تعزيز التركيب الحيوي لجليكوسيدات الفينيثانويد في الثقافات الخلوية لسيستانش ديزيرتيكولا بواسطة الإجهاد التناضحي

اتصال:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

تشون تشاو ليو. شي يو تشنغ

الملخصتم دراسة تأثير الإجهاد التناضحي على نمو الخلايا والتخليق الحيوي لجليكوسيدات فينيل إيثانويد (PeGs) في مزارع تعليق الخلية.Cistanche DeserticolaYC Ma ، نبتة طبية صحراوية تنمو في المنطقة الغربية من الصين. أثرت تركيزات السكروز الأولية المختلفة بشكل كبير على نمو الخلايا والتخليق الحيوي لـ PeGs في مزارع المعلق ، ووصل أعلى وزن جاف وتراكم لـ PeGs إلى 15.9 مجم - 1- DW و 20.7 مجم جم - 1- DW على التوالي عند التناضحي الأولي إجهاد 300 ملي أسمول كجم -1 حيث كان تركيز السكروز 175.3 ملي مولار. أظهر التحليل المتكافئ مع توليفات مختلفة من السكروز والسكر غير الأيضي (مانيتول) أو العوامل التناضحية غير السكرية (PEG و NaCl) أن الإجهاد التناضحي نفسه كان عاملاً مهمًا في تعزيز التخليق الحيوي لـ PeGs في مزارع تعليق الخلية.Cistanche Deserticola. تم الحصول على الحد الأقصى لمحتويات PeGs البالغة 26.9 و 23.8 مجم جم - 1- DW بعد 21 يومًا بتوليفات من 87.6 ملي مولار سكروز مع 164.7 ملي مولار مانيتول (303 ملي أسمول كجم -1) أو 20 ملي مولار بولي إيثيلين على التوالي ، والتي كانت أعلى من أن مزارع خلايا C. ارتبط تراكم PeGs المحفز في مزارع تعليق الخلية بزيادة نشاط فينيل ألانين أمونيوم لياز (PAL) الناجم عن الإجهاد التناضحي.

الكلمات الدالة Cistanche Deserticola، نبات طبي صحراوي ، جليكوسيدات فينيلثانويد ، إجهاد تناضحي ، فينيل ألانين أمونيا-لياز

سيستانشتوبولوساله العديد من التأثيرات ، انقر هنا لمعرفة المزيد

مقدمة

Cistanche DeserticolaYC Ma ، عشب صيني ثمين ، يتطفل على جذور Haloxylon amodendrun وينمو في المناطق الصحراوية في غرب الصين. جليكوسيدات فينيلثانويد (PeGs) ، المكونات النشطة بيولوجيًا الرئيسية المعزولة عن C. بسبب الاستغلال والاستخدام غير المنضبطينCistanche Deserticola، المورد الطبيعي لـCistanche Deserticoكان لا على حافة الإنهاك. في ضوء هذه المشاكل ، تم اعتبار إنتاج PeGs عن طريق مزارع المعلق الخلوي لـ C.Cistanche Deserticolaالمواد النباتية (Lu and Mei 2003 ؛ Ouyang et al. 2003 ؛ Cheng وآخرون 2005 أ).

الإجهاد التناضحي هو عامل مهم يؤثر على نمو النبات وتطوره وتكوينه وتكوين المستقلبات الثانوية. تم الإبلاغ عن زيادة إنتاج المستقلبات الثانوية من مزارع الأنسجة المختبرية في ظل الإجهاد التناضحي الأمثل في عدد قليل من أنواع النباتات الطبية (Kim et al. 2001؛ Wang et al. 1999؛ Wu et al. 2005). السكروز هو عامل إجهاد تناضحي معتاد يستخدم في هذه الحالات ، ويعمل أيضًا كمصدر حيوي للكربون والطاقة. لذلك ، من الصعب للغاية فصل تأثير الإجهاد التناضحي والدور الغذائي للسكريات كمصادر للكربون. أدت زيادة الإجهاد التناضحي الأولي مع مانيتول غير استقلابي ، سوربيتول ، و PEG أيضًا إلى تحسين تراكم باكليتاكسيل في مزارع خلايا تاكسوس تشينينسيس ، وتراكم السابونين وعديد السكاريد في مزارع باناكس لخلايا نوتوجينسنغ ، وتراكم الإليوثروسييدات في إليوثيروكوكوس سيسيليفلوروس الأجنة. وآخرون 2001 ؛ Shohael وآخرون 2006). أشارت نتائجهم إلى أن تأثيرات تركيز الكربوهيدرات والضغط التناضحي تختلف باختلاف الأنواع النباتية والمستقلبات الثانوية.

يركز الهدف من الدراسة الحالية على التأثيرات التناضحية للسكروز والمانيتول و PEG و NaCl على نمو الخلايا والتخليق الحيوي لـ PeGs فيCistanche Deserticolaثقافات تعليق الخلية. تم فحص نشاط PAL في مزارع التعليق تحت مجموعات مختلفة من العوامل التناضحية الأولية ، وتناقش الآلية المحتملة لتراكم PeGs المحسن عن طريق زيادة الإجهاد التناضحي.

المواد والأساليب

المواد النباتية وتحريض الكالس

بذورCistanche Deserticolaتم جمع YC Ma من المناطق الصحراوية في مقاطعة Xinjiang في الصين وتخزينها في 4 درجات مئوية قبل الاستخدام. تم تأكيد الهوية النباتية بالمقارنة مع المعايير المرجعية في معهد علم النبات ، الأكاديمية الصينية للعلوم ، جمهورية الصين الشعبية. تم تعقيم البذور السطحي عن طريق الغمس في 70٪ من الإيثانول لمدة 30 ثانية ، ثم غمرها في محلول مائي بنسبة 20٪ من هيبوكلوريت الصوديوم بنسبة 5.4٪ في الماء لمدة 20 دقيقة ، تليها ثلاث مرات شطف بالماء المقطر المعقم. تم تحفيز Calli من بذور معقمة سطحًا لـCistanche Deserticolaعلى وسط MS (Murashige and Skoog 1962) مُكمل بـ 1. 0 مجم لتر -1 حمض النفثالينيتيك (NAA) ، 2. 0 مجم لتر - 1 6- بنزيل أدينين ({{7} } BA) ، 0. 25 مجم لتر - 1 2 ، 4- حمض ثنائي كلورو فينوكسياسيتيك (2 ، 4- د) ، 6 مجم -1 أجار (PhytoTechnology LaboratoriesTM ، معرف المنتج: A181) و 30 جرامًا -1 سكروز لمدة 60 يومًا في خزانة نمو في الظلام عند 25 درجة مئوية. تم بعد ذلك زراعة مزارع الكالس المستحثة من نباتات إإكسبلنتس البذرية إلى الوسط الصلب أعلاه في فترة 30 يومًا (Cheng et al. 2005a).

إنشاء وصيانة مزارع تعليق الخلية

تمت زراعة مزارع الكالس المعلق (3. 0 جم وزن طازج) والتي تمت تصفيتها من خلال شاشة شبكية مقاس 1 ، 000 واحتفظ بها على شاشة شبكية 200 lm في 500- مل إرلنماير قارورة تحتوي على 100 مل من الوسط السائل أعلاه على شاكر دوار عند 110 دورة في الدقيقة عند 25 درجة مئوية في الظلام على فترة ثقافة فرعية مدتها 18 يومًا. تم تعديل الأس الهيدروجيني المتوسط ​​إلى 5.8 مع 1 M NaOH أو 1 M HCl قبل التعقيم. تم استخدام مزارع الكالس المعلق المزروعة بعد عشر مرات كلقاح لثقافة القارورة التجريبية التالية. أجريت جميع تجارب القارورة في قوارير مخروطية سعة 250 مل تحتوي على 50 مل وسط سائل مع 30 جالون -1 سكروز وتم تلقيحها بوزن 1.5 جم من 18- مزارع معلقة خلوية عمرها يوم واحد. تم تحضين قوارير Erlenmeyer هذه على شاكر دوار (110 دورة في الدقيقة) عند 25 درجة مئوية في الظلام.

تجربة الإجهاد الاسموزي

لفحص تأثير تركيز السكروز الأولي علىنمو الخلايا وتراكم PeGs ،Cistanche Deserticolaتمت زراعة المزارع المعلقة في وسط MS مع 87.6 ،175.3 و 262.9 ملي سكروز. لظروف الإجهاد التناضحي ،Cistanche Deserticolaحضنت الثقافات المعلقة في مرض التصلب العصبي المتعددوسط يحتوي على 87.6 ملي سكروز مع164.7 ملي مانيتول. العوامل التناضحية الأخرى (PEG 4 و 000 وتمت إضافة NaCl) بما يعادل الأسمولية لـ87.6 ملي سكروز. تركيزات المكافئ التناضحيمن العوامل التناضحية تجريبيا على أنها PEG4 ، 000 20 ملي مولار وكلوريد الصوديوم 50 ملي مولار ، على التوالي. تم استخدام قوارير ثلاثية في جميع التجارب وجميع القيمكانت وسيلة القوارير الثلاثية ± SD.

التحليلات

Cistanche Deserticolaتمت ملاحظة الخلايا المستنبتة تحت ضغط تناضحي مختلف بواسطة المجهر الضوئي Nikon AFX-DX (نيكون ، اليابان) تحت 400 · تكبير. تم قياس الأسمولية لوسط الاستزراع باستخدام مقياس ضغط البخار (Fiske One-Ten Osmometer ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية). لتحديد الوزن الطازج (FW) ، فإنCistanche Deserticolaتم ضغط الخلايا برفق على ورق الترشيح لإزالة الماء الزائد ووزنها. بعد ذلك ، تم تجفيف الخلايا في فرن عند 60 درجة مئوية لمدة 24 ساعة وتم تسجيل الوزن الجاف (DW). تم تحديد تركيز السكر المتبقي باستخدام الفينول وحمض الكبريتيك المركز باستخدام الجلوكوز كمعيار (Dubois et al. 1956).

تم استخراج PeGs من الخلايا المجففة بالميثانول لمدة 15 دقيقة عند 60 درجة مئوية في حمام مائي فوق صوتي (KQ2200 ، Shanghai Cany Precision Instrument Co. ، Ltd ، الصين) بتردد 40 كيلو هرتز وقوة 100 وات. والمخلفات المذابة في الماء المقطر ثم مرت عبر عمود راتنج شبكي كبير (AB -8 ، منتج كيميائي لجامعة نانكاى ، تيانجين ، الصين). تم جمع شطف الميثانول وقياس المحتوى الكلي لـ PeGs عند 333 نانومتر باستخدام إشنكوسايد كمعيار (Du and Liu 1993a؛ Du et al. 1993b).

تم تقدير صلاحية الخلية بتقليل 2 ، 3 ، 5- كلوريد ثلاثي فينيل تيترازوليوم (TTC) (ستيبونكوس ولانفير 1967). يُعرَّف مؤشر الصلاحية على أنه الامتصاصية المقاسة لكل جرام من الأنسجة الطازجة. استند تحديد نشاط PAL على طريقة Koukol و Conn (1961). يتم تعريف وحدة واحدة من نشاط PAL (U) على أنها مقدار اختلاف الامتصاص لـ 0. 01.

النتائج والمناقشة

تأثير تركيز السكروز الأولي على نمو الخلايا والتخليق الحيوي لـ PeGs في مزارع تعليق الخليةCistanche Deserticola.استجابةCistanche Deserticolaتم اختبار الثقافات المعلقة الخلوية لتركيز السكروز الأولي بين 87.6 و 262.9 ملي مولار. كما هو مبين في الشكل 1 ، نمت الخلايا وتراكمت بي جي بسرعة بتركيز سكروز أولي منخفض قدره 87.6 مم ، وتم قمع نمو الخلايا وتراكم بي جي بشكل واضح عند تركيز سكروز أولي مرتفع يبلغ 262.9 ملي مولار. انخفضت نسبة الوزن الطازج إلى الوزن الجاف عندما زاد تركيز السكروز الأولي من 87.6 من 262.9 ملي مولار (البيانات غير معروضة). تم الحصول على أقصى وزن جاف يبلغ 15.9 مجم -1 ومحتوى بي جي من 20.7 مجم جم - 1- وزن جاف في اليوم 30 بتركيز سكروز مبدئي 175.3 ملي مولار والتي كانت الأسمولية منها حوالي 300 ملي أسمول كجم -1. تحت الملاحظة المجهرية ، تم فصل جدران الخلايا عن السيتوبلازم عند أعلى إجهاد تناضحي قدره 388 ملي أسمول كجم -1 حيث كان تركيز السكروز الأولي 262.9 ملي مولار (الشكل 2) ، وأعلى إجهاد تناضحي قد يزعج عملية التمثيل الغذائي للخلايا وينتج عن ذلك قمع شديد للنمو وانخفاض في التخليق الحيوي لـ PeGs. كما لوحظت ظاهرة مماثلة في مزارع المعلق من مزارع الخلايا المعلقة T. Chinensis ، وكان تركيز السكروز الأمثل لإنتاج باكليتاكسيل 175.3 ملي مولار (Kim et al. 2001). ومع ذلك ، كان تركيز السكروز الأولي 204.5 ملي مولار مفيدًا لنمو مزارع خلايا E. sessiliflorus. تركيز أعلى من السكروز يبلغ 262.9 ملي مولار يعزز التخليق الحيوي للإيوثيروزيدات والفينول والفلافونويد في مزارع إليوثيروكوكس (Shohael et al.2006). من الواضح أن تركيز السكروز الأولي مهم للنمو وتراكم المستقلبات الثانوية لمزارع الخلايا النباتية ويرتبط تأثيره بخط خلية معين.

تأثير العوامل التناضحية المختلفة على نمو الخلايا والتخليق الحيوي لـ PeGs في مزارع تعليق الخلية من C.

لفهم الدور التناضحي للسكروز الأيضي والركائز الكيميائية الأخرى غير الأيضية في التخليق الحيوي لـ PeGs في مزارع تعليق الخليةCistanche Deserticola، تم إجراء سلسلة من التجارب باستخدام السكروز جنبًا إلى جنب مع العوامل التناضحية غير الاستقلابية (مانيتول ، PEG ، و NaCl). في هذه التجارب ، تمت إضافة 164.7 ملي مولار مانيتول ، و 20 ملي مولار بولي إيثيلين ، و 50 ملي مول كلوريد الصوديوم إلى الوسط الذي يحتوي على 87.6 ملي مولار سكروز وجعل الأسمولية الأولية حوالي 300 ملي أسمول كجم -1 ، والتي كانت حالة تناضحية مكافئة مماثلة للوسط مع 175.3 ملي مولار. السكروز.

كما هو مبين في الشكل 3 أ ، ب ، أدت إضافة مانيتول (عامل تناضحي للسكر غير الأيضي) و PEG (عامل تناضحي غير منفذ) إلى تثبيط طفيف لمعدل نمو الخلايا ، ولكنها عززت بشكل ملحوظ التخليق الحيوي لـ PeGs فيCistanche Deserticolaثقافات تعليق الخلية. تم الحصول على الحد الأقصى لمحتويات PeGs البالغة 26.9 و 23.8 مجم جم - 1- وزن جاف ، على التوالي ، في اليوم 21 عندما نمت الخلايا في توليفات مكونة من 87.6 ملي مولار سكروز مع 164.7 ملي مولار مانيتول (303 ملي أسمول كجم -1) أو 20 ملي PEG (299 ملي أوسم كجم -1). كانت كميات PeGs أعلى من تلكCistanche Deserticolaنمت مزارع الخلايا في وسط سائل MS بتركيز سكروز أولي 175.3 ملي مولار في اليوم 30. تم استهلاك السكر تدريجيًا خلال فترة العلاج.Cistanche Deserticolaثقافة الخلية ، ثم انخفض الضغط التناضحي الناجم عن السكر وفقًا لذلك (الشكل 3 ج ، د). انخفض الضغط التناضحي للوسط السائل مع تركيز أولي للسكروز 175.3 ملي مولار من 280 إلى 110 ملي أسمول كجم -1 عندما بدأت بي جي في مزارع الخلايا في التراكم في اليوم 9 ووصلت إلى الحد الأقصى في اليوم 30 (البيانات غير معروضة). لم يتم استهلاك العوامل التناضحية غير الأيضية (مانيتول و PEG) في سياق زراعة الخلايا ، مما يسمح بالحفاظ على الإجهاد التناضحي للوسط السائل بين 200 و 280 ملي أسمول كجم -1 ، وهو ضغط تناضحي مناسب للتخليق الحيوي لـ PeGs. أظهرت هذه النتائج أن الإجهاد التناضحي نفسه لعب دورًا مهمًا في تعزيز التخليق الحيوي لـ PeGs فيCistanche Deserticolaمزارع الخلايا.

تم الإبلاغ عن إضافة NaCl لتحسين قلويدات الإندول والتخليق الحيوي للسابونين على التوالي في مزارع الخلايا من Catharanthus roseus و Panax ginseng (Smith et al. 1987 ؛ Wu et al. 2005) ، لكن علاج كلوريد الصوديوم أوقف نمو خلايا T. Chinensis بينما لا يظهر أي اختلاف في التخليق الحيوي للباليتاكسيل (Kim et al. 2001). لذلك ، من الضروري إجراء تحقيق مفصل لكل حالة. أدت إضافة مكافئ تناضحي لـ 50 ملي كلوريد الصوديوم إلى كبت نمو الخلايا والتخليق الحيوي لـ PeGs. قد تكون هذه النتيجة ناتجة عن طبيعة نفاذية كلوريد الصوديوم والتي لا تفيد مزارع الخلايا لهذا النوع من النباتات الصحراوية التي يمكنها تحمل إجهاد الجفاف جيدًا.

الشكل 3 تأثير توليفات السكروز والعوامل التناضحية الأخرى غير الأيضية على نمو الخلايا (أ) ، وتراكم بي جي (ب) ، واستهلاك السكر (ج) ، وتغير الإجهاد التناضحي (د) في سياق خلية جيم الصحراء الثقافة. القيم هي وسيلة لثلاث قوارير ± SD

تأثير العوامل التناضحية المختلفة على حيوية الخلية ونشاط PAL في مزارع تعليق الخلية في Cistanche deserticola

في دراساتنا السابقة (Cheng et al. 2005b ، 2006) ، أدت إضافة elicitor إلى تحفيز التخليق الحيوي لـ PeGs بشكل كبير فيCistanche Deserticolaالثقافات الخلوية والتحفيز كان مرتبطًا بزيادة نشاط PAL ، وهو أول إنزيم رئيسي في التخليق الحيوي لـ PeGs (Hahlbrock and Grisebach 1979). كما هو مبين في الشكل 4 ، فإن إضافة 164.7 ملي مولار من المانيتول غير الأيضي أو 20 ملي PEG إلى وسط سائل MS يحتوي على 87.6 ملي مولار سكروز أدى إلى انخفاض طفيف في قابلية الخلية للبقاء ، ولكن عزز نشاط PAL بشكل ملحوظ والذي كان أعلى من ذلك الناتج عن تركيز السكروز الأولي من 175.3 ملم. تراكم PeGs المحسن فيCistanche Deserticolaكانت مزارع تعليق الخلية مرتبطة بزيادة نشاط PAL الذي يحفزه الإجهاد التناضحي نفسه. تسبب تركيز السكروز الأولي البالغ 175.3 ملي مولار في وسط سائل MS في انخفاض في قابلية الخلية للحياة في 15 يومًا وتثبيط نشاط PAL في 21 يومًا. بعد فترة من استهلاك السكر عن طريق النموCistanche Deserticolaمزارع الخلايا ، زادت قابلية بقاء الخلية ونشاط PAL للخلايا المستنبتة ووصلت إلى الحد الأقصى في اليوم 24 واليوم 30 ، على التوالي. لوحظ أيضًا تعزيز نشاط PAL عن طريق الإجهاد التناضحي لتحسين التخليق الحيوي للصابونين في مزارع خلايا P. ginseng وتراكم قلويد في خلايا مستزرعة C. ومع ذلك ، فإن إضافة NaCl المنفذ إلى وسط سائل MS يحتوي على 87.6 ملي سكروز قلل من قابلية بقاء الخلية وأعاق نشاط PAL خلال فترة الثقافة بأكملها. نتيجة لذلك ، تم قمع كل من نمو الخلايا والتخليق الحيوي لـ PeGs.

الشكل 4 التباين في قابلية بقاء الخلية (أ) ونشاط PAL (ب) في مزارع خلايا C.Cistanche Deserticolaزراعة الخلايا. القيم هي وسيلة لثلاث قوارير ± SD

Cistanche Deserticolaهو أحد الأنواع الصحراوية والتحقيق في الأنواع الصحراوية في مزارع الخلايا المختبرية قدم تحديات وفرصًا جديدة لفهم فسيولوجيا النبات والتكيفات البيئية. في هذه الدراسة ، قمنا بتطوير نظام لديه القدرة على دراسة مسار تخليق حيوي لتوصيل الإشارات بوساطة الإجهاد التناضحي ، وقدم النظام الأساس لإنتاج كميات كبيرة من بي جي باستخدامCistanche Deserticolaمزارع الخلايا من خلال استراتيجية جديدة تنظم الإجهاد التناضحي.

شكر وتقدير

يعترف المؤلفون بالدعم المالي المقدم من برنامج أبحاث الابتكار التابع للأكاديمية الصينية للعلوم.

من: "تعزيز التخليق الحيوي للجليكوزيدات الفينيليثانويدية في مزارع الخلايا في Cistanche deserticola عن طريق الإجهاد التناضحي" بواسطة Chun-Zhao Liu. شي يو تشنغ

---ممثل الخلية النباتية (2008) 27: 357–362 DOI 10.1007 / s 00299-007-0443-3

مراجع

Cheng XY، Wei T، Guo B، Ni W، Liu CZ (2005a)Cistanche Deserticolaمزارع تعليق الخلية: التخليق الحيوي للجليكوزيدات الفينيليثانويد والنشاط المضاد للأكسدة. عملية Biochem 40: 3119-3124
Cheng XY ، Guo B ، Zhou HY ، Ni W ، Liu CZ (2005b) الاستنباط المتكرر يعزز تراكم جليكوسيدات الفينيثانويد في مزارع تعليق الخليةCistanche Deserticola. Biochem Eng J 24: 203-207
Cheng XY ، Zhou HY ، Cui X ، Ni W ، Liu CZ (2006) تحسين التخليق الحيوي للجليكوزيدات الفينيليثانويد في مزارع تعليق الخلايا Cistanche Deserticola بواسطة الكيتوزان elicitor. J Biotech 121: 253-260
Du NS ، Liu JL (1993a) تحديد جليكوسيدات فينيلثانويد فيCistanche Deserticolaبواسطة مطياف راتنج شبكي الكلي. Nat Prod Res Dev 5:30 - 33
Du NS، Wang H، Yi YH (1993b) عزل وتحديد جليكوسيدات فينيلثانويد منCistanche Deserticola. Nat Prod Res Dev 5: 5–8
Dubois M، Gilles KA، Hamilton JK (1956) طرق قياس الألوان لتقدير السكر والمواد ذات الصلة. الشرج كيم 28: 350-357

Godoy-Hernandez GC، Vazquez-Flota FA، Loyola-Vargas VM (2000) يزيد التعرض لحمض ترانس سيناميك لخلايا كاثارانثوس روزوس المجهدة تناضحيًا والمزروعة في 14- مفاعل حيوي من التراكم القلوي. Biotechnol Lett 22: 921-925
Hahlbrock K، Grisebach H (1979) الضوابط الأنزيمية في التخليق الحيوي للليغين والفلافونويد. Ann Rev Plant Physiol 30: 105-130
Kim SI، Choi HK، Kim JH (2001) تأثير الضغط الأسموزي على إنتاج باكليتاكسيل في مزارع الخلايا المعلقة في Taxus Chinensis. إنزيم ميكروب تك 28: 202-209
Koukol J، Conn EE (1961) استقلاب الأرومات وخصائص فينيل ألانين ديميناس من Hordeum vulgare. J Biol Chem 236: 2692–2698
Lu MC (1998) دراسات حول التأثير المهدئ لـCistanche Deserticola.J إثنوفارماكول 59: 161–165

Lu CT ، Mei XG (2003) تحسين إنتاج جليكوسيدات الفينيثانويد بواسطة عامل فطري في ثقافة تعليق الخليةCistanche Deserticola. Biotechnol Lett 25: 1437-1439
Murashige T، Skoog F (1962) وسيلة منقحة للنمو السريع والمقايسات الحيوية باستخدام مزارع أنسجة التبغ. النبات Physiol 15: 473-497
Ouyang J، Wang XD، Zhao B، Yuan XF، Wang YC (2003) تأثير العناصر الأرضية النادرة على نموCistanche Deserticolaالخلايا وإنتاج جليكوسيدات الفينيثانويد. J Biotechnol 102: 129-134
Shohael AM، Hakrabarty D، Ali MB، Yu KW، Hahn EJ، Lee HL، Paek KY (2006) تحسين إنتاج الإليوثيروسيدات في الثقافات الجنينية للإليوثروكوكس سيسيليفلوروس استجابة للإجهاد الاسموزي الناجم عن السكروز. عملية Biochem 41: 512-518
Smith JL ، Smart NJ ، Kurd WGW ، Misawa M (1987) استخدام المركبات العضوية وغير العضوية لزيادة تراكم قلويدات الإندول في مزارع Catharanthus roseus (L.) المعلقة الخلوية. J Exp Bot 38: 1507-1511
Steponkus PL، Lanphear FO (1967) صقل طريقة ثلاثي فينيل تيترازوليوم كلوريد لتحديد الإصابة الباردة. النبات Physiol 42: 1423-1426Wang HQ، Wu JT، Zhong JJ (1999) تحسن كبير في إنتاج التاكسان في مزارع معلقة من Taxus Chinensis عن طريق إستراتيجية تغذية السكروز. عملية Biochem 35: 479-483
Wang XW ، Jiang XY ، Wu LY ، Wang XF (2001) تأثير الكسح للجليكوسيدات منCistanche Deserticolaعلى الجذور الحرة وحمايتها من تلف الحمض النووي الناجم عن OH في المختبر. Chin Pharm J 36: 29–31
Wu JY، Wong K، Ho KP، Zhou LG (2005) تعزيز إنتاج الصابونين في زراعة خلايا الجينسنغ عن طريق الإجهاد التناضحي والتغذية المغذية. إنزيم ميكروب تكنول 36: 133-138
Zhang YH، Zhong JJ، Yu JT (1995) تأثير الضغط التناضحي على نمو الخلايا وإنتاج الجينسنغ سابونين وعديد السكاريد في مزارع تعليق باناكس نوتوجينسنغ. Biotechnol Lett 17: 1347-1350
Zong GZ، He W، Wu GL، Chen LH (1996) مقارنات بينCistanche DeserticolaYC Ma و Cistanche tubulosa (Scheak) بعض الأنشطة الدوائية. Tradit Chin Med J 21: 436–438