تحديد ESTs المستجيبة لبيروكسيد الهيدروجين المتضمنة في التخليق الحيوي للجليكوزيد الفينيليثانويد في ثقافة خلية السالسا في سيستانش

جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com

J. تشين وآخرون

الملخص
بيروكسيد الهيدروجين هو عامل استخلاص غير حيوي فعال يمكنه تحفيز التخليق الحيوي للمستقلب الثانوي في النباتات. نظهر أنه في ثقافة التعليق الخلوي لنبات طبي يتحمل الملحسيستانشالصلصا، إنتاج المكونات النشطة بيولوجيافينيليثانويدجليكوسيداتتمت زيادة (PeGs) بعد معالجة H2O2. لتحديد الجينات المتعلقة بـ PeGs(فينيليثانويدجليكوسيدات)التخليق الحيوي المتأثر بـ H2O2 ، قمنا ببناء مكتبة التهجين الطرحي للقمع للجينات المستجيبة لـ H2O2 باستخدامسيستانشالصلصاخط الخلية وتحديد 105 علامات تسلسل معبر عنها (ESTs) و 85 جينًا. أظهرت التعليقات التوضيحية الوظيفية لمكتبة EST وتحليلات الأنطولوجيا الجينية الجينات المرتبطة باستجابات الإجهاد المختلفة ، والتخليق الحيوي للمستقلبات الثانوية ، وتنظيم النسخ. من بينها ، حددنا اثنين من الجينات المرتبطة بـ PeGs(فينيليثانويدجليكوسيدات)مسار التخليق الحيوي (4- أنزيم الكومارات A ligase و cinnamate 4- hydroxylase) ، واثنين من عوامل النسخ من نوع WRKY. تم تحليل تعبيرات الجينات المختارة بعد علاج H2O2 بواسطة RT-qPCR. زيادة النسخ المبكر لـ PeG(فينيليثانويدجليكوسيدات)كشفت جينات مسار التخليق الحيوي بعد العلاج أن H2O2 تسبب في PeGs(فينيليثانويدجليكوسيدات)التخليق الحيوي عن طريق التنظيم الأعلى للجينات الرئيسية.
كلمات رئيسية إضافية: سيناميت -4- هيدروكسيلاز ، 4- أنزيم coumarate A ligase ، قمع التهجين الطرحي.سيستانشالصلصا. فينيليثانويدجليكوسيدات.

مقدمة

سيستانشالصلصاهو طفيلي نباتي معمر على جذر Haloxylos amodendrun ، وينمو في المنطقة الصحراوية بغرب الصين. لقرون،سيستانشتم استخدام الأنواع كدواء عشبي تقليدي (Wang et al. 2012). المكونات النشطة بيولوجيافينيليثانويدجليكوسيدات(PeGs) التي لها تأثير ملحوظ على إزالة أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) ، والحماية من الإشعاع ، وتعزيز المناعة ، ومكافحة الشيخوخة (نان وآخرون 2013). بي جي(فينيليثانويدجليكوسيدات)التخليق الحيوي فيسيستانشيبدأ من فينيل ألانين (الشكل 1 ملحق) ويتم تصنيع حمض الكافيك المركب بشكل إضافي لتشكيل العديد من بي جي.(فينيليثانويدجليكوسيدات)(وانج وآخرون 2012). ثلاثة PeGs رئيسية(فينيليثانويدجليكوسيدات)، إشنكوسايد ، أكتيوسيد ، و 2'-أسيتيل لاكتوزيد ، تعتبر المكونات الأكثر نشاطًا فيسيستانش(كوباياشي وآخرون 1984). من أجل تحسين محتواها فيسيستانشزراعة الخلايا ، تم اختبار العديد من المحفزات بما في ذلك الشيتوزان ، البوتريسين ، Ag plus ، والإجهاد التناضحي (Ouyang et al. 2005a، b، Cheng et al.2005، 2006، Liu et al.2007، Liu and Cheng 2008). ومع ذلك ، فإن الجينات المشاركة في PeGs(فينيليثانويدجليكوسيدات)التخليق الحيوي فيسيستانش، ونادرا ما تم تحديد جينات مسار التمثيل الغذائي للفينيل ألانين. تم تحديد الجين المشفر لأمونيا-لياز فينيل ألانين (PAL) مؤخرًا في Cistanche deserticola (Hu et al. 2011). ترميز الجينات الأخرى ، على سبيل المثال ، سينامات -4- هيدروكسيلاز (C4H) ، والذي يمكن أن يحفز تحويل سينامات إلى حمض كوماريك ، و 4- أنزيم الكومارات A ligase (4CL) ، وهو جين أساسي للجنين والفلافانويد التخليق الحيوي ، لم يتم العثور عليها فيسيستانش.
استخدمنا ثقافة الخليةسيستانشالصلصالدراسة PeGs(فينيليثانويدجليكوسيدات)التخليق الحيوي والتعبير الجيني ذي الصلة. لقد بحثنا أيضًا في تأثير عامل استنشاق فعال H2O2 على PeGs(فينيليثانويدجليكوسيدات)التخليق الحيوي. علاوة على ذلك ، للعثور على الجينات سريعة الاستجابة المبكرة المشاركة في PeGs(فينيليثانويدجليكوسيدات)في التخليق الحيوي ، أجرينا التهجين الطرحي القمعي (SSH) لإنشاء مكتبة cDNA من الجينات المستجيبة لـ H2O 2-.

الشكل 1. التعبير الجيني النسبي الذي يحدده RT-qPCR بعد علاج H2O2. CsWRKY 1 - عامل النسخ WRKY (Contig 0 7) ، CsC4H 1 - سينامات 4- هيدروكسيلاز (كونتيج 0 9) ، Cs4CL 1 - 4- الكومارات: ligase (Contig03) ، CsHSP 1 - بروتين الصدمة الحرارية 70 كيلو دالتون (Contig 01) ، وديسموتاز CsSOD 1 - الفائق (Contig16). عولجت الخلايا بـ 80 ميكروغرام ديسيمتر -3 H2O2 في وسط سائل لمدة ساعتين وتمت مقارنة التعبيرات بعنصر تحكم تمت معالجته بالماء. يعني زائد - SD من ثلاثة تكرارات بيولوجية ؛ * - ف <0.05 ،="" **="" -="" ف=""><>

المواد والأساليب

تم إنشاء خط الخلايا CS2001 من بتلاتسيستانشالصلصا(CA Mey.) جمع بيك في مقاطعة Neimenggu وثقافته الفرعية. كانت طريقة الثقافة مشابهة للبروتوكول المنشور سابقًا (Liu et al.2007). بشكل عام ، تم استخدام وسط Murashige و Skoog صلب (1962 ؛ MS) للثقافة الفرعية ووسط سائل لـ PeGs(فينيليثانويدجليكوسيدات)التخليق الحيوي (كان وسيط MS معدل مكملًا بـ 3 0 جم ديسيمتر -3 جلوكوز و 2. 0 مجم -3 إندول -3- حمض أسيتيك). بالنسبة لمعالجة H2O2 ، 5. 0 ± 0.2 جم من الخلايا في فترة نمو سريعة ، عادةً من 20 إلى 30 يومًا بعد زراعتها في الوسط الصلب ، تم تلقيحها في وسط سائل 50 سم 3 في دورق مخروطي بحجم 250 سم 3 ويتم تربيتها في الظلام بتركيزات مختلفة من H2O2 أو بدونها. و PeGs(فينيليثانويدجليكوسيدات)تم تحليل المحتوى بعد تحريض 10 d بواسطة H2O2 وفقًا لطريقة تم نشرها مسبقًا (Liu et al. 2007) بناءً على تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء بمرحلة عكسية مع شطف تدرج الميثانول.

تم جمع الخلايا بعد ساعتين من معالجة H O من الوسط بواسطة ورق الترشيح باستخدام قمع Büchner ، ثم تم تجميدها في نيتروجين سائل وطحنها إلى مسحوق. تم تحلل كل 2 جم من مسحوق الخلية باستخدام خليط 1 سم 3 من 2- مركابتوإيثانول ، 1 سم 3 من 2 0 0 جم دسم {{1 0}} ساركوسيل ، و 8 سم 3 من المخزن المؤقت GTC (5 M guanidinium isothiocyanate ، 62.5 mM Tris-HCl ، pH 8.0 ، 6.25 ملي مول EDTA ، درجة الحموضة 8.0 ، 5 ملي ثيوريا ، و 10 ملي ثيوثريتول). تم تحضين الخلايا بعد ذلك على الجليد لمدة 15 دقيقة ، ثم تمت إضافة 1/3 حجم 8.5 M CH3COOK ، ودرجة الحموضة 6.0 ، وتم تحضين الخلايا على الجليد لمدة 15 دقيقة ثم طردها بالطرد المركزي عند 15 000 جم لمدة 15 دقيقة . تمت إضافة المادة الطافية إلى حجم متساوٍ من الأيزوبروبانول لترسيب إجمالي الحمض النووي الريبي. تمت تنقية إجمالي الحمض النووي الريبي أيضًا بواسطة مجموعة RNeasy المصغرة (Qiagen ، Hilden ، الولايات المتحدة الأمريكية) وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة. تم عزل Messenger RNA من إجمالي RNA باستخدام مجموعة Oligotex mRNA midi (Qiagen).

فينيليثانويدجليكوسيداتفيسيستانشالصلصا

تم إنشاء مكتبة SSH من عنصر التحكم و 30 بالمائة H2O 2- استخرج عينات من الخلايا بعد ساعتين من الاستنباط باستخدام مجموعة طرح cDNA (Clontech ، Mountain View ، الولايات المتحدة الأمريكية). بالنسبة لبناء المكتبة ، تمت تنقية المنتجات بشكل منفصل باستخدام مجموعة تنقية الهلام (Qiagen) وتم استنساخها في ناقل pGEM باستخدام مجموعة استنساخ TA (Tiangen ، بكين ، الصين). تم عزل وتسلسل البلازميدات من الحيوانات المستنسخة المستقلة باستخدام التمهيدي T7. تم استخدام جميع تسلسلات علامة التسلسل المعبر عنها (EST) من المكتبة (مع إزالة تسلسل المتجهات) للتجميع المستمر مع CAP3 (//doua.prabi.fr/software/cap3). تم تجميع ESTs في contigs و singletons ؛ تم استخدامها للبحث عن التماثل باستخدام برنامج BLASTx في NCBI (http: //blast.ncbi. nlm.nih.gov). تم بعد ذلك شرح المتواليات وتحليلها وتصنيفها وفقًا لمصطلحات علم الجينات (GO) باستخدام Blast2GO (http: // www. blast2go.com).
تم إجراء تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي في الوقت الفعلي (RT-qPCR) وفقًا لـ Bustin et al. (2 0 09). تم تصنيع عينات (كدنا) باستخدام مجموعة كاشف PrimeScript RT (تاكارا ، داليان ، الصين) من 0.5 ميكروغرام من إجمالي الحمض النووي الريبي. تم تنفيذ RT-qPCR باستخدام مجموعات SYBR Premix Ex Taq II و ROX plus (Takara) على نظام PCR في الوقت الفعلي ABI 7300 (Applied Biosystems ، Foster City ، الولايات المتحدة الأمريكية) مع ثلاثة مكررات تقنية. تم تصميم البرايمر باستخدام برنامج Primer3 عبر الإنترنت وفقًا للتعليمات المقدمة من Takara ؛ يتم سرد الاشعال المستخدمة في هذه الدراسة في ملحق الجدول 1. تم تطبيع التعبيرات الجينية إلى 18S RNA ، وكان التعبير عنها ثابتًا في جميع العينات.

تم تحليل النتائج باستخدام R الإصدار 3.1.1 ، وتم التحقق من أهمية الاختلافات من خلال اختبار الطالب t.

نتائج

يتسبب بيروكسيد الهيدروجين في التخليق الحيوي لجميع مركبات PeG الثلاثة الرئيسية(فينيليثانويدجليكوسيدات)فيسيستانشالصلصاالخلايا المعلقة (الجدول 1) ولكن مع عدم وجود تأثير واضح على نمو الخلايا (الشكل S2). زاد محتوى إشنكوسايد بالفعل بعد معالجة 1 0 ميكروغرام -3 H2O2 (P <0. 0="" 5)="" ،="" تم="" تسجيل="" زيادة="" أعلى="" بعد="" 20="" ميكروغرام="" ديسيمتر="" -3="" علاج="" h2o2="" (p=""><0.01) ،="" وكانت="" أعلى="" زيادة="" بعد="" علاجات="" 40="" و="" 80="" و="" 160="" ميكروغرام="" -3="" h2o2.="" تم="" عرض="" نتائج="" مماثلة="" للإكتيوسيد="" ،="" ولكن="" محتواه="" بلغ="" ذروته="" بعد="" 80="" ميكروغرام="" ديسيمتر="" -3="" علاج="" h2o2.="" كان="" التخليق="" الحيوي="" لـ="" 2'-acetylacteoside="" أقل="" حساسية="" لمعالجة="" h2o2.="" كانت="" هناك="" زيادة="" كبيرة="" في="" محتواه="" (p=""><0.05) بتركيزات="" h2o2="" أعلى="" من="" 40="" ميكروغرام="" ديسيمتر="" -3.="" بعد="" معالجة="" 80="" ميكروغرامًا="" من="" الدم="" -3="" h2o2="" ،="" فإن="" كمية="" جميع="" مركبات="" peg="" الثلاثة="">(فينيليثانويدجليكوسيدات)زاد بشكل ملحوظ (P <0. 01)="" على="" عنصر="" التحكم.="" لذلك="" ،="" تم="" استخدام="" هذا="" التركيز="" في="" تجارب="">
لإنشاء مكتبة غنية بالجينات سريعة الاستجابة التي يتم تنظيمها بواسطة H2O2 ، استخدمنا cDNA منسيستانشالصلصاتمت معالجة خلايا التعليق بـ 80 ميكروغرام ديسيمتر -3 H2O2 لمدة ساعتين. أسفر التسلسل أحادي التمرير 129 استنساخًا مؤتلفًا في مكتبة SSH عن 105 ESTs نظيفة بعد استبعاد تسلسل المتجهات. تم استخدام هذه ESTs الواضحة للتجميع بواسطة CAP3 ، وتم إنشاء 18 contigs و 67 مفردًا (الجدول 2). وهكذا ، تم عزل 85 جينًا في هذه المكتبة. كان متوسط ​​طول 105 ESTs النظيفة 527 نقطة أساس ، وهو ما يكفي لتصنيف وظيفي قائم على التشابه المتسلسل.

فينيليثانويدجليكوسيداتفيسيستانشالصلصا

تم استرداد جميع الجينات الـ 85 التي تم الحصول عليها في المكتبة بواسطة BLASTx مقابل قاعدة بيانات البروتين غير الزائدة عن الحاجة GenBank من أجل تشابه التسلسل (القيمة E أقل من أو تساوي 0. 001). 21 جينًا لم تظهر أي نتائج في قاعدة البيانات ، قد تكون خاصة بهاسيستانشالصلصا. تم استيراد النتائج مع BLASThits إلى برنامج Blast2GO لمزيد من تحليلات تخصيب مسار GO و KEGG. من بين 64 جينًا لها ضربات بلاست ، تم شرح 50 جينًا وفقًا لوصف الجينات المتماثلة من الأنواع الأخرى. تم تسمية الجينات المشروحة وفقًا لوصف نتائج بلاست. يوضح تحليل GO (الشكل 3 ملحق) أنه من بين هذه الجينات الخمسين ، كان هناك 14 جينًا مشتركًا في الاستجابات للمنبهات ، وأكثر من 30 جينًا متعلقًا بعمليات التمثيل الغذائي (الجدولان 1 و 2). من بين هذه الجينات ، تم عزل اثنين من متماثلات جينات مسار التخليق الحيوي PeG كما هو متوقع: 4- coumarate coenzyme A ligase (يُسمى Cs4CL1: Contig03) وسينامات 4- هيدروكسيلاز (يُسمى CsC4H1: Contig14). علاوة على ذلك ، تم إجراء RT-qPCR لتأكيد التعبيرات المستحثة للجينات من المكتبة بعد علاج H2O2.

لتأكيد أن الجينات الأساسية التي تم تحديدها من مكتبة SSH كانت تستجيب لعلاج H2O2 ، تعبيرات اثنين من PeGs(فينيليثانويدجليكوسيدات)تم قياس الجينات المرتبطة بمسار التخليق الحيوي (Cs4CL1 ، CsC4H1) ، واثنان من الجينات المستحثة بـ ROS (CsSOD1: Contig 16 ، CsHSP1: CISTH099) ، وجين واحد يشبه عامل النسخ لعائلة WRKY (CsWRKY1: Contig 07) بواسطة RT-qPCR بعد العلاج مع H2O2 (الشكل 1). تم تنظيم تعبيرات CsC4H1 و Cs4CL1 و CsSOD1 و CsWRKY1 أكثر من 15- أضعاف و 3- طية و 45- طية و 4- طية ، على التوالي ساعتان بعد H2O2 علاج او معاملة. تم تغيير تعبير CsHSP1 1.8 مرة فقط بعد علاج H2O2.
تم تحليل الدورة الزمنية لتعبيرات CsWRKY1 و CsC4H1 و Cs4CL1 بعد معالجة H O بواسطة RT-qPCR (الشكل 2). تم زيادة تعبيرات CsC4H1 و Cs4CL1 بشكل كبير (أكثر من 80- أضعاف و 50- أضعاف ، على التوالي) بعد المعالجة 16- ساعة ثم خفضت التنظيم بعد 32 ساعة. تم تنظيم تعبير CsWRKY1 أكثر من 20- أضعاف عند 4 ساعات ثم انخفض من 8 ساعات بعد ذلك (الشكل 2).

الشكل 2. التعبير النسبي لـ CsWRKY1 (A) و CsC4H1 (B) و Cs4CL1 (C) في أوقات مختلفة بعد العلاج بـ 8 0 ميكروغرام dm -3 H2O2. تم تطبيع التعبيرات إلى عنصر تحكم ؛ (معالج بالماء). يعني زائد - SD من ثلاثة تكرارات بيولوجية ؛ * - P <0. 05،="" **="" -="" p=""><>

مناقشة

بيروكسيد الهيدروجين هو نبات مشهور له تأثيرات مختلفة على النباتات. مثل ROS ، يمكن أن تحفز نظام الكسح ROS المكون من ديسموتاز الفائق ، الكاتلاز ، البيروكسيداز ، وما إلى ذلك ، وهي بمثابة إشارة المصب للملح والتناضحي والجفاف

(وي وآخرون 2006 ، كار 2011 ، فورلان وآخرون 2013 ، ساتياراج وآخرون 2014). تم اقتراح أن توليد H2O2 في النباتات يكون مصحوبًا بتخليق حيوي مستقلب ثانوي مستحث فيسيستانشالصلصازراعة الخلايا. كما هو متوقع ، تكشف نتائجنا أن PeGs(فينيليثانويدجليكوسيدات)التخليق الحيوي فيCistanche الصلصاتم إحداث ثقافة الخلية بعد علاج H2O2 (الجدول 1). محتوى ثلاثة PeGs رئيسية(فينيليثانويدجليكوسيدات)زاد بعد معالجة H2O2 مما يشير إلى دوره المحوري في التخليق الحيوي لـ PeGs. اقترحت الجينات المخصبة في مكتبة SSH تأثيرها على PeGs(فينيليثانويدجليكوسيدات)تحريض التخليق الحيوي فيCistanche الصلصا.

العديد من الجينات المستجيبة المعروفة H2O 2- ، مثل أسكوربات بيروكسيديز (CISTH069 ، Karyotou و Donaldson 2005) ، h-quinone oxidoreductase (CISTH125 ، Bello ، وآخرون 2001) ، CsSOD1 ، CsHSP1 (Baruah et al. 2014) ، وجينات الاستجابة لمقاومة المرض (Contig10 ، Nanda ، وآخرون 2010) ، تم إثرائها في مكتبة SSH (الجدول 3 ، الجدول 2 الملحق). تم تأكيد بعض هذه الجينات النموذجية المستجيبة لـ ROS مع تعبير مستحث بعد معالجة H2O2 بواسطة RT-qPCR (الشكلان 1 و 2) مما يشير إلى أنه تم إنشاء مكتبة SSH مؤهلة هنا. تم العثور أيضًا على اثنين من جينات مسار التخليق الحيوي لـ PeG ، CsC4H1 و Cs4CL1 ، في هذه المكتبة وتم تحفيز هذين التعبيرين الجينيين بواسطة معالجة H O بطريقة تعتمد على الوقت (الشكل 2). يقترح أن علاج H2O2 تسبب في PeGs(فينيليثانويدجليكوسيدات)التخليق الحيوي على المستوى الجيني عن طريق تنظيم جينات مسار PAL. ومع ذلك ، لم يتم تحديد PAL وجينات التخليق الحيوي الأخرى لـ PeGs (Wang et al. 2012) في مكتبة SSH ؛ قد يكون ذلك بسبب عدم تسلسل المكتبة بشكل كافٍ. يجب توضيح العلاقة بين التعبيرات المستحثة CsC4H1 و Cs4CL1 وزيادة التخليق الحيوي لـ PeGs بعد معالجة H2O2 من خلال مزيد من التحليل.

بالإضافة إلى جينات مسار PAL التي يسببها علاج H2O2 ، تم العثور على عاملي نسخ عائلة WRKY (CsWRKY1 ، CsWRKY2) في مكتبة SSH (الجدول 3 والجدول 2 ملحق.) ، وتم تأكيد التعبير المستحث CsWRKY1 بواسطة RT-qPCR . كان تعبيره مستجيبًا لعلاج H2O2 في وقت أبكر من التعبير عن اثنين من جينات مسار PAL ، Cs4CL1 و CsC4H1 (الشكل 2). من الدراسات السابقة ، لوحظ التعبير المشترك لبعض عوامل النسخ WRKY وجينات مسار PAL في الأرز (Gupta et al. 2012). علاوة على ذلك ، يتم تنظيم التعبير الجيني PAL في طفرة مفرطة التعبير OsWRKY03 (Liu et al.2005). قد يكون عاملا النسخ العائلي WRKY المذكورين أعلاه متورطين أيضًا في PeGs(فينيليثانويدجليكوسيدات)التخليق الحيوي فيسيستانشالصلصا. ومن المثير للاهتمام ، أنه تم العثور على ESTs المتعلقة بالجفاف (CISTH067 ، CISTH064) في مكتبة SSH ، مما قد يشير إلى أن علاج H2O2 كان مرتبطًا بتعبير الجينات المستجيبة للجفاف فيسيستانشالصلصاكما لوحظ في نباتات أخرى (Schmidt et al. 2013 ، Zhou et al. 2013). تم التعرف على جين مرتبط بإشارات gibberellin (GA) ، مستقبل gibberellin gid1b-like (CISTH092) ، في مكتبة SSH مما يدل على اتصال إشارات GA وعلاج H2O2 فيسيستانشالصلصا، والتي تم الإبلاغ عنها أيضًا في الشعير (Bahin et al. 2011). ومع ذلك ، هناك حاجة إلى مزيد من الدراسات لتأكيد ما إذا كانت هذه الجينات مرتبطة بـ PeGs(فينيليثانويدجليكوسيدات)التخليق الحيوي. بخلاف الجينات المذكورة أعلاه ، تعرض مكتبة SSH التي تم إنشاؤها هنا أيضًا الجينات مع أو بدون ضربات BLAST. إنه يحسن فهمنا لتأثير H2O2 على C. salsa ويقدم أولاً معلومات عن جيناته المشاركة في التخليق الحيوي لـ PeGs.

في الختام ، قمنا بتقييم تأثير H2O2 على PeGs(فينيليثانويدجليكوسيدات)الاستقراء فيسيستانشالصلصازراعة الخلايا. تم إنشاء مكتبة SSH بعد معالجة H2O2 ، وتم تأكيد التعبير عن الجينات المختارة بواسطة RT-qPCR. تم تحديد اثنين من الجينات المرتبطة بمسار التخليق الحيوي لـ PeG وغيرها من الجينات المستجيبة لـ H2O 2-. ستعمل هذه النتائج على توسيع فهمنا لـ H2O 2- المستحث بـ PeGs(فينيليثانويدجليكوسيدات)التخليق الحيوي فيسيستانشالصلصاإلى المستوى الجزيئي ، وتوفير المعلومات للتلاعب الجينيسيستانشالصلصاالثقافات الخلوية لتحسين PeGs(فينيليثانويدجليكوسيدات)إنتاج.

من: "تحديد ESTs المستجيبة لبيروكسيد الهيدروجين المشاركة في التخليق الحيوي لجليكوزيد الفينيثانويد في ثقافة خلية السالسا في سيستانش" بواسطةJ. تشين وآخرون.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700 ، 2015 J. CHEN et al. DOI: 10.1007 / ثانية 10535-015-0541- ص

مراجع

Bahin، E.، Bailly، C.، Sotta، B.، Kranner، I.، Corbineau، F.، Leymarie، J: ينظم الحديث المتبادل بين أنواع الأكسجين التفاعلية ومسارات الإشارات الهرمونية سكون الحبوب في الشعير. - بيئة الخلية النباتية. 34: 980-993 ، 2011.
Baruah، K.، Norouzitallab، P.، Linayati، L.، Sorgeloos، P.، Bossie، r P: تساهم أنواع الأكسجين التفاعلية الناتجة عن بروتين الصدمة الحرارية (Hsp) في إنتاج Hsp70 و Hsp {{1} } مناعة وقائية في Artemia franciscana ضد الضمات المسببة للأمراض. - ديف. شركات إمونول. 46: 470-479 ، 2014.
Bello، RI، Gomez-Diaz، C.، Navarro، F.، Alcain، FJ، Villalba، JM: Expression of NAD (P) H: quinone oxidoreductase 1 in HeLa cells - دور بيروكسيد الهيدروجين ومرحلة النمو. - جي بيول. تشيم. 276: 44379-44384 ، 2001.
Bustin، SA، Vandesompele، J.، Pfaffl، MW: توحيد معايير qPCR و RT-qPCR. - جينيه. م. التكنولوجيا الحيوية. الأخبار 29: 40-43 ، 2009.
Cheng، XY، Wei، T.، Guo، B.، N، I W.، Liu، CZ:سيستانشمزارع تعليق خلية الصحراوية:فينيليثانويدجليكوسيداتنشاط التخليق الحيوي ومضادات الأكسدة. - عملية الكيمياء الحيوية. 40: 3119-3124 ، 2005.
Cheng و XY و Zhou و HY و Cui و X. و Ni و W. و Liu و CZ تحسينفينيليثانويدجليكوسيداتالتخليق الحيوي فيسيستانشمزارع تعليق الخلايا الصحراوية بواسطة الشيتوزان إليسيتور. - J. Biotechnol. 121: 253-260 ، 2006.
Furlan، A.، Llanes، A.، Luna، V.، Castro، S: يتوسط حمض الأبسيسيك في إنتاج بيروكسيد الهيدروجين في الفول السوداني الناجم عن الإجهاد المائي. - بيول. مصنع. 57: 555-558 ، 2013.
Gupta، SK، Ra، i AK، Kanwar، SS، Chand، D.، Singh، NK، Sharma، TR: ينشط جين مقاومة الانفجار الوظيفي الفردي Pi54 آلية دفاع معقدة في الأرز. - جيه إكسب. بوت. 63: 757-772 ، 2012.
Hu، GS، Jia، JM، Hur، YJ، Chung، YS، Lee، JH، Yun، DJ، Chung، WS، Yi، GH، Kim، TH، Kim، DH: التوصيف الجزيئي لجين أمونيا فينيل ألانين منسيستانشالصحراء. - مول. بيول. مندوب رقم 38: 3741-3750 ، 2011.
Kar ، RK: استجابات النبات للإجهاد المائي: دور أنواع الأكسجين التفاعلية. - سلوك إشارة النبات 6: 1741-1745 ، 2011.
Karyotou ، K. ، Donaldson ، RP: Ascorbate peroxidase ، زبال بيروكسيد الهيدروجين في الأغشية السكرية. - قوس ح. بيوتشيم. بيوفيز. 434: 248-257 ، 2005.
كوباياشي ، H. ، Karasawa ، H. ، Miyase ، T. ، فوكوشيما ، S: دراسات حول مكوناتcistancheهي عشبة. 4. عزل وتركيب 2 جليكوسيدات فينيل بروبانويد جديدة ، سيستانوسيد- C ، وسيستانوسيد- د. - علم. فارم. ثور. 32: 3880-3885 ، 1984.

Liu، CZ، Cheng، XY: تحسينفينيليثانويدجليكوسيداتالتخليق الحيوي في مزارع الخلاياسيستانشالصحراوية عن طريق الإجهاد التناضحي. - ممثل الخلية النباتية 27: 357-362 ، 2008.
Liu و JY و Guo و ZG و Zeng و ZL: تحسين تراكمفينيليثانويدجليكوسيداتعن طريق تغذية السلائف لثقافة التعليقسيستانشالصلصا. - الكيمياء الحيوية. م. ج. 33: 88-93 ، 2007.
Liu، XQ، Bai، XQ، Qian، Q.، Wang، XJ، Chen، MS، Chu، CC: OsWRKY03 ، منشط نسخ الأرز الذي يعمل في مسار إشارات الدفاع المنبع من OsNPR1. - خلية الدقة. 15: 593-603 ، 2005.
Murashige، T.، Skoog، F: وسيلة منقحة للنمو السريع والمقايسات الحيوية باستخدام مزارع أنسجة التبغ. - فيزيول. مصنع. 15: 473-497 ، 1962.
Nan و ZD و Zeng و KW و Shi و SP و Zhao و MB و Jiang و Y. و Tu و PF:فينيلثانويدجليكوسيداتمع الأنشطة المضادة للالتهابات من ينبعسيستانشالصحراوية المستزرعة في صحراء تريم. - Fitoterapia 89: 167-174 ، 2013.
Nanda، AK، Andrio، E.، Marino، D.، Pauly، N.، Dunand، C: أنواع الأكسجين التفاعلية أثناء التفاعلات المبكرة بين الكائنات الحية الدقيقة والنباتات. - J. Integr. مصنع بيول. 52: 195-204 ، 2010.
Ouyang، J.، Wang، XD، Zhao، B.، Wang، YC: تعزيز إنتاجفينيليثانويد جليكوسيداتعن طريق تغذية السلائف إلى ثقافة الخليةسيستانشالصحراء. - عملية الكيمياء الحيوية. 40: 3480-3484 ، 2005 أ.
Ouyang، J.، Wang، XD، Zhao، B.، Wang، YC: تحسين إنتاجفينيليثانويدجليكوسيداتبواسطةسيستانشخلايا الصحراء المستزرعة في مفاعل حيوي هوائي عروة داخلية مع غربال الناهض. - انزيم ميكروبيول. تقنية. 36: 982-988 ، 2005 ب.
Salcedo-Morales، G.، Jimenez-Aparicio، AR، Cruz-Sosa، F.، Trejo-Tapia، G: التوصيف التشريحي والكيميائي للنسيج في المختبر من جذور Castilleja tenuiflora. - بيول. مصنع. 58: 164-168 ، 2014.
Sathiyaraj، G.، Srinivasan، S.، Kim، YJ، Lee، OR، Parvin، S.، Balusamy، SR، Khorolragchaa، A.، Yang، DC: يعزز تأقلم بيروكسيد الهيدروجين تحمل الملح عن طريق تنشيط البروتينات المتعلقة بالدفاع في باناكس الجينسنغ CA ماير. - مول. بيول. مندوب 41: 3761-3771 ، 2014.
شميدت ، آر ، ميوليت ، دي ، هوبرتن ، إتش إم ، أوباتا ، تي ، هوفجن ، آر ، فيرني ، أر ، فيسان ، جي ، سيغوندو ، بي إس ، جويدردوني ، إي ، شيبرز ، جي إتش إم ، مولر رويبر ، B: SALTRESPONSIVE ERF1 ينظم الإشارات المعتمدة على أنواع الأكسجين التفاعلية أثناء الاستجابة الأولية للإجهاد الملحي
في الأرز. - الخلية النباتية 25: 2115-2131 ، 2013.
وانغ ، تي ، تشانغ ، إكس واي ، زي ، واي واي:سيستانشDeserticola YC Ma ، "Desert Ginseng": مراجعة. - عامر. جي تشين. ميد. 40: 1123-1141 ، 2012.
Wi، SG، Chung، BY، Kim، JH، Lee، KS، Kim، JS نمط ترسيب بيروكسيد الهيدروجين في أغلفة أوراق الأرز تحت ضغط الملح. - بيول. مصنع. 50: 469-472 ، 2006.
Zhou، XF، Jin، YH، Yoo، CY، Lin، XL، Kim، WY، Yun، DJ، Bressan، RA، Hasegawa، PM، Jin، JB: ينظم CYCLIN H1 استجابات إجهاد الجفاف وفتح الفم الناجم عن الضوء الأزرق بواسطة تثبيط تراكم أنواع الأكسجين التفاعلية في نبات الأرابيدوبسيس. - نبات فيزيول. 162: 1030-1041 ، 2013.