جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com

شين-ليانج تشاو ، هسين-وين هوانج ، هوي-تشي هوانج ، هسين-فان تشاو ، شوين-وين يو ، موه-هوان سو ، تشاو-جيه وانج ، هانج-تشينج لين

الملخص

Cistanche tubulosa مستخلص مائي(CTE) يستخدم بالفعل كدواء نباتي وصفة طبية لعلاج الخرف في الصين. ذكرت دراساتنا السابقة أن جليكوسيدات الفينيثانويد من CTE (Cistanche tubulosa مستخلص مائي) لديهم نشاط مضاد لمرض الزهايمر (AD) عن طريق تثبيط تراكم وترسب ببتيد الأميلويد (أ). ومع ذلك ، فقد اعتبرت الدراسات الحديثة أن جليكوسيدات فينيل إيثانويد يمكن استقلابها بواسطة البكتيريا المعوية لأن جميع نتائج التحليل أظهرت أن التوافر الحيوي لجليكوسيدات فينيل إيثانويد منخفض للغاية. في هذه الدراسة ، أوضحنا كيف يلعب استخلاب الحديد دورًا حاسمًا في آلية تثبيط التجميع والترسيب لـجليكوسيدات فينيلثانويدمن CTE(Cistanche tubulosa مستخلص مائي). بالإضافة إلى ذلك ، أثبتنا أيضًا أن جليكوسيدات الفينيثانويد (1-3) يمكن أن تصل إلى الدماغ. نشط CTE(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)سيكون تأكيد آلية المكون والعمل مساعدة كبيرة لمراقبة جودة المنتج ودراسات التوافر البيولوجي في المستقبل. في الوقت نفسه ، نقدم طريقة تحليل جديدة مفيدة في تحديد جليكوسيدات فينيل إيثانويد (1-3) في النباتات والأطعمة والدم والأنسجة لبصمات الأصابع الكيميائية وأبحاث الحرائك الدوائية.

الكلمات الدالة: Cistanche tubulosa جليكوسيدات فينيلثانويد ؛ مرض الزهايمر؛ إزالة معدن ثقيل من الحديد

Cistanche tubulosa

1 المقدمة

يعد الخرف أحد أكثر أمراض الشيخوخة المزمنة شيوعًا. في عام 2015 قدر تقرير ألزهايمر العالمي أن حوالي 46.8 مليون شخص يعانون من الخرف ، ومن المتوقع أن يكون العدد 74.7 مليون في عام 2030 و 131.5 مليون في عام 2050 [1]. سيزداد عدد مرضى الخرف على مستوى العالم عامًا بعد عام ويصبح خارج نطاق السيطرة في المستقبل. بلغت نفقات الرعاية الصحية العالمية لعلاج الخرف ما يقرب من 604 مليار دولار أمريكي في عام 2010 ومن المتوقع أن يكون المبلغ 1000 مليار في عام 2030 [2]. يتعرض مرضى الخرف لخطر أكبر للوفاة العرضية [3] وبالتالي يحتاجون إلى مزيد من الرعاية الطبية. هذا عبء ثقيل على مقدمي الرعاية الأسرية لمرضى الخرف. يمكن أن يؤدي تأثير الخرف على مقدمي الرعاية والأسرة والمجتمع إلى ضغوط جسدية ونفسية وحياتية واقتصادية كبيرة. هناك نوعان رئيسيان من الخرف ، مرض الزهايمر (AD) والخرف الوعائي [4،5]. الزهايمر هو الخرف الأكثر شيوعًا وهو اضطراب تنكسي عصبي تدريجي لا رجعة فيه [4-6]. كان ميلاديوم سادس سبب رئيسي للوفاة في الولايات المتحدة في عام 2015 [6].

تدعم الدراسات الحديثة أن سمية الخلايا العصبية التي يسببها ببتيد الأميلويد (أ) (لويحات) وتراكم بروتين تاو (التشابك) ترتبط ارتباطًا وثيقًا بالإمراض بمرض الزهايمر. يمكن أن يؤدي تراكم البروتين A والبروتين تاو في الدماغ إلى تلف الخلايا العصبية وفقدان الذاكرة [7]. غير قابلة للذوبان تتجمع أوليغومرات A في لويحات خارج الخلية وقد تم الإبلاغ عن أنها تؤدي إلى خلل وظيفي في المشبكي وتسمم الخلايا العصبية وموت الخلايا [8]. لسوء الحظ ، لا يوجد علاج فعال متاح حتى الآن لإزالة البروتين A والبروتين تاو ، أو منع تكوين أو قلة قلة الخلايا A ، وتعليق أو علاج تلف الخلايا العصبية الذي لا رجعة فيه. يمكن للعوامل العلاجية الحالية ، مثل galantamine و donepezil ، وهي مثبطات أستيل كولينستراز ، أن تخفف مؤقتًا من فقدان الذاكرة عن طريق رفع مستوى الناقل العصبي. في عام 2012 ، لم تكن الأدوية المرشحة قادرة على تقليل تأثير A في الدراسات السريرية الكبيرة لمرضى مرض الزهايمر [9]. لذلك ، هناك حاجة ماسة للبحث عن علاج جديد لقمع انتشار مرض الزهايمر. تم اعتبار أيونات المعادن مؤخرًا عاملاً رئيسيًا وثيق الصلة بالتجمع A [10]. توفر مخلبات المعادن التي تعتبر مركبات الرصاص المحتملة استراتيجية جديدة كاملة لمقاربة مكافحة مرض الزهايمر [9،11-15].

يتم حصاد الساق المجففة لـ Cistanche tubulosa (Schrenk) R. Wight ، Rou Cong Rong ، على نطاق واسع في شينجيانغ ، صحراء الصين. إنه دواء صيني تقليدي مهم ينتمي إلى الطب الصيني المقوي المفهرس في دستور الأدوية الصيني ويستخدم منذ آلاف السنين لعلاج الضعف الجسدي ونقص الكلى والعقم والنسيان والعجز الجنسي والإمساك الخرف [16 ، 17].Cistanche tubulosa مستخلص مائي(CTE) تمت الموافقة على كبسولات (CTE) كدواء نباتي للخرف الوعائي في الصين. وفقًا لتجربة سريرية لـ 18 مريضًا تم تشخيص إصابتهم بمرض خفيف إلى متوسط ​​، CTE(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)أعطت الكبسولات المرضى حالة ذاكرة أكثر استقرارًا مقارنة بمثبطات أستيل كولينستريز [18]. في دراستنا السابقة ، CTE(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)انخفاض ترسب الببتيد الأميلويد (أ) وتحسين فقدان الذاكرة في الفئران الشبيهة بمرض الزهايمر [19]. جليكوسيدات فينيلثانويد ، إشنكوسايد (1) ، أكتيوسيد (2) ، وأيزو أكتيوسيد (3) تعتبر المكونات الرئيسية لـ CTE(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)[20]. يحتوي المركب 1 على نشاط وقائي للأعصاب ضد سمية 1- methyl -4- phenyl -1 ، 2،3 ، 6- تتراهيدروبيريدين (MPTP) [21] ، 1- ميثيل -4- أيون فينيل بيريدينيوم (MPP plus) [22] ، و 6- هيدروكسيدوبامين (6- OHDA) [23]. أظهر تقريرنا السابق أن 1 قمع قلة القلة والسمية في دراسة في المختبر ، ومنع ترسب A ، مما يحسن الذاكرة الضعيفة والخلل الإدراكي في الفئران التي يسببها A [24]. زادت المركبات 2 و 3 من التحلل A وخفضت قلة القلة في المختبر [25]. انخفض المركب 3 ترسب في الفئران المستحثة [25]. بناءً على هذه الدراسات ، أثبتت C. tubulosa بالفعل أن لديها القدرة على علاج مرض الزهايمر. CTE(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)يرتبط ارتباطًا وثيقًا بتجميع وترسب مضاد لـ A [24،25]. لفهم CTE بشكل أفضل(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)آلية ، نحتاج إلى طريقة ملائمة وفعالة لتحديد المكون النشط ، وكذلك المحتوى في عينات أنسجة المخ. صُممت معظم الدراسات من أجل التحديد الكمي لإشيناكوسايد وأكتيوسيد وإيزو أكتيوسيد في الأعشاب أو الأطعمة عن طريق كروماتوجرافيا سائلة عالية الأداء (HPLC) [26-28] ، ولكن تم تحديد دراستين فقط في المصل أو الأنسجة [29 ، 30]. ومع ذلك ، لا يوجد تقرير عن التحليل المتزامن لـ 1-3 في أنسجة المخ بعد الاعتلال الدماغي الرضحي المزمن(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)تناوله عن طريق الفم. بالإضافة إلى ذلك ، لا يزال من غير الواضح من الدراسات الحديثة ما إذا كان الاعتلال الدماغي الرضحي المزمن(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)مرت المكونات النشطة أو مستقلباتها بنجاح عبر الحاجز الدموي الدماغي وعملت على الخلايا العصبية في الدماغ. لذلك ، يوفر هذا البحث طريقة متقدمة وحساسة مع أدلة مقنعة توضح بوضوح الآلية الكامنة وراء الاعتلال الدماغي الرضحي المزمن(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)ضد التجميع والترسب.

Cistanche tubulosa مستخلص مائي

2. النتائج

2.1. عزل وتحديد ثلاثة مركبات رئيسية (1-3)

تم استخلاص السيقان المجففة من C. tubulosa مع 75 في المائة من EtOH عند درجة حرارة الغرفة. تم تعريض مستخلص EtOH المكثف بنسبة 75 بالمائة للراتنج وكروماتوجرافيا العمود C18 لتزويد ثلاثة مركبات رئيسية ، إيكيناكوسيد (1) ، أكتيوسيد (2) ، وإيزو أكتيوسيد (3). تم توضيح هياكلهم من خلال تحليل التحليل الطيفي للرنين المغناطيسي النووي (الرنين المغناطيسي النووي) و ESI-MS (كتلة التأين بالرش الكهربائي) وبالمقارنة مع بيانات الأدبيات [31-33] (الشكل 1 ، أشكال المواد التكميلية S3-S11).

2.2. فحص محتوى فينيلثانويد جليكوسيدات (1-3) من CTE(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)

تم التحقق من صحة طريقة الفحص لتحليل جليكوسيدات فينيلثانويد. تم وزن المركبات 1-3 (5. 0 مجم) بدقة وخلطها مع 5 0 بالمائة من الميثانول (40 مل). تم صوت المخاليط لمدة 5 دقائق. تم خلط ثلاثة محلول معياري من جليكوسيدات فينيل إيثانويد (1-3) كمحلول مخزون قياسي (100 ميكروغرام / مل). تم استخدام محلول المخزون القياسي لتحضير خمسة تركيزات مختلفة (5 ، 10 ، 25 ، 50 ، 100 ميكروغرام / مل) من المحاليل المشار إليها ، على التوالي ، عن طريق التخفيف بأحجام متسلسلة تبلغ 50 بالمائة من الميثانول. تم إنشاء منحنيات جليكوسيدات فينيليثانويد (1-3) باستخدام كروماتوجرافيا سائلة فائقة الأداء (UPLC) من 5-100 ميكروغرام / مل وكانت خطية على التوالي (1 ، ص 2=0. 9999 ؛ 2 ، ص {{25}) } .9999 ؛ 3 ، ص 2=0. 9998). كانت الدقة خلال اليوم وبين اليوم [النسبة المئوية RSD (الانحراف المعياري النسبي) من 0.1 إلى 1.8 بالمائة] والدقة (95.6-104.2 بالمائة) كانت مقبولة من قبل UPLC لمدة 1-3. حددت UPLC 1 و 2 و 3 من CTE(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)تكون المحتويات 254 و 38 و 41 مجم / جم على التوالي (الشكل S2)

2.3 التحقق من صحة UPLC / MS / MS

تم خلط جليكوسيدات الفينيثانويد (1-3) مع تجانس أنسجة دماغ الفئران وتحليلها باستخدام مقياس الطيف الكتلي الترادفي اللوني السائل ذو الأداء الفائق (UPLC / MS / MS) مع استخلاص المرحلة الصلبة. كان الحد الأدنى للاكتشاف (LLOQ) من 1-3 هو 0. 2 نانوغرام / مل. انتعاش جليكوسيدات الفينيثانويد مع تجانس أنسجة المخ (10 نانوغرام / مل) بنسبة 91.39 في المائة لـ 1 و 89.54 في المائة لمدة 2 و 96.81 في المائة لمدة 3 ، على التوالي (الشكل 2).

2.4 تحليل أنسجة دماغ الفئران الشبيهة بـ AD

بعد 14 يومًا من الاعتلال الدماغي الرضحي المزمن(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)عن طريق الفم (2 0 0 ملغم / كغم / يوم) ، تم جمع أنسجة دماغ الفئران الشبيهة بمرض الزهايمر وتنقسم إلى جزأين ، الحصين ، والمخطط ، وكلاهما متجانس [19]. نظرًا لأن متجانسات الحصين والمخطط من كل فأر كانت قليلة جدًا بحيث لا يمكن تحميلها في استخراج المرحلة الصلبة ولتجنب الأخطاء التجريبية المفرطة ، تم خلط الحصين والمتجانسات المخطط من أربعة فئران فردية في عينة تم تحليلها لـ UPLC / MS / MS باستخدام طريقة استخراج المرحلة الصلبة (الشكل 3 أ ، ب). وقد لوحظ جليكوسيدات فينيلثانويد (1-3) في قرن آمون (الشكل 3 أ) والمخطط (الشكل 3 ب). لم يكن هناك ذروة كبيرة في أنسجة المخ الفارغة (الشكل 3 ج). في الحُصين ، كان محتوى إشيناكوزيد 11.97 ± {{2 0}}. 34 نانوغرام / مل ، كان محتوى أكتيوسيد 1.25 ± 0. 16 نانوغرام / مل ، ومحتوى إيزوكسيدي كان 1.38 ± 0.08 نانوغرام / مل. في المخطط ، كان محتوى إيكينكوسايد 22.60 ± 1.69 نانوغرام / مل ، وكان محتوى أكتيوسيد 2.03 ± 0.61 نانوغرام / مل ، وكان محتوى إيزوكتيوزيد 4.90 ± 0.64 نانوغرام / مل. كما هو مبين في الشكل 4 ، CTE(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)سوف يمر عبر الحاجز الدموي الدماغي وفقًا للكميات الكبيرة التي يمكن اكتشافها من 1-3 في الحُصين والمخطط. محتوى 1 أعلى بكثير من 2 و 3 في CTE(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)بواسطة تحليل UPLC (الشكل S2). لذلك ، من المعقول أن نلاحظ أن الرقم 1 هو الأعلى في أنسجة المخ بعد الاعتلال الدماغي الرضحي المزمن عن طريق الفم(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)الادارة. Molecules 2019، 24، x FOR PEER REVIEW 4 من 12 2 .4. تحليل أنسجة دماغ الفئران الشبيهة بمرض الزهايمر بعد 14 يومًا من الاعتلال الدماغي الرضحي المزمن(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)عن طريق الفم (2 0 0 ملغم / كغم / يوم) ، تم جمع أنسجة دماغ الفئران الشبيهة بمرض الزهايمر وتنقسم إلى جزأين ، الحصين ، والمخطط ، وكلاهما متجانس [19]. نظرًا لأن متجانسات الحصين والمخطط من كل فأر كانت قليلة جدًا بحيث لا يمكن تحميلها في استخراج المرحلة الصلبة ولتجنب الأخطاء التجريبية المفرطة ، تم خلط الحصين والمتجانسات المخطط من أربعة فئران فردية في عينة تم تحليلها لـ UPLC / MS / MS باستخدام طريقة استخراج المرحلة الصلبة (الشكل 3 أ ، ب). وقد لوحظ جليكوسيدات فينيلثانويد (1-3) في قرن آمون (الشكل 3 أ) والمخطط (الشكل 3 ب). لم يكن هناك ذروة كبيرة في أنسجة المخ الفارغة (الشكل 3 ج). في الحُصين ، كان محتوى إشيناكوزيد 11.97 ± {{2 0}}. 34 نانوغرام / مل ، كان محتوى أكتيوسيد 1.25 ± 0. 16 نانوغرام / مل ، ومحتوى إيزوكسيدي كان 1.38 ± 0.08 نانوغرام / مل. في المخطط ، كان محتوى إيكينكوسايد 22.60 ± 1.69 نانوغرام / مل ، وكان محتوى أكتيوسيد 2.03 ± 0.61 نانوغرام / مل ، وكان محتوى إيزوكتيوزيد 4.90 ± 0.64 نانوغرام / مل. كما هو مبين في الشكل 4 ، CTE(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)سوف يمر عبر الحاجز الدموي الدماغي وفقًا للكميات الكبيرة التي يمكن اكتشافها من 1-3 في الحُصين والمخطط. محتوى 1 أعلى بكثير من 2 و 3 في CTE(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)بواسطة تحليل UPLC. لذلك ، من المعقول أن نلاحظ أن الرقم 1 هو الأعلى في أنسجة المخ بعد الاعتلال الدماغي الرضحي المزمن عن طريق الفم(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)مدير.

2.5 نشاط جليكوسيدات فينيلثانويد (1-3)

في الأدبيات ، تم تحديد المركبات الخالية من المركبات ومعقدها المعدني باستخدام HPLC [34 ، 35]. تم تحليل مقياس نشاط عملية إزالة معدن ثقيل بواسطة UPLC في هذه الدراسة. تمت إضافة محاليل 50 ميكروجرام / مل لكل جليكوسيد فينيل إيثانويد (1-3) إلى محلول 10 ميكروجرام / مل من النحاس (Cu) ، الكالسيوم (Ca) ، المغنيسيوم (Mg) ، الزنك (Zn) ، الحديد (Fe) أو مصل الفئران على التوالي. تم تحليل كل مركب مع كل محلول معدني أو مصل بواسطة UPLC. أظهر جليكوسيدات فينيل إيثانويد (1-3) نشاط مخلب معدني بالحديد والمصل (الشكل 5 ، المواد التكميلية الشكل S1). Molecules 2019 ، 24 ، x لـ PEER REVIEW 5 من 12 عينة من فئران تشبه AD بعد CTE(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)تناول عن طريق الفم (200 مجم / كجم ، po) [1 (tR=4. 19 دقيقة) ، 2 (tR=5. 13 دقيقة) و 3 (tR=5. 68 دقيقة)] . (ج) أنسجة دماغية فارغة. الشكل 4. جليكوسيدات الفينيثانويد (1-3) كانت قابلة للاكتشاف في أنسجة دماغ الفئران [19] باستخدام UPLC / MS / MS. البيانات الممثلة تعني ± SD ، n =3 لكل مجموعة. 2.5 نشاط جليكوسيدات فينيلثانويد (1-3) معدن مخلب. في الأدبيات ، تم تحديد المركبات الخالية من المركبات ومعقدها المعدني باستخدام HPLC [34 ، 35]. تم تحليل مقياس نشاط عملية إزالة معدن ثقيل بواسطة UPLC في هذه الدراسة. تمت إضافة محاليل 50 ميكروغرام / مل من كل جليكوسيد فينيل إيثانويد (1-3) إلى محلول 10 ميكروغرام / مل من النحاس (Cu) ، الكالسيوم (Ca) ، المغنيسيوم (Mg) ، الزنك (Zn) ، الحديد (Fe) أو مصل الفئران على التوالي. تم تحليل كل مركب مع كل محلول معدني أو مصل بواسطة UPLC. جليكوسيدات الفينيثانويد (1-3)

2.6. تحليل Echinacoside (1) في مصل الفئران في الجسم الحي

من أجل فهم توزيع إشنكوسايد في مصل الفئران ، تم جمع المصل من الوقت الأولي إلى 720 دقيقة بعد تناول إشنكوسايد (1) عن طريق الفم (100 مجم / كجم) وتم جمع المصل من الوقت الأولي إلى 720 دقيقة بعد إشنكوسايد (1) تناول عن طريق الفم (100 مجم / كجم) وتحليلها بواسطة UPLC. أظهر الشكل 6 التركيز مقابل ملامح الوقت لإشنكوسايد في مصل الفئران.

3. مناقشة

الخرف ، وخاصة مرض الزهايمر ، هو مرض مزمن للشيخوخة لا رجعة فيه يؤدي إلى عقدة غوردية من الأسئلة. هذا المرض الذي لا يمكن التغلب عليه يؤدي إلى مشاكل اقتصادية خطيرة مع عبء مالي ضخم ومتزايد. في جميع أنحاء العالم ، يبذل باحثو الزهايمر جهدًا كبيرًا للتحقيق في العقاقير الجديدة المضادة لمرض الزهايمر ، لكنهم فشلوا في العديد من التجارب السريرية الكبيرة التي استهدفت "أ" في عام 2012 [9]. باستثناء الاستهداف المباشر لـ A ، يعتبر توازن أيونات المعدن في الدماغ السبب الرئيسي المتعلق بالتجمع والترسيب الذي يؤدي إلى تكوين AD [9،10]. لذلك ، تلعب أيونات المعادن دورًا أساسيًا في التسبب في مرض الزهايمر ، وأصبحت فرضية استخلاب المعادن اتجاهًا بحثيًا مهمًا [9،13-15].

وفقا لدراساتنا السابقة [18،19،24،25] ، CTE(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)عرض نشاط محتمل لمكافحة الخرف. حتى في الدراسات السريرية البشرية ، بعد عام واحد من العلاج بالاعتلال الدماغي الرضحي المزمن(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)كبسولات لمرضى الزهايمر المعتدلين ، لن تظهر درجة مقياس تقييم مرض الزهايمر المعرفي (ADAS-cog) تدهورًا ملحوظًا مقارنةً بالعلاج السابق [18]. CTE(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)حافظ على استقرار درجة ADAS-cog لمرضى الزهايمر ، لكن الأدوية الموصوفة الأخرى لم تفعل ذلك. الخيار الوحيد للعقاقير الطبية المرخصة لعلاج الزهايمر هو مثبطات أستيل كولينستيراز (AChEIs) مثل دونيبيزيل وجالانثامين التي تحسن أعراض الزهايمر على المدى القصير ، ولكن التدهور يحدث بعد عام واحد من العلاج [36]. بناءً على الدراسات السريرية ، CTE(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)لديه الفرصة ليكون علاجًا محتملًا لتطوير عامل مضاد لمرض الزهايمر. استنادًا إلى تقاريرنا السابقة [24،25] ، إشنكوسايد (1) ، أكتيوسيد (2) ، و iso-acteoside (3) من شأنها حماية الخلايا العصبية من التلف بواسطة A ، وتقليل قلة القلة في المختبر ، وتحسين الخلل المعرفي الناجم عن A في الجسم الحي. أشارت الدراسة في المختبر إلى أن الجرعات النشطة من 1-3 كانت تصل إلى 5 0 ميكروغرام / مل [24،25]. لكن الدراسات السابقة اعتبرت أن التوافر الحيوي عن طريق الفم لـ 1 و 2 كان منخفضًا جدًا (0. 83 بالمائة لـ 1 و 0.12 بالمائة لـ 2) في الجرذان [29،30]. لا يمكن حتى التعرف على المركب 1 في مصل الإنسان بعد تناول قرص إشنسا عن طريق الفم [37]. تظهر الدراسات الحالية أن 1–3 كان لها نفاذية وامتصاص غشاء ضعيفان في الخلايا المعوية [38] وأن معظم 1 سيتم استقلابه في القنوات المعدية المعوية [39]. كان محتوى المركب 2 في مصل الفئران حوالي 4.5 ميكروغرام / مل بعد 15 دقيقة من الحقن في الوريد بجرعة 10 مجم / كجم من أكتيوسيد [30]. ومع ذلك ، تُظهر هذه الدراسة أنه سيتم اكتشاف 1-3 في الحصين والمخطط لأنسجة دماغ الفئران بعد الاعتلال الدماغي الرضحي المزمن.(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)عن طريق الفم (الشكلان 3 و 4). بالإضافة إلى ذلك ، أظهر الشكل 6 أن محتوى المركب 1 في مصل الفئران زاد حوالي 5 مرات من 15 دقيقة إلى 720 دقيقة بعد تناول المركب 1 عن طريق الفم (100 مجم / كجم). اعتبرنا جليكوسيدات الفينيثانويد من CTE(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)سوف يمر عبر الحاجز الدموي الدماغي وسيكون هناك عمل مخلّب بين الاعتلال الدماغي الرضحي المزمن(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)والمعدن. عملية إزالة معدن ثقيل عبارة عن تفاعل كيميائي قابل للانعكاس. الحديد هو العنصر الأساسي في مصل الدم والدماغ [10،40]. يوضح الشكل 5 أن ثلاثة جليكوسيدات فينيل إيثانويد سيكون لها نشاط مخلب معدني بالحديد والمصل. من الواضح أن الحديد والمصل يغيران منطقة وقت الذروة للاحتفاظ بثلاثة جليكوسيدات فينيلثانويد. قد يكون استخلاب الحديد هو السبب الحاسم الذي يؤدي إلى خطأ في التعرف على التوافر الحيوي المنخفض للغاية لجليكوسيدات الفينيثانويد. لذلك ، يجب مراعاة نشاط الاستخلاب المعدني في تحليل مصل الدم والدماغ للـ CTE الثلاثة(Cistanche tubulosa مستخلص مائي)جليكوسيدات فينيل إيثانويد لاستعادة التوافر البيولوجي الحقيقي والحرائك الدوائية. بالإضافة إلى ذلك ، أشارت النتائج إلى أن ثلاثة جليكوسيدات فينيل إيثانويد (1-3) تمر عبر الحاجز الدموي الدماغي وتصل إلى أنسجة المخ من خلال الدورة الدموية في الجسم. طورت هذه الدراسة طريقة أسرع وأكثر حساسية للتحليل 1-3 باستخدام UPLC / MS / MS وقدمت دليلًا قويًا لإثبات أن جليكوسيدات الفينيثانويد (1-3) هي المكونات النشطة بيولوجيًا الرئيسية لـ CTE(Cistanche tubulosa مستخلص مائي).

مستخلص سيستانش توبولوسا

4. المواد والطرق

4.1 المواد النباتية

تم جمع سيقان C. tubulosa في مايو 2016 من مدينة هانغتشو بالصين. تم تحديد المصنع بواسطة عينات قسيمة الدكتور Lin HC (رقم 20016CT) التي تم إيداعها في Sinphar Tian-LiPharm Pharmaceutical Co.، Ltd.

4.2 العزلة والتنقية

تم طحن ساق C. tubulosa المجفف إلى مسحوق ، ثم استخلاصه خمس مرات بنسبة 75 بالمائة من EtOH. بعد تبخر المذيب تحت ضغط منخفض ، تعرض المستخلص الخام إلى كروماتوجرافيا العمود Macroporousin AB -8 باستخدام أنظمة المذيبات المتدرجة H2O / EtOH من 20 بالمائة EtOH حتى 100 بالمائة EtOH. وفقًا لكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة ، تم جمع أربعة كسور (الأب 1 ~ 4 الأب) لمزيد من الفصل. الاب. تم تعريض الشكل 2 للكروماتوجرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) على عمود COSMOSIL® 5C 18- AR-II (250 مم × 20 مم id ، 5 ميكرومتر) باستخدام 18 بالمائة من الأسيتونيتريل كنظام طور متحرك. كان معدل الزميل 15 مل / دقيقة. تم جمع ثلاث قمم رئيسية للاهتمام بشكل انتقائي. تم تكثيف الأجزاء المحتوية على المركبات المستهدفة بشكل أكبر حتى تجف وأنتجت 1 و 2 و 3 على التوالي.

4.3 التحليل التجريبي

تم الحصول على أطياف 1H و 13 C NMR باستخدام مطياف Bruker Avance DRX 500 ميجا هرتز (Billerica ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) مع tetramethylsilane (TMS) كمعيار داخلي. تم إجراء HPLC التحضيري باستخدام عمود المرحلة العكسية (Cosmosil C 18- عمود AR-II ، 250 مم × 20 مم معرف ؛ NacalaiTesque ، Inc. ، كيوتو ، اليابان) على سلسلة Shimadzu LC -6 AD جهاز مع أجهزة كشف الأشعة فوق البنفسجية HPLC البارزة (كيوتو ، اليابان).

اشيناكوسايد (1):بودرة بيضاء؛ ESI − MS m / z: 785 [M - H] - ؛ 1H NMR (CD3OD ، 5 00 ميغا هرتز): δ 1. 0 7 (1H، d، J=6. 2 هرتز ، Rha-H {{1 0} }) ، 2.79 (2H ، t ، J=5. 2 هرتز ، ارتفاع -7) ، 3.56 (1H ، متر ، Ha {{2 0}) ، 3.79 (1H ، m، H -30)، 3.91 (1H، m، Hb -8)، 4.29 (1H، d، J=7. 7، Glc-H -1)، 4.38 (1H، d، J=7. 9 Hz، H -10)، 5. 0 0 (1H، t، J=9. 6 Hz، H -40) ، 5.17 (1H ، d ، J=1. 5 هرتز ، Rha-H -1) ، 6.27 (1H ، d ، J=15. 9 هرتز ، H -800) ، 6.58 (1H ، dd ، J=8. 1،2.0 هرتز ، H -6) ، 6.67 (1H ، d ، J=8. 1 هرتز ، H -5) ، 6.70 (1H ، d ، J=2. 0 هرتز ، H -2) ، 6.77 (1H ، d ، J=8. 2 هرتز ، H { {86}}) ، 6.94 (1H ، dd ، J=8. 3 ، 2.0 هرتز ، H -600) ، 7.05 (1H ، d ، J=2. 0 هرتز ، H { {100}}) ، 7.59 (1H ، d ، J=15. 9 هرتز ، H -700) ؛ 13C-NMR (CD3OD ، 125 ميجاهرتز): δ 18.5 (Rha-C -6) ، 36.6 (ج -7) ، 62.6 (Glc-C -6) ، 69.4 (ج {{{{) 124}}) ، 70.5 (C -40) ، 70.6 (Rha-C -5) ، 71.5 (Glc-C -4) ، 72.0 (Rha-C -3) ، 72.3 (C -8) ، 72.4 (Rha-C -2) ، 73.8 (Rha-C -4) ، 74.7 (C -50) ، 75.1 (Glc-C -2) ، 76.1 (C -20) ، 77.8 (Glc-C -5) ، 77.9 (Glc-C -3) ، 81.7 (C -30) و 103.1 (Rha-C -1) و 104.2 (C -10) و 104.7 (Glc-C -1) و 114.7 (C -200) و 115.3 (C {{{ 188}}) ، 116.3 (ج -500) ، 116.5 (ج -2) ، 117.1 (ج -5) ، 121.3 (ج -6) ، 123.3 (ج {{{) 203}}) ، 127.6 (ج -100) ، 131.5 (ج -1) ، 144.7 (ج -3) ، 146.1 (ج -4) ، 146.9 (ج {{{ 218}}) ، 148.2 (ج -700) ، 149.8 (ج -300) ، 168.5 (ج -900) (الشكل S3 – S5)

أكتوسيد (2):بودرة بيضاء؛ ESI − MS m / z: 623 [M - H] - ؛ 1H NMR (DMSO-d6، 5 0 0 ميغا هرتز): δ 0. 94 (3H، d، J =5. 9 هرتز ، H {{1 {{ 156}}}) ، 2.68 (2H ، m ، H -7) ، 4.33 (1H ، d ، J=7. 8 هرتز ، H {{2 0}}) ، 4.70 (1H ، t ، J=9. 0 هرتز ، H -400) ، 5.01 (1H ، s ، H -1000) ، 6.18 (1H ، d ، J=15 .9 هرتز ، ارتفاع -80) ، 6.48 (1 ساعة ، يوم ، J=7. 9 ، 1.4 هرتز ، ارتفاع -6) ، 6.62 (1H ، د ، J=7 .1Hz ، H -5) ، 6.73 (1H ، d ، J=2. 0 هرتز ، H -2) ، 6.75 (1H ، d ، J=7. 9 هرتز ، H -50) ، 6.97 (1H ، d ، J=8. 1 هرتز ، H -60) ، 7.01 (1H ، ثانية ، H -20) ، 7.44 (1H ، d، J=15. 8 هرتز، H -70) ؛ 13C NMR: (DMSO-d6 ، 125 ميجا هرتز): δ 18.2 (C -6000) ، 35.1 (C -7) ، 60.8 (C -600) ، 68.8 (C {{94}) }) ، 69.2 (C -400) ، 70.3 (C -3000) ، 70.3 (C -8) ، 70.4 (C -2000) ، 70.6 (C {{109}) }) ، 71.7 (ج -500) ، 74.5 (ج -200) ، 79.2 (ج -300) ، 101.3 (ج -1000) ، 102.3 (ج {{124}) }) ، 113.6 (ج -80) ، 114.7 (ج -20) ، 115.5 (ج -5) ، 115.8 (ج -50) ، 116.3 (ج {{139}) }) ، 119.6 (ج -6) ، 121.5 (ج -60) ، 125.6 (ج -10) ، 129.2 (ج -1) ، 143.6 (ج {{154}) }) ، 145.0 (C -3) ، 145.0 (C -30) ، 145.6 (C -70) ، 148.5 (C -40) ، 165.7 (C {{169} }) (الأشكال S6 – S8).

أيزو أكتيوسيد (3):بودرة بيضاء؛ ESI − MS m / z: 623 [M - H] - ؛ 1H NMR (DMSO-d6 ، 5 0 0 ميغا هرتز): δ 1. 0 7 (3H ، d ، J=6. 1 هرتز ، H {{10} }) ، 2.65 (2H ، m ، H -7) ، 4.35 (1H ، d ، J=10. 0 هرتز ، H -100) ، 5.10 (1H ، s ، H {{ 24}}) ، 6.27 (1H ، d ، J=15. 9 هرتز ، ارتفاع -80) ، 6.45 (1H ، dd ، J=8. 0 ، 1.8 هرتز ، H {{ 38}}) ، 6.58 (1H ، d ، J=8. 8 هرتز ، H -5) ، 6.73 (1H ، d ، J=1. 6 هرتز ، H {{50} }) ، 6.74 (1H ، d ، J=8. 1 Hz ، H -50) ، 6.94 (1H ، d ، J=8. 2 هرتز ، H -60) ، 7.04 (1H، s، H -20)، 7.46 (1H، d، J=15. 8 Hz، H -70) ؛ 13C NMR (DMSO-d6 ، 125 ميجا هرتز): δ 17.9 (C -6000) ، 35.2 (C -7) ، 63.5 (C -600) ، 68.2 (C -5000 ) ، 70.4 (ج -400) ، 70.6 (ج -3000) ، 71.7 (ج -8) ، 72.1 (ج -2000) ، 73.7 (ج -4000 ) ، 74.1 (ت -500) ، 74.5 (ج -200) ، 80.9 (ج -300) ، 100.7 (ج -1000) ، 102.7 (ج -100 ) ، 113.9 (ج -20) ، 114.9 (ج -80) ، 115.5 (ج -5) ، 115.8 (ج -50) ، 116.3 (ج -2 ) ، 119.6 (ج -6) ، 121.5 (ج -60) ، 125.5 (ج -10) ، 129.2 (ج -1) ، 143.5 (ج -4 ) ، 145.0 (ج -3) ، 145.3 (ج -30) ، 145.6 (ج -70) ، 148.5 (ج -40) ، 165.6 (ج -90 ) (الأشكال S9 – S11).

4.4. تحضير مستخلص Cistanche Tubulosa المائي (CTE)

تم استخلاص ساق مسحوق Cistanche tubulosa مرتين بالرجوع بالماء لمدة 1.5 ساعة ، وتم ترشيح محلول المستخلص. تمت تصفيتهCistanche tubulosaمستخلص مائي(CTE) تم تخزينه عند 4 درجات مئوية قبل الاستخدام.

5. الاستنتاجات

أظهرت هذه الدراسة أن 1-3 هو المكون النشط للاعتلال الدماغي الرضحي المزمن للنشاط المضاد لمرض الزهايمر. أصبح استخلاب الحديد المفهوم الجديد لتصميم جيل جديد من الأدوية لعلاج مرض الزهايمر [41]. CTE هو دواء صيني نباتي محتمل مضاد لمرض الزهايمر يستهدف التراكم والترسب المستحث باستخلب الحديد. بالإضافة إلى ذلك ، أثبتنا أيضًا أن 1–3 سيصل إلى الدماغ عبر الحاجز الدموي الدماغي (BBB). المكونات النشطة وتأكيد الآلية الأساسية للاعتلال الدماغي الرضحي المزمن سيساعد بشكل كبير في مراقبة الجودة والتوافر البيولوجي لدراسات المنتج في المستقبل. في الوقت نفسه ، ستكون طريقة التحليل المتقدمة والفعالة المقدمة مفيدة في تحديد 1-3 في النباتات والأطعمة والدم وأنسجة الدماغ من أجل بصمات الأصابع الكيميائية وأبحاث الحرائك الدوائية.

مراجع

1. وو ، واي تي ؛ بيسير ، أ. بريتيلر ، MMB ؛ فراتيجليوني ، إل. هيلمر ، سي ؛ هندري ، HC ؛ هوندا ، ح. إكرام ، ماجستير ؛ لانجا ، كم ؛ لوبو ، أ. وآخرون. انتشار وحالات الخرف المتغيرة مع مرور الوقت - الأدلة الحالية. نات. القس نيورول. 2017 ، 13 ، 327-339. [CrossRef]

2. روبنسون ، إل. تانغ ، إي. تايلور ، JP الخرف: التشخيص والتدخل المبكر في الوقت المناسب. BMJ 2015 ، 350 ، h3029. [CrossRef]

3. ميتشل ، ر. درابر ، ب. هارفي ، إل. بروداتي ، هـ. إغلاق ، ي. بقاء وخصائص كبار السن المصابين بالخرف والذين لا يدخلون المستشفى بعد إيذاء النفس المتعمد. كثافة العمليات جيرياتر. نفسية. 2017 ، 32 ، 892-900. [CrossRef] [PubMed]

4. أوت ، أ. بريتلر ، مم ؛ فان هارسكامب ، ف. كلوز ، جي. فان دير كامين ، تي جيه ؛ Grobbee ، DE ؛ هوفمان ، أ. انتشار مرض الزهايمر والخرف الوعائي: الارتباط بالتعليم. دراسة روتردام. BMJ 1995 ، 310 ، 970-973. [CrossRef]

5. كالاريا ، RN ؛ مايستر ، جنرال إلكتريك ؛ أريزاجا ، ر. فريدلاند ، ر. جالاسكو ، د. هول ، ك. Luchsinger ، JA ؛ Ogunniyi، A .؛ بيري ، كرونة إستونية ؛ بوتوكنيك ، ف. وآخرون. مرض الزهايمر والخرف الوعائي في البلدان النامية: عوامل الانتشار والإدارة وعوامل الخطر. لانسيت. نيورول. 2008 ، 7 ، 812-826. [CrossRef]

6. حقائق وأرقام عن مرض الزهايمر 2018. خرف الزهايمر. 2018 ، 14 ، 367-429. [CrossRef]

7. هاردي ، ياء ؛ Selkoe ، DJ فرضية الأميلويد لمرض الزهايمر: التقدم والمشاكل على الطريق إلى العلاجات. علم 2002 ، 297 ، 353–356. [CrossRef]

8. كيرفورث ، HW ؛ LaFerla ، FM مرض الزهايمر. إنجل. جيه ميد. 2010 ، 362 ، 329-344. [CrossRef]

9. آيتون ، إس. لي ، ص. بوش ، AI Metallostasis في مرض الزهايمر. راديك مجاني. بيول. ميد. 2013، 62، 76–89. [CrossRef]

10. كيم ، AC ؛ ليم ، س. كيم ، واي كي تأثيرات أيونات المعادن على تجميع A و Tau. كثافة العمليات J. مول. علوم. 2018 ، 19 ، 128. [CrossRef]

11. روبرت ، أ. ليو ، واي. نجوين ، م. Meunier، B. تنظيم استتباب النحاس والحديد بواسطة خالب المعادن: علاج كيميائي محتمل لمرض الزهايمر. A. تشيم. الدقة. 2015 ، 48 ، 1332-1339. [CrossRef] [PubMed]

12. أوبير ، SKA ؛ راوك ، أ. مخلبات النحاس (I) لمرض الزهايمر. J. فيز. تشيم. ب 2017 ، 121 ، 11304-11310. [CrossRef] [PubMed]

13. سانتوس ، ماساتشوستس ؛ تشاند ، ك. شافيز ، س.التقدم الحديث في خالب المعادن متعدد الوظائف كأدوية محتملة لمرض الزهايمر. تنسيق. تشيم. القس 2016 ، 327-328 ، 287-303. [CrossRef]

14. D'Acunto ، CW ؛ كابلانيك ، ر. Gbelcova ، H. كاجيك ، زي. بريزا ، ت. فاسينا ، إل. هافليك ، م. رومل ، تي. Kral، V. Metallomics لعلاج مرض الزهايمر: استخدام جيل جديد من المستخلبات التي تجمع بين الارتباط الكاتيوني بالمعادن وخصائص النقل. يورو. جيه ميد. تشيم. 2018 ، 150 ، 140-155. [CrossRef] [PubMed]

15. وانغ ، العاشر ؛ وانغ ، العاشر ؛ غو ، ز. تنسيق. تشيم. القس 2018 ، 362 ، 72-84. [CrossRef]

16. شاو ، مل ؛ أماه ، XW ؛ وو ، زي. يو ، ويم ؛ تشن ، دستور الأدوية الصيني XN ؛ الناشر الكيميائي والصناعي: بكين ، الصين ، 2005 ؛ ص. 90.

17. لي ، زي. لين ، ح. قو ، إل. جاو ، ياء ؛ تزينج ، سي. Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): أحد أفضل الهدايا الصيدلانية للطب الصيني التقليدي. أمامي. فارماكول. 2016، 7، 41. [CrossRef] [PubMed]

18. قوه ، س. تشو ، واي. وانغ ، سي جيه ؛ هوانغ ، يم ؛ لي ، واي تي ؛ سو ، MH ؛ Lu ، J. دراسة مفتوحة ، غير خاضعة للتحكم الوهمي على كبسولات Cistanche tubulosa glycoside (مذكرة استعادة (R)) لعلاج مرض الزهايمر المعتدل. أكون. J. مرض الزهايمر. ديمين أخرى. 2013 ، 28 ، 363-370. [CrossRef]

19. وو ، كر ؛ لين ، HC ؛ Su، MH الانعكاس بواسطة المستخلصات المائية لـ Cistanche tubulosa من العجز السلوكي في نموذج الفئران الشبيه بمرض الزهايمر: الصلة بترسيب الأميلويد ووظيفة الناقل العصبي المركزي. تكملة BMC. بديل. ميد. 2014 ، 14 ، 202. [CrossRef]

20. وانغ ، يم ؛ تشانغ ، SJ ؛ لو ، GA ؛ هو ، YN ؛ هو ، جي بي ؛ ليو ، إل. تشو ، واي. Wang ، HJ Analysis of phenylethanoid glycosides in extract of herba Cistanchis بواسطة LC / ESI-MS / MS. اكتا فارم. سينك. 2000 ، 35 ، 839-842.

21. جينج ، إكس سي ؛ تيان ، XF ؛ تو ، PF ؛ Pu ، XP التأثيرات الوقائية العصبية لإشنكوسايد في نموذج MPTP الفأري لمرض باركنسون. يورو. فارماكول. 2007 ، 564 ، 66-74. [CrossRef]

22. تشاو ، س. يانغ ، العاشر ؛ كاي ، د. أنتم ، إل. هوى ، واي. تشانغ ، إل. تشنغ ، ياء ؛ شين ، واي. وانغ ، ك. Bai ، Y. Echinacoside يحمي من موت الخلايا المبرمج العصبي الناتج عن MPP (زائد) عن طريق تنظيم مسار ROS / ATF3 / CHOP. نيوروسسي. ثور. 2016 ، 32 ، 349-362. [CrossRef] [PubMed]

23. وانغ ، YH ؛ شوان ، ZH ؛ تيان ، س. يحمي Du، GH Echinacoside من 6- اختلال وظائف الميتوكوندريا الناجم عن الهيدروكسيدوبامين والاستجابات الالتهابية في خلايا PC12 عن طريق تقليل إنتاج ROS. دليل. تكملة مقرها. بديل. ميد. 2015 ، 2015 ، 189239. [CrossRef] [PubMed]

24. شياو ، YJ ؛ سو ، MH ؛ لين ، HC ؛ يخفف Wu ، CR Echinacoside من ضعف الذاكرة وعجز الكوليني الناجم عن ببتيدات أميلويد بيتا عن طريق تثبيط ترسب الأميلويد وعلم السموم. وظيفة الغذاء. 2017 ، 8 ، 2283-2294. [CrossRef] [PubMed]

25. شياو ، YJ ؛ سو ، MH ؛ لين ، HC ؛ يعمل كل من Wu و CR Acteoside و iso-acteoside على حماية السمية الخلوية التي يسببها amyloid-beta peptide والعجز المعرفي والاضطرابات الكيميائية العصبية في المختبر وفي الجسم الحي. كثافة العمليات J. مول. علوم. 2017 ، 18. [CrossRef]