دراسة تجريبية حول التأثير الوقائي لمجموع الجليكوسيدات القاتلة (CTG) على إصابة إعادة التروية الكلوية الناتجة عن نقص تروية الدم
Mar 09, 2022
جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com
ZHU Jun، ZHAO Xi
الملخص:الهدف: إنشاء نموذج الفئران للصدمة النزفية والإنعاش وذلك لمراقبة التأثير الوقائي لـcistanche مجموع الجليكوسيدات(CTG)على الكلىإصابة نقص تروية ضخه. تم اختيار طريقة الجرذان SD بشكل عشوائي في مجموعة العمليات الزائفة ، ومجموعة الصدمة والإنعاش (مجموعة التجربة) ، ومجموعة CTG ، مع 10 فئران في كل واحدة. بعد النمذجة ، تلقت الفئران في مجموعة CTG الحقن داخل الصفاق لـ CTG 400 مجم / كجم. في المجموعة التجريبية ومجموعة الشام تم حقن محلول ملحي فيزيائي 3 مل. تم تحديد مستويات Cr و BUN و Cys-C للكشف عن وظائف الكلى في كل مجموعة. تم استخدام قياس التدفق الخلوي للكشف عن معدل موت الخلايا المبرمج في الخلايا الكلوية. تم استخدام ELISA للكشف عن تعبير XIAP في أنسجة الكلى. النتائج مقارنة بمجموعة التجربة ، يبدو أن مستويات Cr و BUN و Cys-C انخفضت فيCTGالمجموعة (P ＜ {0}. 01) ، وانخفض موت الخلايا المبرمج (P 0.01). تحسن CTG بشكل ملحوظ تعبير XIAP (P.<0.05). conclusion="">CTGيجلب التأثير الوقائي علىضخه نقص ترويةإصابة الكلى في الفئران ، والتي من المحتمل أن تكون مرتبطة بتعزيز تعبير XIAP.
【الكلمات الرئيسية】 الكلى. إصابة نقص تروية ضخه. Cistanche توتال جليكوسيدات ؛ XIAP ؛ موت الخلايا المبرمج
إصابة نقص التروية وضخه (I / R)هي ظاهرة مرضية فسيولوجية شائعة تتمثل في تلف الكلى في عملية الصدمة النزفية والصدمات الشديدة وزرع الكلى وجراحة الأورام الكلوية. أظهرت الدراسات أن موت الخلايا المبرمج هو رابط مهم في تلف وظائف الكلى الناجم عن إصابة I / R [1]. المانع المرتبط بالكروموسوم X لبروتين الإستماتة (XIAP) هو أحد أقوى مثبطات الإستماتة الذاتية الموجودة حتى الآن [2]. هناك القليل من الدراسات حول التأثير المضاد للاستماتة لـ XIAP في الأنسجة الكلوية بعد إصابة I / R.Cistanche مجموع الجليكوسيدات(CTG) من قائمة مركبات جليكوسيد فينيليثانول المستخرجة منهاسيستانشلها وظائف بيولوجية متنوعة. هناك القليل من الدراسات حول الحماية الكلوية بعد إصابة I / R. في هذه التجربة ، تم إنشاء نموذج الفئران للإنعاش بالصدمة النزفية ، وتم إنشاء نموذج إصابة I / R النظامي لاستكشاف التأثير الوقائي للمعالجة المسبقة لـ CTG على الكلى من إصابة I / R واستكشاف آليتها المحتملة.
آثار cistanche: منعإصابة نقص التروية وضخه (I / R)
1 المواد والأساليب
1.1 المواد التجريبية
1.1.1 حيوانات المختبر 30 من ذكور جرذان SD الصحية من الدرجة النظيفة ، مقدمة من المركز التجريبي لجامعة شنغهاي للطب الصيني التقليدي ، رقم شهادة الحيوان: SYXK (شنغهاي) 2009-0069 ، وزن الجسم (320 ± 30) جم.
1.1.2 كاشف تجريبيCTG(تم شراؤها من Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co.، Ltd. ، رقم الدُفعة: 20081516) ؛ بنتوباربيتال الصوديوم (رقم الدُفعة: P3761) ، بروبيديوم يوديد (PI) ، رودامين 123 (كلاهما تم شراؤه (من سيجما ، الولايات المتحدة الأمريكية) ؛ طقم تحديد الفئران XIAP ELISA Kit (تم شراؤه من Shanghai Kemin Biotechnology Co.، Ltd. ، رقم الدُفعة CSB-ELO26172MO) .
1.1.3 قارئ الصفيحة الدقيقة لأداة المختبر (شركة American Thermo) ؛ كاشف فسيولوجي متعدد المعلمات (تم شراؤه من شركة NIHON KOHDEN ، اليابان) ؛ مقياس التدفق الخلوي (تم شراؤه من شركة Becton-Dickinson ، الولايات المتحدة الأمريكية) ؛ 24 G trocar (شركة Shandong Jierui Medical Equipment Company).
1.2 الطرق التجريبية
تم صيام 1.2.1 تحضير فئران نموذجية حيوانية SD قبل 12 ساعة من التجربة وتم تخديرها عن طريق الحقن داخل الصفاق من بنتوباربيتال الصوديوم (50 مجم / كجم). تم تثبيت الفئران في وضع الاستلقاء ، وتم إجراء شق 3 سم في أسفل البطن الأيسر وفصلهم. في الشريان الفخذي ، يتم إدخال مبزل 24G ، ويتم توصيل جهاز اختبار فسيولوجي متعدد المعلمات ، ويتم حقن محقنة 20 مل بالهيبارين ، وينخفض ضغط الدم إلى 40 مم زئبق. ينخفض ضغط الدم إلى 40 ملم زئبق. يعتبر أن الصدمة قد بدأت ، وضغط الدم مستمر لمدة 90 دقيقة. هو (13 ± 3) مل ، وبعد ذلك يتم إرجاع الدم الذاتي في المحقنة ببطء. يستغرق الأمر حوالي 30 دقيقة لاستعادة ضغط الدم لأكثر من 90 بالمائة من القيمة الأساسية. يعتبر أن الإنعاش ناجح [3]. اسحب إبرة المبزل واربط الشريان الفخذ وخياطة الشق. بعد أن استيقظت الفئران ، أعيدوا إلى القفص للمراقبة ، وكان لديهم حرية الوصول إلى الطعام والماء. بعد 24 ساعة من الإنعاش ، تم تخدير الفئران ببنتوباربيتال الصوديوم (50 مجم / كجم) عن طريق الحقن داخل الصفاق ، وبضع البطن ، وتم جمع 5 مل من الدم من الوريد الأجوف السفلي. قُتلت الفئران على الفور ، واستُخرجت الكليتان اليمنى واليسرى لاستخدامهما.
1.2.2 تجميع الحيوانات وإعطائها تم تقسيم 30 جرذًا بشكل عشوائي إلى مجموعة الجراحة الزائفة ، ومجموعة الإنعاش بالصدمة (المجموعة التجريبية) ، ومجموعة CTG ، مع 10 جرذان في كل مجموعة.
تم حقن المجموعة التجريبية داخل الصفاق بـ 3 مل من المحلول الملحي العادي قبل ساعتين من إراقة الدم. في الCTGتم إعطاء CTG قبل ساعتين من إراقة دم الفئران ، وتم حقن الجرعة في التجويف البطني بجرعة 400 مجم / كجم. خضعت مجموعة العمليات الزائفة فقط للتخدير ، وبضع البطن وفصل مبزل الشريان الفخذي ، ووضع شقوق خياطة ، وما إلى ذلك ، ولم يتم إجراء سفك للدم وإنعاش ، والباقي كانوا نفس المجموعة التجريبية.
1.3 مؤشرات وأساليب الاختبار
1.3.1 يتم تحديد كرياتينين الدم (Cr) ونتروجين اليوريا (BUN) وسيستاتين C Cr و BUN و cystatin C بواسطة مختبر المستشفى الخاص بنا. Cystatin C هو علامة داخلية للتغيرات في معدل الترشيح الكبيبي. عند ضعف وظائف الكلى ، ينخفض معدل الترشيح الكبيبي ويمكن أن يزيد تركيز السيستاتين C في الدم أكثر من 10 مرات. الدقة التشخيصية للسيستاتين C أفضل بكثير من دقة الكرياتينين في الدم.
1.3.2 تحديد معدل موت الخلايا المبرمج تم استخدام قياس التدفق الخلوي للكشف عن معدل موت الخلايا المبرمج لخلايا الكلى. خذ الكلية واقطعها بشفرة ، أضف القليل من برنامج تلفزيوني وانقلها إلى أنبوب اختبار. أضف 0. 3 بالمائة من التربسين للهضم في حمام مائي 37 درجة ، واحتضنه لمدة دقيقتين 0. عندما تتعكر المادة الموجودة في أنبوب الاختبار ، أضف ضعف PBS لإيقاف الهضم ، وقم بالتصفية باستخدام شبكة نايلون شبكية 3 0 0 ، وتخلص من الشوائب ، واستخدم جهاز طرد مركزيًا بدرجة حرارة منخفضة عند 1500 جم / ثانية من أجل 5 دقائق ، وتخلص من المادة الطافية ، واضبط تركيز الخلية إلى 1 × 106 ~ 1.5 × 106 / مل ، وتناول 0.4 مل من معلق الخلية أعلاه ، وأضف 10 ميكرولتر / مل رودامين 123 0 ．4 مل ، واحتضنها في حمام مائي بدرجة 37 محمي من الضوء ، قم بغطاء أنبوب الاختبار ، واشطفه باستخدام PBS مرتين بعد 30 دقيقة ، ثم جهاز الطرد المركزي عند 1500 جم / ثانية لمدة 5 دقائق ، وتخلص من المادة الطافية ، واشطفها مرة أخرى بنفس الطريقة. أضف 0.4 مل من PI ، وصمة عار لمدة 15 دقيقة ، وتحقق من النسبة المئوية للخلايا الطبيعية والنخرية والخلايا الأبوطوزية في الكلى. وفقًا لتقارب هاتين الصبغتين في أنواع مختلفة من الخلايا ، من المعروف أن الخلايا الملونة فقط هي خلايا ميتة ، والخلايا الملونة فقط Rhodamin123 هي خلايا حية ، وكلا الخلايا الملونة هي خلايا موت الخلايا المبرمج.
1.3.3 تم استخدام المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم (ELISA) للكشف عن تعبير XI-AP في أنسجة الكلى لدى الفئران. تم أخذ الكلى من كل مجموعة ، وعولجت أنسجة الكلى الطازجة بمحلول الأنسجة. جهاز طرد مركزي بسرعة 1500 جم / ثانية في جهاز طرد مركزي منخفض الحرارة لمدة 5 دقائق. خذ المادة الطافية وقم بتشغيلها وفقًا لتعليمات XI-AP ELISA Kit. Shanghai Jiaoda Fenghe Technology Co.، Ltd. مسؤولة عن الاختبار.
1.4 المعالجة الإحصائية
تم تحليل جميع البيانات إحصائيًا باستخدام برنامج SPSS17. 0 ، وتم التعبير عن البيانات على أنها متوسط ± الانحراف المعياري (x ± s) ، و P<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">
cistanche مجموع الجليكوسيدات
2 النتائج
2.1 كانت مؤشرات وظائف الكلى Cr و BUN و Cystatin C مقارنة بين Cr و BUN و Cystatin C في المجموعة التجريبية أعلى بكثير من تلك الموجودة في مجموعة العمليات الصورية (P<0.01), indicating="" that="" the="" rat="" kidney="" i/r="" model="" was="" prepared="">
مقارنة بالمجموعة التجريبية ، فإن قيم Cr و BUN و Cystatin C فيCTGتم تخفيض المجموعة بشكل كبير ، وكان الفرق ذا دلالة إحصائية (P<0.01). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">
الجدول 1 مقارنة بين فهارس وظائف الكلى Cr و BUN و Cystatin C للفئران في كل مجموعة (x ± s)
ملاحظة: بالمقارنة مع مجموعة العمليات الصورية ، ف {{0}. 01؛ مقارنة مع المجموعة التجريبية ، bP ＜ 0.01
2.2 معدل موت الخلايا المبرمج في الكلى والتعبير عن XIAP في الأنسجة الكلوية. فقط عدد قليل من الخلايا في الأنسجة الكلوية لمجموعة العمليات الوهمية تخضع لموت الخلايا المبرمج.
زاد عدد حالات الاستماتة في المجموعة التجريبية معنويا ، وكان الفرق ذو دلالة إحصائية مقارنة بمجموعة العمليات الصورية (P<0.01); the="" number="" of="" apoptosis="" in="" the="" ctg="" group="" was="" decreased="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01)>
كان لمجموعة العمليات الصورية تعبير XIAP ضعيف فقط ، بينما كان لدى المجموعة التجريبية زيادة كبيرة في تعبير XIAP (P<0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">
الجدول 2 مقارنة بين معدل موت الخلايا المبرمج والتعبير XIAP لخلايا الكلى الفئران في كل مجموعة (x ± s)
ملاحظة: بالمقارنة مع مجموعة العمليات الصورية ، aP ＜ {0}}. 01 ؛ بالمقارنة مع المجموعة التجريبية ، ب P 0. 05، cP<0.>
3 مناقشة
آلية إصابة الكلى I / R معقدة للغاية. إنها عملية مرضية تحدث من خلال العديد من المسارات تحت تأثير عوامل مختلفة ، مثل الحمل الزائد لأيون الكالسيوم ، وتلف بيروكسيد الدهون ، وموت الخلايا المبرمج ، والنخر ، ومن بينها موت الخلايا المبرمج المعتمد على Caspase هو أحد الأشكال الرئيسية للطلاء الأنبوبي الكلوي تلف الخلايا الناجم عن إصابة الكلى I / R [4]. مثبط عائلة بروتين موت الخلايا المبرمج (IAP) هو مثبط الكاسبيز الوحيد الموجود في خلايا الثدييات حتى الآن ، والذي يمكن أن يمنع بشكل فعال حدوث موت الخلايا المبرمج. XIAP هو أقوى عضو مثبط للكاسبيز في عائلة IAP ، والذي يمكن أن يمنع موت الخلايا المبرمج الناتج عن مجموعة متنوعة من المحفزات المرضية ولعب تأثير وقائي على الأعضاء التالفة [5].
في الوقت الحاضر ، فإن طريقة إنشاء نماذج حيوانية لإصابة كلوي I / R هي في الغالب لإزالة جانب واحد من الكلى وشد الجانب الآخر من عنيق الكلى أو الشريان الكلوي [6] لمحاكاة حالة زرع الكلى. استخدم المؤلف نموذج الصدمة / الإنعاش النزفي في هذه الدراسة ، وهو أقرب إلى العملية الفيزيولوجية المرضية لنقص التروية الجهازية - إعادة التروية التي تحدث في الصدمة السريرية الصادمة. في هذه التجربة ، الدم BUN و Cr و cystatin في فئران SD تزداد كمية C بشكل كبير وتضعف وظائف الكلى بشدة. إنه نموذج حيواني مثالي لدراسة إصابة الكلى I / R.
CTG هو عنصر طبي مهم في الطب الصيني التقليديسيستانش. سيستانش، وهو دافئ بطبيعته ، حلو ومالح ، ينتمي إلى خط الطول في الكلى والأمعاء الغليظة وكان موجودًا في الأصل في Shennong's Materia Medica. يقول "بن جينغ": "يحافظ على خمس أعمال وسبع إصابات ، ويغذي الوسط ، ويغذي الأعضاء الداخلية الخمسة ، ويقوي الين ، ويغذي الجوهر والشي". ايضا."سيستانشتم استخدامه في بلدي منذ ألفي عام. وهي تحتل المرتبة الأولى في تركيبات زيادة القوة في الماضي ، والثانية بعد الجينسنغ في الصيغ المغذية.سيستانشيستطيعتحسين الوظيفة الجنسية ، وتنظيم الغدد الصماء العصبية ، وتحسين وظيفة المناعة في الجسم. مضادات الأكسدة ، تعزز عملية التمثيل الغذائي للمواد ، وتحمي عضلة القلب الإقفارية وغيرها من الوظائف. كمكون طبي رئيسي لـسيستانش، CTG لديها العديد من الوظائف. البحث في الدماغنقص تروية ضخهنموذج
لقد وجدت الدراسات ذلكCTGيمكن أن تقلل من الأحماض الأمينية المثيرة في أنسجة المخ بعد نقص التروية وضخه وحماية أنسجة المخ من الفئران SD [7]. CTG له تأثير مضاد للأكسدة على أنسجة الفئران وله تأثير وقائي معين على نقص الأكسجة الدماغي الحاد في الفئران وتلف عضلة القلب في الفئران [8]. يمكن أن تحسن CTG بشكل ملحوظ السلوك العصبي لفئران نموذج باركنسون وتمنع الانخفاض في عدد الخلايا العصبية الدوبامين في المادة السوداء [9]. من خلال تعزيز نشاط إنزيمات الكسح الجذور الحرة ، ومنع بيروكسيد الدهون ، وتثبيط ترسب الببتيد الأميلويد في الدماغ ، وتثبيط موت الخلايا المبرمج لخلايا الدماغ ، زادت CTG بشكل ملحوظ الفئران التي يسببها مرض الزهايمر في التعلم والذاكرة [10]. أظهرت هذه الدراسة أنه بعد تطبيق المعالجة المسبقة لـ CTG ، انخفض محتوى BUN و Cr و cystatin C في جرذان SD بشكل ملحوظ ، وتم تقليل تلف وظائف الكلى. زاد CTG من البروتين XIAP المثبط لموت الخلايا المبرمج في الأنسجة الكلوية لإصابة I / R وسد الخلايا. يلعب حدوث موت الخلايا المبرمج دورًا وقائيًا في إتلاف الكلى.
المراجع
[1] Cassis P، Azzollini N، Solini S، et al. كل من داربيبوتين ألفا وإريثروبويتين الكرباميل يمنعان ضعف الكسب غير المشروع بسبب نقص التروية / ضخه في الجرذان ［J］． زرع ، 2011 ، 92 (3): 271-279.
[2] West T ، Stump M ، Lodygensky G ، وآخرون. يؤدي نقص المانع المرتبط بـ X لبروتين موت الخلايا المبرمج إلى زيادة موت الخلايا المبرمج وفقدان الأنسجة بعد إصابة دماغ حديثي الولادة ［J］． ASN Neuro، 2009 ، 1 (1). معلومات التعريف الشخصية: e00004. دوى: 10. 10421AN20090005.
[3] فو X ، تيان إتش ، وانج د ، وآخرون. إصابات وفشل أعضاء متعددة ناجمة عن الصدمة وضخه بعد جروح ناجمة عن طلقات نارية ［J］． J Trauma، 1996، 40 (3 ملحق): S 135-139.
[4] Padanilam BJ. موت الخلايا الناجم عن إصابة الكلى الحادة: منظور على مساهمات موت الخلايا المبرمج والنخر ［J］． Am J Physiol Renal Physiol، 2003، 284 (4): F 608- F627.
[5] Galbán S، Hwang C، Rumble JM، et al. التأثيرات الواقية للخلايا لـ IAPs التي كشف عنها مضاد جزيء صغير ［J］． Biochem J، 2009، 417 (3): 765-771.
[6] وو جيان قوه ، تشانغ دان ، وو شين شنغ ، إلخ. إنشاء وتجربة نموذج إصابة الكلى الناجم عن نقص التروية وإعادة التروية الحادة في الفئران [J]. المعلومات الطبية: كتيب الجراحة ، 2007 ، 20 (12): 1103-1105.
[7] تشو تشنغ. آثار Cistanche Glycosides على الأحماض الأمينية المثيرة في أنسجة دماغ الجرذان بعد نقص التروية الدماغية وضخه [J]. Anhui Medicine، 2010، 14 (12): 1393 -1394.
[8] جوليا واي ، وانج إكس دبليو ، ووبولي إيه إس ، وآخرون. تأثير الحماية من إجمالي الجليكوسيدات من cistanche deserticola على نقص الأكسجين ［J］． Rep Chin Pharm، 2003، 20 (1): 73-76.
[9] Li Wenwei و Yang Ru و Cai Dongfang وآخرون. التأثير الوقائي للجليكوزيدات الكلية للكيستانش على الخلايا العصبية الدوبامينية في المادة السوداء من الفئران النموذجية لمرض باركنسون MPTP
[10] Liu Fengxia ، Wang Xiaowen ، Luo Lan ، إلخ. تأثير وآلية إجمالي جليكوسيدات cistanche على التعلم والذاكرة لنموذج فأر مرض الزهايمر الناجم عن ببتيد اميلويد [J]. نشرة علم الأدوية الصينية ، 2006 ، 22 (5): 595-599.
