آثار المستخلص المائي لـ Cistanche Tubulosa على ميكروبيوتا الأمعاء لدى الفئران المصابة باضطرابات معوية

Xiaowei Bao و Dongwen Bai و Xiaolu Liu و Ying Wang و Lanjun Zeng و Chenye Wei و Weiquan Jin

كلية علوم الأغذية والصيدلة ، جامعة شينجيانغ الزراعية ، أورومتشي 830052 ، الصين

يجب توجيه المراسلات إلى Xiaowei Bao ؛ xiaoweibao0723@xjau.edu.cn

تم استلامه في 29 أبريل 2021 ؛ مقبولة في 30 يونيو 2021 ؛ تم النشر في ١٤ يوليو ٢٠٢١

هذا مقال مفتوح الوصول يتم توزيعه بموجب ترخيص Creative Commons Attribution License ، والذي يسمح بالاستخدام غير المقيد والتوزيع والاستنساخ في أي وسيط بشرط الاستشهاد بالعمل الأصلي بشكل صحيح.

اتصال:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

الملخص

ترتبط اضطرابات ميكروبيوتا الأمعاء بالعديد من الأمراض. المستخلص المائي منسيستانشتوبولوساتم الإبلاغ عن (CT) ، وهي تركيبة عشبية صينية تقليدية ، أنها تلعب دورًا في حماية الأمعاء البشرية. ومع ذلك ، لا يُعرف الكثير عن آثاره على ميكروبيوتا الأمعاء. أجريت الدراسة الحالية لتحديد ما إذا كانسيستانشتوبولوسايمكن للمستخلص المائي تعديل ميكروبيوم الأمعاء في الفئران المصابة باضطرابات معوية. وجدنا أنه يمكن إنقاذ مورفولوجيا الأمعاء التالفة الناتجة عن العلاج باستخدام سيفيكسيم باستخدامسيستانشتوبولوسامستخلص مائي. أشارت مقارنة التنوع الميكروبي بين الفئران التي عولجت بمستخلص Cistanche Tubulosa والفئران الضابطة أيضًا إلى أنه يمكن استعادة الاضطراب في مجتمع الميكروبيوم لمجموعات النموذج عن طريق العلاج بتركيزات عالية ومتوسطة منسيستانشتوبولوسامستخلص مائي. أدى العلاج بالسيفيكسيم إلى انخفاض معنوي في بكتيريا حمض اللاكتيك. ومع ذلك ، فإن مكملاتسيستانشتوبولوسااستعاد المستخلص المائي نمو بكتيريا حمض اللاكتيك. علاوة على ذلك ، فإنسيستانشتوبولوساكان المستخلص المائي قادراً على تخفيف التغيرات الدراماتيكية في المسارات الأيضية لميكروبيوم الأمعاء الناجم عن سيفيكسيم. قدمت هذه النتائج نظرة ثاقبة على الآثار المفيدة لمستخلص Cistanche Tubulosa المائي على ميكروبيوتا الأمعاء ، كما أنها قدمت مرجعًا مهمًا لتطوير الأدوية ذات الصلة في المستقبل.

سيستانشتوبولوساله العديد من التأثيرات ، انقر هنا لمعرفة المزيد

1 المقدمة

الكائنات الدقيقة المعوية تستعمر أساسًا تجويف الأمعاء والطبقة المخاطية وتتعاون مع المضيف من خلال تبادل المواد والطاقة ، والتحول ، والعمليات الأخرى [1]. * هي محاور إشارات تدمج الرسائل البيئية ، مثل النظام الغذائي ، مع الإشارات الجينية والمناعة ، وبالتالي تؤثر على التمثيل الغذائي للمضيف ، والمناعة ، والجهاز العصبي ، والاستجابة للعدوى [2]. عادة ، هناك توازن ديناميكي بين الجراثيم المعوية والمضيفين ؛ ومع ذلك ، يمكن أن يؤدي دسباقتريوز القناة الهضمية إلى تغيرات في توازن الصحة / المرض ، واضطرابات المناعة ، والعديد من الأمراض [3]. التغييرات المعتدلة في ميكروبيوتا الأمعاء مقبولة للمضيف ؛ ومع ذلك ، يمكن أن يوفر هذا فرصًا لتضخيم التغييرات في العوامل المشددة الأخرى ، مثل العاثيات ، والبكتريوسينات ، والإجهاد التأكسدي [4].

أظهرت الدراسات السابقة أن مستخلص الإيثانول من Cistanche tubulosa (CT) ، وهو تركيبة عشبية صينية تقليدية ، يمكن أن ينظم التركيب الميكروبي للأمعاء في الجرذان [5] ، وأن إجمالي الجليكوسيدات في Cistanche Tubulosa يعدل الميكروبات المعوية المضطربة [6]. يُطلق على أنواع Cistanche ، التي تتطفل بشكل أساسي على جذور أنواع Tamarix ، اسم "جينسنغ الصحراء" ، ويستخدم منشط يتكون من سيقان Cistanche deserticola (CD) و Cistanche tubulosa (CT) كعلاج عشبي [7 ]. تم العثور على المكونات الكيميائية الرئيسية لـ Cistanche Tubulosa phenylethanol glycosides (PHGs) ، وهي مواد مضادة للأكسدة [8 ، 9] ، لتحسين الخلل الوظيفي التناسلي [10] ، وتثبيط تنشيط الخلايا النجمية الكبدية ، وتعوق توصيل مسارات الإشارات في TGF {{6 } / SMAD [11] ، وتمنع التليف الكبدي الناجم عن الزلال البقري في الفئران [12]. من بين أكثر من 100 مكون في Cistanche Tubulosa ، يعتبر عديد السكاريد أيضًا أحد المواد المهمة ذات المحتوى الوفير [13 ، 14]. أثبتت الدراسات السابقة أن عديدات السكاريد المطثية الصحراوية تحفز تكوين الميلانين في الخلايا الصباغية ، وتقلل من الإجهاد التأكسدي [15] ، وتخفف من الخلل الوظيفي المعرفي عن طريق تنظيم العمليات المضادة للأكسدة والالتهابات في الجرذان [16] ، وتحمي خلايا PC12 ضد الإصابة التي يسببها OGD / RP [17] ، يعزز امتصاص إشنكوسايد في الجسم الحي ، ويؤثر على ميكروبيوتا الأمعاء [18].

البروبيوتيك هي كائنات دقيقة حية غير مسببة للأمراض لها فوائد صحية وتضفي التوازن الميكروبي في الجهاز الهضمي عند تناولها بكميات كافية [19]. * يمكن لـ ey تعزيز الاستجابات المناعية الخلوية غير النوعية التي تتميز بتنشيط الضامة والخلايا القاتلة الطبيعية وخصوصية المستضد للخلايا اللمفاوية التائية السامة وإطلاق السيتوكينات المختلفة بطريقة خاصة بالسلالة وتعتمد على الجرعة [20 ]. تعمل سلالات البروبيوتيك على تحسين خصائص ظهارة الأمعاء عن طريق تعديل TJ ، وقد تم إثبات سلالات بروبيوتيك معينة لتنظيم تعبير الميوسين ، وبالتالي التأثير على خصائص الطبقة المخاطية وتنظيم الجهاز المناعي للأمعاء بشكل غير مباشر [21]. تعتبر سلالات بكتيريا حمض اللاكتيك (LAB) و Bifidobacterium من البروبيوتيكات الرئيسية التي تم استخدامها في العديد من المجالات [22-26]. فوائدها الصحية عديدة ، حيث تعتبر قدرتها المضادة للأكسدة عاملاً مهمًا في وظائفها المتعلقة بالصحة [27]. يمكن للبروبيوتيك أن تخلب أيونات المعادن لمنعها من تحفيز الأكسدة [28 ، 29] ؛ يمكنهم أيضًا زيادة التعبير عن الإنزيمات المضادة للأكسدة [30 ، 31] ، وإنتاج مستقلبات مختلفة ذات نشاط مضاد للأكسدة [32 ، 33] ، والتوسط في مسارات إشارات مضادات الأكسدة [34-36] ، وتنظيم الإنزيمات المنتجة لأنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) و استجابة الكائنات الدقيقة المعوية للإجهاد التأكسدي [37].

زهرة cistanche

أظهرت دراسة حديثة أن السكريات المتعددة في Cistanche Deserticola يمكن أن تحفز نمو بعض بكتيريا حمض اللاكتيك ، والتي يمكن أن تفيد صحة الإنسان [38]. ومع ذلك ، فإن محتوى السكريات في Cistanche Deserticola يختلف عن المحتوى الموجود في Cistanche Tubulosa [7 ، 39] ، وقد يؤدي هذا الاختلاف إلى تأثيرات مختلفة على الكائنات الحية الدقيقة المعوية. علاوة على ذلك ، على الرغم من أن عديد السكاريد Cistanche Deserticola يمكن أن يقلل الإجهاد التأكسدي عن طريق تنشيط مسار NRF2 / HO -1 [15] ، فإن تأثيرات السكاريد الواحد قد تختلف عن التأثير العام للتركيبات المتعددة في Cistanche Tubulosa. وبالتالي ، من الضروري التحديد الدقيق لتأثيرات المستخلصات المائية لـ Cistanche Tubulosa على الكائنات الحية الدقيقة المعوية. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن لـ PHGs أيضًا مقاومة الإجهاد التأكسدي [40] وقمع الاستجابات الالتهابية بوساطة عديدات السكاريد الدهنية عن طريق تنشيط مسار Keap1 / Nrf2 / HO -1 [41]. لذلك ، فإن تحديد تأثير المستخلص المائي Cistanche Tubulosa له قيمة كبيرة. بالإضافة إلى ذلك ، تشير تأثيرات بعض مكونات مستخلص Cistanche Deserticola المائي على الإجهاد التأكسدي والنباتات المعوية إلى أن مقاومة الإجهاد التأكسدي قد تكون مرتبطة بتغيرات الفلورا المعوية.

من أجل سد الثغرات في المعرفة حول الموضوعات المذكورة أعلاه ، قمنا بدراسة آثار مستخلص Cistanche Tubulosa المائي على ميكروبيوتا الأمعاء لدى الفئران المصابة باضطرابات الفلورا المعوية. ستوفر هذه النتائج معلومات قيمة حول الآليات المحتملة التي يغير Cistanche Tubulosa من خلالها الفلورا المعوية ويمنح القناة الهضمية مقاومة للإجهاد التأكسدي.

2. المواد والأساليب

2.1. الحيوانات التجريبية.

تم شراء 18 فأر ذكر C57BL / 6J من فئة SPF ، وزنها 18-22 جم ، من مركز الحيوانات التجريبية بجامعة شينجيانغ الطبية برقم الترخيص SCXK (جديد) 2018-0003. تم إيواؤهم في أقفاص في ظل ظروف معيارية: 12 ساعة من الضوء / الظلام ، ودرجة الحرارة 23 ± 2 درجة ، والرطوبة 55 ± 5 في المائة. * تم تغذية الحيوانات على نظام غذائي تجاري (51 في المائة مستخلص خالٍ من النيتروجين ، و 25 في المائة من البروتين الخام ، و 4.6 في المائة من الدهون الخام ، و 6.5 في المائة من الرماد الخام ، و 4. 0 في المائة من الألياف الخام ، و 8.9 في المائة من الرطوبة) ومياه الصنبور . * تم علاج الحيوانات وفقًا للتوصيات الموضحة في دليل رعاية واستخدام حيوانات المختبر التابع للمعاهد الوطنية للصحة.

2.2. استخراج المستخلص المائي.

شرائح مجففة من C. tubulosa ، التي قدمتها شركة Hotan Dichen PharmaceuticalBiotechnology Co.، Ltd. ، تم طحنها وتحويلها إلى مسحوق ، وتم اختيار حبيبات بأحجام جسيمات تتراوح بين 2 {11}} و 4 0 شبكة. كانت ظروف الاستخراج كالتالي: نسبة المادة الصلبة إلى السائلة 1:19 ، ودرجة الحرارة 8 0 درجة ، ووقت الميكروويف 6 دقائق ، ووقت الموجات فوق الصوتية 16 دقيقة ، وطاقة الميكروويف 4 0 0 وات ، و قوة فوق صوتية تبلغ 400 وات. تم قياس محتويات المكونات الرئيسية للمستخلص المائي بواسطة HPLC (Agilent 1260 Infinity II ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). باختصار ، تم إذابة المواد القياسية لإشنكوسايد (0.2 مجم / مل) والأكتيوسايد (0.2 مجم / مل) في 50 في المائة من الميثانول لتكون بمثابة محلول مادة مرجعي. بعد ذلك ، تمت إذابة 1 جم من المستخلص المائي CT في 100 مل ميثانول بنسبة 50 بالمائة وتركه ليجلس لمدة 30 دقيقة. تمت معالجة محلول الاستخراج بالموجات فوق الصوتية عند 250 واط و 35 كيلو هرتز لمدة 10 دقائق ثم طرد بعد ذلك عند 12 ، 000 دورة في الدقيقة / دقيقة. تم اختراق المادة الطافية بواسطة غشاء مرشح مسامي 0.45 ميكرومتر. تم بعد ذلك اكتشاف محلول المادة المرجعية والمرشح بواسطة HPLC في الظروف التالية: هلام السيليكا المرتبط بأوكتاديسيل سيلان كمواد مالئة ، والميثانول كمرحلة متحركة A ، و 0.1 بالمائة من حمض الفورميك كمرحلة متحركة ب. تم ضبط درجة حرارة العمود على 30 درجة ، تم ضبط الطول الموجي للكشف على 330 نانومتر ، وكان حجم الحقن 10 ميكرولتر.

2.3 التجارب.

بعد أسبوع واحد من التكيف ، تم تقسيم الفئران الـ 18 بشكل عشوائي إلى ست مجموعات: A (طبيعي مع جرعة متوسطة مضافة من مستخلص Cistanche Tubulosa المائي) ، B (طبيعي بدون مستخلص Cistanche Tubulosa المائي) ، C (نموذج بدون المستخلص المائي) ، D (نموذج مع إضافة مستخلص مائي Cistanche Tubulosa بجرعة عالية) ، E (نموذج مع جرعة متوسطة من مستخلص Cistanche Tubulosa المائي مضاف) ، و F (نموذج مع جرعة منخفضة من Cistanche Tubulosa مائي مستخلص مضاف). تم التعامل مع المجموعات على النحو التالي: تم غمر المجموعة العادية بمحلول ملحي عادي ، وتم غمر المجموعة النموذجية بواسطة سيفيكسيم (30 مجم / كجم ، Shiyao Group OuyiPharm Pharmaceutical Co. ، Ltd. ، شيجياتشوانغ ، الصين) ومحلول ملحي عادي ، عالي - تم نقع مجموعة الجرعة بواسطة سيفيكسيم و 221.14 مجم / كجم من مستخلص Cistanche Tubulosa المائي ، وتم غمر مجموعة الجرعة المتوسطة بواسطة سيفيكسيم و 165.54 مجم / كجم من المستخلص المائي ، وتم غمر مجموعة الجرعة المنخفضة بواسطة سيفيكسيم و 110.57 ملغم / كغم من المستخلص المائي. تم غمر المجموعة A بـ 165.54 مجم / كجم من المستخلص المائي ، ولم تتم إضافة سيفيكسيم. تم إعطاء سيفيكسيم يوميًا في الساعة 12: 00 ساعة ، والمواد الأخرى كانت تدار يوميًا في الساعة 15: 00 ساعة. أثناء التجارب ، تم الاحتفاظ بمجموعات C و D و E و F في حالة نموذجية لاضطرابات الأمعاء. * تم جمع البراز كل سبعة أيام على طاولة قابلة للتشغيل المعقمة وتخزينها عند درجة حرارة -20 درجة.

2.4 مراقبة الأنسجة من الفئران القولون.

في نهاية التجربة ، قُتلت الفئران بسبب خلع عنق الرحم ، وتم جمع محتويات القولون على طاولة قابلة للتشغيل المعقمة وتخزينها عند -80 درجة ؛ في الوقت نفسه ، تم تثبيت عينات أنسجة القولون في فورمالين محايد بنسبة 10 في المائة. بعد ذلك ، تم تجفيف العينات باستخدام تركيز متدرج من الإيثانول ، وتم تحليلها باستخدام الزيلين ، وإدخالها في البارافين ، وتقطيعها ، وتلطيخها بهيماتوكسيلين إيوزين. لوحظت التغيرات المورفولوجية في الغشاء المخاطي للقولون وتمت مقارنتها باستخدام المجهر الضوئي. تم قياس طول الزغابة وعمق القبو في القولون ، وتم حساب نسبة طول الزغابة إلى عمق القبو (قيمة V / C) (51).

2.5 استخراج الحمض النووي وبناء المكتبة. تم استخراج الحمض النووي من البراز باستخدام EZNA ®Soil DNA Kit (Omega Bio-Tek ، Norcross ، GA ، الولايات المتحدة الأمريكية) وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة. تم تحديد جودة الحمض النووي باستخدام مقياس التألق (QuantiFluor ™ –ST ، Promega Corporation ، الولايات المتحدة الأمريكية). صُممت البادئات المزدوجة في منطقة V4 3- V4 المكونة من 16 ثانية من rDNA لتضخيم المنطقة وإنتاج 466 زوجًا من أجزاء الحمض النووي. * كان التمهيدي الأمامي 341F (-5- CCTACGGGNGGCWGCAG -3-) ، وكان التمهيدي العكسي 806R (-5- GGACTACHVGGGTATCTAAT -3-). كان حجم كل PCR 25 ميكرولتر ، يحتوي على 2.5 ميكرولتر من 10 × PCR العازلة ، 2 ميكرولتر من dNTPs ، 1 ميكرولتر من كل تمهيدي ، و 20-30 نانوغرام من قالب DNA. * ar ، تم إرفاق المحولات المفهرسة بنهاية الأمبليكونات لإنشاء مكتبات التسلسل. تم التحقق من صحة المكتبات باستخدام مقياس التألق QuantiFluor ™ وتم قياسه إلى 10 نانومول.

Acteoside في cistanche يمكن أن يعزز جهاز المناعة

2.6. 16s تسلسل الجينات الرنا الريباسي وتحليل المجتمع الميكروبي.

تم استخدام منصة Illumina (Illumina MiSeq) للحصول على 2 × 250 نقطة أساس. تم الحصول على وحدات التصنيف التشغيلية (OTUs) باستخدام برنامج Uparse من خلال التجميع القياسي مع تشابه 97 بالمائة. تم استخدام خوارزمية التعيين Bayesian الساذجة لمصنف RDP لمحاذاة OTUs مع قاعدة بيانات Greengene الإصدار 13.5 وإجراء شرح توضيحي للأنواع. تم حساب تنوع ألفا في ميكروبيوتا الأمعاء باستخدام مؤشرات شانون وسيمبسون ، وتم تحليل الفروق بين المجموعات عن طريق تحليل التمايز الخطي تأثير الحجم (LEfSe). تم تحليل تنوع بيتا من خلال تحليل الإحداثيات الرئيسي (PCoA) للاختلافات بين برادي وكيرتس. تم استخدام PICRUSt2 لتقدير قدرة التمثيل الغذائي الميكروبي لميكروبيوم الأمعاء [42].

2.7. تحليل البيانات الإحصائية.

تم استخدام SPSS 20 لـ ANOVA أحادي الاتجاه ، وتم التعبير عن البيانات التجريبية كـ X ± S ؛ تشير X إلى متوسط ​​القيمة ، وتشير S إلى الانحراف المعياري.

3. النتائج

3.1. تأثير مستخلص القسطرة Tubulosa المائي على مورفولوجيا القولون.

تم التحقق من صحة المركبات التمثيلية (إشنكوسايد وأكتيوسايد) وتركيزاتها من مستخلص Cistanche Tubulosa بواسطة HPLC (الشكل S1). لتحديد تأثير المستخلص المائي على القناة الهضمية ، قمنا بفحص طول الزغابات القولونية وعمق التجاويف بعد العلاج بمستخلص Cistanche Tubulosa المائي. كانت زغابات القولون في المجموعات الطبيعية والجرعات العالية (A و B و D) أطول وتشبه الإصبع ، في حين أن الزغابات القولونية في النموذج ومجموعات الجرعات المنخفضة (C و F) كانت قصيرة ، وأطراف القولون تم كسر الزغب (الشكل 1). وفقًا لذلك ، أدت الجرعات العالية من مستخلص Cistanche Tubulosa المائي إلى زيادة كبيرة في طول الزغابات القولونية وتقليل عمق التجويف في الفئران المصابة باضطرابات معوية مقارنة بالفئران في المجموعة النموذجية (P <0. 0="" 1).="" في="" المقابل="" ،="" لم="" يكن="" عمق="" العطلة="" مختلفًا="" بشكل="" كبير="" بين="" مجموعة="" الجرعات="" العالية="" والمجموعة="" العادية="" (p=""> 0.05) (الجدول S1). أشارت هذه النتائج إلى أن الجرعة العالية من مستخلص Cistanche Tubulosa المائي يمكن أن تحسن التشكل داخل القولون لدى الفئران المصابة باضطرابات معوية.

3.2 تأثير مستخلص Cistanche Tubulosa المائي على تنوع ميكروبيوتا الأمعاء.

أجرينا تسلسل جين الرنا الريباسي 16 ثانية للتحقيق في السبب المحتمل للتغيرات المورفولوجية داخل القولون والتحقيق في التغيرات في ميكروبيوتا الأمعاء بعد العلاج بالمستخلص المائي المقطعي المحوسب. تم الحصول على متوسط ​​100،553 علامة فعالة ، تتراوح من 77،734 إلى 125،144 ، من البيانات الأولية (الجدول S2). تم تجميع هذه العلامات في 4932 OTUs (الجدول S3). ثم قمنا بتحليل تنوع ميكروبيوتا الأمعاء بناءً على ثيسيوس. لم يُظهِر مؤشرا شانون وسيمبسون أي فرق بين المجموعة A (طبيعي مع مستخلص Cistanche Tubulosa المائي) والمجموعة B (طبيعي بدون المستخلص المائي المقطعي المحوسب) (الشكل 2 (أ)). * يشار إلى أنه في الفئران التي لم يتم علاجها بالسيفيكسيم ، قد لا يكون للمستخلص المائي المقطعي المحوسب أي آثار مفيدة أو ضارة إضافية على تنوع ميكروبيوتا الأمعاء. ومع ذلك ، أظهر التنوع في مجموعة النموذج (C) اتجاهًا تنازليًا مقارنةً بالمجموعات العادية. * أظهرت الفئران التي عولجت بالمستخلصات المائية ذات الجرعات العالية والمتوسطة من التصوير المقطعي المحوسب علامات على انتعاش التنوع ، في حين لم تُلاحظ هذه الظاهرة في الفئران التي عولجت بالمستخلص المائي للجرعة المنخفضة من التصوير المقطعي المحوسب (الشكل 2 (أ)). في هذه الأثناء ، كشفت PCoA أن المجموعات الطبيعية (A و B) والاضطرابات المعوية التي تتناول جرعات عالية (D) والجرعة المتوسطة (E) CTaqueous تميل إلى أن يكون لها مسافات أقصر بين العينات من تلك الموجودة في المجموعة النموذجية وفي المجموعة النموذجية. مجموعة مكملات مستخلصات CTa المائية منخفضة الجرعة (F) (الشكل 2 (ب)). أشارت هذه النتائج إلى أن المستخلص المائي المقطعي المحوسب يمكن أن يساعد في تحسين تنوع ميكروبيوتا الأمعاء في الفئران المصابة باضطرابات معوية.

3.3 التغييرات في تكوين ميكروبيوتا الأمعاء المعالجة بمستخلص Cistanche Tubulosa المائي.

تمت مقارنة ملامح تكوين الكائنات الحية الدقيقة بين المجموعات المختلفة. على مستوى الشعبة ، كانت الوفرة النسبية لـ Proteobacteria في المجموعة النموذجية أعلى من تلك الموجودة في المجموعات الأخرى (الشكل 3 (أ)). تشير الزيادة في البكتيريا المتقلبة إلى أن الميكروبيوم في الفئران النموذجية قد تم تغييره بواسطة سيفيكسيم وأن المستخلص المائي المقطعي المحوسب قد يفيد الميكروبات المعوية حيث أن الانتشار المتزايد للبكتيريا المتقلبة هو علامة مركزية للنباتات المعوية المضطربة [43-45]. بالإضافة إلى ذلك ، على مستوى الجنس ، انخفضت الوفرة النسبية لـ Lactobacillus في المجموعة النموذجية مقارنةً بالمجموعات الطبيعية والجرعات العالية ؛ ومع ذلك ، فقد زاد مقارنةً بالمجموعة ذات الجرعة المتوسطة والمنخفضة (الشكل 3 (ب)). أشارت هذه النتائج إلى أن مستخلص CTaqueous بجرعة عالية قد يعزز نمو بعض البكتيريا من جنس Lactobacillus.

تم تحديد الجراثيم التفاضلية بين المجموعات المدروسة أيضًا وفقًا لتحليل LEfSe. أظهر هذا التحليل أنه بعد العلاج بالسيفيكسيم ، زادت الكميات النسبية من بكتيريا Turicibacter و Alphaproteobacteria و Acidobacteria و Betaproteobacteriales و Chloroflflexi بشكل ملحوظ ، في حين أن الوفرة النسبية لمجموعة العصيات اللبنية ، Eubacterium _ nodatum _ cardiales و Christensenellaceae _ R -7_ انخفض بشكل ملحوظ مقارنة مع المجموعة العادية (الشكل 4 (أ)). اللافت للنظر ، عندما تم استكمال المجموعة النموذجية بجرعة عالية من المستخلص المائي المقطعي المحوسب ، زادت الوفرة النسبية من Muribaculaceae و Lactobacillus و Kineosporiaceae و Eubacterium no datum و Pedobacter بشكل ملحوظ مقارنة بتلك الموجودة في المجموعة النموذجية. وفي الوقت نفسه ، انخفضت الوفرة النسبية لكل من Rhodobacter و Ruminococcaceae UCG _013 و Roseburia و Ruminiclostridium _9 و Candidatus Stoquefifichus بشكل ملحوظ مقارنة بتلك الموجودة في المجموعة النموذجية (الشكل 4 (ب)).

3.4. وظائف ميكروبيوتا الأمعاء المتعلقة بالعلاج باستخدام مستخلص Cistanche Tubulosa المائي.

استخدمنا برنامج PICRUSt2 للتنبؤ بمسارات التمثيل الغذائي لميكروبات الأمعاء ، واستخدمنا المجموعة الطبيعية كمرجع لتحليل التغييرات في المجموعات الأخرى. في ظل معالجة سيفيكسيم ، زادت الوفرة النسبية لتحلل إيثيل بنزين ، والتخليق الحيوي للببتيدات غير الصبغيّة لمجموعة حامض الحديد ، واستقلاب الزينبيوتيك بواسطة مسارات السيتوكروم P450 ؛ بعد العلاج بجرعة عالية ومتوسطة من مستخلصات Cistanche Tubulosa المائية ، عادت وفرتها النسبية إلى المستويات الطبيعية. وفي الوقت نفسه ، انخفضت الوفرة النسبية لمسار استقلاب الأحماض الأمينية cyano تحت علاج سيفيكسيم. ومع ذلك ، فقد زاد بعد العلاج بجرعة عالية من المستخلص المائي المقطعي المحوسب. علاوة على ذلك ، بشكل عام ، كانت التغيرات في مسارات الأيض المختلفة بعد العلاج بالسيفيكسيم كبيرة مقارنة بتلك الموجودة في المجموعة الطبيعية ؛ ومع ذلك ، فإن إضافة مستخلص Cistanche Tubulosa المائي كان قادرًا على منع التغيرات المفرطة (الشكل 5).

4. مناقشة

يمكن تغيير شكل القولون من خلال النمو ، والهضم والامتصاص ، وتنظيم المناعة ، وإصلاح إصابة الأمعاء [46-50]. يمكن أن تعكس نسبة V / C بشكل شامل الحالة الهضمية للقناة المعوية وتتناسب طرديًا مع قدرة الجهاز الهضمي والامتصاصية في القناة الهضمية [51 ، 52]. في هذه الدراسة ، أظهرت بيانات الزغابات وخزعة الزغب والبيانات الإحصائية أن المستخلص المائي بجرعة عالية يمكن أن يحسن جزئيًا التشكل المعيب داخل القولون. لاستكشاف كيف يغير المستخلص المائي شكل الأمعاء ويؤثر على الجراثيم المعوية ، عملنا بشكل عكسي من التغيرات في الجراثيم المعوية. وجدنا أن الوفرة النسبية للبروتيوبكتريا ، وهي علامة مركزية للنباتات المعوية المضطربة ، زادت تحت العلاج بالسيفيكسيم بالمقارنة مع ذلك بدون علاج سيفيكسيم. في المختبر [56] ويمكن أن تعزز نمو بعض بكتيريا حمض اللاكتيك ، والتي يمكن أن تفيد صحة المضيف [43]. في موازاة ذلك ، تعد Muribaculaceae كائنات حية بروبيوتيك مرتبطة بطول العمر [57]. اقترح هؤلاء أن الآلية التي يعمل بها المستخلص المائي المقطعي المحوسب على تحسين الكائنات الحية الدقيقة في الأمعاء قد تكون تعزيزًا أو حماية لنمو الكائنات الحية المجهرية. هناك بكتيريا أخرى جديرة بالملاحظة وهي البكتيريا YE57. على الرغم من أن مستخلص CTaqueous بجرعة عالية عزز الوفرة النسبية للبكتيريا YE57 في الدراسة الحالية (الشكل 4) ، فقد وجدت الدراسات السابقة أن وفرتها كانت أعلى في الأمعاء الطبيعية منها في القناة الهضمية المعالجة بمخلفات شاي أعشاب عالية التركيز [ 58] وأن وفرته انخفضت بعد التدخل مع Bacillus licheniformis مع XOS (xylooligosaccharides) [59]. وبالتالي ، فإن دور هذه البكتيريا في ميكروبيوتا الأمعاء يستحق مزيدًا من الدراسة. إلى جانب ذلك ، قد يتسبب عدد العينة الصغير نسبيًا في هذه الدراسة في قياس النتائج الإيجابية الزائفة والسلبية الكاذبة ، ويُقترح إجراء دراسة مستقبلية على عينات أكبر للتحقق من صحة العلامات البكتيرية المحددة.

قد تكون تركيبة المستخلص المائي لـ Cistanche Tubulosa مهمة لتأثيرها على التركيب والتغيرات الوظيفية في ميكروبيوتا الأمعاء للفئران المصابة باضطرابات معوية. توبولوسا [60]. في العقود الماضية ، ثبت أن إشنكوسايد يمتلك العديد من الأنشطة الدوائية ، مثل التأثيرات المضادة للشيخوخة والوقاية العصبية ، وتحسين وظائف القلب ، والحد من فرط شحميات الدم وارتفاع السكر في الدم ، والوقاية من مرض السكري الناجم عن السمنة ومتلازمة التمثيل الغذائي [53 ، 61-65] . في الواقع ، اكتشفنا تغيرات في المسارات الأيضية لميكروبات الأمعاء. * أدى علاج سيفيكسيم إلى إثراء البكتيريا المتعلقة بتحلل إيثيل بنزين والتخليق الحيوي للببتيدات غير الريبوزومية لمجموعة حامض الحديد ، في حين أن العلاجات بالجرعة العالية والمتوسطة من Cistanche يمكن لمستخلص Tubulosa المائي أن يخفف من هذه التغييرات ، مما يشير إلى أن هذا المستخلص خفف من المجتمع البكتيري المرتبط بهذه الوظائف. بالإضافة إلى ذلك ، فإن زيادة الإثراء البكتيري المرتبط بمسار التمثيل الغذائي لحمض cyanoamino تحت العلاج بجرعة عالية من المستخلص المائي وانخفاض إثرائه في الفئران النموذجية يشير إلى أن مستخلص Cistanche Tubulosa المائي يمكن أن يعزز عملية التمثيل الغذائي لحمض cyanoamino. * قد تؤدي التغييرات في المستقلبات ذات الصلة إلى تزويد هذا المستخلص المائي بالأنشطة الدوائية.

عشب cistanche

على الرغم من أن الآلية التي يغير بها المستخلص المائي لـ Cistanche Tubulosa من تكوين ووظيفة الجراثيم المعوية معقدة ، إلا أن هناك بعض القرائن للتكهن حول الآلية المحتملة. تم الإبلاغ عن أن كلاً من بكتيريا حمض اللاكتيك ومستخلصات Cistanche Tubulosa المائية يمكن أن تقاوم الإجهاد التأكسدي. الإجهاد التأكسدي الذي يحدث أثناء الالتهاب هو عامل شائع يؤدي إلى تفاقم الاضطرابات المعوية عن طريق الحد بشدة من التنوع الميكروبي في الأمعاء وتعزيز اندفاع بكتيريا معينة (4). [66-68] ؛ على سبيل المثال ، يمكن أن تنمو البكتيريا من عائلة Enterobacteriaceae بسرعة نتيجة للتغيرات في تكوين الفلورا المعوية تحت ظروف الأكسدة أثناء الالتهاب [69 ، 70]. تطور معظم الكائنات الحية دفاعات إنزيمية ، ودفاعات مضادة للأكسدة غير إنزيمية ، وآليات إصلاح لكبح جذور الأكسجين [71]. ومع ذلك ، فإن هذه الأنظمة المضادة للأكسدة الأصلية ليست كافية بشكل عام لمنع الضرر التأكسدي في الكائنات الحية. تم استخدام العديد من مضادات الأكسدة الاصطناعية الإضافية ، بما في ذلك هيدروكسيانيسول بوتيل وهيدروكسي تولوين بوتيل ، على نطاق واسع لتقليل الأكسدة ، ولكن تم التشكيك في سلامتها [72 ، 73]. لذلك ، تحول الباحثون إلى إيجاد مضادات أكسدة أكثر أمانًا وطبيعية يتم الحصول عليها من مواد طبيعية. نظرًا لقدرة كل من السكريات وبكتيريا حمض اللاكتيك على التخلص من الإجهاد التأكسدي ، فإن تحديد آلية مضادات الأكسدة الدقيقة لمستخلصات Cistanche Tubulosa المائية في الكائنات الحية الدقيقة المعوية يتطلب مزيدًا من التحقيق في المستقبل.

في الختام ، وجدنا أن مستخلص Cistanche Tubulosa المائي كان قادرًا على تحسين ميكروبيوتا الأمعاء في الفئران المصابة باضطرابات معوية من خلال تعزيز التنوع ، وتعديل التغيرات الأيضية ، وإعادة تشكيل بنية ميكروبيوتا الأمعاء ، وقد توفر هذه النتائج مرجعًا للتطور. من الأدوية ذات الصلة في المستقبل.

توافر البيانات

يتم تضمين إحصائية وحدات التصنيف التشغيلية بين كل بيانات عينة مستخدمة لدعم نتائج هذه الدراسة في ملفات المعلومات التكميلية ، وسيتم إصدار بيانات تسلسل الرنا الريباسي 16s المستخدمة لدعم نتائج هذه الدراسة عند النشر.

تضارب المصالح

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

تم دعم هذه الدراسة مالياً من خلال المنح المقدمة من مؤسسة العلوم الطبيعية الوطنية في الصين (81860766).

المواد التكميلية

الشكل S1: الكشف عن HPLC لمستخلص سيستانش tubulosa المائي. (أ) تظهر ذروة إشنكوسايد وأكتيوسيد في المادة المرجعية عند 5.066 دقيقة و 9.988 دقيقة بشكل منفصل. (ب) * تظهر ذروة إشنكوسايد وأكتيوسيد في المستخلص المائي عند 5.097 دقيقة و 10.076 دقيقة على حدة ، والتركيزات هي 236 مجم / جم و 12.7 مجم / جم بشكل منفصل. الجدول S1: طول الزغابات القولونية وعمق التجاويف. الجدول S2: المعلومات الإحصائية لبيانات تسلسل الرنا الريباسي 16S. الجدول S3: إحصاء وحدات التصنيف التشغيلية بين كل عينة. (مادة تكميلية).

مراجع

[1] A. Heintz-Butchart and P. Wilmes، "ميكروبيوم الأمعاء البشرية: الوظيفة مهمة" Trends in Microbiology، vol. 26 ، لا. 7 ، ص 563-574 ، 2018.

[2] CA Thaiss، N. Zmora، M. Levy، and E. Elinav، "The microbiome and innate immunity،" Nature، vol. 535 ، لا. 7610 ، ص 65-74 ، 2016.

[3] G. Quaranta، M. Sanguinetti، and L. Masucci، "زرع جراثيم البراز: أداة محتملة لعلاج أمراض الجهاز التناسلي الأنثوي البشري ،" Frontiers in Immunology ، المجلد. 10 ، ص. 2653 ، 2019.

[4] GA Weiss and T. Hennet ، "آليات وعواقب خلل التنسج المعوي ،" Cellular and Molecular Life Sciences ، المجلد. 74 ، لا. 16 ، ص 2959 - 2977 ، 2017.

[5] Y. Li ، Y. Peng ، P. Ma et al. ، "التأثيرات الشبيهة بمضادات الاكتئاب من مستخلص القشرة النبوبية على فئران الإجهاد المزمن غير المتوقع من خلال استعادة توازن ميكروبيوتا الأمعاء ،" Frontiers in Pharmacology ، المجلد. 9 ، ص. 967 ، 2018.

[6] L. Fan و Y. Peng و J. Wang و P. Ma و L. Zhao و X. Li ، "يخفف Totalglycosides من جذوع Cistanche tubulosa السلوكيات الشبيهة بالاكتئاب: التفاعل ثنائي الاتجاه للكيماويات النباتية وميكروبات الأمعاء ، "Phytomedicine، vol. 83 ، معرف المقالة 153471 ، 2021.

[7] Y. Li و Y. Peng و M. Wang و P. Tu و X. Li ، "التمثيل الغذائي المعدي المعوي البشري لمستخلص ماء الأعشاب cistanche herba: توضيح ملف التمثيل الغذائي بناءً على تحديد المستقلب الشامل في عصير المعدة ، عصير الأمعاء ، والبكتيريا المعوية البشرية ، والميكروسومات المعوية ، "Journal of Agricultural and Food Chemistry ، vol. 65 ، لا. 34 ، الصفحات من 7447 إلى 7456 ، 2017.

[8] إتش وانج ، واي. صن ، دبليو-سي. Ye et al. ، "مضادات الأكسدة phenylethanoid and phenolic glycosides من Picrorhiza Scrophularia flora" ، النشرة الكيميائية والصيدلانية ، المجلد. 52 ، لا. 5 ، الصفحات 615-617 ، 2004.

[9] S.-L. جي ، ك. تساو ، X.-X. Zhao et al. ، "النشاط المضاد للأكسدة لجليكوسيدات الفينيثانويد على السمية العصبية التي يسببها الغلوتامات ،" العلوم البيولوجية والتكنولوجيا الحيوية والكيمياء الحيوية ، المجلد. 83 ، لا. 11 ، ص 2016-2026 ، 2019.

[10] Q. Wang، J. Dong، W. Lu et al.، "Phenylethanol glycosides from Cistanche tubulosa تحسن الخلل الإنجابي عن طريق تنظيم المنشطات الخصية من خلال CYP 450-3 - HSDpathway،" Journal of Ethnopharmacology، vol. 251 ، معرف المقالة 112500 ، 2020.

[11] S.-P. أنت ، L. Ma ، J. Zhao ، S.-L. Zhang و T. Liu ، "Phenylethanol glycosides من Cistanche tubulosa يمنع تنشيط الخلايا النجمية الكبدية ويمنع توصيل مسارات الإشارات في TGF - 1 / smad كعوامل محتملة للتليف الكبدي ،" Molecules، vol. 21 ، لا. 1 ، ص. 102 ، 2016.

[12] S.-P. أنت ، J. Zhao ، L. Ma ، M. Tudimat ، S.-L. Zhang ، و T. Liu ، "التأثيرات الوقائية لجليكوسيدات الفينيثانويد من Cistanche tubulosa على التليف الكبدي الناجم عن الزلال البقري في الفئران" ، مجلة دارو للعلوم الصيدلانية ، المجلد. 23 ، لا. 1 ، ص. 52 ، 2015.

[13] T. Morikawa، H. Xie، Y. Pan، et al.، "مراجعة للمنتجات الطبيعية النشطة بيولوجيًا من نبات صحراوي Cistanche tubulosa،" Chemical and Pharmaceutical Bulletin، vol. 67 ، لا. 7 ، ص 675-689 ، 2019.

[14] J. Li، J. Li، A. Aspire، et al.، "Phenylethanoid glycosides fromCistanche tubulosa يثبط نمو الخلايا B 16- F10 في كل من المختبر والحي عن طريق تحريض موت الخلايا المبرمج عن طريق الميتوكوندريا- مسار يعتمد ، "مجلة السرطان ، المجلد. 7 ، لا. 13 ، ص 1877-1887 ، 2016.

[15] Y. Hu ، J. Huang ، Y. Li et al. ، "Cistanche deserticola polysaccharide يحفز تكون الميلانين في الخلايا الصباغية ويقلل من الإجهاد التأكسدي من خلال تنشيط مسار NRF2 / HO -1 ،" Journal of Cellular and Molecular Medicine ، المجلد. 24 ، لا. 7 ، ص 4023-4035 ، 2020.

[16] S. Peng ، P. Li ، P. Liu ، وآخرون ، "Cistanches تخفف من الخلل المعرفي الناجم عن Sevoflurane عن طريق تنظيم مضادات الأكسدة والمضادة للالتهابات المعتمدة على PPAR في الفئران ،" مجلة الطب الخلوي والجزيئي ، المجلد. 24 ، لا. 2 ، الصفحات من 1345 إلى 1359 ، 2020.

[17] Y. Liu، H. Wang، M. Yang، et al.، "Cistanche deserticola polysaccharides تحمي خلايا PC12 ضد الإصابات الناجمة عن OGD / RP ،" Biomedicine & Pharmacotherapy، vol. 99 ، ص 671-680 ، 2018.

[18] Z. Fu، L. Han، P. Zhang، et al.، "Cistanche polysaccharides يعزز امتصاص echinacoside في الجسم الحي ويؤثر على ميكروبيوتا الأمعاء ،" International Journal of Biological Macromolecules، vol. 149 ، ص 732-740 ، 2020.

[19] NT Williams، "Probiotics،" American Journal of Health-System Pharmacy، vol. 67 ، لا. 6 ، ص 449-458 ، 2010.

[20] ر. أشرف ون. ب. شاه ، "تحفيز الجهاز المناعي بواسطة الكائنات الحية الدقيقة بروبيوتيك" ، مراجعات نقدية في علوم الغذاء والتغذية ، المجلد. 54 ، لا. 7 ، ص 938-956 ، 2014.

[21] G. La Fata ، P. Weber ، و MH Mohajeri ، "البروبيوتيك والجهاز المناعي للأمعاء: التنظيم غير المباشر ،" البروبيوتيك والبروتينات المضادة للميكروبات ، المجلد. 10 ، لا. 1 ، ص 11-21 ، 2018.

[22] MA Zocco، LZ dal Verme، F. Cremonini، et al.، "فعالية العصيات اللبنية GG في الحفاظ على مغفرة التهاب القولون التقرحي ،" علم الأدوية الغذائي و 8erapeutics ، المجلد. 23 ، لا. 11 ، ص 1567-1574 ، 2006.

[23] MJ Saez-Lara و C. Gomez-Llorente و J. Plaza-Diaz و A. Gil "* دور بكتيريا حمض اللاكتيك بروبيوتيك والبكتيريا المشقوقة في الوقاية والعلاج من مرض التهاب الأمعاء والأمراض الأخرى ذات الصلة: مراجعة منهجية للتجارب السريرية البشرية العشوائية "BioMed Research International، vol. 2015 ، معرف المقالة 505878 ، 15 صفحة ، 2015.

[24] MAO Dawood، S. Koshio، M. Ishikawa، et al. ، "آثار المكملات الغذائية من Lactobacillus rhamnosus و / و lactococcus lactis على النمو ، الميكروبات المعوية والاستجابات المناعية للدنيس البحر الأحمر ، Pagrus major ،" الأسماك & ShellfifishImmunology ، المجلد. 49 ، ص 275 - 285 ، 2016.

[25] A. Sivan، L. Corrales، N. Hubert، et al.، "Commensal bifidobacterium تعزز المناعة المضادة للأورام وتسهل فعالية مكافحة PD-L1 ،" Science ، المجلد. 350 ، لا. 6264 ، ص 1084-1089 ، 2015.

[26] PJ Whorwell ، L. Altringer ، J. Morel ، et al. ، "فعالية بكتيريا Bifidobacterium مغلفة بروبيوتيك 35624 في النساء المصابات بمتلازمة القولون العصبي ،" 8e American Journal of Gastroenterology ، المجلد. 101 ، لا. 7 ، الصفحات 1581-1590 ، 2006.

[27] Y. Wang، Y. Wu، Y. Wang et al.، "الخصائص المضادة للأكسدة لبكتيريا بروبيوتيك،" Nutrients، vol. 9 ، لا. 5 ، ص. 521 ، 2017.

[28] JMC Gutteridge، R. Richmond، and B. Halliwell ، "تثبيط تكوين جذور الهيدروكسيل المحفز بالحديد من فوق الأكسيد وبيروكسيد الدهون بواسطة ديسفيروكسامين ،" مجلة الكيمياء الحيوية ، المجلد. 184 ، لا. 2 ، ص 469-472 ، 1979.

[29] E. Deriu ، JZ Liu ، M. Pezeshki ، وآخرون ، "تقلل بكتيريا البروبيوتيك استعمار السالمونيلا تيفيموريوم المعوي من خلال التنافس على الحديد" ، مضيف الخلية والميكروب ، المجلد. 14 ، لا. 1 ، ص 26 - 37 ، 2013.

[30] T. Kullisaar ، M. Zilmer ، M.Mikelsaar ، وآخرون ، "سلالتان من العصيات اللبنية المضادة للأكسدة كبروبيوتيك واعدة ،" المجلة الدولية لعلم الأحياء الدقيقة للأغذية ، المجلد. 72 ، لا. 3 ، الصفحات 215-224 ، 2002.

[31] JG LeBlanc، S. del Carmen، A.Miyoshi، et al.، "استخدام فائق الأكسيد ديسموتاز والكتلاز الذي ينتج بكتيريا حمض اللاكتيك في TNBS التي يسببها مرض كرون في الفئران" Journal of Biotechnology، vol. 151 ، لا. 3 ، ص 287-293 ، 2011.

[32] إم روسي ، أ. أماريتي ، وس. رايموندي ، "إنتاج الفولات بواسطة بكتيريا بروبيوتيك ،" نيوترينتس ، المجلد. 3 ، لا. 1 ، ص 118 - 134 2011.

[33] A. Pompei، L. Cordisco، A. Amaretti، et al.، "إدارة البكتيريا المشقوقة المنتجة للفولات تعزز حالة الفولات في فئران Wistar ،" 8e Journal of Nutrition، vol. 137 ، لا. 12 ، ص 2742-2746 ، 2007.

[34] L.-X. Wang ، K. Liu ، DW Gao ، و JK Hao ، "الحماية من سلالتين من Lactobacillus Plantarum في الفئران شديدة الشحميات ،" المجلة العالمية لأمراض الجهاز الهضمي ، المجلد. 19 ، لا. 20 ، ص 3150-3156 ، 2013.

[35] EO Petrof ، K. Kojima ، MJ Ropeleski ، وآخرون ، "البروبيوتيك تمنع العامل النووي B وتحفز بروتينات الصدمة الحرارية في الخلايا الظهارية القولونية من خلال تثبيط البروتياز" ، طب الجهاز الهضمي ، المجلد. 127 ، لا. 5، pp.174–1487، 2004.

[36] أ. سيث ، إف يان ، دي بي بولك ، وآر كيه راو ، "البروبيوتيك تعمل على تحسين تعطيل الحاجز الظهاري الناجم عن بيروكسيد الهيدروجين بواسطة آلية تعتمد على كيناز PKC و MAP ،" المجلة الأمريكية لعلم وظائف الأعضاء - الجهاز الهضمي والكبد ، المجلد. 294 ، لا. 4 ، الصفحات G1060-G1069 ، 2008.

[37] M. G´omezGuzm´an، M. Toral، M. Romero، et al.، "التأثيرات الخافضة للضغط لسلالات البروبيوتيك Lactobacillus في الفئران التي تعاني من ارتفاع ضغط الدم تلقائيًا" Molecular Nutrition & FoodResearch، vol. 59 ، لا. 11 ، ص 2326-2336 ، 2015.

[38] H. Zeng ، L. Huang ، L. Zhou ، P. Wang ، X. Chen ، and K. Ding، "galactoglucan المعزول من Cistanchedeserticola YC Ma. ونشاطه الحيوي على سلالات البكتيريا المعوية ،" Carbohydrate Polymers، vol. 223 ، معرف المقالة 115038 ، 2019.

[39] S. Zheng ، X. Jiang ، L. Wu ، Z. Wang ، and L. Huang ، "التمييز الكيميائي والجيني لعشبة cistanche herba استنادًا إلى UPC-QTOF / MS و DNA barcoding ، PLoS One ، المجلد. 9 ، لا. 5 ، معرف المقالة e98061 ، 2014.

[40] M. Li ، T. Xu ، F. Zhou ، et al. ، "التأثيرات الوقائية لأربعة جليكوسيدات فينيليثانويد على خلايا H2O المستحثة {2}} على خلايا PC12 عبر مسار Nrf2 / ARE ،" المجلة الدولية للعلوم الجزيئية ، المجلد. 19 ، لا. 4 ، ص. 1135 ، 2018.

[41] A. Wu، Z. Yang، Y. Huang، et al.، "جليكوسيدات الفينيثانويد الطبيعية المعزولة من Callicarpa kwangtungensis sup ضغطت الاستجابة الالتهابية بوساطة عديدات السكاريد الدهنية عن طريق تنشيط مسار Keap1 / Nrf2 / HO -1 في RAW 264.7 خلية الضامة "Journal of Ethnopharmacology، vol. 258 ، معرف المقال 112857 ، 2020.

[42] GM Douglas، VJ Maffffei، JR Zaneveld، et al.، "PICRUSt2 للتنبؤ بوظائف الميتاجينوم" Nature Biotechnology، vol. 38 ، لا. 6 ، ص 685 - 688 ، 2020.

[43] H.-L. Li، L. Lu، X.-S. Wang et al.، "تغيير ميكروبيوتا الأمعاء وملامح السيتوكين / الكيماويات الالتهابية في 5- التهاب الغشاء المخاطي المعوي الناجم عن الفلورويوراسيل ،" Frontiers in Cellular and Infection Microbiology، vol. 7 ، ص. 455 ، 2017.

[44] M. Pammi، J. Cope، PI Tarr، et al.، "Dysbiosis المعوي عند الخدج الذين يسبقون التهاب الأمعاء والقولون الناخر: مراجعة منهجية وتحليل تلوي" Microbiome، vol. 5 ، لا. 1 ، ص. 31 ، 2017.

[45] ن. شين ، وت. دبليو. متى ، وج .- دبليو. Bae ، "Proteobacteria: البصمة الميكروبية لـ dysbiosis in gut microbiota ،" Trends in Biotechnology ، المجلد. 33 ، لا. 9 ، ص 496-503 ، 2015.

. 69 ، ص.85-93 ، 2015.

[47] B. Potsic ، N. Holliday ، P. Lewis ، D. Samuelson ، V. DeMarco ، and J. Neu ، "مكملات الجلوتامين والحرمان: التأثير على مورفولوجيا الأمعاء الدقيقة للفئران التي تمت تربيتها صناعيًا ،" أبحاث طب الأطفال ، المجلد. 52 ، لا. 3 ، ص 430-436 ، 2002.

[48] ​​JL Daniels و RJ Bloomer و M. van der Merwe و SL Davis و KK Buddington و RK Buddington ، "تكيفات الأمعاء مع مزيج من الأنظمة الغذائية المختلفة مع وبدون تمارين التحمل" ، مجلة الجمعية الدولية للتغذية الرياضية ، المجلد. 13 ، لا. 1 ، ص. 35 ، 2016.

[49] L. Muñoz، MJ Borrero، M. Ubeda et al. ، "خلل التنظيم المناعي المعوي الناتج عن dysbiosis يعزز تعطيل الحاجز والانتقال البكتيري في الفئران المصابة بتليف الكبد" Hepatology، vol. 70 ، لا. 3 ، الصفحات من 925 إلى 938 ، 2019.

[50] X. Li، Y. Wu، Z. Xu et al.، "آثار مغلي hetiao Jianping على إصابة الأمعاء والإصلاح في الجرذان المصابة بالإسهال المرتبط بالمضادات الحيوية" Medical Science Monitor، vol. 26 ، مقالة IDe921745 ، 2020.

[51] Y. Xie ، F. Ding ، W. Di et al. ، "تأثير النظام الغذائي عالي الدهون على الخلايا الجذعية المعوية ووظيفة الحاجز الظهاري في إناث الفئران في منتصف العمر ،" Molecular Medicine Reports ، المجلد. 21 ، لا. 3 ، الصفحات 1133-1144 ، 2020.

[52] BL Bivolarski و EG Vachkova ، "الأحداث المورفولوجية والوظيفية المرتبطة بالفطام في الأرانب ،" مجلة فسيولوجيا الحيوان وتغذية الحيوان ، المجلد. 98 ، لا. 1 ، ص 9-18 ، 2014.

[53] H. Shimoda، J. Tanaka، Y. Takahara، K. Takemoto، S.-J. شان ، و M.-H. Su ، "* e تأثيرات نقص الكولسترول لمستخلص Cistanchetubulosa ، دواء خام صيني تقليدي ، في الفئران ،" 8e American Journal of Chinese Medicine ، vol. 37 ، لا. 6 ، الصفحات 1125-1138 ، 2009.

[54] RE Ley ، و PJ Turnbaugh ، و S. Klein ، و JI Gordon ، "ميكروبات الأمعاء البشرية المرتبطة بالسمنة ،" Nature ، المجلد. 444 ، لا. 7122 ، ص. 1022-1023 ، 2006.

[55] J.-Y. Kim، YM Kwon، I.-S. Kim et al. ، "آثار مكملات الأعشاب البحرية البنية laminaria japonica على تركيزات المصل من IgG ، والدهون الثلاثية ، والكوليسترول ، وتكوين الجراثيم المعوية في الفئران ،" Frontiers in Nutrition ، المجلد. 5 ، ص. 23 ، 2018.

[56] دبليو زانج ، جيه هوانج ، دبليو وانج ، وآخرون ، "الاستخراج والتنقية والتوصيف والأنشطة المضادة للأكسدة لعديد السكاريد من Cistanche tubulosa ،" المجلة الدولية للجزيئات البيولوجية البيولوجية ، المجلد. 93 ، ص 448-458 ، 2016.

[57] M. Sibai ، E. Altuntas¸ ، B. Yıldırım ، G. ¨Ozt¨urk ، S. Yıldırım ، andT. Demircan ، "الميكروبيوم وطول العمر: وفرة عالية من Muribaculaceae المرتبطة بطول العمر في أمعاء القوارض طويلة العمر Spalax leucodon ،" OMICS: A Journal of IntegrativeBiology ، vol. 24 ، لا. 10 ، ص 592-601 ، 2020.

[58] Y. Xie، Z. Chen، D. Wang، et al.، "آثار مخلفات الشاي العشبي المخمر على خصائص الجراثيم المعوية لعجول هولشتاين تحت الإجهاد الحراري"، Frontiers in Microbiology، vol. 11 ، ص. 1014 ، 2020.

[59] Y. Li ، M. Liu ، H. Liu ، et al. ، "المكملات الفموية من Bacillus licheniformis zhengchangsheng و xylooligosaccharides تعمل على تحسين السمنة التي يسببها النظام الغذائي عالي الدهون وتعديل الكائنات الحية الدقيقة في الأمعاء في الفئران ،" BioMed Research International ، المجلد . 2020 ، معرف المقالة 9067821 ، 17 صفحة ، 2020.

[60] Y. Jiang و P.-F. Tu ، "تحليل المكونات الكيميائية في أنواع cistanche ،" Journal of Chromatography A ، vol. 1216 ، لا. 11 ، ص 1970 - 1979 ، 2009.

[61] F. Li، Y. Yang، P. Zhu، et al.، "Echinacoside يعزز تجديد العظام عن طريق زيادة نسبة OPG / RANKL في MC3T 3- E1cells،" Fitoterapia، vol. 83 ، لا. 8 ، الصفحات 1443-1450 ، 2012.

[62] F. Tang و Y. Hao و X. Zhang و J. Qin ، "تأثير إشنكوسايد على تليف الكلى عن طريق تثبيط مسار إشارات TGF - 1 / Smads في نموذج الفئران DB / DB لاعتلال الكلية السكري ، "تصميم وتطوير الأدوية والعلاج 8 ، المجلد. 11 ، ص 2813-2826 ، 2017.

[63] دبليو- ت. شيونغ ، إل جو ، سي وانغ ، H.-X. Sun و X. Liu ، "تأثيرات خافضة سكر الدم ونقص شحميات الدم من Cistanche tubulosa في النوع 2 من الفئران DB / DB المصابة بداء السكري ،" Journal of Ethnopharmacology ، المجلد. 150 ، لا. 3 ، ص 935-945 ، 2013.

[64] X.-x. باو ، هـ. ما ، هـ. دينغ ، دبليو- و. Li ، and M. Zhu ، "التحسين الأولي لصيغة الطب العشبي الصيني بناءً على التأثيرات الوقائية العصبية في نموذج الفئران لمرض باركنسون الناجم عن الروتينون ،" Journal of IntegrativeMedicine ، vol. 16 ، لا. 4 ، ص 290 - 296 ، 2018.

[65] Y. Chen، Y.-Q. لي ، ج. Fang، P. Li، and F. Li، "إنشاء النموذج التجريبي المتزامن لهشاشة العظام مع مرض الزهايمر في الفئران والتأثيرات المزدوجة لإشنكوسايد وأكتيوسيد من Cistanche tubulosa ،" Journal of Ethnopharmacology، vol. 257 ، معرف المقالة 112834 ، 2020.

[66] M. Hensel، AP Hinsley، T. Nikolaus، G. Sawers، andB. C. Berks ، "* ه الأساس الجيني للتنفس الرباعي في Salmonella Typhimurium ،" Molecular Microbiology ، vol. 32 ، لا. 2 ، ص 275 - 287 ، 1999.

[67] SE Winter، P. Thiennimitr، MG Winter، et al.، "التهاب الأمعاء يوفر مستقبل إلكترون تنفسي للسالمونيلا" Nature، vol. 467 ، لا. 7314 ، الصفحات من 426 إلى 429 ، 2010.

[68] SE Winter، MG Winter، MN Xavier، et al.، "تعزز النترات المشتقة من المضيف نمو الإشريكية القولونية في الأمعاء الملتهبة" Science، vol. 339 ، لا. 6120 ، ص 708-711 ، 2013.

[69] C. Lupp ، ML Robertson ، ME Wickham ، et al. ، "الالتهاب الذي يتوسطه المضيف يعطل الجراثيم المعوية ويعزز نمو البكتيريا المعوية ،" مضيف الخلية والميكروب ، المجلد. 2 ، لا. 2 ، ص 119 - 129 ، 2007.

[70] B. Stecher ، R. Robbiani ، AW Walker ، وآخرون ، "Salmonellaenterica serovar Typhimurium يستغل الالتهاب للتنافس مع الجراثيم المعوية ، PLoS Biology، vol. 5 ، لا. 10 ، ص 244-2189 ، 2007.

[71] في ميشرا ، سي شاه ، إن موكاشي ، ر. شافان ، هـ. ياداف ، و ج. Prajapati ، "البروبيوتيك كمضادات أكسدة محتملة: مراجعة منهجية ،" مجلة الزراعة والكيمياء الغذائية ، المجلد. 63 ، لا. 14 ، ص 3615-3626 ، 2015.

[72] JMP Mart´ın، PF Freire، L. Daimiel، et al.، "هيدروكسيانيسول المضاد للأكسدة بوتيليتيد يقوي التأثيرات السامة لبروبيل بارابين في خلايا الثدييات المستزرعة ،" الغذاء والسموم الكيميائية ، المجلد. 72 ، ص 195 - 203 ، 2014.

[73] RS Lanigan and TA Yamarik، "Final report on the safety Assessment of BHT،" International Journal of Toxicology، vol. 21 ، لا. 2 ، الصفحات 19-94 ، 2002.