ABSTＲفعل

الهدف: توضيح ما إذا كانت عامةسيستانوسيدس(GCs) يتحسنالخلل المعرفيالفئران التي تتقدم في السن بسرعة (SAMP8) عن طريق توسط مستقبلات الأندروجين المحددة (AＲ) فيتنظيم التعبير عن البروتين المتشابك． 

الطرق: تم تقسيم إجمالي 76 7-فئران ذكور SAMP8 عمرها شهر بشكل عشوائي إلى المجموعة النموذجية، ومجموعة GCs، ومجموعة GCs + مجموعة فلوتاميد (F)، ومجموعة GCs + fulvestrant (ICI)، ومجموعة F، ومجموعة ICI. تم اختبار وظائف التعلم والذاكرة لدى الفئران في كل مجموعة باستخدام متاهة موريس المائية. تم استخدام النشاف الغربي وRT-PCR لاختبارمستوى التعبير عن سينابتوفيسين( SYN)، والكثافة بعد المشبكي - 95 ( PSD - 95)، وعامل التغذية العصبية المشتق من الدماغ ( BDNF) لدى الفئران في كل مجموعة.

النتائج: تحسنت الخلايا الجذعية بشكل ملحوظ في وظيفة التعلم والإدراك لدى فئران SAMP8.

بالمقارنة مع مجموعة GCs، انخفضت وظيفة التعلم والذاكرة لدى الفئران في مجموعة GCs + F ومجموعة GCs + ICI بشكل ملحوظ. أظهرت نتائج النشاف الغربي وRT-PCR أن مستوى التعبير عن BDNF وSYN وPSD-95 زاد بشكل ملحوظ على مستوى البروتين ومستوى الجينات في مجموعة GCs مقارنة مع مجموعة النموذج ( P ＜ 0． {{ 11}}5) . تمت زيادة مستوى تعبير SYN في مجموعة GCs + F وGCs + ICI، وانخفضت مستويات التعبير لـ BDNF وPSD - 95 بشكل ملحوظ في مجموعة GCs + F وGCs + ICI مقارنة بمجموعة GCs ( P ＜ 0． 05) .

الاستنتاج: قد تتوسط GCs على وجه التحديد AＲ لتعزيز اللدونة التشابكية في الفئران SAMP8، مما يؤدي بدوره إلى تحسين التعلم والوظيفة المعرفية.

الكلمات الرئيسية:السيستانوسيدسات العامة مستقبلات الاندروجين. اللدونة متشابك؛ الفئران SAMP8

مكمل Cistanche لتحسين الوظيفة الإدراكية مكمل غذائي PhGs75% Ech 30% Act 12%

مرض الزهايمر(م) شائعمرض التنكس العصبي، يتميز سريريًا بتدهور الوظيفة الإدراكية التدريجي وتغيرات في الحالة العقلية والنفسية [1]. لقد وجدت الدراسات أن مستويات هرمون التستوستيرون لدى مرضى مرض الزهايمر الذكور أقل بكثير منها لدى الرجال العاديين.

الالوظيفة المعرفية للمرضىتم تحسينه بدرجات متفاوتة بعدالعلاج ببدائل الكيتون[2]، مما يشير إلى أن الانخفاضات المرتبطة بالعمر في مستويات الأندروجين قد تكون عامل خطر للإصابة بمرض الزهايمر لدى كبار السن من الرجال.

Cistanche deserticola مجموع جليكوسيدات (السيستانوسيدسات العامة، GCs) هي واحدة من المقتطفات الرئيسية لـ Cistanche deserticola، والتي يمكن أن تحسن التعلم المرتبط بمرض الزهايمر والخلل المعرفي[3]. بالإضافة إلى ذلك، أدى إعطاء الخلايا الجذعية عن طريق التزقيم إلى زيادة كبيرة في مستويات هرمون التستوستيرون لدى الحيوانات [4]. تتمتع GCs أيضًا بوظيفة تعزيز اليانغ ويمكن أن تمارسها

التأثيرات الدوائية الشبيهة بالأندروجين. أفادت الدراسات السابقة أن هرمون التستوستيرون يمكن أن يحسن التعلم والوظائف المعرفية لدى الحيوانات النموذجية لمرض الزهايمر، وتعتمد هذه العملية على مستقبلات أندروجين محددة (مستقبلات الأندروجين، AR) بوساطة [5].

من المعروف أن الخلل المعرفي لدى مرضى الزهايمر يرتبط ارتباطًا وثيقًا باللدونة التشابكية. ومع ذلك، فإن الآلية المحددة التي من خلالها تنظم الخلايا الجذعية اللدونة التشابكية وبالتالي تحسين التعلم والوظائف المعرفية لا تزال غير واضحة. تهدف هذه الدراسة إلى استكشاف ما إذا كانت الخلايا الجذعية تتوسط ARＲ محددًا للتأثير على اللدونة التشابكية وبالتالي تحسين وظائف التعلم والمعرفية في مرض الزهايمر.

1 المواد والأساليب

1.1 حيوانات ومعدات التجربة

تم شراء فئران ذكور 3-عمرها شهر واحد من كلية الطب بجامعة بكين (SCXK [Beijing] 2016-0010) وتم تربيتها حتى بلغ عمرها 7 أشهر. تم حفظ الحيوانات في بيئة نظيفة عند درجة حرارة (24 ± 1) و

تم تزويد الحيوانات بالإضاءة الطبيعية، وحرية الوصول إلى الغذاء والماء، وتم تقديم الرعاية الإنسانية وفقًا لمبادئ 3R لاستخدام حيوانات التجارب. تمت الموافقة على هذه الدراسة التجريبية من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان التجريبية بكلية الطب باوتو (كلية الطب باوتو رقم 20201102).

الكواشف الرئيسية في التجربة هي:Cistanche deserticola إجمالي جليكوسيدات(GCs، Xi'an Ciyuan Biological Co., Ltd.)؛ مضادات مستقبلات الاندروجين فلوتاميد (شركة سيجما، الولايات المتحدة الأمريكية)؛ مضاد مستقبلات هرمون الاستروجين (ICI 182780، الولايات المتحدة الأمريكية) Med Chem Express)؛ الأجسام المضادة BDNF المضادة للفأر للأرنب،

الجسم المضاد PSD-95، الجسم المضاد SYN، الجسم المضاد -actin (شركة بروتين تك بالولايات المتحدة)؛ محلول البروتين الكهربائي، محلول نقل البروتين، TEMED، محلول الأكريلاميد، كبريتات الأمونيوم، Tris (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.)؛ مجموعة توليف [كدنا]، الكشف الكمي للموهبة

مجموعة الكاشف (Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd.)، وما إلى ذلك. تشمل المعدات التجريبية الرئيسية خزان الرحلان الكهربي العمودي، وجهاز الرحلان الكهربي، وخزان النقل، وهزاز التحديد (Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.)، ونظام تحليل تصوير هلام البروتين (Shanghai Tanon Technology Co., Ltd.)، أداة PCR الكمية للفلورة في الوقت الحقيقي (USA Roche) وما إلى ذلك.

1.2 التجميع والإدارة

مات اثنان من الفئران بشكل طبيعي أثناء عملية التغذية، وتم تقسيم الفئران الـ 78 المتبقية بشكل عشوائي إلى مجموعة نموذجية، مجموعة GCs، مجموعة GCs + مجموعة فلوتاميد (F)، مجموعة GCs + fulvestrant (ICI)، مجموعة F، ICI

مجموعات مكونة من 13 حيوانًا لكل منها. باستثناء المجموعة النموذجية، والمجموعة F، ومجموعة ICI، تم إعطاء المجموعات الأخرى بشكل مستمر GCs بجرعة 50 ملغم / (كجم · يوم) لمدة 30 يومًا.

من اليوم الرابع والعشرين بعد إعطاء GCs، تم إعطاء مجموعة GCs + فلوتاميد (F) ومجموعة GCs + مكمل (ICI) حقنة داخل الصفاق قدرها F (5 مجم / كجم / يوم) 3 0 دقائق بعد إعطاء GCs بواسطة تزقيمية. )، ICI (1 ملغم/كغم/يوم)، الحقن المستمر لمدة 7 أيام. ضبط تركيز الجرعات للتأكد من أن الحد الأقصى لحجم المعدة من الفئران هو 0. 5 مل، 1 مرة/د.

1. 3 اختبار متاهة موريس المائية

تكيفت الفئران مع البيئة المائية قبل يوم واحد. استمرت متاهة موريس المائية لمدة 6 أيام. كانت الأيام الخمسة الأولى عبارة عن اختبار تحديد المواقع والملاحة. تم تدريب الفئران مرة واحدة يوميًا في كل من الأرباع الأربعة لمدة دقيقة واحدة في كل مرة. كانت كل فترة تدريب 15 دقيقة، وتم تسجيل السجلات في نفس الوقت. الهروب من الكمون لتحديد المواقع الحيوانية واختبار الملاحة؛ في اليوم السادس، قم بإزالة المنصة من الماء وإجراء اختبار استكشاف الفضاء. سجل عدد معابر المنصة والنسبة المئوية للوقت الذي يقضيه في الربع المستهدف من الماوس. الربع المستهدف) ومسار السباحة للاستكشاف المكاني (مسار السباحة لاختبار المسبار المكاني) ومؤشرات أخرى.

1. 4 الكشف عن لطخة غربية

التعبير عن البروتينات المرتبطة بالمشابك SYN وPSD-95 وBDNF. بعد اختبار متاهة موريس المائية، تم تخدير جميع الفئران بشكل روتيني، وتم قطع رؤوسهم، وإزالة أدمغتهم، وتم تجريد الحصين. تم تحليل أنسجة الحصين من البروتين، وتعطيلها بالموجات فوق الصوتية عند 4 درجات، وتركها على الجليد لمدة 30 دقيقة، وطردها عند 12،000 دورة / دقيقة لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات. تم أخذ الطاف وقياس تركيز البروتين باستخدام طريقة BCA. بعد تحميل البروتين، قم بإجراء التراص الكهربائي للهلام عند جهد ثابت قدره 80 فولت، والفصل الكهربائي للهلام عند جهد ثابت قدره 120 فولت، والنقل الرطب عند تدفق مستمر قدره 300 مللي أمبير؛ إخراج غشاء PVDF، وحظره مع الحليب الخالي من الدسم 5% لمدة 80 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، وغسل الغشاء ثلاث مرات مع TBST. لمدة 15 دقيقة/ مرة، تم تحضين الجسم المضاد الأولي طوال الليل على طاولة رج عند درجة حرارة 4 درجات؛ وفي اليوم التالي، تم غسل الغشاء 3 مرات باستخدام TBST.

15 دقيقة / مرة، تم تحضين الجسم المضاد الثانوي في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين، ثم تم إجراء تطوير لون ECL، وتم إجراء التصوير باستخدام نظام تصوير التألق الكيميائي. تم استخدام -actin كمرجع داخلي، وتم تحليل قيمة الكثافة الضوئية للنطاق باستخدام برنامج Image J.

1. كشف 5ＲRT－PCRＲ

تم استخراج تعبير mRNA لـ SYN و PSD -95 و BDNF من إجمالي الحمض النووي الريبي (RNA) لأنسجة الحصين وفقًا لطريقة استخراج Trizol، وتم إنشاء cDNA بعد النسخ العكسي. تم استخدام مجموعة أدوات الكشف الكمي عن مضان المواهب للكشف الكمي النسبي عن مضان. تم تكرار التجربة ثلاث مرات وتم تحويل النتائج إلى 2 - وتم تحليل ΔΔCT. تم تصميم بادئات Mouse -actin وSYN وPSD-95 وBDNF بواسطة شركة Shanghai Sangon، ويتم عرض تسلسلات التمهيدي في الجدول 1.

1. 6 التحليل الإحصائي

عبر SPSS 25. 0 برنامج إحصائي للمعالجة، تم استخدام برنامج Graphpad Prism 8 لرسم الرسوم البيانية الإحصائية، وتم استخدام ANOVA أحادي الاتجاه لمقارنة الوسائل الزوجية لعينات متعددة. ف < 0. 05 يعني أن الفرق ذو دلالة إحصائية.