حويصلات خارج الخلية مشتقة من الخلايا الجذعية الناقصة التأكسج تعمل على تحسين التليف الكلوي بعد نقص التروية - إصابة إعادة التروية عن طريق استعادة CPT1A بوساطة أكسدة الأحماض الدهنية

خلاصة

1. الخلفية

التليف الكلوي هو عملية مرضية شائعة لأمراض الكلى المزمنة التي تسببها عوامل متعددة. يمكن أن تؤدي المعالجة المسبقة بنقص التأكسج للخلايا الجذعية الوسيطة إلى تعزيز فعالية الحويصلات خارج الخلية المفرزة (MSC-EVs) في أمراض مختلفة ، ولكن ليس من الواضح ما إذا كان بإمكانها تحسين التليف الكلوي بشكل أفضل. أظهر آخر بحث أن استعادة أكسدة الأحماض الدهنية (الفاو) يمكن أن تقلل من التليف الكلوي. في هذه الدراسة ، هدفنا إلى فحص ما إذا كانت المعالجة المسبقة بنقص التأكسج بحويصلات MSC خارج الخلية (Hypo-EVs) يمكن أن تحسن الفاو لاستعادة التليف الكلوي والتحقيق في الآلية الكامنة.

2. الطرق

تم عزل Hypo-EVs من MSC المشتق من المشيمة البشرية المعالجة بنقص الأكسجة (hP-MSC) ، وتم عزل Norm-EVs من hP-MSC المستنبت في ظروف طبيعية. استخدمنا نموذج التليف الكلوي الناتج عن نقص التروية - ضخه (I / R) في الجسم الحي. تم حقن الفئران بـ PBS أو Hypo-EVs أو Norm-EVs مباشرة بعد الجراحة واليوم الأول بعد الجراحة. تم تقييم وظائف الكلى وأمراض الكلى والتليف الكلوي لتقييم تلف الكلى. للاستكشاف الميكانيكي ، تم اكتشاف أكسدة الأحماض الدهنية (الفاو) ، والتغيرات المورفولوجية للميتوكوندريا ، وإنتاج ATP ، والبروتينات الكتلية للميتوكوندريا في الجسم الحي. تم فحص إمكانات غشاء الميتوكوندريا وإنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) في المختبر.

3. النتائج

وجدنا أن Hypo-EVs تمنح تأثيرًا علاجيًا فائقًا على استعادة تلف الهيكل الكلوي ، واستعادة وظائف الكلى ، وتقليل التليف الكلوي. وفي الوقت نفسه ، عززت Hypo-EVs منظمة الفاو الميتوكوندريا في الكلى من خلال استعادة التعبير عن إنزيم كارنيتين بالميتويل ترانسفيراز 1A (CPT1A) الذي حددته منظمة الأغذية والزراعة. ميكانيكيًا ، يفسر تحسين توازن الميتوكوندريا ، الذي يتميز بإصلاح هيكل الميتوكوندريا ، واستعادة كتلة الميتوكوندريا وإنتاج ATP ، وتثبيط الإجهاد التأكسدي ، وزيادة إمكانات غشاء الميتوكوندريا ، جزئيًا تأثير Hypo-EVs على تحسين الميتوكوندريا وبالتالي تخفيف I / ضرر R.

4 - نتائج

تقوم Hypo-EVs بقمع التليف الكلوي عن طريق استعادة منظمة الأغذية والزراعة بوساطة CPT1A ، والتي يمكن تحقيق التأثيرات من خلال تنظيم توازن الميتوكوندريا. توفر النتائج التي توصلنا إليها مزيدًا من الدعم الآلي لتطوير العلاج الخالي من الخلايا للتليف الكلوي.

5. الكلمات الرئيسية

الخلايا الجذعية الوسيطة ، نقص التأكسج ، الحويصلات خارج الخلية ، الميتوكوندريا ، أكسدة الأحماض الدهنية ، التليف الكلوي.

انقر هنا لشراء ملحق Cistanche

مقدمة

مرض الكلى المزمن (CKD) هو مرض خطير يهدد صحة الإنسان وهو أيضًا قضية عامة عالمية مهمة. تعد حالات الإصابة بمرض الكلى المزمن وانتشارها ووفاتها على مستوى العالم أمرًا مهمًا ومتزايدًا ، ويبلغ معدل الانتشار حوالي 10 بالمائة بين البالغين في جميع أنحاء العالم [1 ، 2]. ترتبط إصابة نقص التروية الكلوية - ضخه (I / R) بالتليف الكلوي و CKD التدريجي [3 ، 4]. يعتبر التليف الكلوي عملية مرضية شائعة تؤدي إلى مرض الكلى المزمن وأمراض الكلى في نهاية المرحلة. ومع ذلك ، لا توجد حاليًا علاجات فعالة تمنع التليف أو تعكسه بنجاح [5].

تم الإبلاغ عن أن الحويصلات خارج الخلية المشتقة من الخلايا الجذعية الوسيطة (MSC-EVs) تلعب دورًا متجددًا ومضادًا للتليف في العديد من النماذج قبل السريرية لـ CKD [6-9]. ومع ذلك ، فإن العائد المنخفض من MSC-EVs هو عامل مقيد للإنتاج على نطاق واسع للعلاجات الخالية من الخلايا [10]. يحفز التكييف المسبق لنقص الأكسجة أنشطة paracrine لـ MSCs ويزيد من وظيفة وإنتاج المركبات الكهربائية ويعتبر نهجًا هندسيًا لتحسين الإمكانات العلاجية للمركبات الكهربائية [11 ، 12]. أشارت دراسة حديثة إلى أن الخلايا الجذعية السرطانية المشروطة بنقص الأكسجة هي أكثر أهمية من الخلايا الجذعية السرطانية غير المعالجة في الوقاية من التليف الكلوي والالتهاب [13]. ومع ذلك ، لم يتم بعد تحديد دور المركبات الكهربائية المشتقة من MSC المشروط مسبقًا بنقص الأكسجة في التليف الكلوي.

تمت مراجعة الآلية المرضية للتليف الكلوي في العديد من الدراسات الحديثة [14-16] ، لا سيما في مجال تنظيم التمثيل الغذائي [17]. من المعروف أن الخلايا الأنبوبية القريبة (PTCs) هي الخلايا الأكثر تطلبًا للطاقة في الكلى وتلعب دورًا مركزيًا في تطور التليف النُبيبي الخلالي [18 ، 19]. إن أكسدة الأحماض الدهنية (منظمة الأغذية والزراعة) هي مصدر الطاقة الأساسي لمركبات PTCs [19 ، 20]. أظهرت نتائج دراسات النسخ على نطاق الجينوم أن التعبير عن الإنزيمات الأيضية الرئيسية ذات الصلة بمنظمة الفاو ومنظمات النسخ قد انخفض بشكل ملحوظ في نماذج الإنسان والفأر المصابة بالتليف الأنبوبي الخلالي [20]. بالإضافة إلى ذلك ، فإن استعادة عملية التمثيل الغذائي للأحماض الدهنية يمكن أن تحمي الفئران من التليف النبيبي الخلالي [17 ، 20]. أكدت دراسة حديثة أن الإفراط في التعبير عن إنزيم carnitine palmitoyl-transferase 1A (CPT1A) الذي يحد من المعدل الرئيسي يمكن أن يعزز الفاو في الخلايا الظهارية الأنبوبية الكلوية ، ويقلل من التعبير عن الوسطاء الالتهابيين ، ويؤدي إلى التخفيف الكبير من التليف في ثلاثة نماذج تجريبية [21 ]. لذلك ، قد تكون العلاجات التي تستهدفها منظمة الأغذية والزراعة استراتيجية علاجية فعالة محتملة للحد من التليف.

تلعب الميتوكوندريا دورًا لا غنى عنه في تنظيم منظمة الأغذية والزراعة. أشارت دراسة سابقة إلى أن استراغالوسيد IV يمكن أن يعزز الفاو من خلال تنظيم نشاط الميتوكوندريا أثناء الشيخوخة [22]. يلعب تدمير توازن الميتوكوندريا دورًا مهمًا في الإصابة المبكرة لأمراض الكلى ، والإصلاح غير الطبيعي بعد الإصابة ، والتسبب في مرض الكلى المزمن [23 ، 24]. في ظل الظروف الفسيولوجية والمرضية ، تنسق آليات مختلفة للحفاظ على توازن الميتوكوندريا ، بما في ذلك الدفاع المضاد للأكسدة ، وإصلاح الحمض النووي للميتوكوندريا ، واندماج وانشطار الميتوكوندريا ، والالتهام الذاتي للميتوكوندريا ، والتكوين الحيوي للميتوكوندريا [25]. أظهرت العديد من الدراسات أن MSC-EVs يمكن أن تخفف من تلف الميتوكوندريا عن طريق تثبيت الحمض النووي للميتوكوندريا [26] ، وتثبيط الانشطار الميتوكوندريا ، وتحفيز دفاع مضادات الأكسدة في الميتوكوندريا وإنتاج ثلاثي الفوسفات (ATP) في نماذج إصابات الكلى الحادة (AKI) [27 ، 28] . أشارت الدراسات السابقة إلى أن علاج Hypo-EVs كان له تأثيرات أفضل على تعزيز تكوين الأوعية ، والتكاثر ، والهجرة ، وتثبيط الالتهاب والاستماتة من علاج Norm-EVs [29-31]. ومع ذلك ، لم يحدد الباحثون بشكل قاطع ما إذا كانت النتائج العلاجية لـ Hypo-EVs في التليف تعتمد على توازن الميتوكوندريا.

كانت أهداف هذه الدراسة (1) لاستكشاف ما إذا كانت المعالجة المسبقة بنقص التأكسج للحويصلات خارج الخلية المشتقة من MSCs (Hypo-EVs) لها تأثير مضاد للتليف بشكل أفضل. (2) لتحديد ما إذا كان Hypo-EVs يخفف من التليف الناجم عن نقص التروية الناجم عن ضخه عن طريق تعزيز CPT1A بوساطة منظمة الأغذية والزراعة ؛ (3) لفحص ما إذا كان التأثير الوقائي لـ Hypo-EVs على منظمة الأغذية والزراعة مرتبطًا بتنظيم التوازن في الميتوكوندريا.

مسحوق Cistanche

طُرق

1. ثقافة الخلية والتكييف المسبق نقص الأكسجة

تم توفير MSC (hP-MSC) المشتق من المشيمة البشرية من قبل معهد التأسيس والأكاديمية الصينية للعلوم الطبية وتم تربيته في وسط Dulbecco's Modified Eagle's Medium / Nutrient Mixture F -12 (DMEM / F12، Gibco) بنسبة 10 بالمائة مصل بقري جنيني (FBS ، Corning) مكمل بـ 100 U / mL من البنسلين − الستربتومايسين (Gibco) والمحافظة عليه عند 37 درجة في جو رطب بنسبة 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون. بعد أن وصلت hP-MSC إلى 60 في المائة - 70 في المائة من التقاء ، تم استبدال وسائط الثقافة بـ FBS المستنفد من الخارج (SBI ، 50A -1) وتم تربيتها عند 37 درجة ، أو 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون ، أو 21 في المائة من O2 أو عند 1 في المئة O2 ، 94 في المئة N2 ، و 5 في المئة CO2 لمدة 48 ساعة إضافية. تم بعد ذلك جمع الوسيط لعزل المركبات الكهربائية ، وتم استدعاء المركبات الكهربائية التي تم جمعها من المعالجة المسبقة بنقص الأكسجين لـ MSC (1 بالمائة O2) Hypo-EVs ، وتم استدعاء MSC العادي (21 بالمائة O2) Norm-EVs. تم استخدام hP-MSC فقط من المقاطع 6-10 لإجراء مزيد من التجارب.

2. زراعة الخلايا وعلاجها

تمت زراعة الخلايا الطلائية الأنبوبية الكلوية البشرية القريبة (HK -2 ، ATCC ، الولايات المتحدة الأمريكية) في DMEM / F12 بنسبة 10 بالمائة FBS واستكملت بـ 100 وحدة / مل من البنسلين ستربتومايسين. تم الحفاظ على الخلايا عند 37 درجة في جو رطب يحتوي على 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون. استخدمنا طريقتين لتقليد CKD في المختبر. تم إجراء نموذج نقص الأكسجة الخلوي / إعادة الأكسجة (H / R) كما ورد سابقًا [32]. باختصار ، تعرضت خلايا HK -2 لحالة نقص الأكسجة (37 درجة ، 1 بالمائة O2 ، 94 بالمائة N2 ، و 5 بالمائة CO2) لمدة 12 ساعة في وسط خالٍ من الجلوكوز والمصل للحث على إصابة نقص الأكسجة. بعد ذلك ، تم استبدال الوسيط ، وتم وضع الخلايا في الحالة الطبيعية (21 بالمائة O2) لإعادة الأكسجة لمدة 24 ساعة. تمت تربية المجموعة الضابطة تحت الظروف الطبيعية (21٪ O2) حسب التصميم التجريبي. كانت هناك طريقة أخرى وهي احتضان خلايا HK -2 بتحويل عامل النمو بيتا -1 (TGF - 1) بتركيز نهائي قدره 10 نانوغرام / مل لمدة 48 ساعة كما ورد سابقًا [13]. أثناء إعادة الأكسجة أو تم إضافة TGF - 1- الوقت المحفز للخلايا Norm-EVs أو Hypo-EVs (100 ميكروغرام / مل من وسط المغذيات).

3. عزل وتحديد MSC EVs

تم عزل المركبات الكهربائية المشتقة من MSC باستخدام طريقة الطرد المركزي الفائق التفاضلية. باختصار ، تم طرد وسط الاستزراع عند 4 درجات على النحو التالي: 5 0 0 × جم لمدة 10 دقائق ، عند 2 ، 000 × جم لمدة 20 دقيقة ، و 10 ، 000 × جم لمدة 30 دقيقة. تم ترشيح الوسيط من خلال مرشح 0. 22- ميكرومتر قبل تنبيذ فائق عند 100 ، 000 × جم لمدة ساعتين. أخيرًا ، تم تعليق كريات EV في PBS وطردها فائقًا لمدة ساعتين إضافيتين للتخلص من البروتينات الملوثة ، ثم تم حصاد EVs المنقى في PBS وتخزينها عند 80 درجة لمزيد من الاستخدام. تم فحص تركيزات البروتين في Norm-EVs و Hypo-EVs باستخدام اختبار بروتين حمض البيسينشونينيك (BCA ، Thermo Fisher Scientific ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية). لوحظ هيكل الغشاء ثنائي الطبقة النموذجي للمركبات الكهربائية باستخدام المجهر الإلكتروني للإرسال (TEM). تم استخدام النشاف الغربي لفحص جودة المركبات الكهربائية ، وتم فحص توزيع حجم المركبات الكهربائية عن طريق تشتت الضوء الديناميكي (DLS).

Cistanche tubulosa

4. التجارب على الحيوانات

تم توفير الفئران الذكور C57BL / 6 SPF (من 7 إلى 9 أسابيع) من قبل Sibeifu التجريبية لعلوم الحيوان والتكنولوجيا (بكين ، الصين) وتم إطعامها بشكل تكيفي لمدة 4 أيام في مركز الحيوانات في مستشفى جيش التحرير الشعبي الصيني العام قبل التجربة. تم تقسيم الفئران بشكل عشوائي إلى أربع مجموعات: مجموعة التحكم ، ومجموعة المحلول الملحي المخزن بالفوسفات (PBS) ، ومجموعات Norm-EVs ، ومجموعات Hypo-EVs. تعرضت الفئران من مجموعات PBS و Norm-EVs و Hypo-EVs إلى نقص التروية الكلوية - ضخه كما هو موضح سابقًا [33 ، 34]. باختصار ، تم تخدير الفئران بالبنتوباربيتال (5 0 ملغم / كغم) من خلال الحقن داخل الصفاق. تم تنظيف الشعر الظهري فوق كلى الفأر ثم تم الكشف عن الأوعية السنية الكلوية. للحث على نقص التروية الكلوية ، تم تثبيت الشريان الكلوي الأيسر بمشبك وعائي غير رضحي لمدة 30 دقيقة وتمت إزالة الكلية اليمنى في وقت واحد. بعد ذلك ، بدأ ضخه عن طريق تحرير المشبك. لوحظت الكلى لمدة 5 دقائق لضمان ضخه بعد إزالة المشبك. تم الحفاظ على طاولة العمليات ودرجة حرارة الغرفة عند 37 درجة أثناء الجراحة. في نماذج العلاج ، تم إعطاء 100 ميكروغرام من Norm-EVs أو Hypo-EVs في 0.15 مل من مذيب PBS عن طريق الحقن في الوريد الذيل مباشرة بعد الجراحة وبعد الجراحة بيوم واحد (D) في مجموعتي Norm-EVs و Hypo-EVs ، على التوالي. تم إعطاء نفس الحجم من PBS عن طريق حقن الوريد الذيل في مجموعة PBS. قُتلت الفئران في D 2 و D 7 و D 14 بعد الجراحة (الشكل 1 أ).

5. الاستيعاب MSC ‑ EVs

للتحقق مما إذا كان يمكن استيعاب المركبات الكهربائية بواسطة الكلى المصابة. تم إجراء تلطيخ الفلورسنت Dil (Yeasen) لتسمية المركبات الكهربائية. تم تحضين Te Norm-EVs أو Hypo-EVs (200 ميكروغرام) التي تم إذابتها في 100 ميكرولتر من PBS بـ 4 ميكرومتر من Dil عند 37 درجة لمدة ساعة واحدة. ثم تمت إزالة الأصباغ غير المقيدة باستخدام عمود دوران خارجي (Invitrogen). تم تعليق Di / Norm-EVs و Dil / Hypo-EVs في برنامج تلفزيوني للاستخدام اللاحق. تم حقن Dil / Norm-EVs أو Dil / HypoEVs (100 ميكروغرام) عن طريق الوريد في الفئران النموذجية لإصابة نقص التروية وضخ الدم (I / R) عبر الوريد الذيل مباشرة بعد الجراحة وفي D 1 بعد الجراحة كما هو مذكور أعلاه. في الأيام 1 و 3 و 5 و 7 ، تم تصوير الفئران على الفور باستخدام برنامج Live Image Software 4.4 (PerkinElmer). علاوة على ذلك ، تم جمع الكلى ومراقبتها على نظام التصوير البصري على D 7. تم قياس جميع إشارات التصوير بالتلألؤ الحيوي (BLI) من خلال متوسط ​​الإشعاع من مناطق الاهتمام (ROIs).

6. مجهر الإرسال الإلكتروني (TEM)

تم تثبيت ما مجموعه 1 مم 3 من أنسجة الكلى في 2.5 في المائة من الجلوتارالدهيد (الرقم الهيدروجيني 7.4) عند 4 درجات لمدة 24 ساعة. بعد ذلك ، تم إصلاح الأنسجة بنسبة 1 في المائة من حمض الأوزميوم لمدة 2-3 ساعات ، وتجفيفها باستخدام الأسيتون والإيثانول ، ومزودة براتنج الإيبوكسي. بعد ذلك ، تم استخدام جهاز ultramicrotome لتحضير أقسام رقيقة للغاية بسمك 60 نانومتر ، والتي تم تلطيخها بعد ذلك بنسبة 3 في المائة من أسيتات اليورانيل وسيترات الرصاص. أخيرًا ، تمت ملاحظة القسم تحت TEM (اليابان).

7. تحليل وظائف الكلى

تم جمع عينة دم من وريد الذيل على D 3 ، وتم اختبار مستويات نيتروجين اليوريا في الدم (BUN) في الفئران باستخدام مجموعة مناسبة (Bioassay).

8. تقييم التشريح الكلوي

تم إصلاح أنسجة الكلى في 10 بالمائة فورمالين لمدة 48 ساعة ، مدمجة في البارافين ، مقسمة بسمك 3 ميكرون ، ملطخة بكواشف تلطيخ ماسون بواسطة بروتوكول قياسي ، وتم ملاحظتها باستخدام مجهر (أوليمبوس ، طوكيو ، اليابان). تم حساب النسبة المئوية لمنطقة ترسيب الكولاجين باستخدام برنامج ImageJ. كان هناك ما لا يقل عن 10 حقول عشوائية غير متداخلة لكل حيوان للتسجيل.

9. المناعية

تمت معالجة أقسام الكلى المضمنة بالبارافين مسبقًا باستخدام استرجاع مستضد بوساطة الحرارة مع محلول سترات الصوديوم (الرقم الهيدروجيني 6 ، محلول استرجاع الحاتمة 1) لمدة 20 دقيقة ، تليها الحضانة بالأجسام المضادة الأولية طوال الليل عند 4 درجات. تم تحضين المقاطع بعد ذلك بجسم مضاد ثانوي مركب حيوياً ، واستخدم 3،3'-diaminobenzidine (DAB) ككروموجين. تم بعد ذلك مواجهة المقاطع بالهيماتوكسيلين وتم ملاحظتها باستخدام مجهر ضوئي. كانت الأجسام المضادة الأولية المستخدمة على النحو التالي: CPT1A (ab128568 ، Abcam) ، و Vimentin (ab92547 ، Abcam).

10. المناعي

تم نفاذ الخلايا أو الأنسجة باستخدام 0. 2 في المائة Triton X -100 لمدة 5 دقائق ، وحجبها بمصل الأغنام لمدة 30 دقيقة ، واحتضانها بأكتين عضلي أملس (-SMA ، 1: 200 ، 55135 ، Proteintech) أو الكولاجين I (1: 100 ، ab270993 ، Abcam) لمدة 16-18 ساعة عند 4 درجات ، متبوعًا بحضانة الجسم المضاد الثانوي المترافق Cy3 (أحمر) عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. تمت مواجهة النوى بـ DAPI. تم تصوير تلطيخ الفلورسنت لأقسام الأنسجة عن طريق الفحص المجهري مضان متحد البؤر.

11. تحليل النشاف الغربي

تم تحلل الكريات أو الخلايا أو المركبات الكهربائية في محلول تحلل RadioImmune (RIPA) الذي يحتوي على فلوريد فينيل ميثيل سلفونيل (PMSF) ، وتم قياس التعليق الطاف الذي تم الحصول عليه بعد الطرد المركزي باستخدام مجموعة فحص بروتين BCA (Thermo Fisher Scientific). تمت إضافة عينات بروتين من نفس الجودة (20 ميكروغرام / ممر) إلى 10 في المائة أو 12 في المائة من هلام دوديسيل كبريتات - بولي أكريلاميد (SDS-PAGE) ثم نقلها من المواد الهلامية SDS-PAGE إلى الأغشية. تم حظر الغشاء لمدة ساعتين عند درجة حرارة الغرفة بمحلول 1X كازين ثم تم تحضينه بأجسام مضادة أولية عند 4 درجات ضد البروتينات التالية: -SMA (ab7817 ، Abcam) ، vimentin (ab92547 ، Abcam) ، glyceraldehyde 3- نازعة هيدروجين الفوسفات (GAPDH ، 60004-1- Ig ، Proteintech) ، الأكتين (20536-1- AP ، Proteintech) ، PGC1 (ab191838 ، Abcam) ، CPT1A (ab128568 ، Abcam) ، مركب هيدروجيناز السكسينات ، الوحدة الفرعية B (SDHB) و 10620-1- AP ، Proteintech) ، ووحدة cytochrome c أوكسيديز IV (COXIV ، ab202554 ، Abcam) ، و ATPB (17247-1- AP ، Proteintech). تم تحضين الغشاء بعد ذلك مع الجسم المضاد الثانوي المقابل لمدة 1.5 ساعة عند درجة حرارة الغرفة وغسله ثلاث مرات. تم تحليل الصور باستخدام برنامج ImageJ.

12. تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (RT ‑ qPCR)

أولاً ، تم استخراج الحمض النووي الريبي من الخلايا المتحللة أو أنسجة الكلى باستخدام كاشف Trizol (Invitrogen) ، ثم تم تصنيع الحمض النووي الريبي إلى (كدنا) وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة باستخدام مجموعة ReverTra Ace qPCR RT (Toyobo). تم إجراء تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي باستخدام SYBR Select Master Mix (تقنيات الحياة) ونظام الكشف RT-qPCR (ABI). تم تصنيع البادئات للجينات التالية: PPAR إلى الأمام TTTGCCAAGGCTATCCCAGG ، عكس GTCACAGAACGGCTTCCTCA ،

عكس PGC1 إلى الأمام AATGCAGCGTCTTAGCACT ، عكس CTGAGCAGGGACGTCTTTGT ، ACOX2 TCATCCAACGTGACCCAGTG ، عكس CAG CAAGGACTCTGTCAGCA ، CPT2 إلى الأمام CATCGT ACCCACCATGCACT ، عكس CTSCTTCTCTCAATGCC TGACTCAACACGGGA ، وتم تطبيع التعبير عن كل جين مستهدف بواسطة جين 18S وحسابه بواسطة 2 − ΔΔCT طريقة.

13. قياس إمكانات غشاء الميتوكوندريا

تم الكشف عن إمكانات غشاء الميتوكوندريا (MMP) باستخدام JC -1 (Beyotime). أولاً ، تم الحصول على محلول عمل تلطيخ JC -1 بإضافة 8 مل من الماء عالي النقاوة لكل 50 ميكرولتر من JC -1 (200X) ، والتي تم تدويرها بعنف لتذوب تمامًا ، ثم 2 مل من JC {{ تمت إضافة 7}} عازلة تلطيخ (5X). ثانيًا ، تم غسل الخلايا الموجودة في لوحة من ستة مسام مرتين في PBS ، ثم تمت إضافة 1 مل من محلول تلطيخ JC -1 وتركها لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية. أخيرًا ، تم غسل الخلايا باستخدام PBS مرة أخرى ، تمت إضافة 2 مل من محلول ثقافة الخلية. تم الحصول على الصور المرئية باستخدام المجهر الفلوري.

كبسولات Cistanche

14. الكشف عن أنواع الأكسجين التفاعلي للميتوكوندريا (ROS)

تم قياس توليد الميتوكوندريا ROS عن طريق الفحص المجهري الفلوري باستخدام Mito-SOX Red (Thermo Fisher Scientific). تمت إضافة محلول عمل كاشف MitoSOX (2. 0 مل ، 5 ميكرومتر) لتغطية الخلايا في اللوحات ذات الستة مسام ، متبوعًا بالتلطيخ باستخدام MitoSOX Red لمدة 10 دقائق عند 37 درجة. بعد ذلك ، تم غسل الخلايا باستخدام برنامج تلفزيوني ثلاث مرات ، وتم الحصول على الصور المرئية باستخدام الفحص المجهري الفلوري.

15. كشف ATP

تم تحديد إنتاج ATP من خلال مجموعة الفحص المحسن ATP (Beyotime ، الصين ، Cat. رقم: S0027) وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة.

16. التحليل الإحصائي

تم تحليل الكميات والرسوم البيانية باستخدام GraphPad Prism 7 (لا جولا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) وتم تقديمها على أنها خطأ قياسي متوسط ​​للمتوسط. تم تحليل الفروق بين المجموعات المتعددة باستخدام تحليل التباين (ANOVA) ، وتم تعيين الدلالة الإحصائية عند P <0. 05.

مناقشة

في هذه الدراسة ، ركزنا على الفاو في التليف الكلوي ، وحددنا الإنزيمات الأيضية (CPT1A) ومنظمات النسخ (PGC1 ، PPAR) من منظمة الأغذية والزراعة ، والتي أشارت إلى أن Hypo-EVs يمكن أن يعكس اضطراب استقلاب الأحماض الدهنية في الكلى الليفية الناجم عن I / ص. علاوة على ذلك ، وجدنا أن Hypo-EVs لها تأثير عميق على منظمة الأغذية والزراعة بوساطة CPT1A ، والتي تُعزى جزئيًا إلى تنظيم التوازن في الميتوكوندريا.

في السنوات الأخيرة ، أبلغ عدد متزايد من الدراسات عن التأثير الوقائي الكلوي لـ MSC-EVs في نماذج الجسم الحي لـ CKD وأظهرت كمية صغيرة من البيانات المتاحة أن المركبات الكهربائية كانت متفوقة أو فعالة بنفس القدر في الحماية الكلوية مقارنة مع MSC الأصل [43] . لا تزال معالجة MSC-EVs في CKD في مهدها ، ولم يتم إثبات الآلية المعقدة بشكل كامل. AKI هو أحد العوامل الرئيسية لمرض الكلى المزمن ، والذي يؤدي إلى مرض الكلى في نهاية المرحلة [44] ، وإصابة الكلى I / R هي عامل رئيسي لـ AKI ، لذلك اخترنا نموذج التليف المستحث I / R للكشف عن الآلية الجزيئية المحتملة التي كيف يمنع MSC-EVs التليف الكلوي.

يعد انخفاض إنتاج MSC-EVs عاملاً مقيدًا للإنتاج على نطاق واسع للعلاجات الخالية من الخلايا. وبالتالي ، تمت دراسة العديد من الأساليب المحتملة لزيادة إنتاج المركبات الكهربائية ، بما في ذلك تحسين ظروف ثقافة MSC ، والسقالات ثلاثية الأبعاد القائمة على المصفوفة خارج الخلية ، وتنظيم التولد الحيوي للمركبات الكهربائية [10]. من بينها ، يعد التكييف الناقص للأكسجة لـ MSC طريقة صالحة لزيادة تأثير علاج EV في أمراض مختلفة ، مثل التئام كسور العظام [30] والتئام الجروح السكري [29] وإصلاح عضلة القلب [45]. تقدم دراستنا دليلاً على العمل المعزز بنقص الأكسجة للمركبات الكهربائية التي تفرزها MSC. علاوة على ذلك ، نظهر أيضًا أن المركبات الكهربائية المشتقة من MSC والمشتقة من MSC ناقصة التأكسج لها تأثير أكبر في مقاومة التليف والوقاية من الكلى مقارنة بـ Norm-EVs في CKD الناجم عن I / R. تم الإبلاغ جيدًا عن البيانات المتعلقة بـ miRNAs في Hypo-EVs مقارنة بـ Norm-EVs. أفادت العديد من الدراسات أن محتوى ميرنا كان مسؤولاً عن الآثار المفيدة لـ Hypo-EVs في العديد من الأمراض [30 ، 46]. بالمقارنة مع Norm-EVs ، تم تنظيم 215 miRNAs وتم تقليل تنظيم 369 miRNAs في Hypo-EVs المشتقة من الدهون ، والتي تنظم بشكل أساسي استقلاب الخلية والتمايز ووظيفة TGF [29]. ومع ذلك ، فإن الآلية التي من خلالها تنظم Hypo-EVs وظيفة التمثيل الغذائي لا تزال غير مفهومة بشكل جيد في CKD. تشير مجموعة كبيرة من المؤلفات إلى أن الفاو ينخفض ​​في تليف الكلى ويساهم في التسبب في المرض [47]. تمشيا مع التقارير ، أظهرت دراستنا أن التعبير الجيني للأنزيمات الأيضية الرئيسية المرتبطة بمنظمة الأغذية والزراعة (CPT1A ، و CPT2 ، و ACOX2) والعوامل التنظيمية للنسخ (PPAR و PGC1) قد انخفضت بشكل ملحوظ في التليف الكلوي الناجم عن I / R.

علاوة على ذلك ، فإن استعادة التمثيل الغذائي للدهون هي استراتيجية محتملة لعلاج التليف الكلوي [48]. يعد الإفراط في التعبير عن CPT1A في الأنابيب الكلوية مساهماً هامًا في اكتساب الوظيفة في منظمة الأغذية والزراعة ويؤدي إلى حماية وظائف الكلى والتليف عن طريق منع الخلل الوظيفي في الميتوكوندريا ، وتمايز TEC ، والالتهاب في النماذج الحيوانية لمرض الكلى المزمن [21]. أظهرت بياناتنا أن Hypo-EVs يمكن أن يعكس الضرر الذي أصاب الفاو في التليف المستحث I / R ، مما يشير إلى أن الآثار العلاجية لـ Hypo-EVs في التليف الكلوي هي جزئيًا نتيجة استعادة الفاو.

ضعف في إشارات PPAR الكلوي أدى إلى انخفاض نشاط مسار منظمة الأغذية والزراعة وتفاقم تطور التليف الكلوي [49]. أعاد استخدام الفينوفيبرات ، وهو ناهض PPAR ، عيب الأكسدة الدهنية والتليف الأنبوبي الخلالي في CKD [50 ، 51]. PGC -1 هو عامل مساعد لـ PPAR في التحكم النسخي لقدرة منظمة الأغذية والزراعة الميتوكوندريا [39]. لقد بحثنا فيما إذا كانت HypoEVs يمكنها زيادة إشارات PPAR واستعادة الفاو في إصابة I / R. أظهرت نتائجنا أنه لا توجد فروق واضحة في التعبير عن PGC -1 و PPARa بين Norm-EVs و Hypo-EVs. لذلك ، يجب أن تكون هناك عوامل أخرى تعزز حدوث هذه العملية. الميتوكوندريا هي القوة الرئيسية لمنظمة الأغذية والزراعة لتوليد الطاقة للخلية [52]. ضعف الميتوكوندريا أمر بالغ الأهمية في التسبب في تليف الكلى [53]. ظهرت استعادة التوازن الميتوكوندريا كاستراتيجية علاجية واعدة لمنع إصابة الكلى وتسريع إصلاح الكلى [25]. أشارت الدراسات الحديثة إلى أن MSC-EVs لها تأثير وقائي على تلف الميتوكوندريا الناجم عن AKI ، والذي يحمي TECs من الإهانة عن طريق تقليل تجزئة الميتوكوندريا ، وتطبيع إمكانات غشاء الميتوكوندريا ، وعكس حذف mtDNA وعيوب OXPHOS في الميتوكوندريا [26 ، 27]. أظهرت نتائجنا أن علاج Hypo-EVs استعاد تغيير شكل الميتوكوندريا غير الطبيعي ، وزيادة كتلة الميتوكوندريا ، وتحسين وظيفة الميتوكوندريا في الكلى الليفية. تشير النتائج التي توصلنا إليها إلى أن تأثيرات Hypo-EVs على منظمة الأغذية والزراعة يمكن تحقيقها من خلال تنظيم توازن الميتوكوندريا.

هناك بعض القيود في دراستنا. على سبيل المثال ، توضح بياناتنا أن Hypo-EVs لها تأثيرات مضادة للتليف أفضل في الفئران المصابة I / R مقارنة بـ Norm-EVs. ومع ذلك ، لم نحدد التعبير التفاضلي للمحتويات بين Norm-EVs و Hypo-EVs ولم نقم أيضًا بتقييم الطريقة المحددة التي تؤثر بها Hypo-EVs على توازن الميتوكوندريا في هذه الدراسة.

فوائد Cistanche

الاستنتاجات

باختصار ، تشير بياناتنا إلى أن Hypo-EVs تثبط بشكل كبير التليف الكلوي عن طريق استعادة CPT1Amediation FAO ، ويمكن تحقيق هذه التأثيرات من خلال تنظيم توازن الميتوكوندريا. توفر النتائج التي توصلنا إليها مزيدًا من الدعم الميكانيكي لتطوير العلاج الخالي من الخلايا للتليف الكلوي.

مراجع

1. Kalantar-Zadeh K ، Jafar TH ، Nitsch D ، Neuen BL ، Perkovic V. أمراض الكلى المزمنة. لانسيت. 2021 ؛ 398 (10302): 786-802.

2. Xie Y و Bowe B و Mokdad AH و Xian H و Yan Y و Li T و Maddukuri G و Tsai CY و Floyd T و Al-Aly Z. يسلط تحليل دراسة العبء العالمي للمرض الضوء على العوامل العالمية والإقليمية والوطنية اتجاهات وبائيات أمراض الكلى المزمنة من 1990 إلى 2016. الكلى Int. 2018 ؛ 94 (3): 567-81.

3. Ronco C ، Bellomo R ، Kellum JA. إصابة الكلى الحاد. لانسيت. 2019 ؛ 394 (10212): 1949-1964.

4. Zheng Z ، Li C ، Shao G ، Li J ، Xu K ، Zhao Z ، Zhang Z ، Liu J ، Wu H. Hippo-YAP / MCP -1 إصلاح أنبوبي غير قابل للتكيف يعزز الالتهاب في فشل كلوي التعافي بعد نقص تروية AKI. ديس موت الخلية. 2021 ؛ 12 (8): 754.

5. Yan H، Xu J، Xu Z، Yang B، Luo P، He Q. تحديد الأهداف العلاجية للتليف الكلوي: استغلال بيولوجيا التسبب في المرض. فارماكوثر بيوميد. 2021 ؛ 143: 112115.

6. شي زد ، وانج كيو ، زانج ي ، جيانغ د. تعمل الحويصلات خارج الخلية التي تنتجها الخلايا الجذعية الوسيطة للنخاع العظمي على إضعاف التليف الكلوي ، جزئيًا عن طريق تثبيط مسار RhoA / ROCK ، في نموذج الفئران UUO. هناك Res الخلايا الجذعية. 2020 ؛ 11 (1): 253.

7. Kholia S و Herrera Sanchez MB و Cedrino M و Papadimitriou E و Tapparo M و Deregibus MC و Bruno S و Antico F و Brizzi MF و Quesenberry PJ و Camussi G. Mesenchymal الحويصلات خارج الخلية المشتقة من الخلايا الجذعية تخفف من إصابة الكلى في اعتلال الكلية بحمض الأروك. . الجبهة الخلية ديف بيول. 2020 ؛ 8: 188.

8. Birtwistle L، Chen XM، Pollock C. حويصلات خارج الخلية مشتقة من الخلايا الجذعية الوسيطة للإنقاذ من الإصابة الكلوية. علوم Int J Mol. 2021 ؛ 22 (12): 6596.

9. Huang Y، Yang L. الخلايا الجذعية الوسيطة والحويصلات خارج الخلية في علاج أمراض الكلى. هناك Res الخلايا الجذعية. 2021 ؛ 12 (1): 219.

10. Phan J ، Kumar P ، Hao D ، Gao K ، Farmer D ، Wang A. هندسة الخلايا الجذعية الوسيطة لتحسين فعاليتها الخارجية وإنتاجها للعلاج الخالي من الخلايا. حويصلات إكستراسيل ي. 2018 ؛ 7 (1): 1522236.

11. Bister N و Pistono C و Huremagic B و Jolkkonen J و Giugno R و Malm T. نقص الأكسجة والحويصلات خارج الخلية: مراجعة للطرق والشحن الحويصلي والوظائف. حويصلات إكستراسيل ي. 2020 ؛ 10 (1): e12002.

12. Yang Y ، Lee EH ، Yang Z. تكييف الخلايا الجذعية الوسيطة لنقص الأكسجة في تطبيق تجديد الأنسجة. الأنسجة المهندس الجزء ب القس 2021.

13. Ishiuchi N، Nakashima A، Doi S، Yoshida K، Maeda S، Kanai R، Yamada Y، Ike T، Doi T، Kato Y، Masaki T. تمنع الخلايا الجذعية اللحمية المتوسطة المشروطة مسبقًا التليف الكلوي والالتهاب في نقص التروية - ضخه الفئران. هناك Res الخلايا الجذعية. 2020 ؛ 11 (1): 130.

14. Panizo S، Martinez-Arias L، Alonso-Montes C، Cannata P، Martin-Carro B، Fernandez-Martin JL، Naves-Diaz M، Carrillo-Lopez N، Cannata-Andia JB. التليف في أمراض الكلى المزمنة: التسبب والعواقب. علوم Int J Mol. 2021 ؛ 22 (1): 408.

15. همفريز BD. آليات التليف الكلوي. Annu Rev Physiol. 2018 ؛ 80: 309-26.

16. Nastase MV ، Zeng-Brouwers J ، Wygrecka M ، Schaefer L. استهداف التليف الكلوي: الآليات وأنظمة توصيل الأدوية. أدف دروغ ديليف القس .2018 ؛ 129: 295-307.

17. Zhao X، Kwan JYY، Yip K، Liu PP، Liu FF. استهداف اضطراب التمثيل الغذائي لعلاج التليف. نات ريف ديسكوف المخدرات. 2020 ؛ 19 (1): 57-75.

18. Qi R ، Yang C. الخلايا الظهارية الأنبوبية الكلوية: الوسيط المهمل للتليف الأنبوبي الخلالي بعد الإصابة. ديس موت الخلية. 2018 ؛ 9 (11): 1126.

19. جوين LS. التليف الكلوي: أسبقية النبيبات القريبة. ماتريكس بيول. 2018 ؛ 68: 248-62.

20. Kang HM، Ahn SH، Choi P، Ko YA، Han SH، Chinga F، Park AS، Tao J، Sharma K، Pullman J، Bottinger EP، Goldberg IJ، Susztak K. له دور رئيسي في تطور التليف الكلوي. نات ميد. 2015 ؛ 21 (1): 37-46.

21. Miguel V، Tituana J، Herrero JI، Herrero L، Serra D، Cuevas P، Barbas C، Puyol DR، Marquez-Exposito L، Ruiz-Ortega M، Castillo C، Sheng X، Susztak K، Ruiz-Canela M، Salas-Salvado J ، Gonzalez MAM ، Ortega S ، Ramos R ، Lamas S. النبيب الكلوي Cpt1a المفرط يحمي من تليف الكلى عن طريق استعادة التوازن الميتوكوندريا. ياء كلين إنفست. 2021 ؛ 131 (5): e140695.

22. Luo Z ، Wang Y ، Xue M ، Xia F ، Zhu L ، Li Y ، Jia D ، Chen S ، Xu G ، Lei Y. Astragaloside IV يحسن التمثيل الغذائي للدهون في كبد الفئران المسنة من خلال استهداف نشاط الميتوكوندريا. J سيل مول ميد. 2021 ؛ 25 (18): 8863–76.

23. بهارجافا P، شنيلمان RG. طاقة الميتوكوندريا في الكلى. نات ريف نفرول. 2017 ؛ 13 (10): 629–46.

24. Jiang M و Bai M و Lei J و Xie Y و Xu S و Jia Z و Zhang A. خلل في الميتوكوندريا والانتقال من AKI إلى CKD. أنا J Physiol الكلوي Physiol. 2020 ؛ 319 (6): F1105–16.

25. Tang C ، Cai J ، Yin XM ، Weinberg JM ، Venkatachalam MA ، Dong Z. مراقبة جودة الميتوكوندريا في إصابات الكلى وإصلاحها. نات ريف نفرول. 2021 ؛ 17 (5): 299-318.

26. Zhao M و Liu S و Wang C و Wang Y و Wan M و Liu F و Gong M و Yuan Y و Chen Y و Cheng J و Lu Y و Liu J. Mesenchymal الحويصلات خارج الخلية المشتقة من الخلايا الجذعية تخفف من تلف الميتوكوندريا والتهابها عن طريق تثبيت الحمض النووي للميتوكوندريا. ACS نانو. 2021 ؛ 15 (1): 1519-1538.

27. Cao H، Cheng Y، Gao H، Zhuang J، Zhang W، Bian Q، Wang F، Du Y، Li Z، Kong D، Ding D، Wang Y. وظيفة الميتوكوندريا في إصابة نقص التروية الكلوية ضخه. ACS نانو. 2020 ؛ 14 (4): 4014-26.

28. Gu D، Zou X، Ju G، Zhang G، Bao E، Zhu Y. تعمل الخلايا اللحمية الوسيطة المشتقة من الحويصلات خارج الخلية على تحسين الإصابة الحادة لنقص التروية الكلوية - إعادة التروية عن طريق تثبيط انشطار الميتوكوندريا من خلال miR -30. كثافة الخلايا الجذعية. 2016 ؛ 2016: 2093940.

29. Wang J ، Wu H ، Peng Y ، Zhao Y ، Qin Y ، Zhang Y ، Xiao Z. Hypoxia الدهنية المشتقة من الخلايا الجذعية exosomes تعزز التئام عالي الجودة للجرح السكري ينطوي على تنشيط مسارات PI3K / Akt. التكنولوجيا الحيوية النانوية ي. 2021 ؛ 19 (1): 202.

30. Liu W، Li L، Rong Y، Qian D، Chen J، Zhou Z، Luo Y، Jiang D، Cheng L، Zhao S، Kong F، Wang J، Zhou Z، Xu T، Gong F، Huang Y، Gu C، Zhao X، Bai J، Wang F، Zhao W، Zhang L، Li X، Yin G، Fan J، Cai W. تعزز الإكسوسومات المشتقة من الخلايا الجذعية الوسيطة منخفضة التأكسد التئام كسور العظام عن طريق نقل miR {{2} }. اكتا بيوماتر. 2020 ؛ 103: 196-212.

31. Rong Y، Zhang J، Jiang D، Ji C، Liu W، Wang J، Ge X، Tang P، Yu S، Cui W، Cai W. معالجة ناقصة التأكسج للحويصلات الصغيرة خارج الخلية تتوسط في إصلاح الغضروف في هشاشة العظام عن طريق توصيل miR { {1}} أ -5 ص. اكتا بيوماتر. 2021 ؛ 122: 325-42.

32. Yang C ، Chen Z ، Yu H ، Liu X. تثبيط اضطراب إسكات التيلومير 1- مثل نقص التروية الكلوية المُخفف والتليف الناجم عن إصابات إعادة التروية عن طريق منع الإجهاد التأكسدي بوساطة PI3K / AKT. المخدرات Des Devel Ther. 2019 ؛ 13: 4375-87.

33. Qian Y، Qian C، Xie K، Fan Q، Yan Y، Lu R، Wang L، Zhang M، Wang Q، Mou S، Dai H، Ni Z، Pang H، Gu L. خلايا متني كلوية تعاني من إصابة نقص تروية ضخه. ديس موت الخلية. 2021 ؛ 12 (1): 132.

34. Hu MC، Shi M، Gillings N، Flores B، Takahashi M، Kuro OM، Moe OW. قد يكون ألفا كلوثو المؤتلف وقائيًا وعلاجيًا لتطور أمراض الكلى الحادة إلى المزمنة واعتلال عضلة القلب اليوريمي. الكلى Int. 2017 ؛ 91 (5): 1104-14.

35. Dubois V، Eeckhoute J، Lefebvre P، Staels B. مساهمات مميزة ولكنها مكملة للنماذج النظيرية PPAR في استتباب الطاقة. ياء نوتر إنستيج. 2017 ؛ 127 (4): 1202–14.

36. Desvergne B، Wahli W. Peroxisome- المنشّط المستقبلات: التحكم النووي في التمثيل الغذائي. إندوكر القس 199 ؛ 20 (5): 649-88.

37. ليبي إيه إي ، جونز ب ، لوبيز سانتياغو الأول ، رولاند إي ، ليفي م. المستقبلات النووية في الكلى أثناء الصحة والمرض. مول أسبكتس ميد. 2021 ؛ 78: 100935.

38. Bougarne N ، Weyers B ، Desmet SJ ، Deckers J ، Ray DW ، Staels B ، De Bosscher K. الإجراءات الجزيئية لـ PPARalpha في استقلاب الدهون والالتهابات. إندوكر القس .2018 ؛ 39 (5): 760-802.

39. Vega RB ، Huss JM ، Kelly DP. يتعاون المُنشِّط PGC -1 مع مستقبلات ألفا المُفعَّلة بالبيروكسيسوم في التحكم النسخي للجينات النووية التي تشفر إنزيمات أكسدة الأحماض الدهنية في الميتوكوندريا. مول الخلية بيول. 2000 ؛ 20 (5): 1868–76.

40. Li SY، Susztak K. دور منشط جاما لمستقبلات البيروكسيسوم المنشط 1alpha (PGC -1 alpha) في أمراض الكلى. سيمين نفرول. 2018 ؛ 38 (2): 121-6.

41. فرانسن إم ، ليسون سي ، والتون بي. علاقة البيروكسيسوم بالميتوكوندريا: كيف ولماذا؟ علوم Int J Mol. 2017 ؛ 18 (6): 1126.

42. Aparicio-Trejo OE، Avila-Rojas SH، Tapia E، Rojas-Morales P، Leon-Contreras JC، Martinez-Klimova E، Hernandez-Pando R، Sanchez-Lozada LG، PedrazaChaverri J. - الأكسدة تعزز الانتقال التجريبي من AKI إلى CKD الناجم عن حمض الفوليك. مجانا راديك بيول ميد. 2020 ؛ 154: 18-32.

43. Eirin A، Lerman LO. الحويصلات خارج الخلية المشتقة من الخلايا اللحمية المتوسطة / اللحمية لأمراض الكلى المزمنة: هل نحن موجودون حتى الآن؟ ارتفاع ضغط الدم. 2021 ؛ 78 (2): 261-9.

44. Kurzhagen JT ، Dellepiane S ، Cantaluppi V ، Rabb H. AKI: عامل خطر معترف به بشكل متزايد لتطوير CKD وتقدمها. J نفرول. 2020 ؛ 33 (6): 1171–87.

45- Zhu J و Lu K و Zhang N و Zhao Y و Ma Q و Shen J و Lin Y و Xiang P و Tang Y و Hu X و Chen J و Zhu W و Webster KA و Wang J و Yu H. وظائف إصلاح عضلة القلب من exosomes من الخلايا الجذعية الوسيطة يتم تحسينها عن طريق علاج نقص الأكسجة في الخلايا عن طريق نقل microRNA -210 بطريقة تعتمد على nSMase 2-. خلايا Artif Nanomed Biotechnol. 2018 ؛ 46 (8): 1659–70.

46. ​​Zhu LP ، Tian T ، Wang JY ، He JN ، Chen T ، Pan M ، Xu L ، Zhang HX ، Qiu XT ، Li CC ، Wang KK ، Shen H ، Zhang GG ، Bai YP. تسهل exosomes المشتقة من الخلايا الجذعية الوسيطة الناتجة عن نقص الأكسجة إصلاح القلب من خلال الوقاية من موت الخلايا في احتشاء عضلة القلب بوساطة miR {3}}. ثيرانوستيكس. 2018 ؛ 8 (22): 6163–77.

47. Xie YH، Xiao Y، Huang Q، Hu XF، Gong ZC، Du J. دور مسار CTRP6 / AMPK في تليف الكلى من خلال تعزيز أكسدة الأحماض الدهنية. فارماكول Eur J. 2021 ؛ 892: 173755.

48. Chen YY، Chen XG، Zhang S. قابلية تعاطي المخدرات لتعديل التمثيل الغذائي للدهون ضد التليف الكلوي. أكتا فارماكول سين. 2021.

49. Chung KW ، Lee EK ، Lee MK ، Oh GT ، Yu BP ، Chung HY. يؤدي ضعف PPARalpha ومسار أكسدة الأحماض الدهنية إلى تفاقم التليف الكلوي أثناء الشيخوخة. J آم سوك نيفرول. 2018 ؛ 29 (4): 1223–37.

50. Han SH ، Malaga-Dieguez L ، Chinga F ، Kang HM ، Tao J ، Reidy K ، Susztak K. حذف Lkb1 في الخلايا الطلائية الأنبوبية الكلوية يؤدي إلى CKD عن طريق تغيير التمثيل الغذائي. J آم سوك نيفرول. 2016 ؛ 27 (2): 439-53.

51. Jao TM ، Nangaku M ، Wu CH ، Sugahara M ، Saito H ، Maekawa H ، Ishimoto Y ، Aoe M ، Inoue T ، Tanaka T ، Staels B ، Mori K ، Inagi R. ATF6alpha downregulation of PPAR تليف. الكلى Int. 2019 ؛ 95 (3): 577–89.

52. Spinelli JB، Haigis MC. المساهمات المتعددة الأوجه للميتوكوندريا في التمثيل الغذائي الخلوي. نات سيل بيول. 2018 ؛ 20 (7): 745–54.

53. Chung KW و Dhillon P و Huang S و Sheng X و Shrestha R و Qiu C و Kaufman BA و Park J و Pei L و Baur J و Palmer M و Susztak K. يؤدي تلف الميتوكوندريا وتفعيل مسار STING إلى التهاب كلوي والتليف. ميتاب الخلية. 2019 ؛ 30 (4): 784-99.

Zhumei Gao1،2 و Chuyue Zhang1،3 و Fei Peng1 و Qianqian Chen1 و Yinghua Zhao4 و Liangmei Chen5 و Xu Wang1 و Xiangmei Chen1،2

1 قسم أمراض الكلى ، المركز الطبي الأول للمستشفى العام لجيش التحرير الشعبي الصيني ، معهد أمراض الكلى التابع لجيش التحرير الشعبي الصيني ، المختبر الحكومي الرئيسي لأمراض الكلى ، المركز الوطني للبحوث السريرية لأمراض الكلى ، مختبر بكين الرئيسي لأبحاث أمراض الكلى ، بكين ، الصين.

2 قسم أمراض الكلى ، المستشفى الثاني لجامعة جيلين ، تشانغتشون ، الصين.

3 معهد أبحاث الكلى ، المركز الوطني للبحوث السريرية لطب الشيخوخة وقسم أمراض الكلى ، مستشفى غرب الصين بجامعة سيتشوان ، تشنغدو ، الصين.

4 كلية الطب السريري ، جامعة تسينغهوا ، بكين ، الصين.

5 قسم أمراض الكلى ، أول مستشفى تابع لجامعة جينان ، قوانغتشو ، الصين.