MicroRNAs تشكل المناعة الاجتماعية: هدف محتمل للتحكم البيولوجي في شبكيات النمل الأبيض الصينية

خلاصة

يمكن للحشرات الاجتماعية أن تستخدم دفاعات سلوكية وفسيولوجية مختلفة للأمراض لتجنب العدوى المسببة للأمراض ومقاومتها وتحملها في مستعمراتها المكتظة والمترابطة بشكل وثيق، والتي تسمى المناعة الاجتماعية. أظهرت الدراسات الحديثة أن العديد من الجزيئات تخدم المناعة الاجتماعية للحشرات، بما في ذلك الروائح الكيميائية، وسموم الحشرات، والبروتينات المرتبطة بالمناعة، وما إلى ذلك. ومع ذلك، ما إذا كانت الرناوات الدقيقة (miRNAs)، التي تتم معالجة سلائفها بواسطة Dicer-1، تدفع الاجتماعية وكيف. المناعة في مستعمرات الحشرات لا تزال غير معروفة. هنا، استخدمنا نظام "مضيف - مُمْرِض" (المضيف: Reticulitermes chinensis؛ المُمْرِض: Metarhizium anisopliae) لاستكشاف تأثير miRNAs على المناعة الاجتماعية في مستعمرات النمل الأبيض. لقد وجدنا أن إسكات Dicer-1 بوساطة RNAi أدى إلى انخفاض تركيز miRNA مما أدى إلى تثبيط استقلاب الكربوهيدرات والطاقة بشكل كبير، وأثر على عمليات الحياة الأخرى، مثل الاستجابة المناعية وتفاعلات الأكسدة والاختزال، في جسم النمل الأبيض بأكمله . في الدفاع السلوكي، أدى إسكات Dicer-1 إلى تقليل السلوكيات الاجتماعية الدفاعية بشكل كبير مثل الحركة والاستمالة وأكل لحوم البشر والدفن في مجموعات النمل الأبيض عند مواجهة التلوث الفطري. في الدفاع الفسيولوجي، أدى إسكات Dicer-1 وتحفيز miR- 71-5 إلى انخفاض كبير في الأنشطة المضادة للفطريات للنمل الأبيض. علاوة على ذلك، أظهرت كل من مجموعات النمل الأبيض المعالجة بالمنشطات Dicer-1- و miR-71-5 مستوى عالٍ من الوفيات أثناء التلوث الفطري. أظهرت النتائج التي توصلنا إليها الدور الهام الذي تلعبه miRNAs في تشكيل المناعة الاجتماعية في مستعمرات النمل الأبيض، مما يوفر رؤى ضرورية لفهم الآليات المحتملة الكامنة وراء دفاعات الأمراض السلوكية والفسيولوجية في الحشرات، وبالتالي إرساء الأساس لمكافحة الآفات المعتمدة على miRNA.

cistanche tubulosa-تحسين الجهاز المناعي

الكلمات المفتاحية حشرة Eusocial · الفطريات المسببة للأمراض الحشرية · دفاعات المرض · Dicer-1 · miR-71-5

مفتاح الرسالة

• miRNAs بوساطة التعبيرات الجينية المتعلقة بأجهزة المناعة الاجتماعية.

• أثرت miRNAs على دفاعات الأمراض السلوكية في مجموعات النمل الأبيض.

• أثرت miRNAs على الدفاع عن الأمراض الفسيولوجية لدى أفراد النمل الأبيض.

• يمكن اعتبار مبيدات النمل الأبيض المعتمدة على الحمض الريبي النووي المرسال (mRNA) وسيلة وصول جديدة إلى المكافحة البيولوجية للآفات.

مقدمة

يعتبر النمل الأبيض من الآفات ذات الأهمية الاقتصادية، حيث تبلغ تكلفتها 30 مليار دولار في جميع أنحاء العالم، وتتسبب في أضرار عالمية للمحاصيل والأشجار والهياكل الخشبية والمواد السليلوزية. توفر المبيدات الكيميائية وسيلة فعالة لمكافحة آفات النمل الأبيض، ولكنها تخلق أيضًا مشاكل خطيرة تهدد صحة الإنسان والبيئة. تعتبر المكافحة البيولوجية بديلاً قيماً يمكنه معالجة هذه المشكلات. تم تطبيق العديد من مسببات الأمراض الحشرية، مثل Metarhizium وBeauveria، بنجاح في المكافحة البيولوجية للآفات، وهو أمر معقول وفعال (Verma et al. 2009; Kumar and Upadhyay 2021). ومع ذلك، فإن المكافحة البيولوجية للنمل الأبيض غير مرضية، ويرجع ذلك أساسًا إلى الدفاعات المرضية الفريدة في مستعمرات النمل الأبيض. لقد طور النمل الأبيض، كونه حشرات اجتماعية، دفاعات فسيولوجية سلوكية وفردية جماعية لمواجهة المخاطر العالية لانتشار مسببات الأمراض المعدية بين رفاق العش المكتظين والمرتبطين ارتباطًا وثيقًا (يُطلق عليهم "المناعة الاجتماعية") (Van Meyel et al. 2018; Liu et al. 2019 أ). من الموثق جيدًا أن النمل الأبيض ينشر مجموعة واسعة من الدفاعات السلوكية: فالتجنب هو خط الدفاع الأول ويساعد على منع النمل الأبيض من دخول المناطق الملوثة (Yanagawa et al. 2015)؛ يتم عرض سلوك الإنذار من خلال حركة تذبذبية طولية سريعة لتحذير رفاق العش من وجود مسببات الأمراض (Rosengaus et al. 1999)؛ يمكن أن يؤدي التعامل مع رفاق العش الملوثين بمسببات الأمراض إلى إزالة مسببات الأمراض بكفاءة من بشرة رفاق العش (Liu et al. 2019b)؛ وتحد سلوكيات الدفن وأكل لحوم البشر من انتقال مسببات الأمراض من الجثث إلى رفاق العش المعرضين للخطر (Sun et al. 2016). الاستجابات الفسيولوجية مثل الاستجابات المناعية وتفاعلات الأكسدة والاختزال تخدم أيضًا الدفاع عن مرض النمل الأبيض. تشمل الاستجابات المناعية الببتيدات المضادة للميكروبات بوساطة المناعة الخلطية (AMPs) والبلعمة الخلوية والتغليف بوساطة المناعة الخلوية، والتي تكون قادرة على منع تكاثر مسببات الأمراض ونشرها في تجويف جسم الحشرات (Hussain et al. 2013; Liu et al. 2015; لوبيز-أوريبي وآخرون 2016؛ هونغ وآخرون 2018). تعمل تفاعلات الأكسدة والاختزال على تخفيف الأضرار التي تسببها السموم وأنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) أثناء العدوى المسببة للأمراض، مما يساهم في تحمل الحشرات (Liu et al. 2015; Zhao et al. 2020; Zhou et al. 2021). بالإضافة إلى ذلك، أظهرت الدراسات السابقة حول دفاعات مرض النمل الأبيض أن بعض المتكافلات المعوية كانت عنصرًا مهمًا في الدفاع الفسيولوجي للمضيف (Rosengaus et al. 2014). يمكن استخدام بعض AMPs كمطهرات خارجية على سطح البشرة وفي مواد العش عندما تكون مرتبطة بسلوكيات مثل الاستمالة والتعشيش (Bulmer et al. 2009; Hamilton and Bulmer 2012). ولذلك، فإن إضعاف الدفاعات السلوكية والفسيولوجية للنمل الأبيض قد يكون الخطوة الأساسية لتعزيز تأثير المكافحة الحيوية للنمل الأبيض.

فوائد سيستانش للرجال - تقوية جهاز المناعة

انقر هنا لعرض منتجات Cistanche Enhance Immunity

【اطلب المزيد】 البريد الإلكتروني: cindy.xue@wecistanche.com / تطبيق Whats: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

تم الإبلاغ عن الأساس الجزيئي للمناعة الاجتماعية في عدد متزايد من الدراسات. تم التعرف على العديد من الجزيئات، بما في ذلك الروائح الكيميائية والإفرازات الخارجية والمضادات الحيوية والبروتينات المناعية والمستقبلات الكيميائية التي تخدم الدفاعات السلوكية والفسيولوجية للحشرات، من خلال تقنيات omics المتعددة واللوني للغاز/السائل - قياس الطيف الكتلي (Seipke et al. 2011; Hussain et al. 2013؛ تيرابون وآخرون 2014؛ ليو وآخرون 2015؛ صن وآخرون 2016؛ هو وآخرون 2018). في مجموعات النمل الأبيض، تؤدي الرائحة العفنة الصادرة عن مسببات الأمراض إلى تعزيز سلوك النظافة الشخصية (Yanagawa et al. 2011). إشارات الموت من جثث النمل الأبيض تحفز إما أكل لحوم البشر أو سلوكيات الدفن (Sun et al. 2016). تساعد الإفرازات الخارجية من الغدد الأمامية واللعابية والنشاط المضاد للميكروبات الذي تتوسطه الكائنات الحية الدقيقة المفيدة النمل الأبيض على حماية أنفسهم ورفاق العش وحتى المستعمرات (Bulmer et al. 2009; Rosengaus et al. 2000, 2014; Chouvenc et al. 2013). بالنسبة للآليات الوراثية والكيميائية الحيوية التي تحرك المناعة الاجتماعية للحشرات، يمكن استخدام تقنيات RNAi وتحرير الجينات. في النمل الأبيض، ثبت أن إسكات جينات الترميسين وبروتين الارتباط سالب الجرام 2 (GNBP2) والبروتين المرتبط بالسيلينيوم وجينات ناقلة الجلوتامين (TG) بوساطة RNAi يقلل بشكل كبير من النشاط المضاد للفطريات للنمل الأبيض وبالتالي يزيد معدل وفيات العدوى (هاميلتون). وبولمر 2012؛ تشاو وآخرون 2020؛ تشو وآخرون 2021). يمكن أن يؤثر إنزيم هيدروجيناز الإيزوسيترات (IDH) على استقلاب النمل الأبيض، ويؤدي خلل تنظيمه إلى زيادة آفات موت الخلايا المبرمج، مما يؤدي إلى مستويات عالية من العدوى والوفيات (Liu et al. 2020). بالإضافة إلى ذلك، يخدم GNBP2 وTG أيضًا الدفاع السلوكي عن النمل الأبيض، مما يؤثر على سلوكيات أكل لحوم البشر والاستمالة، على التوالي (Zhao et al. 2020; Esparza-Mora et al. 2020). ومع ذلك، لا يزال يتعين فهم الأساس الجزيئي للمناعة الاجتماعية بشكل واضح، وخاصة الآلية الجزيئية التي تقود السلوكيات الاجتماعية المعقدة استجابة لمسببات الأمراض المعدية. علاوة على ذلك، تركز الآلية الجينية والكيميائية الحيوية للمناعة الاجتماعية على الحمض النووي الريبوزي المشفر الذي يحرك المناعة الاجتماعية للحشرات، ولكن ما إذا كان الحمض النووي الريبي غير المشفر مثل miRNAs يشارك في تنظيم المناعة الاجتماعية للحشرات لا يزال غير واضح.

يعتبر Dicer-1، وهو نوكلياز RNase III، ضروريًا للخطوة الأخيرة من عملية التخليق الحيوي للحمض النووي الريبي النووي (mRNA). miRNAs هي RNAs داخلية المنشأ، 18-25 nt، غير مشفرة تنظم التعبير الجيني سلبًا على مستوى ما بعد النسخ من خلال الاقتران الأساسي بين منطقة البذور في miRNAs والمنطقة المتطابقة في mRNAs المستهدفة (Gomez-Orte and Belles 2009؛ Wang et al. 2013؛ يانغ وآخرون 2014؛ لوكاس وآخرون 2015). نظرًا لأن إنتاج miRNA يعتمد على Dicer-1، يمكن دراسة وظائف miRNAs في تعديل العمليات البيولوجية للحشرات من خلال الخسائر الوظيفية لـ Dicer-1. باستخدام طفرات Dicer-1 في ذباب الفاكهة، ثبت أن miRNAs تعمل في تكوين الجنين وتشكل الخلايا العصبية الشمية (Lee et al. 2004; Berdnik et al. 2008). من خلال إسكات Dicer-1 بوساطة RNAi، تحقق الباحثون من أن miRNAs تلعب دورًا رئيسيًا في تنظيم العمليات التنموية في تحول الحشرات، مثل تلك الموجودة في الصراصير والجراد (Gomez-Orte et al. 2009; Wang et al. 2013). وعلاوة على ذلك، تشارك miRNAs أيضًا في تعديل سلوك الحشرات. ينظم miR-8 وmiR-429 سلوك التسلق الناجم عن الفيروسات في ديدان اللوز القطنية عن طريق التحكم المباشر في تعبير BrZ2 (Zhang et al. 2018). ينظم miR-133 تخليق الدوبامين وبالتالي يمنع التجميع السلوكي في الجراد (Yang et al. 2014). استنادًا إلى هذه الأدلة على وظيفة miRNAs في فسيولوجيا الحشرات وسلوكها، كنا نهدف إلى تحديد تأثير miRNAs على فسيولوجيا النمل الأبيض وسلوكه المرتبط بالمناعة الاجتماعية باستخدام نظام "مضيف ممرض" (المضيف: Reticulitermes chinensis؛ العامل الممرض: Metarhizium أنيسوبليا). تضمنت دراستنا بشكل أساسي ثلاثة جوانب من البحث حول المناعة الاجتماعية: تأثير miRNAs على (1) الجزيئات الموجودة في الجسم الحي التي تحرك المناعة الاجتماعية؛ (2) الاستجابة الدفاعية السلوكية، مثل التحرك في المناطق الملوثة بالفطريات، والاستمالة تجاه رفاق العش الملوثين بالفطريات وأكل لحوم البشر/الدفن تجاه الجثث الملوثة بالفطريات؛ و (3) استجابة الدفاع الفسيولوجية، مثل النشاط المضاد للفطريات. علاوة على ذلك، قمنا باختبار تأثير خلل تنظيم ميرنا على وفيات النمل الأبيض الملوث بالفطريات لتقييم تأثير ميرنا على المكافحة البيولوجية للنمل الأبيض. كشفت دراستنا عن الآلية المحتملة الكامنة وراء دفاعات الأمراض السلوكية والفسيولوجية والأهداف الجديدة لمكافحة الآفات.

cistanche tubulosa-تحسين الجهاز المناعي

المواد والطرق

النمل الأبيض

جميع النمل الأبيض التجريبي في دراستنا كانوا من عمال النمل الأبيض R. chinensis. تم جمعها من تل شيزي في مدينة ووهان بمقاطعة هوبى بالصين. تمت تربية النمل الأبيض في أوعية بلاستيكية (40 × 20 × 20 سم) تحتوي على كتل صنوبر صغيرة في المختبر عند درجة حرارة 25 ± 1 درجة ورطوبة نسبية 80٪ وظلام لمدة 24 ساعة.

مسببات الأمراض الحشرية، والنمل الأبيض الملوث، والجثث

تمت زراعة الفطريات الممرضة للحشرات M. anisopliae (سلالة IBCCM321.93) على أجار دكستروز البطاطس (PDA) لمدة أسبوعين عند درجة حرارة 25 ± 1 درجة ورطوبة نسبية 8 0٪ و 24 ساعة من الظلام. تم تعليق الكونيديا الفطرية باستخدام 1% توين 80 وتخزينها عند درجة حرارة 4 درجات لمدة أقصاها 3-4 أسابيع. قبل كل تجربة، تم اختبار التعليق المخروطي من أجل الإنبات. لقد وجدنا أن المعلق المخروطي المستخدم لتلويث النمل الأبيض كان معدل إنباته أكثر من 90%. لتحضير النمل الأبيض الملوث بالفطريات، تم تلويث بطون النمل الأبيض بواسطة قطرة 0.3 ميكرولتر من المعلق المخروطي (108 كونيديا/مل) باستخدام ماصة (0.1-2.5 ميكرولتر، ترانسبيتيت). بعد ذلك، تم تبريد النمل الأبيض الملوث بالفطريات على الفور عند درجة 4 لمدة ساعة واحدة لمنع حركته لترسيب الكونيديا الفطرية على البشرة (Liu et al. 2015). لتحضير الجثث الملوثة بالفطريات، تم جمع النمل الأبيض في أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 مل ثم تجميده في النيتروجين السائل لمدة 20 ثانية لقتل النمل الأبيض. تم غمر الجثث في المعلق المخروطي (108 كونيديا / مل) ثم تم وضعها في طبق بتري معقم مع ورق ترشيح رطب لمدة 0 و 2 يوم من الزراعة (Sun et al. 2016).

توليف الرنا المزدوج الجديلة ومحاكاة ميرنا

تم تضخيم جزء Dicer -1 (1697 نقطة أساس؛ مادة تكميلية 1- نص S1) بواسطة بادئات محددة (للأمام: 5′-CTG CGA CAG ATC ATT GCA CG -3 ′؛ للخلف: 5 ′ -CAC TGG CTG TTT TGG CAC TC -3 ′)، وتمت تنقية منتجات PCR الخاصة بها باستخدام AxyPrepTM DNA Gel Extraction Kit (Axygen Scientific، USA)، والتي تم استنساخها في ناقل pMD 18-T (TaKaRa، اليابان) ثم تم تحويلها باستخدام خلية DH5 المختصة كيميائيًا (Tsingke Biotechnology، China). تم إرسال مستعمرة واحدة من وسط مرق ليسوجيني (LB) مع الأمبيسلين إلى شركة Tsingke Biotechnology Co. Ltd. للتسلسل. أظهرت محاذاة التسلسل أن الجزء الخاص بنا كان Dicer-1. تمت إضافة تسلسل المروج T7 (5′-GGA TCC TAA TAC GAC TCA CTA TAG G -3 ′) إلى الطرف 5 of من الاشعال التضخيم لـ Dicer -1 (519 نقطة أساس؛ للأمام: 5 ′) -GTG ATG CTG GAG TTG GGT TT -3 ′؛ الخلف: 5′-AGA ATG AGT CGC CCA ATG TC -3 ′) وGFP (467 نقطة أساس؛ للأمام: 5′-CTT GAA GTT GAC CTT GAT مجلس التعاون الخليجي -3 ′؛ عكسي: 5′-TGG TCC CAA TTC TCG TGG AAC - 3 ′) قوالب dsRNA (مادة تكميلية 1- نص S1). تم استخراج منتجات PCR لقوالب الرنا المزدوج الجديلة باستخدام كحول هيدروكسي بنزين / كلوروفورم / أيزواميل (25:24:1) (سولاربيو، الصين). تم إنشاء الرنا المزدوج الجديلة باستخدام T7 RNAi Transcription Kit (Vazyme Biotech، الصين) ثم تمت تنقيته بواسطة هيدروكسي بنزين / كلوروفورم / كحول الأيزواميل (50:49:1) (سولاربيو). أخيرًا، تم تقييم الرنا المزدوج الجديلة باستخدام الفصل الكهربائي لهلام الاغاروز وNanoDrop 2000 (Thermo Scientific، الولايات المتحدة الأمريكية) وتخزينه عند درجة حرارة 80 درجة.

كان محاكاة miR -71-5 عبارة عن RNA صغير مزدوج الجديلة مصمم وفقًا لتسلسل miR -71-5 (21 nt، مادة تكميلية 1- نص S1). يتكون قالب محاكاة miR-71-5 من اثنين من الحمض النووي المزدوج الذي تقطعت به السبل يحتوي على مروج T7: تم إنشاء أحدهما بواسطة قليل النوكليوتيد A1 (5′-GAT CAC TAA TAC GAC TCA CTA TAG GGT GAA AGA CAT GGG TAA TGA GAA A -3 ′) وأليغنوكليوتيد A2 (5′-TTT CTC ATT ACC CAT GTC TTT CAC CCT ATA GTG AGT CGT ATT AGT GAT C-3 ′) باستخدام هبوط PCR؛ تم إنشاء الآخر بواسطة قليل النوكليوتيد B1 (5′-GAT CAC TAA TAC GAC TCA CTA TAG GGT CTC ATT ACC CAT GTC TTT CAA A-3 ′) وأليغنوكليوتيد B2 (5′-TTT GAA AGA CAT GGG TAA TGA GAC CCT ATA GTG AGT CGT ATT AGT GAT C-3 ′) باستخدام لمس PCR. تم تصميم محاكي التحكم وفقًا لتسلسل GFP (19 nt، مادة تكميلية 1-Text S1). تم الحصول على قالب محاكاة التحكم أيضًا من خلال اثنين من الحمض النووي المزدوج تقطعت بهم السبل يحتويان على مروج T7: تم إنشاء أحدهما بواسطة قليل النوكليوتيد C1 (5′-GAT CAC TAA TAC GAC TCA CTA TAG GGG CAA GCT GAC CCT GAA GTT AA{{33} } ′) وأليغنوكليوتيد C2 (5′-TTA ACT TCA GGG TCA GCT TGC CCC TAT AGT GAG TCG TAT TAG TGA TC -3 ′) باستخدام هبوط PCR؛ تم إنشاء الآخر بواسطة قليل النوكليوتيد D1 (5′-GAT CAC TAA TAC GAC TCA CTA TAG GGA ACT TCA GGG TCA GCT TGC AA-3′) وأليغنوكليوتيد D2 (5′-TTG CAA GCT GAC CCT GAA GTT CCC TAT AGT GAG TCG TAT TAG TGA TC -3 ′) باستخدام لمس PCR. تم إنشاء miR -71-5 ومحاكيات التحكم باستخدام T7 RNAi Transcription Kit ثم تم استخلاصها بواسطة هيدروكسي بنزين / كلوروفورم / كحول أيزو أميل (50:49:1). تم تقييم المستخلص باستخدام الترحيل الكهربائي لهلام الاغاروز و NanoDrop 2000 وتخزينه في درجة حرارة -80 درجة.

فوائد سيستانش للرجال - تقوية جهاز المناعة

تغذية الرنا المزدوج الجديلة

تم تجويع النمل الأبيض لمدة 12 ساعة قبل إطعامه (Zhou et al. 2008; Hamilton and Bulmer 2012). تم وضع ما مجموعه 18 نملًا أبيضًا في طبق بتري للخلية (D =35 مم) مع قطعة من ورق الترشيح (D =18 مم) تم ترطيبها بـ 60 ميكرولتر من الماء الخالي من RNase الذي يحتوي على 80 ميكروغرام dsDicer-1، 80 ميكروغرام dsGFP، 60 ميكروغرام محاكاة miRNA، أو 60 ميكروغرام محاكاة التحكم. بالنسبة للاختبارات الحيوية لتغذية Dicer-1 dsRNA، تم السماح للنمل الأبيض بتناول الورق المبلل لمدة 24 ساعة قبل التجارب. تم اعتبار النمل الأبيض المعالج بـ GFP بمثابة عناصر تحكم. بالنسبة للاختبارات الحيوية لتغذية محاكاة miRNA، تم السماح للنمل الأبيض بتناول الورق المبلل لمدة 48 ساعة قبل التجارب. تم اعتبار النمل الأبيض المعالج بالمحاكاة بمثابة عناصر تحكم.

رت-قبكر

تم استخدام خمس أو ستة مكررات من ثلاث مستعمرات للتعبير الجيني باستخدام RT-qPCR. تم تجميع ثلاثة نمل أبيض لكل تكرار لكل علاج لاستخراج الحمض النووي الريبي (RNA) بالكامل باستخدام Direct-zol™ RNA Miniprep Kit (Zymo Research، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تحديد نقاء وتركيز الحمض النووي الريبي (RNA) المستخرج باستخدام NanoDrop 2000. تم تحويل الحمض النووي الريبي (RNA) إلى cDNA باستخدام مجموعة كاشف PrimeScript ™ RT مع ممحاة gDNA (الوقت الحقيقي المثالي) (تاكارا، اليابان). تم إجراء RT-qPCR باستخدام نظام PCR QuantStudio ™ 3 في الوقت الحقيقي (Thermo Scientific) باستخدام ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix (Vazyme Biotech). يتم سرد الاشعال المحددة في المواد التكميلية 2-الجدول S1.

تركيز ميرنا

تم استخدام ستة مكررات من ثلاث مستعمرات لتحديد تركيز miRNAs باستخدام مجموعة MiPure Cell / Tissue miRNA (Vazyme Biotech، الصين). تم تجميع ثلاثة نمل أبيض لكل تكرار لكل علاج من أجل miRNAs. تم تحديد نقاء وتركيز miRNAs المستخرج باستخدام NanoDrop 2000.

تسلسل دي نوفو وتحليل النسخ لـ

Fifteen termites from three colonies per treatment were pooled for total RNA extraction using TRIzol Reagent (Invitrogen Life Technologies, USA). The concentration, quality, and integrity of the total RNA were determined using a NanoDrop spectrophotometer (Thermo Scientific). Sequencing libraries were generated using the TruSeq Stranded mRNA Sample Prep Kit (Illumina, USA) and sequenced on a HiSeq platform (Illumina) by Shanghai Personal Biotechnology Cp. Ltd. (China). Sequencing data were filtered by Cutadapt (v1.15) software. For the transcriptome sequencing project without a reference genome, Trinity (v2.5.1) software was used to montage clean reads for the transcripts for later analysis. NR (NCBI non-redundant protein sequences), GO (Gene Ontology), KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genome), Egg NOG (Evolutionary genealogy of genes: Non-supervised Orthologous Groups), and Swiss-Prot databases were used for gene functional annotation. Furthermore, DESeq (1.30.0) was used to analyze the differentially expressed genes under the condition of |log2FoldChange(FC)|>1 و ص<0.05. The genes were then mapped to GO terms, and the terms with significant enrichment were calculated by hypergeometric distribution under the condition of p<0.05 to reveal the possible functions of the candidate genes. Additionally, the genes were mapped to KEGG pathways to determine their possible functions. 

cistanche tubulosa-تحسين الجهاز المناعي

الحركة

تم تحليل تسع مكررات من ثلاث مستعمرات لمقارنة مسافة حركة النمل الأبيض Dicer-1-المكتوم مقابل النمل الأبيض المعالج بـ GFP. بعد يوم واحد من التغذية الفموية لـ dsDicer-1 أو dsGFP، تم وضع نمل أبيض واحد لكل تكرار لكل علاج في طبق بتري جديد للخلية (D =90 مم) مع قطعة من ورق الترشيح مبللة بالمعلق المخروطي (108 كونيديا / مل). ثم استخدمنا علامة سوداء لتتبع حركة النمل الأبيض على غطاء شفاف لمدة 10 ثواني. تم قياس مسافة الحركة باستخدام ورق شبكي (1 × 1 مم).

الاستدراج

تم تحليل تسع مكررات من ثلاث مستعمرات لمقارنة عدد سلوكيات العناية الشخصية بين النمل الأبيض الذي تم إسكاته - 1-والمعالج بـ GFP. بعد يوم واحد من التغذية الفموية لـ dsDicer-1 أو dsGFP، تم وضع ثلاثة نمل أبيض لكل تكرار لكل علاج في طبق بتري جديد للخلية (D =35 مم) مع قطعة من ورق الترشيح المبلل (D{{ 4}} مم) ثم تلوثت بالكونيديا الفطرية (108 كونيديا/مل). تم تسجيل السلوكيات بالفيديو لمدة 15 دقيقة باستخدام كاميرا رقمية عالية الدقة (سوني، اليابان). تم فحص مقاطع الفيديو كل 10 ثوانٍ لمراقبة ما إذا كانت سلوكيات الاستمالة (أفواه النمل الأبيض تجاه أجسام العش) قد حدثت بين النمل الأبيض الملوث بالفطريات.

أكل لحوم البشر

تم تحليل تسع مكررات من ثلاث مستعمرات لمعرفة تأثير Dicer {{0}} مقابل GFP على سلوك أكل لحوم البشر تجاه الجثث الملوثة بالفطريات. تم وضع ستة نمل أبيض لكل تكرار لكل علاج في طبق بتري خلية (D =35 مم) مع قطعة من ورق الترشيح الرطب (D =18 مم) تحتوي على dsDicer -1 أو dsGFP. تم السماح لهم بتغذية الرنا المزدوج الجديلة عن طريق الفم لمدة يوم واحد، وبعد ذلك، تم وضع جثة واحدة ملوثة بالفطريات المحتضنة لمدة 0 يوم في طبق بتري الخلية حيث تم تربية النمل الأبيض المعالج. بعد يوم واحد من التربية معًا، تم أكل الجثة الملوثة بالفطريات إما بالكامل (درجة اختبار عالية =2)، أو تم أكلها جزئيًا (درجة اختبار منخفضة =1)، أو لم يتم أكلها (لا توجد درجة اختبار {{10 }}) (مادة تكميلية 1-الشكل S1) بواسطة النمل الأبيض الستة.

دفن

تم تحليل تسع مكررات من مستعمرتين لمعرفة تأثير Dicer-1 مقابل GFP على سلوك دفن الجثث الملوثة بالفطريات. تم وضع ستة نمل أبيض لكل تكرار لكل علاج في طبق بتري خلية (D =35 مم) مع قطعة من ورق الترشيح الرطب (D =18 مم) تحتوي على dsDicer -1 أو dsGFP. سُمح لهم بيوم واحد من التغذية الفموية للـ dsRNA. بعد ذلك، تم تحضين جثة واحدة ملوثة بالفطريات لمدة يومين، وتم إضافة التربة إلى طبق بيتري الذي تم فيه تربية النمل الأبيض الستة المعالج. بعد يوم واحد من التربية معًا، تم دفن الجثة الملوثة بالفطريات إما بالكامل (درجة اختبار عالية =2)، أو مدفونة جزئيًا (درجة اختبار منخفضة =1)، أو لم يتم دفنها (لا توجد درجة اختبار {{10 }}) (مادة تكميلية 1-الشكل S2) بواسطة النمل الأبيض الستة.

نشاط مضاد للفطريات

تم تحليل ستة مكررات من ثلاث مستعمرات لمعرفة تأثير Dicer {{0}} و miR -71-5 على قدرة النمل الأبيض على تثبيط نمو الفطريات. تم تجميع خمسة نمل أبيض لكل تكرار لكل علاج وسحقهم باستخدام النيتروجين السائل ثم تم إذابتهم في 100 ميكرولتر من محلول ملحي بنسبة 0.9٪. تم الطرد المركزي للمادة المتجانسة عند 6000 × جم لمدة خمس دقائق عند 4 درجات للحصول على 80 ميكرولتر من المادة الطافية. بعد ذلك، تم طرد المادة الطافية مرة أخرى للحصول على 50 ميكرولتر من المادة الطافية. بالنسبة للنشاط المضاد للفطريات، تم استخدام 96-صفيحة ميكروية جيدة لقياس امتصاص العينات وضوابط النمو والفراغات القياسية لحساب انخفاض نمو الفطريات: (1) 50 ميكرولتر من دكستروز البطاطس (PD)، 2 تم خلط ميكرولتر من الكونيديا الفطرية (108 كونيديا / مل)، و5 ميكرولتر من الطاف لكل بئر للعينة؛ (2) تم خلط 50 ميكرولتر من دكستروز البطاطس (PD)، و2 ميكرولتر من الكونيديا الفطرية (108كونيديا/مل)، و5 ميكرولتر من محلول ملحي بنسبة 0.9% لكل بئر للتحكم في نمو الفطريات؛ (3) تم خلط 50 ميكرولتر من دكستروز البطاطس (PD) و7 ميكرولتر من محلول ملحي بنسبة 0.9٪ لكل بئر للفراغ القياسي. بعد 24 ساعة من الزراعة في شاكر درجة حرارة ثابتة (150 دورة في الدقيقة عند 25 ± 1 درجة)، تم إجراء القياس في مقياس الطيف الضوئي الميكروسكوبي (600 نانومتر؛ الحرارية العلمية).

نجاة

لتحديد تأثير التغذية الفموية لـ dsDicer-1 على بقاء النمل الأبيض، تم نشر النمل الأبيض من ثلاث مستعمرات لتحديد بقاء Dicer-1-صامت (42 نمل أبيض في المجمل، 14 نمل أبيض لكل مستعمرة) وGFP- معالجة (42 نملًا أبيضًا في المجموع، 14 نملًا أبيضًا لكل مستعمرة) أثناء التلوث الفطري. بالنسبة لعناصر التحكم، تم نشر 56 نملًا أبيضًا من مستعمرتين لتحديد مدى بقاء Dicer -1-المسكت (28 نملًا أبيضًا في المجموع، 14 نملًا أبيضًا لكل مستعمرة) والنمل الأبيض المعالج بـ GFP (28 نملًا أبيضًا في المجموع، 14 نملًا أبيضًا لكل مستعمرة). عند إجراء التجارب، تم تربية سبعة نمل أبيض في طبق بتري للخلية (D =35 مم) مع قطعة من ورق الترشيح (D =18 مم) مبللة بماء خالي من RNase يحتوي على dsDicer{{17} } أو dsGFP، بينما كان النمل الأبيض ملوثًا بالفطريات ثم تم تربيته لمدة عشرة أيام للمراقبة اليومية لبقائهم على قيد الحياة. لتحديد تأثير التغذية الفموية لمحاكاة miR-71-5 على بقاء النمل الأبيض، تم نشر النمل الأبيض من ثلاث مستعمرات لتحديد بقاء miR-71-5 (42 نملًا أبيضًا في المجموع، 14 نملًا أبيضًا لكل مستعمرة) والتحكم ( 42 نملًا أبيضًا في المجموع، 14 نملًا أبيضًا لكل مستعمرة) النمل الأبيض المعالج بالمحاكاة أثناء التلوث الفطري. بالإضافة إلى ذلك، تم نشر 56 نملًا أبيضًا من مستعمرتين لتحديد مدى بقاء miR- 71-5 (28 نملًا أبيضًا في المجموع، 14 نملًا أبيضًا لكل مستعمرة) والتحكم (28 نملًا أبيضًا في المجموع، 14 نملًا أبيضًا لكل مستعمرة) النمل الأبيض المعالج بالمحاكاة. عند إجراء التجارب، تم تربية سبعة نمل أبيض في طبق بتري للخلية (D=35 مم) مع قطعة من ورق الترشيح (D=18 مم) مبللة بمياه خالية من RNase تحتوي على miR{{35} } محاكاة أو محاكاة التحكم. بعد يومين من التغذية عن طريق الفم، تم تلوث النمل الأبيض بالفطريات ثم تمت تربيته لمدة عشرة أيام للمراقبة اليومية لبقائه على قيد الحياة. تمت إزالة النمل الأبيض الميت في الوقت المناسب.

تحليل احصائي

تم إجراء جميع تحليلات البيانات في IBM SPSS، الإصدار 19. وتم استخدام اختبار Shapiro-Wilk لاكتشاف ما إذا كانت مجموعات البيانات موزعة بشكل طبيعي. وبالنظر إلى أن التعبير الجيني، وأكل لحوم البشر، وبيانات الدفن كانت موزعة بشكل غير طبيعي، تم استخدام اختبار ويلكوكسون. بدلا من ذلك، تم توزيع البيانات من تركيز ميرنا، والحركة، والاستمالة، والنشاط المضاد للفطريات عادة، وتم استخدام اختبار t المقترن. تم تحليل البقاء على قيد الحياة باستخدام طريقة كابلان ماير لعمر في ظل ظروف العلاج المختلفة. وكان مستوى الأهمية ص<0.05 in this study.

نتائج

ملف تعريف تعبير mRNA للنمل الأبيض Dicer-1 الصامت

لتحديد تأثير Dicer{{0}} على ملف تعريف التعبير الجيني للنمل الأبيض، تم إجراء تسلسل mRNA لـ Dicer-1- النمل الأبيض الصامت. بعد يوم واحد من التغذية عن طريق الفم لتعبير dsDicer -1، Dicer -1 (الشكل 1A؛ n=6، p <0.05؛ اختبار ويلكوكسون) وبالتالي تركيز miRNA (الشكل 1B؛ df) =5، ص<0.05; paired t-test) were significantly decreased in termites. A total of 1262 mRNAs were significantly altered in the whole bodies of Dicer-1-silenced termites (upregulated: 562 mRNAs; downregulated: 700 mRNAs; Fig. 1C and Supplementary material 2-Table S2). The differentially expressed genes (DEGs) were mapped to the salivary secretion, glycolysis, citrate cycle, and 29 other KEGG pathways (Fig. 1D–F and Supplementary material 2-Table S3). In addition, the DEGs were clustered into the ATP generation from ADP, structural constituent of the cuticle, defense response, glutathione transferase activity, oxidation–reduction process, and 171 other GO terms (Fig. 2 and Supplementary material 2-Table S4).

الشكل 1: الملف التعريفي للتعبير الجيني في أجسام النمل الأبيض المرخص من Dicer-1- بالكامل. تعبير المقامر-1. يتم عرض البيانات على أنها متوسط ​​± SEM. *ص<0.05. B The concentration of miRNAs. The data are shown as the mean±SEM. *p<0.05. C The number of diferentially expressed genes (DEGs). D The DEGs mapped to salivary secretion. ATP1B, Sodium/potassium-transporting ATPase subunit beta; ATP2B, Plasma membrane calcium-transporting ATPase 1; PKC, Protein kinase C alpha type; CALM, Calmodulin-like protein; LYZ, Lysozyme C. E The DEGs mapped to glycolysis. GPI, Glucose-6-phosphate isomerase; PFKC, ATP-dependent 6-phosphor fructokinase; TIM, Triosephosphate isomerase; GAPDH, Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase; PGK, Phosphoglycerate kinase; MINPP1, Multiple inositol polyphosphate phosphatase 1; GPMA, 2,3-bisphosphoglycerate-dependent phosphoglycerate mutase; ENO, Enolase. F DEGs mapped to citrate cycle. PCK, phosphoenolpyru vate carboxykinase [GTP]; PYC, pyruvate carboxylase; MDH1, malate dehydrogenase; SUCD, succinate–CoA ligase [ADP-forming]. Red letters indicate upregulation; blue letters indicate downregulation

الشكل 2: الخرائط الحرارية لـ DEGs متجمعة في مصطلحات GO المتعلقة بالدفاع. جيل ATP من ADP. ب- المكون الهيكلي للبشرة. ج-رد الدفاع. د نشاط ترانسفيراز الجلوتاثيون. هـ عملية الأكسدة والاختزال

التحقق من RT – qPCR لـ DEGs من mRNA-seq

ارتبط تحلل السكر ودورة السترات وتوليد ATP من ADP باستقلاب الكربوهيدرات والطاقة، حيث تم ربط ثمانية DEGs (glyceraldehyde{{0}} فوسفات ديهيدروجينيز، 2، 3- إنزيم فوسفوجليسيرات المعتمد على ثنائي الفوسفوجليسرات، تم التحقق من أن إنولاز، إيزوميراز ثلاثي الفوسفات، فسفوفركتوكيناز 6- المعتمد على ATP، فوسفونولبيرو فيت كربوكسي كيناز [GTP]، ليجاز السكسينات-CoA [تشكيل ADP] الوحدة الفرعية ألفا -2، ونازعة هيدروجين المالات) تم التحقق من أنها تم تقليل تنظيمها بشكل كبير بعد Dicer -1 إسكات (الشكل 3A–H؛ n=6، p <0.05؛ اختبار ويلكوكسون)، مما يشير إلى اضطرابات تحلل السكر، ودورة السيترات، وتوليد ATP، وبالتالي استقلاب الكربوهيدرات والطاقة في الجسم بأكمله من Dicer-1-إسكات النمل الأبيض. DEGs (defensin و terminicin) في الاستجابة الدفاعية المشفرة AMPs. تم زيادة التعبير عن هذه الجينات بشكل ملحوظ في النمل الأبيض الصامت Dicer-1-مقارنة بذلك الموجود في النمل الأبيض المعالج بـ GFP (الشكل 3I, J; n=5 أو 6, p<0.05; Wilcoxon test). In the oxidation–reduction process, cytochrome P450 9e2 and peroxiredoxin-4 were significantly altered after Dicer-1 silencing in termites (Fig. 3K, L; n = 6, p<0.05; Wilcoxon test). These results implied an important effect of Dicer-1 on the immune response and oxidation–reduction reaction in whole-body of the termites. The effect of Dicer‑1 on behavioural disease defences in termite groups 

لتحديد تأثير Dicer-1 على الاستجابة السلوكية للتلوث الفطري، قمنا باختبار أربعة دفاعات سلوكية مهمة وهي الحركة والاستمالة وأكل لحوم البشر والدفن في النمل الأبيض الصامت Dicer-1-. أظهرت نتائجنا أن الحركة (الشكل 4A، t=7.013، df=8، p<0.01; paired t-test; Supplementary material 1-Fig. S3 and Video S1), grooming (Fig. 4B, t=5.949, df=8, p<0.01; paired t-test; Supplementary material 1-Fig. S4 and Video S2), cannibalistic (Fig. 4C, n =9, p<0.05; Wilcoxon test; Supplementary material 1-Fig. S1 and Video S3) and burial (Fig. 4D; n=9, p<0.05; Wilcoxon test; Supplementary material 1-Fig. S2 and Video S4) behaviors were significantly reduced in Dicer-1-silenced termites compared to GFP-treated termites, suggesting an important role of Dicer-1 in driving behavioral disease defenses in termite colonies.

الشكل 3: التحقق RT-qPCR من DEGs من mRNA-seq. الجينات A-H المرتبطة باستقلاب الكربوهيدرات والطاقة. جينات I-J المرتبطة بالاستجابة المناعية. جينات K – L المرتبطة بتفاعلات الأكسدة والاختزال. يتم عرض البيانات على أنها متوسط ​​± SEM. *ص<0.05

تأثير Dicer-1 و miR-71‑5 على القدرات المضادة للفطريات في النمل الأبيض

لتحديد تأثير miRNAs على الاستجابة الفسيولوجية للتلوث الفطري، قمنا باختبار إجمالي الأنشطة المضادة للفطريات للنمل الأبيض Dicer-1- المُسكت. أظهرت نتائجنا أن النشاط المضاد للفطريات انخفض بشكل ملحوظ (الشكل 5A؛ t=−3.046, df=5, p<0.05; paired t-test) in Dicer-1-silenced termites. Furthermore, miR-71-5 was selected for further testing to determine its role in physiological defense, which was chosen according to the comparative profiling of miRNAs and mRNAs in fungus-contaminated versus naive termites and miRNA-mRNA analysis (data unpublished). We found that the antifungal activity (Fig. 5B; t=−4.000, df=5, p<0.05; paired t-test) was significantly reduced in termites treated with miR-71-5 simulants compared to those treated with simulant controls. These results suggested that miRNAs played an important role in driving physiological disease defenses in termites.

الشكل 4. تأثير خلل تنظيم ميرنا على السلوكيات الاجتماعية الدفاعية في مجموعات النمل الأبيض. A الحركة، B الاستمالة، C سلوكيات أكل لحوم البشر وD سلوكيات الدفن لدى Dicer-1-التي تم إسكاتها مقابل مجموعات النمل الأبيض المعالجة بـ GFP. يتم عرض البيانات على أنها متوسط ​​± SEM. *ص<0.05, **p<0.01

الشكل 5. تأثير خلل تنظيم ميرنا على الدفاع الفسيولوجي لدى أفراد النمل الأبيض. النشاط المضاد للفطريات للنمل الأبيض -1-المُصمت مقابل النمل الأبيض المعالج بـ GFP. B النشاط المضاد للفطريات لـ miR -71-5 مقابل التحكم في النمل الأبيض المعالج بالمحاكاة. يتم عرض البيانات على أنها متوسط ​​± SEM. *ص<0.05

أثر Dicer-1 وmiR-71-5 على بقاء النمل الأبيض الملوث بالفطريات

نظرًا لأن كلا من محاكاة dsDicer-1 وmiR-71-5 أدت إلى انخفاض النشاط المضاد للفطريات للنمل الأبيض، فقد اختبرنا إمكاناتهما في المكافحة البيولوجية للنمل الأبيض. لقد وجدنا أن النمل الأبيض الصامت Dicer-1- الملوث بالفطريات أظهر انخفاضًا ملحوظًا في معدل البقاء على قيد الحياة مقارنة بالنمل الأبيض المعالج الآخر (dsDicer-1+fungus vs. dsGFP+fungus: χ2=81.839, p<0.001; dsDicer-1+fungus vs dsDicer-1+Tween 80: χ2=63.070, p<0.001; dsDicer-1+fungus vs dsGFP+Tween 80: χ2=65.474, p<0.001). GFP-treated termites contaminated with fungus showed significantly decreased survival compared to the termites without fungal contamination (dsGFP+fungus versus dsDicer-1+Tween 80: χ2=58.636, p<0.001; dsGFP+fungus versus dsGFP+Tween 80: χ2=68.849, p<0.001). There was no significant difference between dsDicer-1- and dsGFP-treated termites without fungal contamination (χ2=2.037, p=0.154) (Fig. 6A). Additionally, the survival of fungus-contaminated termites treated with the miR- 71-5 simulant was signifcantly decreased compared to that of other treated termites (miR-71-5+fungus vs. control+fungus: χ2=63.593, p<0.001; miR-71-5+fungus vs. miR- 71–5+Tween 80: χ2=60.585, p<0.001; miR-71-5+fungus vs. control+Tween 80: χ2=67.129, p<0.001). The survival of fungus-contaminated termites treated with the simulant control was significantly decreased compared to that of the termites without fungal contamination (control+fungus vs. miR-71-5+Tween 80: χ2=61.065, p<0.001; control+fungus vs. control+Tween 80: χ2=68.064, p<0.001). There was no significant difference in survival between termites treated with the miR-71-5 simulant and simulant control without fungal contamination (miR-71-5+Tween 80 vs. control+Tween 80: χ2=1.000, p=0.317) (Fig. 6B). These results suggested a good effect of miRNAs coupled with entomopathogens in biologically controlling termites.

مناقشة

تؤدي miRNAs وظائف متعددة، مثل تنظيم استقلاب الكربوهيدرات والطاقة، والاستجابة المناعية، وتفاعلات الأكسدة والاختزال، وعمليات الحياة الأخرى في أجسام النمل الأبيض بأكملها. كما هو متوقع، أدى تناول dsDicer-1 في النمل الأبيض إلى إسكات Dicer-1 ومن ثم تقليل تركيز miRNA، مما يشير إلى نجاح تحريض خلل تنظيم miRNA. أظهر تحليل النسخ أن إسكات Dicer-1 كان مرتبطًا بـ 32 مسارًا لـ KEGG و175 مصطلحًا لـ GO. في مستعمرات الحشرات الاجتماعية، يمكن أن يعمل إفراز اللعاب كمطهر خارجي ويعمل جنبًا إلى جنب مع السلوك الاجتماعي مثل المغذي والاستمالة والتعشيش لرعاية النسل ورفاق العش والمستعمرات (Bulmer et al. 2009; Hamilton et al. 2011) ؛ هاميلتون وبولمر 2012). يشارك تحلل السكر ودورة السيترات وتوليد ATP من ADP في استقلاب الكربوهيدرات والطاقة. نظرًا لأن الاستجابات المناعية المتزايدة وأداء السلوكيات الاجتماعية مكلفة للغاية، فإن اضطرابات استقلاب الكربوهيدرات والطاقة لها آثار سلبية على هذه العمليات (Liu et al. 2020; Hasan et al. 2021a, b; Xu et al. 2021a, b). يرتبط المكون الهيكلي للبشرة ببشرة الحشرات، مما يشكل الحاجز الأول لمنع مسببات الأمراض من غزو الهيموكول (Syazwan et al. 2021). العديد من DEGs المشاركة في الاستجابة الدفاعية، ونشاط ترانسفيراز الجلوتاثيون، وعملية تقليل الأكسدة قادرة على تشفير الببتيدات المضادة للميكروبات (AMPs)، وبروتينات إزالة السموم، والإنزيمات المضادة للأكسدة لزيادة مقاومة الحشرات وتحملها ضد مسببات الأمراض (Liu et al. 2015, 2019 أ). من المرجح أن تساهم هذه الوظائف المتعلقة بالدفاع في المناعة الاجتماعية في مستعمرات النمل الأبيض. شاركت بقية مسارات KEGG ومصطلحات GO في الجهاز العصبي والجهاز الهضمي وطول العمر والتطور وما إلى ذلك (المادة التكميلية 2- الجدول S3 و S4). بالإضافة إلى ذلك، فإن بعض DEGs (مثل جينات استقلاب الكربوهيدرات والطاقة) في النمل الأبيض الصامت Dicer-1 كانت من الميكروبات (المادة التكميلية 2-الجدول S2)، والتي ربما كانت متكافلة في القناة الهضمية وقد تكون مكونات مهمة المشاركة في العمليات الحياتية للمضيفين. لذلك، من المحتمل أن يكون للجزيئات الدقيقة miRNA تأثيرًا عالميًا على جسم النمل الأبيض بأكمله.

الشكل 6. تأثير تنظيم خلل ميرنا على بقاء مجموعات النمل الأبيض الملوثة بالفطريات. بقاء النمل الأبيض - 1-المُصمت مقابل النمل الأبيض المعالج بـ GFP مع أو بدون تلوث فطري؛ B بقاء miR -71-5 مقابل النمل الأبيض المعالج بالمحاكاة مع أو بدون تلوث فطري. اختلاف الحروف يدل على اختلافات معنوية، ص<0.05

تعد استقلاب الكربوهيدرات والطاقة والاستجابة المناعية وتفاعلات الأكسدة والاختزال مهمة بالنسبة للـ miRNAs في تحفيز المناعة الاجتماعية. يعتبر سلوك الحيوان عملية تعتمد على الطاقة، وبالتالي فإن بعض مثبطات الطاقة تجعل الحيوانات تتحرك ببطء وحتى تموت (Davidson 1930; Schuler and Casida 2001). في مستعمرات النمل الأبيض، تؤدي اضطرابات تحلل السكر أو دورة السيترات إلى انخفاض مستويات ATP وتمنع سلوك الحركة (Hassan et al. 2021a, b; Xu et al. 2021a, b). تؤدي اضطرابات دورة السيترات أيضًا إلى تقليل النشاط المضاد للفطريات للنمل الأبيض، مما يؤدي إلى زيادة العدوى والوفيات (Liu et al. 2020). بالإضافة إلى ذلك، نظرًا لأنه تم الإبلاغ عن مشاركة المتكافلات في أمعاء النمل الأبيض في دفاعات المرض المضيف من خلال توفير الإنزيمات (Rosengaus et al. 2014) والمستقلبات (Inagaki and Matsuura 2018)، فمن المرجح أن تؤدي الاضطرابات الأيضية في المتكافلات في الأمعاء إلى تقليل الكفاءة المناعية المشتقة من المتكافل. وبالتالي تضاءلت دفاعات مرض النمل الأبيض. في دراستنا، تم التحقق من أن ثمانية جينات استقلابية تعاني من انخفاض كبير في التنظيم، مما يشير إلى اضطرابات تحلل السكر ودورة السيترات في أجسام النمل الأبيض Dicer-1- بأكملها. اقترحنا أن استقلاب الكربوهيدرات والطاقة بوساطة ميرنا كان آلية كيميائية حيوية مهمة في تحفيز المناعة الاجتماعية وأن تعطيل هذه العملية من المرجح أن يقلل من دفاعات الأمراض السلوكية والفسيولوجية في مستعمرات النمل الأبيض. يستحث الجهاز المناعي للحشرات عددًا كبيرًا من جزيئات المستجيب لمكافحة مسببات الأمراض في الجسم الحي. الديفينسينات عبارة عن AMPs مضغوطة وغنية بالسيستين ومقاومة للبروتياز ولها نشاط واسع النطاق ضد البكتيريا والفطريات والطفيليات الأخرى (Weber 2021). تيرميسين هو ديفينسين مضاد للفطريات خاص بالنمل الأبيض والذي يؤدي إسكاته إلى انخفاض النشاط المضاد للفطريات وبالتالي زيادة معدل وفيات النمل الأبيض الملوث بالفطريات (هاميلتون وبولمر 2012). غالبًا ما تعمل أنظمة إزالة السموم من الحشرات ومضادات الأكسدة جنبًا إلى جنب مع الجهاز المناعي، مما يقلل بشكل فعال من خطر السموم وأنواع الأكسجين التفاعلية أثناء التفاعلات بين المضيف ومسببات الأمراض (Syazwan et al. 2021). تعد إنزيمات الأكسدة السيتوكروم P450 مسؤولة عن تحفيز أكسدة واستقلاب السموم المسببة للأمراض وإنتاج الجذور الحرة أو ROS (Shankar and Mehendale 2014). تشتمل عائلة البيروكسيروكسين على إنزيمات مضادة للأكسدة تحفز تقليل أنواع الأكسجين التفاعلية (Xu et al. 2021a; b). أثبتت نتائجنا أن إسكات Dicer-1 غيّر بشكل كبير التعبير الجيني للديفينسين والتريسين والسيتوكروم P450 9e2 والبيروكسيروكسين-4، مما يشير إلى أن miRNAs لعبت أدوارًا مهمة في تنظيم الاستجابة المناعية و تفاعلات الأكسدة والاختزال في الجسم كله للنمل الأبيض. لذلك، نقترح أن استقلاب الكربوهيدرات والطاقة، والاستجابة المناعية، وتفاعلات الأكسدة والاختزال قد تشارك في آلية القيادة للمناعة الاجتماعية على شكل ميرنا، وقد يؤثر تعطيلها سلبًا على المناعة الاجتماعية في مستعمرات النمل الأبيض.

cistanche tubulosa-تحسين الجهاز المناعي

في الواقع، فإن خلل تنظيم ميرنا له آثار سلبية على الحركة وبالتالي الدفاع السلوكي في مستعمرات النمل الأبيض. على عكس الحشرات الانفرادية، طورت الحشرات الاجتماعية ذخيرة غنية من الدفاعات السلوكية، حيث تكتشف بشكل جماعي وجود مسببات الأمراض، وتحد من انتشار مسببات الأمراض، وتقلل من خطر إصابة الأفراد بالعدوى (Van Meyel et al. 2018; Liu et al. 2019a). يقوم العمال الأكبر سنًا بمهام خطيرة خارج العش ويتعرضون للتلوث بسهولة. عندما تكون ملوثة، يميل رفاق العش إلى التجمع تجاه العمال الملوثين والعناية بهم (Liu et al. 2019b). يقوم كل من العمال الملوثين ومقدمي الرعاية لهم بزيادة المسافة بعيدًا عن بقية رفاق العش الساذجين. تقوم الممرضات بأخذ الحضنات إلى عمق المستعمرة لزيادة المسافة بعيدًا عن العمال الملوثين (Stroeymeyt et al. 2018). تظهر هذه النتائج أن زيادة المسافة الجسدية بين أفراد المستعمرة هي استراتيجية فعالة للحد من انتقال مسببات الأمراض [تسمى "المناعة التنظيمية" (Liu et al. 2019a)]، ويجب أن يكون التنقل سلوكًا اجتماعيًا مهمًا، لأنه يضبط بشكل تكيفي المسافة بين الأفراد الملوثين ورفاق العش الساذجين. وجد حسن وزملاؤه أن النمل الأبيض عزز حركته بشكل كبير أثناء التلوث الفطري، مما أظهر المزيد من الحركة استجابةً لمسببات الأمراض (Hassan et al. 2021a, b). بالإضافة إلى ذلك، فإن سلوكيات الاستمالة وأكل لحوم البشر والدفن معروفة جيدًا في إدارة الأفراد والجثث الملوثة في مستعمرات الحشرات الاجتماعية. في النمل الأبيض الملوث بالفطريات، يحدث سلوك الاستمالة على الفور، قبل الإنبات (Liu et al. 2019b). في المقابل، لا يحدث سلوك أكل لحوم البشر إلا بعد ظهور المرض بشكل واضح على الأفراد الملوثين (Davis et al. 2018). بالنسبة لإدارة الجثث، غالبًا ما يُنظر إلى الجثث الطازجة على أنها مكافآت غذائية وتحفز أكل لحوم البشر من خلال إنتاج إشارة الموت المبكر. في المقابل، تعتبر الجثث المتحللة مخاطر عدوى وتحث على الدفن عن طريق إنتاج إشارات الوفاة المتأخرة (Sun et al. 2016). هنا، وجدنا أن إسكات Dicer-1 يثبط بشكل كبير الحركة والحركات الأخرى، مثل سلوكيات الاستمالة وأكل لحوم البشر والدفن، مما يشير إلى أن خلل تنظيم miRNA أظهر تأثيرًا عامًا على حركة النمل الأبيض وبالتالي أثر على الدفاعات السلوكية ضد مسببات الأمراض، ومسببات الأمراض. رفقاء العش الملوثين والجثث الملوثة بمسببات الأمراض في مستعمرات النمل الأبيض. بالنسبة لآلية القيادة، يمكن اعتبار الكربوهيدرات التي تتوسط ميرنا واستقلاب الطاقة أحد أهم العوامل البيوكيميائية (انظر المناقشة أعلاه). ولذلك، يمكن أن تشكل miRNAs الدفاعات السلوكية للنمل الأبيض.

كان لخلل تنظيم ميرنا أيضًا آثار سلبية على الدفاعات الفسيولوجية للنمل الأبيض. يزيد النمل الأبيض عادةً من قدرته المضادة للفطريات عن طريق تنظيم الجينات المناعية لتعزيز دفاعاته الفسيولوجية (Liu et al. 2015). توفر المواد المضادة للفطريات المشتقة من القناة الهضمية للنمل الأبيض القدرة على تثبيط نمو الفطريات لتعزيز دفاعاتهم الفسيولوجية (Rosengaus et al. 2014). ولذلك، كان إجمالي النشاط المضاد للفطريات مؤشرا فعالا لدفاعات المرض الفسيولوجية للنمل الأبيض. أظهرت الدراسات الحديثة أنه ليس فقط الجينات المناعية ولكن أيضًا استقلاب الكربوهيدرات والجينات المضادة للأكسدة هي مكونات مهمة تؤثر على النشاط المضاد للفطريات للنمل الأبيض (Liu et al. 2020; Zhao et al. 2020; Zhou et al. 2021). كان النمل الأبيض المخلوع أكثر عرضة للتلوث الفطري (Rosengaus et al. 2014). على الرغم من زيادة التعبيرات الجينية المناعية مثل الديفينسين والتريسين، إلا أن خلل تنظيم الحمض النووي الريبوزي -1- بوساطة Dicer قلل من التعبير عن استقلاب الكربوهيدرات والجينات المضادة للأكسدة داخل النمل الأبيض أو متكافلات الأمعاء، وبالتالي قلل بشكل كبير من إجمالي النشاط المضاد للفطريات للنمل الأبيض. بالإضافة إلى ذلك، أظهر النمل الأبيض المعالج بالمحاكاة miR-71-5 أيضًا انخفاضًا في إجمالي النشاط المضاد للفطريات، مما يشير أيضًا إلى التأثير السلبي لخلل تنظيم miRNA على الدفاعات الفسيولوجية في النمل الأبيض. علاوة على ذلك، كانت مجموعات النمل الأبيض التي تم تغذيتها إما بـ dsDicer-1 أو miR-71-5 أكثر عرضة للتلوث الفطري، مما يدل على زيادة في معدل وفيات العدوى. ولذلك، يمكن أن تشكل miRNAs المناعة الاجتماعية من خلال تحفيز دفاعات الأمراض السلوكية والفسيولوجية في مستعمرات النمل الأبيض.

الشكل 7. الآليات المحتملة الكامنة وراء المناعة الاجتماعية في مستعمرات النمل الأبيض والأهداف الجديدة لمكافحة الآفات البيولوجية. تؤثر miRNAs على نطاق واسع على جسم النمل الأبيض بالكامل، بما في ذلك A استقلاب الكربوهيدرات والطاقة، والاستجابة المناعية B، وتفاعلات الأكسدة والاختزال C، وما إلى ذلك. تم الإبلاغ عن D أن الكربوهيدرات واستقلاب الطاقة يلعبان أدوارًا مهمة في تنظيم كل من السلوك والنشاط المضاد للفطريات في النمل الأبيض. لذلك، من المحتمل أن تكون الكربوهيدرات واستقلاب الطاقة بوساطة ميرنا أحد العوامل الوراثية والكيميائية الحيوية التي تحرك الدفاعات السلوكية (مثل الحركة، والاستمالة، وأكل لحوم البشر، والدفن) والفسيولوجية (النشاط المضاد للفطريات) في مستعمرات النمل الأبيض. هـ ساعدت الاستجابة المناعية النمل الأبيض على منع تكاثر مسببات الأمراض وانتشارها في تجويف الجسم. تفاعل الأكسدة والاختزال يحمي النمل الأبيض من الأضرار التي تسببها السموم وأنواع الأكسجين التفاعلية الناتجة عن تفاعلات "المضيف والممرض". ولذلك، فإن الاستجابة المناعية بوساطة ميرنا وتفاعل الأكسدة والاختزال يلعبان دورًا مهمًا في دفع الدفاع عن الأمراض الفسيولوجية في النمل الأبيض. شكلت F miRNAs مناعة اجتماعية من خلال قيادة دفاعات الأمراض السلوكية والفسيولوجية في مستعمرات النمل الأبيض. من خلال استهداف miRNAs، يمكننا بشكل مصطنع زيادة قابلية مستعمرات النمل الأبيض لمسببات الأمراض الحشرية وبالتالي تعزيز المكافحة البيولوجية للنمل الأبيض.

على حد علمنا، هذا هو التقرير الأول عن الآلية المحتملة للmiRNAs الكامنة وراء المناعة الاجتماعية في مستعمرات النمل الأبيض. يمكن أن تؤثر miRNAs على إفراز اللعاب، والكربوهيدرات، واستقلاب الطاقة، وتوليد البشرة، والاستجابات المناعية، وتفاعلات الأكسدة والاختزال، وما إلى ذلك. من بينها، من المحتمل أن يكون استقلاب الكربوهيدرات والطاقة عاملاً كيميائيًا حيويًا مهمًا في قيادة الدفاعات السلوكية مثل الحركة، والاستمالة، وأكل لحوم البشر، والدفن في مستعمرات النمل الأبيض. بالإضافة إلى ذلك، من المحتمل أن يشارك استقلاب الكربوهيدرات والطاقة، والاستجابة المناعية، وتفاعلات تقليل الأكسدة في تحفيز الدفاعات الفسيولوجية للنمل الأبيض، مثل النشاط المضاد للفطريات.

لذلك، يمكن للمناعة الاجتماعية على شكل ميرنا أن تؤثر على قابلية مستعمرات النمل الأبيض للفطريات المسببة للأمراض؛ وبالتالي، قد تكون miRNAs أهدافًا فعالة للمكافحة البيولوجية للنمل الأبيض (الشكل 7). أثبتت العديد من الدراسات أن إسكات الجينات المستهدفة بوساطة RNAi يمكن أن يؤدي إلى موت الحشرات، مع إمكانات كبيرة لمكافحة الآفات الحشرية. في مكافحة آفات النمل الأبيض، تشو وآخرون. (2008) استهدف أولاً جينات الإندوجلوكاناز والهيكساميرات من خلال تغذية الرنا المزدوج الجدوى، مما يدل على جدوى مبيدات النمل الأبيض المعتمدة على الرنا. لتعزيز التأثير المميت في مستعمرات النمل الأبيض، تم استخدام مبيدات النمل الأبيض المستندة إلى RNAi إلى جانب الفطريات المسببة للأمراض الحشرية. يمكن أن يؤدي إسكات الترايسين وGNBP2 وTG وIDH وجينات الترميز الأخرى المقترنة بـ Metarhizium بوساطة RNAi إلى زيادة كبيرة في قابلية رفاق العش للكونيديا الفطرية المنقولة اجتماعيًا وبالتالي يؤدي إلى زيادة معدل وفيات العدوى (Hamilton and Bulmer 2012; Liu et al 2020؛ تشاو وآخرون 2020؛ تشو وآخرون 2021). في دراستنا، أثبتنا جدوى استهداف RNAs الصغيرة غير المشفرة من خلال التغذية لتحسين المكافحة البيولوجية للنمل الأبيض باستخدام Metarhizium. بالمقارنة مع الرنا المزدوج الجديلة الذي يستهدف الجين على وجه التحديد، كانت الرناوات الميكروية قادرة على استهداف عدد من الجينات ذات الوظائف نفسها أو وظائف مختلفة، وبالتالي يكون لها تأثير واسع النطاق على عمليات حياة النمل الأبيض. لذلك، من خلال استهداف miRNAs، أظهرت مجموعات النمل الأبيض انخفاضًا في دفاعات الأمراض السلوكية والفسيولوجية على المستويين الجماعي والفردي، مما يشير إلى تثبيط واسع النطاق للمناعة الاجتماعية للنمل الأبيض. من خلال استهداف miRNAs، أظهرت مجموعات النمل الأبيض بالتالي مستوى عالٍ من الوفيات أثناء التلوث الفطري، مما يشير إلى أنه يمكن استخدام miRNAs كمبيدات للنمل الأبيض لتعزيز المكافحة البيولوجية للنمل الأبيض عن طريق تقليل مناعتهم الاجتماعية. ولذلك، يمكن اعتبار miRNAs أهدافًا جديدة محتملة لمكافحة الآفات الحشرية.

مراجع

Berdnik D، Fan AP، Potter CJ، Luo L (2008) مسار معالجة MicroRNA ينظم تكوين الخلايا العصبية الشمية. كور بيول 18: 1754-1759. https://doi.org/10.1016/j.cub.2008.09.045

Bulmer MS، Bachelet I، Raman R، Rosengaus RB، Sasisekharan R (2009) استهداف وظيفة الفاعل المضاد للميكروبات في مناعة الحشرات كاستراتيجية لمكافحة الآفات. Proc Natl Acad Sci USA 106:12652–12657. https://doi.org/10.1073/pnas.0904063106

Chouvenc T، Efstathion CA، Elliott ML، Su NY (2013) مقاومة الأمراض الممتدة الناشئة من عش البراز للنمل الأبيض الجوفي. بروك آر سوك ب 280:20131885. https://doi.org/10.1098/ rspb.2013.1885

ديفيدسون دبليو إم (1930) روتينون كمبيد حشري ملامس. جي إيكون إنتومول 23:868–874. https://doi.org/10.1093/JEE/23.5.868

Davis HE، Meconcelli S، Radek R، McMahon DP (2018) يشكل النمل الأبيض استجاباتهم السلوكية الجماعية بناءً على مرحلة العدوى. مندوب العلوم 8:14433. https://doi.org/10.1038/ الصورة41598-018-32721-7

Esparza-Mora MA، Davis HE، Meconcelli S، Plarre R، McMahon DP (2020) تثبيط جزيء مناعي مُفرز يتداخل مع المناعة الاجتماعية للنمل الأبيض. أمام إيكول إيفول 8:75. https://doi.org/10. 3389/fevo.2020.00075

Gomez-Orte E، Belles X (2009) التحول المعتمد على MicroRNA في حشرات الهيميميتابولان. Proc Natl Acad Sci USA 106:21678– 21682. https://doi.org/10.1073/pnas.0907391106

Hamilton C، Bulmer MS (2012) الدفاعات الجزيئية المضادة للفطريات في النمل الأبيض الجوفي: يكشف تداخل الحمض النووي الريبي (RNA) في أدوار الجسم الحي للنهاية و GNBPs ضد مسببات الأمراض التي تتم مواجهتها بشكل طبيعي. ديف شركات Immunol 36: 372-377. https://doi.org/10.1016/j.dci. 2011.07.008

Hamilton C، Lejeune BT، Rosengaus RB (2011) العلاج الوقائي والوقاية: المناعة الاجتماعية في النمل النجاركامبونوتوس بنسلفانيكوس. بيول ليت 7: 89-92. https://doi.org/10.1098/rsbl. 2010.0466

Hasan A، Huang Q، Mehmood N، Xu H، Zhou W، Gao Y (2021a) تغيير حركة النمل الأبيض والتكيف استجابةً للعدوى بالفطريات المسببة للأمراض. جي إيكون إنتومول 114: 1256- 1263. https://doi.org/10.1093/jee/toab071

حسن أ، هوانغ كيو، شو إتش، وو جي، محمود ن (2021 ب) إسكاتفسفوفركتوكينازيضعف الجين تحلل السكر ويسبب حركة غير طبيعية في النمل الأبيض الجوفيشبكية تشينينسيسسنايدر. حشرة مول بيول 30: 57-70. https://doi.org/10. 1111/imb.12672

He S et al (2018) يساهم جنود النمل الأبيض في المناعة الاجتماعية عن طريق تصنيع إفرازات فموية قوية. حشرة مول بيول 27: 564-576. https://doi.org/10.1111/imb.12499

Hong M، Hwang D، Cho S (2018) مورفولوجيا الكريات الدموية والاستجابة المناعية الخلوية في النمل الأبيض (شبكية منتفخة). ي الحشرات العلوم 18:46. https://doi.org/10.1093/jisesa/iey039

Hussain A، Li YF، Cheng Y، Liu Y، Chen CC، Wen SY (2013) النسخ المرتبط بالمناعةكوبتوترميس فورموسانوسعمال الشيراكي: آلية الدفاع. بلوس واحد 8:e69543. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0069543

Inagaki T، Matsuura K (2018) التبادل المتبادل الممتد بين النمل الأبيض وميكروبات الأمعاء: تساهم المتكافلات الغذائية في نظافة العش. الخيال العلمي 105:52. https://doi.org/10.1007/ ث00114-018-1580-ص

Kumar S, Upadhyay RK (2021) إمكانات مكافحة النمل الأبيض لمختلف المكونات العضوية الحيوية مع إشارة خاصة إلى عائلة Asteraceae. WJPR 10:1109-1149. https://doi.org/10.20959/wjpr2 0213-19977

لي يس وآخرون (2004) الأدوار المميزة لذبابة الفاكهةDicer-1 وDicer-2 في مسارات إسكات siRNA/miRNA. الخلية 117: 69 – 81. https://doi.org/10.1016/S0092-8674(04)00261-2

Liu L، Li GH، Sun PD، Lei CL، Huang QY (2015) التحقق التجريبي والأساس الجزيئي للتحصين النشط ضد مسببات الأمراض الفطرية في النمل الأبيض. مندوب العلوم 5:15106. https://doi.org/10.1038/srep15106

Liu L، Wang W، Liu YL، Sun PD، Lei CL، Huang QY (2019a) تأثير سلوك التخصيص على المناعة الفطرية الفردية في النمل الأبيض الجوفيشبكية تشينينسيس(متساويات الأجنحة: Rhinotermitidae). ي الحشرات العلوم 19:6. https://doi.org/10.1093/jisesa/ iey119

Liu L، Zhao XY، Tang QB، Lei CL، Huang QY (2019b) آليات المناعة الاجتماعية ضد الالتهابات الفطرية في الحشرات الاجتماعية. السموم 11:244. https://doi.org/10.3390/toxins11050244

Liu L، Wang CC، Zhao XY، Guan JX، Lei CL، Huang QY (2020) الاضطرابات الأيضية التي تتوسطها نازعة الهيدروجين تعطل التحصين النشط ضد مسببات الأمراض الفطرية في النمل الأبيض الاجتماعي. J Pest Sci 93: 291–301. https://doi.org/10.1007/ ث10340-019-01164-ص

Lopez-Uribe MM، Sconiers WB، Frank SD، Dunn RR، Tarpy DR (2016) انخفاض الاستجابة المناعية الخلوية في سلالات الحشرات الاجتماعية. بيول ليت 12:20150984. https://doi.org/10.1098/rsbl.2015. 0984

Lucas KJ, Zhao B, Liu S, Raikhel AS (2015) تنظيم العمليات الفسيولوجية بواسطة microRNAs في الحشرات. Curr Opin علم الحشرات 11: 1-7. https://doi.org/10.1016/j.cois.2015.06.004

Rosengaus RB، Jordan C، Lefebvre ML، Traniello JFA (1999) سلوك إنذار مسببات الأمراض في النمل الأبيض: شكل جديد من التواصل في الحشرات الاجتماعية. Naturwissenschaften 86:544–548. https://doi.org/ 10.1007/s001140050672

Rosengaus RB، Lefebvre ML، Traniello JFA (2000) تثبيط إنبات الجراثيم الفطرية بواسطة nasutitermes: دليل على دور مطهر محتمل لإفرازات الجندي الدفاعية. ي كيم إيكول 26: 21-39. https://doi.org/10.1023/A:1005481209579

Rosengaus RB، Schultheis KF، Yalonetskaya A، Bulmer MS، DuComb WS، Benson RW، Thottam JP، Godoy-Carter V (2014) Symbiont مشتق -1،3-الجلوكاناز في حشرة اجتماعية: التبادلية وراء التغذية . الجبهة ميكروبيول 5:607. https://doi.org/10.3389/fmicb. 2014.00607

Schuler F، Casida JE (2001) هدف المبيد الحشري في الوحدة الفرعية PSST للمجمع I. Pest Manag Sci 57: 932–940. https://doi.org/10. 1002/ملاحظة 364

Seipke RF وآخرون (2011) واحدالعقديةيقوم Symbiont بتصنيع العديد من مضادات الفطريات لدعم فطر النمل الزراعيأكروميرميكس أوكتوسبينوسوس. بلوس واحد 6:e22028. https://doi.org/10.1371/journ al.pone.0022028

شانكار ك، مهيندال إتش إم (2014) السيتوكروم P450. في: Wexler P (ed) موسوعة علم السموم. Academic Press، pp 1125–1127 Stroeymeyt N، Grasse AV، Crespi A، Mersch DP، Cremer S، Keller L (2018) تقلل مرونة الشبكة الاجتماعية من انتقال المرض في حشرة eusocial. العلوم 362: 941-945. https://doi.org/10.1126/ science.aat4793

Sun Q، Haynes KF، Zhou XG (2016) التغيرات الديناميكية في إشارات الموت تعدل مخاطر ومكافآت إدارة الجثث في حشرة اجتماعية. وظيفة إيكول 31: 697-706. https://doi.org/10.1111/1365- 2435.12754

Syazwan SA، Lee SY، Sajap AS، Lau WH، Omar D، محمد R (2021) التفاعل بينميتارهيزيوم أنيسوبليايومضيفه النمل الأبيض الجوفيكوبوترميس كورفيجناثوسأثناء عملية العدوى. علم الأحياء 10:263. https://doi.org/10.3390/biolo gy10040263

Terrapon N et al (2014) الآثار الجزيئية للتنظيم الاجتماعي البديل في جينوم النمل الأبيض. نات كومون 5:3636. https://doi.org/10. 1038/نكومس4636

Van Meyel S، Körner M، Meunier J (2018) المناعة الاجتماعية: لماذا يجب أن ندرس طبيعتها وتطورها ووظائفها في جميع الأنظمة الاجتماعية. Curr Opin علم الحشرات 28: 1-7. https://doi.org/10.1016/j. cois.2018.03.004

Verma M، Sharma S، Prasad R (2009) البدائل البيولوجية لمكافحة النمل الأبيض: مراجعة. إنت Biodeter Biodegr 63: 959–972. https://doi.org/10.1016/j.ibiod.2009.05.009

Wang YL، Yang ML، Jiang F، Zhang JZ، Kang L (2013) التطوير المعتمد على MicroRNA الذي كشفه إسكات الجينات بوساطة RNA لـLmDicer1في الجراد المهاجر. علوم الحشرات ٢٠: ٥٣-٦٠. https://doi.org/10.1111/j.1744-7917.2012.01542.x

ويبر إف (2021) المناعة الفطرية المضادة للفيروسات: مقدمة. في: بامفورد دي إتش، زوكرمان إم (محررون) موسوعة علم الفيروسات. إلسفير، الصفحات من 577 إلى 583 Xu H, Huang QY, Gao YY, Wu J, Hasan A, Liu YT (2021a)آي دي إتشضربة قاضية تغير سلوك البحث عن الطعام في النمل الأبيضodontocetes فورموسانوسفي سياقات اجتماعية مختلفة. كور زول 67:609. https:// doi.org/10.1093/cz/zoab032 Xu Z، Zeng X، Li M، Liao J، Chen Q (2021b) MicroRNA-383 يعزز الالتهام الذاتي الناجم عن أنواع الأكسجين التفاعلية عبر تقليل تنظيم البيروكسيدوكسين 3 في الورم الدبقي البشري خلايا U87. تجربة هناك ميد 21:439. https://doi.org/10.3892/etm.2021.9870

Yanagawa A، Fujiwara-Tsujii N، Akino T، Yoshimura T، Yanagawa T، Shimizu S (2011) الرائحة العفنة لمسببات الأمراض الحشرية تعزز سلوكيات الوقاية من الأمراض في النمل الأبيضكوبتوترميس فورموسانوس. ي إنفيرتيبر باثول 108: 1-6. https://doi.org/10.1016/j.jip.2011. 06.001

Yanagawa A، Imai T، Akino T، Toh Y، Yoshimura T (2015) تؤثر الإشارات الشمية من الفطريات المسببة للأمراض على اتجاه حركة النمل الأبيض،كوبتوترميس فورموسانوس. جي كيم إيكول 41: 1118- 1126. https://doi.org/10.1007/s10886-015-0649-8

Yang ML et al (2014) MicroRNA-133 يمنع التجميع السلوكي عن طريق التحكم في تخليق الدوبامين في الجراد. بلوس جينيت 10:e1004206. https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1004206