تحليل المكونات الممتصة في بلازما الفئران بعد تناوله عن طريق الفم لجزء شبه الإستروجين من القسطرة

تحليل المكونات الممتصة في بلازما الفئران بعد تناوله عن طريق الفم لجزء شبه الإستروجين من القسطرة

لمزيد من المعلومات: Ali.ma@wecistanche.com

انقر لمعرفة الفوائد والآثار الجانبية

الملخص:

لتحليل وتحديد المكونات في بلازما الفئران بعد تناول الجزء النشط من الفم عن طريق الفمcistanche، تم الكشف عن المكونات في بلازما الفئران عن طريق تأين كروماتوجرافي سائل عالي الأداء - تأين بالرش الكهربائي - وقت رباعي من قياس الطيف الكتلي للرحلة (HPLC-Q-TOF MS)． تم توضيح هياكل المكونات من خلال مقارنة أوقات الاحتفاظ بها وأطياف MS / MS مع تلك الخاصة بالمركبات المرجعية والبيانات المبلغ عنها في الأدبيات． تم تحديد 13 تركيبة كيميائية ، بما في ذلك 6 مكونات نموذجية ، مثل حمض الجينيبوسيدك ، ساليدروزيد ،Cistanoside A ، Echinacoside ، Acteoside ، Cistanoside D، 7 مكونات مستقلبات ، مثل 3 ، 4- ثنائي هيدروكسي فينيل إيثانول جليكوسيدات ، مثيلة أكتيوسيد ، أسيتيل سيستانوسيد ج ، 3 ، 4- ثنائي هيدروكسي فينيل إيثانول ، أسيتيل توبولوسيد ب ، مستقلب سيستانوسيد ب غلوكورونيد وميثيل -3 ، ثنائي هيدروكسي فينيل إيثانول． يمكن أن توفر النتائج بيانات أساسية لإلقاء الضوء على الأساس العلاجي لنشاط تنظيم شبه الاستروجينcistanche．

الكلمات الدالة:

cistanche. دواء يحتوي على مصل شبه الاستروجين كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء - تأين بالرش الكهربائي - وقت رباعي لمطياف كتلة الرحلة (HPLC-Q-TOFMS)

Cistanche Deserticolaهو نبات طفيلي في جذر الأشجار الصحراوية (مثل haloxylon amodendron ، tamarix ، إلخ). كنوع من الطب التقليدي الصيني الثمين والمغذي ، فإنه يحتوي على مجموعة متنوعة من التأثيرات الدوائية مثل تغذية الكلى يانغ ، وتنظيم المناعة ، وتأخير الشيخوخة ، ومكافحة الإشعاع وحماية الجهاز العصبي المركزي. ومن المعروف باسم "الجينسنغ الصحراوي". في الوقت الحاضر ، معظم الدراسات حول نشاط c. تقتصر مادة الصحراء في الداخل والخارج على تقييم النشاط الدوائي ، في حين لم يتم توضيح أساس المواد الديناميكية الدوائية ، مما يعيق بشكل خطير التطوير الرشيد وتطبيقCistanche Deserticola.

مكونات الطب الصيني التقليدي معقدة ومتنوعة ، وفقط بعد تناولها بشكل صحيح من خلال الامتصاص والتمثيل الغذائي في الجسم ، يمكن للمكونات أن تدخل الدم أخيرًا لتكون أساس المادة الدوائية للطب الصيني التقليدي. قد تكون هذه المكونات النشطة هي النموذج الأولي أو المستقلب للطب الصيني التقليدي ، أو قد تكون مكونات جديدة تكونت من خلال التفاعل المتبادل لمكونات مختلفة في الطب الصيني التقليدي ، أو قد تكون المواد الفعالة الفسيولوجية الذاتية التي تنتج عن العمل المباشر للأدوية على الجسم. لذلك ، يمكن أن تمثل مكونات الدم هذه أساس المادة الدوائية للطب الصيني التقليدي والطب المركب. يمكن أن يوفر تحليل المكونات والمستقلبات التي يمكن أن تدخل الدم بعد تناوله عن طريق الفم ، والبحث عن قواعد التفاعل بين المكونات ، أساسًا معينًا للبحث الأساسي عن المواد الصيدلانية.

تم استخدام طريقة زيادة وزن رحم الفئران وقياس الألوان MTT لفحص الأجزاء النشطة الشبيهة بالإستروجين وجرعة cistanche deserticola. أظهرت النتائج التجريبية الأولية أن معامل الرحم للفئران غير الناضجة قد زاد بشكل كبير عن طريق تناول الإيثانول داخل المعدة (95 في المائة) من مستخلص cistanche deserticola بمعدل 3 0 جم / كجم يوميًا ، وأن المصل المحتوي على الدواء عزز الانتشار من خلايا McF -7 بشكل ملحوظ (P <0. 01)="" ،="" والذي="" كان="" الجزء="" النشط="" من="" التأثير="" الشبيه="" بالإستروجين="" من="" cistanche="">

في هذه الدراسة ، تم استخدام مقياس الطيف الكتلي لوقت الطيران (HPLC-Q-TOF MS) عالي الأداء لتحليل وتحديد مكونات الدم ، ومكونات النموذج الأولي ، ومستقلبات الأجزاء النشطة من cistanche بعد إعطاء cistanche with estrogen ، والتكهن بالمسار الأيضي ، من أجل توفير أساس للبحوث الأساسية حول المواد الديناميكية الدوائية من cistanche مع هرمون الاستروجين.

1 جزء تجريبي

1.1 الأدوات والكواشف

المياه -600 كروماتوجراف سائل: Waters Co.، LTD. ، مزودة بمضخة متدرجة من أربعة عناصر ، وجهاز أخذ عينات آلي ، وآلة تفريغ الغاز ، وصندوق درجة حرارة العمود ، وكاشف DAD ، ومحطة عمل كيميائية إمباور ؛

Agilent -1290 6530 series Q-TOF LC-MS مطياف الكتلة: منتجات شركة American Agilent ؛

Xw -80 خلاط دوامة: Shanghai Yugong Machinery Co.، LTD.

Dk -80 حمام مائي ترموستاتي كهربائي: Shanghai Yiheng Technology Co.، LTD.

ألك -110. 4 ميزان تحليلي: Shanghai Renhe Scientific Instrument Co.، LTD.

مذبذب بالموجات فوق الصوتية H66MC: Ohaus Technology Co.، LTD.

Cistanche deserticola: تم شراؤها من سوق الأعشاب الطبية في San Ke Shu ، والتي حددها البروفيسور تشانغ ديليان من جامعة هاربين التجارية باسم Cistanche deserticola ؛

Mullein (رقم الدفعة 111530-200505) ، echinoside (رقم الدفعة 111670-200503) ، salidroside (رقم الدفعة 110736-200628): جميعها مقدمة من المعهد الوطني الصيني للتحكم في المنتجات الصيدلانية والبيولوجية ؛

الإيثيلين ستيلبيسترول: شركة قوانغتشو هامبدن للصناعات الدوائية ، المحدودة. الميثانول والأسيتونتريل: درجة HPLC ومنتجات شركة Shandong Yuwang Reagent Co.، LTD. كانت الكواشف الأخرى نقية تحليلية.

المياه التجريبية: ماء نقي.

إناث فئران ويستار: رقم الدُفعة SCXK- (JI) 2003 -- 2004 ، الوزن (220 ± 20) جم ، مقدم من مركز الحيوانات التجريبي التابع لقاعدة تشانغتشون الوطنية للصناعات البيولوجية.

1.2 تحضير محلول الدواء داخل المعدة

تم استخلاص المسحوق الخام من cistanche بعد ذلك ، تم دمج المستخلصات الثلاثة وتكثيفها تحت الضغط للحصول على المستخلص الذي تم تخزينه في الثلاجة لاستخدامه لاحقًا. قبل الاستخدام ، تم استخدام الماء المقطر لتحضير محلول داخل المعدة بتركيز 1.5 جم / مل.

1.3 إعداد الحل المرجعي

تم أخذ كمية محددة من مولين ، ساليدروزيد ، وإكينكوسايد وتم إذابتها بالكامل في ميثانول لتحضير 1 مل من محلول التباين المختلط ، يحتوي كل منها على 0 .2 مجم من المواد المرجعية الثلاثة. ضع محلول المادة المرجعية من خلال 0 غشاء مرشح 45 ميكرومتر ، واتركه جانبًا.

1.4 تحضير مصل دوائي ومصل فارغ

تحضير مصل يحتوي على دواء: وزن إناث فئران ويستار ، وإعطائها 1 مل / 100 جرام يوميًا ، على التوالي ، وإعطائها ماء مقطر ومحلول تزقيمية مرتين في الصباح والمساء ، لمدة 3 أيام متتالية ، 60 دقيقة بعد آخر جرعة ، تخدير مع 2 مل / كغ 10 في المائة هيدرات الكلورال عن طريق الحقن داخل الصفاق. تم أخذ الدم من الوريد البابي الكبدي وطرده عند 3 000 دورة / دقيقة لمدة 10 دقائق بعد التخثر الكامل. كان الطاف بعد ذلك مصلًا يحتوي على عقار.

تحضير مصل فارغ: كانت الفئران داخل المعدة مع كمية متساوية من الماء المقطر كل يوم ، وكانت طرق التحضير الأخرى مماثلة للمصل المحتوي على دواء.

تم أخذ مصل يحتوي على عقار مل ، تمت إضافة 5 أضعاف كمية الميثانول ، وتم إجراء دوامة في أنبوب الطرد المركزي لمدة 1 0 دقيقة. تم إجراء الطرد المركزي عند 14 000 دورة / دقيقة لمدة 1 0 دقيقة ، وتم امتصاص المادة الطافية وتجفيف المذيب. تمت إضافة 0.5 مل ميثانول باستخدام ماصة مجهرية لإذابة المادة المتبقية. تم ترشيح المتبقي بواسطة 0. 22 ميكرومتر من الغشاء الصغير الذي يسهل اختراقه وتحليله بواسطة كروماتوجرافيا.

1.5 الشروط التجريبية

الظروف الكروماتوغرافية: عمود Waters Symmetry ShieldTM RP18 (4.6 مم × 25 0 مم × 5 ميكرومتر) ؛ العمود الأولي: Nova - PakC18 Guard - PakTM ؛ معدل التدفق: 0.5 مل / دقيقة ؛ حجم الحقن: 10 ميكرولتر ؛ الطور المتحرك: أسيتونيتريل -0. 2٪ محلول حمض الفورميك المائي ؛ شروط التدرج: 0-35 دقيقة ، 5 بالمائة -34 بالمائة أسيتونيتريل ، 35-65 دقيقة ، 24 بالمائة -26 بالمائة أسيتونتريل ؛ درجة حرارة العمود: 30 درجة ؛ الطول الموجي للكشف: 254 نانومتر.

مصدر الأيونات الشرطي لقياس الطيف الكتلي: مصدر التأين بالرش الكهربائي بالضغط الجوي (ESI) ؛ معدل التدفق: {{0}}. 5 مل / دقيقة ؛ التفتيت ضغط الغاز: 0. 2 ميجا باسكال ؛ معدل تدفق الغاز الجاف: 8. 0 لتر / دقيقة ؛ درجة الحرارة الجافة: 30 درجة ؛ الجهد الشعري: 3.5 كيلو فولت ؛ معدل تدفق غاز الغمد: 12.0 لتر / دقيقة ؛ درجة حرارة غمد: 400 درجة. تم تحديد وضع مسح الأيونات الموجبة والسالبة ، ونطاق المسح الشامل هو m / z 100 ~ 3 000.

2 النتائج والمناقشة

2.1 تحليل HPLC-ESI-Q-TOF MS / MS للمكونات الكيميائية في مصل الأجزاء النشطة من هرمون الاستروجين في Cistanche deserticola

تم إجراء التحليل النوعي على عينات المصل المحتوية على الدواء المأخوذة من الفئران في الجزء النشط من هرمون الاستروجين من Cistanche deserticola بواسطة كاشف ESI-MS. تم استخدام وضع الأيونات الموجبة ووضع الأيونات السالبة للمسح على التوالي ، وتظهر النتائج في الشكل 1. من خلال مقارنة مخططات تدفق الأيونات الكلية من المستوى الأول لأوضاع المسح في الشكل 1 ، وجد أن الأيون الكلي كان للجريان الذي تم الحصول عليه في وضع الأيونات السالبة خصائص قوية وحساسية عالية ، لذلك تم اختيار مسح وضع الأيونات السالبة في هذه التجربة.

في وضع الأيونات السالبة ، تم استخدام كاشف esI-MS لإجراء تحليل نوعي لمصل الفئران بعد إعطاء جزء نشط من هرمون الاستروجين من Cistanche deserticola. من خلال التحليل المقارن لمسح المستوى الأول لمخطط تدفق الأيونات الإجمالي للمصل الفارغ ومصل الإدارة ، تم وضع علامة على ما مجموعه 13 قمة أيون جزيئي ، كما هو موضح في الشكل 2. تم افتراض القمم 2 و 3 و 5 و 7 و 9 و 10 تكون مكونات نموذجية ، والقمم 1 و 4 و 6 و 8 و 11 و 12 و 13 يفترض أنها مكونات أيضية.

وفقًا لقمم الأيونات الجزيئية التي تم اكتشافها بواسطة كل ذروة كروماتوغرافية في وضع الأيونات السالبة والوزن الجزيئي النسبي المعطى بواسطة الجزء المميز المقابل ، تم تحديد إجمالي 13 مللي ثانية من الذروة. تم تحديد المكونات الكيميائية لـ 13 قمة من خلال مقارنة معلومات UV-MS لكل مادة قياسية والإشارة إلى المكونات المذكورة في الأدبيات ، والتي تم سردها في الجدول 1.

ستة مكونات نموذجية هي جينيبوسيد ، ساليدروزيد ، سيستانش جليكوسيد أ ، إشنسا جليكوسيد ، مولين جليكوسيد ، وسيستانش جليكوسيد د ؛

سبعة مكونات أيضية هي 3 ، 4- ثنائي هيدروكسي فينيل إيثانول جليكوسيد ، ميثيل مولين جليكوسيد ، أسيتيل Cistanche glycoside g ، 3 ، 4- ثنائي هيدروكسي فينيل إيثانول ، أسيتيل توبولوسيد B ، Cistanche glycoside {B حمض الغلوكورونيك 4}} ، 4- ثنائي هيدروكسي فينيل إيثانول. من بين المستقلبات السبعة ، من المتوقع أن الذروة 1 (3 ، 4- ثنائي هيدروكسي فينيل إيثانول) ، والذروة 8 (3 ، 4- ثنائي هيدروكسي فينيل إيثانول) والقمة 13 (ميثيل 3 ، 4- ثنائي هيدروكسي فينيل إيثانول جليكوسيد) هي الأجزاء المتحللة للماء من جليكوسيدات فينيل إيثانول في Cistanche deserticola ؛ الذروة 4 (جليكوسيد مولين الميثيل) هو مستقلب جليكوسيد مولين ؛ الذروة 6 (الأسيتيل Cistanche glycoside g) هو مستقلب Cistanche glycoside G ؛ الذروة 11 (أسيتيل غوانوزين ب) هي مستقلب غوانوزين ب ؛ الذروة 12 (مستقلب حمض الغلوكونيك من Cistanche glycoside b) هو مستقلب Cistanche glycoside B.

شرح مفصل للحروف الصينية:

质谱 信息 يمثل معلومات الطيف الكتلي.

相对 分子 质量 يمثل الكتلة الجزيئية النسبية

化合物 推测 结果 تمثل نتائج المضاربة المركبة

代谢 يمثل مكونات التمثيل الغذائي

原型 يمثل مكونات النموذج الأولي

2.2 مناقشة

في هذه التجربة ، تم استخدام hplc-q-tof MS لتحديد 13 قمة كروماتوجرافية رئيسية في المصل بعد إعطاء الإستروجين مثل الجزء النشط من Cistanche deserticola. قد تكون هذه المواد ذات المفعول المباشر لـ Cistanche deserticola في الجسم الحي. في الوقت نفسه ، يعكس أيضًا أن فعالية الطب الصيني التقليدي ناتجة عن تنسيق متعدد المكونات أو تكامل أو تقييد. من خلال تحليل 13 مكونًا انتقاليًا في الدم ، ثبت أن فينيل إيثانول جليكوسيدات كانت المكونات النشطة الرئيسية لـ Cistanche deserticola. في دراسة المتابعة ، سيتم إنشاء علاقة تأثير الطيف المقابل لدراسة ارتباط تأثير الدواء ، وذلك لزيادة توضيح الأساس المادي لتأثير الدواء ، وتحديد علاقة الجرعة والوقت والتأثير للمكونات المتعددة في أوقات مختلفة نقاط في الجسم ، وذلك للكشف عن المسار الأيضي والوضع الأيضي لـ Cistanche deserticola.

3 الاستنتاجات

في هذه التجربة ، تم استخدام تقنية hplc-esi-q-tof MS / MS لتحليل مكونات الدم للإستروجين مثل الأجزاء النشطة من Cistanche deserticola ، وتم تحديد 13 مكونًا كيميائيًا ، وهو أمر ذو أهمية كبيرة لتوضيح أساس المادة الدوائية. من الاستروجين مثل المكونات النشطة في Cistanche deserticola ويمكن أن توفر أيضًا أساسًا موثوقًا لمزيد من البحث والأدوية السريرية لـ Cistanche deserticola.