التوليف الأخضر وتوصيف جزيئات الحديد النانوية المُصنَّعة من مستخلص الأوراق المائية من مادة الليوكوكسيلون فيتيكس وتطبيقاتها الطبية الحيوية

خلاصة:تم استخدام طريقة الاستخلاص على البارد للحصول على المستخلص المائي لـفيتكس ليكوكسيلونيترك بنسبة 1:10. تم تصنيع جزيئات الحديد النانوية (FeNPs) باستخدام مستخلص أوراق مائيV. leucoxylonكعامل مختزل. تم استخدام نهج الطب النباتي لصنع FeNPs عن طريق خلط 1 مل من المستخلص النباتي مع 1 ملي مولار من كبريتات الحديديك. تم استخدام الفحص المجهري الإلكتروني (SEM) ، والتحليل الطيفي للأشعة تحت الحمراء (FTIR) ، والتحليل الطيفي المرئي فوق البنفسجي (UV-Vis) ، والتحليل الطيفي للأشعة السينية المشتتة للطاقة لفحص FeNPs المركبة. تم توضيح تفاعل الاختزال من خلال تغيير لون المحلول ، ويؤكد تكوين اللون الأسود أن FeNPs قد تم تشكيلها. تم العثور على أعلى ذروة امتصاص (كحد أقصى) عند 395 نانومتر في التحليل الطيفي للأشعة المرئية وفوق البنفسجية. أطياف FTIRV. leucoxylonأظهر مستخلص الأوراق المائي تغيرات في بعض القمم بلغت 923.96 سم−1 و 1709.89 سم−1، مع المجموعات الوظيفية الأحماض الكربوكسيلية ، والألدهيدات غير المشبعة ، والكيتونات ، والتي كانت تفتقر إلى أطياف FTIR من FeNPs وهي مسؤولة عن تكوين FeNPs. لوحظت FeNPs بأقطار تتراوح بين 45 و 100 نانومتر في صور SEM. تم تأكيد إنشاء FeNPs بواسطة EDX ، مما يدل على إشارة قوية في منطقة الحديد المعدني عند 6-8 Kev. كشف XRD عن طبيعة بلورية ومتوسط ​​قطر يبلغ 136.43 نانومتر.مضادات الأكسدة,مضاد التهاب، السامة للخلايا ، والتئام الجروحسجلت الاختبارات في المختبر نشاطًا مهمًا لـ FeNPs. تشير النتائج التراكمية لهذه الدراسة إلى أن التوليف الأخضر لـ FeNPsيعزز نشاطه البيولوجيويمكن أن تكون بمثابةعامل التئام الجروح الجلديوعامل سام للخلايا ضد السرطان. هناك حاجة إلى دراسة مستقبلية لتحديد الآليات المشاركة في تخليق FeNPs بواسطةV. leucoxylonوتطبيقاتها الطبية الحيوية.

الكلمات الدالة:فيتكس ليكوكسيلون؛ جسيمات الحديد النانوية SEM ؛ التئام الجروح الخلايا السامه

فوائد القسطرةمضاد للأكسدة,مضاد التهاب، السمية ، والتئام الجروح

1 المقدمة

يعد تطبيق تقنية النانو في العلوم والتكنولوجيا لتصنيع مواد جديدة على مستوى النانو مجالًا سريع النمو [1]. تتعامل تقنية النانو مع مواد التصنيع على المستوى الذري لاكتساب خصائص مميزة يمكن التلاعب بها من أجل التطبيقات المفضلة. ينمو هذا المجال بسرعة مع تطبيقاته في العلوم والتكنولوجيا لتصنيع مواد جديدة على المستوى النانوي [2]. تبنت القطاعات الصناعية المختلفة تقنية النانو في السنوات الأخيرة بسبب تطبيقاتها في مجالات أنظمة التخزين الإلكترونية [3] ، والتكنولوجيا الحيوية [4] ، والفصل المغناطيسي والتركيز المسبق للتحليلات المستهدفة ، وتوصيل الأدوية المستهدفة [5] ، ومركبات الجينات والأدوية. التسليم [3،5،6]. وبالتالي ، فإن هذه الجسيمات لديها القدرة على إحداث تأثير كبير على المجتمع نتيجة لمجموعة واسعة من التطبيقات التي يمكن استخدامها من أجلها. الجسيمات النانوية (NPs) هي كتل من الجسيمات التي يقل حجمها عن مائة نانومتر وتعتبر من الكتل الهيكلية الرئيسية في مجال تقنية النانو. النشاط الأعلى للـ NPs هو كل من خصائصهم المميزة والجودة التي يتميزون بها [7]. NPs العضوية وغير العضوية هما التصنيفان الأساسيان اللذان يمكن تطبيقهما على الجسيمات النانوية. قد تشمل الجسيمات النانوية غير العضوية NPs المغناطيسية ، NPs المعدنية النبيلة (مثل الذهب والفضة) ، وأشباه الموصلات NPs (مثل ثاني أكسيد التيتانيوم وأكسيد الزنك). قد تشمل الجسيمات النانوية العضوية الكربون NPs. تجذب الجسيمات النانوية غير العضوية اهتمامًا كبيرًا لأنها توفر خصائص مادية فائقة بالإضافة إلى تنوع وظيفي. لقد تم فحصها كأدوات ممكنة للتصوير الطبي وكذلك لعلاج الأمراض بسبب خصائص الحجم التي تمتلكها [8]. تتأثر الخصائص الكيميائية والفيزيائية والبيولوجية المتنوعة للـ NPs بشكل كبير بمجموعة متنوعة من المعلمات ، بما في ذلك حجم الجسيمات النانوية والتشكل ، بالإضافة إلى طلاء السطح ، والتي يتم تحديدها عادة أثناء تخليق الجسيمات النانوية. يحدث فقدان النشاط البيولوجي المقصود بسبب انخفاض الاستقرار الغرواني. يؤثر الأس الهيدروجيني والقوة الأيونية وعدد كبير من البروتينات التي تتفاعل مع AgNPs في ظل الظروف ذات الصلة على الاستقرار الغرواني. نتيجة لذلك ، يعد اختيار تقنية التوليف المناسبة أمرًا بالغ الأهمية للحصول على خصائص الجسيمات المرغوبة لتطبيقات محددة [9].

حاليًا ، هناك مجموعة متنوعة من NPs التي يمكن تصنيعها باستخدام مجموعة متنوعة من العمليات الفيزيائية والكيميائية والبيولوجية والهجينة. وفقًا لنتائج عدد كبير من الدراسات البحثية ، تشمل العمليات الفيزيائية والكيميائية لإنتاج الجسيمات النانوية استخدام المذيبات العضوية والمركبات الخطرة وكميات كبيرة من الطاقة وعوامل التثبيت غير القابلة للتحلل [10]. لذلك ، في مجال تقنية النانو الخضراء ، أصبح تصنيع NPs باستخدام المواد المتاحة بشكل طبيعي مثل المستخلصات النباتية ، والكائنات الحية الدقيقة المختلفة ، ومستقلباتها ، وبعض المواد الدبالية الطبيعية [11 ، 12] كعوامل اختزال وسد. تم استخدام طرق التخليق الصديقة للبيئة لإنتاج مجموعة متنوعة من الجسيمات النانوية المعدنية ، بما في ذلك الفضة والذهب والحديد والنحاس والزنك. يعد تطوير طرق سهلة ومقبولة بيئيًا لتوليف NPs أحد المجالات الرئيسية لتكنولوجيا النانو. يمكن استخدام المواد الحيوية مثل الكائنات الحية الدقيقة والمستخلصات النباتية في عملية تحضير مجموعة متنوعة من NPs [13 ، 14]. ومع ذلك ، نظرًا لأن بعض الكائنات الحية من مسببات الأمراض ، فمن الخطير التعامل معها. من أجل الازدهار ، يجب الحفاظ على الكائنات الحية الدقيقة في المزرعة وإخضاعها لظروف يتم التحكم فيها بعناية ، بما في ذلك درجة الحرارة ودرجة الحموضة والمعلمات الأخرى. نظرًا لأنه يلغي العملية الشاقة للحفاظ على الثقافة الميكروبية ، فإن تركيب NPs باستخدام أجزاء من النبات يمكن أن يثبت في بعض الأحيان أنه أكثر فائدة من العمليات البيولوجية الأخرى [15]. ونتيجة لذلك ، فقد حظيت بالكثير من الاهتمام نظرًا لخصائصها المتأصلة ، والتي تشمل استخدام الموارد الطبيعية ، والسرعة ، والصداقة البيئية ، والحميدة. هذه الخصائص الجذابة ضرورية للغاية للاستخدام في التطبيقات الطبية. الجسيمات النانوية التي ينتجها التوليف الأخضر لها حجم محدد جيدًا وتحت السيطرة ، فهي خالية من الملوثات ، والطريقة سهلة لتوسيع نطاقها. هذه بعض الفوائد الإضافية للتوليف الأخضر [16]. يتم تحديد النشاط البيولوجي للجسيمات النانوية المُصنَّعة إلى حد كبير وضبطه بواسطة المواد الخضراء المستخدمة لاستقرار وتقليل أيونات المعادن. يجب أن تكون إحدى الخصائص المثالية للـ NPs هي أنه يجب أن تتمتع بقدرة متميزة على التمييز بين الأهداف المحتملة (مسببات الأمراض) وخلايا الثدييات (المضيفة) [17].

لهذا السبب ، تم فحص المستخلص المائي لأوراق V. leucoxylon لقدرته على تسهيل تكوين جزيئات الحديد النانوية (FeNPs) في البحث الحالي. الحديد هو أحد العناصر التي يمكن العثور عليها بأكبر وفرة على وجه الأرض. في الآونة الأخيرة ، تم الاعتراف به كفئة جديدة من NPs المهمة نظرًا لحقيقة أنه يمتلك مجموعة متنوعة من الخصائص الفريدة ، بما في ذلك الإكراه العالي والمغناطيسية الفائقة. الأجهزة المحفزة ، والأجهزة الإلكترونية ، وتخزين المعلومات ، وأجهزة الاستشعار ، وتكنولوجيا توصيل الأدوية ، والطب الحيوي ، وأجهزة التسجيل المغناطيسية ، وتنظيف البيئة ليست سوى بعض التطبيقات العديدة المثيرة للاهتمام التي استخدمت FeNPs [18]. علاوة على ذلك ، وفقًا لعدد من الدراسات ، يمكن إنشاء FeNPs من مستخلصات نباتية مختلفة. تشتمل هذه المستخلصات النباتية على أوراق الكافور [19] وأوراق الرمان [20] ورماد قشر الموز [21]. نبات V. leucoxylon ، الذي تم استخدامه في الدراسة الحالية ، هو عضو في عائلة Verbenaceae. تُعرف أيضًا باسم شجرة العفيفة ذات الأوراق الخمس (الكانادا: Sengeni ، Holenekki ، Hollalakki) ويمكن العثور عليها في المنطقة على طول ضفاف الأنهار في غابات دائمة الخضرة وشبه دائمة الخضرة والغابات النفضية الرطبة على طول الجداول. يمكن أن يصل ارتفاعها إلى 20 مترًا ويتم تصنيفها على أنها شجرة متواضعة إلى كبيرة متساقطة الأوراق. على طول غابات غاتس الغربية في الهند ، يمكن العثور عليها بأعداد كبيرة. تم الإبلاغ عن أن مستخلص أوراق V. leucoxylon يحتوي على مجموعة متنوعة من الأنشطة الدوائية مثل الأنشطة المضادة للالتهابات ومضادات الأكسدة ومضادات الذهان ومضادات الاكتئاب ومضادات باركنسون ومضادات فرط شحميات الدم [22]. تم استخدام المنتجات الطبيعية ، عبر التاريخ وخاصة في الطب الشعبي ، لعلاج مجموعة متنوعة من الأمراض والأمراض. تعود هذه الممارسة إلى العصور القديمة. جعلت طرق كيمياء المنتجات الطبيعية التي كانت موجودة منذ فترة طويلة من الممكن العثور على مجموعة كبيرة ومتنوعة من المستقلبات الثانوية النشطة بيولوجيًا التي تأتي من مصادر أرضية وبحرية. يتم الآن النظر في عدد كبير من هذه المواد التي تحدث بشكل طبيعي لاستخدامها كمستحضرات صيدلانية محتملة [23].

هناك عدد كبير من المواد الكيميائية والمغذيات التي تحدث بشكل طبيعي والتي لم يتم الكشف عنها بعد والتي تعد مفيدة للبشرية. نتيجة لذلك ، هناك طلب فوري على البحث والتطوير لخيارات علاجية مبتكرة يمكن استخدامها بنجاح في التدخلات العلاجية مع خلق الحد الأدنى من الآثار الضارة.

عملية التوليف الخضراء المقترحة حاليًا لـ FeNPs متميزة وفعالة من حيث التكلفة. في الدراسة الحالية ، جرت محاولة لإنشاء جسيمات نانوية في درجة حرارة الغرفة دون استخدام أي مواد كيميائية أو تقنيات فيزيائية. تم اختيار نبات Vitex leucoxylon في محاولة لتصنيع جزيئات الحديد النانوية ، وتم تنفيذ نماذج منهجية شاملة في المختبر لتقييم فاعلية جسيمات الحديد النانوية. تم نشر عدد محدود فقط من الدراسات البحثية حول مفهوم الجسيمات النانوية وتطبيقاتها الطبية الحيوية في هذا النبات. نتيجة لذلك ، قررنا أنه سيكون من المفيد إجراء هذا البحث مع وضع الأهداف التالية في الاعتبار: فحص المواد الكيميائية النباتية وقياس عدد المستقلبات الثانوية في V. leucoxylon ؛ التوليف الأخضر وتوصيف FeNPs من V. leucoxylon ؛ دراسة مقارنة للتأثيرات المضادة للأكسدة والمضادة للالتهابات لفطر V. leucoxylon و FeNPs في المختبر ؛ النشاط السام للخلايا في المختبر لمستخلص الأوراق المائية من V. leucoxylon و FeNPs ضد سرطان الجلد وسرطان الرئة وسرطان الفم ؛ نشاط التئام الجروح في المختبر لمستخلص الأوراق المائية من V. leucoxylon و FeNPs الاصطناعية عن طريق مقايسة الخدش.

2. المواد والأساليب

2.1. جمع المواد النباتية

في شهر مارس من عام 2022 ، تم قطف أوراق جديدة من نبات V. leucoxylon من منطقة غابات Anshi في Western Ghats في منطقة Uttar Kannada بولاية كارناتاكا في الهند. تم التعرف على الأوراق والمصادقة عليها من قبل د. كارناتاكا ، بالإشارة إلى عينة القسيمة المودعة في قسم علم النبات ، كلية العلوم في كارناتاكا ، دارواد ، كارناتاكا. بعد جمعها ، تم غسل مادة أوراق النبات الطازجة تحت ماء الصنبور الجاري ، وتجفيفها بالشمس ، ثم طحنها إلى مسحوق خشن باستخدام مطحنة ميكانيكية. تم حفظ المسحوق في حاويات كانت مغلقة عند درجة حرارة الغرفة بحيث يمكن استخدامها لاحقًا في عملية الاستخلاص بالمذيب الخام.

2.2. تحضير مستخلصات نباتية

باستخدام جهاز Soxhlet ، تم استخلاص 25 جم من مسحوق الأوراق لمدة 48 ساعة مع 250 مل من الماء المقطر. تم تركيز المستخلص المائي بشكل أكبر باستخدام مبخر الروتو ، ثم تم تجفيفه في مجففات قبل حفظه في زجاجة مغلقة عند 4 درجات مئوية حتى الاستخدام. لتركيب FeNPs ، تم استخدام المستخلص المائي كعامل مختزل واستقرار.

2.3 المذيبات والكواشف

كانت جميع المواد الكيميائية والمذيبات المستخدمة ذات جودة تحليلية وتم شراؤها من Hi-media (Hubli ، الهند).

2.4 التحليل الكيميائي النباتي

باتباع الإجراء الذي وصفه Deepti et al. (2012) ، تم اختبار مستخلص الأوراق المائية الخام V. leucoxylon نوعيًا لوجود مكونات كيميائية نباتية مختلفة مثل الفلافونويد والقلويدات والفينولات والجليكوسيدات والستيرولات واللجنين والصابونين والأنثراكينون والعفص والسكريات المختزلة [24].

2.5 تخليق جسيمات الحديد النانوية

أولاً ، تمت إضافة 1 مل من مستخلص الأوراق المائية V. leucoxylon إلى 1 0 مل من محلول مائي 0.05 ملي مولار FeSO4 ، ويُرج الخليط. في درجة حرارة الغرفة وفي بيئة مظلمة ، تم تنفيذ عملية خليط التفاعل بالكامل. كان تفاعل الأكسدة / الاختزال مرئيًا بوضوح بعد احتضان خليط التفاعل عديم اللون وتفاعله للقدر المطلوب من الوقت [25]. من أجل إزالة أي آثار من المستخلص المائي من FeNPs المُصنَّع حديثًا ، والذي تم السماح له بالتجفيف في مسحوق بعد الطرد المركزي عند 10 ، 000 دورة في الدقيقة لمدة عشر 10 دقائق خلال فترة التفاعل المطلوبة ، تم طرد الخليط المائي المحتوي على FeNPs مرة ثانية ثم ينثر في ماء مقطر مزدوج ويجفف [26].

2.6. توصيف FeNPs

عدة طرق ، مثل التحليل الطيفي للأشعة فوق البنفسجية المرئية (UV-Vis) ، مطيافية الأشعة تحت الحمراء لتحويل فورييه (FTIR) ، المسح المجهري الإلكتروني ، مطيافية الأشعة السينية المشتتة للطاقة ، حيود الأشعة السينية (XRD) ، محلل حجم الجسيمات ، وزيتا المحتملة ، من أجل توصيف FeNPs.

2.6.1. التحليل القائم على الأشعة فوق البنفسجية - المرئية - الطيفية

أولاً ، تم تقييم قسامة 1 مل من محلول FeNPs الغروي في أنابيب الكوارتز باستخدام التحليل الطيفي المرئي للأشعة فوق البنفسجية (U -3310 ، هيتاشي ، طوكيو ، اليابان) ، باستخدام الماء المقطر كمرجع و 0. 05 ملي مولار FeSO4 على شكل فراغ ، للتحقق من اختزال أيونات الحديديك في المحلول الغرواني [27].

2.6.2. التحليل القائم على FTIR

تم تحديد مجموعات الوظائف (المجموعات) التي كانت مرتبطة على سطح الحديد والتي شاركت في تركيب FeNPs باستخدام التحليل الطيفي FTIR (S700 ، Nicolet ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، [28]. بعد 72 ساعة من الحضانة ، تم عزل FeNPs عن طريق الطرد المركزي المتكرر (3-4 مرات) من مخاليط التفاعل عند 10 ، 000 دورة في الدقيقة لمدة 15 دقيقة. تم استبدال المادة الطافية بالماء منزوع الأيونات وتم تخزين الحبيبات كمسحوق. بعد التجفيف ، تم وضع FeNPs من خلال تحليل FTIR باستخدام عملية تكوير بروميد البوتاسيوم بنسبة 1: 100.

2.6.3. تحليل قائم على المسح الإلكتروني والمجهري

تم استخدام المجهر الإلكتروني الماسح (JSM-IT 500 ، Jeol ، بوسطن ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، لفحص الجسيمات النانوية وتحديد شكل سطحها. تم تحضير الركائز على ركيزة نظيفة من 5 مم × 5 مم مشقوقة من رقاقة قطرها 100 مم. تم السماح للركيزة بالتفاعل لمدة ساعتين إلى 6 ساعات وتم تحضير العينة عن طريق الطرد المركزي لمحلول غرواني عند 10 ، 000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق. تم تجفيف الحبيبات بعد أن تم طردها مؤخرًا عدة مرات ، وبعد ذلك تمت إعادة تشتيتها في الماء منزوع الأيونات وتكرر الإجراء. أخيرًا ، تم الحصول على الحبيبات الجافة ، والتي خضعت لمزيد من التوصيف الهيكلي بواسطة تحليل SEM وفقًا للإجراء الموضح بواسطة المعهد الوطني للمعايير والتكنولوجيا ، NIST -2007 [29].

2.6.4. الأشعة السينية المشتتة للطاقة

بعد التجفيف على شبكة نحاسية مغلفة بالكربون ، تم تحليل FeNPs المخفضة باستخدام EDX (JSM-IT 500 ، Jeol ، بوسطن ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، مما سمح أيضًا بتحديد التكوين الأولي.

2.6.5. زيتا المحتملة

ملاحظات NPs تعد إمكانات زيتا أداة مفيدة لاكتساب رؤى إضافية حول استقرار NPs الغروية. يوفر اتساع إمكانات زيتا تلميحًا إلى الاستقرار المحتمل للغروانية. وفقًا لـ Meléndrez et al. (2010) ، تعتبر الجسيمات مستقرة إذا كانت قيم جهد زيتا الخاصة بها إما أكثر إيجابية من زائد 30 مللي فولت أو أكثر سالبة من 30 مللي فولت [30]. يجب أن تؤخذ هذه الحقيقة في الاعتبار. تم استخدام مقياس زيتا بالليزر من أجل الحصول على قراءات لإمكانيات زيتا السطحية (Malvern zeta seizer 2000 ، Malvern ، UK). تم تخفيف العينات السائلة للجسيمات النانوية ، التي يبلغ مجموعها 5 ملليلتر ، باستخدام 50 ملليلترًا من الماء المقطر المزدوج ، واستخدم 2 ملم لكل متر مربع من كلوريد الصوديوم كمحلول إلكتروليت معلق. بعد ذلك ، تم تعديل الأس الهيدروجيني حتى وصل إلى المستوى المطلوب. تم تقليب العينات لمدة 30 دقيقة. بعد رج الحاوية ، لوحظ الأس الهيدروجيني عند التوازن ، وتم تحديد إمكانات زيتا للجسيمات المعدنية. لغرض تحديد الإمكانات السطحية لـ FeNPs ، تم استخدام إمكانات زيتا. في كل حالة ، كانت القيمة المعلنة هي متوسط ​​نتائج ثلاثة قياسات فردية. عندما تراوحت قيم إمكانات زيتا من أعلى من 30 مللي فولت زائد إلى أقل من 30 مللي فولت ، تم تحديد معايير ثبات NPs [31].

2.6.6. محلل حجم الجسيمات

من أجل تحديد حجم جسيم العينة ، تم إجراء اختبار PSA عليها بعد تجفيفها بالتجميد ثم تفريقها باستخدام جهاز الموجات فوق الصوتية (SZ -100 ، Horiba ، كيوتو ، اليابان).

2.6.7. تحليل حيود الأشعة السينية (XRD)

خضعت جسيمات الحديد النانوية المُصنَّعة من مستخلص الأوراق المائية لـ V. leucoxylon لتحليل XRD (Smart Lab SE ، Rigaku ، طوكيو ، اليابان) لتحديد طبيعة وكذلك متوسط ​​حجم الجسيمات النانوية.

2.7. تحديد نشاط مضادات الأكسدة باستخدام الطرق المخبرية

2.7.1. مقايسة الطاقة المضادة للأكسدة الحديديك أيون (FRAP)

وفقًا لـ Oyaizu (1986) ، مع تعديل طفيف ، تم تقييم قدرة تخفيض أيونات الحديديك [32]. لمدة 3 0 دقيقة عند درجة حرارة 5 0 درجة مئوية ، تمت إضافة 2.5 مل من محلول فوسفات 20 ملي مولار و 2.5 مل من 1 بالمائة فيريسيانيد البوتاسيوم إلى 2.5 مل من مستخلص أوراق V. المزيج. بعد فترة الحضانة ، تمت إضافة الخليط بـ 2.5 مل من 10 في المائة وزن / وزن حمض ثلاثي كلورو أسيتيك و 0.5 مل من 0.1 في المائة وزن / وزن كلوريد الحديديك قبل تحضينه لمدة 10 دقائق إضافية. أخيرًا ، تم استخدام مقياس الطيف الضوئي UV-V للكشف عن الامتصاص عند 700 نانومتر. كمعيار ، تم استخدام حمض الأسكوربيك. تم اختبار كل عينة ثلاث مرات.

2.7.2. مقايسة الكسح باستخدام بيروكسيد الهيدروجين

بناءً على قدرة مستخلص أوراق نبات V. leucoxylon المائي و FeNPs الاصطناعية على تنظيف بيروكسيد الهيدروجين ، تم تقييم النشاط المضاد للأكسدة لهذه المركبات. أولاً ، {0}. تمت إضافة 6 مل من محلول الفوسفات (pH-7.4) المحتوي على 4 ملي مولار H O إلى 0.5 مل من حمض الأسكوربيك القياسي بتركيز معروف ، بالإضافة إلى الأنابيب التي تحتوي على مستخلصات نباتية بتركيزات مختلفة تتراوح من 100 ميكرولتر إلى 500 ميكرولتر (درجة الحموضة - 7.4). باستخدام محلول فوسفات مؤقت ومحلول فارغ خالٍ من بيروكسيد الهيدروجين ، قمنا بتقييم امتصاص المحلول عند 230 نانومتر بعد 10 دقائق. تم استخدام المخزن المؤقت للفوسفات لإنشاء عنصر التحكم بدلاً من العينة أو المعيار [33]. تم اختبار كل عينة ثلاث مرات. تم استخدام طريقة الصيغة لحساب نسبة التثبيط.

2.7.3. DPPH الجذور الحرة الكسح

تم اختبار مقايسة مستخلص أوراق V. leucoxylon و FeNPs المُصنَّع من أجل قدرتها على تنظيف الجذور الحرة باستخدام جذور DPPH ككاشف [34]. تم دمج العينات مع محلول DPPH الجذري (60 م) في الإيثانول (100 ميكرولتر) بتركيزات مختلفة (وزن / حجم). تم استخدام مقياس الطيف الضوئي UV-Vis لقياس امتصاص الخليط عند 517 نانومتر بعد 30 دقيقة من الحضانة في الظلام عند درجة حرارة الغرفة. تم استخدام حمض الاسكوربيك كمعيار للتجربة. تم استخدام المعادلة التالية لتحديد نشاط مسح DPPH لكل عينة:

حيث يمثل Ac الامتصاص لتفاعل التحكم ، والذي يتم إجراؤه عن طريق خلط 100 لتر من الإيثانول مع 100 لتر من محلول DPPH ، ويمثل At امتصاص عينة الاختبار. أجريت التجارب في ثلاثة توائم. تم حساب قيمة IC لكل عينة. تمت الإشارة إلى مستوى أعلى من نشاط الجذور الحرة بواسطة خليط التفاعل الذي يحتوي على امتصاص أقل.

2.7.4. مقايسة الفوسفوموليبدينوم (PM)

تم تحديد النشاط الكلي لمضادات الأكسدة باستخدام تقنية Prieto et al.، 1999 القياسية. تلقى كل أنبوب اختبار يحتوي على 3 مل من الماء المقطر و 1 مل من محلول كاشف الموليبدات مستخلص أوراق مائية من V. leucoxylon و FeNPs بتركيزات مختلفة تتراوح من 100 ميكرولتر إلى 500 ميكرولتر. تم تحضين هذه الأنابيب لمدة 90 دقيقة عند 95 درجة مئوية. تم قياس امتصاص خليط التفاعل عند 695 نانومتر بعد تعديل هذه الأنابيب إلى درجة حرارة الغرفة لمدة 20-30 دقيقة بعد الحضانة. كان المعيار المرجعي حمض الأسكوربيك [35].

2.8 تقييم الفعالية المخبرية المضادة للالتهابات

تم تقييم التأثير المضاد للالتهاب لمستخلص أوراق نبات V. leucoxylon المائي و FeNPs المتولد باستخدام طريقة تمسخ البروتين التي حددها Elias et al. ، 1988 ، مع تعديلات طفيفة [36]. كدواء قياسي ، تم استخدام ديكلوفيناك الصوديوم. خليط تفاعل يشتمل على 2 مل من التركيز المعروف من FeNPs المصنعة (100 جم / مل) مع ديكلوفيناك الصوديوم القياسي (100 جم / مل) و 2.8 مل من محلول ملحي مخزون الفوسفات (الرقم الهيدروجيني 6.4) تم خلطه مع 2 مل من بيض الدجاج الطازج الزلال (1 مم) وحضنت عند 27 ± 1 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. تم إحداث التمسخ عن طريق وضع خليط التفاعل في حمام مائي عند 70 ْم لمدة 10 دقائق. بعد التبريد ، تم قياس الامتصاصية عند 660 نانومتر باستخدام ماء مقطر مزدوج على شكل فراغ. تم إجراء كل اختبار ثلاث مرات. تم استخدام الصيغة التالية لحساب النسبة المئوية لتثبيط تمسخ البروتين:

حيث ، عند=امتصاص عينة الاختبار ؛=امتصاص السيطرة.

2.9 تحديد النشاط السام للخلايا والمضاد للسرطان لجزيئات الحديد النانوية باستخدام اختبار MTT

تم تقييم تأثير V. leucoxylon و FeNPs المُصنَّع على جدوى الخلايا الليفية غير السرطانية L292 ونشاطها المضاد للسرطان على سرطان الجلد (A375) وسرطان الرئة (A549) وسرطان الفم (KB -3-1) باستخدام مقايسة MTT القياسية ، وفقًا لـ Carmichael et al.، (1987) [37]. تم الحصول على جميع خطوط الخلايا من المركز الوطني لعلوم الخلايا (NCCS) ، بيون ، الهند. تم اشتقاق القيم المئوية لتثبيط نمو الخلايا (IC50) باستخدام منحنيات الاستجابة للجرعة لكل خط خلية ، واستخدمت الصيغة التالية لحساب النسبة المئوية لتثبيط النمو. إن تحويل MTT إلى منتج فورمازان أرجواني بواسطة نازعة هيدروجين الميتوكوندريا للخلايا السليمة هو أساس هذه التجربة [38].

2.10. دراسة في المختبر للشفاء من الجروح باستخدام اختبار فحص الخدش

تم فحص قدرات الانتشار والترحيل لخلايا خط الخلية L292 الناتجة عن العينات ذات التركيزات المعروفة من المستخلصات النباتية وجسيمات الحديد النانوية في التحقيق الحالي [39]. تم استخدام لوحات زراعة الخلايا الحيوانية مع وسائط DMEM المكملة بنسبة 1 0 في المائة من FBS و 2 في المائة من المضاد الحيوي Pen-Strep (دارمشتات ، ألمانيا) لبدء عملية زراعة الخلايا. تم استخدام طرف ماصة بلاستيكية معقمة لخدش الطبقة الأحادية المتجمعة من الخلايا بعد أن نمت إلى ما يقرب من 50 ، 000 خلية لكل مل. تم استخدام محلول PBS لإزالة أي حطام خلية غير مرغوب فيه. كعنصر تحكم سلبي ، تم استخدام الخلايا غير المعالجة ، بينما تم استخدام حمض الأسكوربيك القياسي كعنصر تحكم إيجابي لعينات البوليمر ذات التركيز المعروف. لمدة 24 ساعة التالية ، تم الاحتفاظ بالخلايا عند 37 درجة مئوية مع 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون. لفحص الهجرة النسبية للخلايا وإغلاق الجرح ، تم تحضين طبقات الخلايا المخدوشة وتصويرها على فترات تتراوح من 0 ساعة إلى 6 ساعات إلى 12 ساعة و 24 ساعة. تم استخدام معايرة MagVision Software (X64 ، 2016 ، Magnus ، New Delhi ، India) بدقة 4 × لتحديد مسافة الفجوة. من أجل تحديد معدل إغلاق الجرح والهجرة ، تم استخدام الصيغة الموضحة أدناه:

فيما يتعلق بما يلي: منطقة الجرح 0=المقاسة فور الخدش ؛ تقاس منطقة الجرح=بعد ساعة ؛ معدل الترحيل=Rm (µm / h) ؛ Wf=عرض الجرح الأولي (µm) ؛ و=وقت الترحيل (ساعة).

2.11. تحليل احصائي

تم تقديم البيانات على أنها متوسط ​​الانحراف المعياري والخطأ المعياري ، وتم تنفيذ كل تجربة ثلاث مرات. تم استخدام الإصدار 20 من برنامج SPSS لإجراء تحليل أحادي الاتجاه للتباين (ANOVA) على الفروق في متوسط ​​الدرجات الموجودة بين المجموعات.

يطلب المزيد:

البريد الإلكتروني: wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp / Tel: plus 86 15292862950

محل:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop