مستخلص ماء Cistanches Tubulosa يحمي الخصية من الإصابة التي يسببها السيكلوفوسفاميد: التأثير والآلية

XIA Lun-bin1،2، JIANG Ping 1،2، HE Yan-fei 1،2، SUN Tao-tao 1، ZHOU Yu1، ZUO Ｒui-hua 1،2

1． كلية الهندسة البيولوجية والصيدلانية ، كلية ويست آنهوي ، لو آن ، آنهوي 237012 ، الصين ؛ 2． مختبر Anhui الهندسي للحفاظ على مصادر الطب الصيني التقليدي واستخدامها المستدام ، Lu＇an ، Anhui 237012 ، الصين

【خلاصة】

الهدف: التحقيق في التأثير الوقائي لـمستخلص ماء Cistanche tubulosa (CTWE) ضد إصابة الخصية التي يسببها سيكلوفوسفاميد (CTX) في الفئران وآلية عملها．

مسحوق استخراج سيستانش

انقر هنا لعرض Cistanche لمنتجات أمراض الكلى

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

طُرق: تم اختيار ثلاثين ذكرًا بشكل عشوائي على قدم المساواة في عنصر تحكم عادي ، والتحكم في نموذج TI الناجم عن CTX ومجموعة علاج CTWE． بعد 7 أيام من التغذية التكيفية ، عولجت الفئران في مجموعة المعالجة CTWE داخل المعدة باستخدام CTWE بمعدل 1 {{2 {{3 35}}} جم / كجم / يوم ، تلك الموجودة في التحكم الطبيعي ونموذج TI مجموعات التحكم مع نفس الحجم من المحلول الملحي العادي qd لمدة 35 يومًا متتاليًا ، وتلك الموجودة في مجموعة التحكم في نموذج TI ومجموعات علاج CTWE عن طريق الحقن داخل الصفاق من سيكلوفوسفاميد عند 8 0 مجم / كجم / يوم عند 7،14،21 ، 28 و 35 يومًا ثم تم وزن جميع الحيوانات ، وجمع عينات الدم ، وحصاد الخصيتين والبربخ لكشف محتوى المصل T ، وفحص جودة السائل المنوي ، وقياس وزن الخصية ، ومراقبة التغيرات النسيجية المرضية في الخصية ، وتحديد مستويات السوبر. أكسيد ديسموتاز (SOD) و malondialdehyde (MDA) في أنسجة الخصية وتعبيرات mＲNA للجينات المرتبطة بالعامل النووي الكريات الحمر {{1 0} مسار إشارات (Nrf2) ذي الصلة． النتائج: أظهرت الفئران في مجموعة التحكم في نموذج TI ، مقارنةً بعناصر التحكم العادية ، انخفاضًا ملحوظًا في وزن الجسم (34． 13 ± 1． 56］ مقابل ［47． 0 8 ± 1．98 جم ، P ＜ 0． {91}} 5) ، وزن الخصية (［81． 82 ± 1 {{1 {111}} 1}}． 61］ مقابل ［148． 5 0 ± 14． 82］ مجم ، P 0． 0 5) ، تركيز الحيوانات المنوية (［32． 6 0 ± 5． 29］ مقابل ［78． 9 0 ± 7． 95］ × 1 0 6 / مللي ، P 0． 0 5) ، حركة الحيوانات المنوية (［45． 2 0 ± 7． {{186) }} 9］ بالمائة مقابل ［86 70 ± 5． 64 بالمائة ، P 0． 05) ، محتوى المصل T (［7． 49 ± 1． 03］ مقابل ［15． 93 ± 1． 36 ］ نانوغرام / لتر ، ف ＜ 0 05) ، ومستوى SOD (［152． 22 ± 10． 66 مقابل ［356． 10 ± 30 95 U / mg prot ، P 0． 05) ، لكن زيادات ملحوظة في النسبة المئوية للحيوانات المنوية غير الطبيعية شكليًا (MAS) (［39． 30 ± 7． 36 بالمائة مقابل ［14． 40 ± 3． 53 بالمائة ، P 0． 05) ومستوى MDA (［54． 91 ± 5． 12］ مقابل ［31． 71 ± 3． 57 nmol / mg prot ، P 0． 05)． أظهرت الحيوانات المعالجة بـ CTWE ، بالمقارنة مع عناصر التحكم في نموذج TI ، زيادة ملحوظة في وزن الجسم (［40． 67 ± 2． 13］ مقابل ［34． 13 ± 1． 56 g ، P 0． 05) ، وزن الخصية (［121． 21 ± 17． 38 مقابل ［81． 82 ± 10． 61 مجم ، P 0． 05) ، تركيز الحيوانات المنوية (［58． 40 ± 9． 94 مقابل ［32． 60 ± 5． 29 ］ × 106 / مل ، P ＜ 0． 05) ، حركة الحيوانات المنوية (［72． 30 ± 7． 51 بالمائة مقابل ［45． 20 ± 7 09 بالمائة ، P 0． 05) ، محتوى المصل T (［ 10． 89 ± 1． 07 مقابل ［7． 49 ± 1． 03 نانوغرام / لتر ، P ＜ 0． 05) ومستوى SOD (［217． 69 ± 24． 59 مقابل ［152． 22 ± 10． 66 ］ U / mg prot ، P 0． 05) ، لكن انخفضت النسبة المئوية لـ MAS (［22． 20 ± 6． 07 بالمائة مقابل ［39． 30 ± 7． 36 بالمائة ، P 0． 05) ومستوى MDA (［36． 41 ± 4． 27 مقابل ［54． 91 ± 5． 12］ nmol / mg prot ، P ＜ 0． 05)． تم تنظيم تعبيرات mＲNA لـ Nrf2 و HO -1 و NQO -1 في أنسجة الخصية بشكل كبير في عناصر التحكم في نموذج TI مقارنةً بتلك الموجودة في عناصر التحكم العادية (P 0． 05) ، وبشكل ملحوظ تم تنظيمه في مجموعة معالجة CTWE مقارنةً بتلك الموجودة في مجموعة نموذج TI (P 0． 05) ، بينما زاد Caspase3 بشكل ملحوظ في عناصر التحكم في نموذج TI (P 0． 05) وانخفض في مجموعة معالجة CTWE (ف ＜ 0． 05)． من الناحية النسيجية ، أظهرت أنسجة الخصية لعناصر التحكم في نموذج TI حدودًا غير واضحة من قاعدة النبيبات المنوية إلى سطح اللمعان ، مع طبقات غير مرتبة ومقلصة من الخلايا المولدة للحيوانات المنوية وانخفاض عدد الحيوانات المنوية في الأنابيب المنوية ، بينما هيكل الأنابيب المنوية تعافى تقريبًا إلى طبيعته في مجموعة علاج CTWE．

خاتمة: يمكن لمستخلص ماء Cistanches tubulosa أن يمنع بشكل فعال إصابة الخصية التي يسببها السيكلوفوسفاميد من خلال تعزيز نشاط إنزيم مضادات الأكسدة وتنظيم تعبيرات الجينات المرتبطة بمسار إشارات Nrf2．

مسحوق Cistanche

【الكلمات الدالة】مستخلص المياه Cistanche tubulosa ؛ خصية؛ سيكلوفوسفاميد. الاكسدة؛ الفأر

سيكلوفوسفاميد (CTX) ، كدواء مضاد للأورام [1] وعامل مثبط للمناعة [2] ، يستخدم على نطاق واسع في الممارسة السريرية الطبية. ومع ذلك ، فإن له أيضًا تأثيرات سامة للخلايا ، ويعد تلف الجهاز التناسلي أحد آثاره الجانبية. أظهرت الدراسات السابقة أن CTX يمكن أن يسبب ضرر الإجهاد التأكسدي لأنسجة الخصية في الذكور أو الحيوانات الذكور ، مما يؤدي إلى خلل في تكوين الحيوانات المنوية مثل انخفاض عدد الحيوانات المنوية وحركتها [3-6]. لذلك ، أصبح استكشاف طرق لتقليل أو القضاء على تلف CTX لأنسجة الخصية وإصلاح وظيفتها الطبيعية في تكوين الحيوانات المنوية نقطة ساخنة للبحث.

تم تسجيل Cistanche deserticola لأول مرة في "Shennong Materia Medica Classic" وهو دواء صيني تقليدي وثمين. له تأثيرات جوهر التنغيم والدم ، وتوحيد لون الكلى ، وتغذية يين الكلى ، وترطيب الأمعاء ، وتخفيف الإمساك. وفقًا لدستور الأدوية الصيني ، يعد Cistanche deserticola نباتًا عشبيًا طفيليًا معمرًا في عائلة Orobaceae. Cistanche deserticola YCMa أو Cistanche tubulosa (Schenk) الضوء عبارة عن ساق سمين جاف متقشر. وفقًا لـ "المعنى الطبي" [8] ، فإن Cistanche deserticola "ينتمي إلى يين اليانغ ... وهو مادة تقوية الكلى الرئيسية وهو منتج يساعد على تقوية اليانغ والجوهر". يؤكد Materia Medica Preparation [9] على أن مفتاح استخدام Cistanche deserticola كدواء هو "تغذية الكلى وتغذية الأمعاء". يستخدم Cistanche deserticola على نطاق واسع في وصفات الطب الصيني التقليدي وهو أحد الأعشاب الطبية الأكثر استخدامًا في تقوية الكلى وتقوية اليانغ وتعزيز تركيبات القوة. في السنوات الأخيرة ، وجد التحليل الكيميائي والدراسات الدوائية أن Cistanche deserticola يحتوي على مكونات نشطة مختلفة مثل جليكوسيدات الفينيثانويد ، إيريديويد وجليكوسيداتها ، قشور و جليكوسيداتها ، عديد السكاريد ، قلويدات ، أحماض أمينية ، وعناصر ضئيلة [10]. 

فعالية Cistanche deserticola - تنقية الكلى

أظهرت الأبحاث الدوائية الحديثة أن لها تأثيرات دوائية مثل مكافحة الشيخوخة [11-12] ، ومقاومة التعب [13] ، ومضادات الأكسدة [14] ، وتنظيم المناعة [15] ، وحماية الأعصاب [{{6] }}] ولكنه يحسن بشكل ملحوظ الوظيفة الإنجابية [18]. لي وآخرون. [19] ذكرت أن Cistanche deserticola يمكن أن يعكس السمية الإنجابية التي يسببها ثلاثي الظفرة الغليكوزيد في الفئران. وانغ ديجون وآخرون. [20] أثبت أن Cistanche deserticola يمكن أن يعزز تكوين الحيوانات المنوية في الخصية ويحسن البيئة المكروية للبربخ. Zhao Donghai et al. [21] وجد أن جليكوسيدات الفينيثانويد من Cistanche deserticola لها تأثير علاجي كبير على الاضطرابات المولدة للحيوانات المنوية التي يسببها CTX في الفئران ، وأشار إلى أن آليته قد تكون مرتبطة بتحسين مستويات هرمون التستوستيرون في أنسجة الخصية. ومع ذلك ، هناك عدد قليل من التقارير حول آلية تأثير Cistanche deserticola على تعزيز الوظائف الإنجابية مثل تكوين الحيوانات المنوية ، وهناك حاجة إلى مزيد من الاستكشاف المتعمق. استخدمت هذه الدراسة التجريبية CTX لبناء نموذج فأر لإصابة أنسجة الخصية والتحقيق في تأثير إصلاح مستخلص ماء Cistanche tubulosa (CTWE) على أنسجة الخصية التالفة في الفئران. أجريت الدراسة من خلال الأساليب النسيجية والفسيولوجية والكيميائية الحيوية.تهدف دراسة مؤشرات مضادات الأكسدة والتعبير عن الجينات المتعلقة بالعامل النووي E2 المرتبط بمسار الإشارة 2 (Nrf2) في أنسجة الخصية إلى إثراء الأساس الدوائي لـ Cistanche deserticola وتوفيره. أساس علمي لقيمته الطبية وتطوير منتجاته.

1 المواد والطرق

1.1 المواد

1.1.1 حيوانات التجارب

40 فأرًا أبيض نظيفًا من كونمينغ ، ذكر ، يبلغ وزن جسمه (18 ± 2) جرامًا ، تم شراؤه من مركز الحيوانات التجريبية بجامعة أنهوي الطبية ، برقم ترخيص حيواني SCXK (Anhui) 2017-001. تمت تربية الفئران في أقفاص منفصلة وتغذيتها وشربت بحرية في درجة حرارة الغرفة 20-24 درجة ورطوبة 55 في المائة -65 في المائة. بعد 7 أيام من التغذية التكيفية ، تم استخدامها للتجربة.

1.1.2 المواد والكواشف الطبية

أقراص Cistanche deserticola المجففةتم شراؤها من سوق الأعشاب الطبية في مدينة Bozhou ، مقاطعة Anhui. تم تحديدهم على أنهم Cistanche deserticola الأنبوبي من قبل البروفيسور تشين نايدونغ من مكتب تدريس وبحوث الطب الصيني التقليدي في كلية الهندسة البيولوجية والصيدلانية ، جامعة وانشي. منتج قياسي من Echinacetin (نقاء أكبر من أو يساوي 98 في المائة) ، Shanghai Tongtian Biotechnology Co.، Ltd ؛ صبغة تلطيخ الهيماتوكسيلين يوزين (HE) ، Zhuhai Besso Biotechnology Co. ، Ltd ؛ Malondialdehyde (MDA)، superoxide disutase (SOD) ELISA kit، Nanjing Jiancheng Technology Co.، Ltd؛ CTX ، Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co. ، Ltd ؛ التستوستيرون إليسا كيت ، Shanghai Zhenke Biotechnology Co. ، Ltd ؛ UNlQ -10 عمود Trizol total RNA extraction kit، Shenggong Biotechnology (Shanghai) Co.، Ltd؛ إزالة EasyScript One Step gDNA و cDNA Synthesis SuperMix ، Trans Start Green qPCRSuperMix ، Beijing Quanshi Biotech Co.، Ltd.

أقراص Cistanche deserticola المجففة

1.1.3 الآلات والمعدات

مجهر BX53 من شركة أوليمبوس. YD -335 آلة تقطيع البارافين ، Zhejiang Jinhua Yidi Medical Equipment Co.، Ltd؛ RE -2002 Rotating Evaporator، Shanghai Yaote Instrument Equipment Co.، Ltd؛ TU -1950 مقياس الطيف المرئي للأشعة فوق البنفسجية ، Beijing Puxi General Instrument Co.، Ltd؛ NanoDrop2000 Ultramicro Spectrophotometer ، Thermo Fisher Scientific ؛ Agilent 1260 Infinity II Prime Liquid Chromatography System ، Agilent Technologies ؛ الخطوة الأولى بالإضافة إلى أداة PCR الكمية ، النظم الحيوية التطبيقية.

1.2 طريقة

1.2.1 إعداد CTWE

بالإشارة إلى طريقة الاستخراج بالماء الساخن المذكورة في المرجع [22] ، مع تحسينات طفيفة. سحق 5 0 0 جم من Cistanche deserticola واغمرها في 5 لتر من الماء المقطر. يغلي ويستخرج عند 100 درجة لمدة ساعتين. تصفية وجمع الترشيح. أضف 5 لترات من الماء المقطر إلى بقايا المرشح واستمر في الاستخلاص. كرر الاستخلاص ثلاث مرات ، ادمج المرشح ، ثم تبخره تحت فراغ عند 65 درجة ، وقم بالتركيز على محتوى دوائي خام يبلغ 0.5 جم / مل. تعتمد مراقبة الجودة في CTWE على محتوى إشيناسيتين [23]. يتم تحديد محتوى Echinacetin في CTWE بواسطة تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء ليكون (7.63 ± 0.08) مجم / مل.

1.2.2 تجميع الحيوانات وإدارتها

تم تقسيم 3 0 من الفئران بشكل عشوائي إلى مجموعة تحكم عادية ، ومجموعة نموذجية ، ومجموعة علاج Cistanche deserticola ، مع 10 فئران في كل مجموعة. أعطيت فئران مجموعة العلاج جرعة 10 جم / كجم من وزن الجسم من CTWE بالتزقيم [محسوبة على أنها 20 مرة للبالغين 0.5 جم / (كجم / يوم) [13]] ، بينما أعطيت المجموعة الضابطة وفئران المجموعة النموذجية نفس الحجم من محلول ملحي فسيولوجي بالتزقيم مرة واحدة يوميًا لمدة 35 يومًا متتاليًا ؛ في اليوم السابع والرابع عشر والحادي والعشرين والخامس والثلاثين من الإعطاء ، أعطيت المجموعة النموذجية وفئران مجموعة العلاج Cistanche نفس الحجم من المحلول الملحي الفسيولوجي للحقن داخل الصفاق.

1.2.3 جمع العينات ومعالجتها

بعد الحقن الأخير لـ CTX والصيام لمدة 12 ساعة تم قياس وزن الجسم وجمع عينات الدم. بعد ذلك ، تم تخدير الفئران في كل مجموعة باستخدام هيدرات الكلورال (0. 3 مل / 100 جم) داخل الصفاق ، وتمت إزالة الخصيتين ووزنها ؛ أخذ أنسجة البربخ من كلا الجانبين لاختبار جودة الحيوانات المنوية ؛ خذ الخصية اليسرى وقم بتخزينها في محلول بارافورمالدهيد بنسبة 4 في المائة لتقسيم الأنسجة وفحص الأنسجة ؛ خذ الخصية الصحيحة وقم بتخزينها في النيتروجين السائل للمؤشرات البيوكيميائية للأنسجة والكشف الكمي لـ PCR.

1.2.4 اختبار جودة الحيوانات المنوية

قطع نسيج البربخ الذي تم جمعه ووضعه في محلول ملحي فسيولوجي مسخن بدرجة 37. احتضان في درجة حرارة ثابتة لمدة 15 دقيقة للسماح للحيوانات المنوية للسباحة بشكل كامل وإعداد تعليق الحيوانات المنوية. خذ تعليق الحيوانات المنوية وضعه على لوحة عد الحيوانات المنوية مسخنة مسبقًا عند 37 درجة. راقب تحت المجهر واختر الحيوانات المنوية التي يمكن أن تتحرك في خط مستقيم أو في اتجاه غير موجه مثل الحيوانات المنوية الحية. الحيوانات المنوية الأخرى التي يمكنها فقط الدوران أو البقاء غير نشطة في مكانها مثل الحيوانات المنوية الميتة. عد عدد الحيوانات المنوية الحية في 200 حيوان منوي وحساب معدل حركة الحيوانات المنوية [24] ؛ خذ 10 ميكرولتر بعد تخفيف تعليق الحيوانات المنوية بمحلول ملحي فسيولوجي 20 مرة ، احسب تركيز الحيوانات المنوية باستخدام طريقة لوحة عد خلايا الدم ؛ خذ تعليق الحيوانات المنوية وامزجها بمحلول يوزين بنسبة 1 في المائة بنسبة 10: 1 للتلطيخ والتلطيخ والتجفيف بالهواء وتثبيته في الميثانول والمراقبة تحت المجهر وحساب معدل تشوه الحيوانات المنوية.

1.2.5 المراقبة المرضية لنسيج الخصية

خذ الخصية اليسرى المحفوظة في محلول بارافورمالدهيد بنسبة 4 في المائة ، وقم بقصها في كتلة نسيجية بحجم حوالي 0. بحجم 5 سم 3 بشفرة ، وقم بتضمينها في البارافين ، وصبغها باستخدام HE ، ولاحظ التغيرات المرضية للخصية نسيج تحت المجهر.

1.2.6 الكشف عن المؤشرات البيوكيميائية في أنسجة الخصية

وفقًا لتعليمات مجموعة الكشف عن SOD و MDA ، خذ الخصيتين المخزنة في النيتروجين السائل وقم بإعداد متجانس بنسبة 10 بالمائة. اتبع تعليمات العدة للكشف عن محتوى SOD و MDA في أنسجة الخصية.

1.2.7 الكشف عن محتوى هرمون التستوستيرون في الدم

وفقًا لتعليمات التشغيل الخاصة بمجموعة الكشف عن التستوستيرون ELISA ، اكتشف محتوى التستوستيرون في مصل الفأر.

1.2.8 أنسجة خصية الفأر

تم اكتشاف محتوى الجينات المتعلقة بمسار إشارات Nrf2 باستخدام PCR الكمي الفلوري للكشف عن مستويات تعبير mRNA للجينات مثل Nrf2 و Caspase -3 و heme Oxygenase -1 (HO -1) ، NADPH quinine oxidoreductase -1 (NQO -1) ، والبروتين المرتبط بـ Kelch-like ECH -1 (Keap1) في أنسجة خصية الفأر ، تم الإبلاغ عن الطريقة في المرجع [25] وتم تعديلها قليلاً . تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي من أنسجة خصية الفأر باستخدام مجموعة استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي Trizol العمودي. تم تصنيع cDNA عن طريق النسخ العكسي باستخدام إزالة EasyScript One Step gDNA و cDNA Synthesis SuperMix واكتشافه بواسطة RTFQ PCR باستخدام مجموعة Trans Start Green qPCRSuper Mix. تم تصميم البادئات الخاصة بـ Nrf2 و Caspase3 و HO -1 و NQO -1 و Keap1 بواسطة شركة Bioengineering (Shanghai) Co.، Ltd. باستخدام البرنامج المدمج لأداة PCR الكمي الفلورية ، تم التعبير عن قيم Ct للعينات بثبات في الفئران يعتبر Actin جينًا مرجعيًا داخليًا داخليًا [26]. الصيغة 2 - ΔΔ احسب مستوى تعبير mRNA النسبي باستخدام CT.

1.3 التحليل الإحصائي

تم تحليل جميع البيانات باستخدام SPASS 19. 0 لـ ANOVA أحادي الاتجاه ، مع تمثيل بيانات القياس بـ x ± s و P أقل من أو يساوي 0. 05 تشير إلى اختلافات ذات دلالة إحصائية.

الجدول 1. التسلسلات الأولية لـ Nrf2 و Caspase3 و HO -1 و NQO -1 و Keap1 و -actin المستخدمة في RTFQ-PCR

2 النتائج

2.1 تأثير CTWE على وزن الجسم وكتلة الخصية في الفئران المصابة بإصابة الخصية الناجمة عن CTX

بالمقارنة مع مجموعة التحكم العادية ، تم تقليل كتلة الجسم وكتلة الخصية لفئران المجموعة النموذجية بشكل ملحوظ (P<0.05); Compared with the model group, the body mass and testicular mass of mice treated with Cistanche deserticola significantly increased (P<0.05). See Table 2.

2.2 تأثير CTWE على جودة السائل المنوي في الفئران المصابة بإصابة الخصية الناجمة عن CTX

من الجدول 3 ، يمكن ملاحظة أنه بالمقارنة مع مجموعة التحكم العادية ، تم تقليل حركة الحيوانات المنوية وتركيز فئران المجموعة النموذجية بشكل كبير (P<0.05), while the sperm deformity rate was significantly increased (P<0.05); Compared with the model group, the sperm motility and sperm concentration in the Cistanche deserticola treatment group were significantly increased (P<0.05), while the sperm deformity rate was significantly reduced (P<0.05). The results showed that CTWE significantly improved the semen quality of mice with testicular injury caused by CTX.

الجدول 2. وزن الجسم ووزن الخصية للفئران في مجموعات مختلفة (x ± s)

NC: تحكم عادي ؛ TIMC: التحكم في نموذج إصابة الخصية ؛ CTWE: علاج استخراج المياه Cistanche tubulosa ؛ *: ف ＜ {0}}． 05 مقابل مجموعة NC ؛ #: ف 0． 05 مقابل مجموعة TIMC．

الجدول 3. حركة الحيوانات المنوية ، تركيز الحيوانات المنوية ونسبة الحيوانات المنوية غير الطبيعية شكليًا (MAS) للفئران في مجموعات مختلفة (x ± s)

NC: تحكم عادي ؛ TIMC: التحكم في نموذج إصابة الخصية ؛ CTWE: علاج استخراج المياه Cistanche tubulosa ؛ *: ف ＜ {0}}． 05 مقابل مجموعة NC ؛ #: ف 0． 05 مقابل مجموعة TIMC．

شكل 1. صور مرضية لأنسجة الخصية للفئران في مجموعات مختلفة (HE × 400)

A ＇و A: تحكم عادي ؛ B＇ و B: التحكم في نموذج إصابة الخصية ؛ C＇ و C: علاج استخراج المياه Cistanche tubulosa ؛ تشير الأسهم إلى التغيرات في طبقات الخلايا المولدة للحيوانات المنوية على جميع المستويات في الأنابيب المنوية ؛ تشير الصناديق إلى طبقات غير مرتبة ومختزلة من الخلايا المولدة للحيوانات المنوية ؛ والدوائر في دكاكة انخفاض عدد الحيوانات المنوية في الأنابيب المنوية

2.3 تأثير CTWE على التغيرات المرضية لأنسجة الخصية في الفئران المصابة بإصابة الخصية التي يسببها CTX

كما يتضح من الشكل 1 ، مقارنةً بمجموعة التحكم العادية ، فقد تغيرت بنية النبيبات المنوية في أنسجة الخصية لفئران المجموعة النموذجية بشكل ملحوظ. الخطوط العريضة للغشاء القاعدي للنبيبات المنوية غير واضحة ، ومستويات النطاف على جميع المستويات في التجويف تقل وترتب في حالة اضطراب ، ويقل عدد الحيوانات المنوية في التجويف بشكل كبير (الشكل 1 ب ، ب ') ؛ مقارنة بالمجموعة النموذجية ، بعد العلاج في مجموعة العلاج Cistanche وزاد عدد الحيوانات المنوية في التجويف بشكل ملحوظ (الشكل 1C ، C ').

2.4 تأثير CTWE على مستويات SOD و MDA في أنسجة الخصية للفئران المصابة بإصابة الخصية التي يسببها CTX

بالمقارنة مع مجموعة التحكم العادية ، انخفض محتوى SOD في أنسجة الخصية لفئران المجموعة النموذجية بشكل ملحوظ (P.<0.05) and the MDA content significantly increased (P<0.05); Compared with the model group, the SOD content in the testicular tissue of mice treated with Cistanche deserticola significantly increased (P<0.05) and the MDA content significantly decreased (P<0.05). The results showed that CTWE had a significant improvement effect on SOD and MDA indicators in the testicular tissue of mice with CTX-induced testicular injury. See Table 4.

الجدول 4． مستويات SOD و MDA في أنسجة الخصية للفئران في مجموعات مختلفة (x ± s)

SOD: سوبر أكسيد ديسموتاز ؛ MDA: malondialdehyde ؛ NC: تحكم عادي ؛ TIMC: التحكم في نموذج إصابة الخصية ؛ CTWE: علاج استخراج المياه Cistanche tubulosa ؛ *: ف ＜ {0}}． 05 مقابل مجموعة NC ؛ #: ف 0． 05 مقابل مجموعة TIMC．

2． 5 تأثير CTWE على محتوى هرمون التستوستيرون في مصل الفئران المصابة بإصابة الخصية التي يسببها CTX

وفقًا للجدول 5 ، مقارنةً بمجموعة التحكم العادية ، انخفض محتوى هرمون التستوستيرون في مصل الفئران بشكل كبير (P<0.05); Compared with the model group, the serum testosterone content of mice treated with Cistanche deserticola significantly increased (P<0.05). This indicates that CTWE not only has a good anti-injury and repair effect on CTX-induced testicular injury in mice but also significantly increases the serum testosterone content in testicular injury mice.

الجدول 5． محتوى المصل T في مجموعات مختلفة من الفئران (x ± s)

NC: تحكم عادي ؛ TIMC: التحكم في نموذج إصابة الخصية ؛ CTWE: علاج استخراج المياه Cistanche tubulosa ؛ *: ف ＜ {0}}． 05 مقابل مجموعة NC ؛ #: ف 0． 05 مقابل مجموعة TIMC．

2． 6 تأثير CTWE على التعبير عن جينات مسار Nrf2 في خصيتي الفئران المصابة بإصابة الخصية الناجمة عن CTX

كما هو مبين في الشكل 2 ، مقارنةً بمجموعة التحكم العادية ، تم تقليل مستويات التعبير عن الرنا المرسال لـ NQO -1 و HO -1 و Nrf2 في أنسجة الخصية لفئران المجموعة النموذجية بشكل كبير (P<0.05), while the mRNA expression level of the apoptotic gene Caspase3 was significantly upregulated (P<0.05); Compared with the model group, the expression levels of NQO-1, HO-1, and Nrf2 mRNA in the testicular tissue of mice treated with Cistanche deserticola were significantly upregulated (P<0.05), while the expression levels of Caspase3 mRNA were significantly downregulated (P<0.05); The mRNA expression level of Keap1 gene showed no significant difference between the normal control group, model group, and Cistanche deserticola treatment group (P>0 05). وبالتالي ، يمكن لـ CTWE إصلاح الضرر التأكسدي لـ CTX لخلايا المنسجات في خصية الفأر عن طريق زيادة تنظيم التعبير عن NQO -1 ، HO -1 ، والعوامل الأخرى المضادة للأكسدة التي ينظمها Nrf2 وتثبيط التعبير عن جين موت الخلايا المبرمج Caspase3 .

الشكل 2. Ｒ التعبيرات النسبية للجينات المرتبطة بمسار الإشارة Nrf2 في مجموعات مختلفة من الفئران

NC: تحكم عادي ؛ TIMC: التحكم في نموذج إصابة الخصية ؛ CTWE: علاج استخراج المياه Cistanche tubulosa ؛ *: ف ＜ {0}}． 05 مقابل مجموعة NC ؛ #: ف 0． 05 مقابل مجموعة TIMC

3 مناقشة

كدواء مضاد للأورام ومثبط للمناعة ، فإن CTX له سمية إنجابية قوية وضرر كبير للخصوبة [27]. أظهرت نتائج هذه الدراسة أن أنسجة الخصية في الفئران النموذجية CTX قد تضررت بشكل كبير ، وكان محيط الغشاء القاعدي للنبيبات المنوية غير واضح ، وانخفض قطر التجويف ، وانخفضت مستويات السائل المنوي على جميع المستويات ، و مضطربًا ، زاد معدل تشوه الحيوانات المنوية ، وانخفضت حيوية وتركيز الحيوانات المنوية ، وهو ما يتوافق مع نتائج بحث جيانغ بينغ [24] ، مما يشير أيضًا إلى أن CTX له سمية إنجابية قوية. Cistanche deserticola دواء جيد لتقوية اليانغ وتنغيم الكلى. تظهر نتائج هذه الدراسة أن CTWE يمكن أن يصلح بشكل فعال السمية التناسلية لـ CTX في الفئران. زاد وزن ونوعية الخصية لدى الفئران في مجموعة علاج Cistanche deserticola بشكل كبير ، وزاد تركيز الحيوانات المنوية وحيويتها بشكل كبير ، وانخفض معدل تشوه الحيوانات المنوية بشكل كبير ، وزاد محتوى هرمون التستوستيرون في الدم بشكل ملحوظ ؛ من حيث التشريح المرضي ، أظهرت ملاحظة تلطيخ HE لأقسام الأنسجة أن تلف أنسجة الخصية قد تحسن بشكل كبير ، وأصبح محيط الغشاء القاعدي للنبيبات المنوية كاملًا وواضحًا ، وكان مستوى السائل المنوي في التجويف واضحًا ويميل إلى أن يكون منتظمًا ، وتميل مورفولوجيا الأنسجة إلى أن تكون طبيعية ، وهو ما يتوافق مع تقرير البحث الخاص بـ Wang Dejun et al. [20] ، مما يشير إلى أن CTWE كان له تأثير في إصلاح تلف أنسجة خصية الفأر الناجم عن CTX.

cistanche الحياة الصحراوية - تنغيم الكلى

في ظل الظروف الفسيولوجية العادية ، تقضي أنسجة الجسم باستمرار على الجذور الحرة للأكسجين وبيروكسيداتها الناتجة عن الأنشطة الأيضية من خلال نظام مضادات الأكسدة ، وبالتالي الحفاظ على التوازن الديناميكي لنظام الأكسدة والاختزال في الجسم وتجنب تلف الأنسجة المؤكسدة [28]. يعتبر SOD و MDA من المؤشرات المهمة لنشاط مضادات الأكسدة في الأنسجة ، مما يعكس قدرة الأنسجة المضادة للأكسدة ودرجة تلف الإجهاد التأكسدي ، على التوالي [29]. ما شياو تشينغ وآخرون. [30] وجد أن Cistanche deserticola يمكن أن يزيد بشكل كبير من مستوى SOD ويقلل من مستوى MDA في أنسجة الكلى لدى الفئران ، وبالتالي يكون له تأثير وقائي معين على الضرر الناجم عن الجنتاميسين لأنسجة الكلى لدى الفئران. تظهر نتائج هذه الدراسة أن CTWE يمكن أن يزيد بشكل فعال من مستوى نشاط SOD ويقلل من محتوى MDA في أنسجة الخصية التالفة للفئران ، على غرار نتائج البحث المذكورة أعلاه ، مما يشير إلى أن CTWE يمكن أن تقاوم أضرار الإجهاد التأكسدي عن طريق تعزيز القدرة المضادة للأكسدة من أنسجة الخصية.

أعشاب سوبرمان cistanche - تونيفينج الكلى

Nrf2 هو عضو في عائلة عامل النسخ Cap'n'collar ويلعب دورًا مهمًا في عمليات المرض المختلفة مثل الأورام والالتهابات [31]. Nrf2 هو عامل نسخ رئيسي ينظم الإجهاد الخلوي المضاد للأكسدة. عندما يعاني الجسم من الإجهاد التأكسدي ، فإنه يدخل النواة ويرتبط بعناصر استجابة مضادات الأكسدة في اتجاه مجرى النهر (ARE) ، مما ينظم نشاط النسخ للعديد من العوامل المضادة للأكسدة الذاتية ، بما في ذلك SOD و HO -1 و NQO -1 ، وتثبيط تفاعلات الأكسدة [32]. في ظل الظروف المرضية ، تكون وظيفة تنظيم Nrf2 غير طبيعية ، وتتلف المنسجات بسبب الإجهاد التأكسدي. لو وآخرون. [33] ذكرت أن CTX يلعب دورًا في إصابة السمية الإنجابية عن طريق تقليل تنظيم التعبير عن Nrf2 ، وبالتالي تثبيط التعبير عن العوامل المضادة للأكسدة مثل HO -1 و NQO -1. في هذه الدراسة ، تم تقليل تنظيم التعبير عن جينات Nrf2 و HO -1 و NQO -1 في أنسجة الخصية لفئران المجموعة النموذجية بشكل كبير ، وتم تعديل التعبير عن جين موت الخلايا المبرمج Caspase3 ، مما يشير إلى ذلك قد يعزز CTX موت الخلايا المبرمج لخصية الفأر من خلال مسار إشارة Nrf2 ، مما يتسبب في تلف أنسجة الخصية ، وهو ما يتوافق مع نتائج البحث المذكورة أعلاه ؛ تم تنظيم تعبير Nrf2 و NQO -1 و HO -1 في أنسجة الخصية للفئران المعالجة بـ Cistanche deserticola بشكل كبير ، بينما كان التعبير عن Caspase3 منخفضًا بشكل كبير ، مما يشير إلى أن Cistanche deserticola يمكن تعزيز دخول Nrf2 النووي وتكامل ARE ، وتنظيم التعبير عن NQO -1 ، و HO -1 والعوامل المضادة للأكسدة الأخرى التي ينظمها Nrf2 ، وإصلاح الضرر التأكسدي لـ CTX على خلية المنسجات الخصية للفأر ، واستعادة تكوين الحيوانات المنوية للخصية وظيفة.

باختصار ، يمكن أن يخفف CTWE من تلف أنسجة الخصية الناجم عن CTX في الفئران ، وإصلاح بنية أنسجة الخصية التالفة ، واستعادة وظيفة الحيوانات المنوية للخصية. قد تكون الآلية مرتبطة بقدرة CTWE على زيادة نشاط إنزيم مضادات الأكسدة ، وتنظيم التعبير عن جينات عامل الإجهاد المضاد للأكسدة المتعلقة بمسار إشارات Nrf2 ، وتقليل تنظيم التعبير عن الجين الأبوطوزي Caspase3. تستكشف هذه المقالة بشكل أساسي تأثير إصابة الإجهاد المضاد للأكسدة لـ CTWE على أنسجة الخصية ، وهناك حاجة إلى مزيد من البحث حول آلية عملها.

مرجع

［1 ، Smolej L ، Brychtová Y ، Cmunt E ، وآخرون． جرعة منخفضة من فلودارابين وسيكلوفوسفاميد مع ريتوكسيماب في علاج الخط الأول للمرضى المسنين / المرضى المصابين بسرطان الدم الليمفاوي المزمن / سرطان الغدد الليمفاوية الليمفاوية الصغيرة (CLL / SLL): النتائج طويلة المدى لمشروع Q-lite من قبل مجموعة دراسة CLL التشيكية． Br J Haematol، 2021،193 (4): 769-778．

［2］ Li Ruijun و Qin Yong و Zhou Yalin وآخرون. تأثير ببتيد الحمص على الوظيفة المناعية للفئران التي تعاني من نقص المناعة. علوم الغذاء ، 2020 ، 41 (21): 133-139

［3 ، ليو بو ، لي يي ، وو تشي ، وآخرون. تأثير Erxian Tang على الوظيفة الإنجابية للفئران النموذجية التي يسببها سيكلوفوسفاميد. المجلة الصينية لطب الذكورة ، 2018 ، 24 (6): 547-552

［4］Lai Yongwei و Xi Yanli و Shao Minghai وآخرون. التأثير الوقائي لمركب الفلافونويد Myrica rubra على السيكلوفوسفاميد الناجم عن السمية الإنجابية في ذكور الفئران. البحوث الصحية ، 2020 ، 49 (5): 790 - 794

［5］Liu Jianguo و Zhao Hongle و Li Jiaojiao وآخرون. تأثير وصفة Bushen Huoxue على موت الخلايا المبرمج لخلايا الفئران المنوية التي يسببها السيكلوفوسفاميد. المجلة الصينية لعلم الذكورة ، 2020 ، 26 (9): 826-831

［6］Mi Zhaoyan و Zhang Yanan و Hua Rui وآخرون. التأثير الوقائي للريسفيراترول على السيكلوفوسفاميد يسبب الضرر التأكسدي في الحيوانات المنوية البشرية. مجلة طب المسالك البولية الحديثة ، 2021 ، 26 (4): 340-344

［7］لجنة دستور الأدوية الوطنية. دستور الأدوية في جمهورية الصين الشعبية: الجزء الأول. بكين: مطبعة العلوم والتكنولوجيا الطبية الصينية ، يوليو 2022

8］ جيا سو شيويه. الكيمياء الصيدلانية. بكين: مطبعة الطب الصيني التقليدي الصيني ، يوليو 2015

［9］وانغ انج. تحضير المواد الطبية. بكين: مطبعة الصين للطب الصيني التقليدي ، 2009.121

［10］زي ياجينج ، زين يقين ، تيان وي ، وآخرون. تقدم البحث في التركيب الكيميائي والتأثيرات الدوائية لـ Cistanche deserticola وتحليل التنبؤ بعلامات الجودة (Q-Markers). طب الأعشاب الصيني ، 2021 ، 52 (9): 2758-2767

［11］وو يان ، تشانغ هونغ ، بو رن ، وآخرون. دراسة عن التأثير الوقائي لعديد السكاريد Cistanche deserticola على نموذج الشيخوخة الحادة الناجم عن D-neneneba galactose. نشرة علم الأدوية الصينية ، 2017 ، 33 (7): 927-933

［12］ Wang NQ ، Ji SZ ، Zhang H ، وآخرون． Herba Cistanches: مكافحة الشيخوخة． ديس الشيخوخة ، 2017،8 (6): 740-759．

［13］وانغ شياو مينغ. بحث عن المكونات الفعالة وآلية عمل قرحة الصحراء في تخفيف التعب البدني (أطروحة دكتوراه). بكين: كلية الطب في اتحاد بكين ، 2019. 139-145

［14］Guo Qiaoli و Wu Zhibo و Zhou Yubi وآخرون. تحليل التركيب والنشاط المضاد للأكسدة للسكريات من Lanzhou Cistanche deserticola. تكنولوجيا صناعة الأغذية ، 2021 ، 42 (15): 96-103

［15］يانغ شيومي ، يانغ يو ، وانغ دانيانغ ، وآخرون. ينظم مستخلص الإيثانول من Cistanche deserticola في شينجيانغ تأثير تعزيز المناعة لنضوج DC على Th1 / Th2 في الفئران. مجلة تربية الحيوان والطب البيطري ، 2021 ، 52 (3): 820-830

［16］وانغ جينغ كانغ ، وانغ ليشاو ، جيانغ يونغ ، وآخرون. دراسة عن التأثير الوقائي وآلية مستخلص الكحول من Cistanche deserticola على تلف الخلايا العصبية الناجم عن ضخ نقص الأكسجة / نقص السكر في الدم. المجلة الصينية للطب الصيني التقليدي ، 2019 ، 44 (13): 2686-2690

［17］كاي كيروي ، ليو زيكسين ، صن شياودونج ، وآخرون. التأثير الوقائي وآلية عديد السكاريد Cistanche deserticola على الخلايا العصبية في الدماغ في فئران الشيخوخة التي يسببها D-neneneba galactose. المجلة الصينية لعلم الشيخوخة ، 2018 ، 38 (19): 4732-4734

［18］وانغ كيشين وتشين زيهوا ولو هوجي وآخرون. تأثير مستخلصات مختلفة من Cistanche deserticola على تحسين القدرة الجنسية في الفئران المصابة بنقص الكلى يانغ. المجلة الصينية للوصفات التجريبية ، 2018 ، 24 (22): 95-101

19］ Li J، Huang D، He LQ تأثير Ｒoucongrong (Herba Cistanch es Deserticolae) على السمية الإنجابية في الفئران التي يسببها gly coside لـ Leigongteng (Ｒadix et Ｒhizoma Tripterygii)． J Tradit Chin Med، 2014،34 (3): 324-328．

［20］وانغ ديجون ، شنغ شو تشينغ ، ليانغ هونغ. تأثير Cistanche Deserticola على التشكل والكيمياء النسيجية لخصيتين الفأر والبربخ. البحث التشريحي ، 2000 ، 22 (2): 101-103158

［21］Zhao Donghai و Zhang Lei و Zhang Yan et al. التأثير العلاجي وآلية جليكوسيدات فينيل إيثانول من Cistanche deserticola على السيكلوفوسفاميد الناجم عن الاضطرابات المولدة للحيوانات المنوية في الفئران. مجلة جامعة جيلين (الطبعة الطبية) ، 2014 ، 40 (3): 612-615

［22］Li Y و Peng Y و Wang MY وآخرون． التمثيل الغذائي المعدي المعوي البشري لمستخلص ماء عشبة السيستان في المختبر: توضيح ملف التمثيل الغذائي بناءً على تحديد المستقلب الشامل في عصير المعدة وعصير الأمعاء والبكتيريا المعوية البشرية والميكروسومات المعوية． J أجريستيكس فوود كيميائي ، 2017،65 (34): 7447-7456．

［23］شو شانشان ، وو كانغيو ، تو شينغ مينغ. تحديد Echinacetin في مستخلص المياه من Cistanche deserticola بواسطة HPLC. الطب الصيني الجديد وعلم الصيدلة السريرية ، 2019 ، 30 (5): 598-601

［24］جيانغ بينغ ، شو تشينغهونغ ، تشين كونو ، وآخرون. تأثير Jingui Shenqi Wan على التعبير عن جينات مسار الإشارة Nrf2 في أنسجة الخصية للفئران مع إصابة الخصية الناجمة عن السيكلوفوسفاميد. المجلة الصينية لعلم الذكورة ، 2020 ، 26 (2): 160-166

［25］Ma Chaoyang و Zhu Lijuan و Luo Chenxi وآخرون. التأثير الوقائي لحمض البتيولينيك على إصابة الكبد التي يسببها سيكلوفوسفاميد في الفئران. علوم الغذاء ، 2020 ، 41 (21): 147-153

［26］Hai Zhuo و Xiong Xianrong و Ma Hongcheng وآخرون. فحص الجينات المرجعية الداخلية لتحليل PCR الكمي لخصيتين الفأر. مجلة جامعة ساوث ويست للقوميات (إصدار العلوم الطبيعية) ، 2020 ، 46 (5): 448-456

27］ Guo XB و Zhai JW و Xia H وآخرون． يرتبط التأثير الوقائي للخلايا الجذعية المشتقة من الخلايا الجذعية من الصف العظمي ضد السمية الأنبوبية للسيكلوفوسفاميد بمسارات إشارات p38MAPK / EＲK و AKT． آسيوي جي أندرول ، 2021 ، 23 (4): 386-391．

［28］ Liu M و Li H و Zhang L وآخرون． يخفف زيت بذرة القطن من إصابة الإجهاد التأكسدي الناجمة عن السكتة الدماغية عن طريق تنشيط مسار Nrf2 sig naling． مول نيوروبيول ، 2021،58 (6): 2494-2507．

29］ Yang Y و Wu ZZ و Cheng YL et al． يحمي Ｒesveratrol من التلف التأكسدي لخلايا الظهارة الصبغية للشبكية عن طريق نشاط modula ting SOD / MDA وتفعيل تعبير Bcl -2． Eur Ｒev Med Pharmacol Sci، 2019،23 (1): 378-388．

［30］ما شياو تشينغ ، وانغ جي ، هو جين بينغ ، وآخرون. دراسة الديناميكا الدوائية للجليكوسيدات الكلية للفينيل إيثانول من Cistanche deserticola على الجنتاميسين أحدثت إصابات الكلى الحادة في الفئران. مجلة جامعة شينجيانغ الطبية ، 2020 ، 43 (7): 942-946950

31 هوانغ واي ، يانغ واي ، شو واي وآخرون． ينظم محور Nrf2 / HO -1 تكوين الأوعية الدموية لسرطان المعدة عن طريق استهداف VEGF． مدير السرطان ، 2021،13 (1): 3155-3169．

［32］ Zhao Y ، Wang Y ، Zhang M ، وآخرون． تسببت التأثيرات الوقائية لمركب الجينسنوسيدات (20Ｒ) -g3 على H 2O 2- في إصابة خلايا عضلة القلب عن طريق تنشيط مسار إشارات Keap -1 / Nrf2 / HO -1． كيميائي بيوديفر ، 2021 ، 18 (4): e2001007．

33］ Le X ، Ping L ، Gu Y ، وآخرون． يقلل عديد السكاريد بحبر الحبار من تلف الخصية الناجم عن السيكلوفوسفاميد عبر مسار تأثير Nrf2 / AＲE في الفئران． إيراني J Basic Med Sci، 2015،18 (8): 827-831．