تحديد خمسة مكونات في Rehmannia Glutinosa وإنشاء بصمة HPLC
Sep 27, 2024
خلاصة:طريقة تحديد محتويات خمسة مكونات فيريهمانيا جلوتينوزاوهي،ريهمانوسيد د, ليونورين,echinacoside,سيستانشيسيد أوcom.verbascoside، وتم إنشاء بصمة التحليل اللوني السائل عالي الأداء (HPLC) لـ Rehmannia glutinosa لتوفير أساس علمي لمراقبة جودة Rehmannia glutinosa. تم استخدام عمود Shiseido CAPCELL PAK C18، مع محلول حمض الفورميك -0.1% كطور متحرك، وشطف متدرج، ودرجة حرارة العمود 30 درجة، وتحديد الطول الموجي المتغير، ومعدل التدفق 1.0 مل / دقيقة. تم تحليل بصمة HPLC لـ Rehmannia glutinosa بواسطة "الطب الصيني نظام تقييم تشابه بصمات الأصابع الكروماتوغرافي (2012 Edition)" software to evaluate its quality consistency. The results showed that according to the established content determination method, the five components had a good linear relationship within their respective concentration ranges (R2>{{0}}.999 0)، كان RSD لاختبار الدقة واختبار التكرار واختبار الاستقرار 0.12%~1.58%، وكان متوسط معدل استرداد العينة 96.5% ~98.6%؛ حددت بصمة Rehmannia glutinosa HPLC المثبتة 23 قمة شائعة، وكان التشابه بين عينة Rehmannia glutinosa وبصمة التحكم 0.904~0.950. تشير النتائج إلى أن طريقة تحديد المحتوى المعمول بها وبصمة HPLC مناسبة لتقييم جودة Rehmannia glutinosa وتحديد Rehmannia glutinosa الخام وRehmannia glutinosa المطبوخة، بدقة عالية وإمكانية تكرار نتائج جيدة، ويمكن أن توفر الدعم الفني لمراقبة جودة المواد الطبية ريهمانيا جلوتينوزا.
الكلمات الرئيسية:ريهمانيا جلوتينوزا. تحديد المحتوى؛ بصمة؛ تقييم الجودة
عشبة سيستانتشي الجديدة معإشيناكوسيد,سيستانشيسيد أوفيرباسكوسيد
ريهمانيا جلوتينوزاهي درنة الجذر الطازجة أو المجففة من نبات Scrophulariaceae Rehmannia glutinosa Libosch. نظرًا لاختلاف طرق المعالجة، يتم تقسيمها بشكل أساسي إلى ريهمانيا طازجة، وريمانيا خام، وريمانيا مطبوخة [1-2]. مناطق الإنتاج الرئيسية هي خنان، شانشي، شنشي، الخ. الأرض. من بينها، الريهمانية الخام لها آثار إزالة الحرارة وتبريد الدم، وتغذية الين وتعزيز إنتاج السوائل، وتستخدم بشكل أساسي لعلاج الحرارة في الدم، والسموم والبقع الدافئة، وما إلى ذلك؛ ريهمانيا جلوتينوزا المطبوخة لها تأثيرات تغذية الدم والين، وتجديد الجوهر وتجديد النخاع، وتستخدم بشكل أساسي لعلاج نقص الدم، والإصابة بالكلور، وما إلى ذلك. الخفقان، والأرق، وما إلى ذلك.[1-2]. كلاهما لهما خصائص ونكهات مختلفة، ولكن كلاهما ينتمي إلى خطوط الطول في الكبد والكلى. تحتوي الرهمانية الغلوتينوزية على مكونات كيميائية معقدة، بما في ذلك بشكل رئيسي الإيريدويدات والأيونات وجليكوسيدات الفينيل إيثانول والفلافونويدات، إلخ. [3-5].
بعد معالجة Rehmannia glutinosa بطرق معالجة مختلفة، تختلف أنواع ومحتويات ونسب المكونات الكيميائية في كل منتج معالج بشكل كبير، مما يؤدي إلى اختلافات كبيرة في نشاطه الدوائي [6-10]. وفق
تُظهر الدراسات ذات الصلة[11-12] أنه في عملية تغيير Rehmannia glutinosa من "الخام" إلى "المطبوخ"، انخفضت محتويات المكونات الكيميائية مثل الكاتالبول، والنبتة الأم، والاستاكيوز، والأحماض الأمينية بشكل ملحوظ، وتضاءلت محتوياتها. من الفركتوز، 5-هيدروكسي ميثيل فورفورال، إلخ. تمت زيادة محتويات أيسوريباسكوسايد، وما إلى ذلك بشكل ملحوظ. في الوقت الحاضر، تستخدم مراقبة جودة ريهمانيا جلوتينوزا الخام والمطبوخة بشكل رئيسي محتويات الكاتالبول والريمانياسيد د كمؤشرات للتقييم. مؤشرات نظام التقييم واحدة نسبيًا، مما يجعل من الصعب التحكم بشكل شامل في جودة ريهمانيا جلوتينوزا. بالإضافة إلى ذلك، أظهرت الدراسات أن محتوى الريهمانيا الغلوتينوزا D يتغير قبل وبعد المعالجة. وهي صغيرة الحجم ولها خصوصية ضعيفة في توصيف التغيرات في التركيبة بعد المعالجة ودرجة المعالجة [12-13].
لذلك، من أجل تقييم جودة Rehmannia glutinosa بشكل أكثر شمولاً، أنشأت هذه الدراسة العلاقة بين rehmanniaside D وYimu في Rehmannia glutinosa.
طرق تحديد محتوى خمسة مكونات شائعة، بما في ذلك الجلوكوزايد والإشناسيسيد والسيستانتشيوسايد A والفيرباسكوسايد، وإنشاء بصمة HPLC لـ Rehmannia glutinosa لتحليل محتوى المكونات الرئيسية في Rehmannia glutinosa من مناطق الإنتاج المختلفة وقبل وبعد المعالجة، من أجل توفير معلومات لمراقبة جودة Rehmannia glutinosa. الدعم الفني.
الأدوات والكواشف وأدوية الاختبار
Agilent 1260 كروماتوجرافيا سائلة عالية الأداء (الكاشف عبارة عن مصفوفة صمام ثنائي)؛ ميزان تحليلي إلكتروني متغير النطاق (METTLER TOLEDO)؛ المنظف الرقمي بالموجات فوق الصوتية (Shanghai Ultrasonic Instrument Factory, KH-500DE). الميثانول (مجموعة سينوفارم) هو درجة تحليلية؛ الأسيتونيتريل (ميرك) هو الصف الكروماتوغرافي. الماء هو ماء واتسون المعبأ في زجاجات. المادة المرجعية Rehmannia glutinosa D (رقم الدفعة RFSD8401909016، نقاء 98.0%)، مادة مرجعية جليكوسيد ليونوروس (رقم الدفعة RFS-Y22002208010، نقاء 98.0%)، وسيستانشيسيد مادة مرجعية (دفعة رقم RFS-R05002009014، درجة نقاء 96.0٪ تم شراؤها جميعًا من Chengdu Ruifensidean Biotechnology Co., Ltd.؛ تم شراء المادة المرجعية للإكيناكوسيد (رقم الدفعة 111670-201907، النقاء 91.8٪) والمادة المرجعية للفيرباسكوسيد (رقم الدُفعة 11530-201914، النقاء 95.2٪) من معاهد فحص الأغذية والأدوية الصينية. تم جمع عينات ريهمانيا (SX1~SX4، HN1 وHN2) من مناطق إنتاج مختلفة (انظر الجدول 1)، منها SX4 وHN2 تم تبخيرها بواسطة SX1 وHN1 على التوالي، وتم جمع SX2 وSX3 من نفس منطقة الإنتاج. تم التعرف على جميع العينات على أنها أصلية من قبل سونغ بينغشون، كبير ممارسي الطب الصيني في معهد مقاطعة قانسو لمكافحة المخدرات.
الجدول 1: معلومات عينات السائل المنوي Rehmanniae
| شفرة | نوع المنتج | مصدر |
|---|---|---|
| SX1 | أصفر خام | مقاطعة شانشي، مقاطعة يونتشنغ |
| SX2 | أصفر مطبوخ | مقاطعة شانشي، مقاطعة يونتشنغ |
| SX3 | أصفر مطبوخ | مقاطعة شانشي، مقاطعة يونتشنغ |
| SX4 | أصفر مطبوخ | مقاطعة شانشي، مقاطعة يونتشنغ |
| HN1 | أصفر خام | مقاطعة خنان، مقاطعة ووغانغ |
| HN2 | أصفر مطبوخ | مقاطعة خنان، مقاطعة ووغانغ |
2.1 الظروف الكروماتوغرافية
تم استخدام عمود Shiseido CAPCELL PAK C18 (250.0 مم × 4.6 مم، 5 ميكرومتر)، وتم استخدام الأسيتونيتريل كمرحلة متنقلة A، وتم استخدام محلول حمض الفورميك بنسبة 0.1٪ كمرحلة متنقلة B. كانت شروط شطف التدرج: 0-3 دقيقة، 1%A؛ 3-9 دقيقة، 1%أ→5%أ؛ 9-24 دقيقة، 5%أ→35%أ؛ 24-35 دقيقة، 35% أ → 65% أ؛ 35-40 دقيقة، 65%أ←90%أ. الكشف عن الطول الموجي المتغير (0-24 دقيقة، 203 نانومتر؛ 24-40 دقيقة، 330 نانومتر). كان حجم الحقن 15 ميكرولتر من المحلول المرجعي و 20 ميكرولتر من محلول العينة.
2.2 إعداد الحل
2.2.1 إعداد الحل المرجعي
خذ الكميات المناسبة من المواد المرجعية الخمس المذكورة أعلاه، وأضف 70% ميثانول لتحضير محلول مرجعي مختلط بتركيز كتلة قدره 0.4 مجم/مل.
2.2.2 تحضير محلول الاختبار
قم بوزن حوالي 1.0 جم من مسحوق الرهمانية (تمر عبر المنخل رقم 2)، وقم بوزنه بدقة، ثم ضعه في دورق مخروطي مغلق، وأضف بدقة 25 مل من 70% ميثانول، وأغلقه، ووزنه، وعالجه بالموجات فوق الصوتية (قوة 300) W، التردد 50 كيلو هرتز) لمدة 30 دقيقة، اتركه يبرد إلى درجة حرارة الغرفة، ثم وزنه مرة أخرى، وتعويض الكتلة المفقودة باستخدام 70٪ ميثانول، وتصفية، وأخذ الترشيح للحصول عليه.
2.3 التحقيق المنهجي
2.3.1 التحقيق في الخصوصية
خذ الحل المرجعي المختلط تحت "2.2.1" ومحلول الاختبار (عينة SX1) تحت "2.2.2"، وقم بحقنه وقياسه وفقًا للشروط الكروماتوغرافية تحت "2.1". تظهر النتائج أن اللوني لعينة ريهمانيا يقدم ذروة كروماتوغرافية مع نفس وقت الاحتفاظ مثل المعايير المرجعية ل ريهمانيا جلوتينوسا د، ليونورين، إشيناكوسيد، سيستانش ديزيرتيكولا أ، و فيرباسكوسيد (انظر الشكل 1)، مما يشير إلى أن هذه الطريقة لها تأثير قوي. خصوصية.
2.3.2 التحقيق في العلاقة الخطية
أضف 70% ميثانول إلى المحلول المرجعي المختلط، وقم بتخفيفه 5 مرات، 10 مرات، 25 مرة، 50 مرة، 100 مرة، و250 مرة على التوالي، وحقن وقياس وفقا للشروط الكروماتوغرافية تحت "2.1". تم رسم المنحنيات القياسية مع التركيز الشامل لكل مرجع باعتباره المحور الأفقي (x) ومنطقة الذروة الكروماتوغرافية المقابلة باعتبارها المحور الرأسي (y). تظهر النتائج في الجدول 2، مما يشير إلى أن كل مكون لديه علاقة خطية جيدة ضمن نطاق تركيز الكتلة المقابل.
1. ريهمانيوسايد د؛ 2. ليونورايد. 3. إشيناكوسيد. 4. كاستانوسايد أ؛5. com.acteoside
الشكل 1: اللوني للتحقيق خصوصية
الجدول 2: العلاقة الخطية بين 5 مكونات في السائل المنوي الرحماني
| عنصر | معادلة المنحنى القياسي | R² | النطاق الخطي (ميكروجرام·مل⁻¹) |
|---|---|---|---|
| الهندباء د | y = 121.323x + 161.550 | 0.999 | 1.69 – 84.52 |
| يارو | y = 580.537x + 11.775 | 0.999 | 1.52 – 76.20 |
| فطريات الأناناس | y = 605.279x – 3.465 | 0.999 | 1.46 – 73.22 |
| خميرة اللحم أ | y = 645.319x – 3.327 | 0.999 | 1.63 – 81.72 |
| سكر زهرة مشعر | y = 739.071x – 6.534 | 0.999 | 1.43 – 71.66 |
2.3.3 التحقيق الدقيق
خذ محلول الاختبار (عينة SX1) تحت "2.2.2"، وقم بإجراء اختبار الحقن وفقًا للشروط الكروماتوغرافية تحت "2.1". حقن العينة 6 مرات بشكل مستمر، وتسجيل منطقة الذروة لكل مكون، وحساب منطقة الذروة RSD من ريهمانيا جلوتينوسا D، جليكوسيد موثورت، جليكوسيد إشنسا، جليكوسيد سيستانش A، و فيرباسكوسيد في عينة الاختبار لتكون 0. 46%، 0.12%، 0.85%، 0.48%، و0.82%، على التوالي، مما يشير إلى أن الجهاز يتمتع بدقة جيدة.
2.3.4 دراسة التكرار
تم تحضير ستة عينات من نفس عينة جذر الرهمانية (SX1) بالتوازي وفقاً للطريقة المذكورة في "2.2.2" وتم حقنها وتحديدها وفقاً للشروط الكروماتوغرافية في "2.1". كانت RSDs لمحتويات جليكوسيد جذر الريهمانية D وجليكوسيد نبات الأم وجليكوسيد إشنسا وجليكوسيد سيستانش A وverbascoside في العينات الستة 0.46%، 0.69%، 1.42%، {{ 12}}.48% و1.58% على التوالي، مما يشير إلى أن الطريقة تتمتع بقابلية تكرار جيدة.
2.3.5 دراسة الاستقرار
خذ محلول الاختبار (عينة SX1) ضمن "2.2.2" وقم بحقنه وقياسه وفقًا للشروط الكروماتوغرافية ضمن "2.1" عند 0 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h, 1{{ 15}} ح، 12 ح، 18 ح، و 24 ح، على التوالي. كانت RSD لمناطق ذروة rehmannia glutinosa D، وglycoside Motherwort، وechinacoside، وcistanche glycoside A، وverbascoside 0.94%، 1.04%، 0.73% و 0.83% و 0.71% على التوالي، مما يشير إلى أن محلول الاختبار يتمتع بثبات جيد خلال 24 ساعة.
2.3.6 معدل استرداد العينة
{{0}}. تم وزن 5 جم من عينة جذر الرهمانية (SX1) مع محتويات معروفة من 5 مكونات بدقة في دورق مخروطي مغلق، وأضيفت 6 أجزاء متوازية، وأضيفت 5 محاليل مرجعية بتركيزات معينة على التوالى. تم تحضير العينات وفق الطريقة تحت "2.2.2" وتم حقن العينات وقياسها حسب الشروط الكروماتوغرافية تحت "2.1". تم حساب معدل الاسترداد، وتظهر النتائج في الجدول 3. وكان متوسط معدل استرداد العينة لكل مكون 96.5%~98.6%، وكان RSD 0.73%~1.52%، مما يشير إلى أن الطريقة تتمتع بدقة جيدة.
