يمنع Gomisin N تكون الميلانين من خلال تنظيم مسارات إشارات PI3K / Akt و MAPK / ERK في الخلايا الصباغية

اتصال:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

الملخص: جوميسين ن، أحد مركبات الليغنان الموجودة في Schisandra Chinensis ثبت أنه يمتلك أنشطة مضادة للأكسدة ومضادة للأورام ومضادة للالتهابات في دراسات مختلفة. الخلايا وكذلك في أجنة الزرد. قلل Gomisin N بشكل ملحوظ محتوى الميلانين بدون سمية خلوية. على الرغم من أنه لم يكن قادرًا على تعديل النشاط التحفيزي للفطرالتيروزينازفي المختبر،جوميسين نقلل من تنظيم مستويات التعبير عن البروتينات الرئيسية التي تعمل فيهاتكون الميلانين. مستقبلات الميلانوكورتين 1 الخاضعة للتنظيم Gomisin N (MC1R) ، adenylyl cyclase 2 ، عامل النسخ المرتبط بالميكروفيلم (MITF) ، التيروزيناز ،التيروزينازالبروتين المرتبط -1 (TRP -1) ، والبروتين المرتبط بالتيروزينيز -2 (TRP -2). بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت خلايا Melan-A المعالجة بـ Gomisin N زيادة مستويات p-Akt و p-ERK ، مما يعني أن تنشيط مسارات PI3K / Akt و MAPK / ERK قد يعمل على تثبيطتكون الميلانين. لقد تحققنا أيضًا من أن إنتاج Gomisin Nreduced الميلانين من خلال قمع تعبير MITF ،التيروزينازو TRP -1 و TRP -2 في الفئران والخلايا البشرية وكذلك في تطوير أجنة الزرد. بشكل جماعي ، نستنتج أنجوميسين نيثبط تخليق الميلانين عن طريق كبت التعبير عن MITF والإنزيمات الميلانينية ، ربما من خلال تعديل مسارات PI3K / Akt و MAPK / ERK.

الكلمات الدالة:شيساندرا تشينينسيسجوميسين ن؛ قشور.تكون الميلانين; تفتيح البشرة

cistanche لها وظيفة تبييض البشرة

1 المقدمة

الميلانين هو صبغة موجودة في معظم أعضاء الحيوانات بما في ذلك الجلد والشعر والعينين والأذن الداخلية والعظام والقلب والدماغ [1،2].تكوين الميلانينهي عملية معقدة حيث يتم إشراك مسارات إشارات متعددة. مستقبل الميلانوكورتين 1 (MC1R) هو منظم رئيسي فيتكون الميلانين، والإشارات من خلال روابطها مثل الهرمون المنبه للخلايا الصباغية (MSH) وهرمون قشر الكظر (ACTH) [3]. يتم تصنيع الميلانين الجلدي حيويًا بواسطة الخلايا الصباغية في البشرة ثم يتم نقلها إلى الخلايا الكيراتينية ، حيث تلعب أدوارًا مهمة في حماية الجلد عن طريق امتصاص الأشعة فوق البنفسجية من أشعة الشمس وتنظيف الجذور الحرة التفاعلية [4،5]. يتم تنظيم تركيب ونقل الميلانين في الجلد وبصيلات الشعر من خلال توافر سلائفه [6]. L-tyrosine و L-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) ، الركائز الرئيسية للإنزيمات الصباغية ، تعمل أيضًا كمنظمين شبيه بالهرمونات في تكوين الميلانين [7]. من ناحية أخرى ، ينتج عن الإفراط في إنتاج الميلانين مخاوف غير مرغوب فيها مثل النمش والكلف [8،9]. يمكن أن يؤثر تكوين الميلانين على سلوك الخلايا الصباغية الطبيعية والخبيثة عن طريق تعديل الخصائص المرنة للخلايا [10]. على الرغم من أن مستقبلات السيروتونين والميلاتونين المعبر عنها في الخلايا الجلدية تلعب دورًا رئيسيًا في الحفاظ على التوازن الخلوي ، فإن الإنتاج المفرط للميلانين عن طريق التغيرات الهرمونية غير المنضبطة قد يسبب حالات مرضية في الجلد [11].

وبالتالي ، كانت هناك جهود مكثفة لتوضيح الآليات الجزيئية التي تتحكم في تكون الميلانين كخطوة أولية لعلاج اضطرابات الجلد المفرطة التصبغ. بالإضافة إلى ذلك ، فإن المتغيراتتفتيح البشرةتم تحديد العوامل التي تثبط تخليق الميلانين من المستخلصات النباتية وغير النباتية وتستخدم تجاريًا في مستحضرات التجميل [12 ، 13]. تشمل عوامل التبييض الأكثر استخدامًا الهيدروكينون والميكينول والأربوتين وحمض كوجيك وحمض الأسكوربيك وحمض الريتينويك [12،14]. ومع ذلك ، هناك قيود مختلفة لاستخدامها في علاج الأعراض الحادة أو المزمنة لفرط التصبغ لدى البشر. على سبيل المثال ، يمكن أن يسبب الهيدروكينون ، على الرغم من استخدامه منذ فترة طويلة لعلاج التصبغ منذ الستينيات ، تهيج الجلد والتهاب الجلد التماسي [15،16]. كما أنه يؤدي إلى تلف الحمض النووي عن طريق زيادة إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية وتطور الترقق غير المتجانس في خلايا الثدييات [17 ، 18]. معروفة أخرىالتيروزينازمثبطات مثل حمض كوجيك وحمض الأسكوربيك ليس فقط ضعف اختراق الجلد ، والاستقرار ، وفعالية التبييض ، ولكن يمكن أن تسبب أيضًا تسمم الخلايا ، والتهاب الجلد ، والحمامي من الاستخدام طويل الأمد [19 ، 20]. في هذا الصدد ، هناك حاجة متزايدة لتطوير عوامل تبييض أكثر أمانًا وفعالية لعلاج فرط تصبغ الجلد. قد توفر الأعشاب الطبيعية المستخدمة في الطب التقليدي مصادر بديلة لتحديد عوامل التبييض الجديدة التي تتحكم في الخطوات الرئيسيةتكون الميلانينمع آثار جانبية أقل أو معدومة [21].

شيساندرا تشينينسيس Schisandra chinensis ، والمعروف أيضًا باسم التوت ذي النكهة الفاخرة الشمالية ، توجد بشكل طبيعي في شمال شرق الصين ، وأقصى شرق روسيا ، واليابان ، وكوريا [22]. يستخدم هذا النبات منذ فترة طويلة في علاج العمى الليلي وحرق الجلد والتهاب العقيم وأمراض الكبد في الطب الشرقي التقليدي [23 ، 24]. لقد ثبت أن مستخلص فاكهة S. chinensis ومركباته اللجنانة تمتلك تأثيرات دوائية مختلفة في خطوط الخلايا الفأرية. على سبيل المثال ، Schisandra A و C لهما تأثيرات مضادة للأكسدة ، في حين أن Schisandra B له نشاط مضاد للتليف ومضاد للالتهابات ومضاد للأكسدة ومضاد للاستماتة [25]. مركب قشور آخرجوميسين نتم الإبلاغ عن (الشكل 1 أ) لقمع موت الخلايا المبرمج الناجم عن الإجهاد التأكسدي عن طريق تثبيط إطلاق السيتوكروم C من الميتوكوندريا إلى السيتوبلازم ، وانشقاق كاسباس 3 و PARP ، ونفاذية الميتوكوندريا الناتجة عن Ca2 بالإضافة إلى انتقال الخلايا العضلية للفئران H9c2 [7،8]. ومن المثير للاهتمام ، أن العديد من الدراسات التي أجريت باستخدام نماذج الفئران وخطوط خلايا الجلد البشرية قد كشفت عن الإمكانات العلاجية لـ S. chinensis في علاج اضطرابات الجلد. Lee et al. ذكرت أن مستخلص الميثانول لفاكهة S. chinensis يخفف أعراض التهاب الجلد التماسي عن طريق تقليل إنتاج السيتوكينات المؤيدة للالتهابات مثل TNF- و IFN- عند تطبيقها موضعياً [8،24]. كانغ وآخرون. أظهر أن مستخلص ماء Schisandra Fructus منع تنشيط IκB ، مما أدى إلى تثبيط إنتاج TNF- و IL -6 و GM-CSF في خط الخلايا البدينة البشرية HMC -1 [26]. وقد أدت هذه النتائج إلى افتراضنا أن S. chinensis lignans قد تؤثر على وظائف خلايا الجلد على نطاق أوسع. في هذه الدراسة ، سعينا إلى التحقيق في الأدوار المفترضة لـجوميسين ن، أحد المركبات القشرية الرئيسية في S. Chinensis ، في التنظيمتكون الميلانين، وبالتالي تقييم استخدامه المحتمل كعامل أكوسميكوتيكال. هنا ، نقوم بالإبلاغ عن ذلكجوميسين نيمنع تخليق الميلانين الحيوي بدون السمية الخلوية في خلايا الإنسان والفأر ، وكذلك في أجنة الزرد.

2. النتائج

2.1. آثار Gomisin N على تكوين الميلانين وحيوية الخلية

للتحقق من آثار Gomisin N علىتكون الميلانين، تعاملنا مع الخلايا الصباغية في الفئران بتركيزات مختلفة منجوميسين نلمدة 72 ساعة ، ثم تقييم التغيرات في محتويات الميلانين. قلل Gomisin Ntreatment من محتوى الميلانين في كل من خط الخلايا الصباغية الطبيعي Melan-A وفي خلايا الورم الميلانيني B16F10 بطريقة تعتمد على الجرعة دون سمية خلوية (الشكل 1 ب ، ج). لاحظنا أن Gomisin N يثبط إنتاج الميلانين الناجم عن MSH في خلايا B16F10 ، والتي كانت قابلة للمقارنة مع النتائج التي تم الحصول عليها بواسطة علاج PTU [27] (الشكل 1C). لتقييم ما إذا كان الحد من الميلانين عليهجوميسين نيرجع العلاج إلى انخفاض نشاط التيروزيناز ، وقد أجرينا اختبار L-DOPA في خلايا الخلايا الصباغية البشرية الطبيعية (NHEM). كما هو مبين في الشكل 1E ، أظهرت خلايا NHEM المعالجة بـ Gomisin N مستويات منخفضة من L-DOPA مقارنة بالخلايا غير المعالجة. ومع ذلك ، فإن التأثير المثبط لـ Gomisin N على إنتاج الميلانين لم يكن مهمًا في خلايا الورم الميلانيني البشري -1 (الشكل 1 د) .

2.2. آثار Gomisin N على نشاط Tyrosinase

لفحص ما إذا كانجوميسين نيمنعالتيروزينازالنشاط في المختبر ، استخدمنا الفطر التيروزيني و B16 محلولات خلايا سرطان الجلد. تم استخدام حمض كوجيك ، وهو أحد مثبطات التيروزيناز المعروفة ، كعنصر تحكم إيجابي. عند معالجته بتيروزيناز الفطر ، في حين أن حمض كوجيك قلل بشكل كبير من النشاط الإنزيمي ، لم يحفز Gomisin N أي تغيير في تحويل L-DOPA إلى dopachrome (الشكل 2 أ) ، ومع ذلك ، عند معالجته بخلايا سرطان الجلد B16 ، أدى Gomisin N إلى انخفاض فيالتيروزينازنشاط الخلية المحللة بطريقة تعتمد على الجرعة (الشكل 2 ب). علاوة على ذلك ، عند المعالجة المشتركة بخلايا -MSH inB16 ،جوميسين نعكس الزيادة في تكوين الدوباكروم الذي يحفزه -MSH (الشكل 3C). يبدو أن Gomisin N أكثر فعالية من حمض كوجيك لتثبيط الخلايا الخلوية.نشاط التيروزينازمن خلايا B16 عند تحفيز MSH. تشير هذه النتائج إلى أن التأثير المثبط لـ GomisinN على إنتاج الميلانين الذي لوحظ في الخلايا البشرية والفأر (الشكل 1) لا يرجع إلى وظيفته في تثبيط النشاط التحفيزي للتيروزيناز بشكل مباشر. ومع ذلك ، لا يزال من الممكن أن يقوم Gomisin بتنظيم التعبير عن التيروزيناز أو البروتينات الأخرى التي تلعب أدوارًا رئيسية فيتكون الميلانين.

2.3 تأثيرات Gomisin N على تعطيل مسار إشارات MC1R

سعينا إلى توضيح الآلية الأساسية المسؤولة عن التأثير المثبط لـ GomisinN على إنتاج الميلانين. نحن مسببون لذلكجوميسين نقد ينظم إشارات البروتينات التي تشارك فيهاتكون الميلانينوبالتالي تمنع تخليق الميلانين. مستقبل الميلانوكورتين 1 (MC1R) هو مستقبل مقترن ببروتين G amelanocytic يعمل كمنظم رئيسي في تخليق الميلانين. يؤدي تنشيط MC1R بواسطة ligand -MSH أو هرمون قشر الكظر (ACTH) إلى زيادة إنزيم adenylyl cyclase ، والذي بدوره ينظم مستويات cAMP داخل الخلايا [2،3]. وبالتالي ، يتم زيادة مستوى النسخ من MITF عبر مسار بروتين كيناز- C (PKA) / بروتين ربط العناصر المتجاوب (CREB) [2،28]. لتقييم التأثير التنظيمي لـ Gomisin N على مسار إشارات MC1R ، قمنا بفحص مستويات التعبير لـ MC1R وجزيئات إشارات المصب بعد معالجة خلايا Melan-A مع Gomisin N. لقد لاحظنا أن Gomisin N يقلل بشكل كبير من مستويات البروتين لكل من MC1R و adenylyl cyclase 2 بطريقة تعتمد على الجرعة (الشكل 3 أ-ج). كما هو متوقع ،جوميسين ن- أظهرت الخلايا المعالجة أيضًا انخفاضًا في مستويات البروتين في MITF والأهداف المعروفة للتيروزيناز ، و TRP -1 ، و TRP -2 (الشكل 3A ، D-G). تشير هذه النتائج إلى أن Gomisin N يثبط الإنزيمات المنتجة للميلانين عن طريق تعطيل MITF عبر مسار إشارات MC1R.

2.4 تأثيرات Gomisin N على فسفرة Akt و ERK1 / 2 في خلايا Melan-A

من المعروف أن مسارات PI3K / Akt و MAPK / ERK تشارك في تكوين الميلانين عن طريق النسخ أو ما بعد النسخ المنظم MITF [29،30]. لتقييم ما إذا كان GomisinN يؤثر على مسارات الإشارات هذه ، قمنا بتقييم حالة الفسفرة في Akt و ERK1 / 2 عن طريق تحليل لطخة Western. كما هو مبين في الشكل 3H-J ، جرعة عالية من العلاج (30 ميكرومتر) منجوميسين نعزز بشكل كبير الفسفرة لكل من Akt و ERK. تشير هذه البيانات إلى أن التأثير المثبط لـ Gomisin N onتكون الميلانينمن المحتمل أن يرتبط بمسارات P13K / Akt و MAPK / ERK.

2.5 يمنع Gomisin N تكون الميلانين في أجنة الزرد

نهدف بعد ذلك إلى فحص ما إذا كان Gomisin N فعالًا في التثبيطتكون الميلانينفي الجسم الحي. نهاية Tothis ، عالجنا أجنة الزرد باستخدام Gomisin N لمدة 72 ساعة بتركيزات 1 و 10 و 20 و 30 ميكرومتر ، ثم قمنا بقياس مستويات التعبير عن البروتينات الميلانينية. لاحظنا أن علاج Gomisin N يثبط تكوين الميلانين في تطوير أجنة الزرد.جوميسين نأظهرت الأجنة المعالجة انخفاضًا في محتويات الميلانين بطريقة تعتمد على التركيز مقارنةً بالتحكم غير المعالج (الشكل 4). وجدنا أيضًا أن مستويات البروتينالتيروزينازتم تقليل و MITF و TRP -1 و TRP -2 بواسطة علاج Gomisin N (الشكل 5). توضح هذه النتائج أن Gomisin N يثبط تكوين الميلان في الجسم الحي من خلال تنظيم عامل النسخ MITF وأهدافهالتيروزينازو TRP -1 و TRP -2.

2.6. عكس Gomisin N تكوين الميلان الناجم عن Rapamycin في MNT البشري -1

على الرغم من تثبيط Gomisin N بشكل كبيرتكون الميلانينفي خلايا Melan-A و B16 وكذلك أجنة الزرد ، لم نلاحظ تأثيره على خلايا سرطان الجلد MNT -1 البشرية. توقعنا أن يكون تأثير Gomisin N قابلاً للاكتشاف في خلايا MNT -1 في ظل الحالة التي يتم فيها تنظيم تكوين الميلانين بواسطة منبه مناسب. لقد ثبت أن Rapamycin يحفز تكوين الميلانين عن طريق زيادة نشاط التيروزيناز ومستويات البروتين في MITF و tyrosinase و TRP -1 و TRP -2 [31] ، جزئيًا من خلال تنشيط الالتهام الذاتي [32]. قمنا بمراقبة مستوياتالتيروزينازو MITF و TRP -1 و TRP -2 في خلايا MNT -1 عن طريق تحليل اللطخة الغربية ، بعد العلاج المشترك مع Gomisin N andrapamycin. أدى علاج Rapamycin إلى إحداث مستويات MITF و TRP -1 و TRP -2 بشكل ملحوظ ولكن لم يكن له أي تأثير علىالتيروزينازالمستويات (الشكل 6). ومع ذلك ، عكس علاج Gomisin N بشكل ملحوظ تأثيرات الراباميسين على MITF و TRP -1 و TRP -2 بطريقة تعتمد على التركيز. التأثير العكسي لـجوميسين نضد الراباميسين كان واعدًا أكثر بتركيز 20 و 30 ميكرومتر من 10 ميكرومتر ، وتشير هذه النتائج إلى أن Gomisin N يثبطتكون الميلانينفي خلايا الورم الميلانيني MNT -1 البشرية عن طريق تنظيم عامل النسخ MITF وأهدافه TRP -1 و TRP -2.

3. مناقشة

تتمثل الوظيفة الرئيسية للميلانين في حماية خلايا الجلد من الأشعة فوق البنفسجية [33-35] ، ففرط التصبغ الناتج عن الإفراط في إنتاج الميلانين في الجلد يسبب مخاوف تجميلية غير مرغوب فيها ويرتبط بالتهاب الجلد وسرطان الجلد. اقترحت عدة تقاريرتكون الميلانينكهدف مهم لعلاج الورم الميلانيني النقيلي [36،37]. وبالتالي ، هناك حاجة متزايدة لتطوير عوامل مضادة لتكوين الميلانين تنظم تكوين الميلانين بدون السمية الخلوية [38]. هناك العديد من المسارات التي تدخل في تكوين الميلانين الجلدي [39 ، 40]. عند الارتباط بالرابط ، يعزز MC1R نشاط إنزيم adenylyl cyclase ، مما يؤدي لاحقًا إلى زيادة مستويات cAMP داخل الخلايا [41،42]. تم الإبلاغ عن التنشيط المعتمد على cAMP لمسار PKA / CREB على نطاق واسع لتنظيم مستويات النسخ من MITF ، وبالتالي تعزيز تخليق الميلانين [43]. وظائف MITF كمنظم رئيسي للأنزيمات الميلانينية الرئيسية الثلاثة ، التيروزيناز ، TRP -1 ، و TRP -2 في الفقاريات [3 ، 21 ، 44]. هذه الإنزيمات عبارة عن بروتينات عبر الغشاء موجودة في الغشاء الصباغى للخلايا الصباغية. ينظم Tyrosinase خطوة تحديد المعدل فيتكون الميلانينعن طريق تحويل L-tyrosinase إلى L-DOPA [23]. يلعب كل من TRP -1 و TRP -2 أيضًا أدوارًا مهمة في تركيب الميلانين ، على الرغم من أن وظائفهما ليست مفهومة تمامًا.

في هذه الدراسة ، أظهر Gomisin N ، مركب قشور من S. chinensis نشاط إزالة التصبغ بدون سمية خلوية. منع Gomisin N تخليق الميلانين في خطوط خلايا الثدييات المستزرعة وكذلك في أجنة الزرد. يبدو أن Gomisin N أكثر فعالية من التحكم الإيجابي PTU الذي يثبط إنتاج الميلانين في خلايا Melan-A (الشكل 1B). خفض Gomisin N محتوى الميلانين بطريقة تعتمد على التركيز. بالمقارنة مع مجموعة التحكم غير المعالجة ، 10 ميكرومتر منجوميسين نخفض محتوى الميلانين بنحو 40 في المائة ، دون سمية خلوية. كان النشاط المضاد لتكوين الميلانين لـ 10- µM Gomisin N مشابهًا لنشاط 100- µM PTU في خلايا Melan-A. وبالمثل ، يبدو أن Gomisin N هو أكثر فاعلية من خلايا B16F10 المنشّطة بـ PTU في MSH ، حيث كانت تأثيرات 5- و 10- µM Gomisin N قابلة للمقارنة مع تأثيرات 10- و {{12 }} µ M PTU ، على التوالي (الشكل 1C). أظهرت خلايا NHEM المعالجة بـ Gomisin N مستويات منخفضة من L-DOPA ، مما يشير إلى أن GomisinN يثبطالتيروزينازالنشاط في الخلايا المستزرعة (الشكل 1E). أدت هذه النتائج إلى مزيد من التحقيق في الآلية الأساسية التي يمنع بها Gomisin N تكون الميلانين.

قمنا بفحص ما إذا كانجوميسين نينظم مباشرة النشاط التحفيزي لـالتيروزينازفي المختبر: على عكس حمض كوجيك ، لم يُظهر Gomisin N تأثيرات مثبطة على نشاط التيروزيناز في الفطر (الشكل 2 أ). ومع ذلك ، تم تنظيم نشاط التيروزيناز الخلوي في Lysates خلية سرطان الجلد B16 بشكل كبير بواسطة Gomisin N مع وبدون علاج MSH (الشكل 2B ، C). تم العثور على تثبيط نشاط التيروزينات الخلوية لمحفز Gomisin N on -MSH ليكون أكثر أهمية من عنصر التحكم الإيجابي لحمض كوجيك (الشكل 2C).

افترضنا أن الوظيفة المضادة للميلانوجين لـ Gomisin N قد تحدث من خلال تنظيم النسخ أو ما بعد النسخ من التيروزيناز والبروتينات المرتبطة بالتيروزيناز (TRPs). كمية ونوعية إنتاج الميلانين في الخلايا الصباغية. من المتوقع ، لاحظنا أن Gomisin N خفض مستويات MC1R و adenylyl cyclases 2 في خلايا Melan-A (الشكل 3A-C). بالإضافة إلى،جوميسين نقلل من تنظيم التعبير عن MITF والبروتينات المستهدفة بما في ذلك التيروزيناز و TRP -1 و TRP -2 (الشكل 3 أ ، D – G). تشير هذه النتائج إلى أن انخفاض مستويات محتويات الميلانين عند علاج Gomisin N ناتج عن تعطيل مسار MC1R.

من ناحية أخرى ، يمكن لمسارات PI3K / Akt و MAPK / ERK فسفوريلات MITF ، وبالتالي يمكن تعديل نشاطها بعد النسخ [45]. ومع ذلك ، فإن التأثير الكلي لتنشيط مسارات PI3K / Akt و MAPK / ERK فيتكون الميلانينمثير للجدل. يتم تنشيط كل من مسارات PI3K / Akt و MAPK / ERK بشكل أساسي في الأورام الميلانينية البشرية بسبب الطفرات المتراكمة [46]. من المعروف أن إزالة الصبغة 2- بوساطة سيراميد في خلايا Mel-Ab تحدث من خلال تقليل مستويات p-Akt [47]. هناك العديد من المركبات الطبيعية التي تنشط عملية تكوين الخلايا عن طريق تنظيم مستويات p-ERK في خلايا سرطان الجلد B16 [28]. في المقابل ، هناك أيضًا دليل على أن المستويات المرتفعة من p-ERK و p-Akt تمنع تخليق الميلانين [28 ، 48]. يمكن تفسير التعقيد في تنظيم تكوين الميلانين جزئيًا من خلال حقيقة أن الفسفرة تعزز نشاط النسخ لـ MITF ، ولكنها تؤدي في الوقت نفسه إلى التحلل المعتمد على البروتينات المنتشرة في MITF [26،49-51]. أظهرت بياناتنا أن كلا من مستويات p-Akt و p-ERK تم تنظيمهما في خلايا Melan-A المعالجة بـ Gomisin N (الشكل 3H-J). هذا يعني أن PI3K / Akt و MAPK / ERKpathways قد تساهم في تثبيط إنتاج الميلانين.

قمنا أيضًا بالتحقق من صحة النشاط المضاد للميلانوجين لـ Gomisin N في نموذج الزرد في الجسم الحي. أظهرت أجنة الزرد المعالجة بـ Gomisin N انخفاضًا كبيرًا في تصبغ الميلانين (الشكل 4). بالإضافة إلى ذلك ، انخفض Gomisin N بشكل ملحوظ من مستوياتالتيروزينازو MITF و TRP -1 و TRP -2 في تطوير أجنة الزرد. هذه النتائج مجتمعة تشير إلى ذلكجوميسين نيحث على إزالة التصبغ عن طريق تقليل تنظيم تعبير MITF والإنزيمات المولدة للميلان في الجسم الحي. تم تأكيد النشاط المضاد للميلانين لـ Gomisin N بشكل أكبر في خلايا الورم الميلانيني البشري MNT -1 المحفز بواسطة الرابامايسين. على الرغم من أن Gomisin N أدى إلى تغييرات طفيفة فقط في محتوى الميلانين في خلايا MNT -1 (الشكل 1 د) ، إلا أنه كان فعالاً في عكس التنظيم الناجم عن الراباميسين لـ MITF و TRP -1 و TRP -2 في بطريقة تعتمد على التركيز (الشكل 6 أ ، ج - هـ). مجتمعة ، التأثير التنظيمي لجوميسين نعلى MITF والإنزيمات المولدة للميلان وجدت بشكل متكاثر في خلايا الفئران والبشر وكذلك في أجنة الزرد.

للتلخيص ، يشير هذا العمل إلى أن Gomisin N قد يكون لها إمكانات عالية كروايةتفتيح البشرةوكيل. يبدو أن Gomisin N يثبطتكون الميلانينعن طريق قمع تعبير MITF عبر مسار MC1R ، بدلاً من تعديل النشاط التحفيزي مباشرةالتيروزينازو TRPs. على الرغم من أن الآليات التفصيلية لا تزال بحاجة إلى توضيح ، فمن المحتمل أن يرتبط تصبغ Gomisin N الناجم عن تنشيط مسارات PI3K / Akt و MAPK / ERK (الشكل 7).

4. المواد والطرق

4.1 المواد

تم شراء RPMI1640 من Gibco-BRL (Gaithersburg ، MD ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم شراء وسيط Dulbecco المعدّل (DMEM) ومصل بقري الجنين (FBS) والبنسلين الستربتومايسين (PS) من Hyclone (كارلسباد ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم شراء وسيط نمو الخلايا الصباغية من PromoCell (هايدلبرغ ، ألمانيا). فينيل ميثيل سلفونيل فلوريد (PMSF) ، 12- O-tetradecanoylphorbol -13- أسيتات (TPA) ، حمض كوجيك ، 1- فينيل -2- ثيوريا (PTU) ، فطر تيروسيناز ، 3 ، {{ تم شراء 9}} dihydroxy-l-phenylalanine (L-DOPA) و -MSH وثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) وامتصاص العرق من شركة SigmaChemical Co. (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية).جوميسين نتم توفير المركب بواسطة Chul Young Kim (جامعة هانيانغ ، أنسان ، كوريا). تم شراء Rapamycin من Sigma-Aldrich (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية).

4.2 زراعة الخلايا

تم توفير خط خلية سرطان الجلد في الفئران B16F10 من بنك الخلية الكوري (سيول ، كوريا). الخلايا الميلانينية الخلايا الميلانية A كانت هدية سخية من الدكتور بيونغ جون لي (معهد أبحاث الجلد ، شركة أموري باسيفيك ، يونغين -سي ، كوريا). تم توفير خلايا سرطان الجلد MNT البشرية -1 بكثرة بواسطة Aeyeong Lee (كلية الطب في جامعة Dongguk ، جويانغ سي ، كوريا). تم شراء الخلايا الصباغية البشرية الطبيعية الأولية (NHEM) من PromoCell (هايدلبرغ ، ألمانيا). نمت خلايا Melan-A في وسط RPMI 1640 (Gibco ، Carlsbad ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) مكملًا بنسبة 10 بالمائة FBS ، و 1 بالمائة PS ، و 200 نانومتر TPA. تم استخدام DMEM مع 10 بالمائة FBS و 1 بالمائة PS للحفاظ على خلايا Melan-A وخلايا NHEM. تم تحضين جميع الخلايا عند 37 درجة مئوية في حاضنة 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون.

4.3 قياس محتويات الميلانين

تم بذر خلايا Melan-A في 24- صفيحة بئر (1 × 105 خلية / بئر) ، وتم علاجها باستخدامجوميسين نثم حضنت لمدة 72 ساعة. بعد 72 ساعة ، تم قياس محتوى الميلانين كما هو موصوف سابقًا [53]. باختصار ، بعد إزالة وسط المزرعة ، تم غسل الخلايا ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني. بعد ذلك ، تمت إضافة محلول هيدروكسيد الصوديوم (1 مل ، 1 نيوتن) إلى كل بئر لإذابة الميلانين. تم قياس الامتصاص 405 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية. تم تكرار هذا الاختبار مع خلايا B16F10 (2 × 104 خلايا / بئر) وخلايا MNT -1 باتباع نفس الطريقة.

4.4 تحليل لطخة غربية

تم زرع خلايا Melan-A في أطباق 100 مم (1 × 106 خلية / طبق) ومعالجتها بـ 1 أو 5 أو 10 ميكرومترجوميسين نلمدة ثلاثة أيام عند 37 درجة مئوية. تم غسل الخلايا باستخدام برنامج تلفزيوني ثم حصادها باستخدام مكشطة. تم وضع الخلايا المفصولة في 1 مل من برنامج تلفزيوني وطردها عند 75 0 0 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق. بعد إزالة المحلول العلوي ، تم تفكيك حبيبات الخلايا باستخدام محلول تحلل (5 0 ملي مولار تريس-حمض الهيدروكلوريك ، الرقم الهيدروجيني 8. 0 ، 0.1 بالمائة SDS ، 150 ملي مول كلوريد الصوديوم ، 1 بالمائة NP -40 ، 0.02 بالمائة أزيد الصوديوم ، 0.5 بالمائة ديوكسيكولاتي الصوديوم ، 100 ميكروغرام / مل PMSF ، 1 جم / مل أبروتينين) لمدة 24 ساعة عند 4 درجات مئوية. تم استخلاص البروتينات الكلية باستخدام جهاز طرد مركزي فائق عند 12 ، 000 دورة في الدقيقة لمدة 30 دقيقة عند 4 درجات مئوية. تم قياس محتوى البروتين باستخدام اختبار برادفورد. تم فصل البروتينات (30 ميكروغرام) باستخدام 10 في المئة من الصوديوم دوديسيل كبريتات-بولي أكريلاميد جل الكهربائي (SDS-PAGE) ونقلها إلى غشاء أنيتروسليلوز. تم حظر الغشاء لمدة ساعة واحدة مع 5 في المائة من الحليب منزوع الدسم في محلول ملحي من نوع Tris مع Tween -20 (TBST) ، ثم تم تحضينه لمدة 12 ساعة عند 4 درجات مئوية مع استهداف الأجسام المضادة الأولية - التوبولين (سانتا كروز ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية ) ، MITF (تشوير الخلية ، دانفرز ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، التيروزيناز (تشوير الخلية) ، ERK (تشوير الخلية) ، الفوسفو- ERK (تشوير الخلية) ، AKT (تشوير الخلية) ، الفوسفو- AKT (تشوير الخلية) ، MC1R ( Santa Cruz) و adenylyl cyclases 2 (Santa Cruz) و TRP -1 (Santa Cruz) و TRP -2 (Santa Cruz). بعد إزالة الأجسام المضادة الأولية ، تم غسل الأغشية ثلاث مرات باستخدام TBST وحضنت مع ثانوي الأجسام المضادة (الأرنب المضاد للماعز IgG-HRP ؛ الفأر المضاد للأرنب HRP ، سانتا كروز) لمدة ساعة. تمت معالجة الأغشية بكاشف التلألؤ الكيميائي المحسن باستخدام نظام التصوير ChemiDoc XRS plus (Bio-Rad ، Hercules ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم إجراء تحليل قياس الكثافة للنطاقات باستخدام برنامج Image MasterTM 2D Elite (الإصدار 3.1 ، GE Healthcare ، Chicago ، IL ، USA).

4.5 فحص نشاط التيروزيناز

لتقدير التأثير التثبيطي لـ Gomisin N على الفطرالتيروزينازالنشاط ، تم احتضان التيروزيناز بـ 1 أو 5 أو 10 ميكرومترجوميسين نأو حمض كوجيك ذو التحكم الإيجابي. تم إذابة كل عينة في الميثانول. تم تخفيف L-DOPA (8.3 ملي مولار) وتيروزيناز الفطر (125 وحدة) في 80 ملي مولار من الفوسفات (درجة الحموضة 6.8). تم خلط 40 ميكرولتر من كل عينة و 120 ميكرولتر من L-DOPA في 96- صفيحة جيدة ، متبوعة بإضافة 40 ميكرولتر من تيروزيناز الفطر المخفف. تم تحضين الألواح بعد ذلك لمدة 15 دقيقة ، وتم قياس الامتصاصية عند 490 نانومتر باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة.

تيروزينازتم قياس النشاط في محللات خلايا سرطان الجلد B16 مع أو بدون علاج MSH ، كما هو موضح سابقًا بواسطة Ohguchi et al. [54] ، مع بعض التعديلات الطفيفة. تم تحضير محلول الخلية كما هو موضح أعلاه في جزء تحليل Western Blot. تم قياس البروتينات الكلية في المادة الطافية بمقايسة برادفورد باستخدام الزلال المصل البقري كمعيار [55]. تم تخفيف كمية متساوية من البروتينات واستخدامها لفحص نشاط التيروزيناز.

تمنع نشاط التيروزيناز

4.6 تلطيخ L-DOPA في خلايا NHEM

تم زرع خلايا NHEM في لوحة بئر {0} وحضنت لمدة 72 ساعة مع Gomisin N. تم إصلاح الخلايا بنسبة 4 في المائة من بارافورمالدهيد لمدة 4 0 دقائق ، تليها معالجة بنسبة 0.1 في المائة Triton X { {6}} لمدة دقيقتين ، تمت إضافة L-DOPA (0.1 بالمائة) إلى كل بئر ، متبوعًا بالحضانة لمدة ساعتين. بعد إزالة المحلول ، تم غسل الخلايا مرتين باستخدام برنامج تلفزيوني. تم تصوير الصور بواسطة المجهر.

4.7 تجارب الزرد

تم الحصول على أجنة الزرد من بنك موارد الزرد (دايجو ، كوريا). عولجت الأجنة بـ Gomisin N لمدة 72 ساعة. تأثير إزالة الصباغجوميسين نعلى أجنة الزرد لوحظت تحت المجهر الفراغي. لتحليل اللطخة الغربية ، تم تحليل الأجنة المعالجة بـ Gomisin N باستخدام محلول تحلل ، والذي تم تحضير البروتينات الكلية منه كما هو مذكور أعلاه.

5. الاستنتاجات

تدعم نتيجتنا الرأي القائل بأن Gomisin N لديه إمكانات عالية لاستخدامه كغذاء وظيفيتفتيح البشرةوكيل.جوميسين نهي واحدة من مركبات الليغنان الرئيسية في S. Chinensis. في الواقع ، S. تشينينسيس هو دواء عشبي يستخدم في علاج العديد من الأمراض التي تصيب الإنسان. ومع ذلك ، من الضروري إجراء مزيد من الدراسات الوبائية لإثبات سلامة Gomisin N على الجلد. وبالتالي ، ستكون الدراسات والتجارب السريرية في الجسم الحي قادرة على إثبات فعالية GomisinN بشكل أكثر وضوحًا. في الختام ، تشير هذه الدراسة إلى أنجوميسين نقد يكون عاملًا محتملًا لنقص التصبغ وطبيعيًاتفتيح البشرةمرشح لصناعة مستحضرات التجميل.

cistanche تحسين التبييض

مراجع

1. Alaluf، S. أتكينز ، د. باريت ، ك. بلونت ، م. كارتر ، ن. هيث ، أ. تأثير الميلانين في البشرة على القياسات الموضوعية للون جلد الإنسان. الدقة خلية الصباغ. 2002 ، 15 ، 119-126. [CrossRef] [PubMed]

2. D'Mello، SA ؛ فينلي ، جي جي ؛ باجولي ، كولومبيا البريطانية ؛ Askarian-Amiri، ME مسارات الإشارات في تكوين الميلان. كثافة العمليات جيه مول. علوم. 2016 ، 17 ، 1144. [CrossRef] [PubMed]

3 - سلومينسكي ، أ. توبين ، دي جي ؛ Shibahara، S.؛ Wortsman ، J. تصبغ الميلانين في جلد الثدييات وتنظيمه الهرموني. فيسيول. القس 2004، 84، 1155-1228. [CrossRef] [PubMed]

4. Herrling، T .؛ جونغ ، ك. Fuchs، J. دور الميلانين كحامي ضد الجذور الحرة في الجلد ودوره كمؤشر حر في الشعر. Spectrochim Acta A Mol. بيومول. الطيف. 2008 ، 69 ، 1429-1435. [CrossRef] [PubMed]

5. Brozyna، AA؛ جوزويكي ، دبليو. روسكوفسكي ، ك. فيليبياك ، ياء ؛ Slominski، AT محتوى الميلانين في الميلانوماميتاستاس يؤثر على نتيجة العلاج الإشعاعي. Oncotarget 2016 ، 7 ، 17844-17853. [CrossRef] [PubMed]

6. سلومينسكي ، أ. ورتسمان ، ياء ؛ بلونكا ، بيإم ؛ شالروتر ، KU ؛ وقفة ، ر. توبين ، دي جي تصبغ بصيلات الشعر. التحقيق. ديرماتول. 2005 ، 124 ، 13-21. [CrossRef] [PubMed]

7. سلومينسكي ، أ. Zmijewski ، MA ؛ Pawelek ، J. L-tyrosine ، و L-dihydroxyphenylalanine كمنظمين هرمونيين لوظائف الخلايا الصباغية. الخلايا الصباغية Res Melanoma Res. 2012 ، 25 ، 14-27. [CrossRef] [PubMed]

8. Lee، AY التقدم الأخير في التسبب في الكلف. الخلايا الصباغية Res Melanoma Res. 2015 ، 28 ، 648-660. [CrossRef] [PubMed] 9. سبيكارت ، ر. فان جيلي ، م. سبيكارت ، مم ؛ لامبرت ، ياء ؛ فان جيل ، ن. بيولوجيا متلازمات فرط التصبغ. الخلايا الصباغية Res Melanoma Res. 2014 ، 27 ، 512-524. [CrossRef] [PubMed]

10. سلومينسكي ، RM ؛ Zmijewski ، MA ؛ Slominski، AT دور صبغة الميلانين في سرطان الجلد. إكسب. ديرماتول 2015، 24، 258-259. [CrossRef] [PubMed] 11. سلومينسكي ، أ. ورتسمان ، ياء ؛ توبين ، دي جي نظام هرمون السيروتونين / الميلاتونين الجلدي: تأمين مكان تحت أشعة الشمس. FASEB J. 2005، 19، 176–194. [CrossRef] [PubMed]

12. ساركار ، ر. أرورا ، ب. Garg، KV Cosmeceuticals لفرط التصبغ: ما هو المتاح؟ ياء الجلدية سورج. 2013 ، 6 ، 4-11. [CrossRef] [PubMed]

13. ميامورا ، واي. كويلو ، سان جرمان ؛ وولبر ، ر. ميلر ، سا ؛ واكاماتسو ، ك. زمودزكا ، بي زد ؛ إيتو ، إس. سمودا ، سي. Passeron ، T. ؛ تشوي ، دبليو. وآخرون. تنظيم تصبغ بشرة الإنسان والاستجابة للأشعة فوق البنفسجية. خلية الصباغ الدقة. 2007 ، 20 ، 2-13. [CrossRef] [PubMed]

14. ديفيس ، المفوضية الأوروبية ؛ Callender ، VD فرط تصبغ ما بعد الالتهاب: مراجعة لعلم الأوبئة والميزات السريرية وخيارات العلاج في البشرة الملونة. J. كلين. استيت. ديرماتول. 2010 ، 3 ، 20-31. [PubMed]

15. سايلز كامبوس ، إتش. سوزا ، العلاقات العامة ؛ بيجيني ، كولومبيا البريطانية ؛ دا سيلفا ، شبيبة ؛ Cardoso ، CR لمحة عامة عن التأثيرات المعدلة لحمض الأوليك في الصحة والمرض. ميني. القس ميد. تشيم. 2013 ، 13 ، 201-210. [CrossRef] [PubMed]

16. بارفيز ، س. كانغ ، م. تشونغ ، HS ؛ تشو ، سي ؛ هونغ ، MC ؛ شين ، عضو الكنيست ؛ Bae، H. مسح وآلية عوامل تصبغ البشرة وتفتيحها. فيتوثر. الدقة. 2006 ، 20 ، 921-934. [CrossRef] [PubMed]

17. لو ، إل. ؛ جيانغ ، إل. جينج ، سي ؛ تساو ، ياء ؛ Zhong ، L. السمية الجينية المستحثة بالهيدروكينون والأكسدة DNAdamage في خلايا HepG2. تشيم. بيول. تفاعل. 2008 ، 173 ، 1-8. [CrossRef] [PubMed]

18. Enguita، FJ؛ Leitao، AL Hydroquinone: تلوث البيئة والسمية والأجوبة الميكروبية. كثافة العمليات 2013، 2013، 542168. [CrossRef] [PubMed]

19. مستحضرات تفتيح البشرة Draelos، ZD والجدل حول الهيدروكينون. ديرماتول. هناك. ٢٠٠٧ ، ٢٠٣٠٨-٣١٣. [CrossRef] [PubMed]

20. Koo، JH؛ لي أنا. يون ، كورونا كيم ، هو. بارك ، البوسنة والهرسك ؛ يقلل زيت زهرة الربيع المسائية المتصبن من Park، JW من تكوين الميلانين في خلايا سرطان الجلد B16 ويقلل من تصبغ الجلد الناتج عن الأشعة فوق البنفسجية لدى البشر. الدهون 2010،45 ، 401-407. [CrossRef] [PubMed]

21. كورديل ، جورجيا ؛ Colvard، MD المنتجات الطبيعية والطب التقليدي: تشغيل نموذج. ج. نات. إنتاج 2012، 75، 514-525. [CrossRef] [PubMed]

22. بانوسيان ، أ. Wikman ، G. Pharmacology of Schisandra Chinensis Bail: نظرة عامة على الأبحاث والاستخدامات الروسية في الطب. ياء إثنوفارماكول. 2008 ، 118 ، 183-212. [CrossRef] [PubMed]

23. Chen، P.؛ بانج ، إس. يانغ ، ن. منغ ، هـ. ليو ، ياء ؛ تشو ، ن. تشانغ ، م. شو ، زي. جاو ، دبليو. تشين ، ب. وآخرون. التأثيرات المفيدة لـ Schisandrin B على وظيفة القلب في نموذج الفئران لاحتشاء عضلة القلب. بلوس وان 2013 ، 8 ، e79418. [CrossRef] [PubMed]

24. Lee، HJ؛ جو ، إس. ريو ، ياء ؛ جيونج ، HS ؛ لي ، جي ؛ Ryu ، MH ؛ جونغ ، MH ؛ كيم ، هـ. كيم ، BJ آثار SchisandraChinensis Turcz. الفاكهة على التهاب الجلد التماسي الناجم عن ثنائي نيترو فلورو بنزين في الفئران. مول. ميد. تقرير 2015 ، 12 ، 2135-2139. [CrossRef] [PubMed]

25. Chun، JN؛ تشو ، م. لذا أنا.؛ Jeon، JH التأثيرات الوقائية لمستخلص فاكهة Schisandra Chinensis و lignans ضد أمراض القلب والأوعية الدموية: مراجعة الآليات الجزيئية. Fitoterapia 2014، 97، 224–233. [CrossRef] [PubMed]

26- كانغ ، أوهايو ؛ تشاي ، HS ؛ تشوي ، ج. تشوي ، HJ ؛ بارك ، PS ؛ تشو ، SH ؛ لي ، ج. لذا ، HY ؛ تشو ، YK ؛ كويون ، أوهايو ؛ وآخرون. تأثيرات مستخلص ماء Schisandra Fructus على إطلاق السيتوكين من خط الخلايا البشرية. جيه ميد. الغذاء 2006 ، 9 ، 480-486. [CrossRef] [PubMed]

27. Poma، A. بيانشيني ، إس. Miranda ، M. تثبيط إنتاج النوى الصغيرة الناجم عن L- التيروزين بواسطة فينيل ثيوريا في خلايا سرطان الجلد البشري. موتات. الدقة. 1999، 446، 143–148. [CrossRef]

28. Kim، HJ؛ كيم ، IS ؛ دونغ ذ.؛ لي ، هو كيم ، شبيبة ؛ كيم ، شبيبة ؛ وو ، ج ت. Cha ، من خلال التأثير المحفز لتكوين الميلانين من سيرسيماريتين من خلال الزيادات في عامل النسخ المرتبط بالميكروفيلم وتعبير التيروزيناز. كثافة العمليات J. مول. علوم. 2015 ، 16 ، 8772–8788. [CrossRef] [PubMed]

29. Busca، R .؛ آبي ، ص. مانتوكس ، ف. أبيردام ، إي. Peyssonnaux ، سي ؛ إيشيني ، أ. Ortonne ، JP ؛ Ballotti ، R. Rasmediates التنشيط المعتمد على cAMP للكينازات المنظمة للإشارة خارج الخلية (ERKs) في الخلايا الصباغية. EMBO J. 2000، 19، 2900–2910. [CrossRef] [PubMed]

30. Busca، R .؛ Ballotti، R. Cyclic AMP رسول رئيسي في تنظيم تصبغ الجلد. الدقة خلية الصباغ 2000 ، 13 ، 60-69. [CrossRef] [PubMed]

31. Hah، YS؛ تشو ، هاي ليم ، تاي ؛ بارك ، DH ؛ كيم ، جلالة الملك ؛ يون ، ياء ؛ كيم ، ج ج. كيم ، CY ؛ Yoon، TJ Induction of melanogenogenesis by rapamycin في MNT البشرية -1 خلايا سرطان الجلد. آن. ديرماتول. 2012 ، 24 ، 151-157. [CrossRef] [PubMed]

32. Yun، WJ؛ كيم ، إي واي بارك ، JE ؛ جو ، سي ؛ بانغ ، SH ؛ تشانغ ، إي جيه ؛ Chang، SE Microtubule-related proteinlight chain 3 وتشارك في تكوين الميلانين عن طريق تنظيم تعبير MITF في الخلايا الصباغية. علوم. Report.2016، 6، 19914. [CrossRef] [PubMed]

33. Spritz، RA؛ السمع ، VJ ، الابن. الاضطرابات الوراثية من تصبغ. حال. همم. جينيه. 1994، 22، 1–45. [PubMed]

34- كاديكارو أل. تشين ، ياء ؛ يانغ ، ياء ؛ تشين ، إس. جيمسون ، ياء ؛ Swope ، VB ؛ تشنغ ، تي. كاداكيا ، م. عبد الملك ، ز. - الهرمون المنشط للخلايا الصباغية يثبط الإجهاد التأكسدي من خلال 53- مسار تأشير في الخلايا الصباغية البشرية. مول. الدقة السرطان. 2012 ، 10 ، 778-786. [CrossRef] [PubMed]

35. Wasmeier، C.؛ هيوم ، ن. بولاسكو ، جي ؛ Seabra ، MC Melanosomes في لمحة. J. خلية علوم. ٢٠٠٨ ، ١٢١٣٩٩٥-٣٩٩٩. [CrossRef] [PubMed]

36. Brozyna، AA؛ جوزويكي ، دبليو. كارلسون ، جا. Slominski، AT Melanogenesis يؤثر على البقاء على قيد الحياة بشكل عام وخالٍ من الأمراض في المرضى الذين يعانون من الورم الميلانيني من المرحلة الثالثة والرابعة. همم. باتول. 2013 ، 44 ، 2071-2074. [CrossRef] [PubMed]

37. سلومينسكي ، أ. كيم ، تي ك. Brozyna ، AA ؛ Janjetovic، Z.؛ بروكس ، DL ؛ شواب ، ل. سكوبويات ، سي ؛ Jozwicki، W.؛ Seagroves، TN دور تكوين الميلانين في تنظيم سلوك سرطان الجلد: يؤدي تكوين الميلانين إلى تحفيز تعبير HIF -1 والمسارات المصاحبة المعتمدة على HIF. قوس. بيوتشيم. بيوفيز. 2014 ، 563،79-93. [CrossRef] [PubMed]

38 - Kim، HJ؛ لي ، ج. شين ، عضو الكنيست ؛ هيون ليم ، ك. كيم ، YJ ؛ Lee ، MH التأثير التثبيطي لمستخلص Gastrodia elata في تكوين الميلانين في خلايا الورم الميلانيني HM3KO. J. كوزميت. علوم. 2013 ، 64 ، 89-98. [PubMed]

39. Hemesath، TJ؛ السعر ، ER ؛ تاكيموتو ، سي. باداليان ، تي. فيشر ، يربط كيناز DE MAP بعامل النسخ Microphthalmia بإشارات c-Kit في الخلايا الصباغية. Nature 1998، 391، 298–301. [PubMed]

40. السعر ER؛ دينغ ، إتش إف ؛ باداليان ، تي. بهاتاشاريا ، إس. تاكيموتو ، سي. ياو ، TP ؛ Hemesath ، TJ ؛ فيشر ، إشارات خاصة بالسلالة في الخلايا الصباغية. تحفيز C-kit يجند p300 / CBP إلى صغر العين. بيول. تشيم. 1998، 273، 17983–17986. [CrossRef] [PubMed]

41. بيرتولوتو ، سي ؛ آبي ، ص. Hemesath ، TJ ؛ بيل ، ك. فيشر ، دي ؛ Ortonne ، JP ؛ Ballotti ، R. منتج Microphthalmiagene كمحول إشارة في التمايز الناجم عن cAMP للخلايا الصباغية. J. خلية بيول. 1998، 142،827–835. [CrossRef] [PubMed]

42. Pogenberg، V.؛ Ogmundsdottir ، MH ؛ بيرجستينسدوتير ، ك. شيبسكي ، أ. فونج ، ب. دينيكو ، ف. Milewski ، M. ؛ Steingrimsson ، E. ؛ ويلمانز ، م. تطوير الجينات. 2012، 26، 2647–2658. [CrossRef] [PubMed]

43. Flaherty، KT؛ هودي ، ف. فيشر ، دي من الجينات إلى الأدوية: الاستراتيجيات المستهدفة لسرطان الجلد. نات. القس السرطان 2012، 12، 349–361. [CrossRef] [PubMed]

44. Lee، TH؛ سيو ، جو ؛ بايك ، SH ؛ كيم ، سي التأثيرات المثبطة للريسفيراترول على تخليق الميلانين في التصبغ الناجم عن الأشعة فوق البنفسجية في جلد الخنزير الغيني. بيومول. هناك. 2014 ، 22 ، 35-40. [CrossRef] [PubMed]

45. Su، TR؛ لين ، جي. تساي ، سي سي ؛ هوانغ ، تي كيه ؛ يانغ ، زي واي وو ، مو ؛ تشنغ ، YQ ؛ سو ، سي سي ؛ Wu ، YJ تثبيط تكوين الميلانين بواسطة حمض الغال: احتمال تورط مسارات PI3K / Akt و MEK / ERK و Wnt / -cateninsigninging في خلايا B16F10. كثافة العمليات J. مول. علوم. 2013 ، 14 ، 20443-20458. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​ياجيما ، أنا ؛ كوماساكا ، ماي ؛ ثانغ ، إن دي ؛ غوتو ، واي. تاكيدا ، ك. ياماشيتا ، أو. إيدا ، م. Ohgami ، N. ؛ Tamura ، H. ؛ كاواموتو ، واي. وآخرون. إشارات RAS / RAF / MEK / ERK و PI3K / PTEN / AKT في تطور الورم الميلانيني الخبيث وعلاجه. ديرماتول. الدقة. الممارسة. 2012 ، 2012 ، 354191. [CrossRef] [PubMed]

47. Kim، DS؛ كيم ، سي. القمر ، SJ ؛ تشونغ ، JH ؛ كيم ، KH ؛ تشو ، خ. Park، KC Ceramide يمنع تكاثر الخلايا من خلال تعطيل AKT / PKB ويقلل من تخليق الميلانين في خلايا Mel-Ab. 2001 ، 14 ، 110-115. [CrossRef] [PubMed]

48. Kim، JH؛ بايك ، SH ؛ كيم ، د. تشوي ، تاي ؛ يون ، تي جيه ؛ هوانج ، شبيبة ؛ كيم ، م. كوون ، هجرية ؛ Lee ، CH عدم تنظيم تركيب الميلانين من خلال وجود A وتطبيقه في نموذج البرق في الجسم الحي. ياء إنفيستيج. ديرماتول. 2008 ، 128 ، 1227-1235. [CrossRef] [PubMed]

49. هارتمان ، ML ؛ Czyz، M. MITF في الورم الميلانيني: الآليات الكامنة وراء تعبيره ونشاطه. خلية مول. الحياة علوم. 2015 ، 72 ، 1249-1260. [CrossRef] [PubMed]

50. Kim، DS؛ هوانج ، إس. لي ، جي. كيم ، سي. كوون ، س. بارك ، KC Sphingosine -1- الفوسفات يقلل من تخليق الميلانين عن طريق تنشيط ERK المستمر وتدهور MITF اللاحق. J. خلية علوم. 2003 ، 1161699-1706. [CrossRef] [PubMed]

51. Xu، W. جونج ، إل. حداد ، مم. بيشوف ، أو. كامبيسي ، ياء ؛ نعم ، ET ؛ Medrano ، EE تنظيم مستويات بروتين MITF المرتبطة بعامل النسخ المرتبط بالميكروفيلم بالاقتران مع إنزيم اقتران الثيوبيكويتين hUBC9. إكسب. دقة الخلية. 2000 ، 255 ، 135-143. [CrossRef] [PubMed]

52. بينيت ، DC ؛ كوبر ، PJ ؛ Hart ، IR خط من الخلايا الميلانينية في الفئران غير الورمية ، متزامنة مع الورم الميلانيني B16 وتتطلب محفزًا للورم للنمو. كثافة العمليات السرطان 1987 ، 39 ، 414-418. [CrossRef] [PubMed]

53. Meira، WV؛ هاينريش ، تا. كادينا ، SM ؛ Martinez، GR Melanogenesis يثبط التنفس في خلايا الورم الميلانيني B 16- بينما يعزز محتوى خلايا الميتوكوندريا. إكسب. دقة الخلية. 2017 ، 350 ، 62-72. [CrossRef] [PubMed]

54. Ohguchi، K .؛ تاناكا ، ت. إليا ، أنا. إيتو ، تي. إينوما ، م. ماتسوموتو ، ك. أكاو ، واي. Nozawa ، Y.Gnetol كمثبط بوتينتيروسيناز من جنس Gnetum. بيوسكي. التكنولوجيا الحيوية. بيوتشيم. 2003 ، 67 ، 663 - 665. [CrossRef] [PubMed]

55- Uchida، R .؛ إيشيكاوا ، إس. Tomoda، H. تثبيط نشاط التيروزيناز وتصبغ الميلانين بواسطة 2- هيدروكسي إيروسول. اكتا فارم. سينيكا ب 2014 ، 4 ، 141-145. [CrossRef] [PubMed]