 5؛ المجلد 74 ، الصفحات من 233 إلى 409. [CrossRef]

6. سوزا ، CAS ؛ نارديلي ، في بي ؛ باز ، WHP ؛ بينهيرو ، MLB ؛ رودريغز ، ACBC ؛ بومفيفيم ، م. Soares ، MBP ؛ بيزيرا ، دى بى ؛ شار ، شبيبة ؛ كولين ، HHF ؛ وآخرون. فينيل بروبانويد مشتق من الأسارون وقلويدات مشتقة من الأيزوكينولين من لحاء دوجيتيا بيكناستيرا (Annonaceae) وسميتها الخلوية. كيم. نوفا 2020 ، 43 ، 1397-1403. [CrossRef]

7. أراوجو ، MS ؛ سيلفا ، FMA ؛ كولين ، HHF ؛ كوستا ، قلويدات مشتقة من EV Isoquinoline من لحاء Guatteria olivacea (Annonaceae). بيوتشيم. النظام. ايكول. 2020، 92، 104105. [CrossRef]

8. نغونبي ، أ. مبوبدا ، ASW ؛ هابي ، مدير عام مبيانتشا ، م. Tatuedom ، حسنًا ؛ علي ، MS ؛ لطيف ، م. تشوانكيو ، جي سي ؛ Kouam، SF منتجات طبيعية من نبات طبي Duguetia staudtii (Annonaceae). بيوتشيم. النظام. ايكول. 2019 ، 83 ، 22-25. [CrossRef]

9. Santos، RC؛ سوزا ، AV ؛ أندرادي سيلفا ، م. كروز ، كيه سي في ؛ كاسويا ، كال ؛ كاردوسو ، كال ؛ فييرا ، إم سي ؛ Formaggio، ASN فحص مضاد للأكسدة ومضاد للروماتيزم ومضاد للالتهابات للمستخلص والدايسنترينون من Duguetia furfuracea (A. St.-Hil.) Benth. & صنارة صيد. F. ياء إثنوفارماكول. 2018 ، 211 ، 9-16. [CrossRef]

10. كوستا ، إي في ؛ بينهيرو ، MLB ؛ سوزا ، ADL ؛ باريسون ، أ. كامبوس ، فرنسا ؛ فالديز ، ر. أويدا ناكامورا ، تي ؛ دياس فيلو ، بي بي ؛ ناكامورا ، السيرة الذاتية ، نشاط مبيد المثقبيات لأوكسوابورفين وبيريميدين - - قلويدات كاربولين من فروع Annona foetida Mart. (Annonaceae). جزيئات 2011 ، 16 ، 9714-9720. [CrossRef]

11. سيلفا ، دي بي ؛ تولي ، منظمة التعاون الاقتصادي ؛ ميليتا ، GCG ؛ كوستا لوتوفو ، LV ؛ بيسوا ، سي ؛ مورايس ، مو ؛ البوكيرك ، إس. Siqueira ، JM الأنشطة المضادة للأورام ، ومبيد المثقبيات ، والمضادة للشمانية للمستخلصات والقلويدات المعزولة من Duguetia furacea. طب النبات 2009 ، 16 ، 1059-1063. [CrossRef] [PubMed]

12. Costa، ​​EV؛ بينهيرو ، MLB ؛ كزافييه ، سم ؛ سيلفا ، JRA ؛ أمارال ، ACF ؛ سوزا ، ADL ؛ باريسون ، أ. كامبوس ، فرنسا ؛ فيريرا ، إيه جي ؛ ماتشادو ، جي إم سي ؛ وآخرون. كاربولين بيريميدين - - وقلويدات أخرى من Annona foetida مع نشاط مضاد للسماني. ج. نات. همز. 2006 ، 69 ، 292-294. [CrossRef]