يعزز Echinacoside تكاثر الخلايا الطلائية الأنبوبية الكلوية البشرية عن طريق منع مسار إشارات HBX / TREM2 بوساطة NF ‑ κB

جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com

YuFan ZHanG و QinFanG Wu و liMin ZHonG و donGWei GonG

الملخص.

بروتين فيروس التهاب الكبد B ضروري لتكرار فيروس التهاب الكبد B ويلعب دورًا في تطور التهاب الكبد لدى البشر. ومع ذلك ، فإن الوظيفة الأساسية لـ HBX أثناء التهاب كبيبات الكلى المزمن الناجم عن HBV (HBV-Gn) غير معروفة. (إشنكوسايد من cistanche)(ecH) هو جليكوسيد فينيلثانويد من جنس Cistanche ، والذي يمتلك أنشطة قوية مضادة للخلايا العصبية وأنشطة وقائية للأعصاب. في هذه الدراسة ، تم استكشاف وظيفة HBX والعلاقة بين HBX و ecH في الخلايا الظهارية الأنبوبية الكلوية البشرية (rTecs ؛ HK {0}} خط الخلايا). تم استخدام تحليلات Pcr الكمي للنسخ العكسي وتحليلات اللطخة الغربية لتحديد مستويات التعبير عن mRNA والبروتين لـ HBX في خلايا HK {{2} ، على التوالي. تم إجراء اختبار مجموعة عد الخلايا -8 لتحليل تكاثر الخلايا. تم استخدام تحليل التدفق الخلوي لتحديد معدل موت الخلايا المبرمج. أظهر HBX تأثيرات مضادة للتكاثر و proapoptotic في خلايا HK -2 وكان مرتبطًا بشكل إيجابي بتحفيز مستقبلات معبر عنها في تعبير الخلية النخاعية 2 (TreM2). علاوة على ذلك ، عطلت ECH وظيفة HBX في خلايا HK -2 ، حيث كانت تعمل كمثبط لـ HBX. علاوة على ذلك ، تم استخدام مثبط NF ‑ B محدد ، PdTc ، لمزيد من فحص العلاقة بين HBX و nF- B. أشارت النتائج إلى أن nF-B كان متورطًا في مسار إشارات HBX / TreM2 وتعبير TreM2 المنظم سلبًا في RTECS. قدمت الدراسة الحالية رؤى جديدة حول وظيفة HBX ، كما أشارت إلى القيمة المحتملة لـ ECH كعامل علاجي لـ HBV-Gn.

مقدمة

فيروس التهاب الكبد B (HBV) هو فيروس Hepadnaviridae ، مما يؤدي إلى التهاب الكبد الحاد والمزمن لدى البشر (1). HBV ، لا يسبب فقط عدوى مستمرة أو عابرة في الكبد ولكنه يصيب أيضًا الأنسجة خارج الكبد ، بما في ذلك البنكرياس والقناة الصفراوية والجهاز اللمفاوي والكلى (2). علاوة على ذلك ، ترتبط الإصابة بفيروس التهاب الكبد B ارتباطًا وثيقًا بالتهاب كبيبات الكلى المزمن (HBV-Gn) ؛ ومع ذلك ، فإن الآليات الجزيئية لـ HBV خلال HBV-Gn ليست مفهومة تمامًا (3،4).

مطلوب بروتين HBV التنظيمي لفيروس التهاب الكبد B X (HBX) لتكرار HBV (5،6). أفاد عدد من الدراسات أن HBX يعزز تكاثر الخلايا أثناء سرطان الكبد المرتبط بعدوى فيروس التهاب الكبد B (7-9). الخلايا الطلائية الأنبوبية الكلوية البشرية (rTecs) هي جزء رئيسي من النسيج الخلالي الأنبوبي الكلوي وتلعب دورًا نشطًا في التهاب الكلى (10). يرتبط موت الخلايا المبرمج rTec ارتباطًا وثيقًا بخلل وظيفي في النسيج الخلالي الأنبوبي ، مما يؤدي لاحقًا إلى تطور HBV-Gn (10). يتم التعبير عن HBX بشكل أساسي في خلايا rTec ويسبب موت الخلايا المبرمج rTec وآفات الأنبوب الكلوي في المرضى الذين يعانون من HBV-Gn (11 ، 12). علاوة على ذلك ، تم الإبلاغ عن HBX لقمع تكاثر الفئران rTecs (13) ، ويسرع HBX الزائد من تقدم دورة الخلية من طور G1 إلى S في rTecs الأولية ، مما يؤدي إلى توقف دورة الخلية في المرحلة S (14). لذلك ، قد يوفر تحديد مثبط HBX علاجًا جديدًا لـ HBV-Gn. ومع ذلك ، فإن الشبكة الجزيئية الدقيقة لـ HBX في rTecs البشرية ليست مفهومة تمامًا.(إشنكوسايد من cistanche)(ecH) هو مركب طبيعي مستخلص منسيستانشالنباتات ، التي تظهر تأثيرات مضادة للالتهاب ومضادة للالتهابات (15،16). ذكرت دراسة سابقة أن ecH يحرض على الانتشار ويمنع موت الخلايا المبرمج للخلايا الظهارية المعوية (17). علاوة على ذلك ، تم الإبلاغ عن ecH لتسريع تجديد العظام عن طريق زيادة تكاثر خلايا بانيات العظم (18). يمكن أن يقلل ECH أيضًا من تكرار HBV وتعبير المستضد والالتهاب في الخلايا الظهارية المعوية لدى الفئران (16،19). ومع ذلك ، لم يتم توضيح التأثير البيولوجي للـ ECH على rTecs بشكل كامل.

عزز الإفراط في التعبير TreM2 تكاثر خلايا الورم الدبقي (22). على النقيض من ذلك ، تقلل ضربة قاضية TreM2 من انتقال nF-B إلى النواة في خلايا اللب اللبنية التنكسية البشرية (23). علاوة على ذلك ، تم تحديد TreM2 كهدف علاجي جديد لتنكس القرص الفقري البشري (23). ومع ذلك ، لم يتم الإبلاغ عن الوظيفة البيولوجية لـ TreM2 في rTecs البشرية. في هذه الدراسة ، تم إحداث زيادة في التعبير عن HBX (oeHBX) في rTecs البشرية (خط خلية HK -2) ​​وبالتالي تأثير ecH (إشنكوسايد من cistanche) على خلايا oeHBX المنقولة. كان الهدف من هذه الدراسة هو التحقيق في وظائف HBX والقيمة المحتملة لـ ecH كعامل علاجي فعال لـ HBV-Gn.

المواد و طُرق

خلية الثقافة.تم شراء خط خلية rTec البشري HK -2 من Shanghai Yaji Biotechnology co.، ltd. تمت زراعة خلايا HK -2 في وسط DME / F12 (cat. no. SH30023.01B ؛ Hyclone ؛ cytiva) مدعومًا بنسبة 10 في المائة من مصل بقري جنيني (القط رقم 16000‑044 ؛ Gibco ؛ Thermo Fisher Scientific ، inc .) ، 2 ملي مولار من الجلوتامين و 1 في المائة من البنسلين / الستربتومايسين (القط رقم P 1400-100 ؛ شركة بكين سولاربيو للعلوم والتكنولوجيا المحدودة) عند 37 درجة مئوية مع 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون.

RNA عزل و يعكس النسخ الكمي PCR (RT ‑ qPCR).تم استخراج إجمالي rna من خلايا HK -2 باستخدام Trizol® (رقم القط 1596 -026 ؛ Invitrogen ؛ Thermo Fisher Scientific ، inc.) ، وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة. تم نسخ إجمالي الحمض النووي الريبي إلى (كدنا) باستخدام مجموعة توليف أول ستراند (كدنا) وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة (القط رقم K1622 ؛ Thermo Fisher Scientific ، Inc.). تم إجراء qPCR باستخدام الخلط المسبق SYBr-Green وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة (القط رقم K0223 ؛ Thermo Fisher Scientific ، Inc.) على كاشف الوقت الحقيقي ABI ‑ 7300 (Applied Biosystems ؛ Thermo Fisher Scientific ، Inc.). كانت شروط PCR: 95 درجة مئوية لمدة 10 دقائق تليها 40 دورة من 95 درجة مئوية لمدة 15 ثانية ، و 60 درجة مئوية لمدة 45 ثانية. كانت هناك حاجة إلى ثلاث تكرارات لكل تفاعل. تم استخدام أزواج التمهيدي التالية لـ qPCR: HBX forward ، 5'-GGcTGcTaGGTTGTacTG -3 'والعكس ، 5'-caGaGGTGaaGcGaaGTG -3' ؛ TreM2 forward، 5'-TGGcacTcTcaccaTTacG -3 'وعكس ، 5'-ccTccc aTcaTcTTccTTcac -3' ؛ و GaPdH إلى الأمام ، 5'-AAT cccaTcaccaTcTTc -3 'والعكس ، 5'-aGGcTGTTG TcaTacTTc -3'. تم قياس مستويات الرنا المرسال باستخدام طريقة 2 ‑ Cq وتطبيعها إلى الجين المرجعي الداخليجابده (24).

الإفراط في التعبير و صرع.للحث على الإفراط في التعبير عن HBX و TreM2 ، تم إدخال تسلسل HBX أو TreM2 (كدنا) كامل الطول في ناقل plVX-puro (مختبرات التكنولوجيا النظيفة ، المؤتمر الوطني العراقي) عن طريق الهضم المزدوج (هندالثالث وايكو ارى). بعد ذلك ، تم نقل البلازميد المعاد تجميعه (1.5 ميكروغرام) إلى خلايا HK -2 (2 × 105). تم نقل البلازميد الوهمي (ناقل فارغ ، 1 ميكروغرام) بشكل عابر إلى خلايا HK -2 (2x105) كعنصر تحكم سلبي (oenc) باستخدام lipofectamine® 2000 (cat. no. 11668-027 ، Invitrogen ، Thermo فيشر العلمية ، المؤتمر الوطني العراقي.). ecH(إشنكوسايد من cistanche)(cat. no. 82854-37-3؛ Biopurify Phytochemicals، ltd.) في DMSO (القط رقم d2650 ؛ Sigma-Aldrich ؛ Merck KGaa) بتركيز 1 و 2.5 و 5 و 10 و 20 و

50 مجم / لتر على التوالي ؛ ويضاف إلى ثقافة خلايا oeHBX أو oeTreM2 المنقولة. بدأت التجارب اللاحقة بعد 48 ساعة.

لإسقاط تعبير TreM2 ، تم تصنيع ثلاثة تداخلات صغيرة (si) RNAs (siTreM 2-1 و siTreM 2-2 و siTreM 2-3 ؛ 20 ميكرومتر) تستهدف TreM2 (Shanghai Majorbio Bio-Pharm Technology co . ltd.) ومن ثم نقلها إلى خلايا HK -2 (2x105) باستخدام lipofectamine® 2000 وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة (Invitrogen؛ Thermo Fisher Scientific، Inc.). تم استخدام تسلسل siRNA مخلوط غير محدد (5'uucuccGaacGuGucacGu3 ، 25 نانومتر) عنصر تحكم سلبي (nc) كعنصر تحكم سلبي. يتم توفير الموقع المستهدف وتسلسلات صفارات TreM2 في Table Si. تم إجراء التجربة اللاحقة بعد 48 ساعة.

الغربي النشاف.تم استخلاص البروتين الكلي من خلايا HK -2

باستخدام محلول تحلل RIPA (القط رقم BYl40825 ؛ Jrdun Biotech Co.، Ltd.). تم قياس كمية البروتين الكلي باستخدام مجموعة مقايسة حمض بيسينشونينيك (القط رقم PICPI23223 ؛ Thermo Fisher Scientific ، inc.) وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة وتم فصل 20 ميكروغرام من البروتين / الممر عبر SDS-PaGe على هلام بنسبة 15 بالمائة. تم تحديد قياس كثافة العينات باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة (dnM -9602 ، Pulangxin). بعد ذلك ، تم نقل البروتينات المنفصلة إلى غشاء PVDF. بعد الحجب بحليب جاف خالي الدسم بنسبة 5 في المائة لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة ، تم تحضين الغشاء بأجسام مضادة أولية (الجدول SII) عند 4 درجات مئوية طوال الليل وإعادة تحضينه باستخدام الأجسام المضادة الثانوية المضادة للفأر igG (1: 1 ، 000 ، القط. رقم a0216 ، معهد Beyotime للتقنية الحيوية) لمدة ساعة عند 37 درجة مئوية. تم تصور عصابات البروتين المناعي باستخدام نظام ecl (cytiva). تم إجراء البقع في ثلاث نسخ.جابدهتم استخدام H3 كعناصر تحكم في التحميل للبروتينات السيتوبلازمية والنووية ، على التوالي.

نتائج

إيك (إشنكوسايد من cistanche)يقمع الوظيفة من HBX في HK ‑ 2 الخلايا.لكي تقيم

وظيفة HBX ، تم إحداث زيادة في التعبير عن HBX في خلايا HK -2. تم تنظيم مستويات البروتين والبروتين النسبي لـ HBX بشكل كبير في خلايا oeHBX مقارنة بخلايا oenc (الشكل 1 أ و ب). بعد ذلك ، تمت زراعة خلايا oeHBX بتركيزات مختلفة من ecH (1 ، 2.5 ، 5 ، 10 ، 20 و 50 مجم / لتر ؛ e1 ، e2.5 ، e5 ، e10 ، e20 و e50 ، على التوالي). قلل التعبير المفرط عن HBX بشكل كبير من تكاثر خلايا HK -2 ، وتم عكس هذا النقص بواسطة ecH بطريقة تعتمد على الجرعة عند 24 و 48 ساعة (الشكل 1 ج).

علاوة على ذلك ، لم يظهر معدل تكاثر خلايا oeHBX أي فرق كبير مقارنة بالخلايا المعالجة بـ E1 (الشكل 1 ج). على النقيض من ذلك ، زادت المعالجة بـ e10 بشكل ملحوظ من معدل تكاثر خلايا oeHBX مقارنةً بالمعالجة E20 و E50 التي لم تظهر أي فرق كبير (الشكل 1 ج). لذلك ، تم فحص تأثير ecH على موت الخلايا المبرمج في الخلايا المعالجة بـ e2.5 و e5 و e 10-. أدى الإفراط في التعبير عن HBX إلى زيادة موت الخلايا المبرمج لخلايا HK ‑ 2 بشكل ملحوظ ، وانخفض معدل موت الخلايا المبرمج لخلايا oeHBX مع علاج ecH بطريقة تعتمد على الجرعة (الشكل 1 د). بشكل عام ، أشارت النتائج إلى أن ecH يثبط وظيفة HBX في خلايا HK -2 بطريقة تعتمد على الجرعة.

TREM2 التعبير هو تثبط بواسطة إيك(إشنكوسايد من cistanche) في منقولة oeHBX

الخلايا.تم استخدام rT-qPcr والنشاف الغربي لفحص المستويات النسبية للتعبير البروتيني ومرنا لـ TreM2 في خلايا oeHBX ، على التوالي. تم تنظيم مستويات تعبير TreM2 mrna والبروتين بشكل كبير في خلايا oeHBX مقارنة بخلايا oenc (الشكل 2 أ و ب). ومع ذلك ، خفضت ecH مستويات التعبير عن TreM2 في خلايا oeHBX المنقولة بطريقة تعتمد على الجرعة (الشكل 2 أ و ب). لذلك ، أشارت النتائج إلى أن تعبير HBX كان مرتبطًا بشكل إيجابي بتعبير TreM2 ، كما أشارت إلى التأثير القمعي لـ ecH على HBX في خلايا HK -2.

صرع و الإفراط في التعبير من TREM2 في HK ‑ 2 الخلايا.لمزيد من التقييم لوظيفة TreM2 ، تم إحداث ضربة قاضية لـ TreM2 والإفراط في التعبير في خلايا HK -2 باستخدام تداخل rna وناقل الفيروس البطيء ، على التوالي. للمقايسة القاضية ، ثلاثة siRNAs تستهدف الجين البشريTREM2(siTreM 2-1 و siTreM 2-2 و siTreM 2-3) تم نقلها إلى خلايا HK ‑ 2 ، وتم استخدام siRNA غير محدد كعنصر تحكم سلبي (سينت). نجحت جميع صفارات TreM2 الثلاثة في إسقاط التعبير الداخلي لـ TreM2 في خلايا HK -2 (الشكل 3 أ و ب). ومع ذلك ، لوحظت أدنى مستويات التعبير البروتيني عن TreM2 mrna النسبي في siTreM 2-1 و siTreM 2-2- الخلايا المنقولة (الشكل 3 أ و ب) ، لذلك ، siTreM 2-1 و siTreM {{13 }} تم اختيار الخلايا المصابة بالعدوى بالنقل لإجراء التجارب اللاحقة. بالنسبة لتجارب الإفراط في التعبير ، تم إنشاء بلازميد يحتوي على تسلسل TreM2cdna البشري كامل الطول ومن ثم نقله إلى خلايا HK -2 (oeTreM2). أ

خدم البلازميد وهمية كعنصر تحكم سلبي (oenc). تم زيادة مستوى التعبير TREM2 بشكل ملحوظ في خلايا oeTREM2 مقارنة بخلايا oenc (الشكل 3 ج و د). لذلك ، تم استخدام خلايا oeTreM2 للتجارب اللاحقة.

TREM2 إسكات النقصان ال موت الخلايا المبرمج من oeHBX الخلايا.تم تقييم ملف موت الخلايا المبرمج لخلايا oeHBX المنقولة بواسطة siTREM2 أو سينك. كان معدل موت الخلايا المبرمج للخلايا oeHBX بالإضافة إلى الخلايا الصادقة أعلى بشكل ملحوظ مقارنة بالخلايا المفتوحة. ومع ذلك ، انخفض معدل موت الخلايا المبرمج بشكل ملحوظ في خلايا oeHBX بالإضافة إلى siTreM 2-1 أو خلايا siTreM 2-2 مقارنةً بخلايا oeHBX بالإضافة إلى الخلايا الصادقة (الشكل 4 أ). أشارت النتائج إلى أن ضربة قاضية TreM2 أعاقت وظيفة HBX أثناء موت الخلايا المبرمج في HK -2.

Survivin ينتمي إلى مثبط لعائلة بروتين موت الخلايا المبرمج ، والذي يثبط نشاط موت الخلايا المبرمج ويثبط موت الخلايا (25). تم تحديد استهداف Survivin كنهج جديد لعلاج سرطان الخلايا الكلوية (26). nF-κB هو أيضًا مثبط لموت الخلايا المبرمج يلعب دورًا في عمليات الورم المضادة للاستماتة (27). علاوة على ذلك ، يرتبط تنشيط caspase3 ارتباطًا وثيقًا بالاستماتة (28). في هذه الدراسة ، تم تحديد كمية البروتين في TreM2 و Survivin و caspase3 المشقوق في خلايا HK-2. انخفض مستوى التعبير TREM2 بشكل ملحوظ في خلايا oeHBX بالإضافة إلى siTreM 2-1 / 2 مقارنةً بخلايا oeHBX بالإضافة إلى الخلايا الصادقة (الشكل 4 ب). تمت زيادة مستوى تعبير Survivin بشكل ملحوظ في خلايا oeHBX plus siTreM 2-1 / 2 مقارنة بخلايا oeHBX. بالإضافة إلى ذلك ، انخفض مستوى تعبير caspase3 المشقوق بشكل كبير في خلايا oeHBX plus siTreM 2-1 / 2 مقارنةً بخلايا oeHBX بالإضافة إلى الخلايا الصادقة (الشكل 4 ب). علاوة على ذلك ، قلل oeHBX بشكل كبير من انتقال NF B إلى النواة ، وزاد ترنسفكأيشن siTREM2‑1 / 2 بشكل كبير من الانتقال النووي nF- B (الشكل 4 ب). مجتمعة ، اقترحت النتائج أن TreM2 كان عاملاً متجهًا لـ HBX في خلايا HK -2 ، لذلك ، قد يعزز HBX موت الخلايا المبرمج عن طريق تنظيم تعبير TreM2 في rTecs البشرية.

TREM2 الإفراط في التعبير يقمع ال النقل منNF‑κB إلى ال نواة في HK ‑ 2 الخلايا.تأثير ecH(إشنكوسايد من cistanche)على oeTreM 2- تم تحليل الخلايا المنقولة. عزز تعبير TreM2 الزائد عن موت الخلايا المبرمج لخلايا HK -2 (الشكل 5 أ). انخفض موت الخلايا المبرمج لخلايا oeTREM2 بشكل ملحوظ عن طريق علاج ECH (E10 ؛ الشكل 5 أ). علاوة على ذلك ، قلل ECH بشكل كبير من التعبير عن TreM2 في خلايا oeTreM2. قلل تعبير TREM2 الزائد بشكل كبير من مستويات التعبير عن Survivin ، ومع ذلك ، تم عكس هذا الانخفاض في التعبير بواسطة ecH. بالإضافة إلى ذلك ، زادت مستويات التعبير البروتيني لـ caspase3 المشقوق بشكل كبير في خلايا oeTreM2 مقارنة بخلايا oenc ؛ تأثير انخفض بشكل ملحوظ عن طريق علاج ECH. علاوة على ذلك ، عزز ecH إزاحة nF- B إلى النواة في خلايا oeTreM2 (الشكل 5 ب). مجتمعة ، أشارت النتائج إلى أن ecH قام أيضًا بقمع وظيفة TreM2 في خلايا rTec البشرية.

وظائف HBX نكون قمع بواسطة ال NF‑κB المانع PDTCفي بشري RTECs.لمزيد من تقييم العلاقة بين

تمت زراعة خلايا HBX و nF-κB و HK 2 باستخدام مثبط محدد لـ nF-B ، PdTc (10 ميكرو مول / لتر ؛ P10). تم زيادة معدل موت الخلايا المبرمج للخلايا oeHBX بشكل ملحوظ مقارنة بخلايا oenc (الشكل 6 أ). ومع ذلك ، أظهرت خلايا oeHBX plus PdTc زيادة كبيرة في معدل موت الخلايا المبرمج مقارنة بخلايا oeHBX. علاوة على ذلك ، انخفضت مستويات التعبير النسبي للـ mRNA والبروتين في TreM2 في خلايا oeHBX بالإضافة إلى PdTc مقارنة بخلايا oeHBX (الشكل 6 ب). لذلك ، النتائج

اقترح أن nF-B ينظم بشكل سلبي تعبير TreM2 في الخلايا المنقولة بـ oeHBX.

NF‑κB المانع PDTC يقمع TREM2 المروجين نشاط في oeHBX الخلايا.تم إنشاء مراسل luciferase (pGl 3- محسن-luc2) يحتوي على تسلسل محفز من النوع البري لـ TreM2 (pGl 3- محسن-luc 2- pTreM2) وتم نقله لاحقًا إلى oenc و oeHBX و oeHBX بالإضافة إلى P10 الخلايا المستزرعة.

تم زيادة نشاط لوسيفيراز لناقل المراسل الذي يحتوي على مروج TREM2 من النوع البري بشكل كبير في خلايا oeHBX مقارنة بخلايا oenc. ومع ذلك ، قمع PdTc بشكل كبير نشاط لوسيفيراز للمراسل في خلايا oeHBX (الشكل 7). بشكل عام ، أشارت النتائج إلى أن PdTc يثبط نسخ TreM2 عن طريق تثبيط نشاط المروج لـ TreM2 في خلايا oeHBX.

مناقشة

يتم التعبير عن HBX بشكل أساسي في rTecs للمرضى الذين يعانون من HBV-Gn ، ويعمل كمحدد للتسبب في المرض الفيروسي (11 ، 29). لذلك ، تعد زيادة المعرفة بوظيفة شبكة جزيء HBX خطوة حاسمة في تطوير نهج جديد لعلاج HBV-Gn. كان الهدف من هذه الدراسة هو مواصلة فحص وظيفة HBX واستكشاف شبكتها الجزيئية المحتملة في rTecs البشرية.

يمنع HBX تكاثر rTecs (11). في هذه الدراسة ، تم تحديد وظائف مكافحة الانتشار والاستماتة لـ HBX في RTECs البشرية ، مما يشير إلى أن HBX قمع تطور rTecs البشرية. أشارت دراسة سابقة إلى أن ecH(إشنكوسايد من cistanche)يمنع تكرار HBV وتعبير المستضد (19). في الدراسة الحالية ، ecH(إشنكوسايد من cistanche)أدى العلاج إلى تعطيل وظيفة HBX في خلايا HK -2 ، وبالتالي ، قد يتأثر HBX بـ ecH في خلايا HK -2.

إعادة تسجيل الطب الجزيئي 22: 1137-1144 ، 2020 1143

علاوة على ذلك ، أشارت النتائج إلى أن ecH(إشنكوسايد من cistanche)قد يكون بمثابة عامل علاجي محتمل لـ HBV-Gn.

TreM2 هو مستقبل مناعي فطري يلعب دورًا في الاستجابة الالتهابية (30). في هذه الدراسة ، ارتبط تعبير HBX بشكل إيجابي مع تعبير TreM2 في RTECS البشري. علاوة على ذلك ، خفضت ضربة قاضية TREM2 بشكل كبير من معدل موت الخلايا المبرمج لخلايا oeHBX و ecH(إشنكوسايد من cistanche)خفض العلاج من تأثير oeTreM2 على موت الخلايا المبرمج. مجتمعة ، اقترحت هذه النتائج أن TreM2 تم استهدافه بواسطة HBX في خلايا HK -2. لذلك ، ECH(إشنكوسايد من cistanche)قد يثبط موت الخلايا المبرمج للإنسان rTecs عن طريق منع نشاط مسار إشارات HBX / TreM2.

أظهر تقرير سابق أن nF-B ، لا يلعب دورًا في موت الخلايا المبرمج فحسب ، بل يشارك أيضًا في تنظيم الاستجابات المناعية والالتهابات (31). علاوة على ذلك ، يتم التوسط TreM2 بواسطة microRNA حساس لـ nF-B -34 أثناء مرض الزهايمر والضمور البقعي (32،33). في هذه الدراسة ، تم زيادة معدل موت الخلايا المبرمج لخلايا oeHBX بشكل ملحوظ في وجود PdTc. على حد علمنا ، اقترحت الدراسة الحالية لأول مرة أن مثبط NF ‑ κB PdTc قمع نشاط المروج لـ TreM2. علاوة على ذلك ، أشارت النتائج إلى أن TreM2 ينظم بشكل سلبي انتقال nF-B إلى النواة في خلايا HK -2 ، ولكنه كان مرتبطًا بشكل إيجابي بمستويات تعبير caspase3 المشقوق. لعبت TreM2 دورًا معاكسًا في خلايا HK -2 لدورها في خلايا النواة اللبية التنكسية البشرية وخلايا الورم الدبقي (22،23). لذلك ، اقترحت الدراسة الحالية أن TreM2 قد يكون لها وظائف مختلفة في أنواع مختلفة من الخلايا البشرية.

مجتمعة ، الدراسة الحالية ، لم تشير فقط إلى أن nF-B كان مكونًا جديدًا لمسار إشارات HBX / TreM2 ، بل اقترحت أيضًا أن nF-B ينظم سلبًا تعبير TreM2 في rTecs البشرية. ومع ذلك ، كانت القيود الرئيسية للدراسة الحالية هي عدم وجودفي فيفوالتجارب والبيانات السريرية. لذلك ، كذلكفي فيفووالدراسات السريرية مطلوبة لتأكيد نتائج الدراسة الحالية.

في الدراسة الحالية ، وظيفة ecH(إشنكوسايد من cistanche)تم التحقيق فيه والنتائج تشير إلى الآثار المحتملة ل ecH(إشنكوسايد من cistanche)على مسارات الإشارات في rTecs البشرية. علاوة على ذلك ، عززت الدراسة الحالية المعرفة الحالية بالوظيفة البيولوجية للـ ecH في خلايا rTec البشرية واقترحت أيضًا إمكاناتها كعامل علاجي جديد لـ HBV-Gn.

مراجع

1. Karayiannis P: فيروس التهاب الكبد B: علم الفيروسات ، والبيولوجيا الجزيئية ، ودورة الحياة ، والانتشار داخل الكبد. طب الكبد الدولي 11: 1-9 ، 2017.

2. Seeger c و Mason WS: بيولوجيا فيروس التهاب الكبد B. Microbiol Mol Biol rev 64: 51-68، 2000.

3. أسامة إي ، أنا ماريا إس ، دبليو راي ك وفيرفنزا إف سي: علاج اعتلال الكلية المرتبط بفيروس التهاب الكبد B. nephron Clin Clin 119: c 41- c49، 2011.

4. Zhang Y و li J و Peng W و Yu G و Wang l و chen J و Zheng F: التهاب كبيبات الكلى الحاد المرتبط بالعدوى: تقرير عن 10 حالات. بلوس واحد 11: e0160626 ، 2016.

5. Slagle Bl و Bouchard MJ: فيروس التهاب الكبد B وتنظيم التعبير الجيني الفيروسي. كولد سبرينج هارب بيرسبكت ميد 6: a021402 ، 2016.

6. Guerrieri F، Belloni l، d'andrea d، Pediconi n، le Pera l، Testoni B، Scisciani c، Floriot o، Zoulim F، Tramontano a،وآخرون آل: تحديد الجينوم على نطاق واسع للأهداف الجينومية المباشرة لـ HBx. علم الجينوم BMc 18:184 ، 2017.

7. Shi T و Hua Q و Ma Z و lv Q: تقليل تنظيم mir -200 a -3 p الناجم عن بروتين فيروس التهاب الكبد B X (HBx) يعزز تكاثر الخلايا وغزو فيروس التهاب الكبد B المرتبط بالعدوى سرطان الكبد. Pathol res Pract 213: 1464-1469 ، 2017.

8. Tian Y و Xiao X و Gong X و Peng F و Xu Y و Jiang Y و Gong G: يعزز HBx تكاثر الخلايا عن طريق تعطيل الحديث المتبادل بين mir -181 a و PTen. ممثل العلوم 7: 40089 ، 2017.

9. Idris Me و Hachem H و Koering c و Merle P و Thénoz M و Montreux F و Wattel e: HBx يؤدي إما إلى الشيخوخة الخلوية أو تكاثر الخلايا اعتمادًا على النمط الظاهري الخلوي. J Viral Hepat 23: 130-138 ، 2016.

10. Wang X و Wang l و Zhu n و Zhou Y و Gu lJ و Yuan WJ: ينظم بروتين فيروس التهاب الكبد B الفيروسي B الكلوي استجابات الخلايا التائية والخلايا الضامة التي يسببها الخلايا الأنبوبية الكلوية. خلية مناعية بيول 94: 266-273 ، 2016.

11. يقوم بروتين He P و Zhang d و li H و Yang X و li d و Zhai Y و Ma l و Feng G: فيروس التهاب الكبد B الفيروسي X بتعديل موت الخلايا المبرمج في الخلايا الطلائية الأنبوبية الكلوية القريبة من الإنسان عن طريق تنشيط مسار إشارات JaK2 / STaT3. int J Mol Med 31: 1017-1029 ، 2013.

12. Yang Y و Wang X و Zhang Y و Yuan W: يتآزر بروتين X لفيروس التهاب الكبد B والسيتوكينات المسببة للالتهابات لتعزيز موت الخلايا المبرمج الذي يسببه Trail للخلايا الأنبوبية الكلوية عن طريق تنظيم dr4. int J Biochem cell Biol 97: 62-72 ، 2018.

13. He P و Zhou G و Qu d و Zhang B و Wang Y و li d: HBx يمنع التكاثر ويحث على موت الخلايا المبرمج عن طريق تنظيم Fas / Fasl في الخلايا الطلائية الأنبوبية الكلوية للفئران. J نفرول 26: 1033 ، 2013.

14. Han W و luo M و He M و Zhu Y و Zhong Y و ding H و Hu G و liu l و chen Q و lu Y: يؤثر انتقال الجين HBx على دورة الخلايا الطلائية الأنبوبية الكلوية الأولية من خلال تنظيم تعبير السيكلن. Mol Med rep 18: 1947-1954 ، 2018.