التنبؤ بالآلية والتحقق من cistanche deserticola في علاج مرض الأمعاء الالتهابية ⅰ

خلاصة

 

موضوعيللتحقيق في آليةCistanche Deserticola في علاج مرض الأمعاء الالتهاب(IBD).

طُرقالنشطمكونات C. deserticolaتم فحصها بناءً على تقارير TCMSP والأدب. تم الحصول على أهداف المكونات النشطة عبر منصة التنبؤ الهدف السويسري. ثم تم الحصول على أهداف المرض عن طريق البحث عن أدوات الجينات وقواعد بيانات OMIM. تم إنشاء شبكة PPI وشبكة "تمييز الأدوية". تم فحص المكونات الأساسية والأهداف الأساسية. تم إجراء تحليلات إثراء GO و KEGG ، وتم إجراء التحقق من الإرساء الجزيئي للأهداف الأساسية والمكونات الأساسية. تم إنشاء نموذج الفئران IBD وتقسيمه إلى المجموعة النموذجية ، مجموعة التحكم الإيجابية (Dexamethasone ، 0. 4 ملغ/كغ) وC. Deserticolaمجموعة الاستخراج (1 0 0 ، 2 0 0 ، 4 0 0 mg/kg) ؛ تم تعيين مجموعة مراقبة فارغة ، مع 8 الفئران في كل مجموعة. أعطيت كل مجموعة الطب ذات الصلة ، مرة واحدة في اليوم ، لمدة 7 أيام متتالية. تم حساب درجة مؤشر نشاط المرض (DAI) وطول القولون ، ولوحظ التشكل المرضي للقولون من الفئران. مستويات العوامل الالتهابية [interleukin -6 (il -6) ، il1 ، il -10 ، myeloperoxidase (MPO) ، عامل نخر الورم- (tnf-)] في أنسجة القولون ، وتعبيرات البروتين من الأهداف الأساسية. النتائج تم الحصول على 39 مكونًا نشطًا و 232 هدفًا محتملاً لـ C. deserticola في علاج IBD. قد يكون علاج IBD مع C. deserticola مرتبطًا بالمكونات الأساسية مثل Quercetin و Suchilactone و -sitosterol و Cistanoside H ، والأهداف الأساسية مثل TNF و AKT1 و STAT3 و EGFR و SRC. تنبأ تحليل مسار GO و KEGG بأن العمليات البيولوجية لـ C. deserticola في علاج IBD مرتبطة بشكل رئيسي بتفسور البروتين ، والتنظيم السلبي لموت الخلايا المبرمج ، والذي ينطوي بشكل أساسي على مسارات إشارات مثبطات كيناز PI3K/AKT و EGFR. أظهرت نتائج الإرساء الجزيئي أن طاقة الربط بين المكونات الأساسية والهدف الأساسي لـ C. deserticola كانت أقل من －4.7 كيلو جول/مول. أظهرت نتائج التجربة الحيوانية أنه بعد التدخل مع مستخلص C. deserticola ، زاد وزن الجسم وطول القولون من الفئران بشكل كبير (P ＜ 0. 0 5 أو p ＜ ＜ 0. تم تخفيض الازدحام وذمة الغشاء المخاطي للقولون بشكل كبير ، وانخفضت النتيجة المرضية لأنسجة القولون بشكل كبير (P ＜ 0.05 أو P ＜ 0.01) ؛ مستويات il -6 ، il -1 ، mpo و tnf- ، وكذلك تعبيرات البروتين من pi3k ، pi3k phosphorylated pi3k (p-pi3k) ، egfr ، tnf- ، STAT3 ، STAT3 (phkt3) في أنسجة القولون تم تقليلها بشكل كبير (P ＜ 0.05 أو P ＜ 0.01) ، في حين تم زيادة مستوى IL -10 بشكل كبير في المجموعة النموذجية (P ＜ 0.01). الاستنتاجات C. Deserticola قد يخفف IBD من خلال تنظيم مسار إشارات SRC/EGFR/PI3K/AKT.

الكلمات الرئيسية cistanche deserticola; مرض التهاب الأمعاء؛ علم الصيدلة الشبكة ؛ الالتحام الجزيئي التحقق التجريبي

 

ملحق فم الفم الجديد Herb Cistanche للإمساك

---

خدمة داعمة لـ Wecistanche-أكبر مصدر Cistanche في الصين:
البريد الإلكتروني: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel: +86 15292862950
 

مرض الأمعاء الالتهابية (IBD) هو مصطلح عام للأمراض المزمنة غير المحددة والالتهابية في الجهاز الهضمي ، بما في ذلك نوعان فرعيان: مرض كرون والتهاب القولون التقرحي [1]. يعد IBD أحد الأمراض الشائعة والصعبة في الجهاز الهضمي في بلدي ، وهو أيضًا تركيز ومواقع ساخنة وصعوبة البحث الأساسي والتشخيص السريري وعلاج أمراض الجهاز الهضمي. في السنوات العشرين الماضية ، زادت نسبة الإصابة بالـ IBD في بلدي سنة بعد عام ، ومن المتوقع أن تصل إلى 150 ، {3}} بحلول عام 2025 ، المرتبة الأولى في آسيا [2].

يُعتقد عمومًا أن القابلية الوراثية ، والعوامل البيئية ، والخلل الوظيفي المناعي ، والتغيرات في النباتات المعوية وضعف وظيفة الحاجز المخاطي المعوي المعوي هي الأسباب الرئيسية لحدوث وتطور IBD [3]. يعتمد العلاج السريري لـ IBD بشكل أساسي على العلاج الدوائي ، بما في ذلك حمض الأميناتسيليك ، والمضادات الحيوية ، والستيروئيدات القشرية والمثبطات المناعية [4]. ومع ذلك ، فإن الأدوية المذكورة أعلاه عرضة للتسبب في ردود فعل سلبية متعددة ، وسيقوم المرضى بتطوير التسامح بعد الاستخدام على المدى الطويل ، ويعرضون للانتكاس بعد إيقاف الدواء [5].
كمورد فائق تقليدي في بلدي ، يتمتع الطب الصيني بمزايا الفعالية الواضحة ، ومعدل التكرار المنخفض وتفاعلات سلبية قليلة في علاج الأمراض المزمنة. Cistanche Deserticola ، والمعروفة أيضًا باسم "الجينسنغ للصحراء" ، مشتق من السيقان السميكة المجففة بأوراق متشابكة من cistanche deserticola yc ma أو cistanche tubulosa
(Schenk) Wight ، وهو مصنع لعائلة Orobanchaceae. إنه مورد طبي فريد ومفيد في شينجيانغ. أنه يحتوي بشكل أساسي على مكونات نشطة مثل جليكوسيدات فينيل إيثانويد و terpenes. له آثار تنغيم الكلى وتقوية يانغ ، وترطيب الأمعاء وتخفيف الإمساك ، ويستخدم على نطاق واسع في علاج الأمراض المعوية [6-7]. جليكوسيدات فينيل إيثانويد هي مكونات المؤشر لتحديد وتحديد المحتوى من DeSerticola cistanche كما هو محدد في طبعة 2020 من الأدوية الصينية (الجزء الأول)

cistanche للأمعاء الالتهابية

(بشكل رئيسي Echinacoside و Verbascoside) [8]. وقد أظهرت الدراسات أن إيكيناكوسيد يمكن أن يحسن التهاب القولون في الفئران عن طريق تعزيز تكاثر الخلايا الظهارية المعوية وتثبيط موت الخلايا المبرمج الخلوية [9] ؛ يمكن أن يبطئ فيباسكوسيد تطور التهاب القولون في الفئران كزبال جذري حرة [10] ؛ يمكن أن يمنع إجمالي الجليكوسيدات من Cistanche Deserticola وعلاج IBD عن طريق تثبيط التعبير عن العوامل الالتهابية [11]. ومع ذلك ، لا توجد دراسات تلعب المكونات الكيميائية في Cistanche Deserticola دورًا علاجيًا في IBD والتي من خلالها الأهداف ومسارات الإشارة.
تحقيقًا لهذه الغاية ، تعتزم هذه الدراسة التنبؤ بالآلية المحتملة لعمل DeSerticola Cistanche في علاج IBD من خلال علم صيدلة الشبكة جنبًا إلى جنب مع تكنولوجيا الإرساء الجزيئي ، والتحقق من النتائج المتوقعة من خلال الديناميكا الدوائية ، وذلك لتوضيح ذلك بشكل منهجي للآلية الجزيئية لعلاج Cistanche deserticola في علاج IBD ، ويلاحظ أن يكون ذلك من أجل استخدامه.

 

1 مواد

1.1 الحيوانات التجريبية

كانت الحيوانات المستخدمة في هذه الدراسة من الفئران C57BL/6 من فئة SPF ، ما مجموعه 48 ، تم شراؤها من مركز التجربة الحيوانية في جامعة Xinjiang Medical ، التي تزن 18-20 g ، مع عدد ترخيص الإنتاج الحيواني التجريبي (6}}. تم الاحتفاظ بالفئران في بيئة بدرجة حرارة (22 ± 2) ، ورطوبة نسبية تبلغ 50 ٪ -70 ، و 12-} H Cycle Lighting. تتوافق هذه الدراسة بدقة مع رعاية الحيوان والمتطلبات الأخلاقية للجنة أخلاقيات الحيوان التجريبية في جامعة شينجيانغ الطبية (رقم الموافقة 20210301-177).

 

 

 

 

1.2 الأدوية والكواشف الرئيسية

مستخلص Cistanche (CE ؛ نقاء أكبر من أو يساوي 85 ٪ ، تم شراؤها من إيشيناكوسيد أكبر من أو تساوي 40 ٪ ، أوسباسكوسيد أكبر من أو يساوي 16 ٪ ؛ رقم الدفعة 20230103) من شينجيانغ هيتيانDichen Pharmaceutical Sechnology Co. ، Ltd. ؛

 

مقر Wecistanche Hetian Dicheng Cistanche قاعدة

مقر Wecistanche Hetian Dicheng Cistanche قاعدة

مقر Wecistanche Hetian Dicheng Cistanche خلاصة

---

الخدمة الداعمة ل Wecistanche
البريد الإلكتروني: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel: +86 15292862950
 

تم شراء الصوديوم Dextran Sulfate (DSS ، الوزن الجزيئي النسبي 36 ، 000-50 ، 000 ، رقم الدُفعة C16013701) من شركة Shanghai McLean Biochemical Technology ، Ltd. ؛ تم شراء مجموعة الكشف عن نوع الدم الغامض (رقم الدُفعة ML1095013) من شركة Shanghai Elisa Biotechnology Co. ، Ltd. ؛ تم شراء المادة المرجعية للديكساميثازون (نقاء أكبر من أو تساوي 98 ٪ ، رقم الدُفعة 54231207002) من شركة بكين سوليبو للتكنولوجيا ، المحدودة ؛ عامل نخر الورم- (tnf-) ، interleukin 6 (interleukin -6 ، il -6) ، il -10 ، il -1 ، myeloperoxidase (mpo) enzyme-linked ars تم شراء 88-7064 ، 88-7105 ، 88-7013 ، emmpo) من Invitrogen ، USA ؛ أرنب TNF- ، البروتين كيناز B1 (AKT1) ، AKT1 الفسفرة (P-AKT1) ، نقل الإشارة ونشط النسخ 3 (STAT3) ، STAT3 الفسفرة (P-STAT3) ، مستقبلات نمو البشرة (EGFR) ، غير مستقبلات Tyrosine Non-Receptor (SRC) 3- kinase (pi3k) ، pi3k phosphorylated (p-pi3k) ، و horseradish peroxidase-labeled anti-rabbit modtibudies gb1176 ، gb1176 ، gb15000 ، gb15000 ، gb15000 ، gb15000 ، gb150001 ، gb15000 ، gb15000 ، gb15000 ، gb150001 ، gb150001 ، gb150001 ، تم شراء GB112343 و GB112544 و GB11525 و GB23303 ، على التوالي) من شركة Wuhan Saiweier Biotechnology ، Ltd.

 

1.3 الأدوات الرئيسية

تشمل الأدوات الرئيسية المستخدمة في هذه الدراسة قارئ Multiskan Go الطول الموجي الموجي الكامل (Thermo Fisher Scientific ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، RM2016 Slicer (Leica Instruments ، Shanghai) ، Gel.Doc.xr Electrophoresis Imaging System ، و Mini Trans-Trans Brotting System (Bio-Rad).

 

2 طرق

2.1 تحليل صيدلة الشبكة

2.1.1 التنبؤ بالمكونات والأهداف النشطة

The active ingredients of Cistanche deserticola were screened using the TCMSP platform (http://lsp.nwu.edu.cn/) (with oral availability ≥30% and drug-like properties ≥0.18 as screening conditions) [12], and the active ingredients of Cistanche deserticola with anti-IBD effects reported in the literature were supplemented. The Swiss Target Prediction platform was used to search for the active ingredient targets of Cistanche deserticola (probability parameter>0) ، وبعد إزالة التكرارات ، تم الحصول على أهداف المكونات النشطة لـ cistanche deserticola. باستخدام "مرض الأمعاء الالتهابية" كمصطلح البحث ، تم جمع أهداف المرض من قاعدة بيانات Genecards (http://www.genecards.org/) وقاعدة بيانات OMIM (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/omim) ، وتم الحصول على الأهداف المحتملة بعد deplicates.

 

2.1.2 رسم مخطط Venn و "تشييع الأدوية-أدى إلى أدى إلى" إنشاء الشبكة التفاعلية "

 

تم استخدام أداة التحليل عبر الإنترنت فيني 2.1 لتبادل أهداف المكونات النشطة لـ Cistanche Deserticola مع أهداف محتملة للحصول على الأهداف المحتملة لـ Cistanche Deserticola لعلاج IBD. تم استخدام برنامج Cytoscape 3.9.1 لإنشاء مخطط شبكة متعدد المستويات من "تهدئة الأدوية التي تعاني من الأدوية" وإجراء التحليل الطوبولوجي. تم اختيار أفضل 4 مكونات ذات قيمة أعلى درجة كمكونات أساسية من Cistanche Deserticola لعلاج IBD.

 

2.1.3 رسم شبكة التفاعل البروتين البروتين

The potential targets of Cistanche deserticola for the treatment of IBD were imported into the STRING database (http://string-db.org/), the species was limited to "Homo sapiens", the interaction score was limited to >0. 4 ، تم رسم شبكة تفاعل البروتين البروتين (PPI) ، وتم حساب قيمة درجة كل هدف. تم أخذ الأهداف ذات القيم الأعلى 5 درجات كأهداف أساسية.

 

2.1.4 وظيفة وإثراء المسار للأهداف المحتملة

تم استيراد الأهداف المحتملة لـ cistanche deserticola لعلاج IBD في قاعدة بيانات David (https://david.ncifcrf.gov) لتحليل مسار الجينات (GO) و kyoto encyclopedia للجينات والجينوم (kegg) ، ومسار للمعلومات الدقيقة على الانترنت (https://www.bioinformatics.com.cn/). تم قياس درجة التخصيب بعدد الأهداف وقيمة -lgp للمسارات المقابلة المخصب ؛ تم اختيار أفضل 10 إدخالات في تحليل GO لرسم رسم بياني شريط ، وتم اختيار أفضل 20 مسارًا في تحليل KEGG لرسم رسم بياني فقاعي.

2.1.5 الالتحام الجزيئي
تم استخدام برنامج Autodock Vina لأداء التحقق من الإرساء الجزيئي على الأهداف الأساسية التي تم فحصها (TNF ، AKT1 ، STAT3 ، EGFR و SRC) والمكونات الأساسية (Quercetin ، sucinolone ، -sitosterol ، و Cistancheside H). كلما انخفضت الطاقة الحرة الملزمة ، زادت تقارب المكون الأساسي لربط بروتين المستقبلات [13].

 

 

2.2 التحقق من تجربة الحيوانات

2.2.1 النمذجة والتجميع وإدارة المخدرات

48 تم تقسيم 48 من الذكور C57BL/6 الفئران (6-7}) إلى مجموعة مراقبة فارغة ، مجموعة نموذجية ، مجموعة تحكم إيجابية (dexamethasone ، 0. وفقًا للإشارة [14]) وفقًا لوزن الجسم بعد أسبوع واحد من التغذية التكيفية ، مع 8 فئران في كل مجموعة. أكلت الفئران في المجموعة الضابطة الفارغة وشرب الماء بشكل طبيعي كل يوم ، في حين أن الفئران في مجموعة النموذج ومجموعة إدارة المخدرات شربت محلول DSS 3 ٪ بحرية كل يوم للنمذجة وتناولها بحرية. في نفس الوقت الذي تم فيه النمذجة ، تعرضت الفئران في كل مجموعة جرعة CE مع الجرعة المقابلة من CE (الذائبة في الماء المقطر قبل الاستخدام) ، كانت الفئران في المجموعة الضابطة الإيجابية قد تم حقنها داخل الصفاق مع Dexamethasone ، والفئران في كل يوم متتالي. خلال التجربة ، توفي فأر واحد في كل مجموعة من مجموعة النموذج ، ومجموعة التحكم الإيجابية ومجموعة CE منخفضة الجرعة. بعد الإدارة الأخيرة ، صمت الفئران لمدة 12 ساعة. بعد التخدير ، تمت إزالة مقل العيون لجمع أنسجة الدم والقولون للاستخدام لاحقًا.

 

2.2.2 حساب مؤشر نشاط المرض واكتشاف طول القولون

خلال التجربة ، تم تسجيل وزن الفئران والبراز كل يوم. تم تقييم فقدان الوزن وخصائص البراز والدم في براز كل مجموعة من الفئران وفقًا لمعايير التسجيل [15] ، وتم حساب مؤشر نشاط المرض (DAI). dai=(درجة فقدان الوزن + خصائص البراز درجة + برازية الدم السحر أو درجة النزيف القولون) / 3. بعد التجربة ، تم قياس طول القولون الماوس وتصويره.

 

2.2.3 مراقبة أمراض أنسجة القولون

تم إصلاح جزء من أنسجة القولون الماوس مع 4 ٪ من polyformaldehyde ، مضمن في البارافين ، مقطوع ، وملطخة بالهيماتوكسيلين يوزين (HE). وقد لوحظ التشكل المرضي لأنسجة القولون الماوس تحت المجهر ، وتم حساب النتيجة المرضية وفقا لدرجة فقدان الخلايا القبو وتسلل الخلايا الالتهابية [16].

 

2.2.4 اكتشاف مستويات العوامل الالتهابية في أنسجة القولون

تم تجانس جزء من أنسجة القولون من الفئران على الجليد ، وتم الطرد المركزي للتجانس في 3 500 r/min لمدة 15 دقيقة في 4 درجة. تم جمع النافعة وتم اكتشاف مستويات IL -10 ، il -6 ، il -1 ، tnf- ، و mpo في المصل بواسطة قارئ microplate وفقًا لتعليمات المجموعة.

 

2.2.5 اكتشاف تعبير البروتين المستهدف الأساسي في أنسجة القولون

تم أخذ كمية مناسبة من أنسجة القولون من 3 فئران من كل مجموعة. تم التحقق من تعبير البروتين للأهداف الأساسية التي تم فحصها على أساس صيدلة الشبكة بواسطة لطخة غربية. تم تحليل القيمة الرمادية لنطاقات البروتين بواسطة برنامج Image J. -تم استخدام actin كمرجع داخلي لحساب مستوى التعبير لكل بروتين.

 

2.3 الطرق الإحصائية

تم استخدام برنامج SPSS 22. 0 للتحليل الإحصائي للبيانات. تم التعبير عن البيانات الكمية على أنها X ± S ، وتم إجراء المقارنة بين مجموعات متعددة من خلال تحليل التباين أحادي الاتجاه ، وتم إجراء المقارنة بين مجموعتين بواسطة اختبار LSD-T. مستوى الاختبار =0. 05.