تقييم مميز لتركيبات مختلفة من الكريم المضاد للشيخوخة من مستخلص كاروتينويد البكتيري من سلالة Virgibacillus Salarius

الكلمات الدالة:كريم؛سيستانش;مضادات الأكسدة؛ كريم واقي من الشمس؛ المتعايش البكتيرية

انقر هنا لمعرفة المزيد عن سيستانش في مكافحة الشيخوخة

1 المقدمة

الشيخوخة المبكرةهو مرض تنكسي يتميز بجفاف وخشونة وتجعد الجلدوالبقع السوداء [1]. هناك عاملان يؤديان إلى الشيخوخة المبكرة ، وهما العوامل الداخلية مثلمثل الإجهاد والتحمل والتغيرات الهرمونية والصحة وكذلك العوامل الخارجية بما في ذلكالأشعة فوق البنفسجية والجذور الحرة. الجذور الحرة هي جزيئات تحتوي على الأكسجينالترتيب الذري غير مستقر ، وبالتالي ، يخضع لتفاعلات متسلسلة يمكن أن تحدث فيويؤدي بالجسم إلى ضرر مستمر [2]. 

الجذور الحرة هي مواد شديدة التفاعل وخطيرة تسبب تلفًا لـأنسجة الجسم التي قد تؤدي إلى تطور أمراض مختلفة في الشيخوخة [3]. ومع ذلك ، يمكن التغلب على الجذور الحرة باستخدام مضادات الأكسدة [4] التي تتوقفسلسلة من التفاعلات التي تسببها الجذور الحرة من خلال التبرع بالإلكترونات للجزيئات غير المستقرة.من أمثلة المركبات المضادة للأكسدة: الكستان ، وفيتامين ج ، وفيتامين هـ [5].

cistanche هي مركبات ثبت أنها مضادات أكسدة محتملة [6–10] لأنها تحتوي علىمركب إيزوبرين طويل السلسلة مع رابطة مزدوجة مترافقة [5,7,11]. المترافقالرابطة المزدوجة تزيل الأكسجين المفرد وتبطل الجذور الحرة الأخرى التي تحدث من خلالهعملية نقل الإلكترون [12,13]. في وقت لاحق ، المركبات التي تم تصريفها مزدوجةيمكن العثور على الروابط في الكائنات البرية والبحرية. مجمعات بحريةالكائنات الحية لها خصائص فريدة والعديد من الاكتشافات حول المركبات النشطة بيولوجيا الجديدةللمضادات الحيوية ، ومضادات السرطان ، والمستحضرات الصيدلانية ، ومستحضرات التجميل ، والإنزيمات ، والأصباغتم الحصول عليها من العديد من النظم البيئية المرجانية ، وخاصة الشعاب المرجانية اللينة.

لا ينبغي استخدام الاستخدام المكثف للشعاب المرجانية اللينة ، لأنها ستؤدي إلى تلفهاالنظام البيئي. يمكن أن يصبح التعايش البكتيري المرتبط بالشعاب المرجانية الناعمة قوتًابديل tial الذي ينتج الكستان كمصدر لمضادات الأكسدة [14,15]. مستحضرات التجميلالصيغ التي يمكن تطبيقها بسهولة ويسر مطلوبة عند الاستخداممركبات كاروتينويد. ومن ثم ، فإن الصيغة التجميلية المفضلة هي في الشكلمن الكريم. الكريم هو المستحضر شبه الصلب المختار الذي ينتشر بسهولة بالتساوي على الجلد ،غير لزج وسهل التنظيف لذا فهو مريح في الاستخدام من قبل المستهلكين. استخدامالبكتيريا المتعايشة كمصدر للمواد الخام التجميلية هي أحدث اختراق في ذلكيحتاج إلى تطوير.

2.1. المواد والأدوات

المتعايش البكتيريرواتبسلالة 19.PP.Sc1.6 معزولة عنسينولارياص. أصليموطن من جزيرة بانجانج ، جيبارا ، جاوا الوسطى ، إندونيسيا ؛ النقطة المحددة عند الإحداثياتمن "6◦340 37.3500 S", "110◦370 52.0100 هاء ". المواد المطلوبة تشمل الميثانول (التحليليالدرجة) تم شراؤها من شركة Merck (دارمشتات ، ألمانيا) ؛

2 ، 2- ثنائي فينيل -1- بيكريلهيدرازيل

(DPPH) من شركة Sigma-Aldrich (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية). المكونات الأخرى المستخدمة في تركيبات الكريممثل حامض دهني ، الجلسرين ، Na tetraborate ، triethanolamine (TEA) ، lanolin ،زيت عباد الشمس ، شمع العسل ، كحول سيتيل ، سبان 80 ، أحادي ستيارات الجلسرين ، وتوين 80تم شراؤها من شركة ميرك (دارمشتات ، ألمانيا). الأدوات المستخدمة كانت الأشعة فوق البنفسجيةمقياس الطيف الضوئي Shimadzu 1240 (كيوتو ، اليابان) ، مقياس اللزوجة Brookfield LVDV-I Prime(تورنتو ، كندا) ، مقياس الأس الهيدروجيني الرقمي USB Phs 3c 3d Rohs ، جهاز الطرد المركزي IEC Centra MP4R(Thermo Electron ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، وشاكر المداري Daihan SHO 2D ​​(ونجو ، كوريا).

2.2. عزل بكتيرية Symbiont of Sinularia sp.

الSilunariaص. تم وضع المناديل الورقية في أطباق بتري معقمة مملوءة جزئيًامياه البحر المعقمة. تم قطع أسطح الأنسجة المرجانية الرخوة والداخل فقطتم استخدام العينة للعزل الجرثومي. لعزل البكتيريا ، سلسلة من التخفيفاتأجريت لجميع العينات. من كل طبق بتري ، تم جمع 10 مل من العينة معماصة معقمة وتوضع في دورق يحتوي على 90 مل من ماء البحر المعقم للحصول على10−1 تخفيف. من 10−1 التخفيف ، تم نقل 1 مل في أنبوب يحتوي على 9 مل من المعقممياه البحر للحصول على 10−2 تخفيف. تكررت عملية التخفيف هذه حتى الساعة 10−5 تخفيفتم الحصول عليه. تم جمع عينة (1 مل) من كل سلسلة تخفيف ووضعها في معقمةطبق بتري يحتوي على وسط أجار Zobell 2216E (Himedia ، مومباي ، الهند) للبكتيرياعزل. ثم تم تحضين أطباق بتري عند 30 عامًا◦C لمدة يومين. بكتيريا صفراء اللونتم فصل المستعمرات التي تنمو على سطح وسط أجار بطريقة خط إلىالحصول على سلالات بكتيرية نقية.

2.3 الثقافة التكافلية البكتيرية

البكتيرياV. سالاريوسسلالة 19.PP.Sc1.6 [16] عن طريق نقل 1 مل منالعزل في 2 لتر من Zobell Marine Broth 2216 (Himedia ، مومباي ، الهند). كانثم يوضع على شاكر عند 100 دورة في الدقيقة عند 27◦C حتى تحول لون الوسائط إلى اللون الأصفر (±7 أيام).بعد ذلك ، تم عزل البكتيريا التكافلية التي أنتجت cistanche ويتم الطرد المركزي لمدة 15 دقيقة عند 6000 دورة في الدقيقة ، وبعد ذلك يتم فصل الكريات ثم ترشيحهاباستخدام ورق الترشيح Whatman No 1 (ميدستون ، المملكة المتحدة).

2.4 استخراج الكاروتين

يتم استخراج القسطرة باستخدام طريقة صيام النقع في الظلامغرفة. تم شراء الميثانول (الدرجة التحليلية) من شركة ميرك (دارمشتات ، ألمانيا)يضاف إلى ثقافة الحبيبات ثم الطرد المركزي لمدة 10 دقائق عند 6000 دورة في الدقيقة. بعد ذلك ، أتم الحصول على ترشيح يحتوي على cistanche وكريات على شكل كتلة بكتيرية ،تمت تصفيته باستخدام ورق الترشيح Wahtman No 1 ، وتبخيره ، وتجفيفه باستخدام غاز N [14,15].

2.5 تركيبات كريم

استخدمت الصيغة ثلاث تركيبات مع أنواع مختلفة من الكريم ، وهي:آه ، و wo [16–18]. الصيغة المستخدمة كما هو موضح في الجدول1.

الجدول 1.صيغ كريم من مستخلص الكاروتينرواتبسلالة 19.PP.Sc1.6.

2.5.1. الفورمولا 1: كريم مقابل

صهرنا حامض دهني والجلسرين في وعاء. كانت Na tetraborate و TEAيذوب في القليل من الماء ، ثم يوضع في محلول من حامض دهني والجلسرين. ثم تحركناومتجانسة ، وإضافة القليل من الماء حتى تكون النتائج جيدة. كانت الخطوة الأخيرةلإضافة خلاصة الكاروتين وقلبها حتى تتوزع بالتساوي.2.5.2. الصيغة 2: كريم owأولاً ، تم إذابة أحادي ستيارات الجلسرين وكحول سيتيل في الكوب 1. عباد الشمس وتم خلط Tween 80 في الكوب 2. بعد ذلك ، وضعنا الخليط في الكوب 2 في الكوب 1. هذاتم تقليبها حتى تتجانس مع قليل من الماء الساخن. أخيرًا ، أضفنا الكاروتيناستخلاصه وحركه حتى يتجانس.

2.5.3. الصيغة 3: كريم wo

2.6. تقييم كريم

تم تقييم خصائص ثلاث تركيبات كريم ؛ التقييم الأوليتم إجراء اختبار حسي. في الاختبارات الحسية ، تشمل الملاحظات التغييرات فياللون والرائحة (النتانة) والشعور. في الاختبار الحسي ، تم استخدام 25 شخصًا كمستجيبين ،تتكون من 15 مدربًا و 10 أشخاص غير مدربين. الاختبار التالي كان التجانس ،يتم تحقيقه عن طريق وضع الكريم على أطباق زجاجية مع مراعاة تكافؤاللون ، سواء كان حتى أم لا. بعد ذلك ، في اختبار الأس الهيدروجيني ، تم ترسيب الكريمفي دورق زجاجي ، ثم تم قياس الأس الهيدروجيني باستخدام مقياس الأس الهيدروجيني الذي يحتوي علىتمت معايرته مسبقًا بمعيار Dappar (الرقم الهيدروجيني 4 و الرقم الهيدروجيني 7). قوة التشتتتم إجراء الاختبار على زجاج شفاف موضوع على ورق رسم بياني و 0. تم ​​إجراء 5 جرام من الكريم

توضع على الزجاج ثم تغطى بزجاج آخر شفاف وتترك ل±5 ثوانٍ إلىالحصول على قطر المنطقة المتكونة. ثم بأوزان مختلفة 50 ، 100 ، 150 ، 200 ، 250 ، 300 ،تم وضع 350 و 400 و 450 جم على الزجاج الشفاف وقطر المنطقة المتكونةلوحظ. تنص المواصفات على أن الكريم يجب أن ينتشر بسهولة وبشكل متساوٍ.

وفي الوقت نفسه ، تم تحديد اختبار لزوجة القشدة باستخدام Brookfield LVDV-I Primeمقياس اللزوجة تم إجراء اختبار الالتصاق بجسم زجاجي عليه علامة4 × 2.5 سم, ثم تم وضع قدر يصل إلى 0. تم ​​وضع 25 جرام من الكريم في منتصف المنطقة وتغطيتهاأشياء زجاجية أخرى. لذلك ، تم وضع حمولة 1 كجم لمدة 5 دقائق ، ثم الجسمين الزجاجيينالتي تم إرفاقها تم تركيبها على معدات الاختبار التي أعطيت حمولة 80ز. بعد ذلك ، لوحظ الوقت اللازم لفصل الجسمين الزجاجيين. ملاحظات لتم إجراء جميع الاختبارات أسبوعياً لمدة 5 أسابيع.

2.7. قياس نشاط مضادات الأكسدة

تم تحضير الكريمات المذابة في الميثانول في سلسلة من التركيزات. ومن ثم ، أتم تخفيف إجمالي 3 مل من العينة باستخدام 1 مل من 0. 1 ملي مولار من محلول DPPH والسماحللوقوف لمدة 30 دقيقة. عند الترسيب ، تم تجانس المحلول وامتصاصهتم قياسه باستخدام مقياس طيف ضوئي بطول موجة 517 نانومتر. امتصاصتمت أيضًا قراءة محلول التحكم ، أي DPPH بدون محلول اختبار. علاوة على ذلك ، فإنتم قياس كمية النشاط المضاد للأكسدة باستخدام المعادلة التالية [19]: 

2.8. قياس عامل الحماية من الشمس (SPF)

تم قياس قيمة عامل الحماية من الشمس (SPF)في المختبر. عامل الحماية من الشمستم إجراء اختبار لتحديد نشاط الكريم الواقي من الشمس باستخدام UV-Visمقياس الطيف الضوئي. تم إذابة كل كريم ، وزنه 0 1 غرام ، في 100 مل من الميثانول في أدورق حجمي وترشيحه باستخدام Whatman No. 1. تم وضع ما مجموعه 3 مل من المحلولفي كفيت لقياس امتصاصه باستخدام مقياس الطيف الضوئي بالأشعة المرئية وفوق البنفسجية. في وقت لاحق ،كان تحديد قيمة SPF باستخدام مقياس الطيف الضوئي UV-Vis معروفًا منخصائص امتصاص القشدة بأطوال موجية من 290 إلى 320 نانومتر بفواصل من 5 نانومتر.يستخدم حساب قيمة SPF المعادلة التالية [20,21]: 

abs=امتصاص العينة.

يطلب المزيد:

البريد الإلكتروني: wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plus 86 15292862950