إيريدويد ومونوتربين غير دائري جليكوسيدات ، كانكانوسيدات L ، M ، N ، O ، و P من Cistanche Tubulosa
Mar 06, 2022
جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com
Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) هو نبات طفيلي معمر ينمو على جذور أنواع Salvadora أو Calotropis ، موزعة في شمال إفريقيا والجزيرة العربية والدول الآسيوية. يستخدم لعلاج العجز الجنسي ، والعقم ، وألم الظهر ، وضعف الجسم بالإضافة إلى عامل محفز للدورة الدموية .1،2) أثناء دراساتنا على المكونات النشطة بيولوجيًا من سيقان القيصرية ، 3-6) أبلغنا سابقًا أربعة وعشرون أمينوغليكوزيدات فينيل إيثانويد بما في ذلك kankanosides H1 و H2 و I و J1 و J2 و K1 و K2 واثنين من أوليغوسوغار من السيقان الطازجة لـ Cistanchetubulosa.جليكوسيدات فينيلثانويد ،إشنكوسايد ، أكتيوسيد ،و isoacteoside، تم العثور على تثبيط الزيادة في مستويات أسبارتاتي أمينوترانسفيراز (sAST) والألانين أمينوترانسفيراز (sALT) في الكبد المصاب بالفئران الناجم عن D-galactosamine (D-GalN) / عديدات السكاريد الدهنية بجرعات 25-100 مجم / كجم لكل نظام تشغيل ( تم أيضًا توضيح المتطلبات الهيكلية للجليكوسيدات الفينيليثانية للنشاط الوقائي للكبد .5) في هذه الدراسة المستمرة على المكونات في السيقان الطازجة لـ Cistanchetubulosa ، قمنا أيضًا بعزل أحد عشر جليكوسيدات إيريدويد بما في ذلك kankanosides L (1) ، M (2) ، و N (3) ، وسبعة جليكوسيدات monoterpene لا حلقية بما في ذلك kankanosides O (4) و P (5) ، وثلاثة فينيل بروبانويد ، وأربعة قشور. تتناول هذه الورقة عزل وتركيب خمسة مركبات جديدة (1-5).
تم استخلاص السيقان الطازجة من C. tubulosa (المزروعة في Urumuqi ، مقاطعة Xin jiang ، الصين) بالميثانول تحت التدفق الراجع لإنتاج مستخلص ميثانولي (8.36 بالمائة من السيقان الطازجة). من المستخلص الميثانولي ، تم الحصول على الكسور الماصة من H2O و MeOH (5.63 بالمائة و 2.73 بالمائة ، على التوالي) بواسطة كروماتوجرافيا العمود Diaion HP -20 (H2O → MeOH) كما هو موضح سابقًا. تقاطع إلى كروماتوغرافيا عمود SiO2 و ODS و HPLC خامسًا لتزويد kankanosides L (1 ، 0. 0 0 26 بالمائة) ، M (2 ، 0. {{ 27}} 0 0 1 بالمائة) ، N (3 ، 0. 0 0 {{6 0} 7 بالمائة) ، O (4 ، 0. 0 {{9 0} 2 {{1 0 5}} بالمائة) ، و P (5 ، {{118} }. 0 0 0 2 بالمائة)، 6- deoxycatalpol3،7) (6، 0. 197 بالمائة)، bartsioside3،7) (7، 0. 0 583 بالمائة) ، جلوروسايد 3،7) (8 ، 0. 0443 بالمائة) ، كانكانويسايد A3) (9 ، 22.3 مجم ، 0.0010 بالمائة) ، حمض الموسينيوسيدك 3،7) (10، 0.0056٪)، 8- epiloganic acid3،8) (11، 0.0023٪)، 8- epideoxyloganic acid3،7) (12، 0.0004٪)، geniposidic acid3،7) (13، 0.0040 في المائة) ، كانكانوسيد E3) (14 ، 0.0026 بالمائة) ، (2E ، 6Z) -8- ب D-glucopyranosyloxy -2 ، 6- di methyl -2 ، 6- octadienoic acid3،9) (15، 31.0 mg، 0.0014٪)، (2E، 6E) {{95 }} ، 7- ثنائي ميثيل -8- هيدروكسيوكتاديين -1- yl-ObD-glu copyranoside10) (16 ، 0.0082 بالمائة) ، 8- هيدروكسيغيرانيول 8- Ob- D-glucopyranoside11 ) (17 ، 0.0044 بالمائة) ، betulalbuside A12) (18 ، 0.0004 بالمائة) ، coniferin13) (19 ، 0.0002 بالمائة) ، syringin13) (20 ، 0.0015 بالمائة) ، ألدهيد سينابيك 4- ObD-glucopyranoside14) (21 ، 0.0001 بالمائة) ، () -بينوريسينول ObD-glucopyranoside4،8،15) (22 ، 0.0010 بالمائة) ، eucommin A16) (23 ، 0.0002 بالمائة) ، isoeucommin A17) (24 ، 0.0010 بالمائة) ، و () -syringaresinol ObD- غلوكوبيرا نوسيد 4،8،18) (25 ، 0.0044 بالمائة).
Cistanche tubulosaتحسين الوظيفة الجنسية
هياكل Kankanosides L (1) و M (2) و N (3)
تم الحصول على Kankanoside L (1) كمسحوق أبيض مع دوران بصري سلبي ([a] D 26 45.7 في MeOH). أظهر طيف الأشعة تحت الحمراء الخاص به نطاق امتصاص قوي عند 3433 و 1 {{2 0} 80 سم 1 يوحي بوجود جزء من جليكوسيد. أظهر القصف الذري السريع (FAB) -MS من تشغيل واحد في أوضاع الأيونات الموجبة والسالبة قمم أيونات شبه جزيئية عند m / z 371 [M Na] و 347 [MH] ، على التوالي ، وتم تحديد الصيغة الجزيئية على أنها C15H24O9 عن طريق قياس FAB-MS عالي الدقة. التحلل المائي الحمضي لـ 1 مع 1.0 مولار من حمض الهيدروكلوريك (HCl) المحرّر D-glucose ، والذي تم تحديده بواسطة تحليل HPLC باستخدام كاشف الدوران البصري .3-6) أطياف 1 H و 13 C-NMR من 1 (CD3OD ، الجداول 1 ، 2) ، التي تم تعيينها بواسطة تجارب NMR المختلفة ، 19) أظهرت إشارات على أنها قابلة للإشارة إلى أربعة ميثيلينات [d 1.43 (1H ، br dd ، J ca 5 ، 13 هرتز ، 4a-H) ، 1.73 (1H ، br dd ، J حوالي 12 ، 14 هرتز ، 6a-H) ، 1.85 (1H ، m ، 4b-H) ، 1.93 (1H ، br dd ، J=ca. 8 ، 14 هرتز ، 6b-H) ، 3.50 ( 1H ، ddd ، J 2.4 ، 12.5 ، 13.0 هرتز ، 3a-H) ، 3.83 (1H ، br dd ، J=ca. 5 ، 13 هرتز ، 3b-H) ، 3.78 ، 4.12 (ساعة واحدة لكل منهما ، كلاهما d ، J 13.1 هرتز ، 10- H2)] ، اثنان ميثين [d 2.15 (1H ، dd ، J 7.2 ، 8.9 هرتز ، 9- H) و 2.23 (1H ، m ، 5- H)] ، ومجموعة أسيتال [d 4.81 (1H ، d ، J 8.9 Hz ، 1- H)] جنبًا إلى جنب مع جزء b-glucopyranosyl [d 4.70 (d ، J 7.9 Hz ، 1 - ح)]. كما هو مبين في الشكل 1 ، أشارت تجربة التحليل الطيفي للارتباط 1 H - 1H (1 H - 1 H COZY) في 1 إلى وجود هياكل جزئية مكتوبة بخطوط عريضة. في تجربة الارتباط متعدد النوى غير المتجانس (HMBC) على 1 ، لوحظ وجود ارتباطات طويلة المدى بين البروتونات والكربونات التالية (1- H و 3- C ، 8- C ؛ {{ 124}} H و 1- ج ؛ 7- H و 8- ج ، 10- ج ؛ 9- H و 8- ج ؛ {{131} }} H2 و 7- C ، 8- C ؛ 1 -H و 1- C) كما هو موضح في الشكل 1. بعد ذلك ، تميزت البنية المجسمة النسبية لـ 1 بنووية حساسة للطور تجربة التحليل الطيفي لتحسين Overhauser (NOESY الحساسة للطور) ، والتي أظهرت ارتباطات NOE بين أزواج البروتون التالية (1- H و 3a H ؛ 3a-H و 4a-H ؛ 3b-H و 4b-H ؛ 4b-H و 5- H ، 9- H ؛ 5- H و 6b-H ، 9- H ؛ 6a-H و 7- H ؛ 7- H و 10- H2) ، كما هو موضح في الشكل 1. كان أطياف 1 H- و 13 C-NMR من 1 قابلين للتركيب على تلك الخاصة بالمكون القزحي الأساسي 6- deoxycatalpol (6) ، باستثناء الإشارات المستحقة إلى جزء d-lactol المشبع. أخيرًا ، أعطت هدرجة 6 1 ، بحيث تم توضيح البنية المجسمة لـ kankanoside L لتكون 3 ، 4- ثنائي هيدرو -6- deoxycatalpol (1).
تم الحصول على Kankanoside M (2) كمسحوق أبيض مع دوران بصري سلبي ([أ] D 26 18.7 في MeOH). أظهر طيف الأشعة تحت الحمراء 2 نطاقات امتصاص عند 3433 ، و 1736 ، و 1655 ، و 76 سم 1 0 تُعزى إلى شقوق الهيدروكسيل ، ود-لاكتون ، وأولفين ، والإيثر. أظهر طيف الأيونات الموجبة FAB-MS 2 ذروة أيون شبه جزيئية عند m / z 353 [M Na] ، وتم تحديد الصيغة الجزيئية على أنها C15H22O8 عن طريق قياس FAB-MS عالي الدقة للأيونات الموجبة. التحلل المائي الحمضي لـ 2 مع 1.0 مولار من حمض الهيدروكلوريك D- الجلوكوز. أظهر أطياف 1 H- و 13 C NMR من 2 (CD3OD ، الجدولان 1 ، 2) إشارات قابلة للتخصيص لأربعة ميثيلين [d 1.66 ، 2.11 (ساعة واحدة لكل منهما ، كلاهما م ، 4- H2) ، 2.15 ، 2.75 (ساعة واحدة لكل منهما ، كلاهما م ، 6- H2) ، 4.29 (1H ، ddd ، J 2.8 ، 8.4 ، 14.3 هرتز ، 3b-H) ، 4.32 ، 4.51 (ساعة واحدة لكل منهما ، كلاهما d ، J 13.1 هرتز ، 10- H2) ، 4.35 (1H ، ddd ، J 3.1 ، 6.7 ، 14.3 هرتز ، 3a-H)] ، اثنان ميثين [d 2.97 (1H ، m ، 5- H) ، 3.82 (1H ، br s ، {{ 84} H)] ، أوليفين [d 5.94 (1H ، m ، 7- H)] ، ومجموعة لاكتون مشبعة (d C 174.9) جنبًا إلى جنب مع جزء bD-glucopyranosyl [d 4.32 (1H ، d ، J 7.9 هرتز ، 1 -H)]. كما هو مبين في الشكل 1 ، أشارت تجربة 1 H-1H COZY في 2 إلى وجود هياكل جزئية مكتوبة بخطوط غامقة ، وفي تجربة HMBC ، لوحظت ارتباطات طويلة المدى بين أزواج البروتون والكربون التالية ({{105) }} H و 1- ج ؛ 7- H و 9- ج ؛ 9- H و 1- ج ، 8- ج ؛ {{112} } H2 و 7- ج و 8- ج و 9- ج ؛ 1 -H و 10- ج). تميزت البنية المجسمة النسبية لـ 2 بتجربة NOESY الحساسة للطور ، والتي أظهرت ارتباطات NOE بين أزواج البروتون التالية (3a-H و 4a-H ؛ 3b-H و 4b-H ؛ 4b-H و 5- H ؛ 5- H و 6b-H ، 9- H) كما هو موضح في الشكل 1. وبالتالي ، تم توضيح البنية المجسمة لـ 2 كما هو موضح.
تم عزل Kankanoside N (3) كمسحوق أبيض مع دوران بصري سلبي ([أ] D 25 24.6 في MeOH). في الأيونات الموجبة FAB-MS من 3 ، لوحظت ذروة أيون شبه جزيئي عند m / z 371 [M Na]. تم تحديد الصيغة الجزيئية C16H28O8 بواسطة قياس FAB-MS عالي الدقة. التحلل الحمضي لـ 3 مع 1. 0 M HCl حرر الجلوكوز D. أظهرت بيانات 1 H- و 13 C-NMR (CD3OD ، الجدولان 1 ، 2) إشارات يمكن تخصيصها لميثيل [d 1. 0 7 (3H، d، J 7.2 Hz، 10- H3)] ، أربعة ميثيلينات {d 1.37 ، 1.87 (ساعة واحدة لكل منهما ، كلاهما م ، 7- H2) ، 1.65 ، 1.81 (ساعة واحدة لكل منهما ، كلاهما م ، 6- H2) ، [3.65 (1H ، يوم ، J 9.1 ، 9.8 هرتز) ، 3.90 (1H ، يدي ، J 5.9 ، 9.8 هرتز) ، 11- H2] ، و [3.70 (1H ، dd ، J 3.3 ، 12.0 هرتز) ، 3.88 (1H ، m) ، {{ 71}} H2]} ، أربع ميثيل [d 1.69 (1H ، m ، 4- H) ، 1.75 (1H ، m ، 9- H) ، 2.06 (1H ، m ، 8- H) ، 2.16 (1H ، m ، 5- H)] ، ومجموعة hemiacetal [d 4.67 (1H ، d ، J 7.4 Hz ، 1- H)] مع مجموعة bD-glucopyranosyl [ د 4.26 (1H ، d ، J 7.9 هرتز ، 1 -H)]. تم توضيح البنية القزحية لـ 3 بتجارب 1 H-1 H COZY و HMBC وتميزت البنية المجسمة النسبية بتجربة NOESY الحساسة للطور كما هو موضح في الشكل 1. وبالتالي ، تم توضيح البنية المجسمة لـ 3 كما هو موضح.
هياكل Kankanosides O (4) و P (5)
تم الحصول أيضًا على Kankanosides O (4) و P (5) ، C16H26O8 ، كمساحيق بيضاء ذات دوران بصري سالب (4: [أ] D 23 26.1 ؛ 5: [أ] D 21 32.7 في MeOH). أظهرت أطياف الأشعة تحت الحمراء المكونة من 4 و 5 نطاقات امتصاص عند 3433 و 1696 و 1647 و 1 0 76 سم 1 لـ 4 وفي 3434 و 17 0 1 و 1647 و 1 {{96} } 76 سم 1 مقابل 5 ، تُعزى إلى وظائف الجليكوسيد والكربوكسيل والأوليفين. أظهرت أطياف الأشعة فوق البنفسجية الخاصة بهم امتصاصًا شائعًا بحد أقصى عند 217 نانومتر مما يشير إلى وجود جزء حمض الكربوكسيل غير المشبع ب في كلاهما. التحلل المائي الحمضي لـ D-glucose 4 و 5 محررين ، بينما أعطى 4 و 5 (2E ، 6E) -8- هيدروكسي -2 ، 6- ثنائي ميثيل {{39} بواسطة التحلل الأنزيمي مع b glucosidase }} ، {{4 0} octadecenoic acid2 0) (4a) و (2E، 6E) -8- hydroxy -3 ، 7- ثنائي ميثيل {{ 48}} ، 6- octadecenoic acid21) (5a) ، على التوالي. أظهرت بيانات 1 H- و 13 C-NMR لـ 4 (CD3OD ، الجداول 2 ، 3) إشارات قابلة للتخصيص لميثيلين [d 1.71 (3H ، br s ، 10- H3) ، 1.81 (3H ، d ، J 1.0 هرتز ، 9- H3)]، ثلاثة ميثيلينات {d 2.19 (2H، br t، J ca. 7 Hz، 5- H2)، 2.36 (2H، m، 4- H2)، [ 4.24 (1H ، dd ، J 7.6 ، 12.0 هرتز) ، 4.33 (1H ، dd ، J 6.2 ، 12.0 هرتز) ، 8- H2]} ، واثنين من الأوليفينات ثلاثية الاستبدال [d 5.41 (1H ، ddd ، J 1.2 ، 6.2 ، 7.6 هرتز ، 7- ارتفاع) ، 6.75 (1H ، tq ، J 7.2 ، 1.0 هرتز ، 3- H)] مع جزء جلوكوبيرانوزيل bD [d 4.34 (d ، J 7.8 Hz ، 1 -H)]. من خلال مقارنة إشارات الكربون في طيف 13C-NMR لـ 4 مع تلك الخاصة بـ 4a ، لوحظ تحول في الارتباط بالجليكوزيل في الموضع 8- (d C 4: 65.5 ؛ 4a: 59.4). تم تأكيد موضع ارتباط الجلوكوزيد أيضًا من خلال تجارب HMBC كما هو موضح في الشكل 2. وبالتالي ، تم توضيح البنية المجسمة لـ 4 لتكون (2E ، 6E) -8- bD-glucopyranosyloxy -2 ، {{ 143}} ثنائي ميثيل -2 ، 6- حمض octadecenoic. من ناحية أخرى ، أشارت بيانات 1 H- و 13 C-NMR لـ 5 (CD3OD ، الجداول 2 ، 3) إلى وجود (2E ، 6E) -8- هيدروكسي -3 ، {{158} } dimethyl -2، 6- octadecenoic acid moiety [d 1.70 (3H، br s، 10- H3)، 2.14 (3H، br s، 9- H3)، 2.24 ( 2H ، m ، 4- H2) ، 2.27 (2H ، m ، 5- H2) ، 4.05 ، 4.20 (1H لكل منهما ، كلاهما br d ، J ca. 12 هرتز ، 8- H2) ، 5.47 (1H، tq، J 7.1، 0.9 Hz، 6- H)، 5.67 (1H، br s، 1- H)] مع جزء bD-glucopyranosyl [d 4.23 (d، J 7.7 هرتز ، 1 -H)]. تم توضيح اتصال جزء bD-glucopyranosyl في 5 على أساس تجارب HMBC كما هو موضح في الشكل 2. علاوة على ذلك ، لوحظ تحول نموذجي للارتباط بالجليكوزيل للإشارات عند موضع 8- (d C 5: 75.6 ؛ 5 أ: 68.8). بناءً على الأدلة المذكورة أعلاه ، تم تحديد البنية المجسمة لـ 5 لتكون (2E ، 6E) -8- bD-glucopyranosyloxy -3 ، 7- ثنائي ميثيل -2 ، { {230}} حمض ثنائي الأوكتا.
تأثير المكونات على نخر الورم الناجم عن عامل النخر- أ (TNF-a) في السمية الخلوية في خلايا L929
من المعروف أن TNF-a تتوسط في العديد من إصابات الأعضاء من خلال تحريضها لموت الخلايا المبرمج. في حالة الكبد ، فإن التأثيرات البيولوجية لعامل نخر الورم-أ متورطة في إصابة الكبد الناجمة عن السموم الكبدية ، ونقص التروية / ضخه ، والتهاب الكبد الفيروسي ، والكحول. الهدف لاكتشاف العوامل المضادة للالتهابات والعوامل الواقية من الكبد. على أساس المفهوم المذكور أعلاه ، قمنا بفحص المكونات الواقية من المنتجات التي تحدث بشكل طبيعي على موت الخلايا المستحث بـ TNF-a في خلايا L929 ، وهو خط خلية حساس لـ TNF .25) سابقًا ، لقد أبلغنا عن العديد من المكونات من Piper Chaba ، 26-29) Boesenbergia rotunda ، 3 0 ، 31) Punica granatum ، 32) Helichrysum arenarium ، 33-35) و Sapindus rarak ، 36-38) تم العثور عليها لتظهر في تأثيرات hibitory لـ TNF-a - السمية الخلوية المستحثة في خلايا L929. نظرًا لأن المكونات الفينيليثانويدية لـ C. tubulosa (على سبيل المثال إشيناكوسيد ، أكتيوسيد ، أيزوكتيوسيد ، إلخ.) 5) تم تثبيطها أيضًا هذه السمية الخلوية ، قمنا أيضًا بفحص مكونات إيريدويد ، فينيل بروبانويد ، وليجنان كما هو موضح في الجدول 4. ونتيجة لذلك ، كانكانوزيد أ (9 ، تثبيط: 16.3 2. 0 بالمائة عند 100 ملي مولار) ، حمض الموسينيوسيدك (10 ، 44.7 8.7 بالمائة) ، 8- حمض الإيبيلوجانيك (11 ، 10.7 0.4 بالمائة) ، 8- هيدروكسيغيرانيول 8- تم العثور على ObD-glucopyranoside (17، 21.3 2.4٪) و () -pinoresinol ObD-glucopyranoside (22، 22.3 1.6٪) لإظهار نشاط مهم. على الرغم من أن أنشطتها كانت أضعف من أنشطة إشنكوسايد (IC50 31.1 مم) ، أكتيوسيد (17.8 مم) ، و isoaceteoside (22.7 مم) ، فإن مكونات الفينيثانويد الرئيسية تكوينات.
تجريبي
تم استخدام الأدوات التالية للحصول على البيانات الطيفية والفيزيائية: دورات محددة ، Horiba SEPA -300 مقياس الاستقطاب الرقمي (l 5 cm) ؛ أطياف الأشعة فوق البنفسجية ، مطياف شيمادزو للأشعة فوق البنفسجية -1600 ؛ أطياف الأشعة تحت الحمراء ، مطياف شيمادزو FTIR -8100 ؛ 1 أطياف H- و 13 C-NMR ، JEOL JNM-ECA600 (600 ، 150 ميجاهرتز) و JEOL JNM-ECS400 (400 ، 100 هرتز) مع رابع ميثيل سيلان كمعيار داخلي ؛ FAB-MS و FAB-MS عالي الدقة ، مطياف الكتلة JEOL JMS-SX 102A ؛ كاشف HPLC ، Shimadzu RID -10 مؤشر انكسار ، كاشف Shimadzu SPD -10 A UV-VIS ، وكاشف Shodex OR -2 للدوران البصري. تم استخدام عمود HPLC ، Cosmosil 5C 18- MS-II ، و pNAP (Nacalai Tesque Inc. ، 250 4.6 مم id) و (250 20 مم id) للأغراض التحليلية والتحضيرية ، على التوالي.
تم استخدام الظروف التجريبية التالية للكروماتوغرافيا: الفصل اللوني لعمود هلام السيليكا في الطور الطبيعي (CC) ، هلام السيليكا 6 0 N (Kanto Chemical Co.، Ltd.، 63–21 0 شبكة ، كروية ، محايد)؛ هلام السيليكا ذو الطور العكسي CC و Diaion HP -20 (Nippon Rensui) و Chromatorex ODS DM1 0 20T (Fuji Silysia Chemical، Ltd.، 100-200 شبكة) ؛ الطور الطبيعي TLC ، ألواح TLC المطلية مسبقًا مع هلام السيليكا 60F254 (Merck ، 0.25 مم) ؛ TLC ذو المرحلة العكسية ، ألواح TLC المطلية مسبقًا بهلام السيليكا RP -18 F254S (Merck ، 0.25 مم) ؛ HPTLC ذو المرحلة العكسية ، ألواح TLC المطلية مسبقًا مع هلام السيليكا RP -18 WF254S (Merck ، 0.25 مم) ، تم تحقيق الاكتشاف عن طريق الرش بنسبة 1 بالمائة Ce (SO4) 2-10 بالمائة H2SO4 مائي ، متبوعًا بالتسخين .
المواد النباتية
تم وصف هذا العنصر في تقرير سابق.
الاستخراج والعزلة
تم قطع السيقان الطازجة لنبات C. tubulosa (2.98 كجم) بدقة واستخلاصها ثلاث مرات بالميثانول تحت التكثيف الراجع لمدة 3 ساعات. يوفر تبخير المذيب تحت ضغط منخفض مستخلص ميثانولي (249.1 جم ، 8.36 بالمائة). تم تعريض المستخلص الميثانولي لـ Diaion HP -20 CC (5. 0 kg ، H2O → MeOH) لإعطاء كسور H2O- و MeOH (167.84 جم ، 5.63 بالمائة و 81.21 جم ، 2.73 بالمائة ، على التوالى). تعرضت مادة MeOH-eluted frac (61. 00 جم) إلى هلام السيليكا ذي الطور الطبيعي CC [1.8 كجم ، CHCl3- MeOH – H2O (15: 3: 0. 4 → 1 {{{{{{}}}. 36}}: 3: 0. 5 → 6: 4: 1، v / v / v) → MeOH] لإعطاء سبعة كسور [الأب. 1 (1.12 جم) ، 2 (9.56 جم) ، 3 (0. 89 جم) ، 4 (1 0. 69 جم) ، 5 (8.84 جم) ، 6 (12.52 جم) ، و 7 (4.6 {{1 0 4}} جم)] ، كما تم وصفه سابقًا. 5) تم فصل الكسر 1 (1.12 جم) بواسطة هلام السيليكا عكسي الطور CC [55 جم ، MeOH – H2O (4 0: 6 0، v / v) → MeOH] لإعطاء الكسور الخامسة [الأب. 1-1 (132.8 مجم) ، 1-2 (267. 0 مجم) ، 1-3 (182.8 مجم) ، {{8 0} (31 {{ 156}}. 9 مجم) و 1-5 (91.4 مجم)]. تمت تنقية الجزء 1-1 (132.8 مجم) بشكل إضافي بواسطة HPLC [Cosmosil 5C {{9 {{16 0}}} MS-II، CH3CN - 1٪ AcOH مائي (1 {{166} }: 9 0 ، v / v)] لإعطاء kankanoside M (2 ، 2.8 مجم ، 0. {{2 0 3}} {{22 {{24 {248) }}}}}} 0 1 بالمائة) ، bartsioside (7 ، 5.2 مجم ، 0. 00 0 2 بالمائة) ، ألدهيد سينابيك {{1 {{295) }} 6}} O- bD-glucopyranoside (21 ، 1.4 مجم ، {{3 {3 {3 {{31 0} 9}} 5}} {{32 {326}}} }}}. 0 0 0 1 بالمائة). تمت تنقية الكسر 1-2 (267. {{35 0} مجم) بواسطة HPLC [Cosmosil 5C 18- MS-II، CH3CN – 1٪ AcOH المائي (7: 93 ، v / v)] لإعطاء (2E، 6E) -3 ، 7- ثنائي ميثيل -8- hydroxyoctadien {{13 {{36 0}}} yl-O- bD -جلوكوبيرانوسيد (16 ، 15.8 مجم ، {{37 0}. {{4 {411}} 6}} 0 0 7 بالمائة) ، 8- هيدروكسيغيرانيول 8- ObD glucopyranoside (17 ، 5.2 مجم ، 0.0002 بالمائة) ، () -بينوريسينول ObD-glucopyra noside (22 ، 22.0 مجم ، 0.0010 بالمائة) ، eucommin A (23 ، 5.0 مجم ، 0.0002 بالمائة) ، isoeu commin A (24 ، 21.3 مجم ، 0.0010 بالمائة) ، و () سيرينجاريسينول ObD-glucopy ranoside (25 ، 98.0 مجم ، 0.0044 بالمائة). تم فصل الكسر 2 (9.56 جم) بواسطة هلام السيليكا ذو الطور المعكوس CC [400 جم ، MeOH – H2O (10: 90 ، حجم / حجم) → MeOH → أسيتون] لإعطاء الكسور الخامسة [الأب. 2-1 (55.9 مجم) و 2-2 (4.48 جم) و 2-3 (3.42 جم) و 2-4 (1.16 جم) و 2-5 (31.9 مجم) ] ، كما هو موضح سابقًا. )] لإعطاء kankanoside L (1 ، 6.6 مجم ، 0.0026 بالمائة) و 6- deoxycatalpol (6 ، 455.5 مجم ، 0.182 بالمائة). تم تقسيم الكسر 2-3 (1.00 جم) إلى HPLC [Cosmosil 5C 18- MS-II، CH3CN – 1٪ AcOH (7: 93، v / v)] لإعطاء سبعة كسور [Fr . 2-3-1 (66.5 مجم) ، 2-3-2 (20.4 مجم) ، 2-3-3 (26.0 مجم) ، 2-3-4 (136.6 مجم) ، 2-3-5 [7 (380.6 مجم) ، 0.0581 بالمائة)] ، 2-3-6 [جلوروسايد (8 ، 285.1 مجم ، 0.0435 بالمائة)] ، 2-3-7 (84.9 مجم)]. تمت تنقية الكسر 2-3-4 (106.6 مجم) بشكل إضافي بواسطة HPLC [Cosmosil pNAP، CH3CN – 1٪ AcOH (5: 95، v / v)] لإعطاء 6 (68.4 مجم ، 0.0134 بالمائة) مع salidroside5) (13.7 مجم ، 0.0027 بالمائة). تعرض الكسر 2-4 (1.16 جم) لـ HPLC [Cosmosil 5C 18- MS-II ، CH3CN – 1 بالمائة AcOH مائي (15: 85 ، حجم / حجم) و Cosmosil pNAP ، CH3CN - 1 بالمائة أكوه مائي (10: 90 أو 15: 85 ، حجم / حجم)] لإعطاء كانكانوسيدات N (3 ، 15.6 مجم ، 0.0007 بالمائة) ، O (4 ، 44.1 مجم ، 0.0020 بالمائة) ، P (5 ، 4.2 مجم ، 0.0002 في المائة) ، 6 (24.0 مجم ، 0.0011 بالمائة) ، 8 (17.7 مجم ، 0.0008 بالمائة) ، كانكانويزيد أ (9 ، 22.3 مجم ، 0.0010 بالمائة) ، 8- حمض الإيبيدوكسيلوجنيك (12 ، 8.1 مجم ، 0.0004 بالمائة) ، kankanoside E (14 ، 58.1 مجم ، 0.0026 بالمائة) ، (2E ، 6Z) -8- bD-glucopy ranosyloxy -2 ، 6- dimethyl -2 ، 6- octadienoic حمض (15 ، 31.0 مجم ، 0.0014 بالمائة) ، 16 (168.6 مجم ، 0.0075 بالمائة) ، 17 (94.3 مجم ، 0.0042 بالمائة) ، betulalbuside A (18 ، 8.1 مجم ، 0.0004 بالمائة) ، coniferin (19 ، 3.8 مجم ، 0.0002 بالمائة ) و syringin (20 ، 33.9 مجم ، 0.0015 بالمائة). تم فصل الكسر 4 (10.69 جم) بواسطة هلام السيليكا ذي الطور المعكوس CC [500 جم ، MeOH – H2O (30: 70 ، حجم / حجم) → MeOH → أسيتون] لإعطاء أربعة كسور [Fr. 4-1 (878.2 مجم) ، 4-2 (7.06 جم) ، 4-3 (1.57 جم) ، 4-4 (792.8 مجم)] ، كما تم وصفه سابقًا. تمت تنقية الكسر 4-1 (500.0 مجم) بواسطة HPLC [Cosmosil 5C 18- MS-II ، CH3CN – 1 بالمائة AcOH مائي (10: 90 ، حجم / حجم)] لإعطاء حمض الموسينيوسيدك (10 ، 39.1 mg، 0.0031٪) وحمض geniposidic (13، 51.2 mg، 0.0040٪). تم فصل الكسر 5 (8.84 جم) بواسطة هلام السيليكا ذو الطور المعكوس CC [400 جم ، MeOH – H2O (20: 80 → 30: 70 ، حجم / حجم) → MeOH → أسيتون] لإعطاء سبعة كسور [Fr. 5-1 (870.2 مجم) ، 5-2 (478.9 مجم) ، 5-3 (3.72 جم) ، 5-4 (979.9 مجم) ، 5-5 (1.19 جم) ، 5-6 (1.27 جم) و 5-7 (130.1 مجم)] ، كما تم وصفه سابقًا. 5) تمت تنقية الكسر 5-1 (870.2 مجم) بواسطة HPLC [Cosmosil pNAP، CH3CN -1 بالمائة AcOH مائي (5: 95 ، حجم / حجم)] لإعطاء 10 (55.3 مجم ، 0.0025 بالمائة) و 8- حمض ابيلوجانيك (11 ، 51.5 مجم ، 0.0023 بالمائة).
Kankanoside L (1): مسحوق أبيض ، [أ] D 26 45.7 (ج 0. 48 ، MeOH). أيون موجب عالي الدقة FAB-MS: Calcd لـ C15H24O9Na [M Na] 371.1318 ؛ تم العثور عليها في 371.1309. IR (KBr، cm 1): 3433، 2928، 1080. 1 H-NMR (600 MHz، CD3OD) d: مذكور في الجدول 1. 13C-NMR (150 MHz، CD3OD) d C: يرد في الجدول 2. موجب- أيون FAB-MS m / z: 371 [M Na]. الأيونات السالبة FAB-MS m / z: 347 [MH].
Kankanoside M (2): مسحوق أبيض ، [أ] D 26 18.7 (ج 0. 11 ، MeOH). أيون موجب عالي الدقة FAB-MS: Calcd لـ C15H22O8Na [M Na] 353.1212 ؛ تم العثور عليها في 353.1208. IR (KBr، cm 1): 3433، 2924، 1736، 1655، 1076. 1 H-NMR (600 MHz، CD3OD) d: الوارد في الجدول 1. 13C-NMR (150 MHz، CD3OD) d C: الواردة في الجدول 2. أيون موجب FAB-MS m / z: 353 [M Na].
Kankanoside N (3): مسحوق أبيض ، [أ] D 25 24.6 (ج 1. 00 ، MeOH). أيون موجب عالي الدقة FAB-MS: Calcd لـ C16H28O8Na [M Na] 371.1682 ؛ تم العثور عليها 371.1686. IR (KBr، cm 1): 3415، 2874، 1076، 1028. 1 H- NMR (600 MHz، CD3OD) d: مُعطى في الجدول 1. 13C-NMR (150 MHz، CD3OD) d C: الواردة في الجدول 2. أيون موجب FAB-MS m / z: 371 [M Na].
Kankanoside O (4): مسحوق أبيض ، [أ] D 23 26.1 (c 2.30 ، MeOH). أيون موجب عالي الدقة FAB-MS: Calcd لـ C16H26O8Na [M Na] 369.1525 ؛ تم العثور على 369.1528. الأشعة فوق البنفسجية [l max (log e)، MeOH، nm]: 217 (4.04). IR (KBr، cm 1): 3433، 2926، 1696، 1647، 1076. 1 H-NMR (600 MHz، CD3OD) d: الوارد في الجدول 3. 13C-NMR (150 MHz، CD3OD) d C: الواردة في الجدول 2. Pos itive-ion FAB-MS m / z: 369 [M Na].
Kankanoside P (5): مسحوق أبيض ، [أ] D 21 32.7 (ج 0. 18 ، MeOH). أيون موجب عالي الدقة FAB-MS: Calcd لـ C16H26O8Na [M Na] 369.1525 ؛ تم العثور عليها 369.1520. الأشعة فوق البنفسجية [l max (log e)، MeOH، nm]: 217 (4.08). IR (KBr، cm 1): 3434، 2926، 1701، 1647، 1076. 1 H-NMR (600 MHz، CD3OD) d: الوارد في الجدول 3. 13C-NMR (150 MHz، CD3OD) d C: الواردة في الجدول 2. Pos itive-ion FAB-MS m / z: 369 [M Na].
التحلل الحمضي لـ Kankanosides L-P (1-5): المحاليل من 1-5 (كل 1. 0 مجم) في 1. 0 M HCl (1. 0 مل) كانت يسخن عند 8 0 درجة لمدة 3 ساعات. بعد التبريد ، تمت معادلة خليط التفاعل باستخدام Amberlite IRA -400 (شكل OH) ، وتمت إزالة الراتنجات بالترشيح. بعد إزالة المذيب تحت ضغط منخفض ، تم فصل البقايا بواسطة عمود خرطوشة Sep-Pak C18 (H2O → MeOH). تعرض جزء H2O-eluted لتحليل HPLC في ظل الظروف التالية: عمود HPLC ، Kaseisorb LC NH 2-60-5 ، 4.6 ملم معرف 250 ملم (Tokyo Kasei Co.، Ltd. ، طوكيو ، اليابان) ؛ الكشف ، الدوران البصري ، [Shodex OR -2 (Showa Denko Co.، Ltd. ، طوكيو ، اليابان) ؛ المرحلة المتنقلة ، CH3CN - H2O (85: 15 ، ت / ت) ؛ معدل زميل 0.8 مل / دقيقة]. تم إجراء تحديد D- الجلوكوز الموجود في الكسور المستخرجة H2O من 1-5 من خلال مقارنة أوقات الاحتفاظ بها والدوران البصري مع عينة أصلية [tR 17.9 دقيقة (إيجابي)].
هدرجة {{0}} Deoxycatalpol (6) تعليق 6 (12. 0 مجم) و 1 0 بالمائة من كربون البلاديوم (5. 0 مجم) في تم تقليب MeOH (2.0 مل) عند درجة حرارة الغرفة تحت جو H2 لمدة ساعتين. تم ترشيح المحفز ، وتم تكثيف المادة المرشحة تحت ضغط منخفض لإعطاء 1 (12.0 مجم ، كمية).
التحلل المائي الأنزيمي لـ Kankanosides O (4) و P (5) مع b-Glucosidase إلى محلول 4 (8. 0 مجم) في H2O (1.5 مل) تمت إضافة ب-جلوكوزيداز (4.7 مجم ، من اللوز ، شركة الخميرة الشرقية ، طوكيو ، اليابان) ، وتم تقليب المحلول عند 37 درجة لمدة 24 ساعة. يخمد التفاعل بإضافة EtOH (5. {{15} مل) ، يكثف الخليط تحت ضغط مخفض. تم استخلاص المادة المتبقية باستخدام EtOAc وتبخر المذيب الناتج عن (2E ، 6E) -8- هيدروكسي -2 ، {{2 0} ثنائي ميثيل -2 ، {{22} } حمض الأوكتاديسينويك 20) (4 أ ، 3.9 مجم ، 92 في المائة). من خلال إجراء مشابه ، (2E، 6E) -8- هيدروكسي -3 ، 7- ثنائي ميثيل -2 ، 6- octadecenoic acid21) (5a، 0.9 mg، 94 بالمائة ) من kankanoside P (5 ، 1.8 مجم).
تم تقييم التأثير المثبط لطريقة المقايسة الحيوية على السمية الخلوية المستحثة بـ TNF-a في خلايا L929 بالطريقة الموضحة في ورقة سابقة. 5)
يتم التعبير عن القيم الإحصائية كوسائل التحليل الإحصائي للتباين أحادي الاتجاه (ANOVA) متبوعًا باختبار Dunnett الذي تم استخدامه للتحليل الإحصائي. قيم الاحتمالية (p) أقل من 0. 05 اعتبرت هامة.
عشب cistanche
