التفاعلات بين مضادات الأكسدة البوليفينوليك كيرسيتين ونارينغين تملي السلوك الكيميائي والبيولوجي المميز لمخاليطهما المتعلقة بالأكسدة ، الجزء 2

الرجاء التواصلoscar.xiao@wecistanche.comللمزيد من المعلومات

تميل Q عند تركيز يصل إلى 1 ميكرومتر أيضًا إلى تقليل التعبير عن ALOX12 و MT3 (0. 05<><0.09) as="" well="" as="" sod2="" and=""><><0.09).the latter="" gene="" codes="" for="" a="" protein="" that="" belongs="" to="" the="" family="" of="" thioredoxins="" and="" acts="" as="" an="" endogenous="" antioxidant="" facilitating="" the="" reduction="" of="" other="" proteins8.in="" contrast,="" to="" n-,o="" at="" 1="" um="" up-regulated="" gtf2i=""><0.05).the other="" genes="" whose="" expression="" was="" significantly="" elevated="" by="" q="" at="" l="" μm="" were="" gsr,="" hspa1a,="" ptgsi,="" and="" txnrd1;="" all="" play="" key="" roles="" in="" building="" cellular="" defenses="" against="" oxidants.="" up-regulation="" of="" gsr="" is="" crucial="" for="" maintaining="" redox="">التوازنفي الخلايا لأن البروتين المشفر يحافظ على مستويات عالية من الجلوتاثيون المختزل في العصارة الخلوية. في المقابل ، هناك حاجة إلى مساعد HSPAlA لتصحيح أي خلل يحدث ، وكذلك تلك الناتجة عن التعرض لمضادات الأكسدة. قد يؤدي هذا الأخير إلى تحويل توازن الأكسدة والاختزال نحو حالة مخفضة ، مما يؤدي إلى تقليل احتمالية أكبر لجسور ثاني كبريتيد إلىسلفهيدريل

مجموعات وبالتالي تغيير بنية البروتين وبالتالي وظيفتها 0. يشفر جين PTGS1 بروتينًا يقوم بفحص عضو آخر من عائلة إنزيمات مضادات الأكسدة ، وهو سينثيز البروستاغلاندين -241 ، الجين الرابع المذكور- TXNRD {{4 }} رموز اختزال thioredoxin التي تحافظ على thioredoxin (TXN) في الحالة المخفضة 2.

الرجاء الضغط هنا لمعرفة المزيد

على غرار 1 ميكرومتر ، Q عند تركيز أعلى （10 ميكرومتر） قلل أيضًا من التعبير عن TXN （p<0.05） and="" sod2=""><><0.09). furthermore,="" a="" drop="" in="" expression="" was="" observed="" for="" sod1=""><><0.09). the="" investigated="" flavonol="" at="" 10μm="" influenced="" the="" expression="" of="" also="" 4="" genes="" up-regulated="" by="" its="" lower="" concentration∶="" gsr,="" hspa1a,="" ptgs1,="" and="" txnrd2=""><0.05). the="" additional="" up-regulated="" genes="" by="" the="" higher="" q="" concentration="" included="" gstz1="" and="" stk25=""><0.05) as="" well="" as="" gpx4="" and="" sirt2=""><><0.09). the="" protein="" encoded="" by="" gstz1="" is="" a="" member="" of="" the="" glutathione="" s-transferase="" family="" that="" are="" key="" enzymes="" implicated="" in="" the="" detoxification="" of="" electrophilic="" molecules="" by="" conjugation="" with="" gsh4,="" while="" stk25="" codes="" for="" serine/threonine="" kinase="" 25,="" a="" protein="" activated="" by="" oxidative="" stress="" that="" induces="" apoptotic="" cell="" death.="" in="" turn,="" gpx4="" codes="" for="" glutathione="" peroxidase="" 4,="" which="" supports="" the="" antioxidant="" barrier="" of="" the="" cell="" by="" catalyzing="" the="" reduction="" of="" peroxides="" by="" glutathione="" the="" up-regulation="" of="" sirt2,="" encoding="" nad-dependent="" protein="">ديسيتيلاز، الذي يزيل الأسيتيل اللايسينات الداخلية الموجودة في ، على سبيل المثال الهيستونات أو عوامل النسخ ، يلعب دورًا في تعديل العمليات البيولوجية الرئيسية ، مثل التحكم في دورة الخلية أو تمايز الخلايا أو السلامة الجينية ، 46.

يمكن أن يحسن cistanche المناعة

أدى خليط aglycones عند l ميكرومتر إلى تقليل التعبير عن APOE و CCL5 و MT3 و MSRA إلى حد الوصول إلى دلالة إحصائية (p.<0.05). the="" apolipoprotein="" encoded="" by="" apoe="" is="" a="" core="" component="" of="" plasma="" lipoproteins="" and="" is="" involved="" in="" their="" production,="" conversion,="" and="" clearance47.="" the="" protein="" encoded="" by="" msra="" carries="" out="" the="">الأنزيميةاختزال ميثيونين سلفوكسيد إلى ميثيونين ، وبالتالي يعمل هذا البروتين في إصلاح البروتينات التالفة تأكسدًا لاستعادة النشاط البيولوجي. قلل الخليط QN عند 10 ميكرومتر ، على نحو مشابه للجرعة المنخفضة ، من التعبير عن APOE و MT3 و MSRA (p.<0.05). however="" at="" a="" higher="" concentration.="" the="" set="" of="" down-regulated="" genes="" was="" extended="" to="" incorporate="" cygb="" and=""><0.05). the="" latter="" gene="" sepp1="" encodes="" selenoprotein="" p="" the="" extracellular="">بروتين سكريالذي له دور مضاد للأكسدة ويبدو أنه مرتبط بالخلايا البطانية. عزز المزيج QN بشكل طفيف التعبير عن جين PRDX5 الذي يرمز لعضو من عائلة بيروكسيردوكسين من إنزيمات مضادات الأكسدة ، والتي يتمثل دورها في تقليل بيروكسيد الهيدروجين والألكيل.50- هيدروبيروكسيدات.

مناقشة

الأساس العلمي للملاحظات الوبائية التي تشير إلى أن الفاكهة والخضروات الكاملة أكثر فعالية في الوقاية من الأمراض المزمنة غير المعدية من المركبات النشطة بيولوجيًا المعزولة منها غير مفهومة جيدًا. تم اقتراح مفهوم التآزر الغذائي ، الذي يفترض التأثير الإضافي أو التآزري للمكونات الغذائية المختلفة على صحة الإنسان ، كتفسير محتمل. ومع ذلك ، فقد تم تقويض هذا المنطق إلى حد ما من خلال بحثنا السابق الذي قارنا فيه النشاط الحيوي للخضروات ذات الصبغة المختلفة (براسيكاس) بالإضافة إلى ثمار التوت ، الأبيض مقابل الأنثوسيانين المحتوية ، ولم نجد أي نمط من النشاط يمكن أن يُعزى إلى الأصناف الملونة ، مع باستثناء ارتفاع نشاط مضادات الأكسدة في الاختبارات الكيميائية. كما لم تتطابق التأثيرات الحيوية المنطقية مع تأثيرات السياندين المعزول -3- O-glucoside التي تم فحصها عند التركيز الذي يحدث في المواد النباتية المدروسة. كما أظهرت التحقيقات الآلية الإضافية حول إعادة تكوين الكاكاو عدم وجود تأثيرات بيولوجية مضافة / تآزرية لخلائط المكونات كما هو متوقع من خلال مفهوم التآزر الغذائي ، ولكن تم تغيير النشاط الحيوي بالكامل. يبدو أن الخلائط اللاحقة من بوليفينول الكاكاو تتصرف كمواد جديدة. افترضنا أن التفاعلات بين المكونات الفردية في الخليط يمكن أن تخلق كيانًا جديدًا يعرض خصائص فيزيائية كيميائية معدلة تؤدي إلى أنشطة بيولوجية جديدة. في الواقع ، تم اكتشاف مجموعة متنوعة من التفاعلات الممكنة بين البوليفينول (هيدروجين ، ن ، كاره للماء ، مخلب ، تساهمي ، وإلكتروستاتيكي) ، التي تم اكتشافها أثناء التحقيقات في تطبيقها كمثبتات للجسيمات النانوية المجمعة ذاتيًا ، لإنتاج مجموعة من الهياكل المختلفة في الوظائف. وقد لوحظ أيضًا أن هذه المواد الكيميائية النباتية تمارس عادة أكثر من نوع واحد من قوى الجذب المثبتة. في البحث الحالي ، درسنا كيف أثر التفاعل بين التنافس في كثير من الأحيان على التفاعلات في مزيج من اثنين فقط من مضادات الأكسدة البوليفينولية على الأنشطة المرتبطة بالأكسدة والاختزال مقارنة بالمكونات الفردية.

ركزت السلسلة الأولى من التجارب على التحديدات الكيميائية والكهروكيميائية للمعلمات التي تميز أكسدة الفلافونويدات الفردية و 1: 1 المختلطة (ممثلون عن مجموعة الفلافونول والفلافانون) ، بشكل منفصل في شكل aglycone (Q N-) و glycoside (R ، N plus) . يتم إعطاء الارتباطات بين نتائج هذه القياسات في الشكل 8. أظهرت التقييمات الأولية التي أجراها اختبار DPPH الأكثر شيوعًا أنه على الرغم من أن كلا من الفلافانون (N- ، N plus) بدا من مضادات الأكسدة الضعيفة جدًا ، إلا أنهما زادتا من نشاط مضادات الأكسدة للخلائط ، كلاً من QN و RN plus ، بطريقة تآزرية (الشكل. 2 أ). قدم تحليل DPVanalysis شرحًا أعمق لهذا التأثير وأشار إلى التأثير الحاسم للخواص الحركية للتفاعل. اتضح أن مركبات الفلافانون المدروسة تطلق الإلكترونات بسهولة وفقًا للقيمة العالية للمعامل الديناميكي الحراري E ، (الشكل 2C). ومع ذلك ، كانت حركية هذه العملية بطيئة جدًا بحيث لا يمكن ملاحظتها بواسطة اختبارات DPPH و PT. أظهرت الفلافانول ، مضادات الأكسدة القوية في اختبار DPPH و PT ، في DPV الخصائص المعاكسة - الديناميكا الحرارية غير المواتية لإطلاق الإلكترون ، ولكن معدل عالي من عملية الأكسدة. تشير المقارنة بين هياكل الجذور الوسيطة إلى أن جذور الفلافونول السيميكوينون أكثر استقرارًا من جذور الفلافانون الفينوكسيل بسبب آليات التثبيت العديدة (الشكل 1). ويترتب على ذلك أن استقرار الوسيط الجذري له أهمية حاسمة في حركية تفاعل الأكسدة ، وبالتالي للنشاط الاختزالي للمركبات التي تم فحصها.

يتم تضخيم النشاط المضاد للأكسدة النهائي للمخاليط المدروسة عن طريق العوامل الديناميكية الحرارية ، مما يؤثر بشكل إيجابي على عملية الأكسدة ، مما يؤدي لاحقًا إلى تحسين حركية التفاعل (الشكل 2B-F). لا تزال آلية أكثر تفصيلاً لهذا التعزيز غير مفسرة حاليًا ، وعلى الأرجح أنها تتضمن تفاعلات معينة من الفلافونول / الفلافانون. لوحظ هذا التعزيز ليس فقط في أنبوب الاختبار ولكن أيضًا في المواقف الخلوية كما يتضح من فحص CAA حيث أدى النشاط المضاد للأكسدة لكلا الخليطين ، ON و RN plus ، إلى إزاحة نشاط مضادات الأكسدة أعلى من نشاط المكونات الفردية (الشكل 4). كشف الجزء الكيميائي من تحقيقاتنا عن التناقض في نشاط مضادات الأكسدة بين المركبات الفردية وخلائطها. يمكن للمرء

تشير إلى أهمية حركية تفاعل الأكسدة للنشاط الكلي لمضادات الأكسدة وتشير إلى أن التفاعلات بين المكونات الفردية تؤثر على خصائص الأكسدة في الخليط. يجب أن يكون صحيحًا على الأقل في هذه الحالة عندما أدى وجود الفلافونول (Q ، R) في الخليط إلى زيادة قدرة الفلافانون (N- ، N plus) على التبرع بالإلكترونات.

ركز الجزء اللاحق من البحث على مقارنة الخواص البيولوجية المتعلقة بالأكسدة والاختزال التي أظهرتها مركبات الفلافونويد الفردية (O ، R ، N- ، N plus) وخلائطها (ON- و RN plus). تعمل خلايا سرطان القولون البشرية HT29 كنموذج موصى به للدراسات الغذائية للجهاز الهضمي البشري ، ولكن في هذه الدراسة ، تشير بعض تفسيرات البيانات أيضًا إلى الطبيعة الورمية لخط الخلية هذا. من المقبول عمومًا في الوقت الحاضر أن توازن الأكسدة والاختزال أمر حيوي لبقاء الخلية ووظيفتها ؛ وبالتالي ، فإن التعرض لمضادات الأكسدة الخارجية وكذلك ROS قد يعدل العديد من العمليات الخلوية. عند الضغط الاختزالي ، قد تؤدي وفرة ROS غير الكافية إلى تغيير إشارات الخلية عبر المسارات المعتمدة على الأكسدة والاختزال. من ناحية أخرى ، يؤدي فائض أنواع الأكسجين التفاعلية إلى الإجهاد التأكسدي وزيادة خطر الأضرار التأكسدية للمكونات الخلوية. كانت نقطة البداية البيولوجية لهذا المربط هي تقييم تأثير مضادات الأكسدة ، الفردية والمخلوطة ، على النمو الخلوي. النشاط الذي يعتمد على استتباب الأكسدة والاختزال الخلوي ، نظرًا لأن التركيز المناسب لـ ROS هو المفتاح لتنشيط الإشارات التي تؤدي إلى تكاثر الخلايا. أظهرت نتائج اختبار بقاء الخلية MTT اختلافات جوهرية بين العلاجات. لم تؤثر المركبات النقية على تكاثر الخلايا بشكل كبير مقارنةً بالتحكم في الخلايا غير المعالجة. بلغ نمو الخلايا مستوى ثابتًا على نطاق واسع من التركيزات. في المقابل ، حفز كلا الخليطين (QN- ، RN plus) بشكل كبير تكاثر الخلايا. قد لا يرتبط هذا التأثير الأخير بالضرورة بخصائص مضادات الأكسدة للخلائط ، لأن نتائج اختبار CAA لـ O كانت مماثلة لتلك الخاصة بخليط ON. ومع ذلك ، فإن الخلائط ، وليس المكونات الفردية ، تدعم على ما يبدو خلايا HT29 بشكل أفضل للتعامل مع الإجهاد التأكسدي المتبقي ، على سبيل المثال عن طريق استعادة حالة الأكسدة المثلى ؛ التأثير الذي لوحظ سابقًا لمضادات الأكسدة القوية مثل بمضادات الاكسدة. على الرغم من أن الزيادة التآزرية في نشاط مضادات الأكسدة التي لوحظت في الخلائط قد يُنظر إليها على أنها تأثير مفيد ، إلا أن حقيقة أن مثل هذه التوليفات من مضادات الأكسدة تحفز نمو الخلايا السرطانية غير مرغوب فيها. كانت إيجابيات وسلبيات مضادات الأكسدة و ROS في السرطان موضوعًا للنقاش لبعض الوقت وأدت إلى استنتاج مفاده أن مضادات الأكسدة قد تعزز السرطان من خلال آليات معقدة 56 والتي نراها هنا أيضًا.

كان الاكتشاف المثير للاهتمام الآخر هو أن التأثيرات غير المرغوب فيها للمعالجات ، مثل النشاط المؤيد للأكسدة لـ N-التي كشفت عنها مقايسة CAA وكذلك السمية الجينية لـ Q التي لوحظت في فحص المذنب تم تنعيمها بعيدًا عن الخلائط. أظهر الفحص الأخير أن تلف الحمض النووي الناجم عن أعلى تركيز مدروس (100 ميكرومتر) من O النقي قد انخفض إلى مستوى التحكم في التركيز المتساوي للخليط QN- (الشكل 5) الذي قد يكون مرتبطًا بتحسين نشاط مضادات الأكسدة لـ ON - تمت ملاحظته في الاختبارات الكهروكيميائية. في حالة تقييم نشاط مضادات الأكسدة الخلوية ، أظهرت aglycones خصائص مضادات الأكسدة (O) أو prooxidant (N-) أكثر وضوحًا من الجليكوسيدات المقابلة (الشكل 4). لم يتجاوز N- عند التركيزات الفسيولوجية قدرة التخزين المؤقت للأكسدة لخلايا HT29 السمية ، بينما أظهرت التركيزات الأعلى من تلك الموجودة في البلازما البشرية تأثير مؤكسد يعتمد على التركيز ينخفض ​​مع وقت التعرض. بشكل عام ، قللت aglycones من تأثيرها الأولي على حالة الأكسدة الخلوية على مدار الوقت (الشكل 4). أظهر كلا الخليطين نشاطًا مضادًا للأكسدة معززًا ، على ما يبدو لم يتأثر بالتأثير المؤكسد الذي شوهد للمركبات الفردية.

كما لوحظ التأثير المتمايز للمخاليط مقارنة بالمكونات الفردية في النسخة اللاجينية من مقايسة المذنب المستخدمة لرصد التغيرات في مثيلة الحمض النووي. أظهرت مركبات الفلافونويد الفردية ميلًا لتقليل مثيلة الحمض النووي العالمية بطريقة تعتمد على التركيز ، باستثناء R ، والتي لم تؤثر على هذا التعديل الوراثي اللاجيني (الشكل 6). أدى كلا الخليطين أيضًا إلى خفض مستوى مثيلة الحمض النووي العالمي ، ولكن لم يلاحظ أي ارتباط مع التركيز. وتجدر الإشارة إلى أن حالة الأكسدة والاختزال قد تلعب دورًا في الجمع بين البوليفينول لأنه ، في حالة مثيلة الحمض النووي ، لا يبدو أن تأثير مركبات الفلافونويد المدروسة مرتبط بخصائصها المختزلة. من المعروف أن إزالة الميثيل النشطة تتضمن الأكسدة التكرارية لمجموعة الميثيل في 5- ميثيل سيتوزين إلى كربوكسي فورم 5758 ، وبالتالي من المتوقع أن تمنع مضادات الأكسدة هذه العملية. في تجاربنا ، لاحظنا التأثير المعاكس. لذلك ، هناك على الأرجح آلية أخرى متورطة ، وهي تثبيط إنزيم ميثيل ترانسفيراز DNA (DNMT1) - الإنزيم الذي يحفز نقل مجموعات الميثيل إلى هياكل CpG ثنائية النوكليوتيد في DNA. يؤدي الحصار المفروض على صيانة نمط المثيلة إلى نزع الميثيل السلبي على مدار جولات متتالية من تكرار الحمض النووي. تتماشى نتائجنا مع الدراسات الأخرى التي أظهرت تثبيط DNMT1 بواسطة كيرسيتين. كما تبين أيضًا أن بعض مركبات الفلافانون ، بما في ذلك N- تثبط نشاط DNMT1 في المستخلصات النووية لخلايا سرطان الخلايا الحرشفية المريئية البشرية KYSE -510. أظهرت دراستنا أيضًا أن خلط Q مع N تسبب في انخفاض ملحوظ في مستوى مثيلة الحمض النووي في جميع التراكيز المختبرة لهذا الخليط. ولوحظت نتيجة مماثلة لـ RN plus ؛ ومع ذلك ، حدث نقص الميثيل من الحمض النووي إلى حد أقل. قد تكون كل هذه الملاحظات ذات أهمية من وجهة نظر علاجية ، يتميز نمط مثيلة الحمض النووي في السرطان من ناحية بالفقد العالمي للميثيل في أجسام الجينات والمناطق بين الجينات مما يؤدي إلى إضعاف استقرار الجينوم! ، من ناحية أخرى ، من خلال فرط الميثيل في المناطق الغنية بـ CpG في المحفزات وإسكات النسخ للتعبير عن الجينات الكابتة للورم (TSGs)! وبالتالي ، فإن نقص ميثيل الحمض النووي الناجم عن البوليفينول قد يعيد التعبير عن جينات TSGs الصامتة وأيضًا يزيد تدريجيًا من عدم استقرار جينوم السرطان إلى النقطة التي تؤدي إلى موت الخلية.

أظهرت التأثيرات الخلوية الموصوفة للبوليفينول التي تمت دراستها أنه ليس فقط المحتوى أو التركيب أو التوافر البيولوجي ، ولكن أيضًا التفاعلات بين المكونات تعدل الخصائص الكهروكيميائية وكذلك الخصائص البيولوجية للمخاليط. تم دعم هذا الاستنتاج بشكل واضح من خلال النشاط الأخير الذي تم تحليله في هذه الدراسة ، أي تعديل التعبير عن طيف واسع من الجينات المرتبطة بالدفاع المضاد للأكسدة والاستجابة للأكسدة. يلخص مخطط Venn (الشكل 7C) تأثير aglycones الفلافونويد التي تم فحصها على تعديل التعبير الجيني. في حالة المركبات النقية (O ، N-) عند 1 ميكرومتر ، تم العثور على جين واحد فقط (GTFZI) يتأثر بكل من مركبات الفلافونويد. ومع ذلك ، تسبب N- في انخفاض التنظيم لهذا الجين ، بينما زاد Q من تعبيره. لم يتم الحفاظ على هذا التأثير عند تركيزات أعلى من المركبات النقية ولم يُشاهد لخليطها بأي جرعة. N والمزيج الخاضع للتنظيم QN أيضًا جيناتان آخران ، CCL5 و MT3 ، عند l μM وثلاثة جينات تحتضن CYGB و MT3 و MSRA عند 10uM. الأكثر إثارة للدهشة ، أنه لم يتم العثور على أوجه تشابه في تنظيم التعبير عن الجينات بين Q و QN - ولا بين Q و N و QN - في أي من التركيزات التي تم فحصها. علاوة على ذلك ، غيّر المزيج QN-بشكل ملحوظ التعبير عن ثلاثة جينات أخرى (تنظيم خفض APOE و SEPPI ، PRDX5 up-Regulation) التي لم يتأثر نشاط النسخ بأي من المكونات الفردية. في الختام ، توضح دراستنا أن الخصائص البيولوجية لمخاليط البوليفينول ليست مجرد مزيج من الأنشطة المعززة أو الضعيفة التي تظهرها المكونات الفردية. تشير هذه الملاحظات إلى أن النشاط الحيوي للمواد الكيميائية النباتية في المخاليط يجب أن يكون نتيجة التفاعلات بين المكونات التي تؤدي إلى ظهور مادة جديدة ذات خصائص كيميائية وبيولوجية جديدة يصعب التنبؤ بها ، ونتائج التحديدات التي تم إجراؤها في دراستنا لا تدعم فقط ، ولكن في الواقع ، قم بتوسيع فكرة مفهوم التآزر الغذائي مع التأكيد على حقيقة أنه حتى التعديلات الطفيفة في تكوين خليط من المواد الكيميائية النباتية المنقولة بالغذاء (ربما أيضًا مكونات غذائية من أصول أخرى) تخلق كيانًا جديدًا قد لا يكون تأثيره على صحة الإنسان مشابهًا بالضرورة لذلك. من المكونات الفردية. تقوض هذه الفكرة الطريقة الحالية لتصميم المكملات الغذائية ، والتي تعتمد على الادعاءات الصحية التي تم إنشاؤها من خلال البحث عن المركبات المعزولة. من منظور الوقاية الكيميائية الغذائية ، تشرح الدراسة المقدمة سبب عدم تمكن النهج الحالي الذي يؤكد على استخدام المكونات الغذائية النشطة بيولوجيًا المعزولة من مطابقة الملاحظات الوبائية التي تم إجراؤها على الأطعمة الكاملة التي يتناولها الأشخاص. إذا كان للمكملات الغذائية أن تقدم فوائد صحية حقيقية طويلة الأجل للأفراد ، فمن الضروري دراسة مجموعات من العوامل المفترضة معًا وفي سياق بيولوجي.

المواد والأساليب

الكيماويات والكواشف. تم استخدام المركبات النشطة بيولوجيًا التالية في الدراسة: كيرسيتين (Q) ، وروتين (R) ، ونارينجين (N plus) ، ونارينجين (N-) من Sigma-Aldrich (الولايات المتحدة الأمريكية). تم استخدام ميثانول وميثانول من الدرجة التحليلية من POCH (بولندا) وكذلك DMSO من Sigma-Aldrich (الولايات المتحدة الأمريكية). تم استخدام نظام QPLUS185 من Millipore (الولايات المتحدة الأمريكية) لتنقية المياه. لتقييم نشاط مضادات الأكسدة عن طريق اختبار القياس الطيفي ، تم تطبيق 1- ثنائي فينيل -2- بيكريل هيدرازيل (DPPH) من سيجما ألدريتش (الولايات المتحدة الأمريكية). 0. تم ​​تحضير محلول فوسفات الصوديوم بتذويب Na ، HPO12H ، O و NaH ، PO2H ، O (Sigma-Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكية) في الماء منزوع الأيونات تم استخدامه في الدراسات الكهروكيميائية. تم تنظيف القطب العامل والخلية الكهروكيميائية بمحلول 10 ملي برمنجنات البوتاسيوم (Sigma-Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكية) في 95 بالمائة H ، SO ، (y / y) (POCH ، بولندا). تم تخزين القطب المرجعي في 3 مولار بوكل (Sigma-Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكية) مذاب في الماء منزوع الأيونات. تم شراء جميع الكواشف المستخدمة في مزرعة الخلايا (PBS ، وسط مكوي 5A ، التربسين ، مصل بقري جنيني ، مضادات حيوية) من Sigma-Aldrich (الولايات المتحدة الأمريكية). تم تحضير محلول PBS عن طريق إذابة قرص واحد في 200 مل من الماء النقي ، Thiazolyl blue tetrazolium bromide تم تطبيق (MTT) من Sigma-Aldrich (الولايات المتحدة الأمريكية) في اختبار MTT. فحص مضادات الأكسدة الخلوية أوكسي سيليكت

تم شراء المجموعة من شركة Cell Biolabs، Inc. (الولايات المتحدة الأمريكية). تم استخدام الكواشف التالية لمقايسة المذنب: حمض الهيدروكلوريك (HCl) ، نقطة انصهار منخفضة الاغاروز (LMP agarose) ، كلوريد الصوديوم (NaCl ، هيدروكسيد الصوديوم (NaOH) ، حمض إيثيلين ديامينيتراسيتيك (EDTA) ، 2- أمين {{1) }} (هيدروكسي ميثيل) -1 ، 3- بروبانديول (Trizma-Base) ، صبغة هلام الحمض النووي Sybr Green I و Triton X -100 من Sigma-Aldrich (الولايات المتحدة الأمريكية) بالإضافة إلى الذوبان العادي نقطة الاغاروز (NMP agarose) من Bioline (المملكة المتحدة). بالإضافة إلى ذلك ، في مقايسة المذنب الحساسة للميثيل ، تم استخدام بروتيناز K (Merck ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، والإنزيمات التقييدية (HpalI / MspI) ، و Tango Buffer (Promega ، المملكة المتحدة). ، RNeasy Mini Kit ، مجموعة DNase الخالية من RNase ، مجموعة RT² First Strand Kit ، RT²SybrGreen qPCR Mastermix ، RT2Profiler PCR Arrays من أجل الإجهاد التأكسدي (PAHS 0065) من Qiagen (ألمانيا) تم استخدامها في الدراسات الجينية.

هذا المقال مستخرج منwww.nature.com/scientificreports