تحليل التركيب والأنشطة المناعية للسكريات القليلة المعزولة من Cistanche Deserticola

كيف تحسن الذاكرة بدون دواء؟

للمزيد من المعلومات أرجو الأتصالali.ma@wecistanche.com

Ying Bai1، Hai-yan Li1، Shi-xian Chen 1 1 كلية علوم وهندسة الأغذية ، جامعة منغوليا الداخلية الزراعية ، هوهوت 010018 ، الصين

الملخص:تم الحصول على قليل السكاريد (CDOS) منCistanche Deserticolaعن طريق استخراج القلويات (الأس الهيدروجيني {0}}) ، وترسيب الإيثانول ، وتجزئة إلى جزأين مُنقى (على سبيل المثال ، CDOS -1 و CDOS -2) بواسطة Sephadex G -100 و Sephadex G -25 عمود كروماتوغرافيا الترشيح. تم تقييم تركيبة السكاريد الأحادي لـ CDOS عن طريق تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء (HPLC). لقد وجد أن CDOS -1 كان يتألف فقط من السكروز و CDOS -2 كان يتألف بشكل أساسي من السكروز ، الرامنوز ، والمانيتول ، بنسبة مول 1: 0.73: 3.61. أشارت الاختبارات المناعية إلى أن CDOS له تأثير كبير على مؤشر طحال الفأر ، مما يزيد من نشاط البلعمة للبلاعم ويحفز تكاثر الخلايا المنتجة للأجسام المضادة. من المأمول أن يتم تطوير CDOS إلى غذاء وظيفي أو دواء.

الكلمات الدالة:Cistanche Deserticola، قليل السكاريد ، التنقية ، التكوين ، الأنشطة المناعية.

انقر لاستخراج فوائد المنتجات

1 المقدمة

Cistanche DeserticolaYCMa.(عائلةOrobanchaceae) نبات طفيلي قصير موطنه شمال غرب الصين. يُعرف النبات المجفف بالكامل (بدون زهور) باسم منشط ويسمى "رو Congrongويصنف في الطب الشرقي على أنه حلو ومالح في الطعم ، ودافئ بطبيعته ، وينسب إلى قنوات الكلى والأمعاء الغليظة ، ويعمل على تنشيط الكلى وجوهره التكميلي ، وترطيب الأمعاء ، وإرخاء الأمعاء [1]. - [3] أظهرت الدراسة الدوائية الحديثة أنه يمكن أن يحفز تكوين الحمض النووي ويؤخر عملية الشيخوخة ، ويزيد من مضادات الأكسدة [4] ، ويقي ويعالج أمراض القلب والأوعية الدموية [3] ، بالإضافة إلى أنه يمكن أن يسبب أيضًا مسكنات ومضادات - التأثيرات الالتهابية [5] ، تعزز التعلم والذاكرة عن طريق تحفيز عوامل نمو الأعصاب ، وقد أشارت بعض الدراسات إلى ذلكجيم الصحراء يمكن أن تنشط المقتطفات وظيفة البلعمة للبلاعم داخل البطن في الفئران [7] - [9] وتعزز مناعة الجسم. وفقًا للدراسات السابقة ، يحتوي هذا النبات على العديد من المكونات النشطة التي تشمل جليكوسيدات فينيلثانويد ، إيريدويد ، قشور ، سكريات ، قلويدات ، إلخ. [11]جيم الصحراء تم التعرف على جليكوسيدات الفينيثانويد وعديد السكاريد كمكونات نشطة رئيسية ، وقد ركزت العديد من الدراسات على هياكلها وأنشطتها الحيوية خلال العقود الماضية [12] - [17]. أما بالنسبة للسكريات القليلة القيمة فيجيم الصحراء، التقارير محدودة للغاية. السكريات قليلة السلسلة ، وهي عبارة عن سكريات قصيرة السلسلة تحتوي على سكريات متجانسة أو غير متجانسة ، معروفة جيدًا بآثارها المفيدة على حياة الإنسان وقد تم استخدامها على نطاق واسع لفترة طويلة [18]. السكريات القلة الوظيفية ، التي لها وظيفة فسيولوجية مثل انخفاض التسرطن وعامل نمو البيفيدوباكتيريا [19] ، تعمل على تحسين صحة الإنسان والحيوان. لقد تم استخدامها كعنصر غذائي. في الآونة الأخيرة ، تم الإبلاغ عن وظائف جديدة للسكريات القليلة ، والتي لديها القدرة على تعديل الجهاز المناعي في البشر والحيوانات والأسماك. من إجمالي السكريات القليلة التي تم الحصول عليها من المستخلص القلوي لـجيم الصحراءمن خلال الجمع بين الترشيح الفائق والكروماتوغرافيا النفاذة للهلام وتحليل تركيبها بواسطة كروماتوجرافيا سائلة عالية الأداء (HPLC). بالإضافة إلى ذلك ، نقدم أيضًا الأنشطة المناعية لـجيم الصحراءقليل السكريات. على حد علمنا ، هناك عدد قليل من التقارير المنشورة حول دراسات النشاط المناعيجيم الصحراء قليل السكريات.

2. تجريبي

2.1. المواد

الجيم الصحراء تم زراعتها وجمعها من Alexa League (منغوليا الداخلية ، الصين). تم شراء فئران كونمينغ (GradeII ، عمرها ستة أسابيع) من المركز التجريبي لعلم الأدوية بجامعة منغوليا الداخلية. Sephadex G -100 ، Sephadex G -25 ، trifluoroacetic acid (TFA) ، 1- phenyl -3- methyl -5- pyrazolone (PMP) ، D-glucose ، D- تم شراء الجالاكتوز ، D- الفركتوز ، D-xylose ، D-mannose ، D-galacturonic acid ، D- حمض الجلوكورونيك ، السكروز ، الرامنوز ، المانيتول ، الفوكوز ، الرامنوز ، من سيجما (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم شراء Medium RPMI -1640 من شركة Gibco Invitrogen Co. (سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). كانت جميع المواد الكيميائية الأخرى ذات درجة تحليلية.

2.2. استخراج السكريات القليلة

جثثجيم الصحراء تم تقطيعها إلى قطع أصغر ثم طحنها إلى مسحوق بواسطة مطحنة وتم استخلاصها باستخدام إيثانول لا مائي (3 × 5000 مل) عند 70 درجة لمدة 3 ساعات تحت الضغط الجوي. تم إصلاح المكثف الراجع لإزالة الدهون. ثم يتم استخلاص المتبقي المتبقي باستخدام قلوي (pH =10) عند 60 درجة لمدة 3 مرات (ساعتان في كل مرة). بعد الطرد المركزي (2000 جم لمدة 15 دقيقة ، عند 20 درجة) ، تم تركيز المادة الطافية إلى عُشر الحجم في مبخر دوار تحت ضغط منخفض عند 50 درجة وتم ترشيحها. ثم تم نزع البروتين عن المادة المرشحة باستخدام كاشف Sevag [21] ، وإزالة اللون بالكربون المنشط.

2.3. عزل وتنقية قليل السكاريد

تمت إذابة السكريات القليلة الخام المجففة بالتجميد في ماء مقطر ، وطردها مركزيًا ، ثم تمت تنقية المادة الطافية بواسطة عمود Sephadex G -100 (1 × 50 سم) ، تمت معايرته بماء عالي النقاوة. بعد التحميل بالعينة ، تمت تصفية العمود بماء عالى النقاء بمعدل تدفق 5 مل / دقيقة. تم جمع الكسور المختلفة باستخدام أنابيب الاختبار. تم قياس محتوى الكربوهيدرات الكلي لكل أنبوب عند 490 نانومتر بواسطة الفينول-ه₂لذا₄طريقة [22]. تم فصل محلول التصفية المائية إلى جزأين CDOS -1 و CDOs -2. تمت تنقية جزأين على التوالي على عمود Sephadex G -25 (2.7 × 85 سم) باستخدام ماء عالي النقاوة (بمعدل تدفق 1 مل / دقيقة). بعد جمع الجزء المنقى ، تم تجفيفه بالتجميد.

2.4. تحليل أحادي السكاريد تكوين

تم تحقيق تركيبة السكاريد الأحادي لـ CDOs عن طريق تحليل HPLC. تم تحلل CDOs (2 مجم) أولاً بميثانول لا مائي يحتوي على 2 M HCl عند 8 {18}} درجة لمدة 16 ساعة تحت جو من النيتروجين ثم مع 2 M TFA عند 120 درجة لمدة ساعة واحدة. بعد إزالة TFA عن طريق التبخر ، تم اشتقاق التحلل المائي لاحقًا باستخدام PMP وفقًا للطريقة المبلغ عنها [23] وتحليلها بواسطة HPLC. تم إجراء فصل HPLC على نظام HPLC EF -2002 (شركة KNAUER ، ألمانيا). تم تصنيف مشتقات PMP بالكروماتوجراف باستخدام حجم Sugar- PAK (6.5 × 300 مم ، أكواب شركة المياه ، أمريكا) ، وتم قياس الامتصاصية عند 245 نانومتر. كان حجم الحقن 20 ميكرولتر ، وتم استخدام الطور المتحرك ، المكون من PBS (المذيب A) والأسيتونيتريل (المذيب B) ، للتشطيبات المتساوية بنسبة حجم 82 بالمائة (أ) إلى 18 بالمائة (ب). كان إجمالي وقت تشغيل HPLC 40 دقيقة ، وكان معدل التدفق 0.5 مل / دقيقة.

2.5. مناعي أنشطة

2.5.1. الوظيفة البلعمية للوحيدات الضامة

تم شراء ستين فأرًا من الفئران (GradeII ، عمرها ستة أسابيع) من المركز التجريبي لعلم الأدوية بجامعة منغوليا الداخلية وتم تأقلمها لمدة أسبوع واحد قبل استخدامها. تم تقسيم جميع الفئران بشكل عشوائي إلى أربع مجموعات ، تتكون من مجموعة مراقبة ملحية ، ومجموعة جرعات عالية من CDOs ، ومجموعة جرعة معتدلة ، ومجموعة جرعة منخفضة من CDOs. تم حقن الفئران داخل الصفاق بـ 0. 5 مل من محلول قليل السكاريد مرة واحدة يوميًا لمدة 5 أيام. تلقت مجموعة جرعة CDO العالية أو المتوسطة أو المنخفضة 1 0 {{1 0}} ، أو 50 ، أو 25 مجم / كجم / BW CDOs ، على التوالي ؛ و 0.5 مل من محلول ملحي تم حقنه في المجموعة الضابطة. في اليوم السابع ، تم إجراء تجربة إزالة جزيئات الكربون ، وفقًا لـ Hou [24] ، وتم قياس مؤشر الطحال ومؤشر الغدة الصعترية. باختصار ، تم حقن 0.05 مل / 10 جم / وزن الجسم من حبر الهند في كل فأر من خلال الوريد الذيل ، ثم تم الحصول على 20 ميكرولتر من الدم من الوريد المداري الخلفي بعد 3 و 7 دقائق من الحقن. تم وضع عينات الدم في أنابيب تحتوي على 2 مل 0.1 بالمائة Na₂كو₃، وقيم OD عند 600 نانومتر. تم حساب مؤشر التصفية (K) ومؤشر البلعمة () ومؤشر الجهاز المناعي على النحو التالي (1) ، t₂و ت₁يعني 7 دقائق و 3 دقائق على التوالي.

2.5.2. الخلية المنتجة للأجسام المضادة الانتشار

تم تحصين مجموعات من فئران كونمينغ (خمسة لكل مجموعة) عن طريق الحقن داخل الصفاق 2 × 10⁷SRBC في 1. تمت إضافة 0 مل من PBS مع 50 ميكروغرام من مواد الاختبار (لا شيء في المجموعة الضابطة). بعد أسبوع واحد ، الخلايا الطحالية (10⁶خلايا لكل 2 مل لكل بئر) من فئران كونمينغ مع أو بدون مواد اختبار لمدة 72 ساعة في 10 بالمائة RPMI 1640 وسط تحت 5 بالمائة CO₂في الهواء ، في ثلاث نسخ لكل ثقافة. عدد PFC مقابل SRBC لكل 10⁶تم تحديد الخلايا الطحالية.

2.6. الإحصاء التحليلات

تم التعبير عن البيانات كقيم متوسط ​​± SD. تم تحليل الفرق بين المجموعات المختبرة والمجموعة الضابطة بواسطة اختبار الطالب. تم اعتبار P <0. 05="">

3. النتائج و مناقشة

3.1. عزل وتنقية قليل السكاريد

تم عزل CDOs من المستخلص القلوي للأجسام المجففةجيم الصحراء بنسبة 3. 0 7 بالمائة. تم عزل جزأين من CDOS -1 و CDOS -2 من مزال الماء المقطر بواسطة عمود Sephadex G -100 ، على التوالي (الشكل 1). أظهرت الكسور المنقاة من CDOS -1 و CDOS -2 ذروة واحدة على عمود Sephadex G -25 ، مما يشير إلى عدم وجود سكريات قليلة أخرى في العينة. أظهرت نتائج تركيبات السكاريد الأحادي أن CDOS -1 كان يتألف فقط من السكروز (الشكل 2) وأن CDOS -2 كان يتألف أساسًا من السكروز ورامنوز ومانيتول (الشكل 3) ، مع نسبة مول. من 1: 0.73: 3.61.

3.2. الأنشطة المناعية الحيوية لل CDOs

أظهرت الكثير من الأدلة في الجسم الحي وفي المختبر أن السكريات الطبيعية قليلة التعدد أظهرت وظيفة مناعية عن طريق تحفيز الاستجابات المناعية الخلوية والخلطية [27] ، [28]. في هذه الورقة ، 1 0 0 ملغم / كغم / وزن الجسم زادت من مؤشر طحال الفأر ، ولكن لم تكن هناك فروق ذات دلالة إحصائية في مؤشر الغدة الصعترية بين المجموعات المعالجة ومجموعات التحكم (الجدول 1). البلاعم هي عنصر مهم في دفاعات المضيف ضد العدوى الفيروسية عن طريق تثبيط تكاثر الفيروسات داخل الخلايا وقتل الخلايا المصابة بالفيروس [29]. عند تنشيطها ، يتم إطلاق مجموعة متنوعة من الأوكسجين أو النيتروجين الوسيط والسيتوكينات من البلاعم وتشارك في العديد من الوظائف البيولوجية الهامة ، مثل الأنشطة المضادة للالتهابات ومضادة للأورام [30] - [32]. لذلك ، فإن النشاط البلعمي للبلاعم هو مؤشر مهم لوظائف المناعة في الكائن الحي. في هذه الدراسة ، زادت الجرعات المعتدلة والعالية من CDOs من نشاط البلعمة للبلاعم (الجدول 1). تمت دراسة تكاثر الخلايا المنتجة للأجسام المضادة الناجم عن CDOs من خلال فحص الزيادة في PFC الانحلالي في طحال فئران كونمينغ التي تم تحصينها باستخدام SRBC بالإضافة إلى عينة الاختبار. أشارت النتائج إلى أن الجرعات المعتدلة والعالية من CDOs تعزز بشكل كبير تكاثر الخلايا المنتجة للأجسام المضادة (الجدول 2). تسببت الجرعات العالية من CDOs في زيادة ملحوظة للغاية في عدد البيروفلوروكربونات (P <>

مراجع

[1] J. Li، Y. Jiang، R. Fan. التعرف على الإشارة البيولوجية المختلطة بناءً على تحليل المويجات. In: Y. Jiang، et al (eds).بروك. ورشة عمل الهندسة الرياضية في المملكة المتحدة والصين. ليفربول: الاتحاد الأكاديمي العالمي. 2007 ، ص. 1-8.

[2] J. Ouyang و XD Wang و B. Zhao وآخرون. تأثيرات العناصر الأرضية النادرة على نموCistanche Deserticolaالخلايا وإنتاج جليكوسيدات الفينيثانويد.JB io-technol, 2003, 102 (2) : 129-134

[3] Xu Zhaohui و Yang Junshan و Lu Ruimian وآخرون. منتج طبيعي جديد منCistanche DeserticolaYCMA. مجلة العلوم الصيدلانية الصينية ،1999, 8(2):61-63.

[4] X. Wang، L. Li، Muhuyati، X. Wanag، N. Du. العمل المضاد للأكسدة من جليكوسيداتسيستانشفي أنسجة الفئران.Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 1998, 23(9):554-5.

[5] Lin LW و Hsieh MT و Tsai FH و Wang WH و Wu CR النشاط المضاد للألم ومضاد الالتهاب الناجم عنCistanche Deserticolaفي القوارض.ي إثنوفارماكوl. 2002, 83(3):177-82.

[6] Choi، JG؛ القمر ، م ؛ جيونج ، هو. كيم ، MC ؛ كيم ، سي. أوه ، MSسيستانش هربايعزز التعلم والذاكرة عن طريق تحفيز عامل نمو الأعصاب.أبحاث الدماغ السلوكية. 2011, 216 (2): 652–8.

[7] Zong G ، He W ، Wu G ، Chen M ، Shen X ، Shi M. مقارنة بينCistanche DeserticolaYC Ma و C ،توبولوسا(شنك) على بعض الإجراءات الدوائية.Zhongguo Zhong Yao Za Zhi.1996, 21(7):436-7.

[8] He W و Shu XF و Zeng GZ وآخرون. دراسة تعزيز الفاعلية الجنسية لـجيم الصحراء. J تشين ميد.1996, 21(9): 534- 537.

[9] Zeng GZ، He W، Wu GL، et al. مقارنات بينCistanche Deserticolaوزن YC Ma و C.tubulosa على بعض الإجراءات الدوائية.J تشين ميد. 1996, 21(7): 436-438.

[10] Zeng QL، Zheng YF، Lu ZL التأثيرات المناعية لعديد السكاريدCistanche Deserticolaواي سي ما.J Zhejiang Univ ، Med Sci.2002, 31(4): 284- 287.

[11] لي يوان ، سونغ يوان يوان ، تشانغ هونغ تشيوان. التقدم في البحث عن المكونات الكيميائية والنشاط الطبي للكيستانش.الموارد النباتية البرية الصينية, 2010, 29(1):7-11.

[12] دو إن إس ، وانغ إتش ، يي واي إتش. عزل وتحديد جليكوسيدات الفينيثانويد منCistanche Deserticola.

Nat Prod R & D, 1993, 5(4): 5- 8.

[13] لو NS ، Liu JL تقدير جليكوسيدات فينيلثانويد فيCistanche Deserticolaبواسطة راتينج حويصلي- قياس الطيف الضوئي.Nat Prod R & D, 1993, 5(3): 30-33.

[14] Xiong QB و Tezuka Y و Kaneko T وآخرون. تثبيط أكسيد النيتريك بواسطة phenylethanoids في الضامة المنشطة.

المجلة الأوروبية لعلم الأدوية, 2000, 400: 137- 144.

[15] Zhao Wei و Yan Hong و Liang Zhong-Yan et al. التحليل الإنشائي لمنتجعات متعددة السكاريد القابلة للذوبان في الماء المعزولة من جذع سيستانش ديزيرتيكولا ما.المجلة الكيميائية للجامعات الصينية, 2005, 26(3):461-463.

[16] وانغ شيانغيان. دراسة عن علم الصيدلة المناعي وطابع امتصاص عديد السكاريدCistanche Deserticola. 2011 ، رقم S1 ،الطب والعلوم الصحية, E057-235-1-70.

[17] Xiong Q ، Hase K ، Tezuka Y ، Tani T ، Namba T ، Kadota S. النشاط الوقائي للكبد من phenylethanoids منCistanche Deserticola. بلانتا ميد. 1998, 64(2):120-5.

[18] دليل الأميليز والإنزيمات ذات الصلة (محرر بواسطة جمعية أبحاث الأميليز في اليابان) ، مطبعة بيرغامون (1988)

[19] أرايا ، س. (محرر) وقائع 5^العاشرمؤتمر عن تسوس الأسنان وتوصيل السكر (باللغة اليابانية) ، المعهد الوطني للصحة ، طوكيو (1980)

[20] كودو أوتاكا. قليل السكاريد الوظيفي وجانبه الجديد مثل تعديل المناعة.J. بيول. ماكروموl. 2006, 6

(1), 3-9.

[21] Navarini L، Gilli R، Gombac V، Abatangelo A، Bosco M، Toffanin R. Polysaccharides من مستخلصات الماء الساخن من حبوب البن العربي المحمص: العزل والتوصيف. الكربوهيدرات.بوليم.1999, 40:71–81.

[22] Dubois M، Gilles KA، Hamilton JK، Rebers PA، Smith F. طريقة القياس اللوني لتقدير السكريات والمواد ذات الصلة.شرجي. تشيم. 1956, 28:350–356.

[23] Yang X ، Zhao Y ، Wang Q ، Wang H ، Mei Q. تحليل مكونات السكاريد الأحادي في عديد السكاريد Angelica بواسطة كروماتوجرافيا سائلة عالية الأداء.العلوم الشرجية. 2005, 21:1177–1180.

[24] يوفانغ هو ويوباو هو وليو يانيان وآخرون. استخراج وتنقية ليكتين من الفاصوليا الحمراء ودراسات أولية عن الوظيفة المناعية للكتين وأربعة سكريات عشبية صينية.مجلة الطب الحيوي والتكنولوجيا الحيوية, 2010:1-9.

[25] كننغهام ، إيه جيه ، وأيه زنبرج. مزيد من التحسينات في تقنية البلاك لاكتشاف الخلايا المفردة المكونة للأجسام المضادة.علم المناعة.1968, 14:599-600.

[26] Haruhiko Takada و Tomohiko Ogawa و Fuminobu Yoshimura وآخرون. الأنشطة المناعية الحيوية لجزء بورين المعزول من نواة Fusobacterium ATCC 10953 [J]. العدوى والمناعة. 1988 ، 56 (4): 855-863.

[27] Wang MQ ، Guilbert LJ ، Ling L ، Li J ، Wu YQ ، Xu SR ، Pang P ، Shan JJ نشاط التعديل المناعي لـ CVT- E002: مستخلص ملكية من الجينسنغ في أمريكا الشمالية (Panax quinque folium).فارماكول ياء.2001, 53:1515–1523.

[28] Nergard CS ، Kiyohara H ، Reynolds JC ، Thomas-Oates JE ، Matsumoto T ، Yamada H ، Patel T ، Petersen D ، Michaelsen TE ، Diallo D ، Paulsen BS Structures والعلاقات الهيكلية والنشاط لثلاثة من الانقسام والتثبيت التكميلي أرابينوجالاكتان البكتيرية من نباتات ماليه المضادة للقرحةCochlospermum tinctoriumأ. ريتش وفيرنونيا كوتشياناSch Bip. السابق Walp.الجزيئات الحيوية. 2006, 7:71–79.

[29] E.-M. تشوي ، A.-J. كيم ، Y.-O. كيم ، وج.ك. هوانج ، نشاط مناعي من Arabinogalactan و Fucoidan في المختبر.مجلة الغذاء الطبي. 2005, 8(4):446–453.

[30] Y. Chen، J.-A. دوان ، د. تشيان ، وآخرون. تقييم ومقارنة نشاط تنظيم المناعة لأربعة أجزاء قابلة للذوبان في الماء من Angelica Sinensis في المختبر على الضامة البريتونية في الفئران ICR.علم الأدوية المناعي الدولي. 2010, 10:422–430.

[31] YS Lee ، OK Han ، CW Park ، وآخرون. التعبير الجيني للسيتوكين المؤيد للالتهابات وتنظيم أكسيد النيتريك لجذر استراغالي المائي المستخرج في خلايا RAW 264.7 الضامة.مجلة علم الادوية الاثنية. 2005, 100(3): 289–294.

[32] KY Lee و YJ Jeon. عديد السكاريد المعزول من Poria cocos sclerotium يستحث تنشيط NF-B / Rel وتعبير iNOS في الضامة الفأرية.علم الأدوية المناعي الدولي. 2003, 3(10-11):1353–1362.