Cistanche Deserticola Polysaccharides لها تأثير اعصاب
Mar 19, 2022
لمزيد من المعلومات: Ali.ma@wecistanche.com
يو ليو وآخرون
الملخص:
السكتة الدماغية الإقفارية مرض ذو معدلات مراضة ووفيات عالية.سيستانشالصحراءالسكريات(CDP) مجموعة واسعة من الآثار المفيدة ، بما في ذلك حماية الكبد والتوازن المناعي. بقدر ما نعلم ، التأثير الوقائي لـ CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)على الخلايا العصبية المصابة بالحرمان من الأكسجين والجلوكوز / ضخه (OGD / RP) لم يتم التحقيق فيها. في هذه الدراسة ، أصاب OGD / RP نموذج خلية PC12. باختصار ، CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)({0}. 05 و 0.5 و 5 ميكروغرام / مل) تمت إدارته قبل ضخه. التأثير الوقائي لـ CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)تم تقييمها بعد ذلك على أساس قابلية بقاء الخلية ، وتسرب نازعة هيدروجين اللاكتات (LDH) ، [Ca2 plus] I ، وإمكانات غشاء الميتوكوندريا (MMP) وموت الخلايا المبرمج ، وتم تقييم حالة andredox بعد إعادة التروية عن طريق فحص أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) ، الكاتلاز ( CAT) ، الجلوتاثيون بيروكسيديز (GSH-Px) والقدرة الإجمالية المضادة للأكسدة. استنادًا إلى حقيقة أن بروتين DJ المرتبط بمرض باركنسون -1 يشارك في مضادات الأكسدة الذاتية ويؤدياعصاببعد السكتة الدماغية ، درسنا التفاعل بين CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)و DJ {0}}. تم اكتشاف تعبير DJ -1 من خلال تحليل ELISA و Western blot ، وتم تقييم انتقال DJ -1 من خلال التألق المناعي. أظهرت النتائج أن CDP (0. 05 ، 0.5 ، و 5 ميكروغرام / مل) يضعف موت خلايا PC12 ، ويحافظ على MMP واستتباب الكالسيوم. الإجهاد التأكسدي المثبط ، وانخفاض موت الخلايا المبرمج. علاوة على ذلك ، حفز CDP (5 ميكروغرام / مل) بشكل ملحوظ إفراز وتعبير DJ -1. بشكل عام ، أشارت النتائج إلى أن CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)يمارس أاعصابتأثير ضد الإصابات الناجمة عن OGD / RP عن طريق تثبيط الإجهاد التأكسدي وتنظيم مسار DJ -1
الكلمات الدالة:Cistanche deserticola ، السكريات ، الحماية العصبية ، الحرمان من جلوكوز الأكسجين / ضخه ، الإجهاد التأكسدي ، DJ {0}}
1 المقدمة
السكتة الدماغية الإقفارية هي السبب الرئيسي الثاني للوفيات والسبب الرئيسي للعجز طويل الأمد على مستوى العالم [1]. من المتوقع أن ترتفع الوفيات بسبب السكتة الدماغية إلى 7.8 مليون في عام 2030 [2]. في الصين ، يموت من 58 إلى 142 لكل 100 شخص ، 000 من الأشخاص بسبب السكتة الدماغية كل عام. وبالتالي ، يجب تطوير استراتيجيات فعالة لعكس إصابة نقص التروية وضخه. تدعم الأدلة الشاملة أن الإجهاد التأكسدي هو عامل رئيسي يعزز تطور وتطور الاحتشاء الدماغي أثناء ضخه [3،4]. لذلك ، اكتشاف فعالاعصاباجتذبت العوامل القادرة على تقليل أنواع الأكسجين التفاعلية وقمع الإجهاد التأكسدي اهتمامًا كبيرًا بالبحث. يتوسط بروتين دي جي المرتبط بمرض باركنسون -1 الحماية العصبية عن طريق تحفيز التعبير الجيني المضاد للاستماتة والمضاد للأكسدة [4،5]. يمكن نقل DJ -1 إلى الميتوكوندريا عن طريق الإجهاد التأكسدي وتحفيز الميثوجين ويمكن إفرازه إلى المصفوفة خارج الخلية في ظل ظروف مرضية ، مثل سرطان الثدي وسرطان الجلد وإصابة OGD / RP [6]. علاوة على ذلك ، فإن DJ -1 مفيد في الاستهداف العلاجي للتنكس العصبي الإقفاري بسبب دوره الحاسم في مضادات الأكسدة [4،7]. في السنوات العشر الماضية ، أكدت عدة مجموعات أن DJ -1 قام بذلكاعصابالتأثيرات على نماذج نقص التروية الدماغي vivofocal ونماذج OGD / RP في المختبر [6-9]. وفي الوقت نفسه ، فإن بعض الأدوية ، بما في ذلك السيكلوسبورين A و sodium phenylbutyrate ، تلغي موت الخلايا العصبية عبر DJ -1 upregulation inischemia stroke [9،10] ].
سيستانشالصحراء، النبات المجفف المتكاملسيستانشالصحراءيتم إنتاج YCMa و Cistanche tubulosa Wight بشكل رئيسي في المناطق الصحراوية في شمال وشمال غرب الصين [11]. يعتبر C. في الوخز بالإبر ، يتم استخدامه كعلاج لأمراض الكلى المزمنة ، والعجز الجنسي ، والعقم عند النساء ، ونزيف الدم ، ونزيف الدم ، والإمساك الخرف [12]. السكريات الصحراوية ، عنصر نشط رئيسي معزول عنسيستانش الصحراء. CDP ، يعدل وظائف المناعة وتوازن الدهون ويوفر الحماية ضد الشيخوخة والأكسدة وتلف الكبد.(سيستأنشالصحراءالسكريات)يمنع إصابة نقص التروية - ضخه في القلب والكبد [13 ، 14]. ذكرت الدراسات الحديثة أن CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)غير سامة [12،15،16] ، والمواد الكيميائية النباتية الأخرى المستخرجة من C.اعصابآثار [11،12]. ومع ذلك ، لم يتم الإبلاغ عن الاستخدام المحتمل لـ CDP لتحسين تلف السكتة الدماغية الإقفارية.
في هذه الدراسة ، نفترض أن CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)يمنع الأكسدة للحماية العصبية. التأثيرات الوقائية المحتملة لـ CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)تم فحص الضرر الناتج عن السكتة الدماغية الخانقة باستخدام خلايا PC12 المصابة بـ OGD / RP. تم بعد ذلك استكشاف التفاعلات الأساسية المرتبطة بـ DJ -1.
2. الطرق
2.1. ثقافة الخلية ونموذج OGD / RP
تمت زراعة خلايا PC12 في وسط RPMI 1640 يحتوي على 10 بالمائة FBS عند 37 درجة في حاضنة عادية تحتوي على 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون. تم استبدال الوسيط كل 48 ساعة. تم إعداد نموذج OGD / RP. تم غسل خلايا PC12 وتعريضها لمحلول ملح متوازن من Earle. بعد ذلك ، تم نقل الخلايا إلى غرفة لاهوائية تحتوي على 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون و 95 في المائة N2 عند 37 درجة لمدة 4 ساعات ثم تم السماح لها بالخضوع لعملية إعادة الأكسجة ، وخلال هذه الخطوة ، تمت إضافة نفس الحجم من وسط الثقافة إلى الخلايا. بعد إعادة الأكسجة ، تم وضع الخلايا في حاضنة سمية لمدة 24 ساعة.
2.2. إدارة المخدرات
CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)تم شراؤها من شركة Yuanye Biological Technology Co. ، شنغهاي ، الصين (C23J7Y18405 ، نقاء> 98 بالمائة). تم استخدام Nimodipine ، وهو عقار وقائي من الخط الأول للسكتة الدماغية الإقفارية ، كمركب تحكم إيجابي [17-19]. تم حقن Nimodipine من شركة Bayer ، وتم تقسيم الخلايا بشكل عشوائي إلى ست مجموعات ، وهي المجموعة الضابطة ، والحقن (OGD / RP) ، و Nimo (5 ميكروغرام / مل) ، و CDP.(سيستأنشالصحراءالسكريات)(0. 05 ميكروغرام / مل) ، CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)(0. 5 ميكروغرام / مل) و CDP (5 ميكروغرام / مل). النيموديبين و CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)تمت إضافتها قبل ضخه. تمت تربية المجموعة الضابطة في وسط طبيعي وحضنت تحت ظروف طبيعية.
2.3 جدوى الخلية: فحوصات MTT و NRU
تم زرع خلايا PC12 (6 × 103 لكل بئر) في 96- صفيحة استنبات بئر. تمت معالجة الخلايا وفقًا لمتطلبات كل مجموعة. تمت إضافة MTT (Solarbio ، الصين) إلى الخلايا بتركيز 5 مجم / مل وحضنت لمدة 4 ساعات عند 37 درجة. فورمازان هو نتاج اختزال نازعة هيدروجين السكسينات في الخلايا الحية [20]. تم إضافة DMSO لتفكيك فورمازان الأزرق المتولد. تم الكشف عن الامتصاص بطول موجي 490 نانومتر باستخدام Microplate Reader (Thermo ، الولايات المتحدة الأمريكية) بعد اهتزاز الخلايا لمدة 10 دقائق عند 25 درجة. تم إظهار نتائج بقاء الخلية كنسبة مئوية من المجموعة الضابطة [21].
تم إجراء مقايسة الامتصاص الأحمر المحايد (NRU) وفقًا للبروتوكول المنشور سابقًا [22]. عندما اكتملت فترات ضخه ، تمت إضافة اللون الأحمر المحايد (سولاربيو ، الصين) إلى الخلايا بتركيز 5 0 ميكروغرام / مل. تم تحضين الخليط لمدة 3 ساعات. بعد ذلك ، تم غسل الخلايا بسرعة بمحلول يحتوي على 0.5 في المائة فورمالديهايد و 1 في المائة كلوريد الكالسيوم. تمت إضافة الخلايا لاحقًا إلى خليط يحتوي على 1 بالمائة حمض إيثيليك و 50 بالمائة أنهيدرو إيثانول. تمت قراءة اللوحات بامتصاص 540 نانومتر بعد اهتزاز الخلايا لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة. تم إظهار نتائج بقاء الخلية كنسبة مئوية من مجموعة التحكم.
Cistanche Deserticola السكرياتعندتأثير وقائي
2.4 تقييم السمية الخلوية
LDH هو إنزيم حشوي يحفز أكسدة اللاكتات توبيروفات. يتم تحرير LDH بسرعة في السائل خارج الخلية عند تلف غشاء الخلية. لذلك ، عادة ما يتم إجراء الكشف عن LDH لتقييم السمية الخلوية. [23]. اتبعت التعليمات الإجرائية التجريبية للمجموعة التجارية المقدمة من مجموعة مقايسة LDH (Jiancheng ، الصين). تم الكشف عن امتصاص كل عينة عند 440 نانومتر باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة. تم حساب النسبة المئوية لموت الخلية باستخدام الصيغة التالية: قابلية البقاء (النسبة المئوية)=(معالجة OD - فراغ معالجة ODT) / (نشاط OD Max LDH - نشاط OD Max LDH فارغ) × 100 بالمائة.
2.5 الكشف عن تركيز Ca2 زائد داخل الخلايا
تم قياس التركيز داخل الخلايا لـ Ca2 plus باستخدام Fluo -3 / AM [15]. تم غسل خلايا PC12 باستخدام PBS ثلاث مرات ثم احتضانها بـ 2 ميكرومتر Fluo -3 / AM (Beyotime ، الصين) لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة في الظلام. تم بعد ذلك غسل الخلايا باستخدام برنامج تلفزيوني ثلاث مرات لتنظيف الصبغة خارج الخلية. تم تحديد شدة التألق لـ Fluo -3 / AM على مجهر متحد البؤر مسح بالليزر (أوليمبوس ، اليابان). تم استخدام حزمة البرامج Olympus FV 10- ASW 4.1 Viewer و ImageJ لحساب قيم التدرج الرمادي
2.6. قياس MMP
JC -1 (5،5 ′، 6،6′-Tetrachloro -1، 1 ′، 3،3′-tetraethyl-imidacarbocyanine؛ Beyotime ، الصين) هو مجس مناسب حساس للجهد ويستخدم بشكل عام للتلطيخ الخلايا وتقييم MMP [24]. تم غسل خلايا PC12 مرتين باستخدام PBS بارد ثم تم تحضينها بمزيج يحتوي على 50٪ وسط و 50٪ سائل عامل لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة في الظلام ، ثم تم التخلص من الخليط واستبداله بوسط جديد. تم التقاط صور مضان حمراء وخضراء من خلال الفحص المجهري البؤري بالليزر. تم استخدام النسبة النسبية لإشارات التألق الأحمر والأخضر لقياس MMP [25]. تم استخدام حزمة البرامج Olympus FV 10- ASW 4.1 Viewer و ImageJ لحساب قيم التدرج الرمادي.
2.7. مقايسة كشف موت الخلايا المبرمج ، Hoechest33342 ، وتحليل التدفق الخلوي
تم استخدام Hoechst33342 ، صبغة ربط الحمض النووي ، لفحص موت الخلايا المبرمج [26]. بعد ضخه ، تم غسل خلايا PC12 باستخدام PBS ثلاث مرات واحتضانها بـ Hoechst33342 (Beyotime ، الصين) بتركيز 5 ميكروغرام / مل لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة في الظلام. بعد ذلك ، لوحظت الخلايا تحت مجهر متحد البؤر المسح بالليزر. أظهرت خلايا Theapoptotic مضان أزرق مكثف وتكثف النواة. لكل تجربة تلطيخ ، تم التقاط ثلاثة حقول عشوائية وتحديدها كمياً. تم استخدام Olympus FV 10- ASW 4.1 Viewer و ImageJ لحساب قيم التدرج الرمادي. تم حساب النسب المئوية للخلايا المبرمجية من خلال الصيغة التالية: كمية موت الخلايا المبرمج / المبلغ الإجمالي × 100 بالمائة [27].
2.8. قياس توليد ROS
يمكن للمسبار الفلوري 2 ′ ، 7′- ثنائي كلورو فلورسين ثنائي الأسيتات (DCFH-DA ، Jiancheng ، الصين) أن يخترق أغشية الخلايا ويمكن أن يتحلل بالماء إلى DCFH غير الفلوري. يتأكسد DCFH بواسطة ROS داخل الخلايا الفلورية DCF [29]. بعد ضخه ، تم غسل الخلايا مرتين باستخدام برنامج تلفزيوني ثم حضنت باستخدام DCFH-DA بتركيز نهائي قدره 10 ميكرومتر لمدة 45 دقيقة عند 37 درجة في الظلام. تمت ملاحظة الإسفار بواسطة مقياس الطيف الضوئي الفلوري بطول موجة إثارة يبلغ 485 نانومتر وطول موجة انبعاث يبلغ 535 نانومتر.
Cistanche Deserticola السكرياتعندتأثير وقائي
2.9 تحديد مؤشرات الإجهاد التأكسدي: مستويات CAT و GSH-Px و T-AOC
تم كشط الخلايا وإعادة تعليقها في برنامج تلفزيوني. تم صوت تعليق الخلايا التي تم الحصول عليها 45 مرة على الجليد وطردها عند 1000r / min لمدة 10 دقائق عند 4 درجات. تم الاحتفاظ بالمواد الطافية واستخدامها في الكشف [24]. تم قياس محتوى البروتين الكلي لطاف الخلية باستخدام مجموعة كاشف اختبار بروتين BCA (KeyGEN ، الصين). تم قياس أنشطة مستويات CAT و GSH-Px و T-AOC وفقًا لتعليمات الشركات المصنعة (Jiancheng ، الصين). تم الكشف عن الامتصاصية لكل عينة باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية.
2.10. قياس تركيز DJ -1 خارج الخلية
تم زرع خلايا PC12 (6 × 103 لكل بئر) في 96- ألواح زرع بئر. بعد إعادة التروية ، تم جمع طاف الخلية وتحليله بواسطة DJ -1 / PARK -7 ELISA Kit (Raybio ، الولايات المتحدة الأمريكية ) طبقاً لتعليمات الشركة الصانعة [9]. تم اكتشاف امتصاص كل عينة باستخدام Microplate Reader بطول موجي مزدوج يبلغ 450 نانومتر أو 540 نانومتر.
2.11. تحليل لطخة غربية
تم استخلاص البروتينات الخلوية باستخدام محلول تحلل بارد مثلج وفقًا لتعليمات الشركات المصنعة (KeyGEN ، الصين). تم تحديد تركيز البروتين باستخدام مجموعة كاشف اختبار بروتين BCA. تم حل كميات متساوية من محللات البروتين (20 ميكروغرام) من كل مجموعة في 12 في المائة من الصوديوم دوديسيل كبريتات - بولي أكريلاميد هلام الكهربائي ثم نقلت بعد ذلك إلى غشاء نيتروسليلوز. تم تحضين الغشاء باستخدام PBS الذي يحتوي على 5 بالمائة من الحليب منزوع الدسم لمدة ساعتين عند درجة حرارة الغرفة ثم تم فحصه باستخدام الأجسام المضادة لـ PARK7 / DJ -1 (ab76008 ، Abcam ؛ التخفيف 1: 1000) طوال الليل عند 4 درجات. بعد ذلك ، تم غسل الغشاء ثلاث مرات باستخدام PBST واحتضانه بجسم مضاد ثانوي من الماعز المضاد للأرنب IgG (SA 00001-2 ، مجموعة Proteintech ؛ التخفيف 1: 5000) عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين. تم اعتبار مضاد الجسم المضاد - - Tubulin (10759-1- AP ، Proteintech Group ؛ التخفيف 1: 1000) كعنصر تحكم. تم تصور عصابات البروتين بواسطة كواشف تفاعل التلألؤ الكيميائي المحسن (ECL). تم قياس كثافة النطاق باستخدام برنامج QuantityOne Analysis v.4.6.9.
2.12. تحليل الكيمياء المناعية
تم تثبيت خلايا PC12 في 4٪ بارافورمالدهيد لمدة 15 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة بعد معالجة إعادة التسريب [9]. بعد إزالة بارافورمالدهيد المفرط ، تم تحضين الخلايا في PBS التي تحتوي على 0. 3 بالمائة Triton X -100 لمدة 10 دقائق عند درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، تم غسل الخلايا ببرنامج تلفزيوني ثلاث مرات قبل أن يتم تحضينها بنسبة 5 في المائة من مصل الماعز الطبيعي لمدة ساعة واحدة. تم تحضين الخلايا بعد ذلك باستخدام أرنب فأر وحيد النسيلة مضاد لـ ATP synthase -chain (MABS1304 ، EMD Millipore ، التخفيف 1: 200) لتلطيخ الميتوكوندريا ثم حضنت لاحقًا مع الأجسام المضادة المضادة لـ PARK7 / DJ -1 (التخفيف 1: 100) لسبر البروتين DJ -1. تم غسل الخلايا واحتضانها باستخدام الماعز المضاد للأرنب IgG-Alexa 488 (أخضر ؛ A11034 ، Invitrogen ؛ التخفيف 1: 1000) والماعز المضاد للفأر IgG-Alexa 594 (أحمر ؛ A11032 ؛ Invitrogen ؛ التخفيف 1: 1000) لمدة 90 دقيقة. أخيرًا ، تم غسل الخلايا ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني وتم تركيبها على شرائح زجاجية بوسط تركيب يحتوي على DAPI. تم تصور الصور المناعية باستخدام مجهر متحد البؤر المسح بالليزر.
Cistanche Deserticola السكرياتعندتأثير وقائي
2.13. البيانات / التحليل الإحصائي
تم عرض جميع القيم على أنها تعني ± SD. تم تحديد الأهمية من خلال تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) ، متبوعًا باختبار Dunnett متعدد المقارنة. p <. 0="" 5="" تعتبر="" ذات="" دلالة="" إحصائية.="" تم="" تحليل="" البيانات="" التجريبية="" باستخدام="" برنامج="" spss="" 17.0="">
3. النتائج
3.1. CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)يمنع تلف الخلايا الناجم عن OGD / RP
أظهرت خلايا PC12 التي تعرضت لـ OGD / RP انخفاضًا كبيرًا في العدد. تم تغيير شكل الخلية وكسر غشاء الخلية. في اختبار MTT ، جدوى الخلية في CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)المجموعات ({0}. 05 و 0.5 و 5 ميكروغرام / مل) كانت 58.91 بالمائة ± 5.40 بالمائة و 61.13 بالمائة ± 3.81 بالمائة و 68.57 بالمائة ± 3.24 بالمائة على التوالي ، p <.05 (الشكل="" 1="" أ)="" ،="" وكان="" ذلك="" مع="" السيارة="" 51.68="" في="" المائة="" ±="" 3.89="" في="" المائة.="" أشارت="" هذه="" القيم="" إلى="" أن="">(سيستأنشالصحراءالسكريات)يحمي الخلايا من إصابة OGD / RP ويقلل من موت الخلايا. علاوة على ذلك ، كانت قابلية بقاء الخلية في مجموعة Nimo 77.02 بالمائة ± 5.22 بالمائة ، وهو ما يعادل تقريبًا تلك الموجودة في 5 ميكروغرام / مل CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)المجموعة المعالجة.
في اختبار NRU ، جدوى الخلية في CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)المجموعات ({0}. 05 و 0.5 و 5 ميكروغرام / مل) كانت 52.03 بالمائة ± 4.72 بالمائة و 58.49 بالمائة ± 2.50 بالمائة و 69.17 بالمائة ± 3.91 بالمائة على التوالي (الشكل 1 ب) وذلك مع السيارة 47.14 في المئة ± 2.88 في المئة. أشارت القيم إلى التأثير الوقائي المعتمد على التركيز لـ CDP.
على عكس السيارة (44.73 بالمائة ± 3.30 بالمائة) ، تم تقليل إطلاق LDH بشكل كبير في CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)مجموعات. في CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)المجموعات ({0}. 05 و 0.5 و 5 ميكروغرام / مل) ، كانت معدلات تسرب LDH 32.41 بالمائة ± 3.70 بالمائة ، 27.13 ± 2.79 بالمائة و 23.13 بالمائة ± 4.59 بالمائة على التوالي ، p <.01 (الشكل="" .="" 1c).="" علاوة="" على="" ذلك="" ،="" كانت="" معدلات="" تسرب="" ldh="" في="" مجموعة="" nimo="" 21.99="" بالمائة="" ±="" 4.02="" بالمائة="" ،="" والتي="" كانت="" مساوية="" تقريبًا="" لتلك="" في="" المجموعة="" المعالجة="" بـ="" 5="" ميكروغرام="" مل="">
3.2 CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)الزيادة المخففة التي يسببها OGD / RP لـ [Ca2 plus] i
تم تحسين مستويات Ca2 plus داخل الخلايا في خلايا PC12 إلى 4146.60 ± 195.97 بعد إصابة OGD / RP على عكس المجموعة الضابطة (373.62 ± 75.69). CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)يمكن للمجموعات ({0}. 05 و 0.5 و 5 ميكروغرام / مل) تقليل مستوى Ca2 زائد داخل الخلايا إلى 2921.25 ± 222.19 و 2015.85 ± 230.53 و 1768.43 ± 426.12 على التوالي (الشكل 2A و C) ). علاوة على ذلك ، انخفض مستوى Ca2 plus في المجموعة المعالجة بـ 5 ميكروغرام / مل CDP إلى مستوى مشابه لذلك في مجموعة Nimo (1591.19 ± 213.21).
3.3 CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)التخفيف الناجم عن OGD / RP الناجم عن MMP
مقارنة بمجموعة التحكم (1.67 ± 0. 89) ، أظهرت مجموعة المركبات (0. 48 ± 0. 1 0) تألق FL أخضر أكثر من FL الأحمر مضان (الشكل 2B و D). انخفضت النسب بين مضان FL الأحمر والأخضر إلى 1.11 ± 0. 26 و 1.18 ± 0 .16 في 0.5 و 5 ميكروغرام / مل CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)المجموعات المعالجة على التوالي ، p <.01. تم="" تقليل="" مضان="" الأخضر="" fl="" بشكل="">
3.4. CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)منع موت الخلايا المبرمج الناتج عن OGD / RP
تم تسجيل الخلايا التي تظهر كروماتينات مكثفة أو نوى مجزأة كخلايا موت الخلايا المبرمج [30]. كشفت نتائج فحص Hoechst33342 عن ظهور نوى مكثفة بعد OGD / RP (الشكل 3 أ و ج). لوحظ وجود كثافة عالية في مضان FL في النواة في مجموعة المركبات. تم إضعاف شدة الفلورة الفلورية للنواة في 5 ميكروغرام / مل CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)المجموعة المعالجة. قمنا بتحليل معدل موت الخلايا المبرمج في خلايا PC12 عن طريق قياس الخلايا الزميل باستخدام تلوين مزدوج FITC-Annexin V / PI (الشكل 3 ب و د). كان لدى المجموعة الضابطة 4.16٪ ± 0. 24٪ معدل موت الخلايا المبرمج ، بينما كان لدى مجموعة المركبات 22.98٪ ± 0. 66٪. في المجموعة المعالجة بـ 5 ميكروغرام / مل بالـ CDP ، كان معدل موت الخلايا المبرمج للخلايا 7. 86 بالمائة ± 1.16 بالمائة.
3.5 CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)المخفف الذي يسببه OGD / RP في تراكم أنواع الأكسجين التفاعلية داخل الخلايا وحالة الأكسدة والاختزال المحفوظة
آثار CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)على الإجهاد التأكسدي على أساس توليد ROS ، و GSH-Px ، وأنشطة CAT ، ومستويات T-AOC. زادت مستويات ROS في خلايا PC12 المصابة بـ OGD / RP وأصبحت أعلى بكثير من تلك الموجودة في المجموعة الضابطة (p <.01). وفي="" الوقت="" نفسه="" ،="" مستويات="" ros="" في="">(سيستأنشالصحراءالسكريات)المجموعات ({0}. 05 و 0.5 و 5 ميكروغرام / مل) انخفضت بطريقة تعتمد على الجرعة (p <.01 ؛="" الشكل="" 4="" أ).="" علاوة="" على="" ذلك="" ،="" زاد="" cdp="" أيضًا="" بشكل="" كبير="" من="" مستويات="" t-aoc="" (p=""><.05 ؛="" الشكل="" 4b)="" و="" cat="" (p=""><.05 ؛="" الشكل="" 4c)="" و="" gsh-px="" (p=""><.05 ؛="" الشكل="" 4d)="" مقارنةً="" بالمركبة="" مجموعة.="" أنشطة="" مضادات="" الأكسدة="" الذاتية="" في="">(سيستأنشالصحراءالسكريات)زادت المجموعات.
3.6 CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)حفز إفراز DJ -1 وعزز تعبير DJ -1
تم اكتشاف تغييرات تركيز DJ -1 في طاف الخلية وكشفت العلاقة المحتملة بين DJ -1 و CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات). تم ملاحظة إطلاق DJ -1 من خلايا PC12 المصابة بـ OGD / RP (الشكل 5). تم تنظيم DJ -1 بشكل كبير في 5 ميكروغرام / مل CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)- المجموعة المعالجة (38.66 ± 8.44 بيكوغرام / مل) وأصبحت زيادة كبيرة عن تلك الموجودة في مجموعة المركبات (18.33 ± 3.80 بيكوغرام / مل ، p <.01) ومجموعة التحكم (9.67 ± 3.96 بيكوغرام / مل ، ف <.01) .
للتحقيق في آثار CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)على التعبير داخل الخلايا لـ DJ -1 ، قمنا بقياس مستويات بروتين DJ -1 بواسطة النشاف الغربي. زادت مستويات تعبير البروتين DJ -1 بشكل ملحوظ خلال 24 ساعة بعد ضخه. على النقيض من ذلك ، عززت المعالجة اللاحقة للـ CDP 5 ميكروغرام / مل بشكل ملحوظ من الإفراط في التعبير عن DJ -1 مقارنة بمجموعة المركبات (p <.01 ،="" الشكل="">
3.7 CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)نقل DJ المحسن -1 إلى الميتوكوندريا
كانت خلايا PC12 ملطخة بمضاد PARK7 / DJ -1 والأجسام المضادة لـ ATP synthase -chain (الشكلان 7 و 8). يرتبط الجسم المضاد المضاد لـ ATP بمركب الميتوكوندريا I ، ومستضد الارتباط في الغشاء الداخلي للميتوكوندريا. كشفت النتائج أن DJ -1 انتقل إلى الغشاء الداخلي للميتوكوندريا بعد إهانة OGD / RP (الشكل 8). وفي الوقت نفسه ، كشفت نتائج تلوين DJ {12}} والميتوكوندريا المزدوجة أن CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)سهّل DJ - 1 نقل الميتوكوندريا والتوطين المشترك (الشكل 8). أشارت هذه النتائج إلى تفاعل مباشر بين DJ -1 واعصابتأثير CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)(الشكل 9).
4. مناقشة
في هذه الدراسة ، أبلغنا بشكل مباشر عن CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)يقلل بشكل فعال من تلف خلايا PC12 الناجم عن OGD / RP عن طريق تنظيم بروتين DJ -1. CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)تحسين قابلية بقاء الخلية ، وتقليل تلف غشاء الخلية ، والحفاظ على Ca2 داخل الخلايا بالإضافة إلى التوازن ، ومنع فقدان MMP ، وتقليل موت الخلايا المبرمج ، والإجهاد التأكسدي المكبوت ، وتعزيز التعبير عن DJ -1 ، وتحسين انتقال DJ -1 إلى الميتوكوندريا. تم مؤخرًا تورط DJ -1 في تنظيماعصابتأثير وسلامة الميتوكوندريا. قدمت هذه النتائج أدلة مقنعة علىاعصابآثار CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)ضد نقص التروية. علاوة على ذلك ، يؤدي التفاعل بين CDP و DJ -1 تشغيل ملفاعصابدور في تلف خلايا PC12 الناجم عن OGD / RP. قد تؤدي النتائج المذكورة أعلاه إلى تطوير فهمنا للتأثير المفيد لـ CDP وقد توفر معلومات مفيدة لعلاج السكتة الدماغية في المستقبل.
تُعزى السكتة الدماغية الإقفارية إلى سلسلة معقدة من الآليات الكيميائية الحيوية والجزيئية ، بما في ذلك السمية المفرطة ، والكالسيوم الزائد ، والإجهاد التأكسدي [31]. يستخدم OGD / RP على نطاق واسع كنموذج في المختبر من نقص التروية - ضخه ويستخدم لاستكشاف التغيرات العصبية والكيميائية الحيوية. يعتبر خط خلية PC12 حساسًا لإصابة OGD / RP [2]. يُظهر عددًا من خصائص وخصائص الخلايا العصبية المتعاطفة [32] وبالتالي خطوط الخلايا العصبية المستخدمة على نطاق واسع للبحث المتعلق بآليات الضرر العصبي الناجم عن السكتة الدماغية [33 ، 34]. أشارت العديد من الدراسات إلى أن الإجهاد التأكسدي يلعب دورًا حيويًا في السكتة الدماغية وتلف نقص تروية الدماغ [35-37]. يمكن للبروتين المرتبط بمرض باركنسون DJ -1 أن يمنع التنكس العصبي الإقفاري والخلل السلوكي عن طريق الحد من إصابة الخلايا العصبية التي تتوسطها أنواع الأكسجين التفاعلية [7]. لذلك ، استخدمنا نموذج خلية PC12 للإصابة OGD / RP للتحقيق فياعصابتأثير CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات).
تم تقييم درجة الإصابة في خلايا PC12 التي يسببها OGD / RP بواسطة فحوصات إطلاق MTT و NRU و LDH. إدارة CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)({0}. 05 و 0.5 و 5 ميكروغرام / مل) أدى إلى تحسين بقاء الخلية وتقليل إطلاق LDH. تضمنت الآثار المفيدة لعلاج CDP أيضًا انخفاض الحمل الزائد للكالسيوم داخل الخلايا والحفاظ على MMP. تم ربط شذوذ تركيز Ca2 زائد داخل الخلايا ، وخاصة الحمل الزائد للكالسيوم في الميتوكوندريا ، بموت الخلايا المبرمج والموت الناجم عن السكتة الدماغية الإقفارية [38]. يمكن أن يعكس MMP كفاءة سلسلة نقل الإلكترون وقد تمت الإشارة إليه كمؤشر اضطراب مرضي لهذا النظام [39]. يمكن أن تؤدي كل من ارتفاعات تركيز Ca2 زائد داخل الخلايا وفقدان MMP إلى زعزعة استقرار بنية الخلايا العصبية وتؤدي في النهاية إلى تلف الخلايا أو موت الخلية [21،40]. في هذه الدراسة ، أظهرت النتائج أن CDP يثبط بشكل كبير الحمل الزائد داخل الخلايا Ca2 بالإضافة إلى زيادة مستويات MMP في خلايا PC12 إصابة OGD / RP. يلعب موت الخلايا المبرمج دورًا حيويًا في الفيزيولوجيا المرضية المعقدة لإصابة نقص التروية الدماغية وضخه. تشير البيانات المتزايدة إلى أن موت الخلايا المبرمج له دور في اختلال وظائف الميتوكوندريا. يعتبر تبديد MMP حدثًا مبكرًا أدى إلى موت الخلايا المبرمج [8،39]. موت الخلايا المبرمج هو عملية موت الخلايا المبرمج المعتمد على الطاقة للتخلص من الخلايا الزائدة عن الحاجة. العديد من الخلايا العصبية في السكتة الدماغية ستخضع لموت الخلايا المبرمج [41]. في هذه الدراسة ، أجرينا تلطيخ Hoechst33342 و Annexin V-FITC / PI لفحص تأثير CDP على موت الخلايا المبرمج [23،28]. أظهرت النتائج أن CDP يحافظ على سلامة النواة ويقلل من معدل موت الخلايا المبرمج. كل هذه النتائج أشارت إلى أن النشاط المضاد للاستماتة للـ CDP ساهم في التأثير المفيد في إصابة الخلايا العصبية في خلايا PC12.
تتعرض الخلايا للتلف الناتج عن نقص التروية الناجم عن تراكم ROS المفرط ، والذي يمكن أن يؤدي إلى أكسدة الدهون ، وتلف غشاء الخلية ، والحمل الزائد للكالسيوم ، وخلل الميتوكوندريا ، مما يؤدي في النهاية إلى موت الخلايا المبرمج والموت [42]. يشير استهلاك مضادات الأكسدة الداخلية ، مثل SOD و CAT و GSH-Px ، أيضًا إلى حدوث الشكل 9. الآليات المحتملة للتأثيرات الوقائية لـ CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)ضد تلف خلايا PC12 الناجم عن OGD / RP. يمنع علاج CDP الإجهاد التأكسدي ، ويستقر Ca2 بالإضافة إلى التركيز و MMP ، ويعزز تعبير DJ -1 وتوطينه في الميتوكوندريا. Y. Liu et al. الطب الحيوي والعلاج الدوائي 99 (2018) 671 - 680 678 من الإجهاد التأكسدي أثناء نقص التروية وضخه. في هذه الدراسة ، أظهرت مجموعة OGD / RP زيادة كبيرة في ROS وانخفاض في CAT و GSH-Px و T-AOC مقارنة بالمجموعة المعالجة بـ 5 ميكروغرام / مل CDP. ومع ذلك ، لاحظنا انخفاضات كبيرة في معدلات توليد ROS واستهلاك مضادات الأكسدة الذاتية (CAT ، GSH-Px ، و T-AOC) في مجموعات CDP. كانت التأثيرات المفيدة في مجموعة CDP 5 ميكروغرام / مل قريبة من تلك الموجودة في مجموعة Nimo. أشارت النتائج إلى أن CDP يثبط إنتاج ROS ويعيد الدفاع الأنزيمي المضاد للأكسدة.
DJ -1 هو مفتاح تفاعلي للاختزالاعصابالبروتين المتورط في تنظيم الإجهاد التأكسدي في السكتة الدماغية. تشمل التأثيرات المفيدة للتعبير المفرط لـ DJ -1 بقاء الخلية من نقص التروية - ضخه والحفاظ على وظيفة الميتوكوندريا والتشكل ، مثل تعجيل فتح المسام الانتقالية لنفاذية الميتوكوندريا [39،43]. أشارت الدراسات السابقة إلى أن التأثير الوقائي لـ DJ -1 في الخلايا المعرضة لـ OGD / RP يرتبط بخصائصه المضادة للأكسدة وانتقال الميتوكوندريا [43-45]. يقوم DJ -1 بأداء حماية عصبية داخلية فعالة في التخفيف من عيوب الميتوكوندريا عن طريق الإزاحة [46]. أشارت العديد من الدراسات إلى أن انتقال DJ -1 قد يكون له تأثير على حركة الميتوكوندريا ، ويعزز تفاعل الخلية الخلوية ، ويعزز عمليات أخرى مؤيدة للبقاء على قيد الحياة.
يؤثر DJ {0}} على العديد من العمليات ، مثل ترحيل الخلايا والالتصاق ، والانجذاب الكيميائي ، والتكاثر ، والاستماتة ، في كل من النماذج المختبرية والحيوية [6،9،47،48]. باستخدام نموذج السكتة الدماغية لخلايا PC12 المصابة OGD / RP ، استكشفنا العلاقة المحتملة بين CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)و DJ -1. تم التعرف على تعبير DJ - 1 الزائد بواسطة ELISA والنشاف الغربي. إلى جانب هذه الوظيفة ، أظهر أحد الاكتشافات الرئيسية في التجارب أن التعبير المفرط الكبير عن DJ -1 حدث عند CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)(5 ميكروغرام / مل) كانت تدار قبل ضخه. اقترح هذا ممكناعصابتأثير في العلاقة بين CDP و DJ -1. علاوة على ذلك ، لاحظنا أن DJ -1 الموجود في الميتوكوندريا في ظل ظروف OGD / RP والتعبير الوفير لـ DJ -1 يقلل من الحساسية الخلوية لـ ROS ويثبط الإجهاد التأكسدي [45]. أشارت النتائج إلى أن CDP ينظم ويعزز DJ -1 ، والذي يعمل كحلقة وصل جزيئية بين خلل الميتوكوندريا والإجهاد التأكسدي ويوفر تطورًا لموت الخلايا الثانوي المتأصل في السكتة الدماغية [5،47،49-51]. جنبًا إلى جنب مع استقرار DJ -1 في الميتوكوندريا ، CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)أدى العلاج إلى زيادة بقاء الخلية ، واستقرار Ca2 بالإضافة إلى التوازن ، وتحسين تبديد MMP ، ومنع موت الخلايا المبرمج المتعلق بالميتوكوندريا [43]. بشكل عام ، أشارت نتائجنا إلى أن CDP يمارس روايةاعصابآلية في علاج السكتة الدماغية.
5. الخلاصة
أشارت نتائجنا إلى أن CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)يحمي خلايا PC12 من الإصابات التي يسببها OGD / RP من خلال تأثيرات مضادات الأكسدة ، والتي تُنسب جزئيًا إلى المسار بوساطة DJ -1. تتضمن هذه التأثيرات انخفاضًا في معدل تلف غشاء الخلية ، والحفاظ على التوازن [Ca2 plus] I ، وتحسين تبديد MMP ، وتثبيط موت الخلايا المبرمج ، وتوهين ROS داخل الخلايا ، وتعديل مستويات DJ -1. أشارت النتائج أيضًا إلى أن التفاعلات بين CDP و DJ -1 تضخم الحماية العصبية وتحافظ على سلامة الميتوكوندريا. لذلك ، يمكن حماية الخلايا العصبية الضعيفة بواسطة CDP(سيستأنشالصحراءالسكريات)عبر تحسين تعبير DJ -1 أثناء السكتة الدماغية.
شكر وتقدير
تم دعم هذه الدراسة من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (المنحة 81360649) ، والبرنامج الوطني للعلوم والتكنولوجيا (المنحة 2015BAK45B01) ، وبرنامج دعم العلوم والتكنولوجيا لمنطقة نينغشيا هوي الذاتية الحكم (منحة 2016BZ07).
Cistanche Deserticola السكرياتعند تأثير وقائي
مراجع
[1] HD Tsai، JS Wu، MH Kao، JJ Chen، GY Sun، WY Ong، TN Lin، Clinacanthus nutans يحمي الخلايا العصبية القشرية من السمية الناتجة عن نقص الأكسجة عن طريق تقليل تنظيم HDAC1 / 6 و Neuromol. ميد. 18 (2016) 274-282.
[2] J. Zhao، R. Liu، Stroke 1-2-0: برنامج الاستجابة السريعة للسكتة الدماغية في الصين ، Lancet Neurol. 16 (2017) 27-28.
[3] PM George ، GK Steinberg ، العلاجات الجديدة للسكتة الدماغية: تفكيك الفيزيولوجيا المرضية للسكتة الدماغية وتأثيرها على العلاجات السريرية ، Neuron 87 (2015) 297-309.
[4] H. Yao، T. Ago، T. Kitazono، T. Nabika، NADPH أوكسيديز المرتبط بالفيزيولوجيا المرضية في النماذج التجريبية للسكتة الدماغية ، Int. جيه مول. علوم. (2017) 18.
[5] J. Cao، M. Ying، N. Xie، G. Lin، R. Dong، J. Zhang، H. Yan، X. Yang، Q. He، B. Yang، The oxidation States of DJ {{ 1}} تملي مصير الخلية استجابة للإجهاد التأكسدي الناجم عن 4- hpr: الالتهام الذاتي أو موت الخلايا المبرمج؟ علامة الأكسدة والاختزال المضادة للأكسدة. 21 (2014) 1443–1459.
[6] Y. Kaneko ، H. Shojo ، J. Burns ، M. Staples ، N. Tajiri ، CV Borlongan ، DJ -1 يحسن موت الخلايا الإقفارية في المختبر ربما عن طريق مسار الميتوكوندريا ، Neurobiol ، Dis. 62 (2014) 56-61.
[7] D. Yanagisawa، Y. Kitamura، M. Indian، K. Takata، T. Taniguchi، S. Morikawa، M. Morita، T. Inubushi، I. Tooyama، T. Taira، et al.، DJ {{ 1}} يحمي من التنكس العصبي الناجم عن نقص تروية الدماغ البؤري وضخه في الفئران ، J. Cereb. تدفق الدم. التقى. 28 (2008) 563-578.
[8] Y. Kaneko ، N. Tajiri ، H. Shojo ، CV Borlongan ، تظهر الخلايا العصبية الأولية للفئران المحرومة من الأكسجين والجلوكوز انتقال DJ -1 إلى ميتوكوندريا صحية: هدف علاجي قوي للسكتة الدماغية ، CNS Neurosci. هناك. 20 (2014) 275-281.
[9] N. Tajiri، CV Borlongan، Y. Kaneko، Cyclosporine A العلاج يلغي موت الخلايا العصبية الناجم عن نقص التروية عن طريق الحفاظ على سلامة الميتوكوندريا من خلال تنظيم البروتين المرتبط بمرض باركنسون DJ -1 ، الجهاز العصبي المركزي. هناك. 22 (2016) 602-610.
[10] RX Yang ، J. Lei ، BD Wang ، DY Feng ، L. Huang ، YQ Li ، T. Li ، G. Zhu ، C. Li ، FF Lu ، et al. ، المعالجة المسبقة مع Phenylbutyrate sodium Alleviates cerebral ischemia / إصابة ضخه عن طريق تنظيم بروتين DJ -1 ، الأمامي. نيورول. 8 (2017) 256.
[11] C. Gu، X. Yang، L. Huang، Cistanches Herba. مراجعة علم الأدوية العصبية ، الجبهة. فارماكول. 7 (2016) 289.
[12] Z. Li، H. Lin، L. Gu، J. Gao، CM Tzeng، Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): واحدة من أفضل الهدايا الصيدلانية للطب الصيني التقليدي ، Front. فارماكول. 7 (2016) 41.
[13] Q. Liu، J. Li، J. Wang، J. Li، JS Janicki، D. Fan، تأثيرات وآليات الطب العشبي الصيني في تخفيف إصابة عضلة القلب نقص التروية ، Evid.- Based Compl. بديل. (2013) (2013) 925625.
[14] يحفز HS Wong، KM Ko، Herba Cistanches دورة الأكسدة والاختزال الجلوتاثيون الخلوية بواسطة أنواع الأكسجين التفاعلية المتولدة من تنفس الميتوكوندريا في H9c2 cardiomyocytes ، فارم. بيول. 51 (2013) 64-73.
[15] T. Wang، X. Zhang، W. Xie،سيستانشDeserticola YC Ma ، "Desert ginseng": مراجعة ، Am. J. تشين. ميد. 40 (2012) 1123-1141.
[16] L. Gu، WT Xiong، C. Wang، HX Sun، GF Li، X. Liu،سيستانشالصحراءديكوتيون يخفف من سمية الخصية التي يسببها هيدروكسي يوريا في ذكور الفئران ، Asian J. Androl. 15 (2013) 838-840.
[17] إي هرتسفيلد ، سي ستراوس ، س. سيميرماخر ، ك. بورك ، ر. هورستكورتي ، ف. دهغاني ، سي شيلر ، التحقيق فياعصابتأثير النيموديبين على خلايا Neuro2a عن طريق نموذج إجهاد شبيه بالجراحة ، Int. جيه مول. علوم. 15 (2014) 18453–18465.
[18] ج. فهاب زاده ، ن. رهبر روشانديل ، س. أ. إبراهيمي ، محمد محمودان ،اعصابتأثير noscapine على إصابة الحرمان من الأكسجين والجلوكوز الدماغي ، فارماكول. ممثل 67 (2015) 281-288.
[19] CP Wang، LZ Zhang، GC Li، YW Shi، JL Li، XC Zhang، ZW Wang، F. Ding، XM Liang، Mulberroside A يحمي من الضعف الإقفاري في الثقافة الأولية للخلايا العصبية القشرية للفئران بعد الحرمان من الأكسجين والجلوكوز المتبع بواسطة ضخه ، J. Neurosci. الدقة. 92 (2014) 944-954.
[20] X. Qi و R. Zhou و Y. Liu و J. Wang و WN Zhang و HR Tan و Y. Niu و T. Sun و YX Li و JQ Yu و Trans-cinnamaldehyde المحمية خلايا PC12 ضد الحرمان من الأكسجين والجلوكوز / الإصابات الناجمة عن ضخه (OGD / R) عن طريق مكافحة موت الخلايا المبرمج ومضادات الأكسدة ، Mol. الخلية الحيوية. 421 (2016) 67-74.
[21] R. Chang ، R. Zhou ، X. Qi ، J. Wang ، F. Wu ، W. Yang ، W. Zhang ، T. Sun ، Y. Li ، J. Yu ، تأثيرات الحماية من aloin على الأكسجين و الإصابة الناجمة عن الحرمان من الجلوكوز في خلايا PC12 ، Brain Res. ثور. 121 (2016) 75-83.
[22] M. Agrawal، V. Kumar، AK Singh، MP Kashyap، VK Khanna، MA Siddiqui، AB Pant، Trans-resveratrol يحمي الخلايا الإقفارية PC12 عن طريق تثبيط عوامل النسخ المرتبطة بنقص الأكسدة وزيادة مستويات إنزيمات الدفاع المضادة للأكسدة ، ACS تشيم. نيوروسسي. 4 (2013) 285-294.
[23] KW Zeng ، LX Liao ، MB Zhao ، FJ Song ، Q. Yu ، Y. Jiang ، PF Tu ، Protosappanin B يحمي خلايا PC12 من الموت العصبي الناجم عن الحرمان من الأكسجين والجلوكوز عن طريق الحفاظ على التوازن في الميتوكوندريا عن طريق تحريض المعتمد على يوبيكويتين تدهور البروتين p53 ، يورو. فارماكول. 751 (2015) 13-23.
[24] NT Ma، R. Zhou، RY Chang، YJ Hao، L. Ma، SJ Jin، J. Du، J. Zheng، CJ Zhao، Y. Niu، et al. الخلايا العصبية الحُصَينية المزروعة المصابة بالحرمان من الأكسجين والجلوكوز وضخه ، J. Nat. ميد. 69 (2015) 575-583.
[25] Y. Wang، W. Ma، A. Jia، Q. Guo، Parecoxib يحمي الخلايا العصبية القشرية للفأر من السمية العصبية التي يسببها OGD / R عن طريق تنظيم Bcl -2 ، Neurochem. الدقة. 40 (2015) 1294-1302.
[26] MP Ponnusamy، P. Seshacharyulu، A. Vaz، P. Dey، SK Batra، MUC4 يعمل على استقرار تعبير HER2 ويحافظ على تعداد الخلايا الجذعية السرطانية في خلايا سرطان المبيض ، J. Ovarian Res. 4 (2011) 7.
[27] R. Wang ، L. Peng ، J. Zhao ، L. Zhang ، C. Guo ، W. Zheng ، H. Chen ، A. Gardenamide ، يحمي خلايا RGC -5 من H (2) O ( 2) إهانات الإجهاد التأكسدي الناجم عن طريق تنشيط مسار إشارات PI3K / Akt / eNOS ، Int. جيه مول. علوم. 16 (2015) 22350-22367.
[28] LP Sun، X. Xu، HH Hwang، X. Wang، KY Su، YL Chen، Dichloromethane مقتطفات من البروبوليس تحمي الخلية من الإجهاد التأكسدي الناجم عن الحرمان من الأكسجين والجلوكوز Y. Liu et al. الطب الحيوي والعلاج الدوائي 99 (2018) 671 - 680 679 عن طريق الحد من موت الخلايا المبرمج ، Food Nutr. الدقة. 60 (2016) 30081.
[29] L. Wang، Y. Zhang، T. Asakawa، W. Li، S. Han، Q. Li، B. Xiao، H. Namba، C. Lu، Q. Dong،اعصابتأثير السربين العصبي في الحرمان من الأكسجين والجلوكوز والخلايا النجمية المعالجة بإعادة الأكسجة في المختبر ، PLoS One. 10 (2015) e0123932.
[30] Z. Zhiwen ، W. Haitao ، S. Fu ، Z. Lihua ، JL Peter ، Q. Remi ، Z. Wenhua ، أيونات الليثيوم تخفف من موت الخلايا المبرمج الناتج عن الحرمان من المصل في خلايا PC12 من خلال تنظيم إشارات Akt / FoxO1 Pathways ، علم الأدوية النفسية (بيرل) 12 (2015) 625-633.
[31] EJB Dariush Mozaffffarian، S. Alan، et al.، ملخص تنفيذي لإحصائيات أمراض القلب والسكتة الدماغية لعام 2016. تقرير من جمعية القلب الأمريكية ، الدورة 133 (2016) 447-454.
[32] JE Jumblatt ، TA ، تنظيم مواقع الارتباط المسكارينية بواسطة عامل نمو الأعصاب في خلايا ورم القواتم PC12 ، Nature 297 (1982) 152-154.
[33] S. Afrazi، S. Esmaeili-Mahani، V. Sheibani، M. Abbasnejad، Neurosteroid allopregnanolone يخفف من موت الخلايا المبرمج الناتج عن الجلوكوز ويمنع آلام الاعتلال العصبي السكري التجريبية: في الدراسات المختبرية والحيوية ، J. Steroid Biochem. مول. بيول. 139 (2014) 98-103.
[34] X. Liu، X. Zhu، M. Chen، Q. Ge، Y. Shen، S. Pan، Resveratrol يحمي خلايا PC12 ضد الاستماتة التي يسببها OGD / R عبر مسار التأشير بوساطة الميتوكوندريا ، Acta Biochem Biophys Sin . 48 (2016) 342–353.
[35] PW Kleikers ، K. Wingler ، JJ Hermans ، I. Diebold ، S. Altenhofer ، KA Radermacher ، B. Janssen ، A. Gorlach ، HH Schmidt ، NADPH oxidases كمصدر للإجهاد التأكسدي والهدف الجزيئي في نقص التروية / ضخه إصابة ، J. Mol. ميد. (بيرل) 90 (2012) 1391-1406.
[36] إف سي ليو ، هاي تساي ، إتش بي يو ، مؤثرات واقية للأعضاء من مستخلص النبيذ الأحمر ، ريسفيراترول ، في إصابة إعادة ضخ الدم المؤكسد بوساطة الإجهاد ، الأكسيد. ميد. خلية لونجيف. (2015) 568634.
[37] LK Seidlmayer و VV Juettner و S. Kettlewell و EV Pavlov و LA Blatter و EN Dedkova وآليات تنشيط mPTP المتميزة في نقص التروية وإعادة التروية: مساهمات Ca2 plus و ROS و pH و polyphosphate غير العضوي Cardiovasc. الدقة. 106 (2015) 237 - 248.
[38] F. Su ، AC Guo ، WW Li ، YL Zhao ، ZY Qu ، YJ Wang ، Q. Wang ، YL Zhu ، يحمي التكييف المسبق للإيثانول بجرعة منخفضة من الحرمان من الأكسجين والجلوكوز / إصابة الخلايا العصبية الناتجة عن إعادة الأكسدة عن طريق تنشيط الموصلية الكبيرة ، Ca2 بالإضافة إلى K plus المنشط بالإضافة إلى القنوات المختبرية ، Neurosci. ثور. 33 (2017) 28-40.
[39] Y. Li ، M. Wang ، S. Wang ، تأثير تثبيط انشطار الميتوكوندريا على استقلاب الطاقة في الخلايا العصبية في حصين الفئران أثناء إصابة نقص التروية / إعادة التروية ، Neurol. الدقة. (2016) 1-8.
[40] C. Rui، L. Yuxiang، H. Yinju، Z. Qingluan، W. Yang، Z. Qipeng، W. Hao، M. Lin، L. Juan، Z. Chengjun، et al.، Protection effffects of عديد السكاريد Lycium barbarum على الخلايا العصبية الحصينية المستزرعة في الفئران حديثي الولادة المصابة بالحرمان من الأكسجين والجلوكوز وضخه ، J. Mol. هيستول. 43 (2012) 535-542.
[41] BR Broughton ، DC Reutens ، CG Sobey ، آليات موت الخلايا المبرمج بعد نقص التروية الدماغية ، السكتة الدماغية 40 (2009) e331–339.
[42] Jordan M. Willcox، AJS Summerlee، Relaxin يحمي الخلايا النجمية من نقص الأكسجة في المختبر ، PLoS One. 9 (3) (2014) e90864.
[43] X. Zhang، D. Yuan، Q. Sun، L. Xu، E. Lee، AJ Lewis، BS Zuckerbraun، MR Rosengart، Calcium / calodulin-based protein kinase ينظم PINK1 / Parkin و DJ {{3} } مسارات التخفيف أثناء تعفن الدم ، FASEB J. 31 (2017) 4382-4395.
[44] S. Vasseur، S. Afzal، J. Tardivel-Lacombe، DS Park، JL Iovanna، TW Mak، DJ -1 / PARK7 هو وسيط مهم للاستجابات الخلوية التي يسببها نقص الأكسجة ، Proc. ناتل. أكاد. علوم. USA 106 (2009) 1111-1116.
[45] Z. Xianghong، Y. Du، S. Qian، X. Li، L. Emma، J. Anthony، Brian Lewis، S. Zuckerbraun، Matthew R. Rosengart، Calcium / calodulin-based protein kinase ينظم PINK1 / Parkin and DJ -1 pathways of mitophagy أثناء تعفن الدم ، FASEB J. (2017). [
46] MS Choi، T. Nakamura، SJ Cho، X. Han، EA Holland، J. Qu، GA Petsko، JR Yates 3rd، RC Liddington، SA Lipton، Transnitrosylation من DJ -1 إلى PTEN يخفف من موت الخلايا العصبية في نماذج مرض باركنسون ، J. Neurosci. 34 (2014) 15123-15131.
[47] RK Dongworth، UA Mukherjee، AR Hall، R. Astin، SB Ong، Z. Yao، A. Dyson، G. Szabadkai، SM Davidson، DM Yellon، DJ Hausenloy، DJ -1 يحمي من موت الخلية بعد إصابة نقص التروية القلبية - ضخه ، ديس موت الخلايا. 5 (2014) e1082.
[48] A. Di Cello، M. Di Sanzo، FM Perrone، G. Santamaria، E. Rania، E. Angotti، R. Venturella، S. Mancuso، F. Zullo، G. Cuda، F. Costanzo، DJ { {1}} هو واصم مصل حيوي موثوق به لتمييز سرطان بطانة الرحم عالي الخطورة ، Tumor Biol. 39 (2017) 1010428317705746.
[49] H. Aleyasin، MW Rousseaux، PC Marcogliese، SJ Hewitt، I. Irrcher، AP Joselin، M. Parsanejad، RH Kim، P. Rizzo، SM Callaghan، et al.، DJ -1 يحمي nigrostriatal المحور من السم العصبي MPTP عن طريق تعديل مسار AKT ، Proc. ناتل. أكاد. علوم. USA 107 (2010) 3186-3191.
[50] RM Canet-Aviles، MA Wilson، DW Miller، R. Ahmad، C. McLendon، S. Bandyopadhyay، MJ Baptista، D. Ringe، GA Petsko، MR Cookson، The Parkinson's disease protein DJ -1 isاعصاببسبب توطين الميتوكوندريا المدفوعة بحمض الكبريتيك السيستين ، بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 101 (2004) 9103-9108.
[51] M. Liu، B. Zhou، ZY Xia، B. Zhao، SQ Lei، QJ Yang، R. Xue، Y. Leng، JJ Xu، Z. Xia، Hyperglycemia-induced Inhibition of DJ -1 أضعف التعبير من فعالية حماية القلب بعد التكييف الإقفاري في الفئران ، الأكسيد. ميد. خلية لونجيف. (2013) (2013) 564902.
