كيفية إصلاح وعلاج إصابة الكلى الحادة؟

الاتصال: أودري هوaudrey.hu@wecistanche.com

نهج متعدد أوميك لإصابات الكلى الحادة وإصلاحها

Louisa MS Gerhardt and Andrew P. McMahon

الملخص

تتمتع الكلية بقدرة تجديدية ملحوظة. استجابةً للإصابة الإقفارية أو السامة ، يمكن أن تتكاثر الخلايا النبيلة القريبة لإعادة بناء الأنابيب التالفة واستعادة وظائف الكلى. ومع ذلك ، شديدةإصابة الكلى الحاد(AKI) أو AKI المتكرر (إصابة الكلى الحاد) الأحداث يمكن أن تؤدي إلى إصلاح سوء التكيف وتطور المرض من AKI (إصابة الكلى الحاد) إلىفشل كلوي مزمن(كد). حدد تطبيق تقنيات الخلية المفردة حالات الخلايا الأنبوبية القريبة المصابة بعد أسابيع من الإصابة بـ AKl (إصابة الكلى الحاد)، يتميز بتوقيع جزيئي منشط للالتهابات. سلطت الدراسات اللاجينية الضوء على التغيرات الديناميكية في منظر الكروماتين للكلية بعد القصور الكلوي الحاد (إصابة الكلى الحاد)ووصف عوامل النسخ الرئيسية المرتبطة بـ AKI (إصابة الكلى الحاد) استجابة. يفتح تكامل التقنيات متعددة omic إمكانيات جديدة لتحسين فهمنا لـ AKI (إصابة الكلى الحاد) والقوى الدافعة وراء AKl (إصابة الكلى الحاد) - الانتقال إلى CKD ، مع الهدف النهائي لتصميم استراتيجيات تشخيصية وعلاجية مخصصة لتحسين القصور الكلوي الحاد (إصابة الكلى الحاد) النتائج والوقايةمرض كلويتقدم.

الكلمات الدالة: إصابة الكلى الحاد، Multi-omics ، Epigenomics ، تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية ، تسلسل ATAC.

مقدمة

إصابة الكلى الحاد(AKI) ، الذي تم تشخيصه بالزيادة المفاجئة في الكرياتينين في الدم و / أو انخفاض حجم البول ، هو حالة منتشرة بشكل كبير مرتبطة بزيادة معدلات الاعتلال والوفيات بالإضافة إلى تكاليف الرعاية الصحية الكبيرة [1e4]. على سبيل المثال ، تشير الأدلة الحالية إلى أن ما لا يقل عن 25 بالمائة من جميع مرضى COVID -19 في المستشفى يصابون بـ AKI (إصابة الكلى الحاد) وأن هؤلاء المرضى معرضون لخطر وفيات أعلى بكثير من مرضى COVID -19 الذين لا يعانون من القصور الكلوي الحاد (إصابة الكلى الحاد) [5]. المرضى الناجين من AKI (إصابة الكلى الحاد) معرضون لخطر متزايد من الانتقال إلى مرض الكلى المزمن والمراحل النهائية [3،4،6]. وفقًا للتقرير السنوي لنظام بيانات الكلى في الولايات المتحدة لعام 2018 ، فإن 52.6 بالمائة فقط من مرضى شؤون المحاربين القدامى في المستشفى والذين قابلوا AKI (إصابة الكلى الحاد)معايير التشخيص ، أعطيت التشخيص AKI (إصابة الكلى الحاد) ، داعيا إلى مزيد من الوعي بـ AKI (إصابة الكلى الحاد) في إجراءات المستشفى [7]. علاوة على ذلك ، التشخيص المبكر لـ AKI (إصابة الكلى الحاد)محدود بسبب نقص المؤشرات الحيوية الحساسة وخيارات العلاج المتاحة لـ AKI (إصابة الكلى الحاد) الاستمرار في الاعتماد على تحسين الدورة الدموية وتجنب السمية الكلوية والعلاج باستبدال الكلى.

تعد خلايا الأنابيب الدانية ، وهي أكثر أنواع الخلايا وفرة في الكلى ، مسؤولة عن جزء كبير من السائل الكلوي وإعادة امتصاص المواد المذابة ، وقد ظهرت كلاعبين رئيسيين في الاستجابات التكيفية وغير القابلة للتكيف مع القصور الكلوي الحاد (AKI) (إصابة الكلى الحاد) [8]. بسبب نشاطها الأيضي المرتفع واعتمادها على التمثيل الغذائي التأكسدي ، يؤدي نقص التروية بسرعة إلى استنفاد ATP ، وتراكم أنواع الأكسجين التفاعلية ، وفي النهاية موت الخلايا المبرمج أو نخر خلايا الأنابيب القريبة (الشكل 1). تتمتع الخلايا النُبيبية القريبة التي تنجو من الحدث الإقفاري بالقدرة على إلغاء التمايز والتكاثر وإعادة بناء الأنابيب التالفة ، وبالتالي تلعب دورًا أساسيًا في عملية الإصلاح التكيفي لاستعادة وظائف الكلى [9-11]. ومع ذلك ، فإن الخلايا الأنبوبية القريبة غير القادرة على التكيف ، والتي تتميز بنمط ظاهري مُسبِّب للالتهابات ، ومتورِّطة أيضًا في تطور المرض من القصور الكلوي الحاد (AKI) (إصابة الكلى الحاد) لمرض الكلى المزمن (CKD) ، وهي عملية معقدة تشمل الالتهاب ، وخلخلة الأوعية الدموية ، وإنتاج المصفوفة خارج الخلية عن طريق الخلايا العضلية الليفية المنشطة والخلايا الليفية العضلية (الشكل 1) [8 ، 12]. تقنيات Omics التي تفحص التنظيم الجيني ، والتعبير الجيني ، ومنتجات البروتين ، مثل مقايسة الكروماتين الذي يمكن الوصول إليه بواسطة الترانسبوزيز باستخدام التسلسل (ATAC-seq) ، وتسلسل الرنا المرسال ، وقياس الطيف الكتلي ، على التوالي ، حسنت بشكل كبير البصيرة الجزيئية في الاستجابات الخلوية التي بدأها AKI (إصابة الكلى الحاد). في الآونة الأخيرة ، أتاحت التطبيقات أحادية الخلية لهذه الأساليب دراسة الأحداث الخلوية بدقة عالية غير مسبوقة. تبشر هذه المناهج وغيرها من المناهج متعددة النطاقات بفهم شامل للآليات التنظيمية التي تحكم أمراض الكلى ، مما يفتح طرقًا جديدة للعلامات الحيوية واكتشاف الأدوية. تستعرض هذه المخطوطة النتائج الأخيرة التي تستخدم تقنية omics علىإصابة في الكلىوإصلاح والنظر في التطبيقات المستقبلية للنُهج متعددة النظم لتحسين فهم ومعالجةإصابة في الكلىومرض كلوي.

شكل 1:نظرة عامة على AKI والعمليات.

تكون خلايا النُبيبات الدانية شديدة التأثر بنقص التروية ، والذي يمكن أن يؤدي إلى موت الخلايا من خلال موت الخلايا المبرمج والتنظيم (التهاب الحويصلة ، والتطعيم الحديدي ، والنخر) بالإضافة إلى النخر غير المنظم ونزع كل من الخلايا الميتة والقابلة للحياة في التجويف الأنبوبي. يمكن لخلايا الأنابيب القريبة الباقية (PTCs) أن تتكاثر وتتكاثر لاستعادة بنية ووظيفة الكلى ؛ ومع ذلك ، يمكن أن يؤدي الإصلاح غير القادر على التكيف أيضًا إلى تطور المرض إلى مرض الكلى المزمن (CKD). تتميز هذه العملية بتخلخل الأوعية الدموية ، وتمايز الخلايا الليفية العضلية ، وترسب المصفوفة الليفية خارج الخلية (ECM) المعزز ، وفقدان الأنبوب ، والالتهاب المزمن. من المحتمل أن تلعب PTCs Nfkb1 بالإضافة إلى الإصلاح الفاشل ، والتي تتميز بنمط ظاهري إفرازي مرتبط بالشيخوخة ، دورًا مهمًا في AKI (إصابة الكلى الحاد)-to-CKD الانتقال.

علم الجينوم

تهدف الدراسات الجينومية إلى تحديد الأساس الجيني للمرض عن طريق التسلسل المستهدف القائم على الفرضيات للجينات المرشحة أو تسلسل الجينوم الكامل الخالي من الفرضيات. هنا ، سنركز على دراسات الارتباط على مستوى الجينوم (GWAS) التي تستخدم نهجًا غير متحيز لتعيين متغيرات التسلسل عبر الجينوم بأكمله لميزات النمط الظاهري مثل سمات المرض والسماح بتحديد الجين المرشح للدراسات الميكانيكية (الشكل 2). بالمقارنة مع سمات المرض الأخرى ، فإن العدد المتاح من GWAS يستفسر عن الخلفية الجينية لـ AKI (إصابة الكلى الحاد) نادر. هذا يرجع جزئيًا إلى الطبيعة المعقدة وغير المتجانسة لـ AKI (إصابة الكلى الحاد) كصفة مرضية. AKI (إصابة الكلى الحاد) يمكن أن يكون ناتجًا عن العديد من العوامل المختلفة مثل نقص التروية والإنتان والأدوية السامة للكلية واعتلال الكلية الانسدادي. تشير الأدلة الحالية إلى أن الآليات الجزيئية والخلوية الأساسية لـ AKI (إصابة الكلى الحاد) تحتوي على مكونات خاصة بالسبب [13 ، 14] ، لكن التعريف المتفق عليه لـ AKI (إصابة الكلى الحاد) - تغيير في كرياتينين المصل وإخراج البول - لا يأخذ في الحسبان اختلاف AKI (إصابة الكلى الحاد) الأسباب.

تم توضيح سير عمل مبسط لدراسة الارتباط على مستوى الجينوم (GWAS) (أعلى اليسار). لدراسة ارتباط بين المتغيرات الجينية وسمة معينة ، يتم إجراء تسلسل الجينوم الكامل أو التنميط الجيني باستخدام مصفوفات تعدد الأشكال أحادية النوكليوتيدات (SNP) على مجموعة سكانية ، ويتم استخدام اختبارات الارتباط الإحصائي لتحديد تعدد الأشكال المرتبطة بالسمة محل الاهتمام. لتسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية (أعلى اليمين) ، يتم تحضير تعليق أحادي الخلية ، وعزل الخلايا المفردة والتقاط جزيئات الرنا المرسال من الخلية (أو النواة) على حبات للتحويلات اللاحقة إلى (كدنا). يتم تضخيم cDNA وتحديد التسلسلات من خلال تسلسل الجيل التالي (NGS) ورسم خرائط التسلسل للجينوم. للتحليل اللاجينومي (أسفل اليمين) ، يتم اتباع اختبار للكروماتين الذي يمكن الوصول إليه بواسطة الترانسبوزيز (ATAC) بواسطة NGS ورسم خرائط التسلسل لتصور إمكانية الوصول إلى الكروماتين على مستوى الجينوم. يتم استخدام ترانسبوزيز Tn5 المفرط النشاط (Tn5) على وجه التحديد لتقسيم مواقع الكروماتين المفتوح وإدخال محولات التسلسل في وقت واحد لـ NGS. تظهر مناطق زيادة إمكانية الوصول إلى الكروماتين على شكل قمم ATAC. لتحليل البروتينات عن طريق قياس الطيف الكتلي (أسفل اليسار) ، يتم استخلاص البروتينات وهضمها إلى ببتيدات وتأيينها. في مطياف الكتلة ، يتم تسريع الأيونات ، وتعريضها لمجال مغناطيسي ، ويتم قياس نسبة الكتلة إلى الشحن ، مما يسمح بتحديد البروتين وتحديد كميته.

حتى الآن ، استجوب اثنان أكبر من GWAS الخلفية الجينية لـ AKI (إصابة الكلى الحاد). أظهرت الدراسة الأولى ارتباطًا بين تعدد الأشكال النووية المفردة (SNPs) في GRM7 LMCD 1- AS1 وموضع BBS9 مع AKI المرتبط بجراحة الكسب غير المشروع في الشريان التاجي (إصابة الكلى الحاد) في مجموعة اكتشاف مكونة من 873 مريضًا ومجموعة النسخ المتماثل [15]. تم الجمع بين المرضى الثاني من مجموعتين متميزتين لتشكيل مجموعة اكتشاف تضم 1429 مريضًا في حالة حرجة وحدد أربعة مرضى AKI (إصابة الكلى الحاد) - تعدد الأشكال على مقربة شديدة من عامل الإنترفيرون التنظيمي 2 (IRF2) أو عامل النسخ T-box 1 (TBX1) [16]. ومن المثير للاهتمام ، أن IRF2 تم ربطه بالإصابة بالتسمم العضلي وله دور تنظيمي في الجهاز المناعي [17،18] و TBX1 هو جزء من عائلة جين T box ، وهي مجموعة من عوامل النسخ ذات الأدوار المهمة في مصير الخلية وتنظيم حالة الخلية [19] ]. ومع ذلك ، فإن الارتباط بين AKI (إصابة الكلى الحاد) ولا يمكن استنساخ هذه المواقع في مجموعة محتملة من المرضى المصابين بأمراض خطيرة ، والذين تم تنميطهم الجيني تحديدًا من أجل SNPs المحددة [20]. وهذا يؤكد على ضرورة وجود أحجام أكبر للعينات من أجل مستقبل AKI (إصابة الكلى الحاد) GWAS ويوضح صعوبة تحديد عوامل الخطر الجينية القوية للأمراض غير المتجانسة مثل AKI (إصابة الكلى الحاد).

بالإضافة إلى ذلك ، من المرجح أن تساعد تحليلات مواضع السمات الكمية (eQTL) في ترجمة الأفكار التي اكتسبتها GWAS إلى آليات المرض. تهدف تحليلات OTL إلى تحديد المواقع التي تشرح جزءًا بسيطًا من تباين التعبير الجيني في الأنسجة ويمكن استخدامها لربط SNPs في الجينوم غير المشفر لاستهداف التعبير الجيني. على سبيل المثال ، أدى النهج التكاملي الذي يجمع بين GWAS و eOTL والتجارب الوظيفية إلى تحديد الجينات المشاركة في التسبب في مرض CKD [21-23].

الشكل 2:رسم تخطيطي لتقنيات omics المختارة.

ترانسكريبتوميكس

أحدث ظهور تقنيات جديدة قابلة للتطوير لدراسة نسخة الخلايا داخل الكلى المصابة ثورة في فهمنا للاستجابات الخلوية لـ AKI (إصابة الكلى الحاد) ، والكشف عن حالات خلوية جديدة وإضاءة عالية للمناظر الطبيعية المتغيرة ديناميكيًا للكلية التي تم إصلاحها. تسلسل mRNA الجزء الأكبر من الكلى على مدار عام واحد بعد AKI (إصابة الكلى الحاد) أظهر تغيرات التعبير الجيني الخاصة بالزمان المتعلقة بالإصابة الأنبوبية ، والانتشار ، والإصلاح ، والتليف ، والمناعة [24]. هذا الماوس AKI (إصابة الكلى الحاد) أظهرت بيانات البنك الحيوي أن الجينات المرتبطة بالالتهابات لا تزال في حالة تنظيم بعد عام واحد من التهاب المفاصل الروماتويدي (AKI) (إصابة الكلى الحاد) ، مما يشير إلى الالتهاب المستمر كعامل دافع لتطور المرض إلى CKD. سمح تسلسل mRNA بالجملة لخزعات زرع الكلى الروتينية بتحديد ملامح التغيرات النسخية قصيرة وطويلة المدى في عمليات زرع الكلى البشرية الناتجة عن إصابة نقص التروية / إعادة التروية (IRI) أثناء الزرع [25]. تم أخذ جميع خزعات الكلى في الساعات الأولى بعد أن أظهر إعادة ضخ الدم صورة نسخية مماثلة تتميز بتنشيط جينات الاستجابة الفورية إلى المبكرة ، والتي يشفر العديد منها عوامل تنظيم النسخ.

في 3 و 12 شهرًا بعد الزرع ، يمكن تحديد مسارين متباينين ​​مرتبطين إما بالشفاء أو التقدم إلى CKD. أظهر المسار الشبيه بـ CKD انخفاضًا في التنظيم في التعبير عن الجينات المتعلقة بالتكوين الحيوي للميتوكوندريا وانتظام الجينات المرتبطة بالالتهاب والتليف ، كما لوحظ في نموذج الماوس لـ AKI (إصابة الكلى الحاد) [24 ، 25]. تشير كل من الدراسات التي أجريت على الفئران والإنسان إلى دور بارز لنشاط الخلايا التائية والخلايا البائية وظهور مراكز الأنسجة اللمفاوية الثالثة في النتائج طويلة المدى لـ AKI (إصابة الكلى الحاد) [25،26]. تحليل الماوس AKI (إصابة الكلى الحاد) تحاج مجموعات بيانات البنك الحيوي وزراعة الكلى البشرية عن نشاط الخلايا البائية الذي يحركه مستضد ذاتي ، مما يعزز تطور المرض من خلال الاستجابة المناعية المستمرة ، بعد عام واحد من AKI (إصابة الكلى الحاد) [27].

على الرغم من أن تسلسل mRNA بالجملة أثبت أنه مفيد للغاية في AKI (إصابة الكلى الحاد) الدراسات ، لا يتم تمييز الاستجابات الخاصة بنوع الخلية بهذه التقنية. تضيف الأساليب الجينية لوضع العلامات على أنواع الخلايا المميزة دقة أكبر ورؤية ثاقبة إضافية. على سبيل المثال ، تستخدم ترجمة تنقية تقارب الريبوسوم (TRAP) علامات eGFP للوحدة الفرعية الريبوسومية L10a لتحديد مجموعة فرعية معينة من الرنا المرسال في أنواع الخلايا الفردية التي تخضع للترجمة النشطة [28]. أول دراسة TRAP في AKI (إصابة الكلى الحاد) استخدم البحث نموذجًا جينيًا لتفعيل بروتين CRE بوساطة recombinase للكاسيت eGFP-L10a على وجه التحديد داخل أنواع الخلايا النيفرون أو اللحمية أو الأوعية الدموية أو المناعية وأظهر تغييرات نسخية مميزة مرتبطة بكل حجرة خلوية بعد AKI (إصابة الكلى الحاد) [29]. تم تقليل تنظيم العديد من الجينات المتعلقة بوظيفة الأنبوب الكلوي لمدة 24 ساعة بعد AKI (إصابة الكلى الحاد). في المقابل ، تم تنظيم الجينات المشاركة في نشاط المسار المضاد للاستماتة ، وتكاثر الخلايا ، وحركة الخلية بشكل ملحوظ. أظهر تحليل TRAP لخلايا الأنابيب القريبة التي أبرزتها علامة الإصابة Kim -1 (المشفرة بواسطة Hazel) أن غالبية خلايا Kim {{2} الإيجابية تم إصلاحها بنجاح بعد أسبوعين من AKI (إصابة الكلى الحاد) ، على الرغم من أن 15 بالمائة احتفظوا بتعبير كيم -1 وعلامة الإصابة Sox9 [10] ، مما يبرز حالة الخلية المصابة باستمرار [30]. كشف التحليل النسيلي أن توسع كيم -1 المستنسخات الإيجابية أعيد تسكين الأنابيب القريبة التالفة ، مما يدعم نموذج الإصلاح من خلال عدم التمايز بين الخلايا الأنبوبية القريبة ، وليس من خلال مجموعة محددة من الخلايا الجذعية / السلفية [30]. تم تنظيم النسخ FoxMI بشكل كبير في خلايا كيم -1- الأنابيب القريبة الإيجابية ، وتبين أنه يؤدي إلى تكاثر الأنابيب القريبة في زيترو بطريقة تعتمد على مستقبل عامل نمو البشرة [30]. أساليب تسلسل mRNA أحادية الخلية عالية الإنتاجية ، وفحص ملفات تعريف تسلسل mRNA للخلية الكاملة (scRNA-seq) أو نصوص mRNA المترجمة نوويًا (snRNA-seq) ، عززت بشكل كبير AKI (إصابة الكلى الحاد) دراسات. توفر هذه الأساليب نظرة ثاقبة جزيئية عميقة للتعبير الجيني على مستوى الخلية عند دمجها مع مناهج حسابية قوية ، وتحديد أنواع الخلايا المتغيرة وحالات الخلية في جميع أنحاء العضو [31 ، 32]. يبدأ scRNA-seq من تعليق الخلايا المفردة أو النوى المفردة ، والتي تم تصنيفها بعلامات جزيئية فريدة و lysed (الشكل 2). يتم بعد ذلك نسخ mRNA عكسيًا وتضخيمه وتسلسله. حددت دراسة snRNA-seq على الكلى المعرضة لانسداد الحالب أحادي الجانب (UUO) مجموعتين جديدتين من الخلايا الأنبوبية القريبة بعد 14 يومًا من UUO ، أحدهما كان له توقيع تكاثر قوي ، في حين أن الجينات الأخرى المعبر عنها تشارك في الالتهاب وحركات الخلايا ، مثل Ccl2 و II34 و Cxcll و Dock10 [33].

تتجلى مجموعة مماثلة من الخلايا في دراسة snRNA-seq التي تحدد ملامح الكلية المصابة بعد IRI [34]. في الساعات الأولى بعد IRI ، هناك انخفاض في تنظيم التعبير الجيني للنبيبات القريبة الطبيعية واستجابة نسخية ملحوظة بما في ذلك الجينات المبكرة الفورية وعلامات الإصابة المعروفة HuverI و Krt20 [24،25،34]. بحلول اليوم الثاني بعد IRI ، أظهر جزء كبير من خلايا الأنابيب القريبة إما ملفًا شخصيًا تكاثريًا أو استعاد خاصية التوقيع النسخي لخلايا الأنابيب القريبة المتباينة. ومع ذلك ، فإن مجموعة صغيرة من الخلايا المسببة للالتهابات ، بروتيفيبروتيك ، والتي تتميز بالتعبير عن Vcaml في معظم الخلايا ، وتعايش Cal2 في مجموعة فرعية ، تنبأ بنشاط لعائلة NF-KB من عوامل النسخ. أثناء تكاثر خلايا الأنابيب القريبة انخفضت أسبوعين بعد AKI (إصابة الكلى الحاد) ، زادت الخلايا الأنبوبية القريبة المسببة للالتهابات ، مما يشير إلى وجود صلة بين الإصلاح الأنبوبي الفاشل ومجموع الخلايا المؤيدة للالتهابات ، بروفيبوتيك (الشكل 1). ومن المثير للاهتمام ، أن تحليل deconvolution لدراسات تسلسل الحمض النووي الريبي السائبة يشير إلى زيادة عدد سكان مماثل مع تقدم الكلية في العمر بشكل طبيعي وبعد الزرع.

تماشياً مع الدراسة المذكورة أعلاه ، [34] ، هناك تركيز انتقائي وراثيًا على الخلايا الأنبوبية القريبة المصابة بعد أربعة أسابيع من إصابة القصور الكلوي الحاد (AKI) (إصابة الكلى الحاد) ، باستخدام الفئران 20- T2A-CRE-ERT2 لتسمية وتنقية الخلايا الأنبوبية القريبة المصابة ، أظهر نمطًا خلويًا مصابًا مشابهًا: VcamI / Cal2 بالإضافة إلى مجموعة الخلايا الأنبوبية القريبة المصابة والتي تم تمييزها أيضًا عن طريق الالتهاب القوي ( على سبيل المثال ، Cal2 و Vcam1 و Cxcll و / 34) وتوقيع نصي احترافي (egPdgfb و ColAal) ، مع تنشيط ملحوظ لإشارات NF-KB و TNF و AP -1 [35]. تشترك هذه الخلايا الأنبوبية القريبة المصابة في سمات النمط الظاهري الإفرازي المرتبط بالشيخوخة (SASP) المحددة في الأعضاء المصابة الأخرى (الشكل 1) [35 ، 36]. على عكس AKI السابق (إصابة الكلى الحاد) [12] ، لم يلاحظ أي توقف كبير في دورة الخلية G2 / M في هذه الفئة من السكان. أظهرت تجارب رسم خرائط المصير الإضافية لخلايا ركوب الدراجات غالبية VcamI plus / Cal2 بالإضافة إلى خلايا الأنابيب القريبة ، المترجمة إلى الحدود القشرية النخاعية ، والتي تعود إلى خلايا الأنابيب القريبة التي تكاثرت في الأيام الأولى بعد AKI (إصابة الكلى الحاد). ومع ذلك ، من المحتمل أن تمثل خلايا النبيب القريبة القشرية Vuamt plus / Cu2 مواقع ثانوية للإصابة ، لا تتعلق بإصلاح النبيبات القريبة المرتبطة بالتكرار المبكر.

أطلس شامل للاستجابة للإصابة لضخ الدم من جانب واحد (UIR) يؤدي أداء scRNA-seq في نقاط زمنية متعددة من اليوم الأول إلى اليوم 14 بعد كشف UIR عن تعبير مرتفع في الخلايا المصابة من Sox4 و Cd24a ، الجينات المحددة للأدوار في التطور الكلوي [37]. تم الإبلاغ أيضًا عن مجموعة خلايا جديدة ، "خلايا هوية مختلطة" ، تظهر تضافرًا للنبيبات القريبة (Sl34a7) ، أو الطرف الصاعد السميك (Umod) ، أو علامات القناة التجميعية (Agp2). أظهرت بيانات scRNA-seq المأخوذة من نماذج اعتلال الكلية بحمض الفوليك ونماذج UUO أن تقليل التعبير عن علامات التمايز مثل ناقلات المواد المذابة في خلايا الأنابيب القريبة المصابة يرتبط بتقليل تنظيم الجينات المشاركة في عمليات التمثيل الغذائي ، مثل أكسدة الأحماض الدهنية [38]. تم تحديد المستقبل النووي Esrra كحلقة وصل مهمة بين تمايز الأنابيب القريبة والتمثيل الغذائي لأنه ينظم بشكل مباشر التعبير عن الجينات الأيضية والجينات الخاصة بالنبيبات القريبة. سلطت هذه الدراسة وغيرها من الدراسات المتسلسلة للـ scRNA-seq أيضًا الضوء على تنوع الخلايا المناعية التي لم يتم تقديرها سابقًا في الكلى المريضة [38،39].

أحد القيود المهمة على جميع تقنيات النسخ التي تمت مناقشتها هو عدم وجود المعلومات المكانية. تتيح منصات النسخ الجديدة الآن تصور تعبير الرنا المرسال مكانيًا عن طريق تلدين أقسام الأنسجة وتثبيتها مباشرةً على تحقيقات مشفرة بشكل فريد ، وتصوير قسم الأنسجة ، وإجراء النسخ العكسي في الموقع متبوعًا بإطلاق المسبار وتسلسله [40]. يمكن بعد ذلك تعيين النسخ المتسلسلة مرة أخرى في قسم الأنسجة المصوّرة. سمحت تقنية النسخ المكانية هذه بالتوطين المحدد لنوعين من الخلايا المتميزة نسبيًا لجزء النبيبات القريبة S3 [41] إلى القشرة والشريط الخارجي للنخاع الخارجي [42].إصابة الكلى الحاد) نماذج ، deconvolution لبقع النسخ المكانية الفردية باستخدام بيانات scRNA-seq كشفت AKI (إصابة الكلى الحاد) أنماط خاصة بالنموذج لتسلل الخلايا المناعية وتمكين تحديد Af 3- متميز يعبر عن سكان الخلايا الأنبوبية القريبة ، ويتحد مع العدلات بعد IRI [43]. توضح هذه الدراسات إمكانات omics المكانية والزمانية للتنبؤ بضوابط البيئة المكروية على الاستجابات الخلوية بعد AKI (إصابة الكلى الحاد).

علم الوراثة

تعتمد البرامج الخاصة بنوع الخلية للتعبير الجيني التفاضلي على التعديل اللاجيني للكروماتين (على سبيل المثال ، مثيلة الهيستون والأستلة) والحمض النووي (على سبيل المثال ، عن طريق مثيلة السيتوزين في بقايا CpG) استجابة لمنظمات النسخ المرتبطة بالحمض النووي والعوامل المرتبطة بها. تشير مجموعة من الأدلة المتراكمة إلى دور تنظيمي مهم لآليات الوراثة اللاجينية في القصور الكلوي الحاد (إصابة الكلى الحاد) والإصلاح الكلوي [44-46]. نظرًا للمراجعات المتعمقة الممتازة [44-47] ، فإننا نسلط الضوء لفترة وجيزة فقط على الدراسات اللاجينومية الحديثة المختارة في AKI (إصابة الكلى الحاد) ابحاث.

Positively charged histone proteins provide the core for packing negatively charged DNA, through electrostatic interactions, into nucleosomes — the structural unit of chromosomes[44]. Modifications to the amino-terminal tails of histones alter the chromatin structure or recruit chromatin modifiers, thus altering gene expression. An unbiased mass spectrometry screen of 63 different histone marks in the healthy kidney revealed widespread histone modifications with a compartment-specific pattern [48]. In this bulk tissue analysis, few histone marks showed a quantitatively significant change >5 في المائة بعد UUO. ومن المثير للاهتمام ، أنه تم الإبلاغ عن تغييرات تكميلية في علامات مختلفة على نفس الحمض الأميني ، مما يشير إلى استجابة منسقة لـ AKI (إصابة الكلى الحاد) [48].

تمت مقارنة المروجين المميزين H3K4me 3- بالمحسِنات التي تحمل علامة H3K27ac بعد AKI (إصابة الكلى الحاد) باستخدام الترسيب المناعي للكروماتين وتسلسل الجيل التالي (ChIP-seq) [49]. عرضت مواقع المحسنات النشطة تغييرًا أكثر ديناميكية استجابةً لـ AKI (إصابة الكلى الحاد). ارتبطت تعديلات الكروماتين في مواقع المحسن النشط بالارتباط المتغير لعوامل النسخ مثل Hnf4a و Gr و Stat3. Hnf4a هو عامل نسخ رئيسي في المواصفات والتمايز بين الخلايا الأنبوبية القريبة [50]. انخفضت خلايا الأنابيب القريبة استجابةً لـ AKI (إصابة الكلى الحاد) [49]. هذا من المحتمل أن يساهم في AKI (إصابة الكلى الحاد) - عدم التمايز الناجم عن الخلايا الأنبوبية القريبة المصابة. يعتبر Stat3 منظمًا رئيسيًا للنسخ في شبكة التهابية باستخدام عوامل تنظيمية لمسار NF-KB والبروتين المنشط -1 (AP -1) [51]. يتم الحفاظ على تنشيط مسار AP -1 بدرجة كبيرة كأساس أولي استجابة الماوس AKI (إصابة الكلى الحاد) و IRI المرتبط بزراعة الكلى البشرية [24،25]. مشاركة Stat3 في موقع Junb استجابةً لـ AKI (إصابة الكلى الحاد) يقترح دورًا لتعطيل Stat3 لمكونات نسخ AP -1 [49]. علاوة على ذلك ، فإن تثبيط البرومودومين وتنشيط المعزز المعتمد على الطرف الإضافي (BET) يضعف الانتعاش بعد القصور الكلوي الحاد. (إصابة الكلى الحاد)، وتسليط الضوء على الدور المهم لديناميات المحسن في AKI (إصابة الكلى الحاد)إصلاح [49].

أصبحت ATAC-seq المنهجية الأكثر استخدامًا لتقييم انفتاح الكروماتين واستنتاج نشاط المناطق الجينومية التنظيمية والنسخ. بسرعة ، انتقلت تقنية ATAC-seq من فحوصات الأنسجة الحساسة مع 500 خلية فقط ، إلى تحليل نووي واحد ، وآخر تحليل موازٍ لحالة الكروماتين والتعبير الجيني في نفس الخلية [41، 52-54]. يستخدم ATAC-seq ترانسبوزيز Tn5 مفرط النشاط لقطع الكروماتين المفتوح وعلامة قطع الحمض النووي مع محولات الحمض النووي لتسهيل بناء المكتبة وتسلسل الحمض النووي (الشكل 2). بالنظر إلى موقعين مستهدفين فقط في كل جينوم ، تكون بيانات ATAC متفرقة ، وتستخدم دراسات snATAC مناهج حسابية لتجميع الخلايا ذات ملفات تعريف snATAC المتشابهة والتكامل مع مجموعات بيانات sc أو snRNA-seq التي تم إنشاؤها بشكل مستقل. كشفت دراسة حديثة عن عدم التجانس الخلوي في عينات الكلى البشرية السليمة مع مجموعات بيانات snATAC-seq و snRNA-seq المتكاملة حسابيًا [55]. ومن المثير للاهتمام ، أن الدراسة حددت مجموعة سكانية فرعية من VCAM 1- تعبر عن الخلايا الأنبوبية القريبة ، والتي أظهرت انخفاضًا في نشاط HNF4A وزيادة نشاط أفراد عائلة NF-KB ، والتي تشبه جزئيًا الخلايا الأنبوبية القريبة المصابة المسببة للالتهابات والتي تم تحديدها في كلية الفأر. أسابيع بعد القصور الكلوي الحاد (إصابة الكلى الحاد) [34،35،55]. زادت وفرة هذه المجموعة من الخلايا بمرور الوقت في الفئران المسنة وكانت أعلى في الكلى المصابة بداء السكري مقارنة بالضوابط الصحية. وبالتالي ، يبدو أن بعض الاستجابات الخلوية محفوظة بين أمراض الكلى المختلفة وعبر الأنواع. ومع ذلك ، إلى أي مدى تساهم هذه المجموعة الخلوية في فقدان وظائف الكلى المرتبطة بالعمر ومرض كلويالتقدم يتطلب مزيد من التحقيق.

يتم تحسين اكتشاف نوع الخلية والتنبؤات التنظيمية عن طريق التحليل المشترك لكل من snRNA-seq و snATAC-seq في نفس النواة [41]. تم استخدام هذه التقنية مؤخرًا لتوصيف أنسجة الكلى البشرية السليمة و AKI (إصابة الكلى الحاد) وخزعات CKD التي تكشف عن تنوع خلايا جديد في الكلى الطبيعية وتسليط الضوء على حالات الإصابة المماثلة في الفئران و AKI البشري (إصابة الكلى الحاد)، بالإضافة إلى حالات خلايا الطرف الصاعد السميكة المتغيرة التي تتميز بالتعبير عن Proml و Dcd2 [56]. بالإضافة إلى ذلك ، قامت النسخ المكانية بترجمة الخلايا الليفية العضلية والخلايا المناعية في عينات CKD إلى مواقع إصابة النبيبات القريبة [56].

يستعيد الكيسانش ضعف وظائف الكلى

البروتينات والأيض

تكمل دراسة البروتينات والمستقلبات في أنسجة البلازما والبول والكلى باستخدام الرحلان الكهربي للهلام وقياس الطيف الكتلي أدوات الترنسسكريبتوم والتخلقية اللاجينومية. يمكن لمقياس الطيف الكتلي تحديد وقياس الجزيئات الكبيرة (مثل البروتينات) والمستقلبات الخلوية داخل نسيج معقد ، وقياس خصائص شحنة الكتلة المتميزة جزيئيًا للجزيئات عند تأينها وتعريضها لمجال مغناطيسي أو كهربائي (الشكل 2) [57]. تم توجيه العديد من دراسات البروتينات نحو تحديد المؤشرات الحيوية لـ AKI (إصابة الكلى الحاد) (تمت مراجعته بشكل شامل في مكان آخر [57-59]). على سبيل المثال ، تبين أن البروتينات المعدنية المثبطة للأنسجة البولية -2 (TIMP2) والبروتين الرابط لـ IGF -7 (IGFBP7) تنبئ بالوفاة والفشل الكلوي في المرضى المصابين بأمراض خطيرة بأمراض القصور الكلوي الحاد (إصابة الكلى الحاد) [60]. علاج مرضى TIMP2 و IGFBP7 المصابين بإجراءات رعاية داعمة وفقًا لإرشادات تحسين النتائج العالمية لأمراض الكلى (KDIGO) للمرضى المعرضين لمخاطر عالية للإصابة بـ AKI(إصابة الكلى الحاد) انخفاض AKI (إصابة الكلى الحاد) التطور في أول 72 ساعة بعد جراحة القلب ، لكنه لم يؤثر على معدل الوفيات والحاجة إلى العلاج الكلوي التعويضي [61]. هذه النتائج والنتائج من دراسات العلامات الحيوية الأخرى مشجعة ؛ ومع ذلك ، فإن المرقم الحيوي المثالي أو لوحة العلامات الحيوية الأكثر احتمالاً لـ AKI (إصابة الكلى الحاد)تقييم المخاطر ، استهداف AKI (إصابة الكلى الحاد)الوقاية والتشخيص التنبئي وربما حتى التوجيه العلاجي في الممارسة السريرية الروتينية لم يتم تحديدها بعد.

إلى جانب محرك أقراص AKI الفعال (إصابة الكلى الحاد) المؤشرات الحيوية ، يمكن أيضًا استخدام البروتينات لاستجواب AKI (إصابة الكلى الحاد) الفيزيولوجيا المرضية [62]. دراسة قبل السريرية للـ AKI الناجم عن سيسبلاتين (إصابة الكلى الحاد)كشف ارتباط ضعيف بين الترنسكريبتوم والبروتيوم في الكلى المصابة [63]. اقترحت الدراسة أن التناقض بين النهجين كان مدفوعًا بتغيرات البروتين في الحيز خارج الخلية ، على سبيل المثال ، في النظام التكميلي [63]. ومن المثير للاهتمام ، أن مدى التفكك بين الحمض النووي الريبي وتعبير البروتين كان مرتبطًا ارتباطًا وثيقًا بشدة الإصابة كما يتضح من مستويات الكرياتينين في الدم ومستويات نيتروجين اليوريا في الدم [63]. هذا يسلط الضوء على أهمية التغييرات بعد النسخ في AKI (إصابة الكلى الحاد)استجابة.

في الآونة الأخيرة ، تم استخدام التنميط البروتيني شبه وحيد الخلية ، والذي يتيح إجراء قياسات بروتينية كمية من 10 إلى 100 من خلايا الكلى المصغرة بالليزر ، لتحديد البروتينات الخاصة بالكبيبات والمقصورة الأنبوبية القريبة في الكلى السليمة [64] . ترتبط بعض البروتينات الخاصة بالمقصورة الأكثر تخصيبًا ارتباطًا جيدًا بالتعبير عن الجين المقابل في الخلية البودوسية ومجموعة الأنابيب القريبة من مجموعة بيانات scRNA-seq ، على التوالي. علاوة على ذلك ، يمكن اكتشاف أكثر من 40 واسمًا بروتينيًا في وقت واحد في قسم واحد من الأنسجة عن طريق تصوير قياس الكتلة الخلوية (IMC) ، مما يسمح بدراسة البروتين في السياق المكاني [65]. كشفت IMC للكلى البشرية السليمة عن تغايرية خلوية غير متوقعة وحددت نوع خلية موجب ميجالين / أكوابورين -1 / فيمينتين (Lrp2 / Aqp1 / Vim) من المحتمل أن يعكس أنبوبًا قريبًا مصابًا (Vim plus) (Lrp2 plus / Aqp1 plus) حالة الخلية [65]. تطبيق هذه التقنيات على AKI (إصابة الكلى الحاد) سيوفر البحث رؤى حاسمة في المشهد البروتيني للإصابة والإصلاح.

لقد طورت دراسة مستقلب الكلى (الجزيئات الأصغر من 1500 Da [62]) فهم AKI (إصابة الكلى الحاد) الفيزيولوجيا المرضية.

التمثيل الغذائي

أدى تحديد ملامح أنسجة الكلى المصابة باستخدام الكروماتوجرافيا السائلة لقياس الطيف الكتلي إلى اكتشاف أن تخليق دي نيوكوتيناميد الأدينين ثنائي النوكليوتيد (NAD plus) ضعيف في AKI (إصابة الكلى الحاد) [66]. تنظيم منظم للتكوين الحيوي للميتوكوندريا PGCla في AKI (إصابة الكلى الحاد) أدى إلى نضوب NAD plus المحلي ، في حين أدى الإفراط في التعبير PGC1 إلى زيادة مستويات NAD زائد الكلوي وانخفاض AKI (إصابة الكلى الحاد) [66]. أظهرت شاشات البول غير المتحيزة أيضًا مستويات متزايدة من NAD بالإضافة إلى سلائف الكينولين في بول الفئران بعد IRI [67] الناتجة عن تقليل الكينولين الكلوي فوسفوريبوزيل ترانسفيراز (QPRT) ، وهو إنزيم رئيسي في تخليق de novo NAD plus [67]. ارتبطت مستويات QPRT الكلوية المنخفضة بارتفاع القصور الكلوي الحاد(إصابة الكلى الحاد) القابلية للتأثر [67]. أنقذ علاج نيكوتيناميد عن طريق الفم AKI (إصابة الكلى الحاد) - الناجم عن نقص NAD الكلوي بالإضافة إلى نقص التخليق الحيوي في الفئران ، وقد اقترحت تجربة سريرية صغيرة في المرحلة الأولى فائدة كلوية محتملة من علاج النيكوتيناميد في المرضى الذين يخضعون لجراحة قلبية [67]. أظهرت دراسة استقلابية لخزعات زرع الكلى البشرية ، قبل وبعد ضخه ، مظهرًا استقلابيًا مختلفًا تمامًا لعمليات الزرع ذات وظيفة الكسب غير المشروع المستقبلية مقارنةً بعمليات الزرع بدون تأخر وظيفة الكسب غير المشروع [68]. تتميز عمليات الزرع ذات وظيفة الكسب غير المشروع المتأخرة في المستقبل بتقويض ATP / GTP المستمر ، مما يشير إلى الاستعادة المبكرة لاستتباب الطاقة كهدف علاجي في AKI (إصابة الكلى الحاد) المنع [68]. التصوير بمطياف الكتلة (MSI) هو تقنية قوية تستخدم لتصور التوزيع المكاني للأيضات أو البروتينات أو الدهون بدقة خلوية وتحت خلوية [69]. أظهر تحليل MSI للكلى المصابة أن الدهن الدهني يستخدم ch coll .x7rr للتمييز بين الإقفار الخفيف والشديد في وقت مبكر من ساعتين بعد الإصابة [70،71].

الاستنتاجات والمنظور

لقد دفعت تقنيات omics المتاحة فهمنا لـ AKI (إصابة الكلى الحاد) والإصلاح. سيؤدي التكامل أو الاستحواذ المتزامن لمجموعات بيانات omics المختلفة إلى تعزيز الرؤى في AKI (إصابة الكلى الحاد) ، وستعطي النتائج المؤيدة من المناهج المتعامدة ثقة إضافية للآليات المحددة. تتراكم الأفكار الجديدة والأدوات والموارد المعلوماتية مع استثمار NIDDK في العديد من الاتحادات الكبيرة بما في ذلك مشروع طب الكلى الدقيق وبرنامج إعادة بناء الكلى. يتمثل التحدي الكبير لعصر "البيانات الضخمة" هذا في استنتاج الآليات ذات الصلة بيولوجيًا من مجموعات البيانات شديدة التعقيد لإضفاء الطابع الديمقراطي على الوصول إلى هذه البيانات من خلال منصات عرض سهلة الاستخدام وتحليل البيانات ، وفي النهاية ، ترجمة رؤيتنا المتزايدة في الفسيولوجيا المرضية إلى التشخيص و الاستراتيجيات العلاجية التي تعمل على تحسين رعاية المرضى و AKI (إصابة الكلى الحاد) النتائج.

إعلان تضارب المصالح

يعلن المؤلفون عن المصالح المالية / العلاقات الشخصية التالية التي يمكن اعتبارها مصالح منافسة محتملة: APM هو مستشار علمي للنهج المتعلقة بالكلى للأمراض البشرية في Novartis و eGenesis و Aviva و Trestle Biotherapeutics.

شكر وتقدير

نعتذر لجميع الباحثين الذين لا يمكن مناقشة عملهم بسبب محدودية المساحة. نشكر الدكتور بيترو إي سيبا على القراءة النقدية للمخطوطة. تم دعم LMS Gerhardt من قبل مؤسسة الأبحاث الألمانية (DFG) بألمانيا بمنحة ما بعد الدكتوراه (GE 3179 / 1-1). يتم دعم العمل في مختبر AP McMahon من خلال المنح المقدمة من NIDDK ، الولايات المتحدة (DK126024،54364،126925) ومبادرة ChanZuckerberg ، الولايات المتحدة (CZIF 2019-002430).

مراجع

تم تسليط الضوء على الأوراق ذات الأهمية الخاصة ، والتي تم نشرها خلال فترة الاستعراض ، على النحو التالي:

1. Chertow GM ، Burdick E ، Honor M ، Bonventre JV ، Bates DW:إصابة الكلى الحادوالوفيات ومدة الإقامة والتكاليف في المرضى في المستشفى. JASN (J Am Soc Nephrol) 2005 ، 16: 3365-3370.

2. ميهتا RL ، سيردا J ، Burdmann EA ، Tonelli M ، Garcia-Garcia G ، Jha V ، Susantitaphong P ، Rocco M ، Vanholder R ، Sever MS ، وآخرون: مبادرة الجمعية الدولية لأمراض الكلى 0 بحلول 25إصابة الكلى الحاد(صفر وفيات يمكن الوقاية منها بحلول عام 2025): قضية حقوق الإنسان لأمراض الكلى. لانسيت 2015 ، 385: 2616-2643.

3. Hsu RK، Hsu CY: دورإصابة الكلى الحاد3. مرض الكلى المزمن. سيمين نفرول 2016 ، 36: 283-292.

4. Chawla LS، Eggers PW، Star RA، Kimmel PL:إصابة الكلى الحادوأمراض الكلى المزمنة مثل المتلازمات المترابطة. N Engl J Med 2014،371: 58-66.

5. Legrand M ، Bell S ، Fomi L ، Joannidis M ، Koyner JL ، Liu K ، 5 ، 1 ؛ Cantaluppi V: الفيزيولوجيا المرضية لـ COVID -19- المرتبطةإصابة الكلى الحاد. نات ريف نفرول 2021.https: //doi.org/10.1038/s 41581-021-00452-0. تقدم هذه المراجعة نظرة عامة مفصلة على الأدبيات الحالية المتعلقة بـ COVID -19- المرتبطإصابة الكلى الحاد.

6. Zuk A ، Bonventre JV: التطورات الأخيرة علىإصابة الكلى الحاد6. 2 ونتائجها وتأثيرها على أمراض الكلى المزمنة. F Curr Opin Nephrol Hypertens 2019،28: 397-405. تلخص هذه المراجعة الممتازة الآليات الفيزيولوجية المرضية الكامنة وراء الانتقال من إصابة الكلى الحادة إلى المزمنة وتسلط الضوء على دور الخلل الوظيفي في الميتوكوندريا والالتهاب والشيخوخة وموت الخلايا في هذه العملية.

7. Saran R و Robinson B و Abbott KC و Agodoa LYC و Bragg Gresham J و Balkrishnan R و Bhave N و Dietrich X و Ding Z و Eggers PW وآخرون: تقرير البيانات السنوي لنظام بيانات الكلى الأمريكية لعام 2018: وبائيات أمراض الكلى في الولايات المتحدة. AmJ Kidney Dis 2019،73: A 7- A8.US Renal Data System 2018 التقرير السنوي للبيانات المتاحة من: https://www.usrds.org/media/2282/2018_المجلد{{9} } ckd _ في _ في _ us.pdf. (تم الوصول إليه في 11 أبريل 2021).

8. Ferenbach DA ، Bonventre JV: آليات سوء التكيف 8. الإصلاح بعد AKI (إصابة الكلى الحاد) مما يؤدي إلى تسريع شيخوخة الكلى و CKD. نات ريف نفرول 2015،11: 264-276.

9. Kusaba T ، Lalli M ، Karmann R ، Kobayashi A ، Humphreys BD: 9. تعمل الخلايا الظهارية المتمايزة على إصلاح الأنابيب القريبة المصابة. Proc Natl Acad Sci US A 2014111: 1527-1532. 10- كومار إس ، ليو جي ، بانج بي ، كراوتزبيرجر إيه إم ، ريجينسي إيه ،

10. Akiyama H، Schedl A، Humphreys BD، McMahon AP: يسلط تنشيط Sox9 الضوء على المسار الخلوي للإصلاح الكلوي في كلية الثدييات المصابة بشدة. Cell Rep 2015،12: 1325-1338.

11. Kang HM ، Huang S ، Reidy K ، Han SH ، Ching F ، SusztakK: تلعب الخلايا السلفية الإيجابية لـ Sox9 دورًا رئيسيًا في تجديد الخلايا الطلائية للنبيبات الكلوية في الفئران. ممثل الخلية 2016 ، 14: 861-871.

12. Yang L ، Besschetnova TY ، Brooks CR ، Shah JV ، Bonventre JV: توقف دورة الخلية الظهارية في G2 / M يتوسط تليف الكلى بعد الإصابة. نات ميد 2010 ، 16: 535-543.

13. Xu K و Rosenstiel P و Paragas N و Hinze C و Gao X و Shen TH و Werth M و Forster C و Deng R و Bruck وآخرون: تحدد برامج النسخ الفريدة الأنواع الفرعية من AKI (إصابة الكلى الحاد) .JASN (J Am Soc Nephrol) 2017،28: 1729-1740.

14. مار د ، غريب سا ، زاجر ر ، جونسون أ ، دينيسينكو أو ، بومسزتيك ك: عدم تجانس التغيرات اللاجينية في نقص التروية / إعادة التروية والسموم الداخلية التي يسببهاإصابة الكلى الحادالجينات. Kidney Int 2015 ، 88: 734-744.

15. ستافورد سميث إم ، لي واي جي ، ماثيو جي بي ، لي يو دبليو ، جي واي ، فيليبس-بوت بي ، ميلانو سي إيه ، نيومان إم إف ، كراوس وي ، كيرتاي إم دي ، وآخرون: دراسة الارتباط على مستوى الجينومإصابة الكلى الحادبعد جراحة الكسب غير المشروع المجازة التاجية تحدد مواقع القابلية للإصابة. Kidney Int 2015،88: 823-832.

16. Zhao B، Lu Q، Cheng Y، BelcherJM، Siew ED، Leaf DE، Body SC، Fox AA، Waikar SS، Collard CD، et al: دراسة الارتباط على مستوى الجينوم لتحديد تعدد الأشكال أحادي النوكليوتيدات من أجلإصابة الكلى الحاد.Am J Respir Crit Care Med 2017 ، 195: 482-490.

17. Kayagaki N و Lee BL و Stowe IB و Kornfeld OS و O'Rourke K و Mirrashidi KM و Haley B و Watanabe C و Roose-Girma M و Modrusan Z وآخرون: يستحث IRF2 نسبيًا تعبير GSDMD عن التهاب الحنجرة. سيجنال 2019 ، 12.

18. Matsuyama T و Kimura T و Kitagawa M و Pfeffer K و Kawakami T و Watanabe N و Kündig TM و Amakawa R و Nishihara K و Wakeham A: ينتج عن التعطيل المستهدف لـ IRF -1 أو IRF -2 نوع غير طبيعي من التحريض الجيني IIFN وتطور الخلايا الليمفاوية الشاذة. الخلية 1993 ، 75: 83-97.

19. Papaioannou VE: عائلة الجينات T-box: الأدوار الناشئة في التنمية ، والخلايا الجذعية ، والسرطان. التطوير 2014.141: 3819-3833.

20. Renken IJE، Vilander LM، Kaunisto MA، Vaara ST، Snieder H، Keus F van der Horst ICC، Pettilä V∶No لا يوجد ارتباط بين المواقع الجينية بالقرب من IRF2 و TBX1 وإصابة الكلى الحادفي حالة حرجة. AmJ Respir Crit Care Med 2019،201: 109-111.