Epigallocatechin -3- الجسيمات الشحمية المحملة بغالاتي تساعد في مكافحة التهاب الخلايا الدبقية الصغيرة وتعزز الحماية العصبية

joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

الملخص

من المعروف أن الالتهاب العصبي بوساطة الخلايا الدبقية الصغيرة يساهم بشكل رئيسي في تطور الأمراض التنكسية العصبية. يمكن أن يمنع Epigallocatechin -3- gallate (EGCG) ، المعروف بمضادات الأكسدة الطبيعية في الشاي الأخضر ، الالتهاب الذي تتوسطه الخلايا الدبقية الصغيرة وحماية الخلايا العصبية ، ولكن له عيوبًا مثل عدم الاستقرار المرتفع وانخفاض التوافر البيولوجي. قمنا بتطوير تركيبة EGCG liposomal لتحسين التوافر البيولوجي وتقييم النشاط العصبي في نماذج الالتهاب العصبي في المختبر وفي الجسم الحي. تم تحضير الجسيمات الشحمية المحملة بـ EGCG من فسفاتيديل كولين (PC) أو فسفاتيديل سيرين (PS) مغلف بفيتامين E (VE) أو بدونه عن طريق الترطيب وبثق الغشاء. المضاد التهابتم تقييم التأثير ضد تنشيط الخلايا الدبقية الدبقية الناجم عن عديد السكاريد الدهني (LPS) {{1} والالتهاب في المادة السوداء لجرذان سبراج داولي. في نموذج الالتهاب الخلوي ، غيّرت خلايا الفئران الدبقية الدبقية BV -2 شكلها من شكل كروي طبيعي إلى شكل مغزل مفعل بعد 24 ساعة من تحريض LPS. في اختبار الجذور الحرة 2 في المختبر ، 2- ثنائي فينيل -1- بيكريل هيدرازيل (DPPH) ، كشط EGCG 80 بالمائة من DPPH في غضون 3 دقائق. يمكن بلعمة الجسيمات الشحمية المحملة بـ EGCG بواسطة خلايا BV -2 بعد ساعة واحدة من زراعة الخلايا من تجارب امتصاص الخلية. حسنت الجسيمات الشحمية المحملة بـ EGCG إنتاج أكسيد النيتريك المشتق من الخلايا الدبقية الصغيرة BV -2 و TNF- بعد LPS. في نموذج الفئران المتلازمة باركنسون في الجسم الحي ، أدى الحقن المتزامن داخل النيجر من الجسيمات الشحمية المحملة بـ EGCG إلى تخفيف السيتوكينات المؤيدة للالتهابات الناتجة عن LPS واستعادة ضعف الحركة. لقد أظهرنا أن الجسيمات الشحمية المحملة بـ EGCG لها تأثير اعصاب من خلال تعديل تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة. يمكن أن يكون EGCG المستخرج من الشاي الأخضر والجسيمات الشحمية المحملة مرشحًا مهمًا لعلاج تعديل المرضمرض باركنسون (PD).

الكلمات الدالة:حماية الأعصاب; التهاب الأعصاب; مرض الشلل الرعاش؛ كاتشين. - - فوسفاتيديل كولين ؛ فوسفاتيديل سيرين

يحول دونالشلل الرعاشمرضآثار Cistanche معcistanche

Chun-Yuan Cheng 1 و 2 و Lassina Barro 2 و Shang-Ting Tsai 2 و 3 و Tai-Wei Feng 2 و 3 و Xiao-Yu Wu 2 و Che-Wei Chao 4 و Ruei-Siang Yu 2 و Ting-Yu Chin 4 ، * ومينغ فا هسيه 2،3 ، *

1 قسم جراحة الأعصاب ، قسم الجراحة ، مستشفى Changhua Christian ، 135 Nanxiao St. ، مدينة Changhua ، مقاطعة Changhua 500 ، تايوان ؛ 83998@cch.org.tw

2 قسم الهندسة الطبية الحيوية ، جامعة Chung Yuan Christian ، رقم 200 ، طريق Zhongbei ، حي Zhongli ، مدينة Taoyuan 320314 ، تايوان ؛

3 مركز للأجهزة والتقنيات الطبية ذات الحد الأدنى من التدخل الجراحي ، جامعة Chung Yuan Christian ، رقم 200 ، طريق Zhongbei ، حي Zhongli ، مدينة Taoyuan 320314 ، تايوان

4 قسم تكنولوجيا العلوم البيولوجية ، جامعة Chung Yuan Christian ، رقم 200 ، طريق Zhongbei ، حي Zhongli ، مدينة Taoyuan 320314 ، تايوان.

1 المقدمة

عندما يتلف الجهاز العصبي أو يصاب بالعدوى ، يتم تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة وتحويلها إلى متفرعة ، مما يؤدي إلى الإفراط في التعبير عن كمية كبيرة من السيتوكينات المؤيدة للالتهابات مثل عامل نخر الورم- (TNF-) والإنترلوكين -1 ( IL -1) ، وإنترلوكين 6 (IL -6) ، والوسيطات الالتهابية مثل أكسيد النيتريك (NO) وأنواع الأكسجين التفاعلية (ROS). أخيرًا ، تتلف الخلايا العصبية أو تتحلل أو تموت من هذه الوسائط الالتهابية. لقد اكتشف مؤخرًا أنه في دماغ المرضى الذين يعانون من أمراض التنكس العصبي مثل مرض باركنسون (PD) ومرض الزهايمر 0 ومرض هنتنغتون 0 ومرض كروتزفيلد جاكوب ، يتم تنشيط كميات كبيرة من الخلايا الدبقية الصغيرة والإفراط في التعبير [1-3]. من الناحية الوبائية ، يرتبط سبب مرض باركنسون في الغالب برد الفعل الالتهابي العصبي. تم العثور على الوسطاء الناتج عن الالتهاب ، مثل TNF- و IL -1 و IL -6 و NO و ROS ، في مخطط الدماغ [1،4-7]. يمكن تنظيم تدهور الخلايا العصبية الدوبامينية بواسطة الخلايا الدبقية الصغيرة [8].

تسبق عملية الالتهاب العصبي التي تسبب شلل الرعاش تلف أولي للخلايا العصبية ناتج عن السموم البيئية ، بما في ذلك الروتينون [9] وعديد السكاريد الدهني (LPS) [5،7] ، وتأثيرات تراكم البروتين غير الطبيعي [10]. سوف يتسبب الضرر في حدوث آفات وحتى موت الخلايا المبرمج للخلايا العصبية الدوبامينية. ثم يتم تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة لإطلاق السيتوكينات ، مما يؤدي إلى التهاب وموت الخلايا العصبية ويؤدي في النهاية إلى شلل الرعاش.

عندما يتم تحفيز الخلايا الدبقية الصغيرة بواسطة LPS ، يرتبط LPS بموقع ارتباط مستقبلات السطح CD14 لخلايا الخلايا الدبقية الصغيرة. يتم ربط مجمع LPS-CD14 برابط MD2 من خلال بروتينات عبر الغشاء -4 (TLR4) التي تشبه رسوم المرور ومن ثم تشارك في مسارات نقل رسائل متعددة تم إنشاؤها بواسطة كينازات البروتين المنشط بالميتوجين (MAPK) وتفعيل عوامل النسخ (العامل النووي) -kappa B ، NF- B). بعد النسخ الجيني [5 ، 11 ، 12] ، تطلق الخلايا الدبقية الدبقية السيتوكينات مثل TNF- و IL -1 ، أو تعبر عن جينات سينثاز أكسيد النيتريك المحرض (iNOS) وأوكسجيناز سيكلو -2 (COX { {17}}) ، مما أدى إلى إطلاق البروستاجلاندين أو NO. بالإضافة إلى ذلك ، يتم إنشاء الجذور الحرة المدمرة ONOO عن طريق الجمع بين الأنيونات الفائقة التي تنتج من نيكوتيناميد الأدينين ثنائي النوكليوتيد أوكسيديز (NADPH) مع NO المنتج من iNOS ، مما يؤدي إلى موت الخلايا العصبية الدوبامينية [13]. لذلك ، في هذه الدراسة ، تم استخدام LPS للحث على التهاب عصبي لخلايا الخلايا الدبقية الصغيرة كنموذج في المختبر من PD.

يعتبر الكاتيكين من مضادات الأكسدة الطبيعية التي يمكن أن تمنع تلف الخلايا وتوفر العديد من الفوائد الدوائية مثل مضادات الأورام ، ومكافحة السرطان ، ومكافحة الشيخوخة ، والإشعاع المضاد الدوائي ، وإزالة الجذور الحرة [14]. يحتوي الشاي الأخضر على حوالي 10 في المائة من مادة البوليفينول بالوزن ، بما في ذلك كميات كبيرة من مادة كاتشين تسمى إيبيغالوكاتشين جالاتي (EGCG). يحتوي EGCG على أعلى نشاط مضاد للأكسدة وقدرة على إزالة الجذور الحرة في جميع أنواع مضادات الأكسدة في الشاي الأخضر ويمكنه التقاط ROS لحماية الخلايا من تلف الإجهاد التأكسدي [15]. يحتوي EGCG أيضًا على فعالية عالية مضادة للالتهابات ، والتي يمكن أن تمنع بشكل فعال إفراز السيتوكينات (TNF- و IL -2 و IL -8) بواسطة الضامة [16] ، وفسفرة بروتينات تأشير Akt وبروتينات IκB في المسارات الالتهابية لتقليل تعبير NF-κB ، أو نسخ AP -1 عن طريق تثبيط الفسفرة لبروتينات MAPK المنبع لموازنة تعبير COX -2 وتقليل إنتاج السيتوكينات المسببة للالتهابات [17].

في الآونة الأخيرة ، تم الإبلاغ عن EGCG ليكون علاجيًا أو وقائيًا لـ PD بسبب قمع أوليغومرات السينوكلين (S) النشطة [18]. يمنع EGCG أيضًا تراكم S في المختبر [19-21] ، وتجمع S السيتوبلازمي في الخلايا العصبية الدوبامينية هو أحد العوامل المرضية المحتملة لـ PD مما يؤدي إلى تلف الخلايا العصبية الدوبامينية في المادة السوداء [22]. علاوة على ذلك ، يمكن لـ EGCG استرداد 1- ميثيل -4- فينيل -1 ، 2،3 ، 6- تيتراهيدروبيريدين (MPTP) الناجم عن التلف الكيميائي العصبي أو الوظيفي وتنظيم ferroportin في المادة السوداء وتقليل الاكسدة [23]. يحتوي EGCG أيضًا على تأثيرات واقية من الأعصاب ووقائية مناعية في الفئران المعالجة بـ MPTP ويمكنه تعديل الالتهاب العصبي وحماية فقدان الخلايا العصبية الدوبامينية في PD الناجم عن MPTP [24].

تم التحقيق في الآثار المضادة للالتهاب من EGCG. قام EGCG بإيقاف إنتاج LPS الناتج عن عدم إنتاج iNOS والتعبير عنه في الخلايا الدبقية الصغيرة BV -2. يمكن أن يثبط EGCG بشكل فعال تعبيرات السيتوكينات المؤيدة للالتهابات مثل TNF- و IL -1 في خلايا BV -2 [25]. أدت المعالجة المسبقة لـ EGCG للخلايا الضامة البشرية إلى تثبيط التعبير الناجم عن LPS بشكل ملحوظ عن السيتوكينات المؤيدة للالتهابات مثل TNF- و IL -1 و IL -6 [26]. بالإضافة إلى ذلك ، أدت المعالجة اللاحقة لـ EGCG على الفئران المصابة بـ LPS إلى تقليل إنتاج السيتوكين المؤيد للالتهابات من خلال تعديل مسار TLR 4- NF-B [27]. علاوة على ذلك ، يمكن للكريات المجهرية بولي (لاكتيد-كو-جليكوليد) (PLGA) المحملة بـ EGCG والمحسّنة عن طريق إضافة -Cyclodextrin (-CD) أن تمنع بشكل فعال إنتاج NO من خلايا BV -2 في النموذج المختبر من الفئران BV -2 الخلايا الدبقية الدبقية التي يتم تحفيزها بواسطة LPS ، مما يشير إلى أن الكرات المجهرية يمكن أن تمنع التهاب الخلايا الدبقية الدبقية المنشطة [28].

على الرغم من أن الشاي الأخضر هو مشروب يومي ، فإن فعالية بمضادات الاكسدة غير فعالة بسبب قلة التوافر الحيوي عن طريق الفم ؛ وبالتالي ، هناك حاجة إلى أشكال جرعات دوائية فعالة. حاملة الأدوية النانوية لها فوائد تجنب الأيض المبكر ، وإطالة وقت عمل الدواء ، واستهداف توصيل الدواء. لذلك ، تهدف هذه الدراسة إلى تطوير الجسيمات الشحمية المحتوية على فسفاتيديل كولين (PC) وفوسفاتيديل سيرين (PS) ، وهي مكونات مماثلة لغشاء الخلية ، كأشكال جرعات مضادة للالتهابات. تم تحميل EGCG المستخرج من أوراق الشاي الأخضر في الجسيمات الشحمية لإبطاء التفاعلات الالتهابية في الخلايا الدبقية الصغيرة التي يسببها LPS. تم أيضًا تقييم التأثير العلاجي للجسيمات الشحمية المحملة بـ EGCG على النموذج الحي لـ PD للحماية العصبية.

2. النتائج

2.1. استخراج EGCG

2.1.1. استخراج EGCG

يمكن العثور على بيانات توصيف epigallocatechin {0} في الملف التكميلي (الشكلان S1 و S2). 2.1.2. تركيبات مختلفة من EGCG في الجدول 1 ، كان متوسط ​​أقطار الجسيمات من الجسيمات الشحمية PS- و PS-EGCE- و PS-EGCG-VE الوهمي أصغر من تلك الخاصة بالعلاج الوهمي PC- و PC-EGCE- و PC-EGCG-VE- الجسيمات الشحمية ، على التوالي. نظرًا لأن الكمبيوتر الشخصي محايد و PS سالب الشحنة [29] ، فإن هذا يشير إلى أن إمكانات السطح المضافة أثرت على حجم الجسيمات. كان مؤشر التشتت المتعدد (PDI) لجميع الجسيمات الشحمية أقل من 0.22 ، مما يشير إلى أن بنية الجسيمات الشحمية في المحلول مستقرة. أدت الشحنات السالبة لـ PS إلى قوة طاردة على الإمكانات السطحية بين PS-liposomes ، وتجنب التجميع وتقليل حجم PS-liposomes.

كانت كفاءة / حجم تغليف الجسيمات الشحمية المحتوية على PS الموصوفة في الجدول 1 أكبر / أصغر من الجسيمات الشحمية المحتوية على الكمبيوتر الشخصي [30]. كانت كفاءة تغليف الجسيمات الشحمية PC-EGCG-VE و PS-EGCG-VE-liposomes أكثر شمولاً من تلك الخاصة بـ PC-EGCG-liposomes و PS-EGCG-liposomes ، على التوالي. هذا لأن فيتامين (هـ) قابل للذوبان في الدهون ، ومدمج في غشاء ثنائي الطبقة من الفوسفوليبيد ، ويوفر مضادًا للأكسدة يحمي EGCG.

2.2. في تحليل الخلايا المختبرية

2.2.1. حيوية الخلية

انخفضت قابلية بقاء الخلايا المعالجة بـ EGCG من 50 إلى 400 ميكرومتر بشكل ملحوظ مقارنة بمجموعة التحكم (الشكل 1A). في المقابل ، فإن جدوى الخلايا التي تتلقى من 5 إلى 25 ميكرومتر تشبه جدوى خلايا المجموعة الضابطة. تم تحديد تركيز EGCG المستخدم في هذه الدراسة ليكون 25 ميكرومتر. وبالمثل ، تم تحديد تركيز LPS المستخدم لتحريض التهاب الخلايا ليكون 50 نانوغرام / مل وفقًا للشكل 1 ب. في الشكل 1 ج ، لم تكن صلاحية الخلية للخلايا المزروعة بالاشتراك مع الجسيمات الشحمية الوهمية لجميع التركيزات ذات دلالة إحصائية مقارنة بمجموعة التحكم. ولذلك ، فإن الجسيمات الشحمية الوهمية ليست سامة للخلايا للخلايا الدبقية الصغيرة.

2.2.2. مورفولوجيا الخلية

كانت مورفولوجيا الخلية لمجموعة التحكم (الشكل 2A) ومورفولوجيا الخلايا المعالجة بـ 25 ميكرومتر EGCG الشكل 2B） كروية ، في حين أن مورفولوجيا الخلايا المعالجة بـ 50 نانوغرام / مل LPS (الشكل 2C) كانت على شكل مغزل. ومع ذلك ، فإن مورفولوجيا الخلايا المعالجة بـ 25 uM EGCG وتنشيطها بواسطة LPS (الشكل 2D) كانت كروية. هذا يدل على أن EGCG يمكن أن يمنع التنشيط الناجم عن LPS. لذلك ، فإن المعالجة المسبقة لـ EGCG لها تأثير مثبط على التهاب الأعصاب ، مما يحمي الخلايا الدبقية الصغيرة من التنشيط.

2.2.3. لا تحرير

في الشكل 3 أ ، كان إطلاق NO من خلايا BV -2 المستحثة باستخدام 5-1000 نانوغرام / مل LPS خلال فترة الحضانة لمدة 24 ساعة ذات دلالة إحصائية مقارنة بإصدار NO من المجموعة الضابطة. تم تحديد تركيز LPS المستخدم لتنشيط التهاب الخلايا للعمل ليكون 50 نانوغرام / مل.

لم يكن الإطلاق من خلايا BV {0}} المعالجة بـ 25 ميكرومتر من EGCG ذا دلالة إحصائية مقارنة بمجموعة التحكم ، كما هو موضح في الشكل 3 ب. ومع ذلك ، أظهر التهاب الخلايا الناجم عن LPS لمدة 24 ساعة زيادة معنوية مقارنة بمجموعة التحكم. أظهرت تلك الخلايا التي عولجت بـ 25-200 ميكرومتر من EGCG لمدة ساعة واحدة ثم تنشيطها باستخدام LPS انخفاضًا مهمًا إحصائيًا مقارنة بمجموعة الخلايا التي تم تنشيطها باستخدام LPS فقط. لم ينخفض ​​أي إطلاق عندما زاد EGCG من 50-200 ميكرومتر منذ أن انخفضت صلاحية الخلية عندما ارتفع EGCG من 50-200 ميكرومتر ، وفقًا للشكل 1 أ.

لم يكن إنتاج الخلايا المعالجة بـ 25 ميكرومتر من EGCG متبوعًا بالالتهاب الناجم عن 50 نانوغرام / مل LPS ذا دلالة إحصائية مقارنة مع مجموعة التحكم (الشكل 3C). ومع ذلك ، أظهر NO الصادر في مجموعة الخلايا المعالجة بـ PC-EGCG-liposomes أو PC-EGCG-VE-liposomes متبوعًا بتنشيط LPS مع 50 نانوغرام / مل انخفاضًا كبيرًا مقارنة بمجموعة الخلايا المعالجة بـ LPS فقط. كان إطلاق NO من الخلايا المعالجة مسبقًا بـ PC-EGCG-liposomes أو PC-EGCG-VE-liposomes أعلى من إطلاق NO من مجموعة الخلايا المعالجة مسبقًا بواسطة EGCG ، والذي يجب تفسيره بالإفراج البطيء عن EGCG من الجسيمات الشحمية.

2.2.4. تحليل السيتوكين

في الشكل 4 أ ، أظهر تركيز TNF- للخلايا التي عولجت بـ LPS بعد 24 ساعة زيادة ذات دلالة إحصائية مقارنة بتركيز المجموعة الضابطة أو وسط ثقافة الخلية (DMEM). كانت الجسيمات الشحمية للكمبيوتر الوهمي قريبة من الخلايا المعالجة بـ LPS. مع ذلك ، أظهر تركيز TNF- في مجموعة الخلايا المعالجة مسبقًا بـ PS-EGCG-liposomes أو PS-EGCG-VE-liposomes متبوعًا بتنشيط LPS انخفاضًا ذا دلالة إحصائية مقارنةً بالخلايا المعالجة بـ LPS. يشير هذا التركيز المتناقص لـ TNF- إلى أن الجسيمات الشحمية المحملة بـ EGCG يمكن أن تقلل من تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة التي يسببها LPS. كان التأثير المثبط للجسيمات الشحمية PS-EGCG-VE أفضل من تأثير PS-EGCG-liposomes.

يمكن تحلل الدهون الفسفورية الموجودة على غشاء الخلية بواسطة فسفوليباز العصاري الخلوي A2 (cPLA2) لإنتاج حمض الأراكيدونيك. Cyclo-Oxygenase (COX) هو إنزيم رئيسي يحول حمض الأراكيدونيك إلى البروستاجلاندين. غالبًا ما يتم إنشاء COX -2 و cPLA2 من الالتهابات أو الأمراض الخبيثة [31–34]. في الشكل 4 ب ، تم إحداث الالتهاب بواسطة LPS من 5 إلى 50 نانوغرام / مل لمدة 24 ساعة ، وزاد التعبير عن cPLA2 عندما زاد تركيز LPS. أظهر الشكل 4 ج الأنشطة المتزايدة لـ COX -2 ، التي يسببها LPS (5-50 نانوغرام / مل) لمدة 24 ساعة. زاد تعبير COX -2 من 5-25 نانوغرام / مل LPS ، بينما انخفض عند 50 نانوغرام / مل. في الشكل 4 د ، تم تقليل تعبير cPLA2 عندما تمت معالجة خلايا BV -2 مسبقًا باستخدام EGCG واستحثها بواسطة LPS. تمت زيادة التعبير عن COX -2 عند تنشيط LPS لخلايا BV -2 مقارنةً بمجموعة التحكم (الشكل 4E). كان هناك انخفاض كبير في COX -2 في مجموعة الخلايا المعالجة مسبقًا بـ EGCG ، و PS-liposomes الوهمي ، و PS-EGCG-liposomes ، و PS-EGCG-VE-liposomes ، متبوعًا بالحث الالتهابي LPS. على وجه الخصوص ، كان للتعبير عن COX -2 للخلايا المعالجة مسبقًا باستخدام الجسيم الشحمي PS الوهمي اختلاف مهم إحصائيًا عن الخلايا التي يسببها LPS.

2.3 في اختبار الحيوانات فيفو

2.3.1. سلوك الحيوان

اختبار تمت زيادة عدد الدوائر التي أكملتها جرذان باركنسون بعد تناول الأمفيتامين (كما هو موضح في الشكل 5 أ) بشكل ملحوظ مقارنة بعدد الدوائر التي أكملتها جرذان المجموعة الضابطة. كان سلوك جرذان باركنسون 0 الذي تمت معالجته بالتركيبة المختلفة لـ EGCG مشابهًا لسلوك فئران المجموعة الضابطة. أشارت هذه البيانات إلى أن EGCG المخففة التي يسببها LPS من جانب واحد من نظام نيغروسترياتال. 2.3.2. تحليل العلامات الالتهابية كانت نسبة TNF- / GAPDH في المجموعة المعالجة أقل بشكل ملحوظ مقارنة بالنسبة الموجودة في الفئران المتلازمة. كان اتجاه IL -1 مشابهًا لاتجاه TNF. النتائج في الجسم الحي متوافقة مع نتائج الدراسات في المختبر. كان التعبير عن العامل العصبي المشتق من الدماغ (BDNF) في المجموعة المعالجة مشابهًا للمجموعة التي يسببها LPS (الشكل 5 د). ومع ذلك ، يمكن أن تشير هذه النتيجة إلى أن تحسين تنسيق الأطراف في فئران متلازمة باركنسون بواسطة الجسيمات الشحمية المحملة بـ PC-EGCG ناتج عن تقليل استجابة الالتهاب العصبي ، ولكن ليس عن طريق زيادة التعبير عن BDNF.

كما أنه يتناسب مع التقارير السابقة التي تشير إلى انخفاض إنتاج TNF- و NO عن طريق المعالجة المسبقة للفئران باستخدام EGCG (10 مجم / كجم) لمدة 24 ساعة والتحريض باستخدام LPS بعد 7 أيام مقارنةً بالفئران المعالجة بـ LPS ، وخلص إلى أن EGCG لديه تأثير علاجي محتمل للسمية العصبية التي يسببها LPS بسبب الحد من إطلاق TNF- و NO.

3. مناقشة

في هذه الدراسة ، تم اكتشاف أن نقاوة EGCG المستخرجة من الشاي الأخضر بلغت 90.5٪ ، وكان نشاط إزالة الجذور الحرة لـ EGCG أكثر شمولاً من 80٪ خلال 3 دقائق. كان يزداد بتركيز أعلى من EGCG أو وقت رد فعل أطول. كان حجم الجسيمات الشحمية PC-EGCG-VE- و PS-EGCG-VE 161.5 و 142.9 نانومتر ، والتي كانت أصغر من EGCG المحملة في كريات PLGA المجهرية [28] مع سيكلوديكسترين إضافي (يتراوح من 1-14 ميكرومتر) . كانت كفاءة تغليف PC-EGCG-VE-and PS-EGCG-VE-liposomes 60.2٪ و 76.8٪ على التوالي. أظهرت هذه النتائج أن الجسيمات الشحمية المحتوية على PS كانت أصغر وأكثر ثباتًا ولها كفاءة تغليف أعلى بسبب الشحن على PS وأدت إلى قوة طاردة بين الجسيمات الشحمية لتجنب التجميع.

كان للتعبير عن TNF- في الخلايا المعالجة مسبقًا بـ PS-EGCG- و PS-EGCG-VE-liposomes ثم المستحث بواسطة LPS فروق ذات دلالة إحصائية مقارنةً بالخلايا التي يسببها LPS ، ولوحظت نتائج مماثلة في المعالجة المسبقة لـ EGCG على LPS - ناتج عن TNF- تعبير في خلايا BV -2 [25] والضامة البشرية [26]. باختصار ، أظهر مورفولوجيا الخلية والتعبير عن TNF- للمجموعة التي عولجت بـ EGCG تأثير تثبيط للالتهاب الناجم عن LPS.

في هذه الدراسة ، يمكن أن تقلل المعالجة المسبقة لـ EGCG من إطلاق NO. تم التحقيق أيضًا في قمع أي إنتاج من خلايا BV المستحثة بـ LPS -2 عن طريق المعالجة المسبقة للكرات المجهرية PLGA المحملة بـ EGCG في دراستنا السابقة [28].

في هذه الدراسة ، يتم إنشاء متلازمة باركنسون في الفئران من الأضرار التي لحقت بمنطقة المادة السوداء أحادية الجانب التي يسببها LPS. نتيجة مهمة أخرى هي أنه من خلال التحليل الكمي الإحصائي ، يمكن للجسيمات الشحمية المحملة بـ EGCG أن تخفف من المتلازمة بسبب تلف منطقة نيجروزين أحادية الجانب من الدماغ المتوسط ​​في دماغ الفئران الناجم عن LPS في اختبار الدوران ، وإنتاج العوامل العصبية الالتهابية TNF- في المادة يمكن أيضًا تقليل منطقة nigra من دماغ الفئران بواسطة الجسيمات الشحمية المحملة بـ EGCG. تشير هذه الدراسة إلى أن تحسين تنسيق الأطراف والحد من التهاب الخلايا العصبية في متلازمة باركنسون التي يسببها LPS ناتج عن إعطاء الجسيمات الشحمية المحملة بـ EGCG محليًا ولكن ليس عن طريق زيادة التعبير عن BDNF. ومع ذلك ، فإن النتائج المضادة للالتهاب العصبي ضرورية لتأثير اعصاب [35]. يطلق تنشيط BV -2 العوامل المؤيدة للالتهابات ، والتي تعتبر سامة للأعصاب وتؤدي إلى تلف الخلايا. من خلال منع تنشيط BV -2 ، يوفر EGCG تأثيرًا وقائيًا للأعصاب. تشير بعض المعالجة اللاحقة لـ EGCG لتحسين التكاثر ، ومعدل البقاء ، والتمايز العصبي للخلايا الجذعية العصبية البالغة في التلفيف المسنن الناجم عن LPS إلى أن EGCG قد يكون عاملًا علاجيًا محتملًا للأمراض الالتهابية العصبية [27].

أظهرت دراسات الحرائك الدوائية السابقة أن PS الخارجي يمكن أن يعبر الحاجز الدموي الدماغي (BBB) ​​، حيث يبدو أن لديه تقارب مع منطقة ما تحت المهاد [6] ، وينتج عن تناوله عن طريق الفم مستويات الذروة في 1-4 ساعات. بالإضافة إلى ذلك ، وجد أن الجسيمات الشحمية المحتوية على PS تحاكي الخلايا المبرمج لتعزيز إفراز الوسطاء المضاد للالتهابات ، مثل تحويل عامل النمو - 1 (TGF - 1) (لتقليل NO الناتج من الضامة) [36] والبروستاغلاندين E2 (PGE2) بواسطة الخلايا الضامة والخلايا الدبقية الصغيرة في المختبر [6،37] ، كما أنها تعزز التخفيف من الالتهاب في الجسم الحي [38]. وفقًا لذلك ، تتميز الجسيمات الشحمية المحتوية على PS التي تحتوي على EGCG والتي تم توضيحها في هذه الدراسة بميزة حجم الجسيمات الأصغر ، وكفاءة التغليف العالية ، وتثبيط تنشيط متلازمة باركنسون في كل من الخلايا الدبقية الصغيرة وفي نموذج الفئران Vivo ، مما يدل على تحسين الوظيفة المضادة للالتهابات و حماية الأعصاب.

القيد هو أن دراستنا أجريت مع بعض التحليلات المفقودة ، كما في حالة تأثير الحماية العصبية ، ولم يتم التحقيق في تلطيخ NeuN. قمنا أيضًا بتحليل BDNF فقط كعامل تغذوي عصبي. FGF2 و IGF2 هما أيضًا من العوامل التغذوية العصبية التي يجب أخذها في الاعتبار [39].

5. الاستنتاجات

لتحسين التوافر الحيوي الفموي المنخفض لمضادات الاكسدة ، تم تحميل EGCG في الجسيمات الشحمية في هذه الدراسة. لقد وجد أن الجسيمات الشحمية المحتوية على PS كانت أصغر وأكثر استقرارًا. لديها كفاءة تغليف أعلى ، وإضافة فيتامين E يمكن أن تحمي EGCG من الأكسدة وتحسن كفاءة التغليف. في الدراسة المختبرية ، تم تقليل تعبيرات إنتاج TNF- و NO من خلايا BV -2 بعد المعالجة المسبقة للجسيمات الشحمية المحملة بـ EGCG على خلايا BV المستحثة بـ LPS -2. لذلك ، لعبت الجسيمات الشحمية المحملة بـ EGCG دورًا أساسيًا في الاستجابة الالتهابية العصبية كمثبط. كانت الآثار المفيدة هي منع الخلايا من موت الخلايا المبرمج في التفاعلات الالتهابية العصبية.

في دراسة في الجسم الحي ، تم تحسين متلازمة باركنسون في الفئران التي يسببها LPS إلى منطقة مادة الدماغ المتوسط ​​أحادية الجانب. تم تثبيط آلية الالتهاب العصبي ، بما في ذلك إفراز TNF ، عن طريق المعالجة اللاحقة للجسيمات الشحمية المحملة بـ EGCG. لقد أثبتنا أن EGCG سيكون مرشحًا أكثر قيمة لعلاج الأمراض التنكسية العصبية عن طريق تخفيف الالتهاب في الدماغ. يجب أن يركز التحقيق اللاحق على المسارات الالتهابية باستخدام متعقب الجسيمات لتتبع مدخل الجسيمات الشحمية في الخلية وإطلاق EGCG من الجسيم الشحمي.

مراجع

1 لول ، أنا ؛ منع تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة ML وتنكس عصبي مزمن. العلاج العصبي 2010 ، 7 ، 354–365. [CrossRef]

2. إكدال ، سي ؛ Kokaia ، Z. ؛ Lindvall ، O. التهاب الدماغ وتكوين الخلايا العصبية عند البالغين: الدور المزدوج للخلايا الدبقية الصغيرة. علم الأعصاب 2009 ، 158 ، 1021-1029. [CrossRef] [PubMed]

3. ويسليدر ، ر. نهرندورف ، م. Pittet ، MJ التصوير الضامة مع الجسيمات النانوية. نات. ماطر. 2014 ، 13 ، 125-138. [CrossRef]

4. Papageorgiou، IE؛ فيتاني ، AF ؛ لوين ، أ. هاينمان ، يو. كان ، أو. التنشيط الواسع للخلايا الدبقية الدبقية في قرن آمون من الفئران المصابة بالصرع المزمن يرتبط جزئيًا فقط بالتنكس العصبي. هيكل الدماغ. Funct. 2015 ، 220 ، 2423-2439. [CrossRef] [PubMed]

5. دوتا ، ج. تشانغ ، ب. ليو ، ب. النموذج الحيواني لمرض عديدات السكاريد الشحمية باركنسون: الدراسات الآلية واكتشاف الأدوية. فوندام. كلين. فارماكول. 2008 ، 22 ، 453-464. [CrossRef] [PubMed]

6 - أوتسوكا ، م. تسوتشيا ، س. أراماكي ، واي. مشاركة ERK ، كيناز MAP ، في إنتاج TGF- بواسطة الضامة المعالجة بالجسيمات الشحمية المكونة من فوسفاتيديل سيرين. بيوتشيم. بيوفيز. الدقة. كومون. 2004 ، 324 ، 1400-1405. [CrossRef]

7. Li، R .؛ هوانغ ، واي جي ؛ فانغ ، د. لو ، W.-D. (-) - يثبط Epigallocatechin gallate التنشيط الناجم عن عديد السكاريد الدهني ويحمي من إصابة الخلايا العصبية الدوبامينية الناتجة عن الالتهاب. J. نيوروسسي. الدقة. 2004 ، 78 ، 723-731. [CrossRef]

8. ليو ، ج. هونغ ، زي ؛ دينغ ، ياء ؛ ليو ، ياء ؛ تشانغ ، ياء ؛ تشن ، س.الإفراز السائد للإنزيمات الليزوزومية بواسطة الخلايا الدبقية الصغيرة في الفئران حديثي الولادة بعد علاج LPS الذي كشفت عنه الدراسات البروتينية. J. بروتيوم الدقة. 2008 ، 7 ، 2033-2049. [CrossRef]

9. تشو ، H.-S. كيم ، س. لي ، S.-Y. ؛ بارك ، جا. كيم ، S.-J. ؛ Chun ، HS تأثير وقائي لمكون الشاي الأخضر ، L-theanine على موت الخلايا العصبية الناجم عن السموم البيئية. علم السموم العصبية 2008 ، 29 ، 656-662. [CrossRef]

10. مارياني ، مم ؛ كيليان ، T. Microglia في الأمراض المعدية للجهاز العصبي المركزي. J. Neuroimmune فارماكول. 2009 ، 4 ، 448-461. [CrossRef]

11- سانتياغو ، جمهورية مقدونيا ؛ باربييرو ، ياء ؛ ليما ، مم ؛ دومبروفسكي ، بنسلفانيا ؛ أندرياتيني ، ر. ترتبط التغييرات الحيوية الشبيهة بالاكتئاب التي تحدثها نماذج MPTP الداخلية و 6- OHDA و LPS والروتينون لمرض باركنسون في الغالب بالسيروتونين والدوبامين. بروغ. Neuro-Psychopharmacol. بيول. الطب النفسي 2010 ، 34 ، 1104-1114. [CrossRef] [PubMed]

12. ليو م. Bing ، G. نماذج حيوانية من عديدات السكاريد الشحمية لمرض باركنسون. ديس باركنسون. 2011 ، 2011 ، 327089. [CrossRef] [PubMed]

13. Wu، D.-C .؛ تايزمان ، ص. تيو ، ك. فيلا م. جاكسون لويس ف. إيشيروبولوس ، هـ. يتوسط Przedbourski، S. NADPH أوكسيديز الإجهاد التأكسدي في 1- الميثيل -4- فينيل -1 ، 2 ، 3 ، 6- نموذج رباعي هيدروبيريدين لمرض باركنسون. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 2003 ، 100 ، 6145–6150. [CrossRef]

14. الرحمن أنا. بيسواس ، كورونا كيركهام ، السلطة الفلسطينية تنظيم الالتهاب وإشارات الأكسدة والاختزال بواسطة البوليفينول الغذائي. بيوتشيم. فارماكول. 2006 ، 72 ، 1439-1452. [CrossRef] [PubMed]

15. فالكو ، م. رودس ، سي. مونكول ، ياء ؛ إيزاكوفيتش ، م. Mazur ، M. الجذور الحرة والمعادن ومضادات الأكسدة في الأكسدة التي يسببها السرطان. تشيم. بيول. تفاعل. 2006 ، 160 ، 1-40. [CrossRef]

16. أكيد ، Y.-J. ؛ تشون ، ك. تشا ، H.-H. ؛ هان ، SS ؛ كيوم ، Y.-S. ؛ بارك ، ك.ك. لي ، إس إس الآليات الجزيئية الكامنة وراء الأنشطة الوقائية الكيميائية للمواد الكيميائية النباتية المضادة للالتهابات: التنظيم الخافض لـ COX -2 و iNOS من خلال قمع تنشيط NF-B. موتات. الدقة. فوندام. مول. ميكانيكي. الطفرات 2001 ، 480 ، 243-268. [CrossRef]

17. رينو ، ياء ؛ نابافي ، سادس ؛ داجليا ، م. Nabavi ، SM ؛ مارتينولي ، M.-G. Epigallocatechin -3- gallate ، جزيء واعد لمرض باركنسون؟ تجديد Res. 2015، 18، 257–269. [CrossRef]

18. يانغ ، جي إي ؛ رو ، كنتاكي ؛ لي ، س. لي ، ج ت. بارك ، JH ؛ باك ، جي ؛ Paik ، SR EGCG بوساطة الحماية من تمزق الغشاء والسمية الخلوية التي تسببها Oligomerof -Synuclein. علوم. مندوب. 2017، 7، 1–10. [CrossRef]

19. Bieschke، J.؛ روس ، ياء ؛ فريدريش ، ر. إيرنهوفر ، دي ؛ Wobst ، H. Neugebauer ، K. Wanker ، EE EGCG يعيد تشكيل ألياف السينوكلين والأميلويد الناضجة ويقلل من السمية الخلوية. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 2010 ، 107 ، 7710–7715. [CrossRef]

20. يوشيدا، دبليو. كوباياشي ، ن. ساساكي ، واي. إكيبوكورو ، ك. Sode، K. الببتيد الجزئي للسينوكلين المعدل بمثبطات الجزيئات الصغيرة على وجه التحديد يمنع الرجفان النشواني للسينوكلين. كثافة العمليات J. مول. علوم. 2013 ، 14 ، 2590-2600. [CrossRef] [PubMed]

21. شو ، واي. تشانغ ، واي. كوان ، زي. وونغ ، دبليو. قوه ، ياء ؛ تشانغ ، ر. يانغ ، س. داي ، ر. ماكجير ، بل ؛ Qing، H. Epigallocatechin gallate (EGCG) يمنع تراكم alpha-synuclein: عامل محتمل لمرض باركنسون. نيوروتشيم. الدقة. 2016 ، 41 ، 2788-2796. [CrossRef] [PubMed]

22. Li، Y .؛ تشين ، زي. لو ، زي. يانغ ، س. ليو ، إل. جيانغ ، زي. تشانغ ، إل. تشانغ ، العاشر ؛ تشينغ ، هـ. دواء نانوي ثنائي الهدف "مسبب للإدمان على الخلايا" يمكن تتبعه لعلاج مرض باركنسون عبر مسار flotillins. Theranostics 2018، 8، 5469. [CrossRef]

23. شو ، س. لانجلي ، م. Kanthasamy، AG؛ Reddy ، MB Epigallocatechin gallate له تأثير عصبي في نموذج فأر لمرض باركنسون. نوتر. 2017 ، 147 ، 1926-1931. [CrossRef] [PubMed]

24. Zhou، T .؛ تشو ، م. Liang، Z. (-) - ينظم Epigallocatechin -3- gallate المناعة المحيطية في نموذج الفئران الناجم عن MPTP لمرض باركنسون. مول. ميد. ممثل. 2018، 17، 4883–4888. [CrossRef]

25. بارك ، إي. منع Chun، HS الشاي الأخضر بوليفينول Epigallocatechin gallate (EGCG) من تنشيط الخلايا الدبقية الدبقية التي يسببها LPS -2. J. الحياة علوم. 2016 ، 26 ، 640-645. [CrossRef]

26. Liu، J.-B .؛ تشو ، إل. وانغ ، Y.-Z. ؛ وانغ ، العاشر ؛ تشو ، واي. هو ، دبليو زي ؛ لي ، ج. النشاط الوقائي للأعصاب لـ () -Epigallocatechin Gallate ضد السمية الخلوية بوساطة عديدات السكاريد الدهنية. J. إمونول. الدقة. 2016، 2016، 4962351. [CrossRef] [PubMed]

27. Seong، K.-J .؛ لي ، H.-G. ؛ كوك ، MS ؛ كو ، إتش- م. جونغ ، جيه واي. كيم ، دبليو- جيه. ينقذ Epigallocatechin -3- gallate تكوين الخلايا العصبية الحُصَينية عند البالغين الذين يعانون من ضعف LPS عن طريق كبت مسار إشارات TLR 4- NF-κB في الفئران. الكورية J. Physiol. فارماكول. 2016 ، 20 ، 41. [CrossRef] [PubMed]

28. Cheng، C.-Y .؛ فو ، Q.-H. ؛ وو ، X.-Y. ؛ تشين ، T.-Y. ؛ تشين ، سي إم. فانغ ، P.-H. ؛ لين ، Y.-C. ؛ هسيه ، م. الكرات المجهرية PLGA المحملة بمركبات سيكلودكسترين من epigallocatechin -3- غاليت للخصائص المضادة للالتهابات في الخلايا الدبقية الدبقية المنشطة. البوليمرات 2018 ، 10 ، 519. [CrossRef]

29. Buszello، K. هارنيش ، إس. مولر ، ر. Müller، B. تأثير الأحماض الدهنية القلوية على خصائص واستقرار مستحلبات O / W بالحقن المعدلة باستخدام Solutol HS 15®. يورو. J. فارم. بيوفارم. 2000، 49، 143–149. [CrossRef]

30. شاشي ، ك. ساتيندر ، ك. Bharat ، P. مراجعة كاملة على: الجسيمات الشحمية. كثافة العمليات الدقة. J. فارم. 2012 ، 3 ، 10-16.

31. Wang، W.-Y .؛ تان ، M.-S. ؛ Yu ، J.-T. ؛ تان ، ل. دور السيتوكينات المؤيدة للالتهابات المنبعثة من الخلايا الدبقية الصغيرة في مرض الزهايمر. آن. ترجمة. ميد. 2015 ، 3. [CrossRef]

32. Smith، JA؛ داس ، أ. راي ، SK ؛ بانيك ، NL دور السيتوكينات المؤيدة للالتهابات المنبعثة من الخلايا الدبقية الصغيرة في الأمراض التنكسية العصبية. Res الدماغ. ثور. 2012 ، 87 ، 10-20. [CrossRef] [PubMed]

33. Hu، H .؛ لي ، زي. تشو ، العاشر ؛ لين ، ر. يقلل Chen ، L. Salidroside من تنقل الخلايا عبر إشارات NF-κB و MAPK في الخلايا الدبقية الصغيرة BV2 المستحثة بـ LPS. دليل. البديل التكميلي القائم. ميد. 2014 ، 2014 ، 383821. [CrossRef]

34. Tambuyzer، BR؛ Ponsaerts، P.؛ Nouwen ، EJ Microglia: حراس بوابات مناعة الجهاز العصبي المركزي. J. ليوكوك. بيول. 2009 ، 85 ، 352-370. [CrossRef] [PubMed]

35. Lee، D.-S. ؛ جيونج ، ج. يوفر Butein تأثيرات واقية للأعصاب ومضادة للالتهابات العصبية من خلال تعبير Haem Oxygenase 1 المعتمد على Nrf2 / ARE عن طريق تنشيط مسار PI3K / Akt. Br. فارماكول. 2016 ، 173 ، 2894-2909. [CrossRef]

36. ماتسونو ، ر. أراماكي ، واي. Tsuchiya ، S. مشاركة TGF- في التأثيرات المثبطة للجسيمات الشحمية سالبة الشحنة على إنتاج أكسيد النيتريك بواسطة الضامة المحفزة باستخدام LPS. بيوتشيم. بيوفيز. الدقة. كومون. 2001 ، 281 ، 614-620. [CrossRef] [PubMed]

37. Zhang، J.؛ فوجي ، إس. وو ، زي. هاشيوكا ، إس. تاناكا ، واي. شيراتسوشي ، أ. ناكانيشي ، واي. ناكانيشي ، هـ. مشاركة كوكس -1 وتركيبات البروستاغلاندين E المنتظمة في إنتاج البروستاجلاندين E2 الناجم عن فوسفاتيديل سيرين بواسطة الخلايا الدبقية الصغيرة. J. نيورويمونول. 2006 ، 172 ، 112-120. [CrossRef]

38. Ramos، GC؛ فرنانديز ، د. تشارو ، كونيتيكت ؛ سوزا ، د. تيكسيرا ، مم ؛ Assreuy ، J. تقليد Apoptotic: تقلل الجسيمات الشحمية الفوسفاتيديل سيرين الالتهاب من خلال تنشيط مستقبلات تنشيط البيروكسيسوم (PPARs) في الجسم الحي. Br. فارماكول. 2007 ، 151 ، 844-850. [CrossRef]

39. Abe، N.؛ نيشيهارا ، تي. يوروزويا ، تي. Tanaka ، J. Microglia and Macrophages in the Pathological Central and Peripheral Nervous Systems. خلايا 2020، 9، 2132. [CrossRef] [PubMed]

40. Chen، C.-H.؛ هسيه ، م. Ho ، Y.-N. ؛ هوانغ ، سي إم. لي ، جي إس. يانغ ، سي واي. تشانغ ، واي. تعزيز نفاذية جلد الكاتشين عبر غشاء هيدروكسي السليلوز المصنوع حديثًا MPEG-PCL-graft -2-. عضو. علوم. 2011 ، 371 ، 134-140. [CrossRef]

41. Parthasarathy، S. بن عزيزي ج. راماناثان ، إس. إسماعيل ، ش. ساسدران ، إس. سعيد ، ميم ؛ منصور ، SM تقييم الأنشطة المضادة للأكسدة والمضادة للبكتيريا للمستخلصات المائية والميثانولية والقلويد من أوراق Mitragyna speciosa (عائلة Rubiaceae). جزيئات 2009 ، 14 ، 3964–3974. [CrossRef] [PubMed]

42. Herrera، D .؛ مولينا ، أ. بوهلين ، ك. أمراض اللثة وارتباطها بمرض تصلب الشرايين. طب اللثة 2000 2020 ، 83 ، 66-89. [CrossRef] [PubMed]

43- Batista، CRA؛ جوميز ، GF ؛ كانديلاريو جليل ، إي. فيبيش ، BL ؛ دي أوليفيرا ، التهاب الأعصاب الناجم عن عديد السكاريد الدهني ACP كجسر لفهم التنكس العصبي. كثافة العمليات J. مول. علوم. 2019 ، 20 ، 2293. [CrossRef]

44- كريس ، أنا ؛ بيرت ، د. Snyder ، SH تعزيز ارتباط مستقبلات الدوبامين يصاحب الحساسية المفرطة السلوكية الناجمة عن الآفات. علم 1977 ، 197 ، 596-598. [CrossRef] [PubMed]