Gao-Zi-Yao يحسن وظيفة التعلم والذاكرة لدى الجرذان القديمة المصابة بارتفاع ضغط الدم التلقائي - الجزء 2

حيوانات تجريبية

تم شراء فئران ارتفاع ضغط الدم التلقائي (SHR) البالغة من العمر اثني عشر شهرًا وثمانية أسابيع من مركز نانجينغ لنماذج الحيوانات.

هناك علاقة قوية بين 8-الذكور بعمر الأسبوع والذاكرة. خلال هذه الفترة، يتطور دماغ الكائن الذكر بشكل سريع، وتتزايد الروابط بين خلاياه العصبية تدريجياً، مما يؤثر بدوره على تطور ذاكرته.

تظهر الأبحاث أن ذاكرة المخلوقات الذكورية تستمر في التحسن مع تقدم العمر. وهذا ليس له تأثير كبير على بقائهم على قيد الحياة وتكاثرهم فحسب، بل يساعدهم أيضًا على التكيف بشكل أفضل مع البيئة والتعامل مع التحديات الجديدة.

ولذلك، ينبغي لنا أن نشجع الشباب الذكور بنشاط على المشاركة في مجموعة متنوعة من الأنشطة المفيدة، مثل حل الألغاز، وتعلم مهارات جديدة، واستكشاف مجالات جديدة. تحفز هذه الأنشطة أدمغتهم، مما يسمح لهم بالتطور بشكل أسرع وتحسين قدرات الذاكرة لديهم.

وفي الوقت نفسه، يجب علينا أيضًا توفير بيئة وأجواء مناسبة للمخلوقات الذكورية الشابة. إن جعلهم يشعرون بالأمان والقرب يمكن أن يعزز نمو دماغهم ويحسن ذاكرتهم.

باختصار، يجب علينا أن نفعل كل ما في وسعنا لمساعدة الشباب الذكور على تحسين ذاكرتهم حتى يصبحوا مخلوقات أكثر ذكاءً وأكثر ثقة وقدرة. ولا يؤدي هذا إلى تطورهم الشخصي فحسب، بل يؤدي أيضًا إلى ازدهار وبقاء النوع بأكمله. يمكن ملاحظة أننا بحاجة إلى تحسين الذاكرة، ويمكن أن تحسن Cistanche deserticola الذاكرة بشكل كبير، لأن Cistanche deserticola لها تأثيرات مضادة للأكسدة ومضادة للالتهابات ومضادة للشيخوخة، والتي يمكن أن تساعد في تقليل تفاعلات الأكسدة والالتهابات في الدماغ، وبالتالي حماية الخلايا. صحة الجهاز العصبي. بالإضافة إلى ذلك، يمكن لـ Cistanche deserticola أيضًا تعزيز نمو وإصلاح الخلايا العصبية، وبالتالي تعزيز اتصال الشبكات العصبية ووظيفتها. يمكن أن تساعد هذه التأثيرات في تحسين الذاكرة والتعلم وسرعة التفكير، وقد تمنع أيضًا تطور الخلل المعرفي والأمراض التنكسية العصبية.

انقر فوق معرفة المكملات الغذائية لتعزيز الذاكرة

في هذا النموذج، يبدأ ارتفاع ضغط الدم في التطور عند عمر 4 أشهر مع ظهور التغيرات المرتبطة بارتفاع ضغط الدم في الأوعية الدموية الدقيقة في الدماغ عند عمر 6 أشهر [37].

تم إيواء الفئران في ظروف مثالية مع النظافة القياسية، وتم الاحتفاظ بها عند درجة حرارة 25 درجة مع دورة الضوء / الظلام 12/12، وتم إطعامها بطعام الجرذ القياسي والماء حسب الرغبة.

تمت الموافقة على جميع الإجراءات وتنفيذها وفقًا للمبادئ التوجيهية لرعاية واستخدام الحيوانات التي وضعتها جامعة سوتشو، وهو ما يتوافق مع تقريرنا السابق [35].

تم إجراء التجارب وفقًا للمبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة لاستخدام حيوانات المختبر (NIH، المنشور رقم 85-23، المنقح عام 1996). تم الإبلاغ عن الدراسة الحالية من خلال إرشادات ARRIVE.

تم تطبيق SHR البالغ من العمر ثمانية أسابيع للتحكم في الشيخوخة (SHR-Young، n =10). تم علاج الفئران البالغة من العمر اثني عشر شهرًا باستخدام أو بدون Gao-Zi-Yao للمياه المقطرة (Old SHR-C، n=10)، جرعة منخفضة (Old SHR-L، n=10)، جرعة متوسطة (Old SHR-M، n=10)، جرعة عالية (Old SHR-H، n=10) عن طريق تغذية المعدة.

جرعات منخفضة ومتوسطة وعالية من Gao-Zi-Yao تساوي 1/2-، 1-، جرعات ثلاثة أضعاف للتطبيق السريري للمريض محسوبة وفقًا لمساحة سطح الجسم. تم إذابة Gao-Zi-Yao في 5 مل من الماء المقطر قبل الاستخدام وتم تناول منتجات الألبان لمرة واحدة لمدة 4 أسابيع.

تمت مراقبة ضغط الدم ومعدل ضربات القلب كل أسبوع باستخدام طريقة الكفة الذيلية، كما تمت مراقبة وزن الجسم كل أسبوع وفقًا لملاحظتنا السابقة [35].

بعد 4 أسابيع، تم إجراء تجربة متاهة موريس المائية، وتم التضحية بالفئران تحت التخدير بواسطة بنتوباربيتال الصوديوم (50 ملغم/كغم من وزن الجسم)، وتم جمع أنسجة الحصين لمزيد من التحليل. تمت الموافقة على جميع البروتوكولات التجريبية من قبل لجنة ترخيص الأخلاقيات بجامعة سوشو.

تجربة متاهة موريس المائية

تم إجراء تجربة متاهة موريس المائية (BW-MWM101، Shanghai Bio-will Co.، Ltd.، Shanghai، China) كما هو موضح سابقًا مع بعض التعديلات [38]. تم التخطيط للاختبار لمدة 6 أيام، الأيام من 1 إلى 5 كانت لفترة التدريب، واليوم السادس لنتائج الاختبار.

تلقت الفئران تدريبًا لمدة دقيقتين من منتجات الألبان، وسجلت وقت الصعود على المنصة باعتباره وقت الكمون. في اليوم السادس تمت إزالة المنصة. تم وضع الفئران في أبعد مسافة وتم تسجيل مسار السباحة لمدة دقيقتين.

تم حساب معلمات وظيفة التعلم والذاكرة بواسطة البرنامج.

قياس مستويات NO والعوامل الالتهابية في الدم بواسطة ELISA

مستويات مصل NO (رقم الكتالوج: S0023)، IL-1 (رقم الكتالوج: A301BH80153)، IL-2 (رقم الكتالوج: A31038348)، IL-6 (رقم الكتالوج: A30681042)، تم قياس وTNF- (رقم الكتالوج: A38280855) باستخدام مجموعات ELISA المتاحة تجاريًا (BiotechnologyCo., Ltd. Shanghai لأبحاث الإنزيمات. شنغهاي، الصين). تم تنفيذ جميع الخطوات وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة.

تلطيخ نيسل

تم عزل أنسجة الحصين الجرذية وتثبيتها وجزءا لا يتجزأ من البارافين ثم حضنت في محلول تلطيخ أزرق طولويدين 1٪ لمدة 5-10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. تم شطف عشرة أقسام في الماء المقطر، ونقعها في 95٪ من الإيثانول لمدة 5-30 دقيقة، وتجفيفها في 100٪ من الإيثانول.

بعد التجفيف، تم وضع الشريحة في الزيلين وغطاءها منزلق باستخدام وسط راتنجي. تمت ملاحظة وتحليل عدد الخلايا العصبية في مناطق CA1 وCA2 والتلفيف المسنن في الحصين باستخدام برنامج تحليل ImageJ.

لطخة غربية للتعلم والبروتينات المرتبطة بالذاكرة

تم إجراء لطخة غربية للتعلم والبروتينات المرتبطة بالذاكرة كما هو موضح في تقريرنا السابق مع بعض التعديلات [39].

تم تجانس أنسجة الحصين باستخدام المخزن المؤقت RIPA (5 0 مم تريس، 150 ملي كلوريد الصوديوم، 1٪ Triton-X -100، الرقم الهيدروجيني 7.0) الذي يحتوي على فلوريد فينيل مينثانيسولفونيل (R&D Systems Inc.، Minneapolis، US). تم الطرد المركزي للمتجانسات عند 12,000 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات.

تم فصل بروتينات الخلايا بواسطة SDS-PAGE ونقلها إلى أغشية PVDF (Hybond TM-ECL؛ AmershamPharmacia Biotech، Inc.). تم حصر الأغشية في حليب خالي الدسم بنسبة 5% في PBS و0.1% توين-20 عند درجة حرارة الغرفة.

تم بعد ذلك تحضين البقع باستخدام الجسم المضاد الأولي: مستقبل مضاد الغلوتامات 1 (1:1000، Abcam, Inc.، رقم الكتالوج: ab183797)، الجسم المضاد AntiNMDAR2B (1:1000، Abcam، Inc.، رقم الكتالوج: ab28373)، مضاد الفوسفو - الجسم المضاد CaMKII (1:1000، Abcam, Inc.، رقم الكتالوج: ab171095)، الجسم المضاد Antiphospho-CREB (1:1000، Abcam، Inc.، رقم الكتالوج: 32096) أو مضاد GAPDH (Santa Cruz Biotech، Inc.، رقم الكتالوج: الشوري -47724).

بعد ذلك، تم تحضين الأغشية لمدة ساعة واحدة مع جسم مضاد ثانوي (HRP مترافق مع مضاد للأرنب Ig-G، 1: 2000، Abcam، Inc. رقم الكتالوج: ab205718). تم بعد ذلك غسل الأغشية ثلاث مرات لمدة 15 دقيقة باستخدام TBS-T لإزالة الأجسام المضادة الزائدة قبل الحضانة لمدة دقيقة واحدة باستخدام الكواشف الكيميائية (ECL، R&D Systems Inc.، Minneapolis، MN، USA).

علاوة على ذلك، تم الكشف عن النطاقات المناعية بواسطة نظام تحليل الهلام الكهربائي (GL2200 Pro، Crestream Inc. USA). تم تحليل شدة النطاقات بواسطة برنامج Image J. وتم تطبيع كمية البروتينات المستهدفة بواسطة تعبير GAPDH [39].

تحليل احصائي

تم استخدام برنامج SPSS 18.0 للتحليل الإحصائي. يتم تقديم البيانات كما تم تحليل البيانات المجمعة المتوسطة ± SEM باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه متبوعًا باختبار Student-Newman-Keuls. تم اعتبار القيمة P < 0.05 ذات دلالة إحصائية وفقًا لتقريرنا السابق [35].

نتائج

ضغط الدم الانقباضي (SBP)، ومعدل ضربات القلب، ووزن الجسم بين SHR الشاب وSHR القديم

أظهر Yong SHR انخفاضًا في ضغط الدم الانقباضي في الأسبوعين الأولين مقارنةً بـ SHR القديم، ثم زاد إلى عدم وجود فرق بين المجموعتين في الأسابيع الثلاثة اللاحقة (الشكل 2A).

على العكس من ذلك، لم يكن هناك فرق في معدل ضربات القلب بين المجموعتين في الأسبوعين الأولين، ثم زاد معدل ضربات القلب لدى الشباب بشكل ملحوظ مقارنة مع معدل ضربات القلب القديم في الأسابيع الثلاثة اللاحقة (الشكل 2ب). أظهر الشباب SHR انخفاض وزن الجسم مقارنة مع SHR القديم خلال فترة المراقبة بأكملها (الشكل 2C).

معلمات متاهة موريس المائية بين SHR الصغير و SHR القديم

لتحديد التعلم والذاكرة المعتمدين على الحصين، تم إجراء تجربة متاهة موريس المائية. أظهر SHR القديم زمنًا أطول للهروب في الأيام الأربعة الأولى مقارنةً بـ SHR الشاب (الشكل 3A).

كانت أوقات عبور الربع المستهدف أقل في SHR القديم منها في SHR الشاب (الشكل 3B).

كانت النسبة المئوية للوقت في ربع المنصة المستهدفة أقصر في SHR القديم مقارنةً بـ SHR الشاب (الشكل 3C). كانت النسبة المئوية لطول المسار في الربع أيضًا أقصر في SHR القديم مقارنةً بـ SHR القديم (الشكل ثلاثي الأبعاد). تشير هذه النتائج إلى أن SHR القديم يعاني من ضعف في الوظيفة الإدراكية.

عدد الخلايا العصبية في الحصين بين SHR الشاب و SHR القديم

تم حساب عدد الخلايا العصبية في مناطق مختلفة من الحصين بواسطة تلطيخ نيسل. أظهرت النتائج أن هناك عددًا أقل من الخلايا العصبية في مناطق CA1 وCA2 وDG في SHR القديمة مقارنةً بمناطق SHR الصغيرة (الشكل 4).

التعبيرات البروتينية المرتبطة بالتعلم والذاكرة في الحصين بين SHR الشاب وSHR القديم

أظهرت نتائج اللطخة الغربية أن التعبير عن البروتينات المرتبطة بالتعلم والذاكرة (GluR1 وNMDAR 2B وphosphorylated-CaMK II وphosphorylated-CREB) في الحصين القديم SHR كان أقل من ذلك في الحصين SHR الصغير (الشكل 5).

تأثير Gao-Zi-Yao على SBP ومعدل ضربات القلب ووزن الجسم في SHR القديم

تم تحليل تأثير Gao-Zi-Yao على ضغط الدم الانقباضي. العلاج بجرعة منخفضة من Gao-Zi-Yao انخفض بشكل ملحوظ ضغط الدم الانقباضي في SHR القديم من الأسبوع الثاني إلى الأسبوع الرابع مقارنة مع مجموعة التحكم SHR القديمة، الجرعات المتوسطة والعالية من Gao-Zi-Yao انخفضت بشكل ملحوظ SBP في SHR القديم من الأسبوع الأول إلى الأسبوع الأول. الأسبوع الرابع مقارنة بالتحكم القديم SHR (الشكل 6A). تشير نتائج Tese إلى أن Gao-Zi-Yao يمارس تأثيرًا مضادًا لارتفاع ضغط الدم في SHR القديم.

قمنا أيضًا بمقارنة البيانات المتعلقة بتأثيرات معدل ضربات القلب لـ Gao-Zi-Yaoon ووزن الجسم. أظهرت بياناتنا أنه لم يكن هناك اختلاف كبير في معدل ضربات القلب ووزن الجسم بين جميع المجموعات خلال فترة المراقبة بأكملها (الشكل 6 ب، ج).

تأثير Gao-Zi-Yao على مستويات مصل NO وIL-1 وIL-2 وTNF- في SHR القديم

أدى العلاج بجرعات متوسطة وعالية من GAO-ZIYAO إلى زيادة مستويات NO في المصل مقارنة بالمستويات الموجودة في مجموعة التحكم SHR (الشكل 7A). العلاج مع جميع الجرعات المختبرة من GAO-ZI-YAO قلل من مستويات المصل لـ IL-1، IL-2 مقارنة بالمستويات الموجودة في مجموعة التحكم SHR (الشكل 7B، C)؛ ومع ذلك، فقط الجرعة العالية من GAO-ZI-YAO قمعت مستويات المصل لـ TNF- (الشكل 7D).

توضح هذه النتائج أن GAO-ZI-YAO يمكنه تنظيم الإجهاد التأكسدي والالتهابات.

For more information:1950477648nn@gmail.com