يزيد مرض الكلى المزمن من النزف الدماغي الدقيق في الفأر والرجل

اتصال:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

Wei Ling Lau1،2 & Ane CF Nunes 1 & Vitaly Vasilevko3 & David Floriolli4 & Long Lertpanit 1 & Javad Savoj 1 & Maria Bangash 1 & Zhihui Yao 1،5 & Krunal Shah6 & Sameen Naqvi 1 & Annlia Paganini-Hill6 & Nosratola D. Vaziri 1 & David H Cribbs3 & Mark Fisher6،7

تم الاستلام: 25 آب (أغسطس) 2018 / المنقح: 28 كانون الثاني (يناير) 2019 / مقبول: 22 شباط (فبراير) 2019 / تم النشر على الإنترنت: 4 أيار (مايو) 2019

# المؤلف (المؤلفون) 2019

سيستانشيمكن أن يخففمرض كلوي

الملخص

يتم زيادة النزيف الدقيق في الدماغمزمنالكلىمرض(كد) ووجودها يزيد من خطر التدهور المعرفي والسكتة الدماغية. قمنا بفحص التفاعل بين CKD والنزيف الدقيق في الدماغ (الركيزة العصبية المرضية للنزيفات الدقيقة) في نماذج زراعة الفئران والخلية ودرسنا تطور عبء microbleed على تصوير الدماغ التسلسلي من البشر. دراسات الفئران: تم التحقيق في نموذجين من مرض الكلى المزمن: التهاب الكلية الأنبوبي الخلالي الناجم عن الأدينين واستئصال الكلية الجراحي 5/6. دراسات زراعة الخلايا: نمت الخلايا البطانية لمخ الفأر bEnd.3 لتلتقي ، وتم قياس سلامة الطبقة الأحادية بعد التعرض لمصل يوريمي بشري بنسبة 5-15 في المائة أو زيادة تركيزات اليوريا. الدراسات البشرية: تم تقييم تطور نزيف الدماغ الدقيق على التصوير بالرنين المغناطيسي التسلسلي من مرضى التحكم ، وغسيل الكلى السابق ، ومرضى غسيل الكلى. تم زيادة النزف الدقيق 2-2. 5- أضعاف في الفئران المصابة بمرض الكلى المزمن بشكل مستقل عن ارتفاع ضغط الدم في نموذج استئصال الكلية 5/6. تمت زيادة تلطيخ IgG في حيوانات CKD ، بما يتوافق مع زيادة نفاذية الحاجز الدموي الدماغي. أدى احتضان خلايا bEnd.3 مع مصل اليوريمي أو ارتفاع اليوريا إلى انخفاض يعتمد على الجرعة في المقاومة الكهربائية عبر البطانة. تسبب ارتفاع اليوريا في حدوث اختلالات في الهيكل الخلوي في الأكتين وانخفاض تعبير كلودين -5. في البشر ، كان انتشار النزف الدقيق 50 بالمائة في كلتا المجموعتين من مرض الكلى المزمن مقارنة بـ 10 بالمائة في الضوابط المتطابقة مع العمر. زاد عدد المرضى في مجموعة غسيل الكلى من النزيف الدقيق في متابعة التصوير بالرنين المغناطيسي بعد 1.5 سنة. يعطل مرض الكلى المزمن (CKD) الحاجز الدموي الدماغي ويزيد من نزيف الدماغ الدقيق في الفئران والنزيفات الدقيقة في البشر. يؤدي ارتفاع اليوريا إلى تغيير الهيكل الخلوي للأكتين وبروتينات الوصلة الضيقة في الخلايا البطانية المستنبتة ، مما يشير إلى أن هذه الآلية تشرح (جزئيًا على الأقل) النزيف الدقيق والنزيف الدقيق الذي لوحظ في الدراسات الحيوانية والبشرية.

الكلمات المفتاحية مرض الكلى المزمن. نزيف دقيق. نموذج الفأرة. زراعة الخلايا البطانية. الدماغ بالرنين المغناطيسي

للتخفيف منمزمنالكلىمع المرضcistanche

مقدمة

أحد أهم اكتشافات طب الأعصاب السكتة الدماغية في السنوات الأخيرة هو ظهورمزمنالكلىمرضأن يكون لها تأثير يتجاوز عوامل الخطر التقليدية مثل ارتفاع ضغط الدم والسكري [10 ، 11]. بالنظر إلى الانتشار المرتفع (حوالي 50 بالمائة) للنزيف الدماغي الدقيق والضعف الإدراكي لدى المرضى المصابين بمرض الكلى المزمن المتطور [2-4 ، 6 ، 7] ، فإن هذه العلاقة تستحق مزيدًا من الدراسة.

النزف الدماغي الدقيق هو بؤر صغيرة من الهيموسيديرين - الحديد يمكن إثباته في التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) ، ويعتقد أنه يعكس النزيف الدقيق الدماغي الكامن [12 ، 13] ، ويشير إلى زيادة خطر الإصابة بالسكتة الدماغية ، سواء النزفية أو الإقفارية [9 ، 14]. تسلسلات محددة للتصوير بالرنين المغناطيسي (صدى التدرج والتصوير المرجح القابلية للإصابة) توضح هذه المجالات البؤرية لفقدان الإشارة في حمة الدماغ التي تقيس أقل من أو تساوي 10 ملم [12 ، 15]. تعتمد النزيفات الدقيقة الدماغية على العمر ، مع انتشار يقترب من 20 في المائة بحلول سن 65 [16]. بالإضافة إلى العمر ، يعتبر ارتفاع ضغط الدم واعتلال الأوعية الدموية الدماغي من أفضل عوامل الخطر الموصوفة لتطور النزيف الدقيق [13 ، 17]. في المرحلة المتأخرة من مرض الكلى المزمن ، تتواجد النزيفات الدقيقة في ما يصل إلى 50 في المائة من السكان [2-4].

في الوقت نفسه ، يكون الضعف المعرفي أكثر انتشارًا وأكثر حدة في المستويات الأدنى منالكلىوظيفة[18] ، وبلغ معدل الانتشار 30-70٪ في مرضى غسيل الكلى المزمن [6 ، 7]. في تحليل مقطعي لعدد 338 مريضًا بالغسيل الكلوي تتراوح أعمارهم بين 55 عامًا وأكبر مع ضوابط مطابقة للعمر ، كان 34 بالمائة من مرضى غسيل الكلى يعانون من ضعف إدراكي شديد مقارنة بـ 12 بالمائة من الضوابط [6]. 35 في المائة أخرى من مجموعة غسيل الكلى لديهم ضعف إدراكي معتدل [6].

أظهرت العديد من الدراسات في مجموعات غير مصابة بمرض الكلى المزمن ارتباطًا قويًا بين النزف الدماغي الدقيق وتراجع الوظيفة الإدراكية [19-22]. تدعم البيانات الوبائية التعايش بين عبء النزيف الدقيق في التصوير بالرنين المغناطيسي والخلل الوظيفي الإدراكي في مرضى الكلى في نهاية المرحلة (الداء الكلوي بمراحله الأخيرة) [8 ، 23]. علاوة على ذلك ، أظهر تقرير حديث لـ 28 مريضًا مزمنًا بغسيل الكلى مع التصوير بالرنين المغناطيسي للدماغ وجود ارتباط بين النزيف الدقيق الجديد وانخفاض درجة فحص الحالة العقلية المصغرة (MMSE) [4]. علاوة على ذلك ، يعاني مرضى الداء الكلوي بمراحله الأخيرة (الداء الكلوي بمراحله الأخيرة) 3- إلى 4- أضعاف معدل الإصابة بالسكتات الدماغية الإقفارية والنزفية مقارنةً بعموم السكان [5]. في مجموعة من مرضى غسيل الكلى اليابانيين الذين كانوا خاليين من السكتات الدماغية في الأساس ، كان وجود النزف الدماغي الصغير مؤشرًا مستقلاً للنزيف داخل المخ خلال فترة متابعة مدتها 5- سنة [9].

هنا نُبلغ عن نتائج الدراسات التي أُجريت على الفئران ومرضى الكلى المزمن. وجدنا زيادة النزف الدقيق في الدماغ في الفئران CKD ووصف ضعف التقاطع الضيق البطاني واضطراب الهيكل الخلوي كآليات محتملة لتشكيل النزف الدقيق في بيئة CKD. أكد التحليل بأثر رجعي للتصوير بالرنين المغناطيسي للدماغ من غير المصابين بمرض الكلى المزمن ، وغسيل الكلى السابق ، وغسيل الكلى المزمن أن الداء الكلوي بمراحله الأخيرة عامل خطر كبير لتطور عبء microbleed.

طُرق

تجارب الفئران

الحيوانات التجريبية ومجموعات العلاج

تم التحقيق في نموذجين من الفئران CKD. (1) نموذج التهاب الكلية الأنبوبي الخلالي الأدينين: تم تغذية الفئران الذكور C57BL / 6J من مختبرات جاكسون (بار هاربور ، الشرق الأوسط) والتي تتراوح أعمارهم بين 1 0 - 12 أسبوعًا بنظام غذائي يحتوي على 0.2 بالمائة من الأدينين لمدة 18 يومًا للحث على اعتلال الكلية الخلالي المزمن ، تم وضعها العودة إلى الطعام العادي لمدة أسبوعين ، ثم إعادة تعريض نظام الأدينين الغذائي لمدة أسبوع واحد للحفاظ على CKD (الشكل 1 أ). تم الحفاظ على الفئران الضابطة في طعام منتظم. (2) نموذج استئصال الكلية 5/6: خضع ذكور الفئران C57BL / 6J الذين تتراوح أعمارهم بين 10 أسابيع لعملية جراحية على مرحلتين في مختبرات جاكسون والتي تضمنت استئصال الكلية الجزئي الأيسر متبوعًا باستئصال الكلية الأيمن بعد أسبوع واحد. تم تسليم الحيوانات إلى المختبر بعد أسبوع واحد من

الجراحة الثانية. تم استخدام هذين النموذجين لتحديد تأثير ارتفاع ضغط الدم. ارتفاع ضغط الدم هو السمة المميزة لنموذج استئصال الكلية 5/6 ، في حين أن Adenine- CKD غير مصحوب بارتفاع ضغط الدم [24].

تم اختيار حيوانات CKD بشكل عشوائي بدون حقن عديد السكاريد الدهني (LPS) أو حقن LPS. (في الدراسات التجريبية ، حددنا أن هناك حاجة إلى فترة أطول من التبول في الدم لاكتشاف العبء الأكبر للنزيف الدقيق العفوي في حيوانات CKD غير المعالجة ؛ الفئران التي تتبع نظامًا غذائيًا للأدينين لمدة 1 0 يومًا فقط بعد الثمانية عشر يومًا الأولى كان التعرض 3. 0 ± 0.4 نزيفًا دقيقًا لكل سم 2.)

بعد خمسة أسابيع من التحريض الأولي لـ CKD وفي عمر مكافئ في الضوابط ، تم إعطاء الفئران حقن LPS داخل الصفاق (IP) (Salmonella enterica serotype Typhimurium، L {0} MG، Sigma-Aldrich، St. ) للحث على النزيف الدقيق في الدماغ. تم إعطاء LPS في ثلاث جرعات ، 1 مجم / كجم عند 0 و 6 و 24 ساعة [25]. أعطيت الفئران المعالجة بـ LPS الماء بحقن محلول ملحي تحت الجلد مرتين إلى ثلاث مرات في اليوم لمدة 3 أيام بعد علاج LPS. تم قياس ضغط الدم (BP) قبل يومين من حقن LPS عبر مخطط التحجم في صفعة الذيل (CODA-S2 متعددة القنوات ، Kent Scientific). تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسية في إيرفين بجامعة كاليفورنيا.

حصاد الأنسجة وكيمياء الدم

تم التخلص من الفئران بعد أسبوع واحد من حقن LPS أو في عمر مكافئ في الحيوانات غير المعالجة عن طريق الاستنزاف باستخدام ثقب القلب تحت تخدير الأيزوفلورين المستنشق. تم استخدام إبرة قياس 26- كقنية وتم إدخالها في البطين الأيسر ، وتم تطبيق محلول PBS المثلج بمعدل تدفق يبلغ 7-8 مل / دقيقة. بعد، بعدما

نضح لمدة 5 دقائق ، تم تجميد نصف الكرة المخية الأيسر لطخة غربية. تم إصلاح نصف الكرة المخية الأيمن والكليتين طوال الليل في بارافورمالدهيد بنسبة 4 في المائة ثم تخزينها في برنامج تلفزيوني بارد قبل التقسيم. تم اقتطاع المصل من أجل كيمياء الدم. تم قياس نيتروجين اليوريا في الدم (BUN) باستخدام مجموعة قياس الألوان من BioAssay Systems (هايوارد ، كاليفورنيا). تم قياس الكرياتينين في الدم باستخدام الرحلان الكهربائي الشعري في مركز أوبراين لأبحاث الكلى (UT Southwestern ، دالاس ، تكساس).

الكشف عن النزف الدقيق

تم تركيب العقول في نسبة 1.5 في المائة من agarose وتم تقسيمها باستخدام جهاز اهتزازي لتوليد مقاطع إكليلية (4 0 ميكرومتر). تم جمع كل قسم خامس للتلوين الأزرق البروسي للكشف عن النزف الدقيق [26]. تم إجراء التلوين الأزرق البروسي باستخدام 5 في المائة من البوتاسيوم هيكساسيانوفيرات ثلاثي هيدرات و 10 في المائة حمض الهيدروكلوريك. بعد عشرين دقيقة ، تم شطف المقاطع بالماء وتطهيرها باللون الأحمر السريع النووي ، والجفاف ، والغطاء. تم تحديد النزف الدقيق عند التكبير × 20 حيث تم إعطاء رواسب أرجوانية زرقاء محسوبة بثلاث حقن عند 0.6 و 24 ساعة. تم إعطاء الترطيب تحت الجلد بمحلول ملحي لمدة 3 أيام بعد حقن LPS. تم قياس ضغط الدم الذيل (BP) قبل حقن LPS. تم التضحية بالفئران بعد أسبوع واحد من حقن LPS. ب أقسام كلية ملطخة من H&E توضح إصابة الفئران CKD التي يسببها الأدينين (اللوحة اليمنى) مقارنةً بالكلية الطبيعية من حيوان CTL (اللوحة اليسرى) ، تكبير × 20. شريط المقياس=100 ميكرومتر

مراقبين مستقلين ، ثم تم حساب المتوسط. تم التقاط صور المقاطع الملطخة بشكل إيجابي باستخدام مجهر ضوئي (نيكون إكليبس ، اليابان) لثلاثة حيوانات لكل مجموعة لحساب منطقة النزف الدقيق. تم مسح صور الشرائح بالكامل وتم استخدام برنامج ImageJ المجاني (الإصدار 10.2) من المعاهد الوطنية للصحة (www.imagej.nih.gov/ij/) في

حساب إجمالي مساحة سطح الدماغ. تم تطبيع عدد النزف الدقيق إلى إجمالي مساحة سطح الدماغ لكل حيوان.

النشاف الغربي

تم تجميد نصفي الكرة المخية لتحليل البروتين في وقت جمع الأنسجة وتم تجانسها في كاشف استخراج الأنسجة المثلج I (Thermo Fisher Scientific) المضاف إليه كوكتيل مثبط البروتياز (Roche Applied Science ، Indianapolis ، IN). تم قياس تركيزات البروتين باستخدام مجموعة فحص بروتين BCA (Thermo Fisher Scientific). تم إجراء الرحلان الكهربائي للهلام SDS-PAGE باستخدام 100 ميكروغرام من البروتين لكل عينة. تم نقل البروتينات إلى أغشية PVDF ثم تم حظرها

ساعة واحدة في 5 في المائة من الحليب الجاف منزوع الدسم الخالي من الدسم المحضر في محلول TBS-T (1 0 ملي مولار تريس- حمض الهيدروكلوريك ، 150 ملي كلوريد الصوديوم ، و 0.1 بالمائة توين -20) ​​ويتم تحضينه بأجسام مضادة أولية تستهدف كلاودين -5 (المخفف 1: 200 ، Sigma-Aldrich SAB4502981) ، الإكلودين (المخفف 1: 200 ، Invitrogen 711500 ، Thermo Fisher Scientific) ، والمعايرة للتحكم الداخلي GAPDH (المخفف 1:10 ، 000 ، Abcam ، Cambridge ، MA) في حليب خالي من الدسم بنسبة 5 في المائة TBS-T بين عشية وضحاها بدرجة 4. تم تحضين البقع بعد ذلك مع الأجسام المضادة الثانوية المضادة للأرانب أو المضادة للفأر لمدة ساعتين عند درجة حرارة الغرفة. بعد الغسل باستخدام TBS-T ، تم اكتشاف نطاقات باستخدام Luminescent Image Analyzer LAS -3000 (Fujifilm Life Science ، Stamford ، CT).

المناعية

للكشف عن تسرب الحاجز الدموي الدماغي (BBB) ​​، تم تحضين الأقسام بجسم مضاد IgG الثانوي المضاد للفأر الحيوي عند 1: 100 لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة (Vector Laboratories ، Burlingame ، CA ، USA). بعد الغسل باستخدام برنامج تلفزيوني ، تم تحضين المقاطع لمدة 30 دقيقة بمركب أفيدين-بيوتين-بيروكسيديز (مختبرات ناقلات) بتخفيف 1: 200. تم تطوير التلوين باستخدام 3 ، 3′- ديامينوبنزيدين (DAB ، مختبرات ناقلات) كروموجين. تم تحليل المنطقة الملطخة بـ IgG باستخدام برنامج ImageJ في أدمغة غير LPS CTL و CKD. تم اختيار عتبة تلطيخ IgG الإيجابي عن طريق التقييم اليدوي لحيوان التحكم لتلطيخ IgG ، ثم تم الحفاظ على هذه العتبة متساوية لجميع الحيوانات المشمولة [27].

Cistanche deserticola يمنع أمراض الكلى

تجارب ثقافة الخلية

زراعة الخلايا البطانية للمخ ومعالجة المصل

تم شراء 3 خلايا من الماوس الخالد من مجموعة American Type Culture Collection (ATCC ، Manassas ، VA). تم تأكيد النمط الظاهري للخلايا البطانية عن طريق التلوين المناعي لعامل فون ويلبراند.

تم تحضين الثقافات الخلوية في وسط Dulbecco المعدّل (DMEM ، ATCC 30-2002 عالي الجلوكوز) الذي يحتوي على 25 ملي مولار من الجلوكوز مع 1 0 بالمائة من مصل بقري جنيني (FBS) و 1 بالمائة بنسلين ستربتومايسين في حاضنة رطبة عند 37 درجة في جو من 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون و 95 في المائة من الهواء. تم استخدام الخلايا في المقطع 5 لجميع التجارب. تم زرع الخلايا بكثافة 5 × 106 على 12- حشوات بوليستر ترانسويل جيدة (0.4 ميكرومتر من المسام ، كوستار) وتم تحقيق التقاء في 24-48 ساعة. ثم تم تغيير وسط المزرعة لتعريض الخلايا لتركيزات مختلفة من FBS ، أو مصل الإنسان الطبيعي (HNS) ، أو مصل اليوريمي (CKD) من مرضى غسيل الكلى. تم قياس قراءات TEER باستخدام مقياس EVOM2 فولت / أوم (أدوات الدقة العالمية ، ساراسوتا ، فلوريدا) في ثلاثة مواقع لكل بئر للحصول على متوسط. استمرت التجارب لمدة 21 يومًا ، وتم تحديث وسط الثقافة كل 3-4 أيام. تم الحصول على NHS ومصل اليوريم من عينات مخزنة مسبقًا تم الحصول عليها بعد موافقة IRB والموافقة المستنيرة.

تجارب زراعة خلايا اليوريا

لفحص تأثيرات اليوريا (السموم المحتفظ بها الأكثر وفرة في CKD) ، تم تحضين 3 خلايا في DMEM عالي الجلوكوز بنسبة 10 بالمائة FBS بمفردها أو في وسط مكمل بـ 42 أو 72 مجم / ديسيلتر (70 أو 120 ميكرومتر) من اليوريا ( سيجما - الدريتش). تقارب تركيزات اليوريا هذه القيم قبل وبعد غسيل الكلى الموجودة عمومًا في مرضى الداء الكلوي بمراحله الأخيرة ، وتعتبر ذات صلة سريريًا [28]. في ختام فترة حضانة تبلغ 24- ساعة ، تم قياس TEER وتم حصاد الخلايا ومعالجتها لتحليل اللطخة الغربية. لتصور الهيكل الخلوي للأكتين ، نمت خلايا bEnd.3 على زلات غطاء زجاجي وتعرضت لتركيزات اليوريا المذكورة أعلاه لمدة 24 ساعة ، وثبت لمدة 10 دقائق في 4 في المائة فورمالين / برنامج تلفزيوني مبرد ، ثم تمت معالجتها من أجل تلطيخ التألق المناعي باستخدام أكتيستين 488 فلورسنت phalloidin مع صبغة DAPI النووية (كتالوج # PHDG 1- A، Cytoskeleton Inc.، Denver، CO). تم عمل شرائح ثلاثية لكل مجموعة ، وتم تصوير ثلاثة إطارات لكل شريحة على برنامج ImageJ لحساب مساحة تلطيخ phalloidin الذي تم تطبيعه في منطقة DAPI.

النشاف الغربي

تم تكوير 3 خلايا من تجارب اليوريا ، ثم تم تفكيكها في كاشف استخراج الأنسجة 1 (Thermo Fisher Scientific) مع مزيج مثبط البروتياز (Roche Applied Science). تم قياس تركيزات البروتين باستخدام مجموعة فحص بروتين BCA ، وتم إجراء النشاف الغربي على النحو الموصوف أعلاه باستخدام claudin -5 (مخفف 1: 500) وإكلودين (مخفف 1: 500) تم تطبيعه للتحكم الداخلي GAPDH (مخفف 1:20 ، 000). تم تكرار اللطخات الغربية ثلاث مرات على الأقل لكل عينة.

الدراسات البشرية

مراجعة مخطط الدماغ بأثر رجعي

تم فحص السجلات الطبية الإلكترونية بين 1 يناير 2008 و 31 ديسمبر 2014 في المركز الطبي بجامعة كاليفورنيا إيرفين باستخدام نظام Honest Broker و UCReX (جامعة كاليفورنيا للأبحاث) بعد موافقة IRB. تم تحديد ما قبل غسيل الكلى CKD (ن =8) ومرضى غسيل الكلى المزمن (ن =9) الذين أجروا على الأقل عمليتي تصوير بالرنين المغناطيسي للدماغ في نقاط زمنية منفصلة (من 10 مرضى غسيل الكلى تم تحديدهم مبدئيًا ، تمت إزالة 1 من التحليل النهائي بسبب الصور المفقودة في نظام الأشعة PACS). تم مطابقة عناصر التحكم مع وظائف الكلى الطبيعية (ن=10) يدويًا مع مرضى غسيل الكلى الكلوي المزمن حسب الجنس والعمر ± 5 سنوات.

مراجعة التصوير بالرنين المغناطيسي للنزيف الدماغي

تم إحصاء النزيف الدقيق من قبل أخصائي الأشعة العصبية (DF) وتحليله من أجل التقدم بمرور الوقت. تم إجراء التصوير بالرنين المغناطيسي للدماغ مع التصوير بالرنين المغناطيسي الموزون وقابلية الحساسية (SWI) و FLAIR (استرداد الانعكاس المخفف بالسوائل) على ماسحات التصوير بالرنين المغناطيسي 1.5T و 3T. تم إجراء سماكة الطبقة لتسلسلات SWI عند 2 مم ، مع فاصل الطبقة البينية 0. تم حساب النزف الدقيق على أساس SWI المحوري 2- مم. كان FLAIR في-

تم تشكيلها لاكتشاف آفات المادة البيضاء بسماكة شريحة 3 مم ، وكذلك بفاصل بين الطبقات يبلغ 0.

تحليل احصائي

لم تكن هناك بيانات متطرفة عند الفحص باستخدام اختبار Grubbs (طريقة الانحراف الطلابية القصوى ، http: // graphpad. com / quick calls / grubbs1 /). تمت مقارنة الاختلافات بين المجموعات في الفئران والإنسان من خلال اختبارات خي مربع (دقة فيشر) للمتغيرات الفئوية واختبارات t و ANOVA للمتغيرات المستمرة. يتم الإبلاغ عن البيانات المستمرة على أنها تعني ± SEM. بالنسبة لبيانات الماوس ، أجرينا كلاً من Kruskal – Wallis non-parametric و ANOVA أحادي الاتجاه مع اختبارات Tukey HSD. تم استخدام ANOVA ثنائي الاتجاه (CKD-yes / no و LPS- نعم / لا) لاختبار تفاعل CKD. اعتبرت الاختلافات بين المجموعات كبيرة إذا كانت P <0. 05.="" تم="" إنشاء="" الأرقام="" باستخدام="" برنامج="" graphpad="" prism="" 4="" (برنامج="" graphpad="" ،="" سان="" دييغو="" ،="">

نتائج

البقاء على قيد الحياة مع علاج LPS

كان لدى الفئران CKD التي عولجت بـ LPS معدل بقاء بنسبة 80 في المائة. فقط الفئران التي نجت لمدة أسبوع واحد بعد علاج LPS كانت

المدرجة في التحليلات النهائية. نجت جميع الفئران في المجموعات الأخرى حتى نهاية التجربة.

CKD زيادة كبيرة في النزيف الدقيق في الدماغ

العبء بعد علاج LPS

أظهرت الحيوانات المصابة بـ CKD الناجم عن الأدينين و 5/6 CKD ارتفاعًا ملحوظًا في نيتروجين اليوريا في الدم (BUN) وقيم الكرياتينين في الدم مقارنة مع حيوانات CTL (الجدول 1). كان Tail BP أعلى بشكل ملحوظ في حيوانات استئصال الكلية- CKD مقارنة مع حيوانات CTL و Adenine-CKD (الجدول 1) ؛ ومع ذلك ، كانت أعداد الميكروبلييد في مجموعتي CKD متشابهة. أكد تلطيخ H&E الإصابة الخلالية التي يسببها الأدينين في الكلى من الفئران CKD (الشكل 1 ب).

كان متوسط ​​عبء النزف الدقيق في الدماغ 2. 0 ± 0. 5 لكل سم 2 في الفئران التي لا تحتوي على LPS CTL وتمت زيادتها 2-2. 5- أضعاف في الحيوانات غير LPS CKD (الأدينين- الفئران CKD 4.5 ± 0. 9 لكل سم 2 ؛

استئصال الكلية - الفئران CKD 4.2 ± 1.1 لكل سم 2) (الجدول 1 ؛ الشكل 2 أ). بالنسبة للمجموعات التي لا تحتوي على LPS ، كانت الزيادة في النزف الدقيق مهمة بالنسبة للأدينين- CKD مقارنة مع CTL ولكن ليس لاستئصال الكلية- CKD. زاد علاج LPS من تكوين النزف الدقيق بنفس الدرجة في حيوانات CTL و CKD بواسطة