يمكن أن تؤدي مقتطفات من Cistanche Deserticola إلى استعداء المناعة وإطالة العمر الافتراضي في الفئران المعرضة للشيخوخة 8 (SAM-P8)

الرجاء التواصلoscar.xiao@wecistanche.comللمزيد من المعلومات

تم استخدام 8 سلاسل فرعية من الفئران المعرضة للشيخوخة (SAM-P8) ، والتي تم قبولها على نطاق واسع كنموذج حيواني لدراسة الأدوية المضادة للشيخوخة ومضادة للشيخوخة ، لفحص آثار المكملات الغذائية مع مقتطفات من Cistanche deserticola (ECD) والتي تم استخدامها على نطاق واسع في الطب الصيني التقليدي بسبب قدرته المتصورة على تعزيز وظيفة المناعة لدى كبار السن. عولجت الفئران الذكور SAM-P8 البالغة من العمر ثمانية أشهر باستخدام ECD عن طريق الإدارة الفموية اليومية لمدة 4 أسابيع. أظهرت النتائج أن المكملات الغذائية البالغة L50 مجم / كجم و 450 مجم / كجم من ECD يمكن أن تطيل من العمر الافتراضي المقاس بتحليل البقاء على قيد الحياة من Kaplan-Meier بطريقة تعتمد على الجرعة. تبين أن المكملات الغذائية لفئران SAM-P8 لمدة 4 أسابيع مع 100500 و 2500 ملغم / كغم من ECD تؤدي إلى زيادات كبيرة في كل من الخلايا التائية الساذجة والخلايا القاتلة الطبيعية في خلايا الدم والطحال. في المقابل ، انخفضت خلايا الذاكرة الطرفية التائية والسيتوكين المنبه للالتهاب ، IL -6 في مصل الدم ، انخفاضًا كبيرًا في الفئران التي تناولت 100 و 500 مجم / كجم من ECD يوميًا. بالإضافة إلى ذلك ، Sca -1 من الخلايا الموجبة ، وهي أسلاف معروفة لـساذجة المحيطيةتمت استعادة الخلايا التائية بالتوازي. توفر نتائجنا دعمًا تجريبيًا واضحًا لدراسات الملاحظة السريرية طويلة الأمد التي توضح ذلكسيستانشيمتلك Deserticola تأثيرات كبيرة في إطالة العمر الافتراضي ويشير إلى أن هذا يتحقق عن طريق العداءمناعة.

الرجاء الضغط هنا لمعرفة المزيد

1 المقدمة

سيستانشالصحراء، أحد أشهر الأدوية العشبية الصينية التقليدية / المنتجات الصحية ، وقد تم وصفه في عدد من الأدوية العشبية الصينية التاريخية على أنه يحتوي على خصائص مضادة للشيخوخة. وبالتالي ، فقد تم استخدامه على نطاق واسع في الصين لعلاج الاضطرابات المختلفة المرتبطة بالعمر بما في ذلك الخرف ، والعجز الجنسي ، والعقم ، والعدوى المزمنة ، واضطرابات تكوين الدم لدى كبار السن [1]. سمحت الأساليب الكيميائية الحديثة بعزل نوعين رئيسيين من المركبات ، جليكوسيدات فينيل إيثانويد ، والسكريات قليلة السكرية ، باعتبارها المكونات النشطة الرئيسية لـ Cistanche deserticola [1]. في العقد الماضي ، تمت دراسة Cistanche deserticola ومستخلصاته بشكل مكثف وأثبتت قدرتها على حماية الخلايا العصبية من الإصابة التي تسببها السموم العصبية [2] ، مما يثبط الناجم عن رباعي كلوريد الكربونالسمية الكبدية[2] ، وتعزيز استعادة خلايا نخاع العظام من التلف الإشعاعي الناجم عن Co60 [3]. كما ثبت أن لها تأثيرات مضادة للالتهابات ومضادة للأكسدة ومضادة للشيخوخة [4]. ومع ذلك ، ما إذا كان Cistanche deserticola يمكنه زيادة العمر الافتراضي وما هي الآليات الجزيئية الكامنة [3] المرتبطة بخصائصه المضادة للشيخوخة لم يتم اختبارها بدقة.

التقلص المناعي ، أي تغير الجهاز المناعي مع تقدم العمر ، يشكل الخلفية التي لوحظت على خلفية زيادة القابلية للإصابة بالعدوى والسرطان والأمراض التنكسية العصبية وأمراض المناعة الذاتية لدى كبار السن [5]. تم الإبلاغ عن أن التدخلات العلاجية ، مثل تقييد السعرات الحرارية [6] ومكملات فيتامين E ، فعالة في تأخير تطور التورم المناعي وبالتالي تقليل الإصابة ببعض الأمراض المرتبطة بالعمر بالإضافة إلى إطالة عمر كل من البشر والقوارض [7 ، 8]. ومع ذلك ، فإن الدراسات في هذا المجال معقدة بسبب حقيقة أن الشيخوخة مرتبطة بمفارقة نقص المناعة المتزامن والالتهاب المزمن [9]. هذا يعني أن التحفيز البسيط لتكاثر الخلايا الليمفاوية أو مضادات الالتهاب لا يمثل تدخلات علاجية مثالية في التعامل مع الشيخوخة والظروف المرتبطة بالعمر [10]. وبالتالي عند البحث عن التدخلات الطبية القادرة على منع أو تخفيف الحالات المرتبطة بالعمر بما في ذلك الالتهابات والسرطان وأمراض المناعة الذاتية وتصلب الشرايين والأمراض التنكسية العصبية التي تعتبر الأسباب الرئيسية للوفاة والعجز ، ويجب أن يكون إصلاح عيوب الجهاز المناعي مصحوبًا بتثبيط استجابات التهابية. الفأر المتسارع للشيخوخة [11] هو نموذج للفأر الفطري ، مشتق من سلالة AKR / J ، والذي يستخدم على نطاق واسع في دراسات الشيخوخة. تتمتع السلالة الفرعية P8 (SAM-P8) لهذه الفئران بعمر افتراضي أقصر بشكل ملحوظ بالمقارنة مع السلالة الفرعية R1 (SAM-R1) ، والتي تُظهر أيضًا عملية شيخوخة أبطأ [12]. بالتوازي مع الشيخوخة المبكرة ، تُظهر الفئران SAM-P8 أيضًا زيادة في الشيخوخة العصبية ، والتهاب المناعة ، والشيخوخة المرتبطة بالعمر.مكونات الدمالعجز الذي يحاكي عن كثب الخصائص النموذجية للشيخوخة البشرية [13 ، 14]. يشير تحليل الآليات الأساسية المسؤولة عن عملية الشيخوخة المتسارعة والاضطرابات المرتبطة بالعمر إلى أن اختلال وظائف الميتوكوندريا [15] والإجهاد التأكسدي وزيادة معدل تحور الحمض النووي الجسدي جميعها متورطة [16 ، 17]. وبالتالي ، فإن نظام الفأر هذا ، بخلفيته الجينية المتجانسة ، يوفر نموذجًا تجريبيًا ممتازًا لدراسة الشيخوخة والعلاجات المضادة للشيخوخة [12]. ركزت هذه الدراسة على التحقق مما إذا كانت مستخلصات Cistanche deserticola قادرة على إطالة عمر الفئران SAM-P8 وعكس حالة التورم المناعي لديهم.

يمكن أن يحسن القسطرة المناعة ومقاومة التعب

2. المواد والأساليب
2.1. المواد. تم جمع Fresh Cistanche deserticola YC MA من مناطق مختلفة في شمال غرب الصين بما في ذلك مناطق Xinjiang و Neimenggu و Ningxia ذاتية الحكم. تم توثيق العينات المستخدمة في تحضير المستخلصات من قبل البروفيسور Pengfei Tu ، أخصائي العقاقير في قسم الأدوية الطبيعية ، كلية العلوم الصيدلانية ، جامعة بكين. تم إيداع عينة قسيمة Cistanche deserticola (رقم القرص المضغوط -2007-03-08) المستخدمة في معشبة مدرسة العلوم الصيدلانية ، جامعة بكين ، الصين. 2.2. إعداد مقتطفات من Cistanche deserticola (ECD) وتحليل HPLC. تم تجفيف وشرائح Cistanche deserticola (2. 0 كجم) واستخلاص مرتين مع 7 0 بالمائة من الإيثانول لمدة ساعة واحدة. كانت نسب النبات / الإيثانول المستخدم 1/6 (وزن / وزن) في الاستخراج الأول و 1/4 (وزن / وزن) في الثانية. تم الجمع بين المستخلصين وترشيحهما قبل التركيز على كثافة نسبية تبلغ 1.1 0 - 1.15 تحت الضغط المنخفض عند 6 0 م. ثم يجفف هذا المركز بالتفريغ وكان المسحوق الناتج هو المستخلص من Cistanche Deserticola (ECD) المستخدمة في جميع أنحاء هذه الدراسة. تم تحليل مكونات ECD باستخدام HPLC كما هو موضح سابقًا [1]. باختصار ، تم إذابة 1 0 0 ملغ من مسحوق ECD في 10.0 مل من H2O وبعد الترشيح تم حقنها في HPLC. تم إجراء تحليل HPLC على نظام كروماتوغرافيا سائل Agilent 1100 (شركة Agilent ، الولايات المتحدة الأمريكية). تتألف المرحلة المتنقلة من خليط من الميثانول (A) و 0.10 بالمائة من حمض الميثانويك (B). تم استخدام برنامج كروماتوغرافيا متدرجة ؛ كان هذا 26.5 بالمائة (أ) و 73.5 بالمائة (ب) في 0-7 دقائق ، 26.5 - 29.5 بالمائة (أ) و 73.5 - 70.5 بالمائة (ب) في 8-10 دقائق ، و 29.5 بالمائة (أ) و 70.5 بالمائة (ب). ) في 20-27 دقيقة. تم الحفاظ على معدل التدفق ثابتًا عند 1.0 مل / دقيقة ، وكان حجم الحقن 10 مل ، وتم الحفاظ على درجة حرارة العمود عند 25 درجة مئوية. تم استخدام كاشف للأشعة فوق البنفسجية تم ضبطه عند 330 نانومتر لمراقبة تدفق العمود وتوليد مخططات كروماتوجرام. تم التعرف على جليكوسيدات فينيلثانويد و oligosaccharides من أوقات الاحتفاظ بها وأطياف الامتصاص. تم إجراء القياس الكمي بواسطة منحنيات المعايرة القياسية الخارجية. كان محصول مستخلصات Cistanche deserticola (ECD) حوالي 3.33٪ ومحتوى الفينيليثانويد 17.94٪. كان Acteoside و echinacoside مكونين رئيسيين في هذا الجزء ، حيث بلغت محتوياتهما 3.80 في المائة و 8.25 في المائة على التوالي. تمثل السكريات القلة 82 بالمائة من إجمالي ECD. تركيزات المكونات النشطة الرئيسية للنماء في مرحلة الطفولة المبكرة موضحة في الجدول 1. 2.3. تحليل فترات حياة الحيوان. تم شراء الفئران الذكور SAM-P8 وفئران التحكم SAM-R1 من مختبر تربية الحيوانات ومركز الأبحاث التابع لمركز العلوم الصحية بجامعة بكين (بكين ، الصين). تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة أبحاث الحيوانات بجامعة بكين وتم تنفيذها وفقًا لإرشادات رعاية واستخدام حيوانات المختبر في جامعة بكين. رقم شهادة هذه الفئران كان SCXK 2001-2008. تم الاحتفاظ بالفئران في أقفاص أيضية قياسية في ظروف مضبوطة بيئيًا (22 ± 2 درجة مئوية ، ورطوبة 45-60 في المائة ، ودورة ضوئية / مظلمة لمدة 12 ساعة) وسمح بالوصول المجاني إلى الطعام والماء. بعد أسبوعين من التأقلم ، تم تقسيم الحيوانات إلى خمس مجموعات: 3 مجموعات علاج ECD ، ومجموعة مراقبة SAM-R1 ، ومجموعة مراقبة SAM-P8 بدون علاج. تم استكمال النظام الغذائي لمجموعات العلاج الثلاث بنظام غذائي ممزوج

تركيزات مختلفة من ECD: متوسط ​​جرعات منخفضة (5 0 مجم / كجم) ومتوسط ​​(15 0 مجم / كجم) وجرعات عالية (45 0 مجم / كجم) متوسط ​​جرعات ECD اليومي. لم يتم تغذية مجموعتي SAM-R1 و SAM-P8 بمراقبة العلاج بنفس النظام الغذائي بدون ECD. تم إجراء قياس تناول الطعام لجميع الحيوانات كل ثلاثة أيام طوال التجربة. تم إجراء مراقبة ضغط الدم ومعدل ضربات القلب بشكل غير جراحي كل ثلاثة أشهر طوال مدة التجربة لتحديد الحالة الصحية للفئران. تم تسجيل العمر الافتراضي لكل فأر حتى موت جميع الحيوانات. 2.4 تحليل الخلايا التائية الساذجة وخلايا الذاكرة التائية والخلايا القاتلة الطبيعية والخلايا الإيجابية -1 في خلايا الدم المحيطية وخلايا الطحال عن طريق قياس التدفق الخلوي. تم تقسيم فئران SAM-P8 الذكور البالغة من العمر ثمانية أشهر وفئران التحكم SAM-R1 إلى 5 مجموعات: 3 مجموعات علاج ECD لفئران SAM-P8 ، ومجموعة SAM-P8 بدون مجموعة تحكم في العلاج ، ومجموعة مراقبة SAM-R1. تم استكمال النظام الغذائي لمجموعات العلاج الثلاث بالتزقيم اليومي لنماء الطفولة المبكرة بجرعات 1 0 0 مجم / كجم أو 500 مجم / كجم أو 2500 مجم / كجم. بعد 4 أسابيع من العلاج ، تم تثبيت الحيوانات لمدة 12 ساعة ثم تخديرها بمحلول صوديوم بنتوباربيتال (50 مجم / كجم ، حقن البريتوني ، IP) ، وتم جمع الدم ومعالجته بمضاد التخثر ، سترات الصوديوم (2 مجم / مل). ). تم جمع الخلايا الليمفاوية في الدم وتحليلها. ثم تم مسح الفئران بنسبة 75 بالمائة من الكحول وتم فتح تجاويف البطن في خزانة فائقة النظافة (غطاء دخان). تم غسل الطحال ببرنامج تلفزيوني ؛ ثم تم طحنه وترشيحه بمصفاة خلوية (70 ميكرومتر). تم غسل المعلق الناتج من خلايا الطحال وتعليقه في وسط PRMI 1640 بتركيز 2 × 106 / مل. تم تقسيم خلايا الطحال من كل فأر إلى 6 أنابيب لتحليل قياس التدفق الخلوي ، وكان التركيز النهائي لتعليق خلية الطحال في كل أنبوب 2 × 105/100 ميكرولتر. تم تحضين الخلايا الليمفاوية في الدم المحيطي والخلايا الليمفاوية الطحالية بشكل منفصل باستخدام FITC-CD4 و PerceCD3 و Perce-CD8a و PC-CD28 و PE-CD44 و FITC-CD45RB و PE CD49b / pink و FITC-ly -6 A / E ( Sca -1) (تم شراؤها من BD Biosciences ، سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) الأجسام المضادة أحادية النسيلة في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. تم تحضين محلول lysing ، المصمم خصيصًا لتحليل خلايا الدم الحمراء أثناء تقديم الكريات البيض مسبقًا ، وبالتالي القضاء على الخلايا المتداخلة لتحليل التدفق الخلوي ، مع الدم في الظلام في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. بعد الطرد المركزي عند 500 × جم لمدة 5 دقائق ، تم صب المادة الطافية ، ثم تم غسل الخلايا المحببة 3 مرات باستخدام برنامج تلفزيوني ، ثم أعيد تعليقها في محلول ملحي معزول بالفوسفات المثلج (PBS ، الرقم الهيدروجيني 7.4) يحتوي على 0.01 في المائة من أزيد الصوديوم ، وتعرض لـ FCM التحليلات. تم تحليل المجموعات السكانية الفرعية للخلايا الليمفاوية عن طريق قياس التدفق الخلوي باستخدام مقياس التدفق الخلوي FACS Calibur (BD Biosciences ، سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) وبرنامج تحليل BD CellQuest. 2.5 تقييم الجدوى الخلوية للخلايا اللمفاوية التائية الطرفية بواسطة Annexin V-FITC و PI Double Staining and FACS Analysis. بعد المكملات الغذائية لفئران SAM P8 بثلاث جرعات من ECD لمدة 4 أسابيع ، تم تثبيت الحيوانات لمدة 12 ساعة ثم تخديرها ، وتم جمع الدم وتحليله. تم تحديد كمية الخلايا الليمفاوية القابلة للاستماتة والنخرية باستخدام مجموعة Annexin V-FITC (شركة Beijing Biosea Biotechnology Co. ، Ltd. ، بكين ، الصين). تعرضت الخلايا الليمفاوية لتلطيخ مزدوج باستخدام الفلورسين أيزوثيوسيانات المترافق المسمى الملحق الخامس (أنكسين V-FITC) ويوديد البروبيديوم (PI). باختصار ، تم غسل معلقات الخلايا الليمفاوية التي تحتوي على ما يقرب من 106 خلية / مل مرتين باستخدام برنامج تلفزيوني وتم تعليقها في 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت للربط (10 ملي مولار HEPES / هيدروكسيد الصوديوم ، ودرجة الحموضة 7.4 ، و 140 ملي مولار كلوريد الصوديوم ، و 2.5 ملي كلوريد الكالسيوم) ، و 10 ميكرولتر من Annexin V-FITC تمت إضافته إلى تعليق الخلية. بعد 15 دقيقة من الحضانة في الظلام عند درجة حرارة الغرفة ، تمت إضافة 300 ميكرولتر من محلول الربط المؤقت و 5 ميكرولتر PI. مباشرة بعد 5 دقائق من الحضانة في الظلام ، تم تحليل عينات الخلايا الليمفاوية المصبوغة بشكل مضاعف باستخدام مقياس التدفق الخلوي ، FACS Calibur (BD Biosciences ، سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). 2.6. تحديد السيتوكينات في البلازما بالمقايسة المناعية لصفيف الخرزة الخلوية (CBA). تم قياس مستويات السيتوكينات في البلازما باستخدام مجموعة مقايسة الخرزة الخلوية (CBA) (BD Biosciences ، سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) القادرة على الكشف المتزامن عن IFN-𝛾 و TNF-𝛼 و IL -6 و IL {{96 }} و IL -10 و GM-CSF و IL -3 في عينة واحدة. لذلك ، مكّن هذا الاختبار المناعي متعدد الإرسال من اكتشاف السيتوكينات المنشطة للمناعة (IL -2) ، السيتوكينات المنشطة للالتهابات (IFN-𝛾 ، TNF- 𝛼 ، و IL -6) ، السيتوكينات المثبطة للالتهاب (IL {{105 }}) ، والسيتوكينات المكونة للدم (IL -3 و GM-CSF). باختصار ، تم خلط 50 ميكرولتر من البلازما مع 50 ميكرولتر من خرز التقاط السيتوكينات المترافق مع PE والتي كانت مغلفة بأجسام مضادة خاصة بـ IFN-𝛾 و TNF-𝛼 و IL -6 و IL -2 و IL بروتينات -10 و GM-CSF و IL -3. بعد ساعتين من الحضانة في درجة حرارة الغرفة ، تم غسل العينات في محلول ملحي مخزّن بالفوسفات المثلج (PBS ، الرقم الهيدروجيني 7.4) يحتوي على 0.01 في المائة من أزيد الصوديوم ، ثم تم تثبيتها في 0.5 مل من بارافورمالدهيد بنسبة 1 في المائة في برنامج تلفزيوني وحفظها عند 4 درجات مئوية في الظلام حتى التحليل ، ثم تحليله بواسطة مقياس التدفق الخلوي FACS Calibur (BD Biosciences ، سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). 2.7. تحليل احصائي. يتم عرض البيانات كقيم متوسطة ± تم إجراء مقارنات SD بين المجموعات المختلفة بواسطة ANOVA أحادي الاتجاه مع اختبار لاحق. في دراسة مدى الحياة ، خضعت البيانات لتحليل البقاء على قيد الحياة من قبل كابلان ماير ، والذي تضمن استخدام كل من اختبارات رتبة لوغاريتم (Mantel-Cox) و Gehan-Breslow Wilcoxon. تم إجراء التحليل الإحصائي باستخدام الحزمة الإحصائية للعلوم الاجتماعية لنظام التشغيل Windows (SPSS، Chicago، IL) واعتُبرت قيمة أقل من 0.05 مهمة.

3. النتائج
3.1. تحليل المكونات النشطة المحتملة في مقتطفات من Cistanche deserticola (ECD). كما هو مبين في الجدول 1 ، يتكون ECD بشكل أساسي من نوعين من المركبات ، جليكوسيدات فينيل إيثانويد ، و oligosaccharides. في جليكوسيدات فينيل إيثانويد ، تم التعرف على إشنكوسايد ، أسيتونيد ، و 8- حمض الإيبيلوغانيك ، بينما في السكريات قليلة التين ، تم تحديد الجلاكتيتول فقط.

الشكل 1: آثار مقتطفات من Cistanche deserticola (ECD) على العمر الافتراضي لفئران SAM-P8. تم تقسيم الفئران البالغة من العمر ثمانية أشهر / الفئران المعرضة للشيخوخة 8 (SAM-P8) بشكل عشوائي إلى 4 مجموعات (في كل مجموعة ، 𝑛 {{1 0}}): 3 مجموعات علاج ، و لا - مجموعة مراقبة العلاج. تم استخدام السلالة غير الهلالية (SAM-R1) للفئران كعنصر تحكم تجريبي. تمت مراقبة تناول الطعام لجميع الحيوانات خلال التجربة على فترات 3- يوم. تم إطعام المجموعات العلاجية الثلاث على أساس الشهرة على الأنظمة الغذائية المكملة بجرعات منخفضة (5 0 مجم / كجم) ومتوسطة (15 0 مجم / كجم) وجرعات عالية (450 مجم / كجم) من Cistanche deserticola استخراج (ECD). تم تغذية مجموعتين من الحيوانات الضابطة بنفس النظام الغذائي بدون مكملات ECD. (أ) منحنيات بقاء Kaplan-Meier لفئران SAM-P8 التي خضعت لنظام ECD أو التحكم في السيارة. تم إجراء تحليل البقاء على قيد الحياة في Kaplan-Meier باستخدام اختبار رتبة لوغاريتم (Mantel-Cox) واختبار Gehan-Breslow-Wilcoxon. (ب) رسم بياني لمتوسط ​​عمر مجموعات الفئران. توضح أشرطة الخطأ أن الانحراف المعياري عن المتوسط ​​والدلالة الإحصائية قد تم تنفيذه باستخدام تحليل ANOVA متبوعًا باختبار 𝑡 اللاحق. ### 𝑃 <0.001 sam-p8="" مقابل="" sam-r1="" ؛="" ∗∗="" 𝑃=""><0.01 المجموعة="" المعالجة="" بجرعة="" عالية="" مقابل="" sam-p8="" ؛="" ∗="" 𝑃=""><0.05 مجموعة="" معالجة="" بجرعة="" متوسطة="" مقابل="" sam-p8="" (في="" كل="" مجموعة="" ،="" 𝑛="">

3.2 تأثير مستخلصات Cistanche deserticola على متوسط ​​العمر الافتراضي لفئران SAM-P8. لهذه الدراسة والدراسات اللاحقة ، تم تقسيم ذكور فئران SAM-P8 البالغة من العمر ثمانية أشهر إلى 4 مجموعات. من بينها ، تم تغذية مجموعة واحدة من الفئران بنظام غذائي عادي بدون تنمية الطفولة المبكرة ، والمجموعات الثلاث الأخرى تناولت بشكل منفصل الأنظمة الغذائية التي تحتوي على نسب مختلفة من ECD. تم استخدام الفئران من السلالة الفرعية SAM-R1 ، والتي لها عملية شيخوخة طبيعية وعمر افتراضي ، كمجموعة تحكم في جميع التجارب. مقارنة بمجموعة التحكم SAM-R1 ، تم تقصير متوسط ​​العمر الافتراضي لفئران SAM-P8 بشكل ملحوظ (الشكل 1 (أ) ؛ 𝑃 <0. 0="" 0="" 1).="" على="" الرغم="" من="" أن="" مكملات="" النظام="" الغذائي="" بجرعة="" منخفضة="" (50="" مجم="" كجم)="" من="" ecd="" فشلت="" في="" إنتاج="" زيادة="" كبيرة="" في="" عمر="" الفئران="" sam-p8="" ،="" في="" المتوسط="" ​​(150="" مجم="" كجم)="" والعالية="" (450="" مجم="" مل)="" التكميلية="" الجرعات="" كانت="" هناك="" زيادة="" تعتمد="" على="" الجرعة="" في="" مدى="" العمر="" (الشكلان="" 1="" (أ)="" و="" 1="" (ب)="" ؛="" 𝑃=""><0.05-0.01) الذي="" أكده="" تحليل="" البقاء="" على="" قيد="" الحياة="" في="" كابلان="" ماير="" ،="" والذي="" تضمن="" استخدام="" كل="" من="" رتبة="" اللوغاريتمات="" (="" mantel-cox)="" و="" gehan-breslow-wilcoxon.="" 3.3="" انعكاس="" المناعة="" في="" الفئران="" sam-p8="" عن="" طريق="" مقتطفات="" من="" cistanche="" deserticola="" (ecd).="" يعتبر="" انخفاض="" الخلايا="" اللمفاوية="" التائية="" الطرفية="" الساذجة="" والزيادة="" المصاحبة="" للذاكرة="" المحيطية="" من="" السمات="" البارزة="" للتورم="" المناعي="" والتي="" تعتبر="" على="" نطاق="" واسع="" الأسباب="" الكامنة="" وراء="" التشوهات="" المناعية="" المرتبطة="" بالعمر.="" كان="" هذا="" التقلص="" المناعي="" في="" sam-p8="" بالنسبة="" لحيوانات="" sam-r1="" واضحًا="" بوضوح="" عند="" استخدام="" تحليل="" facs="" لتعداد="" الخلايا="" الليمفاوية="" (cd3="" بالإضافة="" إلى="" cd44low="" cd45rb="" عالية)="" كمؤشر="" على="" الخلايا="" التائية="" الساذجة="" والخلايا="" الليمفاوية="" (cd3="" plus="" cd44="" عالية="" cd45brlow)="" كمؤشر="" للذاكرة="" t="" الخلايا.="" وهكذا="" ،="" في="" كل="" من="" الدم="" المحيطي="" (الشكل="" 2)="" وخلية="" الطحال="" (الشكل="" 3)="" ،="" قلل="" السكان="" من="" مستويات="" الخلايا="" التائية="" الساذجة="" وشوهدت="" زيادة="" مستويات="" خلايا="" الذاكرة="" التائية="" في="" الفئران="" sam-p8.="" تم="" العثور="" على="" مكملات="" النظام="" الغذائي="" للفئران="" sam-p8="" مع="" ecd="" لتكون="" قادرة="" على="" عكس="" هذه="" المؤشرات="" من="" مناعة="" بطريقة="" تعتمد="" على="" الجرعة="" في="" كل="" من="" الدم="" المحيطي="" (الشكل="" 2)="" وخلية="" الطحال="" (الشكل="" 3).="" تم="" تحليل="" مستوى="" الخلايا="" القاتلة="" الطبيعية="" [18]="" ،="" وهي="" علامة="" خلوية="" رئيسية="" لجهاز="" المناعة="" الفطري="" ،="" كمؤشر="" إضافي="" لعكس="" التورم="" المناعي="" عن="" طريق="" مكملات="" ecd="" من="" النظام="" الغذائي.="" أظهر="" هذا="" أن="" مكملات="" النظام="" الغذائي="" ecd="" أدت="" إلى="" زيادة="" تعتمد="" على="" الجرعة="" في="" خلايا="" nk="" (cd3="" بالإضافة="" إلى="" cd49="" plus)="" في="" كل="" من="" خلايا="" الدم="" المحيطي="" (الشكل="" 4)="" وخلايا="" الطحال="" (الشكل="" 5)="" الخلايا="" الليمفاوية.="" 3.4.="" تعمل="" مقتطفات="" من="" cistanche="" deserticola="" على="" تقوية="" كثافة="" الإسفار="" النسبية="" للخلايا="" الإيجابية="" لـ="" sca="" -1="" في="" الفئران="" sam-p8.="" مستضد="" الخلايا="" الجذعية="" -1="" (sca="" -1)="" هو="" أحد="" أبرز="" المؤشرات="" الحيوية="" للخلايا="" الجذعية="" المكونة="" للدم="" (hsc)="" في="" تجمعات="" خلايا="" نخاع="" العظم.="" تمثل="" الخلايا="" الموجبة="" sca="" -1="" أيضًا="" أسلاف="" الخلايا="" الليمفاوية="" التي="" تم="" تصديرها="" حديثًا="" من="" نخاع="" العظم="" إلى="" الدم="" المحيطي="" حيث="">

4. مناقشة

يعتمد الدفاع المناعي ضد الكائنات الدقيقة الغازية أو الخلايا السرطانية الداخلية على تنوع ذخيرة الخلايا التائية ، والتي تعتمد بدورها على توليد وصيانة الخلايا التائية الساذجة [19]. أثناء عملية الشيخوخة ، تبين أن تنوع ذخيرة الخلايا التائية يتقلص بشكل كبير بسبب النضوب التدريجي للخلايا التائية الساذجة في تجمع الاحتياطي المحيطي. إن هذا النقص في الخلايا التائية الساذجة المستجيبة هو الذي يُعتقد أنه مسؤول عن تعرض كبار السن للعدوى والسرطان والنتائج السيئة بعد التطعيم [2 0]. تم استخدام العديد من التدخلات ، بما في ذلك تقييد السعرات الحرارية [7] ، والتمارين الرياضية [21] ، ومكملات فيتامين هـ [8] ، لتجديد الخلايا التائية الساذجة بنجاح وبالتالي إطالة العمر الافتراضي وتقليل ظهور العدوى والسرطان بين كبار السن. في هذه الدراسة ، أوضحنا أن النماء في مرحلة الطفولة المبكرة قادر على زيادة مستوى الخلايا التائية الساذجة في البركة المحيطية ، وكان هناك إطالة مصاحبة لمدى الحياة وتقليل تواتر تكوين الورم في الفئران المتسارعة للشيخوخة (المجموعة العلاجية في مرحلة الطفولة المبكرة مقابل المجموعة العلاجية SAM-P8 ، 0 مقابل 1/6). لذلك ، يبدو من المعقول أن نستنتج أن قدرة ECD على عكس الاستنزاف المعتمد على العمر للخلايا التائية الطرفية الساذجة قد تساهم في آثارها المعروفة في الحد من الأمراض المرتبطة بالعمر والتي تنجم عن الملاحظات السريرية طويلة المدى.

5. المواد والطرق

5.1 المواد. في الاستجابة المناعية الطبيعية ، بعد احتواء مستضد غريب والقضاء عليه ، تخضع معظم الخلايا التائية المتوسعة نسليًا لموت الخلايا المبرمج مع الاحتفاظ بجزء صغير منها كخلايا ذاكرة تي. ونتيجة لذلك ، مع تقدم العمر في الكائن الحي المؤهل للمناعة ، تتراكم خلايا الذاكرة الطرفية نتيجة التعرض المستمر لمولدات المضادات الأجنبية التي تحول الخلايا التائية الساذجة إلى خلايا ذاكرة [22 ، 23]. اقترح عدد من الدراسات أن عيوب موت الخلايا المبرمج في الخلايا الليمفاوية في الحيوانات الأكبر سنًا والبشر تساهم أيضًا في تضخم حجرة الذاكرة التائية [24 ، 25]. بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت دراسة حديثة أن الزيادة المفرطة في خلايا الذاكرة الطرفية يمكن أن تمنع تكاثر الخلايا التائية الساذجة [26]. اقترحت هذه الدراسات الحديثة أيضًا أن خلايا الذاكرة التائية قد تفرز مستويات عالية من السيتوكينات المنشطة للالتهابات والتي قد تساهم في حدوث التهابات مستمرة في أنسجة مختلفة لكبار السن. وبالتالي ، يجب أن يكون تقليل مستوى خلايا الذاكرة التائية مفيدًا للتكاثر المتماثل للخلايا التائية الساذجة وأيضًا في التخفيف من حالة الالتهاب الزائدة التي لوحظت في الكائنات الحية القديمة. في هذه الدراسة ، تبين أن المكملات الغذائية مع ECD قادرة على تقليل مستوى خلايا الذاكرة الطرفية T وزيادة مستويات الخلايا التائية الساذجة. بالإضافة إلى ذلك ، زادت مكملات ECD من موت الخلايا المبرمج في مجموعات الخلايا الليمفاوية المحيطية ، مما قد يوفر مساحة للخلايا الليمفاوية الساذجة الجديدة. النخر في الخلايا الليمفاوية المحيطية ، والذي يحدث بشكل رئيسي بسبب الإجهاد التأكسدي في حيوانات الشيخوخة ، تم تثبيطه أيضًا. توجد أدلة كثيرة تشير إلى أن الشيخوخة في الكائن الحي لا تتميز فقط بنقص المناعة ولكن أيضًا بزيادة الالتهاب المزمن [27]. تتجلى الحالة المسببة للالتهاب بشكل أكثر وضوحًا في زيادة مستويات السيتوكينات المسببة للالتهاب ، بما في ذلك IL -6 و TNF- 𝛼 و IL -1 ، في الدورة الدموية مقرونًا بزيادة تواتر الأمراض الالتهابية المزمنة المرتبطة بالشيخوخة مثل مرض الزهايمر وأمراض باركنسون وتصلب الشرايين. أحد أبرز عوامل التحفيز الخلوي الالتهابي IL -6 ويزيد تركيزه في البلازما مع تقدم العمر والأمراض المرتبطة بالعمر [18 ، 28 ، 29] وتشير الدراسات الوبائية إلى أن IL -6 مؤشر بيولوجي جيد لطول العمر لأنه يرتبط ارتباطًا وثيقًا بالوفيات في أفواج المرضى المسنين [30 ، 31]. وتوافقًا مع هذا ، فإن عددًا من التدخلات العلاجية التي تقلل تركيز IL -6 قادرة على التخفيف من الأمراض المرتبطة بالعمر [18]. في ظل هذه الخلفية ، كان من المهم في هذه الدراسة أن المكملات الغذائية مع ECD كانت قادرة على تقليل تركيزات IL المحيطي -6 ، مع الإشارة ضمنيًا إلى أن هذا التأثير قد يساهم في الآليات الأساسية لتقليل تكرار الأمراض المرتبطة بالعمر والتي تم الحصول عليها من خلال الاستخدام طويل الأمد لتنمية الطفولة المبكرة في الممارسة السريرية. إلى جانب التغييرات في الاستجابة المناعية التكيفية التي تحدث مع تقدم العمر ، هناك أيضًا تغييرات كبيرة في المناعة الفطرية مع تقدم العمر. من بين هذه التغييرات في الخلايا القاتلة الطبيعية [18] ، وهي السطر الأول من المكونات الخلوية لتوفير تحلل مباشر سام للخلايا للخلايا السرطانية والخلايا المصابة بالفيروس ، كانت واسعة النطاق منذ أن أظهر كبار السن قابلية متزايدة لتطور الورم والعدوى بالفيروسات [ 32]. أشارت هذه الدراسة إلى أن خلايا CD3 بالإضافة إلى Ly49 بالإضافة إلى NK كانت موجودة بمستويات أقل بشكل ملحوظ في فئران SAM P8 الخرف مقارنةً بالحيوانات الضابطة SAM-R1 ، والتي قد تكون عاملاً أساسيًا آخر مسؤولاً عن زيادة حساسية الفئران المسنة للإصابة بالسرطان وعدوى الفيروس. يمكن أن تكون الزيادة في مستوى الخلايا القاتلة الطبيعية التي شوهدت في هذه الدراسة بعد المكملات الغذائية مع ECD مفيدة للكائنات المسنة من حيث زيادة المقاومة لتطور الورم والعدوى الفيروسية. ومع ذلك ، هناك حاجة إلى مزيد من الدراسات لتوضيح دور تأثير ECD على الخلايا القاتلة الطبيعية في الكائنات الحية المسنة. في الختام ، أظهرت هذه الدراسة أن علاج السلالة الفرعية المعرضة للشيخوخة ، SAM P8 ، مع ECD يمكن أن يؤدي إلى انعكاس كبير في تغيرات المناعة المرتبطة بالعمر. تم تقليل أوجه القصور في كل من مجموعات الخلايا المحيطية والطحال للخلايا التائية الساذجة والخلايا القاتلة الطبيعية ، في حين تم أيضًا تقليل مستويات خلايا الذاكرة التائية الزائدة. بالإضافة إلى ذلك ، كانت المكملات الغذائية التي تحتوي على ECD قادرة على قمع كل من النخر في الخلايا الليمفاوية الطرفية ومستويات السيتوكين الالتهابي ، IL -6. أخيرًا ، بالإضافة إلى إحداث تغييرات في الجهاز المناعي للشيخوخة ، فإن المكملات الغذائية لنماء الطفولة المبكرة تطيل بشكل كبير من عمر الفئران الخرف SAM-P8.

مراجع
[1] Y. Jiang و P.-F. Tu ، "تحليل المكونات الكيميائية في أنواع Cistanche ،" Journal of Chromatography A ، vol. 1216 ، لا. 11 ، ص 1970 - 1979 ، 2009.
[2] Q. Xiong، K. Hase، Y. Tezuka، T. Tani، T. Namba، and S. Kadota، "Hepatoprotective activity of phenylethanoids from Cistanche deserticola،" Planta Medica، vol. 64 ، لا. 2، pp.120–125، 1998.
[3] "علم المناعة والشيخوخة في أوروبا. وقائع المؤتمر الثاني للبيولوجيا الأساسية والتأثير الإكلينيكي للتأثير المناعي. مارس 22-26 ، 2001 ، قرطبة ، إسبانيا ،" Experimental Gerontology، vol. 37 ، لا. 2-3 ، ص 183 - 473 ، 2002.
[4] ج. Xuan و C.-Q. Liu ، "بحث حول تأثير جليكوسيدات فينيلثانويد (PEG) من Cistanche deserticola على مكافحة الشيخوخة في الفئران المسنة التي يسببها D-galactose ،" Journal of Chinese Medicinal Materials ، المجلد. 31 ، لا. 9 ، ص 1385 - 1388 ، 2008.
[5] D. Aw ، AB Silva ، و DB Palmer ، "مناعة: التحديات الناشئة لشيخوخة السكان ،" علم المناعة ، المجلد. 120 ، لا. 4 ، ص 435-446 ، 2007.
[6] M. Alizadeh ، H. Pohla ، A. Rehbein ، و G. Pawelec ، "الثقافة طويلة المدى للخلايا اللمفاوية التائية أحادية النسيلة البشرية: نماذج للتورم المناعي؟" آليات الشيخوخة والتنمية ، المجلد. 83 ، لا. 3 ، ص 171 - 183 ، 1995.
[7] EH Greeley ، E. Spitznagel ، DF Lawler ، RD Kealy ، و M. Segre ، "تعديل مناعة الكلاب عن طريق تقييد السعرات الحرارية مدى الحياة ،" علم المناعة البيطري وعلم أمراض المناعة ، المجلد. 111 ، ص 287-299 ، 2006.
[8] SN Meydani، SN Han، and D. Wu، "فيتامين E والاستجابة المناعية عند كبار السن: الآليات الجزيئية والآثار السريرية" ، مراجعات مناعية ، المجلد. 205 ، ص 269-284 ، 2005.
[9] SG Deeks ، "عدوى فيروس العوز المناعي البشري والالتهاب والتهاب المناعة والشيخوخة ،" المجلة السنوية للطب ، المجلد. 62 ، ص 141-155 ، 2011.
[10] M. Capri، D. Monti، S. Salvioli et al.، "Complexity of anti immunosenescence Strategies in Human،" Artificial Organs، vol. 30 ، لا. 10 ، ص 730-742 ، 2006.