يمارس الجلوكوز تأثيرًا مضادًا للميلانين عن طريق التثبيط غير المباشر للتيروزيناز في الخلايا الصباغية وما يعادله من جلد الإنسان

خلاصة:

السكريات موجودة في كل مكان في الكائنات الحية وهي مكونات تجميلية معروفة لترطيب البشرة بأقل آثار جانبية. غالبًا ما يستخدم الجلوكوز ، وهو سكر بسيط تستخدمه الخلايا الحية كمصدر للطاقة ، في منتجات العناية بالبشرة. أظهرت العديد من التقارير أن السكر والمركبات المرتبطة بالسكر لها تأثيرات مضادة للميلانين على الخلايا الصباغية. ومع ذلك ، فإن الآلية الجزيئية الأساسية التي يمنع الجلوكوز من خلالها تخليق الميلانين غير معروفة ، على الرغم من استخدام الجلوكوز كعنصر مبيض ومرطب في مستحضرات التجميل. هنا ، وجدنا أن الجلوكوز قلل بشكل كبير من محتوى الميلانين في خلايا B16 المحفزة للهرمون الصباغى (MSH) والخلايا الصبغية البشرية الطبيعية ذات الصبغة الداكنة مع عدم وجود علامات على السمية الخلوية.

علاوة على ذلك ، أظهر العلاج الموضعي للجلوكوز فعاليته في التبييض من خلال التصوير الفوتوغرافي وتلطيخ Fontana-Masson (F&M) والفحص المجهري متعدد الفوتونات في نموذج مصطبغ ثلاثي الأبعاد للجلد البشري ، MelanoDerm. ومع ذلك ، فإن الجلوكوز لم يغير التعبير الجيني أو مستويات البروتين للبروتينات الميلانينية الرئيسية في الخلايا الصباغية. في حين أن الجلوكوز قلل بشكل فعال من نشاط التيروزيناز داخل الخلايا في الخلايا الصباغية ، إلا أنه لم يقلل من نشاط التيروزيناز في الفطر في نظام تجريبي خالٍ من الخلايا. ومع ذلك ، تم استقلاب الجلوكوز إلى حمض اللاكتيك ، والذي يمكن أن يثبط نشاط التيروزيناز بقوة. وهكذا توصلنا إلى أن الجلوكوز يثبط بشكل غير مباشر نشاط التيروزيناز من خلال التحويل إلى حمض اللاكتيك ، موضحين آثاره المضادة للميلانين في الخلايا الصباغية.

التيروزيناز التبييض هو إنزيم رئيسي في تخليق الميلانين. إجمالي جليكوسيدات Cistanche deserticola - مركب معزول من طب الأعشاب الصيني الطبيعي يمكن لـ Cistanche deserticola تنظيم نشاط التيروزيناز بشكل كبير. التأثير هو تثبيط تنافسي قابل للانعكاس ، والذي يمكن أن يمنع بشكل فعال تصبغ الجلد ، وهو تأثير تبييض رائع للجمال. أظهرت البيانات التجريبية أنه: عندما كان تركيز إجمالي جليكوسيدات Cistanche deserticola في نطاق 0. 5-3. 0 mg · mL -1 ، كان له مثبط تم العثور على تأثير على نشاط التيروزيناز ، وتم العثور على علاقة جيدة بين الجرعة والتأثير في نطاق 0. 5-2. 0 ملغم · مل -1.

انقر لمعرفة ما هو cistanche

الكلمات الدالة:

تكون الميلانين. سكر؛ الجلوكوز. التيروزيناز. ما يعادل الجلد البشري

1 المقدمة

تشكل الميلانين عملية إنتاج الميلانين وهي ضرورية لحماية الجلد. يمتص الميلانين الأشعة فوق البنفسجية (UV) ويحمي الجلد من الآثار الضارة للأشعة فوق البنفسجية والجذور الحرة [1]. ومع ذلك ، نظرًا لأن الإنتاج المفرط للميلانين يسبب فرط تصبغ مثل النمش والنمشة ، والتي يمكن اعتبارها غير مخدرة ، فقد تم تخصيص الكثير من الأبحاث لإيجاد مكونات فعالة لإزالة الصباغ لمستحضرات التجميل أو الأدوية [2-4].

السكر مرطب قوي لترطيب البشرة ويستخدم كمكون تجميلي لترطيب البشرة بأقل آثار جانبية. بالإضافة إلى ذلك ، تؤثر السكريات والعوامل المرتبطة بالسكر على تكوين الميلانين [5،6]. يمكن تغيير الارتباط بالجليكوزيل في التيروزيناز ، وهو إنزيم رئيسي يشارك في تخليق الميلانين ، مما يثبط نشاطه التحفيزي ويسرع من تحلله [7]. تم تسليط الضوء على دور السكريات في تكوين الميلانين من خلال الدراسات التي تبحث في تأثير الارتباط بالجليكوزيل على النمط الظاهري لتصبغ الخلايا الصباغية ودور مخلفات السكر في النشاط التحفيزي للتيروزيناز [5-7]. أفادت بعض الدراسات أن مشتقات السكر يمكن أن تمنع نضوج التيروزيناز ، مما يؤثر على الارتباط بالجليكوزيل. على سبيل المثال ، N-acetylglucosamine (NAG) ، وهو سداسي أميني يتم إنتاجه فسيولوجيًا عن طريق إضافة مجموعة أمينية إلى الجلوكوز ، يعطل ارتباط التيروزيناز بالجليكوزيل ، مما يؤدي إلى تأثيرات إزالة التصبغ في جلد خنزير غينيا وجلد الإنسان [8].

بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت الدراسات الحديثة أن المركبات المرتبطة بالسكر تمنع تعبير أو تنشيط التيروزيناز وكذلك تغير ارتباطه بالجليكوزيل. على سبيل المثال ، قمنا بتقييم فعالية التبييض لحمض الجالاكتورونيك (GA) ، وهو حمض السكر الذي هو شكل مؤكسد من الجالاكتوز والمكون الرئيسي للبكتين. يمارس حمض الجالاكتورونيك تأثيرًا مبيضًا من خلال تنظيم نشاط التيروزيناز والتعبير عنه في خلايا سرطان الجلد الفأري B16 وما يعادله من جلد الإنسان [9]. في تقرير آخر ، أظهر نوع جديد من السكريات قليلة السكاريد الحلقية ، يُعرف باسم nitrosyl nigerose (CNN) ، تأثير تثبيط مباشر ضعيف ولكنه مهم على النشاط الإنزيمي للتيروزيناز ، مما يشير إلى آلية واحدة محتملة لنقص التصبغ [10]. على غرار نضج التيروزيناز عن طريق الارتباط بالجليكوزيل المناسب ، يمكن أن يكون تعبير أو نشاط CNN هدفًا للعوامل المضادة لتولد الميلانين [11]. ومع ذلك ، فإن العديد من العوامل المضادة لتكوين الميلانين لها آثار جانبية شديدة ، مثل البهاق [12،13]. لذلك هناك اهتمام كبير بمركبات أكثر أمانًا لإزالة الصباغ.

هنا ، قمنا بالتحقيق في التأثيرات المضادة للجلوكوز المضادة للميلانين على خلايا الورم الميلانيني B16 والخلايا الصباغية البشرية الطبيعية. بالإضافة إلى ذلك ، قمنا بفحص لون الأنسجة وحالة البشرة باستخدام تلطيخ قسم الأنسجة لما يعادل جلد الإنسان. بناءً على النتائج التي توصلنا إليها ، نقترح أن تأثير التبييض للجلوكوز يعتمد على إنتاج حمض اللاكتيك ، مما يؤدي إلى تعطيل إنزيم التيروزيناز.

2. النتائج

2.1. الفعالية المضادة للميلانوجين للجلوكوز في B16 و NHMs

للتحقيق في تأثير الجلوكوز المضاد للميلانين ، استخدمنا نوعين من الخلايا الصباغية ، خلايا سرطان الجلد B16 (خط خلايا الورم الميلانيني الفئران) والخلايا الصباغية البشرية الطبيعية (NHMs). أولاً ، حددنا ما إذا كان الجلوكوز سامًا لخلايا B16. لم يُظهر الجلوكوز أي سمية خلوية بتركيزات تصل إلى 100 ملي مولار في خلايا B16 ، كما هو موضح في الشكل 1 أ. بناءً على بيانات السمية الخلوية ، عولجت خلايا B16 بتركيزات مختلفة من الجلوكوز لمدة 72 ساعة في وجود الهرمون المنبه للخلايا الصباغية (MSH) ، وهو محفز لتكوين الميلانين. كما هو مبين في الشكل 1 ب ، ينظم الجلوكوز بشكل واضح وبشكل ملحوظ محتوى الميلانين داخل الخلايا بطريقة تعتمد على الجرعة. تم استخدام حمض كوجيك (KA) كمركب مرجعي لمكافحة تكون الميلانين لأنه غالبًا ما يستخدم كمكون تجميلي لتفتيح البشرة [1،3،4]. كان لون lysates في الخلايا المعالجة بالجلوكوز أفتح من لون خلايا التحكم (الشكل 1C).

بالإضافة إلى ذلك ، أكدنا أن كمية الميلانين التي تفرز في وسائط الثقافة انخفضت ولون الوسائط سطع (الشكل 1 د). بعد ذلك ، درسنا التأثير المضاد للميلانوجين للجلوكوز على NHMs الداكن اللون. لم يكن الجلوكوز بتركيزات تصل إلى 100 ملي سامًا للخلايا لمدة تصل إلى أربعة أيام (الشكل 1E). عندما تم تحديد محتوى الميلانين بعد معالجة الجلوكوز في NHMs لمدة 4 أيام ، وجدنا أن محتوى الميلانين انخفض بطريقة تعتمد على الجرعة (الشكل 1F). تشير هذه النتائج مجتمعة إلى أن الجلوكوز يثبط تخليق الميلانين في الخلايا الصباغية.

الشكل 1. تأثير الجلوكوز على خلايا B16 والخلايا الصباغية البشرية الطبيعية (NHMs). (أ) تأثير الجلوكوز على صلاحية خلايا B16. (ب) محتويات الميلانين داخل الخلايا في خلايا B16 المحفزة بـ MSH. تم تحديد محتويات الميلانين داخل الخلايا باستخدام محللات الخلية ، كما هو موضح في قسم الطرق. (ج) لون الخلية المحللة. (د) تم تحديد محتويات الميلانين خارج الخلية باستخدام الوسائط المستنبتة التي تحتوي على الميلانين المفرز بعد العلاج المشترك للجلوكوز و- MSH لمدة 72 ساعة. يشير KA إلى حمض الكوجيك (1 0 0 ميكروغرام / مل) ، والذي تم استخدامه كمركب مرجعي. تظهر الصورة ألوان الوسائط الثقافية. (هـ) تأثير الجلوكوز على جدوى NHMs. (و) آثار الجلوكوز على تخليق الميلانين في NHMs. عولجت NHMs بتركيزات الجلوكوز المحددة لمدة 4 أيام ، وغسلها ، وغسلها باستخدام هيدروكسيد الصوديوم لتحديد محتويات الميلانين داخل الخلايا. تم تقدير محتويات الميلانين عن طريق الامتصاص عند 4 0 5 نانومتر وطبيعتها بمحتويات البروتين الكلية. يتم التعبير عن البيانات على أنها متوسط ​​± SD لثلاثة قياسات مستقلة على الأقل (* p <0.05 ، ** p <0.01 ، *** p <0.001).

2.2. تأثير تبييض الجلوكوز على مكافئ ثلاثي الأبعاد لبشرة الإنسان

لتحديد قدرة الجلوكوز المضادة للميلانين بشكل أكبر ، استخدمنا نموذج جلد بشري ثلاثي الأبعاد مصطبغ ، MelanoDerm. كما هو موضح في قسم المواد والطرق ، تم تطبيق الجلوكوز موضعيًا على MelanoDerm لمدة 18 يومًا ، وتم تحديد قابلية بقاء الخلية عن طريق مقايسة CCK -8. كما هو مبين في الشكل 2 أ ، لم يلاحظ أي سمية خلوية للأنسجة بعد علاج الجلوكوز لمدة 18 يومًا. تم تقييم تغيرات لون الأنسجة عن طريق التصوير الفوتوغرافي. كما هو مبين في الشكل 2 ب ، كانت الأنسجة المعالجة بالجلوكوز أفتح في اللون من الأنسجة المعالجة بالفوسفات المخزنة بالمحلول الملحي (PBS). بالإضافة إلى ذلك ، أظهر تلطيخ الهيماتوكسيلين ويوزين (H&E) أن الجلوكوز لم يتسبب في انهيار الأنسجة ، بينما أظهر تلطيخ فونتانا-ماسون (F&M) أن الجلوكوز قلل من عدد الخلايا الصباغية مفرطة التصبغ (كما هو موضح بالسهام) في الطبقة القاعدية (الشكل 2C) .

لمزيد من التحقيق في التغييرات في محتوى الميلانين ، قمنا بمقارنة إشارات التألق التلقائي للميلانين في طبقات الخلايا الصباغية للأنسجة المعالجة بـ PBS والأنسجة المعالجة بالجلوكوز باستخدام الفحص المجهري للإثارة ثنائية الفوتون (TPEF) ، كما هو موضح في الشكل 2 د. أظهر تحليل هذه الصور أن حجم الميلانين انخفض بنسبة 36 بالمائة تقريبًا وأن شدة إشارة TPEF للميلانين في المنطقة الغنية بالخلايا الصباغية قد انخفضت بنسبة 38 بالمائة تقريبًا في الأنسجة المعالجة بالجلوكوز مقارنة بالأنسجة المعالجة بـ PBS.

الشكل 2. تأثير الجلوكوز على ما يعادل الجلد البشري ، MelanoDerm. (أ) جدوى معادلات جلد الإنسان المعالجة بالجلوكوز. (ب) تمت معالجة معادلات جلد الإنسان (MelanoDerm ؛ n=3) موضعيًا بالجلوكوز لمدة 18 يومًا ، ثم تم تصويرها. تشير قيمة ∆L إلى درجة الإضاءة مقارنة بالأنسجة المعالجة ببرنامج تلفزيوني. (ج) تلطيخ H&E و F&M لأقسام الأنسجة. تم إصلاح الشرائح في محلول فورمالديهايد ودمجها في شمع البارافين للتلطيخ (شريط مقياس ، 5 {{1 0} ميكرومتر). تشير الأسهم السوداء إلى الخلايا الصباغية المصطبغة. (د) تم إجراء تصوير الميلانين (200 × 200 × 60 ميكرومتر) لمكافئات جلد الإنسان باستخدام الفحص المجهري TPEF. تشير إشارات Pseudocolored (الحمراء) إلى الميلانين (شريط مقياس ، 50 ميكرومتر). تشير الرسوم البيانية إلى القياس الكمي لحجم الميلانين وإشارات TPEF. يتم التعبير عن البيانات على أنها متوسط ​​± SD لثلاثة قياسات مستقلة على الأقل (* p <0.05 ، *** p <0.001).

2.3 تأثير الجلوكوز على التعبير عن البروتينات الميلانينية في الخلايا الصباغية

بعد ذلك ، لتوضيح آلية إزالة تصبغ الجلوكوز في الخلايا الصباغية ، قمنا بتقييم تأثيرها على التعبير عن الإنزيمات الصبغية مثل التيروزيناز والتيرب -1 في خلايا B16 و NHMs. عولجت خلايا B16 بالجلوكوز للأوقات المحددة بوجود -MSH. بعد ذلك ، تم تحديد مستويات البروتين من التيروزيناز والتيرب -1 بمقايسة لطخة ويسترن (الشكل 3 أ). لم تنخفض مستويات التعبير عن التيروزيناز والتيرب -1 بواسطة الجلوكوز في أي وقت. علاوة على ذلك ، لم تتأثر مستويات نسخة التيروزيناز بالجلوكوز في خلايا B16 المحفزة بـ MSH (الشكل 3 ب). على غرار خلايا B16 ، لم يتم تثبيط مستويات البروتين من التيروزيناز ، و Tyrp {12}} ، و MITF بواسطة الجلوكوز (الشكل 3C) في خلايا NHM المعالجة بالجلوكوز ، كما أن مستويات mRNA من التيروزيناز والتيرب -1 لم تكن كذلك انخفض ، بل زاد قليلاً عن طريق الجلوكوز (الشكل 3D).

الشكل 3. تأثير الجلوكوز على التعبير عن البروتينات الميلانينية في خلايا B16 و NHMs. (أ ، ب) خلايا B16 عولجت بـ -MSH للوقت المحدد في وجود أو عدم وجود 20 ملي جلوكوز. بعد ذلك ، تم إجراء فحوصات اللطخة الغربية (A) و qRT-PCR (B). (ج) NHMs عولجت مع تركيزات الجلوكوز المشار إليها لمدة 48 ساعة. بعد ذلك ، تم إجراء فحص لطخة ويسترن. (D) عولجت NHMs مع الوقت المحدد في وجود 50 ملي جلوكوز. بعد ذلك ، تم إجراء فحوصات qRT-PCR. يتم التعبير عن البيانات على أنها متوسط ​​± SD لثلاثة قياسات مستقلة على الأقل.

2.4 تأثير الجلوكوز على نشاط التيروزيناز

لتحديد آلية عمل الجلوكوز بشكل أكبر ، اختبرنا ما إذا كان له تأثير مثبط على نشاط التيروزيناز في الفطر. كما هو مبين في الشكل 4 أ ، وجدنا أن الجلوكوز ليس له تأثير مثبط على نشاط التيروزيناز في الفطر ، مما يشير إلى أن الجلوكوز لا يؤثر بشكل مباشر على نشاط التيروزيناز. أجرينا بعد ذلك فحصًا إجماليًا لنشاط التيروزيناز داخل الخلايا باستخدام محللات الخلايا المعالجة بالجلوكوز من كل من خلايا B16 و NHMs. ومن المثير للاهتمام ، تم تثبيط نشاط التيروزيناز داخل الخلايا بطريقة تعتمد على الجرعة في خلايا B16 المعالجة بالجلوكوز في وجود -MSH (الشكل 4 ب). في NHMs ، منع الجلوكوز أيضًا نشاط التيروزيناز داخل الخلايا (الشكل 4C). تدعم هذه البيانات احتمال أن يؤدي الجلوكوز بشكل غير مباشر إلى تعطيل التيروزيناز في الخلايا الصباغية.

الشكل 4. تأثير الجلوكوز على نشاط التيروزيناز. (أ) تأثير الجلوكوز على نشاط التيروزيناز الفطر في نظام خالٍ من الخلايا. (ب ، ج) فحص نشاط التيروزينات الخلوية. (ب) تم علاج خلايا B16 بتركيزات الجلوكوز المحددة لمدة 24 ساعة. بعد ذلك ، تم إجراء فحص نشاط التيروزيناز الخلوي ، كما هو موضح في قسم الطرق. (C) NHMs عولجت بـ 5 ملم جلوكوز 0 في الوقت المحدد. بعد ذلك ، تم إجراء فحص نشاط التيروزيناز الخلوي ، كما هو موضح في قسم الطرق. تم تطبيع نشاط التيروزيناز الخلوي من خلال محتوى البروتين الكلي. يتم التعبير عن البيانات على أنها متوسط ​​± SD لثلاثة قياسات مستقلة على الأقل (* p <0. 0 5 ، ** p <0.01 ، *** p <0.001).

2.5 تثبيط التيروزيناز عن طريق إنتاج حمض اللاكتيك في الخلايا الصباغية المعالجة بالجلوكوز

يتم تحويل الجلوكوز إلى اللاكتات المستقلب الخلوي ، وهو حمض اللاكتيك في محلول والذي تم الإبلاغ عن فعاليته في علاج الآفات الصباغية [14 ، 15]. لذلك ، افترضنا أن الجلوكوز يتحول إلى حمض اللاكتيك في الخلايا الصباغية وأن زيادة مستويات حمض اللاكتيك تمنع تكون الميلانين من خلال تثبيط إنزيم التيروزيناز. لتقييم هذه الفرضية ، قمنا أولاً بتقييم إنتاج حمض اللاكتيك في الوسائط من الخلايا الصباغية المعالجة بالجلوكوز. كما هو متوقع ، قام الجلوكوز بتنظيم محتوى حمض اللاكتيك بشكل كبير في الوسائط المستزرعة بخلايا B16 (الشكل 5 أ). بالإضافة إلى ذلك ، نظرًا لأنه من المعروف أن حمض اللاكتيك يثبط نشاط التيروزيناز بشكل مباشر [15] ، قمنا بتقييم ما إذا كان حمض اللاكتيك يثبط نشاط التيروزيناز في الفطر. كما هو مبين في الشكل 5 ب ، أدى حمض اللاكتيك إلى تثبيط نشاط التيروزيناز في الفطر بشكل كبير ، على عكس الجلوكوز. تشير هذه النتائج إلى أن تحويل الجلوكوز إلى حمض اللاكتيك له تأثير مضاد للميلانين عن طريق تثبيط التيروزيناز بواسطة حمض اللاكتيك.

الشكل 5. إنتاج اللاكتات عن طريق الجلوكوز وتأثير حمض اللاكتيك على نشاط التيروزيناز. (أ) إنتاج اللاكتات في خلايا B16 المعالجة بالجلوكوز. (أ) عولجت خلايا B16 بتركيزات الجلوكوز المحددة لمدة 3 د. بعد ذلك ، تم إجراء اختبار اللاكتات باستخدام الوسائط المستنبتة ، كما هو موضح في قسم الطرق. (ب) تأثير حمض اللاكتيك على نشاط فطر التيروزيناز في نظام خالٍ من الخلايا. يتم التعبير عن البيانات على أنها متوسط ​​± SD لثلاثة قياسات مستقلة على الأقل (* p <0. 0 5، ** p <0. 01، *** p <0.001) .

3. مناقشة

غالبًا ما تستخدم السكريات أو المواد المشتقة من السكر كمكونات تجميلية لحماية البشرة والتحكم الفسيولوجي. على سبيل المثال ، يزيد رافينوز الالتهام الذاتي المستقل عن mTOR ويقلل من موت الخلايا في الخلايا الكيراتينية المشععة بالأشعة فوق البنفسجية ، مما يشير إلى أن العامل الطبيعي رافينوز له قيمة محتملة في الحد من التلف الضوئي [16]. يعتبر التريهالوز والسكروز من المنشطات الجديدة للالتهام الذاتي في الخلايا الكيراتينية البشرية من خلال مسار مستقل عن mTOR [17]. توفر هذه النتائج نظرة ثاقبة جديدة للتنظيم بوساطة السكر للالتهام الذاتي في الخلايا الكيراتينية. في حالة الجلوكوز ، تبين أن الجلوكوز الموضعي يحفز الكلودين -1 وتعبير الفيلاجرين في نموذج فأر لالتهاب الجلد التأتبي وزراعة الخلايا الكيراتينية ، مما يشير إلى أن له تأثيرًا مضادًا للالتهابات عن طريق إصلاح وظيفة حاجز الجلد [18]. بالإضافة إلى ذلك ، يمنع الجلوكوز الانتشار ويعزز تمايز الخلايا الكيراتينية في الجلد [19]. لذلك ، ينظم الجلوكوز جوانب مختلفة من فسيولوجيا البشرة ، مثل وظائف حاجز الجلد ومستويات ترطيب الخلايا الكيراتينية.

يمكن أن تعمل السكريات كعوامل مزيلة للصبغة عبر عدة آليات مختلفة تتضمن التيروزيناز. على سبيل المثال ، تمنع بعض العوامل نضوج إنزيم التيروزيناز ، بينما تحث عوامل أخرى على تثبيط التعبير الجيني للتيروزيناز أو نشاطه [5،8-10]. ومع ذلك ، فقد بحثت دراسات قليلة في الآليات الكامنة وراء آثار إزالة تصبغ الجلوكوز.

لتحديد تأثير الجلوكوز على تكوين الميلانين ، ركزنا سابقًا على مستقبلات الكبد X (LXRs) ، وهي مستقبلات نووية تنشط بواسطة الترابط والتي تلعب دورًا محوريًا في استقلاب الدهون وتوازن الكوليسترول [20]. وجدنا أن تنشيط مستقبلات الكبد X يثبط تكوين الميلانين من خلال تسريع تحلل عامل النسخ المرتبط بصغر العين (MITF) المرتبط بالإشارات خارج الخلية [21].

علاوة على ذلك ، الجلوكوز عبارة عن رابطة LXR داخلية المنشأ [22]. وبالتالي ، افترضنا أن الجلوكوز له تأثيرات مضادة للميلانين بسبب تنشيط مسار يعتمد على LXR. ومع ذلك ، كما هو موضح في الشكل 3 ج ، لم يغير الجلوكوز مستويات التعبير عن التيروزيناز أو MITF ، على الرغم من أن تنشيط LXR قلل من مستويات التعبير عن هذه البروتينات في الخلايا الصباغية. لذلك ، خلصنا إلى أن الجلوكوز له تأثيرات مزيلة للصبغة على الخلايا الصباغية المستقلة عن تنشيط LXR.

الجلوكوز هو الركيزة الأساسية لإنتاج الطاقة ، ويتم تحللها عن طريق تفاعلات متسلسلة للعديد من الإنزيمات ، والمعروفة باسم تحلل السكر. أظهرت العديد من الدراسات أن تحلل السكر يحتوي على منتج نهائي واحد فقط ، وهو حمض اللاكتيك ، سواء في الظروف الهوائية أو اللاهوائية. في ظل الظروف الهوائية (O2) ، يتم استخدام اللاكتات كركيزة من نازعة هيدروجين اللاكتات الميتوكوندريا (MLD). تقوم LDH بتحويله إلى بيروفات يدخل دورة حمض الكربوكسيليك (TCA). في ظل الظروف اللاهوائية (N2) ، يتراكم اللاكتات في العصارة الخلوية. لذلك ، يبدأ مسار تحلل السكر بالجلوكوز كركيزة وينتهي بإنتاج اللاكتات كمنتج نهائي رئيسي [23]. بالإضافة إلى ذلك ، ديفيد وآخرون. قياس نسبة الجلوكوز التي تم تحويلها إلى حمض اللاكتيك أو البيروفات في الخلايا الصباغية البشرية الطبيعية [24]. كانت معظم مستقلبات الجلوكوز عبارة عن حمض اللاكتيك بدلاً من البيروفات.

حمض اللاكتيك هو حمض ألفا هيدروكسي (AHA) ؛ تستخدم هذه الأحماض على نطاق واسع في مستحضرات التجميل كعوامل تقشير سطحية [25]. بالإضافة إلى ذلك ، يمنع حمض اللاكتيك تكوين الميلانين عن طريق تثبيط نشاط التيروزيناز بشكل مباشر ، وهو تأثير مستقل عن طبيعته الحمضية ، مما يعني أن تأثير حمض اللاكتيك على الآفات الصباغية لا يرجع فقط إلى تسريع دوران خلايا البشرة ولكن أيضًا عن طريق تثبيط مباشر لتكوين الميلانين في الخلايا الصباغية [15]. وبالتالي ، فقد توصلنا إلى أن الجلوكوز قد يمارس تأثيره المضاد للميلانين عن طريق إنتاج حمض اللاكتيك لأن الجلوكوز يمكن تحويله إلى حمض اللاكتيك.

كما هو متوقع ، وجدنا أن معالجة الجلوكوز أدت إلى إنتاج حمض اللاكتيك في الخلايا الصباغية (الشكل 5 أ). بالإضافة إلى ذلك ، أكدنا أن حمض اللاكتيك أعاق نشاط التيروزيناز بقوة ومباشرة (الشكل 5 ب). Usuki et al. اكتشف أيضًا أن حمض اللاكتيك قلل من نشاط التيروزيناز داخل الخلايا في خلايا B16 وخلايا HM3KO البشرية [15]. في التقرير ، لم تتأثر مستويات الرنا المرسال والبروتين في التيروزيناز والتيرب -1 بحمض اللاكتيك. تشير هذه البيانات مجتمعة إلى أن الجلوكوز يزيد من إنتاج حمض اللاكتيك وأن حمض اللاكتيك هذا يثبط بشكل مباشر نشاط التيروزيناز دون التأثير على مستويات التعبير الجيني ، مما يشير إلى أن الجلوكوز له تأثير مضاد للميلانين في الخلايا الصباغية عن طريق تثبيط التيروزيناز غير المباشر الذي يعتمد على إنتاج حمض اللاكتيك. ومع ذلك ، من الضروري إجراء مزيد من التجارب للتحقق من دور حمض اللاكتيك والجلوكوز في إزالة التصبغ.

توفر البيانات الجماعية من هذه الدراسة أدلة أولية تدعم فائدة الجلوكوز الموضعي كتبييض فعال بالإضافة إلى كاشف مرطب يمكن استخدامه بأمان في مستحضرات التجميل والمستحضرات الطبية.

4. المواد والطرق

4.1 مواد

تم شراء D-glucose و -MSH و kojic acid (KA) و L-tyrosine و L-DOPA وحمض اللاكتيك من Sigma-Aldrich (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم شراء الأجسام المضادة ضد التيروزيناز والأكتين من Abcam (كامبريدج ، المملكة المتحدة). تم شراء الجسم المضاد ضد Tyrp -1 من Santa Cruz Biotechnology (كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم شراء الجسم المضاد ضد MITF من Proteintech (مدينة ، IL ، الولايات المتحدة الأمريكية).

4.2 ثقافة الخلية ومقايسة الجدوى

اشترينا خلايا سرطان الجلد من نوع B16 ، وسيط Dulbecco المعدّل (DMEM) ، ومصل الأبقار الجنيني (FBS) من مجموعة الثقافة الأمريكية (ATCC ، ماناساس ، فيرجينيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تمت زراعة خلايا B16 في DMEM المحتوية على 4500 ملجم / لتر من الجلوكوز المرتفع (ATCC 30-2002) على النحو الموصى به من قبل الشركة المصنعة (ATCC) مع إضافة 5 بالمائة من FBS ، وحضنت عند 37 درجة مئوية في جو رطب يحتوي على 95 بالمائة من الهواء و 10 في المئة من ثاني أكسيد الكربون. تم شراء NHMs الأولية ذات اللون الداكن من Thermo Fisher Scientific (# C2025C ؛ Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم زراعة الخلايا في متوسط ​​254 (# M254500) مكملًا بمكمل نمو الخلايا الصباغية البشرية (# S0025) وحضنت عند 37 درجة مئوية تحت جو من ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5 بالمائة. للتجارب ، تم استخدام NHMs الأولية بين الممرات 4 و 7. تم تقييم صلاحية الخلايا المستنبتة باستخدام مجموعة عد الخلايا -8 (CCK -8) كما هو موضح من قبل الشركة المصنعة (DOJINDO ، طوكيو ، اليابان).

4.3 قياس محتوى الميلانين

تم تحديد محتوى الميلانين كما هو موضح في التقارير السابقة [2-4]. باختصار ، عولجت خلايا B16 بتركيزات الجلوكوز المحددة في وجود -MSH (200 نانومتر) لمدة 72 ساعة. عولجت NHM بتركيزات الجلوكوز المحددة لمدة 4 د. بعد ذلك ، تم غسل جميع الخلايا بمحلول ملحي مخزّن من الفوسفات (PBS) وتم إذابته في 1 N هيدروكسيد الصوديوم عند 60 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. تم نقل محللات الخلية إلى صفيحة بئر 96- ، وتم قياس الامتصاصية عند 405 نانومتر. تم تطبيع القيم بناءً على تركيزات البروتين في كل عينة جيدًا.

4.4. فحص نشاط الفطر التيروزينيز

درسنا التأثيرات المباشرة لتركيزات الجلوكوز المشار إليها على نشاط التيروزيناز في الفطر. باختصار ، تم خلط 1 0 0 ميكرولتر من المخزن المؤقت للفوسفات المحتوي على الجلوكوز مع فطر التيروزيناز (10 وحدات / بئر) وتم دمجه مع 50 ميكرولتر من 0.03 بالمائة L-tyrosine أو L-DOPA في الماء المقطر. بعد ذلك ، تم تحضين الخليط معًا عند 37 ْم لمدة 10 دقائق ، وتم قياس الامتصاصية عند 405 نانومتر. تم استخدام حمض كوجيك (KA) ، وهو عامل معروف مضاد للتيروزيناز ، كمركب مرجعي.

4.5 فحص نشاط التيروزيناز داخل الخلايا

باختصار ، عولجت خلايا B16 أو NHM بتركيزات الجلوكوز المشار إليها في الأوقات المحددة. بعد ذلك ، تم غسل الخلايا باستخدام PBS وتحلل عن طريق الحضانة في محلول فوسفات 5 0 ملي مولار (درجة الحموضة 6.8) يحتوي على 1 بالمائة Triton X -100 و 0.1 ملي مولار فينيل ميثيل سلفونيل فلوريد. تم بعد ذلك طرد المحللات الخلوية عند 12 ، 000 دورة في الدقيقة عند 4 درجات مئوية لمدة 20 دقيقة. تم جمع المادة الطافية المحتوية على التيروزيناز الخلوي وتم تحديد محتوى البروتين للتطبيع. تم تحضين المستخلص الخلوي باستخدام L-DOPA في المخزن المؤقت للفوسفات وتم مراقبة تكوين الدوباكروم عن طريق قياس الامتصاصية عند 405 نانومتر في غضون 30 دقيقة.

4.6 عزل الحمض النووي الريبي والنسخ العكسي الكمي في الوقت الحقيقي - تفاعل البوليميراز المتسلسل (qRT-PCR)

لتحديد تعبير mRNA النسبي للجينات المختارة ، تم عزل إجمالي الحمض النووي الريبي باستخدام TRIzol (Invitrogen ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة ، وتم نسخ 4 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي إلى cDNA باستخدام RT-premix (Bioneer ، سيول ، الجنوب كوريا). تم إجراء PCR الكمي باستخدام ABI 75 0 0 نظام PCR السريع في الوقت الفعلي (Applied Biosystems ، Foster City ، CA ، USA). تم شراء مجموعات qRT-PCR التمهيدية للتيروزيناز و Tyrp -1 من Applied Biosystems ، واستخدمت TaqMan Gene Expression Assay kits (Applied Biosystems) للتضخيم. تم تطبيع التعبير الجيني المستهدف مع ذلك الخاص بجين التدبير المنزلي الذي يشفر البروتين الريباسي للوحدة الفرعية للساق الجانبي P0 (RPLP0). تم إجراء التكمية النسبية باستخدام طريقة ∆∆Ct المقارنة وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة.

4.7 النشاف الغربي

تم غسل الخلايا مرتين باستخدام PBS بارد ثم تم فصلها في محلول RIPA معدّل بالثلج (تقنية تشوير الخلية ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) يحتوي على مثبطات الأنزيم البروتيني (Calbiochem ، La Jolla ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تحديد تركيز البروتين الكلي ، وتم حل البروتينات بواسطة SDS-PAGE على 4-12 بالمائة من المواد الهلامية المتدرجة Bis-Tris (Thermo Fisher Scientific ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، تم نقلها إلى أغشية النيتروسليلوز (Thermo Fisher Scientific). بعد النقل ، تم حظر الأغشية في محلول مانع بنسبة 5 في المائة. تم تحضين الأغشية بأجسام مضادة أولية عند 4 درجات مئوية لمدة 24 ساعة ، وغسلها بمحلول ملحي مخزّن من Tris يحتوي على 0. 1٪ توين -20 (TBST) ، وتعرضت للأجسام المضادة الثانوية المقترنة بالبيروكسيديز لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. تم شطف الأغشية ثلاث مرات باستخدام TBST. تم تطوير إشارة كيميائية باستخدام كاشف ECL النشاف الغربي (GE Healthcare ، Hatfield ، المملكة المتحدة).

4.8 ثلاثي الأبعاد مكافئ لبشرة الإنسان

استخدمنا MelanoDerm (MEL -300- B؛ MatTek Corp.، Ashland، MA، USA) كنموذج لأنسجة الجلد البشري. تم اشتقاق هذا المكافئ ثلاثي الأبعاد لجلد الإنسان القابل للحياة والمعاد تكوينه من متبرعين سود ويحتوي على خلايا صباغية طبيعية وخلايا كيراتينية. تم تطوير MelanoDerm في واجهة الهواء السائل في وسط EPI -100- NMM -113 (MatTek Corp، Ashland، MA، USA). قبل علاج الجلوكوز ، تم غسل الأنسجة بـ 1 مل من PBS لإزالة المركبات المتبقية. تم إذابة الجلوكوز في برنامج تلفزيوني. كان التركيز النهائي للجلوكوز 2 في المائة. عولجت العينة الضابطة فقط باستخدام برنامج تلفزيوني. تم وضع الجلوكوز على MelanoDerm في الأيام 1 و 4 و 6 و 8 و 11 و 13 و 15. بعد 18 يومًا ، تم تثبيت أنسجة MelanoDerm في 4 في المائة من الفورمالديهايد المخزن مؤقتًا ، مدمجة في البارافين ، مقطعة إلى سمك 3 ميكرومتر ، وتعريضها لتلطيخ H&E و F&M. تم تقييم صلاحية عينات الأنسجة باستخدام مجموعة عد الخلايا -8 (CCK -8) كما هو موضح من قبل الشركة المصنعة (DOJINDO ، طوكيو ، اليابان). تم تقييم تصبغ MelanoDerm من خلال مقارنة التغيير في قيمة L *.

4.9 تصوير مضان ثنائي الفوتون (TPEF)

لتصور توزيع الميلانين في مكافئ جلد الإنسان ثلاثي الأبعاد ، أجرينا تصوير TPEF ، كما هو موضح في تقاريرنا السابقة [3،4]. باختصار ، تم تثبيت كل مستحضر MelanoDerm في 4 في المائة من الفورمالين لمدة 24 ساعة عند 4 درجات مئوية ثم غسلها بـ PBS / 0. 1 في المائة من BSA (ألبومين مصل الأبقار ، Merck ، Branchburg ، NJ ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم الحصول على صور TPEF من الطبقة القاعدية لقياس الميلانين داخل الخلايا في طبقة الخلايا الصباغية. تم قياس شدة إشارة TPEF النسبية للميلانين في حجم القياس باستخدام برنامج Image-Pro Premier 3D (Media Cybernetics ، Inc. ، Bethesda ، MD ، الولايات المتحدة الأمريكية).

4.10. فحص L- اللاكتات

تم زرع خلايا B16 عند 1. 0 × 105 خلية لكل بئر في 12- لوحة بئر. بعد العلاج بالجلوكوز لمدة 3 أيام ، تم قياس مستويات اللاكتات خارج الخلية باستخدام مجموعة مقايسة لونية L-lactate (Abcam ، ab65331 ، كامبريدج ، المملكة المتحدة) وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة.

4.11. تحليل احصائي

يتم التعبير عن البيانات كوسائل ± SDs (الانحرافات المعيارية) ، وتم تحديد الأهمية الإحصائية بواسطة اختبار الطالب t. تم اعتبار القيمة الاحتمالية <0. 05 ذات دلالة إحصائية.

الكاتب الاشتراكات:

التصور ، H.-JK ، JL ، و CSL ؛ تنظيم البيانات ، SHL ؛ التحقيق ، SHL ؛ المنهجية ، SHL ، I.-HB ، و E.-SL ؛ الإشراف ، JL ، و CSL ؛ الكتابة - المسودة الأصلية و SHL و CSL ؛ كتابة - مراجعة وتحرير ، JL جميع المؤلفين قرأوا ووافقوا على النسخة المنشورة من المخطوطة.

التمويل:

تم تمويل هذا البحث من قبل برنامج أبحاث العلوم الأساسية من خلال المؤسسة الوطنية للبحوث في كوريا (NRF) بتمويل من وزارة التعليم (رقم المنحة: 2018R1D1A1B07049402).

تضارب المصالح:

الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح.

الاختصارات

الهرمون المنشط للخلايا الصباغية MSH

البروتين 1 المرتبط بالتيروزيناز -1

عامل النسخ المرتبط بالـ MITF

NHMs الخلايا الصباغية البشرية العادية

مضان الإثارة ثنائي الفوتون TPEF

مستقبلات الكبد LXR X

أحماض ألفا هيدروكسي

H&E الهيماتوكسيلين ويوزين

إف آند إم فونتانا ماسون

مراجع

1. Swalwell، H. لاتيمر ، ياء ؛ هايوود ، RM ؛ Birch-Machin، MA التحقيق في دور الميلانين في إنتاج الخلايا والأشعة فوق البنفسجية A / UVB وبيروكسيد الهيدروجين وتلف الحمض النووي للميتوكوندريا في خلايا الورم الميلانيني البشري. راديك مجاني. بيول. ميد. 2012 ، 52 ، 626-634. [CrossRef]

2. لي ، سي إس ؛ جانغ ، و. بارك ، م. جونغ ، ك. بايك ، HS ؛ جو ، YH ؛ بارك ، YH ؛ Lim ، KM A مشتق جديد من adamantyl benzylbenzamide ، AP736 ، يمنع تكوين الميلانين من خلال تثبيط عامل النسخ المرتبط بالميكروفيلم المرتبط بـ cAMP-PKA-CREB المنشط وتعبير التيروزيناز. إكسب. ديرماتول. 2013 ، 22 ، 762-764. [CrossRef] [PubMed]

3. لي ، ج. لي ، إس ؛ باي ، IH ؛ هوانج ، جا. كيم ، SH ؛ كيم ، دي واي بارك ، نيو هامبشاير ؛ رو ، HS ؛ كيم ، YJ ؛ أوه ، SG ؛ وآخرون. الفعالية المضادة للميلانوجين لميلاسولف (3،4 ، 5- Trimethoxycinnamate Thymol Ester) في الخلايا الصباغية وما يعادل الجلد البشري ثلاثي الأبعاد. فارماكول الجلد. فيسيول. 2017 ، 30 ، 190–196. [CrossRef] [PubMed]

4. Bae، IH؛ لي ، إس ؛ يو ، جي دبليو ؛ لي ، SH ؛ كو ، جي كيم ، YJ ؛ لي ، TR ؛ كيم ، دي واي لي ، سي إس مانوسيليريثريتول ليبيدات تمنع تكون الميلانين عن طريق قمع إشارات ERK-CREB-MITF-Tyrosinase في الخلايا الصباغية البشرية الطبيعية ومكافئ ثلاثي الأبعاد لجلد الإنسان. إكسب. ديرماتول. 2019 ، 28 ، 738-741. [CrossRef] [PubMed]

5. بن ، البوسنة والهرسك ؛ كيم ، ST ؛ بهين ، ياء ؛ لي ، TR ؛ Cho ، EG تطوير العوامل المضادة لتكوين الميلانين القائمة على السكر. كثافة العمليات J. مول. علوم. 2016 ، 17 ، 583. [CrossRef]

6. كوماري ، س. تيان جوان ثنج ، إس. كومار فيرما ، إن. مثبطات تكوين الميلانين جوتام ، هونج كونج. اكتا. ديرم. فينيرول. 2018 ، 98 ، 924-931. [CrossRef]

7. أندو ، هـ. كوندوه ، ح. إيتشيهاشي ، م. السمع ، نهج VJ لتحديد مثبطات تخليق الميلانين الحيوي من خلال مراقبة جودة التيروزيناز. J. الاستثمار ديرماتول. 2007 ، 127 ، 751-761. [CrossRef]

8. هوانغ ، شبيبة ؛ لي ، هاي ليم ، تاي ؛ كيم ، ماي ؛ Yoon ، TJ تعطيل ارتباط التيروزيناز بالجليكوزيل بواسطة N-acetylglucosamine وتأثيراته المزيلة للصبغة في جلد خنزير غينيا وجلد الإنسان. J. ديرماتول. علوم. 2011، 63، 199–201. [CrossRef]

9. لي ، سي إس ؛ بايك ، HS ؛ باي ، IH ؛ تشوي ، SJ ؛ كيم ، YJ ؛ لي ، ج. Kim، JW فعالية إزالة التصبغ لحمض الجالاكتورونيك من خلال تنظيم التيروزيناز في خلايا الورم الميلانيني B16 وما يعادل الجلد البشري ثلاثي الأبعاد. كلين. إكسب. ديرماتول. 2018 ، 43 ، 708-712. [CrossRef]

10- ناكامورا. Kunikata ، T. ماتسوموتو ، واي. Hanaya، T. Harashima، A. نيشيموتو ، تي. Ushio ، S. آثار الكربوهيدرات الحلقية غير سيكلودكسترين على خلايا الورم الميلانيني في الفئران: توصيف نوع جديد من السكر ناقص الصباغ. بلوس وان 2017 ، 12 ، e0186640. [CrossRef]

11. خان ، MT Novel مثبطات التيروزيناز من الموارد الطبيعية - دراساتهم الحسابية. بالعملة. ميد. تشيم. 2012، 19، 2262–2272. [CrossRef] [PubMed]

12- سولانو ، ف. بريجانتي ، س. بيكاردو ، م. Ghanem، G. Hypopigmentingagents: مراجعة محدثة للجوانب البيولوجية والكيميائية والسريرية. صبغة. خلية. الدقة. 2006 ، 19 ، 550-571. [CrossRef] [PubMed]

13. لي ، سي إس ؛ جو ، YH ؛ بايك ، HS ؛ بارك ، م. كيم ، ج. شين ، هج. بارك ، نيو هامبشاير ؛ لي ، ج. بارك ، YH ؛ شين ، SS ؛ وآخرون. تأثيرات مختلفة لخمسة مركبات لإزالة الصباغ ، رودودندرون ، توت العليق كيتون ، أحادي بنزون ​​، روسينول ، و AP736 على تكوين الميلانين وصلاحية الخلايا الصباغية للبشرة البشرية. إكسب. ديرماتول. 2016 ، 25 ، 44-49. [CrossRef] [PubMed]

14. مولوكوتلا ، كولومبيا البريطانية ؛ خان ، س. لانج ، أ. Hu ، WS استقلاب الجلوكوز في ثقافة خلايا الثدييات: رؤى جديدة لتغيير المسارات القديمة. اتجاهات. التكنولوجيا الحيوية. 2010 ، 28 ، 476-484. [CrossRef]

15. Usuki، A .؛ أوهاشي ، أ. ساتو ، هـ. Ochiai ، واي. إيتشيهاشي ، م. Funasaka، Y. التأثير المثبط لحمض الجليكوليك وحمض اللاكتيك على تخليق الميلانين في خلايا الورم الميلانيني. إكسب. ديرماتول. 2003 ، 12 ، 43-50. [CrossRef]

16. Lin، S. لي ، إل. لي ، م. قو ، ح. يزيد Chen، X. Raffinose من الالتهام الذاتي ويقلل من موت الخلايا في الخلايا الكيراتينية المشعة للأشعة فوق البنفسجية UVB. J. فوتوشيم. فوتوبيول. ب 2019 ، 201 ، 111653. [CrossRef]

17. تشين ، العاشر ؛ لي ، م. لي ، إل. شو ، إس. هوانغ ، د. جو ، م. هوانغ ، ياء ؛ تشين ، ك. تعتبر كل من Gu و H. علوم. مندوب. 2016، 6، 28423. [CrossRef]

18. يامادا ، ك. ماتسوشيتا ، ك. وانغ ، ياء ؛ Kanekura ، T. الجلوكوز الموضعي يحفز كلودين -1 وتعبير Filaggrin في نموذج فأر لالتهاب الجلد التحسسي وفي زراعة الخلايا الكيراتينية ، مما يؤدي إلى تأثيرات مضادة للالتهابات عن طريق إصلاح وظيفة حاجز الجلد. اكتا. ديرم. فينيرول. 2018 ، 98 ، 19-25. [CrossRef]

19. سبرافتشيكوف ، ن. سيزياكوف ، جي ؛ جارتسبين ، م. Accili ، د. تينينباوم ، تي. Wertheimer، E. تأثيرات الجلوكوز على الخلايا الكيراتينية الجلدية: الآثار المترتبة على مضاعفات مرض السكري الجلدية. داء السكري 2001 ، 50 ، 1627-1635. [CrossRef]

20- كاستريلو ، أ. Tontonoz ، P. المستقبلات النووية في بيولوجيا البلاعم: على مفترق طرق التمثيل الغذائي للدهون والالتهابات. Annu. القس الخلية. ديف. بيول. 2004 ، 20 ، 455-480. [CrossRef]

21. لي ، سي إس ؛ بارك ، م. هان ، ياء ؛ لي ، ج. باي ، IH ؛ تشوي ، هـ. الابن ، ED ؛ بارك ، YH ؛ يمنع تنشيط مستقبلات الكبد X من Lim و KM تكون الميلانين من خلال تسريع تدهور MITF بوساطة ERK. J. الاستثمار. ديرماتول. 2013 ، 133 ، 1063-1071. [CrossRef] [PubMed]

22. ميترو ، ن. ماك ، بنسلفانيا ؛ فارغاس ، إل. جوديو ، سي. هامبتون ، إي. مولتيني ، ف. كريوش ، أ. Saez، E. المستقبل النووي LXR هو جهاز استشعار الجلوكوز. Nature 2007، 445، 219–223. [CrossRef] [PubMed]

23. شور ، أ. كربوهيدرات. IntechOpen: لندن ، المملكة المتحدة ، 2017 ؛ ص 21 - 35.

24. سكوت ، د. ريتشاردسون ، أ. فيليب ، ف. كنوتزن ، سي ؛ شيانغ ، جي. روناي ، زي. أوسترمان ، أ. سميث ، ج. تحديد ملامح الجريان الأيضي المقارن لخطوط خلايا سرطان الجلد: ما وراء تأثير واربورغ. J. بيول. تشيم. 2011 ، 286 ، 42626-42634. [CrossRef] [PubMed]

25. Tang، SC؛ Yang، JH التأثيرات المزدوجة لأحماض ألفا هيدروكسي على الجلد. جزيئات 2018 ، 23 ، 863. [CrossRef]

For more information:1950477648nn@gmail.com