عديد السكاريد Cistanche يعزز امتصاص Echinacoside في الجسم الحي ويؤثر على ميكروبيوتا الأمعاء

جهة الاتصال: emily.li@wecistanche.com

زيفي فو وآخرون

الملخص

السكريات وجليكوسيدات فينيلثانويدمنCistanche Deserticolaلقد ثبت أن لها فوائد صحية مختلفة ، ومع ذلك ، فإن التأثير التفاعلي بين هذين النوعين من المركبات في الجسم الحي غير معروف بالتفصيل. كان الهدف من هذه الدراسة هو التحقيق في الإجراءات التآزرية لعديد السكاريد cistanche مع جليكوسيد الفينيثانويد وتأثير السكريات على الكائنات الحية الدقيقة في الأمعاء. تم تغذية فئران سبراغ-داولي بأنواع مختلفة من عديد السكاريد لمدة 20 يومًا ، في اليوم الأخير ، تم إعطاء جميع الفئرانإشنكوسايدعند 100 مجم / كجم. تمت مقارنة النتائج بشكل رئيسي على الاختلاف في معاملات الحرائك الدوائية ، وتركيب ميكروبيوتا الأمعاء ، ومحتويات الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة. أشارت النتائج إلى أن جميع السكريات القاتلة ، بما في ذلك السكريات الخام ، جزيئية عاليةالوزن السكريات، والسكريات منخفضة الوزن الجزيئي ، يمكن أن تنظم تنوع ميكروبيوتا الأمعاء ، وتزيد من البكتيريا المفيدة وتحسن بشكل خاص نمو Prevotella spp. وكذلك تحسين إنتاج الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة وامتصاص إشنكوسايد. من خلال استكشاف الإجراءات التآزرية لعديد السكاريد مع الجزيئات الصغيرة ، تشير هذه العناصر إلى أن السكريات الحاملة للسكريات ، وخاصة السكريات منخفضة الوزن الجزيئي ، يمكن استخدامها كمعالج ميكروبيوتا الأمعاء لتعزيز الصحة.

الكلمات الدالة:سيستانشالصحراءعديد السكاريدإشيناكوسايدجراثيم الأمعاء

انقر هنا للحصول على مزيد من المعلومات حول منتجات cistanche

1 المقدمة

في السنوات الأخيرة ، أصبح من الواضح أن السكريات تعدل تكوين ميكروبيوتا الأمعاء وأن التغييرات يمكن أن تؤدي إلى امتصاص غذائي متعدد [1] ، مما ينتج عنه وظيفة فسيولوجية [2،3]. تم إثبات أن السكريات المتعددة من الطب الصيني التقليدي (TCM) هي المرشحين المثاليين لتنظيم ميكروبيوتا الأمعاء وأظهرت تأثيرات بريبايوتك. في الجهاز الهضمي ، تتلامس السكريات وبعض المركبات الجزيئية الصغيرة حتمًا ، وتظهر بعض التأثيرات على الأنشطة البيولوجية [4]. كنوع واحد من المكونات النشطة الرئيسية في Panax ginseng ، والذي يستخدم على نطاق واسع لآلاف السنين ، أظهرت السكريات الجيدةتحسينفي المعويالتمثيل الغذائيواستيعابمنالجينسنوسيداتفي الجسم الحي [5]. أظهر عديد السكاريد Codonopsis Pilosula تأثير تعزيز امتصاص الصابونين في الفئران التهاب القولون الناجم عن كبريتات ديكستران الصوديوم [6]. تم الكشف عن وجود عديد السكاريد في غانوديرما لوسيدوم ، وخاصة الجزء ذو الوزن الجزيئي المرتفع.بريبيوتيكالمهامفي نماذج الفئران دسباقتريوز القناة الهضمية عالية الدهون التي يسببها النظام الغذائي [7]. عديد السكاريد لونجان ينظم الجراثيم المعوية ومستقلبات الأمعاء (زيادة محتويات البيروفات والبيوتانوات) لإنتاج أنشطة مناعية [8].

يستخدم Cistanche deserticola ، باعتباره الطب الصيني التقليدي ، على نطاق واسع كمكمل غذائي في الصين. أظهرت الدراسات الدوائية أنه معروضاعصاب, مناعي, الهرمونيةموازنة, مضاد-إعياء, مضاد-التهاباتحماية الكبدمضاد-مؤكسد, مضاد-جرثومي, مضاد-على نطاق واسع، ومضاد-ورمآثار [9]. أظهر التحليل الكيميائي أن جليكوسيدات الفينيثانويد والسكريات كانت المكونات النشطة الرئيسية. أظهر Echinacoside ، جليكوسيد الفينيثانويد الرئيسي في C. أثبتت الدراسات أنه يمكن استقلاب إشنكوسايد بواسطة ميكروبيوتا الأمعاء في المختبر [10،11]. ومع ذلك ، لم يتم التحقيق في الأدلة في الجسم الحي. كما نعلم ، لعبت الجراثيم المعوية دورًا مهمًا في التوسط في استقلاب النشاط الحيوي للأدوية العشبية. لذلك ، كان الهدف الرئيسي من هذا العمل هو التحقيق في تأثيرالسكريات cistancheعلى ميكروبيوتا الأمعاء والتأثيرات على استقلاب إشنكوسايد.

2. المواد والأساليب

2.1. المواد والكيماويات

تم الحصول على Cistanche deserticola YC Ma من Alashan ، شركة تنمية صناعة الرمل الداخلية منغوليا مانديلا المحدودة ، الصين. تم التصديق عليها من قبل الأستاذ Lijuan Zhang (جامعة تيانجين للطب الصيني التقليدي). تم إيداع عينة قسيمة في مختبرنا. تم الحصول على المادة القياسية مثل إشنكوسايد ، أكتيوسيد ، وحمض الكلوروجينيك من المعهد الوطني للتحكم في المنتجات الصيدلانية والبيولوجية (بكين ، الصين). كان نقاء كل معيار أكبر من أو يساوي 98 بالمائة. تم شراء الأسيتونيتريل والميثانول من الدرجة اللونية من Fisher Scientific (Pitts burgh ، PA). تم شراء حمض الفورميك من شركة Anaqua Chemical Supply Inc. (ويلمنجتون ، الولايات المتحدة الأمريكية). كانت الكواشف الكيميائية الأخرى من الدرجة التحليلية وتم شراؤها من شركة Sinopharm Chemical Reagent Co.، Ltd. (شنغهاي ، الصين).

تم توفير ذكور فئران Sprague-Dawley (200-220 جم) بواسطة شركة Beijing HFK Bioscience CO.، LTD (بكين ، الصين ، رقم الترخيص SCXK (Jing) 2014- 0004). تم تربية جميع الحيوانات وإيوائها تحت ظروف SPF في منشأة الحيوانات. تم إجراء التجربة وفقًا للإرشادات التي وضعتها رعاية الحيوان وتستخدم لجنة من TJUTCM وتتوافق مع دليل رعاية واستخدام حيوانات المختبر المنشور من قبل المعاهد الوطنية الأمريكية للصحة (NIH المنشور رقم 85-23 ، المنقح عام 1996 ). بعد فترة تأقلم لمدة أسبوع ، تم تقسيم الفئران بشكل عشوائي إلى أربع مجموعات: مجموعة التحكم ، مجموعة السكريات الكلية ، مجموعة السكريات الجزيئية العالية ، ومجموعة السكريات الجزيئية المنخفضة. تتكون كل مجموعة من 6 فئران تم تربيتها في نفس القفص.

2.2. تحضير السكريات

3. تم تنظيف وتجفيف 0 كجم من Cistanche deserticola YC Ma عند 40 درجة في فرن التجفيف بالهواء ، ثم تم سحقها إلى مسحوق خشن. تم استخلاص المسحوق الخشن الجاف باستخدام 85 بالمائة من الإيثانول المائي (حجم / حجم) عند 60 درجة مرتين ، وساعتين لكل مرة. كانت النسب الصلبة والسائلة 1:12 و 1:10 على التوالي. تم استخلاص المخلفات العشبية بالماء عند 100 درجة مرتين أخريين ، ووقت الاستخراج ونسبة السائل الصلب كانت متماثلة مع 85 بالمائة من الإيثانول. تم تجميع محلول الماء وتركيزه تحت ضغط مخفض ثم ترسبه في 80 بالمائة من الإيثانول ، ويبقى تحت 4 درجات لمدة 24 ساعة. تم عزل الراسب من خلال الطرد المركزي عند 8000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق عند 4 درجات ثم تم تجفيفه بالتجميد للحصول على السكريات الكلية (ZT). تم بعد ذلك إذابة ZT في ماء منزوع الأيونات وترشيحه على غشاء من الألياف المجوفة 100 كيلو دالتون ، وتم جمع عديد السكاريد الجزيئي المرتفع المتسلل (HM). تم ترشيح المرشح المخترق بغشاء ترشيح فائق 6 كيلو دالتون. تم الحصول على السكريات الجزيئية المتوسطة (MM) والسكريات الجزيئية المنخفضة المرشح المتخلل (LM).

2.3 التوصيف الأساسي لعديد السكاريد

تم تحديد محتوى عديد السكاريد بواسطة طريقة حمض الكبريتيك الفينول باستخدام الجلوكوز كمعيار [12]. تم تحديد محتوى البروتين الكلي بواسطة طريقة BCA [13]. تم إجراء تحليل تكوين أحادي السكاريد بواسطة HPLC (نظام UltiMate 3 0 00) مجهزًا بعمود SinoPak C18 (5 ميكرومتر ، 150 مم × 4.6 مم) وكاشف صفيف الصمام الثنائي (VWD -3000). تم إجراء الفصل الكروماتوجرافي لمشتقات PMP (1- phenyl -3- methyl -5- pyrazolone) قبل العمود باستخدام محلول فوسفات 100 ملي وأسيتونتريل بنسبة 82:18 (v / v ، في المائة) كمرحلة متحركة بمعدل تدفق 1.0 مل / دقيقة. تم حقن 10 ميكرولتر من كل عينة وتم استخدام وقت تحليل قدره 30 دقيقة مع الكشف عند 245 نانومتر. تم إجراء الحصول على البيانات ومعالجتها باستخدام برنامج Chromeleon 7.1 (Dionex ، Sunnyvale ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية).

تم تحديد الوزن الجزيئي (Mw) عن طريق كروماتوجرافيا استبعاد الحجم عالية الأداء (نظام HPSEC ، UltiMate 3 0 {{1 0} 0) ، مزودًا بـ TSK gel G3000 PWXL (7.8 × 300.0 مم ، Tosoh ، اليابان) و TSK gel GMPWXL (7.8 × 300.0 مم ، توسوه ، اليابان) وكاشف معامل الانكسار RefractoMax521 (RID). تم التصفية من العينات باستخدام 0.1 مللي لتر / لتر Na2SO4 بمعدل تدفق قدره 0.5 مل / دقيقة. تم الحفاظ على درجة حرارة العمود عند 35 درجة. تم رسم Dextran كمعايير ومنحنى قياسي وفقًا لوقت الشطف المرسوم مقابل لوغاريتم الوزن الجزيئي.

2.4 دراسة حركية الدواء

تم جمع عينات الدم من الحشرة الداخلية في الساعة {0}} ساعة ، 0. 0 83 ساعة ، 0. 167 ساعة ، 0. 25 ح ، 0. 5 س ، 0. 75 س ، 1. 0 س ، 2. 0 س ، 3. {{2 0}} ح ، 4. 0 س ، 6. 0 س ، 8. 0 س ، 10 س ، 12 ساعة و 24 ساعة بعد تناول إشنكوسايد (100 مجم / كجم). تم الحصول على عينات البلازما بالطرد المركزي لمدة 10 دقائق عند 7500 مساءً. إلى 100 ميكرولتر من عينة البلازما ، تمت إضافة 10 ميكرولتر من محلول IS (حمض الكلوروجينيك) ، و 500 ميكرولتر من الميثانول. تم بعد ذلك تدوير الخليط لمدة 3 دقائق والطرد المركزي عند 14 ، 000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق. تم جمع المادة الطافية وتجفيفها في نيتروجين عند درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، تمت إذابة المادة المتبقية في 100 ميكرولتر 50 بالمائة ميثانول مائي ، بالطرد المركزي عند 14 ، 000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق مرة أخرى. أخيرًا ، تم حقن 3 ميكرولتر من المادة الطافية في نظام LC-MS / MS للتحليل. تم تحليل العينات باستخدام الطريقة وفقًا لتقرير سابق. يتكون الطور المتحرك من CH3CN (المذيب A) و H2O (يحتوي على 0.1 بالمائة HCOOH ؛ المذيب B) باستخدام التدرج التالي: 0-1 دقيقة ، 10 بالمائة أ ؛ 1-8 دقائق ، 10-90 في المائة أ ؛ 8-9 دقائق ، 90-10 في المائة أ ؛ 9-11 دقيقة: 10 بالمائة أ. تم فصل العينة على عمود ACQUITY HSS T3 (1.8 ميكرومتر ، 100 مم × 2.1 مم معرف). كان معدل التدفق 0.3 مل / دقيقة وتم ضبط درجة حرارة العمود عند 35 درجة. في تحليل MS ، تم استخدام وضع التأين السالب ، مع المعلمات المحسّنة التالية: الجهد الشعري ، 2.5 كيلو فولت ؛ درجة حرارة الذوبان ، 450 درجة. تم استخدام النيتروجين كغاز إذابة وغاز مخروطي ، بمعدل تدفق 900 لتر / ساعة و 150 لتر / ساعة ، على التوالي. وهكذا تم إجراء القياس الكمي باستخدام MRM لتحولات m / z 785.29 → 623.26 لإشنكوسايد ، m / z 353.06 → 191.07 لحمض الكلوروجينيك (IS) ، m / z 623.24 → 161.09 لـ acteoside. كان جهد المخروط لـ echinacoside و IS و acteoside 100 V و 32 V و 74 V ؛ طاقة الاصطدام ، 32 فولت ، 14 فولت ، 30 فولت.

2.5 دراسة الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة (SCFAs)

تم إعطاء ذكور جرذان Sprague-Dawley عن طريق الفم ZT و HM و LM لمدة 3 أسابيع. تم تحديد SCFAs (حمض الخليك ، وحمض البروبيونيك ، وحمض الأيزوبوتريك ، وحمض الزبد ، وحمض الأيزوفاليريك ، وحمض الفاليريك ، وحمض الهكسانويك) بواسطة كروماتوجرافيا الغاز (GC) كما هو موضح سابقًا مع بعض التعديلات [14]. باختصار ، 0. تم ​​تشتيت عينة براز 5 جم في 2.5 مل من ماء Milli-Q ، ودوامة لمدة 1 0 دقيقة ، و 7.5 مل 1٪ من محلول HCl / إيثانول يحتوي على معايير داخلية (حمض الزبد 24.0 ميكروغرام تمت إضافة / مل و 2- حمض إيثيل هيكسانويك 1.32 ميكروغرام / مل كمعايير داخلية). تم تجانس المخاليط لمدة 5 دقائق وطردها عند 14 ، 000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق عند 4 درجات. تم حقن خمسة ميكرولتر من المادة الطافية في وضع الانقسام بنسبة 30: 1. كان الغاز الحامل N2 (99.999 بالمائة) عند 1 مل / دقيقة. كان غاز المكياج (N2) عند 25 مل / دقيقة. كان معدل تدفق H2 والهواء 30 مل / دقيقة و 300 مل / دقيقة ، على التوالي. تم جمع عينات البراز في اليوم العشرين من هذه الدراسة وتم تخزينها على الفور عند درجة حرارة -80 درجة.

2.6. جمع البراز ، واستخراج الحمض النووي ، وتسلسل الجينات 16S rRNA

تم جمع ما يقرب من 2 0 0 ملغ من عينة البراز الطازجة في أنبوب إيبندورف المعقم 1.5 مل من كل فأر وتم تخزينها عند -80 درجة لتحضير الحمض النووي لاحقًا. تم استخراج الحمض النووي من البراز باستخدام QIAamp DNA Stool Mini Kit (QIAGEN). تم تحديد كمية الحمض النووي باستخدام مقياس الطيف الضوئي NanoDrop (شركة Thermo Electron) ؛ تم فحص السلامة والحجم بنسبة 1.0 في المائة من الاغاروز الكهربائي للهلام. وفقًا للتركيز ، تم تخفيف الحمض النووي إلى 1 نانوغرام / ميكرولتر باستخدام الماء المعقم.

تم تضخيم الرنا الريباسي 16S باستخدام أساس محدد (V4: 515F -806 R) مع الرمز الشريطي. تم إجراء جميع تفاعلات تفاعل البوليميراز المتسلسل باستخدام Phusion® High Fidelity PCR Master Mix (New England Biolabs). امزج حجمًا متساويًا من 1 × تحميل عازلة (تحتوي على SYB أخضر) مع منتجات PCR وقم بتشغيل الرحلان الكهربي على 2 بالمائة من هلام الاغاروز للكشف. تم اختيار الشرائط الرئيسية الساطعة بين 400 و 450 نقطة أساس لإجراء مزيد من التجارب. تم خلط منتجات PCR في نسب كثافة الاتحاد الأوروبي. بعد ذلك ، تمت تنقية خليط منتجات PCR باستخدام Qiagen Gel Extraction Kit (Qiagen ، ألمانيا).

تم إنشاء مكتبات التسلسل باستخدام TruSeq® DNA PCR Free Sample Preparation Kit (Illumina ، الولايات المتحدة الأمريكية) باتباع توصيات الشركة المصنعة وأضيفت رموز الفهرس. تم تقييم جودة المكتبة على نظام Qubit® 2. 0 مقياس التألق (Thermo Scientific) ونظام Agilent Bioanalyzer 2100. تم تسلسل المكتبة على منصة Illumina HiSeq 2500 وتم إنشاء قراءات نهائية مزدوجة بمقدار 250 نقطة أساس.

2.7. تحليل المعلوماتية الحيوية

قطع الكود الشريطي وتسلسل التمهيدي ، وتجميع التسلسل ، وترشيح البيانات وفقًا لـ QIIME (V 1.7. 0). تم تعيين التسلسلات ذات التشابه الأكبر من أو يساوي 97 بالمائة لنفس OTUs. يتم شرح OTUs كعناوين SILVA. تم حساب مؤشرات تنوع ألفا التي تقيم ثراء المجتمع الميكروبي المعوي (مقاييس ACE و Chao1) وتنوع المجتمع (مقاييس شانون وسيمبسون) باستخدام Qiime (الإصدار 1.9.1). تم استخدام تحليل تنوع بيتا للتحقيق في الاختلافات الهيكلية للمجتمعات الميكروبية باستخدام مسافة UniFrac. تم اختبار الفروق بين جميع المجموعات من خلال اختبار Tukey واختبار Wilcox. تم تطبيق تحليل الإحداثيات الرئيسي (PCoA) لشرح الاختلافات التركيبية بين المجموعات الأربع باستخدام حزم R. تم تصميم طريقة حجم تأثير تحليل التمايز الخطي (LEfSe) خصيصًا لاكتشاف المرقمات الحيوية وتفسير بيانات التسلسل. واستخدم التحليل التفاضلي الخطي (LDA) لحساب حجم تأثير كل ميكروبات أمعاء تفاضلية والخصائص المرتبطة بكل مجموعة من الجرذان. تم إجراء تحليل الارتباط باستخدام حزم R gcorrplot (الإصدار 1.1.463).

تم تحليل بيانات SCFAs باستخدام ANOVA من SPSS 22. 0.

3. النتائج والمناقشة

3.1. التحضير والتحليل الكيميائي لعديد السكاريد

يستخدم Cistanches Herba كغذاء ودواء في الصين. اجتذبت السكريات المعزولة عنه اهتمامًا كبيرًا نظرًا لأنشطتها الهامة. في هذه الدراسة ، تم الحصول على الأجزاء الأربعة من عديد السكاريد (ZT ، HM ، MM ، و LM) عن طريق طريقة استخراج المياه ، وترسيب الكحول ، والترشيح الفائق. يتم عرض التركيبات الكيميائية لأربعة أجزاء من السكريات في الجدول 1.

إجمالي محتويات السكر في العينات باستخدام منحنى قياسي للجلوكوز. أظهرت النتيجة أن غلة HM و LM كانت أعلى من MM. أظهرت السكريات خصائص دوائية متنوعة ، وخاصة نشاط المناعة. أظهرت الدراسات أن محتوى السكريات الأحادية ونوعها ، والوزن الجزيئي ، ونوع المجموعة البديلة تلعب دورًا مهمًا في أنشطة السكريات [15]. كانت الأجزاء المختلفة لتكوين السكاريد الأحادي من عديد السكاريد cistanche متشابهة ، وكان المانوز (Man) ، وحمض الجالاكتورونيك (GalUA) ، والجلوكوز (Glc) ، والجالاكتوز (غال) ، والأرابينوز (Ara) هي السكريات الأحادية الرئيسية.

ومع ذلك ، اختلفت المحتويات بين الأجزاء الأربعة. كان الجلوكوز والأرابينوز المكونين الرئيسيين لـ ZT و HM ، بينما كان الجلوكوز هو وحدة السكر الرئيسية في LM ، إلى جانب ذلك ، تم اكتشاف القليل من rhamnose وحمض الجلوكورونيك (GlcUA) في هذه الكسور.

تم فحص الأوزان الجزيئية النسبية للعينات بواسطة كروماتوغرافيا استبعاد الحجم عالية الأداء (HPSEC). وفقًا للمنحنى القياسي لـ dextrans ووقت الاستبقاء في الأعمدة ، لوحظ أن ذروة الأوزان الجزيئية الرئيسية في ZT عند 1.68 × 106 Da و 1.70 × 104 Da ، في HM تم تحديدها لتكون 1.54 × 106 ، 2.06 × 105 ، و تم تحديد 4.81 × 104 ، في MM و LM لتكون 1.09 × 104 و 2.05 × 104 ، على التوالي. تم سرد غلة منهم في الجدول 1 وكان محصول MM منخفضًا وغير كافٍ للتجربة الحيوانية. أشارت الدراسات السابقة إلى التأثيرات التي تعتمد على الهيكل لعديد السكاريد على الأنشطة الحيوية المتنوعة [16]. لا تزال هناك حاجة لمزيد من التجارب ، خاصة التنقية ، يجب تطبيق التحليل البنيوي الخمسين لدراسة الهيكل والنشاط

3.2 دراسة حركية الدواء

تم فحص الحرائك الدوائية لإشنكوسايد بواسطة كروماتوجرافيا سائل فائق الأداء مطياف الكتلة رباعي الأضلاع (UPLC و Xevo TQ-S) بعد تناوله عن طريق الفم من إشيناكوسيد. تم عرض الملامح المتوسطة لزمن تركيز البلازما لإشنكوسايد في الشكل 1. وفقًا لبرنامج الأدوية والإحصاءات (DAS ، الإصدار 2. 0) ، فإن الحرائك الدوائية لإشنكوسايد في نموذج مكون من جزء واحد ، والآخر تم تلخيص المعلمات في مجموعات ZT و HM و LM في الجدول 2 ، بما في ذلك الوقت للوصول إلى أقصى تركيز (Tmax) ، والتركيز الأقصى (Cmax) ، والمنطقة الواقعة تحت منحنى وقت التركيز (AUC) ، ومتوسط ​​وقت الإقامة (MTR). ). أظهرت دراسة الحرائك الدوائية أن متوسط ​​Cmax لإشنكوسايد في مجموعات ZT و HM و LM كان 646.4 نانوغرام / مل و 732. {13}} نانوغرام / مل و 898.4 نانوغرام / مل والتي كانت 1.6 و 1.8 و 2.2 مرات مقارنة بمجموعة التحكم (406.8 نانوغرام / مل) ، على التوالي. من خلال المعالجة المسبقة بعديد السكاريد ، تمت زيادة AUC ({24}} ساعة) من إشنكوسايد بنسبة 6.6 في المائة و 36.7 في المائة و 63.6 في المائة في مجموعات ZT و HM و LM ، مقارنة بالمجموعة الضابطة ، والتي أثبتت أن السكريات أظهرت نشاط تعزيز امتصاص جزيء صغير. كانت هذه النتائج متشابهة تمامًا مع أن السكريات الشيتولية حسنت التوافر البيولوجي للجليكوزيدات الفينيليثانويد في مستخلص Fructus Forsythia [17] والسكريات المتعددة في Polygonum multiflorum حسنت الخصائص الصيدلانية الحيوية لـ 2 ، 3 ، 5 ، 4′-tetrahydroxy-stilbene - 2- O - - D-glucoside في جرذان Sprague-Dawley العادي [18]. تحتوي ميكروبيوتا الأمعاء على مجموعة متنوعة من الإنزيمات المرتبطة بعملية التمثيل الغذائي للدواء ، ولا تزال آليات تشكيل الميكروبيوم الحرائك الدوائية والديناميكا الدوائية غير معروفة [19]. قد تغذي السكريات المتعددة الكائنات الحية الدقيقة في الأمعاء عن طريق زيادة جهاز المناعة ، وامتصاص العناصر الغذائية ، وتقليل نمو مسببات الأمراض [20 ، 21]. على الرغم من أن الأدبيات ذكرت أن عديد السكاريد الكستان يمكن أن يزيد من مستقلبات إشنكوسايد (مثل أكتيوسيد) في المختبر ، لم نجد أن السكريات المتعايشة قد استفادت من تحويل إشنكوسايد إلى أكتيوسيد في الجسم الحي [10،11].

3.3 محتوى SCFAs في براز الفئران

الجراثيم المعوية تخمر عديد السكاريد ، منتجة العديد من البوليمرات النشطة بيولوجيا والأيضات ، مثل SCFAs [3]. باعتبارها المستقلبات الرئيسية للسكريات ، تم تحليل SCFAs في البراز. تم الإبلاغ عن SCFAs ، بما في ذلك حمض الأسيتيك وحمض البروبيونيك والزبدات ، أن لها تأثيرات مفيدة على استقلاب الجلوكوز والكوليسترول والدهون. الأسيتات هي الركيزة الرئيسية في القولون وهي ركيزة مهمة لتخليق الكوليسترول ، والبروبيونات هو الركيزة لتكوين السكر في الكبد والزبدة هو الركيزة المفضلة للطاقة في القولون وله مضاد للالتهابات في الأمعاء [22 ، 23].

أوضحت نتائجنا أن الأسيتات كانت أهم مكونات SCFA المتكونة في البراز لجميع المجموعات ، يليها الزبدات والبروبيونات ، بينما كان تركيز الفاليرات والمتفرعة (حمض الأيزوبيوتريك وحمض الأيزوفاليريك) أقل. ثبت أن الأسيتات تزيد من نشاط الإنزيم في أنسجة الكبد ، مما يؤدي إلى تحسين التحكم في نسبة السكر في الدم [24]. في اليوم الثاني 0 (الشكل 2) ، كان لدى مجموعة LM مستوى أعلى بشكل ملحوظ من الأسيتات (pb 0.05) ، وتميل نسبة البروبيونات إلى الانخفاض ، وتميل نسبة الزبدات إلى الزيادة على الرغم من كان التغيير ضئيلاً في البراز مقارنة بمجموعة التحكم.

ومع ذلك ، كان لدى مجموعة HM نسبة أقل بشكل ملحوظ من الزبدات من المجموعة الضابطة (pb 0. 05). كانت محتويات إجمالي SCFAs بين LM و HM اتجاهًا معاكسًا مقارنة بالمجموعة الضابطة وفقط مجموعة LM كان لها فرق كبير.

تؤثر العديد من العوامل على مستوى SCFAs في البراز ، بما في ذلك تكوين وكمية ميكروبيوتا الأمعاء ، والمصدر الغذائي ، والوقت الذي يستغرقه الطعام في المرور عبر الجهاز الهضمي [22]. تظهر الدراسات المتراكمة أن بنية عديد السكاريد ، بما في ذلك تكوين مخلفات السكاريد الأحادي ، ودرجة البلمرة ، يمكن أن يؤثر كلاهما على خصائص التخمير وإنتاج SCFAs [25]. من نتائجنا ، يمكننا أن نستنتج أن السكريات السكرية تعدل إنتاج SCFAs وأن عديدات السكاريد الهيكلية المختلفة لها تأثيرات مختلفة.

3.4. تسبب عديد السكاريد في حدوث تغييرات جوهرية في تكوين وتنوع ميكروبيوتا الأمعاء

تم فحص التركيب البكتيري لعينات البراز (ن=4) باستخدام تقنية التسلسل عالي الإنتاجية من Illumina. تم تسلسل المكتبة على منصة Illumina HiSeq2500 وتم إنتاج قراءات نهائية مزدوجة بمقدار 250 نقطة أساس. تمت معالجتها لتحديد التصنيف وتحليل التنوع. أظهرت منحنيات التخلخل (الشكل 3 أ) أنه ، لكل عينة ، استقر ثراء الأنواع البكتيرية مع زيادة عمق أخذ العينات ، مما يشير إلى أن جهد التسلسل كان كافياً وأن التنوع الكلي داخل العينة تم التقاطه. أظهر منحنى شانون (الشكل 3 ب) أن عدد الأنواع البكتيرية الفريدة زاد مع زيادة عدد التسلسلات المحددة. يعني تشبع منحنيات شانون أن بيانات التسلسل كانت كافية لتغطية جميع أنواع البكتيريا.

يستخدم تحليل تنوع ألفا لقياس التنوع داخل العينة. تم حساب مؤشرات التنوع Chao1 و ACE و Shannon و Simpson من خلال اختبار Tukey لوصف تنوع ألفا. كشف تحليل التنوع المعتمد على مؤشرات ACE و Chao 1 عن ثراء المجتمع بالميكروبات المعوية على مستوى OTU. كانت مؤشرات ACE و Chao 1 أقل بشكل ملحوظ في عينات البراز لمجموعة LM مقارنةً بالمجموعة الضابطة (pb 0. عن طريق تغذية LM. كشف تحليل التنوع المستند إلى فهارس شانون وسيمبسون عن التنوع المجتمعي للميكروبات المعوية. لم يكن هناك تغيير واضح في فهارس تنوع شانون وسيمبسون عند التعامل مع عديد السكاريد مقارنة بمجموعة التحكم.

تسبب عديد السكاريد Cistanche في حدوث تغييرات كبيرة في الأصناف. علاوة على ذلك ، في أربع مجموعات ، كانت N98 في المائة من OTUs مرتبطة ببكتيريا phyla Bacteroidetes و Firmicutes و Proteobacteria. كانت الشعبة الأكثر شيوعًا هي Bacteroidetes التي ساهمت بـ 55. 0 9 بالمائة و 57.89 بالمائة و 52.72 بالمائة و 69. {{2 0} 4 بالمائة من الميكروبات البرازية تحت السيطرة و ZT و HM و مجموعات LM على التوالي ، تليها الشركات ، حيث ساهمت بنسبة 41.39 بالمائة و 38. 0 3 بالمائة و 42.15 بالمائة و 28.15 بالمائة على التوالي (الشكل 5 أ ، ب). مقارنة مع المجموعة الضابطة ، تبين أن مجموعة ZT تؤدي إلى تأثيرات ضعيفة على الوفرة النسبية للشعبة الرئيسية ، فيما عدا الوفرة المنخفضة للبكتيريا الشعاعية التي زادت بشكل ملحوظ (MetaStat ، pb 0.05). في مجموعة HM ، تمت زيادة البكتيريا المتقلبة بشكل ملحوظ (pb 0.01). يشير هذا إلى أن عديد السكاريد HM Cistanche يمكن أن يعزز تخصيب البكتيريا المتقلبة للتأثير على استقلاب المواد في الفئران. في المجموعة LM ، ازدادت وفرة Bacteroidetes ، التي كان المساهمون الرئيسيون فيها هم Prevotellaceae و Prevotellaceae _ UCG -001 بشكل ملحوظ (pb 0.05) وانخفضت وفرة العوامل الثابتة ، بما في ذلك Peptococcaceae ، بشكل ملحوظ (pb 0.01) . تم وصف أعضاء Prevotella و Bacteroides سابقًا على أنها عوامل تحلل الألياف الغذائية [26] ، وتنتج منتجات نهائية استقلابية مثل السكسينات والأسيتات [27]. أكدت هذه الدراسات السابقة التي أظهرت أن بعض أنواع Prevotella spp. يمكن أن تتحلل السكريات النباتية المعقدة. كما أظهرت تقارير سابقة أن التقسيمين البكتيريين المهيمنين ، النسبة المتزايدة من phyla Firmicutes / Bacteroidetes مرتبطة بالسمنة [28]. تشير الوفرة المنخفضة للأول والوفرة الأعلى للأخير في المجموعة LM إلى أن LM يمكن أن يساعد في التخلص من الجنيهات.

من بين 72 عائلة تم اكتشافها ، تم عزل وتحليل التصنيف العلوي 1 0 (الشكل 5 ج ، د). تعد Lachnospiraceae و Ruminococcaceae من أكثر العائلات وفرة الموجودة في بيئة أمعاء الثدييات وقد ارتبطت بالحفاظ على صحة الأمعاء [29]. في الدراسة الحالية ، مجموعة العائلات Bacteroidales _ S 24-7_ (39.11 ± 6.04 بالمائة ، 36.88 ± 4.44 بالمائة ، 28.37 ± 4.01 بالمائة ، 35.81 ± 7.91 بالمائة) ، Prevotellaceae (10.66 ± 3.84 بالمائة ، 15.14 ± 5.50 بالمائة ، 19.65 ± 8.97 بالمائة ، 21.05 ± 8.39 بالمائة) ، Lachnospiraceae (18.21 ± 5.20 بالمائة ، 15.09 ± 3.29 بالمائة ، 12.13 ± 7.14 بالمائة ، 13.12 ± 6.82 بالمائة) ، Ruminococcaceae (9.64 ± 0.88 بالمائة ، 10.44 ± 2.45 بالمائة ، 11.27 ± 4.70٪ ، 8.19 ± 1.72٪) سيطرت على كل مجموعة. تم الإبلاغ عن عائلة S 24-7 أنها تحتوي على وفرة من إنزيمات الكربوهيدرات المهينة [30]. قدم Prevotellaceae ارتفاعًا وعرض Lachnospiraceae ميلًا متراجعًا في مجموعة السكريات مقارنة بمجموعة التحكم [31]. كان من المفترض أنه لا توجد إنزيمات عديد السكاريد النشطة المقابلة في مجموعة Bacteroidales _ S 24-7_ و Lachnospiraceae أو وحدات ربط الكربوهيدرات للبكتيريا في السكريات. تم الإبلاغ عن أجناس بريفوتيلا بالاشتراك مع مواضع استخدام السكاريد والإنزيمات النشطة للكربوهيدرات [32]. من أجل إيجاد العلاقة بين البكتيريا و SCFAs ، تم تطبيق تحليل ارتباط سبيرمان. تلعب بعض الأجناس مثل Bacteroides و Prevotella و Lactobacillus في ميكروبيوتا الأمعاء دورًا مهمًا في التحلل المائي للسكريات في SCFAs [33]. أظهرت نتائجنا أيضًا أن الجراثيم المرتبطة ارتباطًا إيجابيًا والميكروبات المسيطرة أنتجت المزيد من الزبدات [34] ، في حين أن الكائنات الحية الدقيقة المرتبطة إيجابيًا وتغلبت على الكائنات الحية الدقيقة أنتجت المزيد من الأسيتات. أنتجت الجراثيم Lactobacillaceae و Ruminococcaceae المهيمنة المزيد من البروبيونات (الشكل 6).

تم استخدام تحليل تنوع بيتا للتحقيق في الاختلافات الهيكلية لميكروبات الأمعاء عبر العينات باستخدام مقاييس مسافة UniFrac. تم تحليل الاختلافات في مسافات Unifrac بواسطة اختبار Tukey و Wilcox (الشكل 7). باستخدام التحليل غير الموزون uniFrac ، وجدنا أن فئران تغذية LM تتجمع بعيدًا عن المجموعات الأخرى. تم تحديد نمط تجميع واضح لمجموعات التحكم و ZT و HM و LM.

تم تعديل وفرة هذه الميكروبات بشكل تفاضلي باستخدام علاجات السكاريد. لتحديد الأصناف البكتيرية المحددة في كل مجموعة ، تمت مقارنة تركيبة الكائنات الحية الدقيقة من مجموعات التحكم و ZT و HM و LM باستخدام طريقة حجم تأثير تحليل التمايز الخطي (LEfSe). يستخدم التحليل التمييزي الخطي (LDA) لحساب حجم تأثير كل ميزة تفاضلية وفيرة. عتبة درجات LDA أعلى من 4 كانت قائمة ، مما يشير إلى وفرة مجتمعية أعلى نسبيًا في المجموعة المقابلة مقارنة بالمجموعات الأخرى. باستخدام هذه الطريقة ، وجدنا أن 19 OTU كانت مختلفة بشكل كبير في جميع المجموعات ، أي 6 OTUs في المجموعة الضابطة كانت أعلى ، 1 فقط OTU في مجموعة ZT كانت أعلى ، 1 0 OTUs في مجموعة HM كانت أعلى و 2 OTUS في المجموعة LM كانت أعلى من المجموعات الأخرى (الشكل 8). تمت زيادة وفرة g _ Prevotellaceae _ UCG _001 في LM بشكل ملحوظ (8.47 ± 1.9 بالمائة في LM ، 0. 4 0 ± {{21 }}. 0 9 بالمائة في مجموعة التحكم ، pb 0.01). كانت النتيجة متوافقة مع التقرير الذي يفيد بأن بورفيرا هيتانينسيس وألفا بروليفيرا عديدات السكاريد يمكن أن تعزز بشكل واضح تكاثر Prevotellaceae UGC -001 (pb 0.05) و Rikenellaceae RC9 (pb 0.01) [35].

4 - نتائج

من الواضح أن هناك علاقة بين المكونات الكيميائية للطب الصيني التقليدي ، وميكروبات الأمعاء ، وبعض المستقلبات الناتجة عن ميكروبات الأمعاء. قدمت فيفايندنغس الحالية طريقة لدراسة تآزر استقلاب إشنكوسايد مع أنواع مختلفة من السكريات على أساس ميكروبيوتا الأمعاء. يمكن لميكروبات الأمعاء أن تستقلب الطب الصيني التقليدي ويمكن أن تؤثر الطب الصيني التقليدي على نمو جراثيم الأمعاء. من ناحية ، بعد تناول السكريات عن طريق الفم في الأمعاء ، تقوم مجموعة متنوعة من ميكروبيوتا الأمعاء بتشفير الإنزيمات الأيضية ، وتلعب دورًا مهمًا في تحلل السكريات ، وإنتاج المستقلبات النشطة بيولوجيًا. من ناحية أخرى ، فإن مساهمات السكريات لها بعض التأثير على توازن الأمعاء المكروية في العملية. من خلال المقارنة مع أو بدون السكريات ، وجدنا أن السكريات على الرغم من عسر هضمها من قبل المضيف مباشرة ، من المحتمل أن تكون بمثابة مواد حيوية ، مما يؤدي إلى تغييرات مواتية في ميكروبيوتا الأمعاء من خلال تعزيز نمو البروبيوتيك. عديد السكاريد Cistanche ينظم تنوع ميكروبيوتا الأمعاء ، ويزيد البكتيريا المفيدة وخاصة السكريات الجزيئية المنخفضة التي عززت نمو Prevotella spp. علاوة على ذلك ، عززت الجراثيم المعوية المحسنة امتصاص إشنكوسايد في Cistanche deserticola. لكن السبب غير واضح تمامًا ، فقد يكون نتيجة للعيوب المشتركة في ميكروبيوتا الأمعاء ، و SCFAs ، والمناعة ، وهناك حاجة إلى مزيد من البحث لنموذج المرض. من الصعب إثبات تأثيرات البريبايوتكس في نماذج حيوانية صحية يتمتع مجتمع الميكروبات فيها بالاستقرار والمرونة. يمكن تطوير عديد السكاريد Cistanche deserticola كمنتجات بروبيوتيك لتنظيم ميكروبات الأمعاء ويمكن تطبيقها على التمثيل الغذائي التآزري للجزيئات الصغيرة في المستقبل. ستساعدنا هذه البيانات في تصميم تدخلات لمنع الفئات الضعيفة من الناس من تحسين صحتهم.

إعلان تضارب المصالح

يعلن المؤلفون أنه لا يوجد تضارب في المصالح فيما يتعلق بنشر هذه الورقة.

شكر وتقدير

يعترف المؤلفون بامتنان بالمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (المنحة رقم 81830112 و 81904058)

مراجع
[1] I. Khangwal ، P. Shukla ، البريبايوتكس المحتملة وآليات انتقالها: الأساليب الحديثة ، J. Food Drug Anal. 27 (3) (2019) 649-656.
[2] XF Xu و PP Xu و CW Ma و J. Tang و XW Zhang و Gut microbiota و host health و polysaccharides و Biotechnol. حال. 31 (2) (2013) 318-337.
[3] NT Porter ، EC Martens ، الأدوار الحاسمة للسكريات في البيئة الميكروبية في الأمعاء وعلم وظائف الأعضاء ، Annu. القس ميكروبيول. 71 (2017) 349-369.
[4] QW Guo و QQ Ma و ZH Xue و XD Gao و HX Chen ، دراسات حول خصائص الارتباط لثلاثة سكريات ذات وزن جزيئي مختلف وفلافونيدات من حرير الذرة (وصمة Maydis) والكربوهيد. بوليم. 198 (2018) 581-588.
[5] SS Zhou، J. Xu، H. Zhu، J. Wu، JD Xu، R. Yan، XY Li، HH Liu، SM Duan، Z. Wang، HB Chen، H. Shen، SL Li، Gut microbiota - آليات متضمنة في تعزيز التعرض الجهازي للجينسنوسيدات عن طريق تعايش السكريات المتعددة في مغلي الجينسنغ ، علم العلوم. ممثل 6 (2016) ، 22474.
[6] YP Jing و AP Li و ZR Liu و PR Yang و JS Wei و XJ Chen و T. Zhao و YR Bai و LJ Zha و CJ Zhang وامتصاص Codonopsis pilosula saponins عن طريق التعايش متعدد السكريات يخفف من خلل التنسج الجرثومي المعوي مع صوديوم كبريتات ديكستران - التهاب القولون الناجم عن الفئران النموذجية ، بيوميد. الدقة. كثافة العمليات 2018 (2018) ، 1781036 (18 صفحة).
[7] CJ Chang، CS Lin، CC Lu، J. Martel، YF Ko، DM Ojcius، SF Tseng، TR Wu، YYM
Chen ، JD Young ، HC Lai ، Ganoderma Lucidum يقلل من السمنة في الفئران عن طريق تعديل تكوين ميكروبيوتا الأمعاء ، Nat. كومون. 6 (2015) 7489.
[8] JC Zhang ، GM Yang ، YZ Wen ، SX Liu ، CF Li ، RL Yang ، W. Li ، الكائنات الحية الدقيقة المعوية متورطة في الأنشطة المناعية لعديد السكاريد Longan ، Mol. نوتر. الدقة الغذائية. 61 (11) (2017) ، 1700466.
[9] T. Wang، XY Zhang، WY Xie، Cistanche deserticola YC Ma، "Desert Ginseng": a review، Am. J. تشين. ميد. 40 (6) (2012) 1123-1141.
[10] Y. Li ، GS Zhou ، SH Xing ، PF Tu ، XB Li ، تحديد مستقلبات إشنكوسايد التي تنتجها البكتيريا المعوية البشرية باستخدام سائل فائق الأداء
كروماتوغرافيا - قياس الطيف الكتلي لوقت الرحلة الرباعي ، J. Agr. الغذاء تشيم. 63 (30) (2015) 6764–6771.
[11] Y. Li ، Y. Peng ، MY Wang ، PF Tu ، XB Li ، التمثيل الغذائي المعدي المعوي البشري لمستخلص ماء Cistanches Herba في المختبر: توضيح ملف التمثيل الغذائي بناءً على تحديد المستقلبات الشاملة في عصير المعدة ، عصير الأمعاء ، الأمعاء البشرية البكتيريا ، والميكروسوم المعوي ، J. Agric. الغذاء تشيم. 65 (34)
(2017) 7447–7456.
[12] M. Dubois، K. Gilles، JK Hamilton، PA Rebers، F. Smith، Colorimetric method for تحديد السكريات والمواد ذات الصلة ، الشرج. تشيم. 168 (4265) (1956) 167.
[13] NH Cho، SY Seong، KH Chun، YH Kim، IC Kwon، BY Ahn، SY Jeong، تمنيع الغشاء المخاطي الجديد مع تقارن البروتين متعدد السكاريد الموجود في الجينات المجهرية ، J. Control. الإصدار 53 (1-3) (1998) 215-224.
[14] XY Zhao ، ZZ Jiang ، F. Yang ، Y. Wang ، XM Gao ، YF Wang ، X. Chai ، GX Pan ، Y. Zhu ، الاكتشاف الحساس والمبسط لتأثير المضادات الحيوية على التغيرات الديناميكية والمتعددة الاستخدامات للبراز القصير - سلسلة الأحماض الدهنية ، PLoS One 11 (12) (2016) ، e167032.
[15] SJ Li ، QP Xiong ، XP Lai ، X. Li ، MJ Wan ، JN Zhang ، YJ Yan ، M. Cao ، L. Lu ، JM Guan ، DY Zhang ، Y. Lin ، التعديل الجزيئي للسكريات والنشاطات الحيوية الناتجة كومبر. القس الغذاء. علوم. التقرير الفيدرالي 15 (2) (2016) 237-250.
[16] ZF Fu، X. Fan، XY Wang، XM Gao، Cistanches Herba: نظرة عامة على خاصية الكيمياء والصيدلة والحركية الدوائية ، J. Ethnopharmacol. 219 (2018) 233 - 247.
[17] W. Zhou، XB Tan، JJ Shan، T. Liu، BC Cai، LQ Di، Effect of chitooligosaccharides on
الامتصاص المعوي لجليكوسيدات الفينيثانويد في مستخلص Fructus Forsythia ، Phytomedicine 21 (12) (2014) 1549-1558.
[18] LL Sun، M. Wang، HJ Zhang، GJ You، YN Liu، XL Ren، YR Deng ، تأثير السكريات المتعددة من Ophiopogon japonicus على 2،3،5،4′-tetrahydroxy -stilbene -2- Z. فو وآخرون. / المجلة الدولية للجزيئات الكبيرة البيولوجية 149 (2020) 732 - 740 739 O - - د-جلوكوزيد حول الخصائص الصيدلانية الحيوية في المختبر والحركية الدوائية في الجسم الحي ، Int. J. بيول. ماكرومول. 119 (2018) 677-682.
[19] KN Lam، M. Alexander، PJ Turnbaugh ، أصبح الطب الدقيق مجهريًا: هندسة الميكروبيوم لتحسين نتائج الأدوية ، ميكروب مضيف الخلية 26 (1) (2019) 22–34.
[20] I.Khangwal ، P. Shukla ، التنقيب عن البريبايوتكس ، طرق التقييم المبتكرة ، وتطبيقاتها الصحية: مراجعة ، 3 Biotech. 9 (5) (2019) 187.
[21] GR Gibson، R. Hutkins، ME Sanders، SL Prescott، RA Reimer، SJ Salminen، K. Scott، C. Stanton، KS Swanson، PD Cani، K. Verbeke، G. Reid، The International Scientific Association for probiotics و prebiotics (ISAPP) بيان إجماع حول تعريف ونطاق البريبايوتكس ، Nat. القس. المعدة. هيبات. 14 (8) (2017) 491-502.
[22] JMW Wong ، R. de Souza ، CWC Kendall ، A. Emam ، DJA Jenkins ، صحة القولون: التخمير والأحماض الدهنية قصيرة السلسلة ، J. Clin. جاسترونتيرول. 40 (3) (2006) 235 - 243.
[23] SI Cook ، JH Sellin ، مراجعة المقالة: الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة في الصحة والمرض ، الغذاء. فارم. هناك. 12 (6) (1998) 499-507.
[24] H. Yamashita ، K. Fujisawa ، E. Ito ، S. Idei ، N. Kawaguchi ، M. Kimoto ، M. Hinamori ، H. Tsuji ، تحسين السمنة وتحمل الجلوكوز بواسطة الأسيتات في مرض السكري من النوع 2 Otsuka Long- Evans Tokushima Fatty (OLETF) الجرذان ، Biosci. التكنولوجيا الحيوية. بيوتشيم. 71 (5) (2007) 1236-1243.
[25] AL Ho ، O. Kosik ، A. Lovegrove ، D. Charalampopoulos ، RA Rastall ، التخمير في المختبر للسكريات xylooligosaccharides و Xylo-polysaccharide بأوزان جزيئية مختلفة بواسطة بكتيريا البراز البشرية ، الكربوهيد. بوليم. 179 (2018) 50-58.
[26] TT Chen ، WM Long ، CH Zhang ، S. Liu ، LP Zhao ، BR Hamaker ، تختلف القدرة على استخدام الألياف في بريفوتيلا - مقابل البكتيريا المعوية التي يهيمن عليها البكتيريا ، Sci. ممثل رقم 7 (1) (2017) 2594.
[27] M. Sakamoto، M. Ohkuma، Bacteroides sartorii هو مرادف سابق للنمط غير المتجانس لـ Bacteroides chinchilla وله الأولوية ، Int. J. Syst. Evol. مايكر. 62 (6) (2012) 1241-1244.
[28] PJ Turnbaugh ، RE Ley ، MA Mahowald ، V. Magrini ، ER Mardis ، JI Gordon ، ميكروبيوم الأمعاء المرتبط بالسمنة مع زيادة القدرة على حصاد الطاقة ، Nature 444 (7122) (2006) 1027-1131.
[29] LF Gomez-Arango ، HL Barrett ، HD McIntyre ، LK Callaway ، M. Morrison ، NM Dekker ، الروابط بين ميكروبيوم الأمعاء والهرمونات الأيضية في بداية الحمل لدى النساء ذوات الوزن الزائد والبدناء ، مرض السكري 65 (8) (2016) 2214 –2223.
[30] KL Ormerod، DL Wood، N. Lachner، SL Gellatly، JN Daly، JD Parsons، CG Dal Molin، RW Palfreyman، LK Nielsen، MA Cooper، M. Morrison، PM Hansbro، P. Hugenholtz، Genomic Characterization of the غير المستزرعة عائلة Bacteroidales S 24-7 تسكن أحشاء الحيوانات المتجانسة الحرارة ، Microbiome. 4 (1) (2016) 36.
[31] JD Zhang ، LJ Song ، YJ Wang ، C. Liu ، L. Zhang ، SW Zhu ، SJ Liu ، LP Duan ، تأثير مفيد لإنتاج الزبدات Lachnospiraceae على فرط الحساسية الحشوي الناجم عن الإجهاد في الفئران ، J. Gastro. هيباتول. 34 (8) (2019) 1368–1376.
[32] T. Accetto ، G. Avguštin ، أجهزة تحلل السكاريد النباتية المتنوعة والواسعة النطاق لأنواع الكرش والأمعاء الخلفية Prevotella: عامل في انتشارها؟ النظام. تطبيق ميكروبيول. 42 (2) (2019) 107-116.
[33] KE Bach Knudsen ، MS Hedemann ، HN Lærke ، دور الكربوهيدرات في صحة الأمعاء للخنازير ، الرسوم المتحركة. تغذية. علوم. تقنية. 173 (1-2) (2012) 41-53.
[34] س. أ. باركر ، أ. Geirnaert ، L. Berchtold ، A. Greppi ، L. Krych ، RE Steinert ، T. de Wouters ، C. Lacroix ، فهم إمكانات البريبايوتك للألياف الغذائية المختلفة باستخدام نموذج التخمير المستمر للبالغين في المختبر (PolyFermS) ، Sci. ممثل. 8 (1) (2018) 4318.
[35] ZS Zhang ، XM Wang ، SW Han ، CD Liu ، F. Liu ، تأثير اثنين من عديدات السكاريد من الأعشاب البحرية على الجراثيم المعوية في الفئران التي تم تقييمها بواسطة تسلسل Illumina PE250 ، Int. J. بيول. ماكرومول. 112 (2018) 796-802.