arلغة
الصفحة الرئيسية / معرفة / المحتوى

معرفة

يؤدي فقدان JAK1 إلى نقص المناعة الفطري

Nov 13, 2023

يعد مسار إشارات يانوس كيناز - محولات إشارة ومنشطات النسخ (JAK-STAT) أمرًا بالغ الأهمية في ضبط الاستجابات المناعية ويرتبط خلل تنظيمها ارتباطًا وثيقًا بالسرطان والاضطرابات المناعية. يؤدي تعطيل مسار إشارات إنترلوكين (IL)-15/STAT5 بسبب فقدان سلاسل مستقبلات IL-15، JAK3 أو STAT5 إلى نقص المناعة مع تشوهات الخلايا القاتلة الطبيعية (NK). ينقل JAK1، مع JAK3 الإشارات في اتجاه مجرى النهر IL-15، لكن المساهمة الدقيقة لـ JAK1 في بيولوجيا الخلايا NK لا تزال بحاجة إلى توضيح. لدراسة عواقب نقص JAK1 في خلايا NK، أنشأنا فئران مع الحذف المشروط لـ JAK1 في خلايا NKp46+ (Jak1fl/flNcr1Cre). نظهر هنا أن حذف JAK1 للخلايا القاتلة الطبيعية (NK) يقلل بشكل كبير من أعداد الخلايا القاتلة الطبيعية (NK) في النخاع العظمي ويضعف نموها. في الخط، لاحظنا تقريبًا فقدانًا كاملاً للخلايا القاتلة الطبيعية في الطحال والدم والكبد، مما يثبت الدور الحاسم لـ JAK1 في الخلايا القاتلة الطبيعية المحيطية. في الخط، أظهرت الفئران Jak1fl/+Ncr1Cre ضعفًا ملحوظًا في مراقبة الورم بوساطة خلايا NK. تشير بياناتنا إلى أن JAK2 غير قادر على تعويض فقدان JAK1 في خلايا NK. الأهم من ذلك أن الحذف المشروط لـ JAK2 في خلايا NKp 46+ لم يكن له أي تأثير على خلايا NK الطرفية مما يكشف أن JAK2 الجوهري لخلايا NK يمكن الاستغناء عنه لبقاء خلايا NK. باختصار، حددنا أن فقدان JAK1 في الخلايا القاتلة الطبيعية يؤدي إلى نقص المناعة الفطري، في حين أن نقص JAK2 يترك أعداد الخلايا القاتلة الطبيعية ونضوجها دون تغيير. وبالتالي نقترح أنه على عكس مثبطات JAK1/JAK2 المستخدمة حاليًا، فإن استخدام مثبطات JAK 2- المحددة سيكون مفيدًا للمرضى من خلال ترك خلايا NK سليمة.

الكلمات المفتاحية: JAK-STAT، الخلايا القاتلة الطبيعية، JAK1، JAK2، مراقبة الأورام

effects of cistance-antitumor

فوائد cistanche tubulosa-Antitumor

مقدمة

الخلايا القاتلة الطبيعية (NK) هي خلايا ليمفاوية فطرية تتعرف على الخلايا المصابة بالفيروس أو المتحولة وتقتلها (1). يعد نقص الخلايا القاتلة الطبيعية (NK) نوعًا فرعيًا نادرًا ولكنه يحظى بتقدير متزايد من نقص المناعة الأولية (PID). يتميز نقص الخلايا القاتلة الطبيعية الكلاسيكية بغياب الخلايا القاتلة الطبيعية في الدم المحيطي ويؤدي إلى زيادة القابلية للإصابة بالعدوى الفيروسية (2). يعمل محول الإشارات يانوس كيناز (JAK) ومنشط مسار إشارات النسخ (STAT) في اتجاه مجرى السيتوكينات المتعددة وعوامل النمو والهرمونات وبالتالي ينظم الاستجابات المناعية بشكل حاسم (3، 4). عند ربط رابطة معينة بمستقبلها المشابه، تؤدي التغييرات التوافقية إلى احتكار قليل للمستقبل وتفعيل JAKs المرتبطة بالمستقبل. تعمل JAKs على فسفرة بعضها البعض تلقائيًا وعبر سلاسل مستقبلات الفسفوريلات، مما يوفر مواقع الالتحام لجزيئات STAT. تخضع STATs بعد ذلك لعملية الفسفرة بوساطة JAK، وتتضاءل، وتنتقل إلى النواة، حيث تنظم نسخ الجينات المستهدفة (5). يعد JAK3 و STAT5 من اللاعبين الأساسيين في نقل الإشارة في اتجاه مجرى السيتوكينات التي تستخدم المستقبل c (6). تؤدي طفرات "فقدان الوظيفة" (LOF) في الجينات التي تشفر JAK3 (7) أو STAT5B (8) إلى PIDs مع وجود خلل في الخلايا القاتلة الطبيعية مما يؤكد أهمية مسار الخلايا الليمفاوية الفطرية. تم تفسير نقص المناعة لدى هؤلاء المرضى من خلال استجابات IL-7 و IL-15 الضعيفة (6). الأهم من ذلك أن JAK1 له دور مهيمن على JAK3 في تنشيط STAT5 في اتجاه مجرى مستقبلات السيتوكينات المحتوية على c (9). من المثير التكهن بأن طفرات LOF في JAK1 يمكن أن تؤدي أيضًا إلى PID. حتى الآن، تم التعرف على مريض واحد فقط يحمل طفرات في السلالة الجرثومية JAK1، حيث تم تقليل JAK1 ولكن لم يكن غائبًا، وتم تقديمه بالفعل مع كبت المناعة (10). في الفئران، يؤدي الفقدان الكامل لـ JAK1 إلى الوفاة في الفترة المحيطة بالولادة وتظهر الفئران حديثي الولادة انخفاضًا قويًا في الخلايا الثيموسية والخلايا البائية (11). تم تأكيد هذه الملاحظات في الفئران البالغة: يؤدي الحذف المحفز لـ JAK1 إلى إضعاف توازن الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSCs) ويقلل بشكل ملحوظ من ترددات الخلايا البائية والمجموعة الفرعية B220+CD11c+NK1.1+ من خلايا NK (12). ومع ذلك، حتى الآن، لم تقم أي دراسة بتحليل تأثير فقدان JAK1 بشكل مباشر على خلايا NK التقليدية.

Total glycosides of Cistanche deserticola

Cistanche deserticola أماه-المحافظة على الكبد

إن الأفكار الأولى حول مساهمة JAK1 في بيولوجيا الخلايا NK مستمدة من الدراسات التي تستخدم مثبطات JAK - الأدوية المعتمدة لعلاج السرطان وأمراض المناعة الذاتية (13). أظهر كل من الفئران والمرضى الذين عولجوا بمثبط JAK1/JAK2 Ruxolitinib انخفاضًا في أعداد خلايا NK، وضعف النضج، والوظيفة (14، 15). نظرًا لأن JAK2 متورط أيضًا في دفع تمايز خلايا NK (14 ، 16) ، فلا يزال يتعين توضيح أي من الكينازين هو المسؤول عن التأثيرات الملحوظة لعلاج Ruxolitinib. باستخدام الفئران مع خروج Jak1 أو Jak2 في خلايا NKp46+، نظهر هنا أن JAK2 يمكن الاستغناء عنه لبقاء الخلايا NK. في المقابل، يؤدي حذف JAK1 في خلايا NK الناضجة إلى نقص الخلايا NK، ويكون فقدان أليل واحد من Jak1 كافيًا لإضعاف التحكم في نمو الورم. وهكذا، حددنا JAK1 كعامل رئيسي لخلايا NK الناضجة وقمنا بإنشاء نموذج فأر لنقص خلايا NK الكلاسيكية.

المواد والأساليب

الفئران وخطوط الخلايا

Jak1fl/fl (C57BL/6N-Jak1tm1c(EUCOMM)Hmgu/H؛ تم تقديمها من قبل الدكتور ألكسندر دونال (CCRI، فيينا، النمسا). تم إنشاء أليل Jak1tm1c للطفرة من الفئران مع أليل خروج المغلوب Jak1tm1a الأول (الموصوف بواسطة الاتحاد الدولي للتنميط الظاهري للماوس https://www.mousephenotype.org) عن طريق استئصال شريط lacZ-neo عبر إعادة التركيب Flp.

تم تنشيط الإمكانات الشرطية لفئران Jak1fl / fl عن طريق إعادة تركيب Cre واستئصال exon 3 المحاط بـ loxP من Jak1. تم إحداث إعادة التركيب الخاصة بالأنسجة عن طريق التهجين لـ Jak1fl/fl أو Jak2fl/fl [Jak2tm1Kuw; (17)] مع B6NTg(Ncr1Cre); (18) فأراً. تم وصف الفئران Stat5fl/fl (19) وStat5fl/flNcr1Cre (18) من قبل. كانت الفئران Jak1fl/fl و Ncr1Cre و Stat5fl/fl و Stat5fl/flNcr1Cre على خلفية C57B6/N وكانت Jak2fl/fl على خلفية مختلطة. كانت حيوانات التجارب مطابقة للعمر (من 8 إلى 12 أسبوعًا) وتم الحفاظ عليها في ظل ظروف محددة خالية من مسببات الأمراض في جامعة الطب البيطري في فيينا وفقًا لإرشادات اتحاد جمعيات علوم الحيوان المخبرية (FELASA) (2014). تمت الموافقة على التجارب على الحيوانات من قبل لجنة الأخلاقيات ورعاية الحيوان التابعة لجامعة الطب البيطري في فيينا والسلطة الوطنية (وزارة العلوم والبحوث الفيدرالية النمساوية) وفقًا للمادة 26 وما يليها. قانون التجارب على الحيوانات، Tierver suchsgesetz 2012 — TVG 2012، بموجب التراخيص BMWF-68.205/0218-II/3b/2012 وBMBWF-68.205/0174-V/3b /2018 وتم إجراؤها وفقًا لإرشادات FELASA وARRIVE. في جميع أنحاء الورقة، يشير Jak1WT إلى البيانات المجمعة من الفئران Jak1fl/+ وJak1fl/fl. خطوط خلايا سرطان الغدد الليمفاوية الفأرية RMA-Rae1 [يرجى تقديمها من قبل البروفيسور أ. سيروينكا؛ (20)] وYAC -1 تم استزراعها في وسط RPMI1640 (Sigma) الكامل الذي يحتوي على 10٪ FCS (Bio & Sell)، و100 U/mL بنسلين، و100 مجم/مل ستربتومايسين (Sigma)، و50 ميكرومتر {{58 }}مركابتوإيثانول (سيجما).

Desert ginseng—Improve immunity (9)

cistanche tubulosa-تحسين الجهاز المناعي

في الجسم الحي نموذج الورم

تم حقن الفئران Jak1fl/+ وJak1fl/+Ncr1Cre بـ 106 خلايا RMA-Rae1 في كلا الجانبين وتم رصد نمو الورم كل يومين. تم التضحية بالفئران بعد عشرة أيام من الحقن وتم تحديد وزن الورم. لتحليل التدفق الخلوي لخلايا NK المتسللة للورم، تم تقطيع الأورام إلى قطع ∼ 5 مم، وتم الحصول على تعليق الخلية المفردة باستخدام GentleMACSTM Octo Dissociator (Miltenyi Biotec) مع مخزن مؤقت للهضم يحتوي على Collagenase D (1 مجم / مل؛ سيجما ألدريش) ودناز أنا (20 ملغ/مل؛ روش).

عزل خلايا NK وتوسيعها وتحفيزها

تم عزل خلايا NK من معلقات الطحال أحادية الخلية باستخدام خرز MACS المسمى DX 5- وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة (Miltenyi Biotec). تم توسيع خلايا NK في وسط RPMI1640 الكامل المكمل بـ 5،000 U/mL rhIL-2 (Proleukin، Novartis) لمدة 7 أيام. تم تقييم عدد خلايا CD3−NK1.1+ عن طريق قياس التدفق الخلوي في الأيام 0 و3 و5 و7. في اليوم السابع تم إخضاع الخلايا لتحليل اللطخة الغربية. لتحليل pSTAT5، تم تحفيز 106 خلية طحال باستخدام 50 نانوغرام/مل rmIL-15 (PeproTech) لمدة 15 دقيقة وتم تثبيت الخلايا في 2% PFA متبوعة بنفاذية الميثانول والإماهة.

فحص السمية الخلوية لخلايا NK

بالنسبة لفحوصات السمية الخلوية في المختبر، تم توسيع خلايا NK المصنفة بواسطة DX 5-MACS لمدة 7 أيام في IL-2 كما هو موضح أعلاه وتم خلطها عند المستجيب المشار إليه: النسب المستهدفة مع كربوكسي فلوريسئين ثنائي أسيتات إستر سوسينيميديل (CFSE، مجسات جزيئية) ، مجموعة تكاثر الخلايا CellTrace CFSE) المسمى الخلايا المستهدفة. بعد 4 ساعات من الحضانة عند 37 درجة مئوية، تم تلوين الخلايا باستخدام Sytox Blue Dead Cell Stain (Thermo Fischer)، وتم تقييم تحلل الخلية المستهدفة المحددة بواسطة قياس التدفق الخلوي.

التدفق الخلوي

تم تحضير معلقات وحيدة الخلية من الطحال أو نخاع العظم أو الكبد. تمت ترطيب الكبد عبر الوريد البابي باستخدام 5-1 0 مل من PBS المعقم. تم إجراء فصل الخلايا الليمفاوية باستخدام 37.5% من الخلايا الليمفاوية الشخصية (GE Healthcare). لتحليل الدم، تم إفساد كريات الدم الحمراء باستخدام BD FACS Lysing Solution وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة (BD Bioscience). تم شراء الأجسام المضادة (المستنسخات) التي تستهدف البروتينات التالية من eBioscience: CD3 (17A2)، CD3e (145-2C11)، CD11b (M1/70)، CD16/CD32 (93)، CD19 (eBio1D3) CD27 (LG. 7F9)، CD49b (DX5)، CD122 (5H4)، CD226 (10E5)، Gr -1 (RB 6-8C5)، KLRG1 (2F1)، Ly49A (A1)، Ly49G2 (eBio4D11)، NKG2A /C/E (20d5)، NKG2D (CX5)، NKp46 (29A1.4)، NK1.1 (PK136)، وTer119 (TER-119). تم شراء الأجسام المضادة CD49a (Ha31/8) وpSTAT5 [47/Stat5(pY694)] من BD Pharminogen وتم شراء pan-Rae1 (186107) من R&D Systems. تم تقييم إجمالي أعداد الخلايا عن طريق قياس التدفق الخلوي باستخدام حبات العد Count Bright Beads (Invitrogen). تم إجراء تجارب قياس التدفق الخلوي على BD FACSCanto II (BD Bioscience) أو Cytoflex (Beckman Coulter) وتم تحليلها باستخدام برنامج BD FACSDiva V8.0 (BD Bioscience) أو CytExpert (Beckman Coulter) أو FlowJo V10 (FlowJo، LLC).

FIGURE 1 | Loss of JAK1 in NKp46+ cells leads to an almost complete absence of peripheral NK cells. (A) Frequency (left panel) and total numbers (right panel) of Lin−(CD3−CD19−Ly-6G−Ter119−) CD122+ NK cells in the bone marrow were assessed by flow cytometry. (B) Bone marrow Lin−CD122+ cells were further divided into NK precursors (NKPs: NKp46−NK1.1−), immature NK cells (iNKs: NKp46−NK1.1+), and mature NK cells (mNKs: NKp46+NK1.1+). (C) The frequency of CD3−NKp46+ NK cells in the spleen was assessed by flow cytometry and representative plots are shown. (D, E) Frequency (left panel) and total numbers (right panel) of CD3−NKp46+ NK cells in the (D) spleen and (E) blood were assessed by flow cytometry. (F) The frequency of conventional NK cells (CD3−NK1.1+NKp46+CD49b+, left panel) and ILC1 cells (CD3−NK1.1+NKp46+CD49a+, right panel) was analyzed in the liver of Jak1WT, Jak1fl/+Ncr1Cre, and Jak1fl/flNcr1Cre mice by flow cytometry. (A, B,D–F) Bar graphs represent mean ± SEM of 1–2 independent experiments; n = 3–11. *p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001.

الشكل 1|يؤدي فقدان JAK1 في خلايا NKp46+ إلى غياب شبه كامل لخلايا NK الطرفية. (A) التردد (اللوحة اليسرى) والأرقام الإجمالية (اللوحة اليمنى) لـ Lin− (CD3 − CD19 − Ly -6 G − Ter119−) CD 122+ تم تقييم خلايا NK في نخاع العظم عن طريق التدفق قياس الخلايا. (ب) تم تقسيم خلايا نخاع العظم Lin − CD 122+ إلى سلائف NK (NKPs: NKp46− NK1.1−)، وخلايا NK غير ناضجة (iNKs: NKp46− NK1.1+)، وخلايا ناضجة خلايا NK (mNKs: NKp46+NK1.1+). (C) تم تقييم تواتر خلايا CD3−NKp46+ NK في الطحال عن طريق قياس التدفق الخلوي وتظهر المؤامرات التمثيلية. (D، E) تم تقييم التردد (اللوحة اليسرى) والأرقام الإجمالية (اللوحة اليمنى) لخلايا CD3 − NKp 46+ NK في الطحال (D) والدم (E) عن طريق قياس التدفق الخلوي. (F) تردد خلايا NK التقليدية (CD3−NK1.1+NKp46+CD49b+، اللوحة اليسرى) وخلايا ILC1 (CD3−NK1.1+NKp46+CD49a+ ، اللوحة اليمنى) في كبد الفئران Jak1WT و Jak1fl / + Ncr1Cre و Jak1fl / flNcr1Cre عن طريق قياس التدفق الخلوي. (أ، ب، د – و) تمثل الرسوم البيانية الشريطية متوسط ​​± SEM من 1-2 تجارب مستقلة؛ ن=3–11. *p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001.

FIGURE 2 | The remaining Jak1fl/flNcr1Cre NK cells show an immature phenotype. (A, B) Splenic CD3−NKp46+ NK cells were analyzed for expression of CD27 and CD11b by flow cytometry. (A) The frequency of cells in each maturation stage is shown: DN (CD27 −CD11b−), CD27 (CD27+CD11b−), DP (CD27+CD11b+), CD11b (CD27−CD11b+). The total number of cells in each maturation stage is shown in Figure S1C. (B) Representative plots are shown. (C) pSTAT5(Y694)+ cells were analyzed within the CD3−NKp46+NK1.1+ population ex vivo after 15 min stimulation with IL-15 by flow cytometry. (D) Splenic CD3−NKp46+ NK cells were analyzed for expression of the indicated activating and inhibitory receptors by flow cytometry. The percentage of NK cells positive for each receptor is shown. The median fluorescence intensity data is presented in Figure S1D. (A–D) Bar graphs and numbers on the plots represent mean ± SEM of 2 independent experiments; n = 5–8. **p < 0.01, ***p < 0.001.


الشكل 2|تُظهر خلايا Jak1fl/flNcr1Cre NK المتبقية النمط الظاهري غير الناضج. (أ، ب) تم تحليل خلايا الطحال CD3−NKp46+ NK للتعبير عن CD27 وCD11b بواسطة قياس التدفق الخلوي. (أ) يظهر تكرار الخلايا في كل مرحلة من مراحل النضج: DN (CD27 −CD11b−)، CD27 (CD {{1 0}} CD11b−)، DP (CD 27+ CD11b +)، CD11b (CD27−CD11b+). يظهر العدد الإجمالي للخلايا في كل مرحلة من مراحل النضج في الشكل S1C. (ب) يتم عرض المؤامرات التمثيلية. (C) تم تحليل خلايا pSTAT5(Y694)+ داخل CD3−NKp46+NK1.1+ السكان خارج الجسم الحي بعد تحفيز لمدة 15 دقيقة باستخدام IL-15 عن طريق قياس التدفق الخلوي. (D) تم تحليل خلايا الطحال CD3 − NKp {{3 0}} NK للتعبير عن مستقبلات التنشيط والمثبطة المشار إليها عن طريق قياس التدفق الخلوي. تظهر النسبة المئوية للخلايا NK الإيجابية لكل مستقبل. يتم عرض بيانات كثافة الإسفار المتوسطة في الشكل S1D. (أ – د) تمثل الرسوم البيانية والأرقام الشريطية الموجودة على المخططات متوسط ​​± SEM لتجربتين مستقلتين؛ ن=5–8. ** ع < 0.01، *** ع < 0.001.

لطخة غربية

تم إجراء تحلل الخلايا، SDS-PAGE، والبقع الغربية كما هو موضح سابقا (21). تم إجراء الكشف عن اللمعان الكيميائي باستخدام ركيزة Clarity Western ECL (BioRad) وChemiDocT XRS + Molecular Imager (BioRad) وتم تحليلهما بواسطة برنامج Image Lab (BioRad). تم استخدام الأجسام المضادة التالية: anti-actin (C4, sc-47778) من سانتا كروز كعنصر تحكم في التحميل، anti-JAK2 (D2E12; #3230)، anti-Perforin (#3693)، وanti-JAK1 (#3332) ) من تكنولوجيا تشوير الخلية.

Cistanche deserticola—improve immunity (3)

cistanche tubulosa-تحسين الجهاز المناعي

انقر هنا لعرض منتجات Cistanche Enhance Immunity

【اطلب المزيد】 البريد الإلكتروني: cindy.xue@wecistanche.com / تطبيق Whats: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

تحليل احصائي

تم إجراء اختبارات t غير المقترنة أو ANOVA أحادي الاتجاه مع اختبارات Tukey اللاحقة باستخدام الإصدار 5 من GraphPad Prism.00 (برنامج GraphPad). تتم الإشارة إلى مستوى الأهمية لكل تجربة (∗p < 0.05; ∗∗p < 0.01; ∗∗∗p < 0.001).

نتائج

يؤدي حذف JAK1 إلى تقليل أرقام خلايا NK وILC1 بطريقة تعتمد على الجرعة

ثبت أن مثبط JAK1/JAK2 Ruxolitinib يقلل من أعداد الخلايا القاتلة الطبيعية والنضج والوظيفة (14، 15). لمقارنة ومعالجة مساهمة JAK1 وJAK2 في بيولوجيا خلايا NK، أنشأنا فئران مع الحذف المشروط إما لـ JAK1 أو JAK2 في خلايا NKp46+. وهكذا عبرنا الفئران Ncr1Cre (18) مع الفئران Jak1fl/fl أو Jak2fl/fl [انظر قسم المواد والطرق و(17)] الفئران، على التوالي. تتطور خلايا NK في النخاع العظمي من سلائف الخلايا NK (NKPs)، والتي يتم تعريفها على أنها Lin − CD 122+ NK1.1 − NKp46−. تتطور إلى خلايا NK غير ناضجة (iNKs) تصبح NK1.1+ بينما خلايا NK الناضجة فقط (mNKs) هي NK1.1+NKp46+ (22). نظرًا لأن تعبير Cre recombinase في الفئران Ncr1Cre يتم تشغيله بواسطة مروج NKp46، فإن الحذف بوساطة Cre يقتصر على خلايا NK. لاحظنا انخفاضًا كبيرًا في النسبة المئوية والعدد الإجمالي لخلايا نخاع العظم NK في الفئران Jak1fl/flNcr1Cre (الشكل 1A). أظهرت خلايا Lin − CD 122+ NK في الفئران Jak1fl / flNcr1Cre نسبًا غنية من سلائف خلايا NK (NKPs) وخلايا NK غير الناضجة، بينما تم تقليل mNKs بشكل ملحوظ في نخاع العظم بما يتماشى مع كتلة النمو في خلية iNK مرحلة منع التقدم إلى مرحلة الخلية mNK (الشكل 1B). أدى حذف أليل واحد من Jak1 إلى أعداد متوسطة من خلايا نخاع العظم NK (الشكل 1A). على نحو متسق، أظهر تطور خلايا NK نمطًا ظاهريًا متوسطًا يشير إلى تأثير جرعة الجينات Jak1 على تطور خلايا NK (الشكل 1B). تُترجم الكتلة في تطور خلايا NK في نخاع العظم إلى أعداد منخفضة بشكل كبير من خلايا NK في المحيط. أدى فقدان JAK1 إلى نقص شبه كامل في خلايا الطحال وخلايا الدم NK (الأشكال 1C – E). تماشيًا مع تأثير جرعة الجين Jak1، عرضت الفئران Jak1fl/+Ncr1Cre نسبًا منخفضة من خلايا NK وأعدادًا إجمالية تصل إلى 50% مقارنةً بزملاء الفضلات من النوع البري في الطحال والدم (الأشكال 1C – E). يؤدي حذف المستجيب المصب JAK1 وعامل النسخ STAT5 في خلايا NKp46+ أيضًا إلى تقليل خلايا NK الناضجة (18). كشفت مقارنة مباشرة بين الفئران Jak1fl/flNcr1Cre وStat5fl/flNcr1Cre أن حذف JAK1 أثار نقصًا أكثر وضوحًا في خلايا NK في الطحال والدم مقارنةً بحذف STAT5 (الأشكال S1A، B). تتكون الخلايا الليمفاوية الفطرية في الكبد NKp 46+ من مجموعتين من الأنساب المتميزة (23). تتميز خلايا NK التقليدية (cNK) بالتعبير عن CD49b وتنتشر بحرية في حين تتميز الخلايا الليمفاوية الفطرية من النوع الأول المقيمة في الكبد (ILC1) بالتعبير عن CD49a وتقتصر على الكبد (24). على غرار الطحال والدم، تم القضاء على cNKs الكبد وILC1s المقيمة في الأنسجة بالكامل تقريبًا عند فقدان JAK1 (الشكل 1F). مرة أخرى، أدى حذف أليل واحد من Jak1 إلى وفرة متوسطة من الخلايا الليمفاوية الفطرية في الكبد (الشكل 1F). باختصار، قادتنا هذه النتائج إلى استنتاج أن تعبير JAK1 في خلايا NKp46+ لا غنى عنه لتطوير خلايا NK وصيانتها في الأعضاء الطرفية بطريقة تعتمد على الجرعة.

JAK1 أمر بالغ الأهمية لنضج الخلايا القاتلة الطبيعية

في المحيط، تخضع الخلايا NK لخطوات النضج التي تتميز بالتعبير المتسلسل للعلامات السطحية CD27 وCD11b (22). كان أليل واحد من Jak1 كافيا لدفع نضوج الخلايا NK حيث لم نكتشف أي اختلافات في النسبة المئوية للخلايا في كل مرحلة من مراحل النضج بين خلايا Jak1WT وJak1fl/+Ncr1Cre (الأشكال 2A، B). أظهرت خلايا Jak1fl / flNcr1Cre NK المتبقية زيادة في عدد السكان غير الناضجين (CD 27+ CD11b−) وانخفاضًا في عدد السكان CD27 − CD11b + الناضج (الأشكال 2A وB والشكل S1C). تشير هذه النتيجة إلى أن الخلايا المتبقية ربما فقدت JAK1 ولم تتلق إشارات IL-15 كافية لتنضج تمامًا. في الواقع، أظهرت خلايا Jak1fl/flNcr1Cre NK المتبقية انخفاض الفسفرة في STAT5 خارج الجسم الحي عند التحفيز قصير المدى باستخدام IL-15 (الشكل 2C). يتم التحكم في نشاط الخلايا القاتلة الطبيعية عن طريق التوازن بين المستقبلات المنشطة والمثبطة. لم يكن لحذف أي من أليلات Jak1 أو كليهما تأثير على النسبة المئوية للخلايا NK التي تعبر عن المستقبلات التنشيطية والمثبطة التالية: KLRG1، NKG2D، NKG2A/C/E، وLy49A (الشكل 2D). كان الاختلاف الأبرز هو انخفاض طفيف في خلايا Ly49G 2+ NK وزيادة في خلايا DNAM -1+ NK في الفئران Jak1fl / flNcr1Cre (الشكل 2D). وبالمثل، لم يتم اكتشاف فروق جسيمة في مستوى التعبير (MFI) لكل مستقبل، إلى جانب زيادة في MFI لـ DNAM1 وLy49G2 (الشكل S1D). إلى جانب دوره كمستقبل منشط، يمثل تعبير DNAM- 1 خطوة تطورية؛ تؤدي خلايا DNAM -1+ إلى ظهور خلايا DNAM -1− (25). لقد فكرنا في أن التغييرات في DNAM -1+ تعكس كتلة نضوج خلايا Jak1fl / flNcr1Cre NK.

FIGURE 3 | JAK2 is dispensable for NK cell survival and maturation. (A) Frequency (left panel) and total numbers (right panel) of CD3 −NKp46+ NK cells in the spleens of Jak2WT and Jak2fl/flNcr1Cre mice were assessed by flow cytometry. (B) Splenic CD3−NKp46+ NK cells were analyzed for expression of CD27 and CD11b by flow cytometry. Frequency of cells in each maturation stage is show: DN (CD27−CD11b−), CD27 (CD27+CD11b−), DP (CD27+CD11b+), CD11b (CD27−CD11b+). (C) The expression of JAK2 and β-actin was analyzed by Western blot in NK cells upon 6 days of expansion in IL-2. Scans of full blots are available in Supplementary Material. (A,B) Bar graphs represent mean ± SEM of 2–3 independent experiments; n = 5–12.

الشكل 3|JAK2 يمكن الاستغناء عنه لبقاء الخلايا القاتلة الطبيعية ونضجها. ( A ) تم تقييم التردد (اللوحة اليسرى) والأرقام الإجمالية (اللوحة اليمنى) لخلايا CD3 −NKp 46+ NK في الطحال في الفئران Jak2WT و Jak2fl / flNcr1Cre بواسطة قياس التدفق الخلوي. (ب) تم تحليل خلايا الطحال CD3−NKp46+ NK للتعبير عن CD27 وCD11b بواسطة قياس التدفق الخلوي. يظهر تردد الخلايا في كل مرحلة من مراحل النضج: DN (CD27−CD11b−)، CD27 (CD27+CD11b−)، DP (CD27+CD11b+)، CD11b (CD27−CD11b+). (C) تم تحليل تعبير JAK2 و-actin بواسطة لطخة غربية في خلايا NK بعد 6 أيام من التوسع في IL-2. تتوفر عمليات مسح البقع الكاملة في المواد التكميلية. (أ،ب) تمثل الرسوم البيانية الشريطية متوسط ​​± SEM لـ 2-3 تجارب مستقلة؛ ن=5–12.

FIGURE 4 | Loss of one allele of Jak1 impairs NK cell activity. (A) NK cells were MACS-purified from spleens and cultured in IL-2 for 7 days. The numbers of living CD3−NK1.1+NKp46+ cells were assessed every 2–3 days. The symbols and the error bars present mean ± SEM of 2–4 biological replicates. (B) The expression of JAK1, Perforin, and β-actin was analyzed in expanded NK cells from two independent experiments by Western blot. Scans of full blots are available in Supplementary Material. (C) Expanded NK cells from Jak1WT and Jak1fl/+Ncr1Cr mice were mixed with CFSE-stained YAC-1 (left panel) or RMA-Rae1 (right panel) target cells at indicated effector target ratios. The specific lysis was assessed by flow cytometry. For YAC-1 a representative graph of one of two independent experiments is shown. The symbols and the error bars present the mean ± SEM of 2 technical replicates. For RMA-Rae1 a mean out of two independent experiments is shown. The symbols and the error bars present mean ± SEM of 2–3 biological replicates. *p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001.


الشكل 4|يؤدي فقدان أليل واحد من Jak1 إلى إضعاف نشاط الخلايا القاتلة الطبيعية. (أ) تمت تنقية خلايا NK من الطحال وزرعها في IL-2 لمدة 7 أيام. تم تقييم أعداد الخلايا الحية CD3− NK1.1+NKp46+ كل 2-3 أيام. الرموز وأشرطة الخطأ الموجودة تعني ± SEM من 2 إلى 4 مكررات بيولوجية. (ب) تم تحليل تعبير JAK1 وPerforin و-actin في خلايا NK الموسعة من تجربتين مستقلتين بواسطة لطخة غربية. تتوفر عمليات مسح البقع الكاملة في المواد التكميلية. ( C ) تم خلط خلايا NK الموسعة من الفئران Jak1WT و Jak1fl / + Ncr1Cr مع الخلايا المستهدفة YAC {{2 0}} (اللوحة اليسرى) أو الخلايا المستهدفة RMA-Rae1 (اللوحة اليمنى) بنسب مستهدفة المستجيب المشار إليها. . تم تقييم التحلل المحدد عن طريق قياس التدفق الخلوي. بالنسبة إلى YAC-1، يتم عرض رسم بياني تمثيلي لإحدى تجربتين مستقلتين. تمثل الرموز وأشرطة الخطأ متوسط ​​± SEM لـ 2 مكررات تقنية. بالنسبة لـ RMA-Rae1، يظهر متوسط ​​من تجربتين مستقلتين. الرموز وأشرطة الخطأ الموجودة تعني ± SEM من 2-3 مكررات بيولوجية. *p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001.

JAK2 يمكن الاستغناء عنه لبقاء الخلايا القاتلة الطبيعية ونضوجها

لقد أظهرنا حتى الآن أن حذف JAK1 للخلايا القاتلة الطبيعية يؤدي إلى نقص الخلايا القاتلة الطبيعية. لتوضيح ما إذا كان JAK2 يؤثر على بقاء خلايا NK ونضجها، قمنا بتحليل خلايا NK الطحالية في الفئران Jak2fl/flNcr1Cre وزملائها من النوع البري. لقد فشلنا في اكتشاف أي تأثير لحذف JAK2 على التردد أو العدد الإجمالي لخلايا CD3−NKp46+ في الطحال (الشكل 3A). علاوة على ذلك، أظهرت الفئران Jak2fl/flNcr1Cre نضوج خلايا NK الطبيعي، حيث تم اكتشاف نسب مماثلة من خلايا CD27−CD11b + في كلا الطرز الوراثية (الشكل 3B). نظرًا لأن حذف بروتين JAK2 في خلايا NK كان فعالاً للغاية (الشكل 3C)، فإن هذه البيانات تحدد بشكل لا لبس فيه أنه على عكس JAK1، فإن JAK2 الجوهري للخلايا NK يمكن الاستغناء عنه لبقاء الخلايا NK ونضجها.

cistanche benefits for men-strengthen immune system

فوائد سيستانش للرجال - تقوية جهاز المناعة

يؤدي فقدان أليل واحد من Jak1 إلى إضعاف وظائف الخلايا القاتلة الطبيعية

للحصول على مزيد من الأفكار حول كيفية تنظيم JAK1 لوظائف خلايا NK، قمنا بتحليل نمو خلايا NK الطحالية المنقية بواسطة MACS من Jak1WT وJak1fl/+Ncr1Cre وJak1fl/flNcr1Cre. لم تتوسع خلايا NK الناقصة JAK1-، مما يدل على أنه حتى في ظل جرعة عالية جدًا من IL-2 لا يمكن لخلايا JAK الأخرى تعويض فقدان JAK1 (الشكل 4A). أدى فقدان أليل واحد من Jak1 إلى نقص طفيف في النمو (الشكل 4A). أكد تحليل اللطخة الغربية انخفاض تعبير البروتين JAK1 في خلايا Jak1fl / + Ncr1Cre NK الموسعة والتي توازيها مستويات منخفضة من البيرفرين (الشكل 4B). في الخط، عرضت خلايا Jak1fl/+Ncr1Cre NK نشاطًا سامًا للخلايا ضعيفًا ضد خطوط الخلايا المستهدفة YAC-1 وRMA-Rae1 (الشكل 4C). تثبت هذه النتائج أن JAK1 ليس فقط لا غنى عنه للحفاظ على خلايا NK في المحيط ولكنه يساهم أيضًا في نشاطها السام للخلايا.

استنزاف الخلايا القاتلة الطبيعية الناجم عن فقدان أليل واحد من Jak1 يضعف مراقبة الورم

تعتبر الخلايا القاتلة الطبيعية حاسمة في التعرف المبكر على الخلايا المتحولة والقضاء عليها. لاستكشاف ما إذا كان تقليل خلايا NK وضعف وظائفها في الفئران Jak1fl/+Ncr1Cre يؤدي إلى زيادة القابلية لنمو الورم ولا يتم تعويضه بوسائل أخرى، استخدمنا خلايا سرطان الغدد الليمفاوية RMA-Rae1. يعد هذا الخط الخلوي أداة لدراسة مراقبة الأورام المعتمدة على الخلايا القاتلة الطبيعية بطريقة قوية وفعالة (20). قمنا بزراعة خلايا سرطان الغدد الليمفاوية RMA-Rae1 تحت الجلد في كلا جانبي الفئران Jak1fl/+ وJak1fl/+Ncr1Cre. يؤدي عدم وجود أليل واحد من Jak1 إلى إضعاف قدرة الخلايا NK على التحكم في نمو الورم كما يتضح من زيادة حجم الورم (الشكل 5A) ووزن الورم في Jak1fl/+Ncr1Cre (الشكل 5B). في الخط، أظهرت هذه الأورام انخفاضًا ملحوظًا في تسلل خلايا NK (الأشكال 5C، D). لقد فشلنا في اكتشاف أي اختلاف في تواتر خلايا NK المتسللة للورم NKG2D + (الشكل 5E)، والتي تعتبر ضرورية للتعرف على أورام RMA-Rae1. باختصار، تظهر نتائجنا أن انخفاض أعداد خلايا NK مع ضعف وظيفة خلايا NK في الفئران Jak1fl/+Ncr1Cre كافية لإضعاف التحكم في نمو الورم بشكل كبير في الجسم الحي.

FIGURE 5 | Loss of one allele of Jak1 impairs tumor surveillance. (A, B) Jak1fl/+ and Jak1fl/+Ncr1Cre mice were injected s.c. with 106 RMA-Rae1 cells and after 10 days the tumor weight was assessed. Shown are (A) representative tumor pictures and (B) dot plots with horizontal lines representing mean tumor weights ± SEM from 2 independent experiments; n = 6–8 (C, D) Tumor-infiltrating NK cells were analyzed by flow cytometry. (C) Representative plots of tumor-infiltrating CD3−NKp46+ cells and their percentage among Rae1− cells are shown. (D) Total numbers of tumor-infiltrating CD3−NKp46+ cells per gram of tumor and (E) percentages of NKG2D+ NK cells are presented as bar graphs showing mean ± SEM from one experiment n = 4–5. ***p < 0.001.


الشكل 5|يؤدي فقدان أليل واحد من Jak1 إلى إضعاف مراقبة الورم. (A، B) تم حقن الفئران Jak1fl/+ وJak1fl/+Ncr1Cre مع 106 خلايا RMA-Rae1 وبعد 10 أيام تم تقييم وزن الورم. تظهر هي (أ) صور الورم التمثيلية و(ب) المؤامرات النقطية ذات الخطوط الأفقية التي تمثل متوسط ​​أوزان الورم ± SEM من تجربتين مستقلتين؛ ن=6 –8 (C، D) تم تحليل خلايا NK المتسللة للورم عن طريق قياس التدفق الخلوي. ( C ) تظهر المؤامرات التمثيلية لخلايا CD3 − NKp 46+ المتسللة للورم ونسبتها بين خلايا Rae1−. (D) يتم عرض إجمالي أعداد خلايا CD3−NKp46+ المتسللة للورم لكل جرام من الورم و(E) النسب المئوية لخلايا NKG2D + NK كرسوم بيانية شريطية توضح متوسط ​​± SEM من تجربة واحدة n=4 - 5. *** ع <0.001.

مناقشة

يرتبط خلل تنظيم مسار إشارات JAK-STAT ارتباطًا وثيقًا بتطور السرطان بالإضافة إلى الاضطرابات المناعية (7). كان أول مرض مرتبط بـ JAK تم اكتشافه هو نقص المناعة المشترك الشديد (SCID) والذي تميز بتشوهات الخلايا القاتلة الطبيعية الناجمة عن طفرات LOF JAK3 (26، 27). نوضح هنا أن حذف JAK1 في خلايا NKp46+ يؤدي إلى نقص مناعي فطري مع فقدان خلايا NK وILC1 في الأعضاء الطرفية، في حين أن JAK2 زائد عن الحاجة لبقاء الخلايا NK ونضجها. كشف عملنا السابق أن فقدان STAT5 في الخلايا القاتلة الطبيعية يؤدي إلى انخفاض حاد في أعداد الخلايا القاتلة الطبيعية في الأعضاء الطرفية (18). تم إنقاذ فقدان خلايا NK في الفئران Stat5fl/flNcr1Cre من خلال التعبير القسري للجزيء المؤيد للبقاء BCL2 (28). حددت هذه الدراسة STAT5 كعامل بقاء حاسم للخلايا القاتلة الطبيعية. تفتقر الفئران التي تعاني من نقص STAT5B إلى حد كبير إلى خلايا NK (29)، وذلك تمشيا مع حقيقة أن STAT5 يشير إلى مجرى السيتوكينات التي تعتبر حيوية لبيولوجيا الخلايا NK، مثل IL-2 أو IL-15 (30). يعد IL -15 أمرًا ضروريًا لتطوير خلايا NK والبقاء على قيد الحياة حيث أن الفئران Il15 -/− خالية إلى حد كبير من خلايا NK الطرفية (31). إشارات IL-15 عبر مجمع مستقبلات من سلسلة مستقبلات c، IL-2R، و IL-15r (32). تثبت الفئران المعطلة لكل سلسلة مستقبلات دورًا حاسمًا للغاية للإشارات المرسلة في اتجاه مجرى النهر لـ IL-15 لتطوير خلايا NK (33، 34). حتى الآن ، كانت مساهمة JAK3 المرتبطة بـ c في تطوير خلايا NK راسخة. تُظهر الفئران المصابة بنقص JAK3 نمطًا ظاهريًا مماثلاً لـ SCID كما لوحظ في المرضى من البشر ويتم حظر نمو الخلايا القاتلة الطبيعية في مرحلة السلف ما قبل NK (35، 36). الآن نضع JAK1 الذي لم يحظى بالتقدير الكافي سابقًا كجزء مهم من محور IL-15/STAT5 في خلايا NK. تُظهر خلايا Jak1fl/flNcr1Cre NK كتلة تطورية في مرحلة خلايا iNK وفقدانًا شبه كامل لخلايا NK في الأعضاء الطرفية.

ومن المثير للاهتمام أن عواقب حذف JAK1 للخلايا NK تتجاوز تأثيرات نقص STAT5-. قد يكون ضعف التنشيط المشترك لـ STAT3 وSTAT5 هو السبب وراء الفقد الأكثر وضوحًا للخلايا NK، حيث ثبت أن STAT3 يحفز التعبير عن جين بقاء الخلية NK الحاسم Mcl1 (37، 38). وبدلاً من ذلك، قد يكون لـ JAK1 وSTAT5 فترات نصف عمر مختلفة والتي تمثل ترددات مختلفة من "المحذفات فقط" - الخلايا القاتلة الطبيعية التي فقدت الجين للتو ولكنها لا تزال تحمل البروتين، وهو ما قد يفسر الاختلافات. ينعكس تأثير الجرعة الجينية لنقص JAK1- في أرقام الخلايا NK، بينما يمكن الاستغناء عن فقدان أليل واحد من JAK1 لنضج الخلايا NK. يشير هذا إلى أن STAT5 المنشط يحد من معدل بقاء الخلايا القاتلة الطبيعية ولكن ليس النضج. يعد حذف أليل واحد من Jak1 كافيًا أيضًا لإضعاف مراقبة الورم بشكل كبير استنادًا إلى انخفاض أعداد خلايا NK مع انخفاض وظيفة خلايا NK المتبقية. وفقًا لبياناتنا، يؤدي الحذف الخاص بخلايا NK للجين المستهدف STAT5 Mcl1 إلى نقص حاد في خلايا NK مما يسبب زيادة كبيرة في العبء النقيلي (38).

Desert ginseng—Improve immunity (2)

cistanche tubulosa-تحسين الجهاز المناعي

قد تظهر JAKs وظائف زائدة عن الحاجة وتعوض بعضها البعض. يمكن لمستقبل الإنترفيرون JAK1 أن يعوض جزئيًا فقدان نشاط كيناز JAK2 (39). تم أيضًا عرض JAK2 على فسفرة STAT5 في اتجاه مجرى IL -15 أثناء التمايز المختبري للخلايا NK (16). من ناحية أخرى، يمكن لـ JAK2 النشط من الناحية التأسيسية أن يعوض بشكل متواضع فقط عن فقدان JAK1 في الخلايا الجذعية، مما يشير إلى دور غير زائد عن الحاجة لـ JAK1 و2 في الخلايا الجذعية السرطانية. في الخط، نلاحظ أنه في غياب JAK1، يفشل JAK2 في التعويض في تنشيط STAT5، حتى في ظل جرعة عالية من IL-2 في المختبر، للسماح ببقاء الخلايا القاتلة الطبيعية. يبقى أن نوضح ما إذا كان من الممكن تحقيق التأثيرات التعويضية من خلال التعبير عن شكل نشط من الناحية التأسيسية لـ JAK2. والأهم من ذلك أننا نظهر أن فقدان JAK2 في خلايا NKp 46+ أمر يمكن الاستغناء عنه لبقاء الخلايا NK. تكون خلايا NK الناقصة 2- ناضجة تمامًا، مما يثبت أن JAK2 الجوهري لخلايا NK لا يؤدي إلى نضج الخلايا NK. يشير هذا أيضًا إلى أن ضعف نضج خلايا NK في الفئران Jak2fl/flMx1Cre (14) هو على الأرجح سببه وظائف الخلايا NK الخارجية لـ JAK2. يمكن للمرء أن يتكهن بأن الحذف التأسيسي لـ JAK2 يغير بيئة السيتوكينات.

مراجع

1. Abel AM، Yang C، Thakar MS، Malarkannan S. الخلايا القاتلة الطبيعية: التطور والنضج والاستخدام السريري. الجبهة المناعية. (2018) 9:1869. دوى: 10.3389/fimmu.2018.01869

2. أورانج شبيبة. نقص الخلايا القاتلة الطبيعية. J الحساسية كلين Immunol. (2013) 132:515–25. دوى: 10.1016/j.jaci.2013.07.020

3. O'Shea JJ، Plenge R. JAK وSTAT جزيئات الإشارة في التنظيم المناعي والأمراض المناعية. الحصانة (2012) 36:542-50. دوى: 10.1016/j.immuni.2012.03.014

4. ستارك جي آر، دارنيل جي. مسار JAK-STAT في العشرين. الحصانة (2012) 36:503-14. دوى: 10.1016/j.immuni.2012.03.013

5. Shuai K، Liu B. تنظيم إشارات JAK-STAT في الجهاز المناعي. نات القس إيمونول. (2003) 3: 900–11. دوى: 10.1038/nri1226

6. أوشيه جي جي، هولاند إس إم، ستودت إل إم. JAKs وSTATs في المناعة ونقص المناعة والسرطان. ن إنجل ي ميد. (2013) 368: 161–70. دوى: 10.1056/NEJMra1202117

7. Hammarén HM، Virtanen AT، Raivola J، Silvennoinen O. تنظيم JAKs في إشارات السيتوكينات وانهيارها في المرض. السيتوكين (2018). دوي 10.1016/j.cyto.2018.03.041. [النشر الإلكتروني قبل الطباعة].

8. Lorenzini T، Dotta L، Giacomelli M، Vairo D، Badolato R. طفرات STAT كمحولات للبرنامج: تحويل نقص المناعة الأولية إلى أمراض المناعة الذاتية. جي ليوكوك بيول. (2017) 101: 29–38. دوى: 10.1189/jlb.5RI0516-237RR

9. هان سي، رولفيرنج سي، راولف إف، كاب إم، دروكس بي، توما جي، وآخرون. يلعب Jak1 دورًا مهيمنًا على Jak3 في نقل الإشارة من خلال مستقبلات السيتوكينات المحتوية على c. كيم بيول. (2011) 18: 314–23. دوى: 10.1016 / j.chembiol.2011

10. إليتو د، بيرنز إس أو، أنجولو الأول، بلاجنول الخامس، جيلمور كيه سي، هنريكيز إف، وآخرون. طفرات Biallelic JAK1 في المرضى الذين يعانون من نقص المناعة المصابين بالعدوى الفطرية. نات كومون. (2016) 7:13992. دوى: 10.1038/ncomms13992

11. روديج SJ، ميراز MA، وايت JM، لامب PA، رايلي JK، آرثر CD، وآخرون. يُظهر تعطيل جين Jak1 الأدوار الإجبارية وغير الزائدة لـ Jaks في الاستجابات البيولوجية التي يسببها السيتوكين. الخلية (1998) 93: 373–83.

12. كليبي إم، سبيتزر إم إتش، لي إس، هيل سي، دونغ إل، بابالكسي إي، وآخرون. Jak1 يدمج استشعار السيتوكين لتنظيم وظيفة الخلايا الجذعية المكونة للدم وتكوين الدم الإجهاد. الخلية الجذعية (2018) 22:277. دوى: 10.1016/j.stem.2017 13. شوارتز مارك ألماني, كانو Y, فيلارينو A, جناح M, م جادينا, أوشيه جي جي. تثبيط JAK كإستراتيجية علاجية للأمراض المناعية والالتهابية. نات ريف المخدرات ديسكوف. (2017) 16: 843–62. دوى: 10.1038/nrd.2017.201

14. بوتوس أ، جوتهارت د، جيل جي دبليو، جاتيلي أ، فري أ، تزانكوف أ، وآخرون. انخفاض المراقبة المناعية للورم في خلايا NK نتيجة لتثبيط JAK يعزز ورم خبيث في نماذج سرطان الثدي. نات كومون. (2016) 7:12258. دوى: 10.1038/ncomms12258

15. شونبيرج كيه، رودولف جيه، فوناهيم إم، بارامبالي ياجنانارايانا إس، كورنيز آي، حجازي إم، وآخرون. تثبيط JAK يضعف وظيفة الخلايا NK في الأورام التكاثرية النقوية. الدقة السرطان. (2015) 75:2187–99. دوى: 10.1158/0008-5472.CAN-14-3198

16. كيم وس، كيم إم جي، كيم دو، بيون جي، هوي إتش، سونغ إتش واي، وآخرون. يقوم مثبط إشارة السيتوكين 2 بتنظيم تمايز الخلايا القاتلة الطبيعية سلبًا عن طريق تثبيط نشاط JAK2. ممثل العلوم. (2017) 7:46153. دوى: 10.1038/srep46153

17. كريمبلر إيه، تشي واي، تريبليت إيه إيه، تشو جي، روي إتش، فاغنر كي يو. توليد أليل خروج مشروط للجين يانوس كيناز 2 (Jak2) في الفئران. تكوين (2004) 40: 52-7. دوى: 10.1002/gene.20063

18. إيكلهارت إي، وارش دبليو، زبدين إي، سيما أو، ستويبر دي، كولبي تي، وآخرون. يكشف فأر Ncr1 -Cre الجديد عن الدور الأساسي لـ STAT5 في بقاء الخلايا القاتلة الطبيعية وتطورها. الدم (2011) 117: 1565–74. دوى: 10.1182/دم-2010-06-291633

19. كوي واي، ريدلينجر جي، ميوشي كيه، تانغ دبليو، لي سي، دينغ سي، وآخرون. يكشف تعطيل نشاط Stat5 في ظهارة الثدي لدى الفأر أثناء الحمل عن وظائف متميزة في تكاثر الخلايا والبقاء والتمايز. مول خلية بيول. (2004) 18:8037–47. دوى: 10.1128/MCB.24.18.8037-8047.2004

20. سيروينكا أ، بارون جي إل، لانير إل إل. يسمح التعبير خارج الرحم لجين -1 المحفز المبكر لحمض الريتينويك (RAE -1) برفض الخلايا القاتلة الطبيعية للورم الحامل من الفئة MHC في الجسم الحي. Proc Natl Acad Sci الولايات المتحدة الأمريكية. (2001) 98:11521–6. دوى: 10.1073/pnas.201238598

21. بوتز إي، جوتهارت د، هورمان جي، سيسيزار أ، ويرث إس، بيرغر أ، وآخرون. يعمل الفسفرة CDK8-بوساطة STAT1-S727 على تقييد السمية الخلوية للخلايا القاتلة الطبيعية ومراقبة الورم. مندوب الخلية. (2013) 4: 437–44. دوى: 10.1016/j.celrep.2013.07.012

22. جيجر تي إل، صن جي سي. تطور ونضج الخلايا القاتلة الطبيعية. العملة Opin Immunol. (2016) 39:82–9. دوى: 10.1016/j.coi.2016.01.007

23. سوجكا دي كيه، بلوغاستيل-دوغلاس بي، يانغ إل، باك-فيتيل إم، أرتيوموف إم إن، إيفانوفا واي، وآخرون. الخلايا القاتلة الطبيعية المقيمة في الأنسجة هي سلالات خلوية متميزة عن خلايا NK الغدة الصعترية والخلايا الطحالية التقليدية. إليفي (2014) 3:e01659. دوى: 10.7554/eLife.01659

24. بينج إتش، جيانغ إكس، تشن واي، سوجكا دي كيه، وي إتش، جاو إكس، وآخرون. تمنح خلايا NK المقيمة في الكبد مناعة تكيفية في التهاب ملامسة الجلد. جي كلين انفست. (2013) 123:1444–56. دوى: 10.1172/JCI66381

25. مارتينيت إل، فيراري دي أندرادي إل، غيليري سي، لي جي إس، ليو جيه، سوزا-فونسيكا غيماريش إف، وآخرون. يمثل تعبير DNAM -1 برنامجًا بديلاً لنضج خلايا NK. مندوب الخلية. (2015) 11: 85-97. دوى: 10.1016/j.celrep.2015. 03.006

26. ماتشي بي، فيلا أ، جيلياني إس، ساكو إم جي، فراتيني أ، بورتا إف، وآخرون. طفرات جين جاك -3 في المرضى الذين يعانون من نقص المناعة المشترك الوخيم الوراثي (SCID). طبيعة (1995) 377(6544):65-8.

27. راسل إس إم، الطيبي إن، ناكاجيما إتش، ريدي إم سي، روبرتس جي إل، أمان إم جي، وآخرون. طفرة Jak3 في مريض مصاب بـ SCID: الدور الأساسي لـ Jak3 في تطور اللمفاوية. العلوم (1995) 270: 797-800.

28. جوتهاردت د، بوتز إي إم، جروندشوبر إي، برشال-ميرفي إم، ستراكا إي، كودويس بي، وآخرون. يعد STAT5 منظمًا رئيسيًا في خلايا NK ويعمل كمفتاح جزيئي من مراقبة الورم إلى تعزيز الورم. اكتشاف السرطان. (2016) 4: 414-29. دوى: 10.1158/2159-8290.CD-15-0732

29. فيلارينو إيه في، سيومي جي، ديفيس إف بي، إيواتا إس، زيتي بي، روبنسون جي دبليو، وآخرون. تتحكم عتبات STAT5 المحددة بالمجموعة الفرعية والأنسجة في التوازن ووظيفة الخلايا اللمفاوية الفطرية. J إكسب ميد. (2017) 214:2999–3014. دوى: 10.1084/jem.20150907

30. Marçais A، Viel S، Grau M، Henry T، Marvel J، Walzer T. تنظيم تطور خلايا NK الفأرية ووظيفتها بواسطة السيتوكينات. الجبهة المناعية. (2013) 4:450. دوى: 10.3389/fimmu.2013.00450

31. كينيدي إم كيه، جلاكوم إم، براون إس إن، بوتز إي إيه، فيني جي إل، إمبرز إم، وآخرون. عيوب عكسية في سلالات خلايا CD8 T القاتلة الطبيعية والذاكرة في الفئران التي تعاني من نقص الإنترلوكين 15-. J إكسب ميد. (2000) 191: 771–80. دوى: 10.1084/jem.191.5.771

32. إيكيميزو إس، تشيريفو إم، ديفيس إس جيه. مجمعات الإشارة IL-2 و IL-15: مختلفة ولكنها متماثلة. نات إيمونول. (2012) 13:1141–2. دوى: 10.1038/ni.2472

33. ويليامز إن إس، كليم جيه، بوزانوف آي جيه، سيفاكومار بي في، شاتزلي جيه دي، بينيت إم، وآخرون. تمايز الخلايا القاتلة الطبيعية: رؤى من نماذج الفئران المعدلة وراثيا والأنظمة المختبرية. القس إيمونول (1998) 165: 47-61.

34. لودولسي جي بي، بون دي إل، تشاي إس، سوين ري، داسوبولوس تي، تريتين إس، وآخرون. يحافظ مستقبل IL-15 على التوازن اللمفاوي من خلال دعم توجيه الخلايا الليمفاوية وانتشارها. الحصانة (1998) 9:669-76.

35. بارك سي، سايجو ك، تاكاهاشي تي، أوساوا إم، أراس إتش، هيراياما إن، وآخرون. العيوب التنموية للخلايا اللمفاوية في الفئران التي تعاني من نقص كيناز Jak3. الحصانة (1995) 3: 771-82.

36. روبينيت إم إل، سيلا إم، تيليز جي بي، أولاند تي كيه، بارو إيه دي، كابودير كيه، وآخرون. نقص Jak3 يمنع نمو الخلايا اللمفاوية الفطرية. المناعي المخاطي. (2017) 1:50-60. دوى: 10.1038/mi.2017.38 37. عبد الغني J، ألين جي، ديكر دي تي، ليو واي، جولدنبرج دي، سميث سي دي، وآخرون. يعمل Sorafenib على توعية الأورام الصلبة بالأجسام المضادة لمستقبلات Apo2L/TRAIL وApo2L/TRAIL بواسطة محور Jak2-Stat3-Mcl1. بلوس وان (2013) 8:e75414. دوى: 10.1371/journal.pone.0075414

38. ساثي بي، ديلكونتي آر بي، سوزا-فونسيكا-غيمارايش إف، سيليت سي، شوبان إم، فاندنبرغ سي جيه، وآخرون. نقص المناعة الفطرية بعد الاجتثاث الوراثي لـ Mcl1 في الخلايا القاتلة الطبيعية. نات كومون. (2014) 5:4539. دوى: 10.1038/ncomms5539

39. كايل إي، فينكينستادت دي، ووفكا سي، تريلينج إم، ليبفريد بي، ستروبل بي، وآخرون. تم الكشف عن وظيفة سقالة مهمة لـ Janus kinase 2 بواسطة نموذج فأر جديد يحتوي على طفرة في حلقة التنشيط Jak2. الدم (2014) 123: 520–9. دوى: 10.1182/دم-2013-03-492157

قد يعجبك ايضا