الطب الصيني Cistanche التركيب الكيميائي وتحليل المكونات في الجسم Ⅲ

الفصل الثاني: دراسة نوعية عن التركيب الكيميائي لنبات Cistanche deserticola

Cistanche هو الجذع اللحمي ذو الأوراق المتقشرة الجافةCistanche deserticola YC.Maو Cistanche tubulosa (شينك) R.Wight. وهو أحد الأدوية الصينية التقليدية المغذية للكلى يانغ. لديها وظائفيانغ الكلى المغذيةوتجديد الجوهر والدم وترطيبه وله تأثير ملين وغالباً ما يستخدم لعلاج العجز الجنسي والعقم وألم الخصر والركبتين وضعف العضلات والعظام وجفاف الأمعاء والإمساك وما إلى ذلك وله تأثيرات دوائية مثل مضادات الأكسدة. الخرف، ومكافحة مرض باركنسون، والحماية من نقص تروية الدماغ، وتحسين قدرات التعلم والذاكرة. من أجل توضيح الأساس المادي لفعالية Cistanche deserticola، يستخدم هذا الفصل HPLC وLC-IT-TOF-MS لتوصيف شاملالمكونات الكيميائية لCistanche. واستنادًا إلى ملخص منهجي لقواعد التكسير لأنواع مختلفة من المكونات الكيميائية، يتم تحليل خصائص Cistanche deserticola بشكل منهجي. التركيب الكيميائي، لتوفير بيانات غنية من مصادر موثوقة لتوضيح متعمقمن الخصائص الطبية للسيستانش ديزيرتيكولافي الجسم الحي.

ما هي المدة التي يستغرقها عمل سيستانشي؟

القسم 1 المواد التجريبية

1. الصك

مقياس طيف الكتلة السائلة Shimadzu HPLC-IT-TOF-MS (مجهز بمضختين LC-20ADXR، جهاز أخذ العينات التلقائي SIL-20AC، فرن عمود CTO-20AC، كاشف الأشعة فوق البنفسجية SPD-M20A، DGU-20آلة إزالة التلوث بالغاز A3R، CBM-20وحدة تحكم، مصدر أيون ESI، شركة Shimadzu، اليابان)، نظام تنقية المياه فائق النقاء Milli-Q (شركة Milipore، الولايات المتحدة الأمريكية): ميزان التحليل الإلكتروني Mettler ME204 ( شركة ميتلر توليدو، سويسرا).

2. الكواشف

تم شراء درجة التحليل اللوني ودرجة قياس الطيف الكتلي للميثانول والأسيتونيتريل وحمض الفورميك من درجة قياس الطيف الكتلي من شركة Thermo-Fisher (بيتسبرغ ، بنسلفانيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). كان الماء عبارة عن ماء Milli-Q عالى النقاء تم تصنيعه في المختبر (Millipore، Bedford، MA، USA). الكواشف المتبقية كلها من الدرجة التحليلية.

ساليدروسيد، 6-ديوكسي كاتالبول، 8-حمض إيبي-لوجانيك، إيتشيناكوسايد، أكتيوسايد، إيزوزيد فيرباسكوسيد (أيزواكتيوسايد،) وبينوريسينول- -D-جلوكوبيرانوسيد (بينوريسينول- -D-جلوكوبيرانوسيد) تم تقديمهما من قبل مجموعة أبحاث البروفيسور تو بنغفي في المختبر الرئيسي للأدوية الطبيعية والمحاكاة الحيوية بجامعة بكين. تم شراء Sarcoside F (cistanosideF) من Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd.، cistanoside A (cistanoside A)، 2'-acetylacteoside (2'-acetylacteoside)، 2'-acetylpoliumoside (2'-acetylpoliumoside)، cistanoside Polyglucoside (poliumoside) ) ، cistanoside E (cistanosideE)، isocistanoside E (isocistanosideE)، cistanoside C (cistanosideC)، isocistanoside C (isocistanosideC) و cistanoside D (cistanosideD) تم شراؤها جميعًا من Shanghai Shidande Biotechnology Co., Ltd.، tubuloside A (tubulosideA) و تم شراء tubuloside B (tubulosideB) من شركة Chengdu Weikeqi Biotechnology Co., Ltd.

القسم 2 المحتوى التجريبي

1. تحضير العينة

1.1 إعداد المادة المرجعية

تزن بدقة كميات مناسبة من المواد المرجعية المختلفة في "القسم 1 المواد التجريبية" أعلاه وإعداد حلول المخزون 10 ملم مع DMSO. على وجه التحديد ماصة 2 مل من كل محلول مخزون وتمييعه مع الأسيتونتريل 25٪ لصنع محلول تحكم مختلط 2 ميكرومتر. 1.2 تحضير محلول الاختبار

تم تصنيع المستخلص المائي لـ Cistanche deserticola في مختبرنا، ويتم تخزين العينة في مركز أبحاث التحديث للطب الصيني التقليدي، كلية الطب الصيني التقليدي، جامعة بكين للطب الصيني. خذ 20 ملغ من مسحوق Cistanche deserticola، وأضف 40 مل من الماء ليذوب، ودوامة، واخلط، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة 10000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق، ثم خذ المادة طافية. وهذا يعني أنه تم الحصول على حل الاختبار.

3. شروط قياس الطيف الكتلي

مصدر الأيونات الكهربائية (ESI)، وضع المسح هو مسح الأيونات الموجبة والسالبة في وقت واحد وتشغيل قياس الطيف الكتلي متعدد المستويات تلقائيًا. نطاق المسح الشامل لـ MS'~MS' للأيونات الموجبة هو m/z50~800، وللأيونات السالبة هو m/z100~1000. تبلغ جهود غرفة الرش 4.5 كيلو فولت و-3.5 كيلو فولت على التوالي: معدل تدفق غاز التفتيت (Nz) هو 1.5 لتر دقيقة؛ ضغط غاز التجفيف هو 110MPa؛ جهد الكشف 1.55 كيلو فولت. تبلغ درجات حرارة أنبوب إزالة المذيبات المنحني (CDL) ووحدة التسخين 200 درجة. يبلغ ضغط غرفة الاصطدام 1.5e-Pa؛ ضغط فخ الأيونات هو 2.8e-Pa؛ عدد مرات التكرار للمراحل الأولى الإيجابية والسلبية هو 1، ووقت تراكم الأيونات هو 30 مللي ثانية؛ عدد تكرارات المرحلتين الثانية الموجبة والسالبة هو 2، وزمن تراكم الأيونات هو 20 مللي ثانية. ; تبلغ طاقة التفكك الناتج عن الاصطدام (CID) 50%.

القسم 3 النتائج والمناقشة

اختيار العمود

من أجل الحصول على فصل كروماتوغرافي أفضل، قمنا بفحص الأعمدة الكروماتوغرافية على نطاق واسع من مختلف الشركات المصنعة والمواصفات، مثل العمود الكروماتوغرافي ACEUltraCore 2.5 SuperC8 (3.0x150mm, 2.5 um, Advance Chromatography Technologies Ltd., Aberdeen, Scotland)، Shiseido Capcell Core Ci8 (2.1 مم × 150 مم، 2.7 ميكرومتر)، وعمود Waters Acquity UPLC HSS T3 (2.1 × 100 مم، 1.8 ميكرومتر، ميلفورد، ماساتشوستس، الولايات المتحدة الأمريكية) وعمود Capcell Core ADME (2.1 × 150 مم، 2.7 ميكرومتر، شركة شيسيدو، اليابان). من خلال المقارنة المنهجية، وجد أنه عند استخدام العمود الكروماتوغرافي Capcell Core ADME (2.1x150 مم، 2.7 ميكرومتر، شركة Shiseido Co., Ltd.، اليابان)، يمكن فصل كل إشارة كروماتوغرافية بشكل أفضل (الشكل 3-1).

2. اختيار ظروف الطور السائل

منذ المكونات الكيميائية الرئيسية للسيستانش ديزيرتيكولاهي جليكوسيدات فينيل إيثانول، والقشور، والإيريدويدات ومركبات أخرى، فهي تستجيب بشكل أفضل بشكل عام في ظل ظروف الأيونات السالبة. من أجل تحديد المكونات الكيميائية منخفضة المستوى في المستخلص المائي لنبات Cistanche deserticola، فمن المتوقع أنه قد يلزم إضافة الأحماض إلى الطور المتحرك لتعزيز الطاقة. لذلك، استخدمت هذه التجربة ماء-ميثانول، ماء-أسيتونيتريل، 0.1% حمض الفورميك ماء-ميثانول و0.1% ماء حمض الفورميك-أسيتونيتريل كأنظمة طور متنقلة للتحقيق. لقد وجد أن 0.1% ماء حمض الفورميك-أسيتونيتريل كان له أفضل تأثير فصل، مع شكل قمة جيد وسعة ذروة كبيرة، لذلك تم اختيار 0.1% ماء حمض الفورميك والأسيتونيتريل ليكونا المرحلة المتنقلة. 3. التحليل النوعي للمكونات الكيميائية. استخدم 19 مادة مرجعية موجودة لاستكشاف قواعد تجزئة قياس الطيف الكتلي لأنواع مختلفة من المركبات في Cistanche deserticola. المواد المرجعية المختلطة هي مخططات PDA اللونية عند 340 نانومتر على عمود ADME ومخططات BPC في أوضاع الأيونات الموجبة والسالبة. انظر الشكل 3-1. قمنا بمراجعة الأدبيات ذات الصلة من خلال PubMed، وRSC، وCNKl، وSpringer، وScienceDirect، وVIP، وWanfang، وما إلى ذلك، وقمنا ببناء قاعدة بيانات ذاتية الصنع للمكونات الكيميائية لـ Cistanche deserticola. استنادًا إلى المقارنة بين قواعد تجزئة قياس الطيف الكتلي وأوقات الاحتفاظ بالمركبات المعروفة، حددنا بشكل مبدئي 45 مركبًا في Cistanche deserticola. مركبات، بما في ذلك 31 جليكوسيدات فينيل إيثانول، و9 إيريدويدات، و3 جليكوسيدات بنزيل، و2 قشور، كما هو موضح في الجدول 3-1.

من خلال مقارنة زمن السرية وطيف MS وطيف MS للمادة المرجعية، المركبات 11، 12، 13، 17، 21، 22، 24، 25، 26، 28، 29، 32، 33، 36، 37، 38 تم تحديدها بشكل تسلسلي بدقة على أنها جينيبين، سيستانشين F، سيستانتشيوسايد E، إشيناسيسيد، كريسانتوسيد، سيستانشين A، توبروسين A، لاركريسينول 4-0- - D غلوكوزيد، مولين جليكوسيدات، جليكوسيد إيزوكانابينويد، بينوريسين مونوميثيل إيثر جليكوسيد، 2'أسيتيل فيرباسكوسيد، سيستانش جليكوسيد. C، إيزوسيستانكوزيد C، توبروسين B، وسيستانش جليكوسيد D.

تستخدم هذه التجربة تقنية HPLC-IT-TOF-MS لتحليل المكونات الكيميائية المعقدة بسرعة ودقة وبشكل منهجي في المستخلص المائي لـ Cistanche deserticola، والذي يوفر أساسًا لتحليل الجودة الشامل لـ Cistanche deserticola والبحث عن المواد الدوائية في الجسم الحي.

الشكل 3-1 مخطط كروماتوجرام للمادة المرجعية المختلطة الأعلى: مخطط BPC في وضع الأيونات الموجبة: الأسفل: مخطط BPC في وضع الأيونات السالبة

الشكل 3-1 مخطط كروماتوجرام للمادة المرجعية المختلطة الأعلى: مخطط BPC في وضع الأيونات الموجبة: الأسفل: مخطط BPC في وضع الأيونات السالبة