مكونات Monoterpene من Cistanche Tubulosa - التركيبات الكيميائية لـ Kankanosides A و E و Kankanol—

جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com

Haihui XIE و Toshio MORIKAWA و Hisashi MATSUDA و Seikou NAKAMURA و Osamu MURAOKA و Masayuki YOSHIKAWA

الملخص

تم عزل أربعة جليكوسيدات إيريدويد جديدة ، kankanosides A (1) ، B (2) ، C (3) ، و D (4) ، إيريدويد مكلور ، كانكانول (5) ، و monoterpene acyclic monoterpene glycoside ، kankanoside E (6) ، من المستخلص الميثانولي للسيقان المجففة لـ Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) مع 16 مركبًا معروفًا. تم تحديد هياكل هذه المركبات الجديدة (1-6) بناءً على الأدلة الكيميائية والفيزيائية الكيميائية.

الكلمات الدالة:Cistanche tubulosa؛ كانكانوسيد. كانكانول. القزحية. مونوتربين. Orobanchaceae

Cistanche tubulosa(شرنك) ر. وايت (Orobanchaceae)هو نبات طفيلي معمر ينمو على جذور سالفادورا أو كالوتروبيس ، وينتشر في شمال أفريقيا والجزيرة العربية والدول الآسيوية. ، lumbago ، وضعف الجسم. 2) في السابق ، تم عزل العديد من القزحية ، monoterpenoids ، phenylethanoids ، والقشور من الصينية والباكستانية C. tubulosa. 1،3-7) في سياق دراساتنا التسلسلية على المكونات النشطة بيولوجيًا من الأدوية الطبيعية الصينية ، 8-18) أربعة جليكوسيدات إيريدويد جديدة ، كانكانوسيدات A (1) ، B (2) ، C (3) ، و D (4) ) ، القزحية المكلورة ، kankanol (5) ، و monoterpene glycoside ، kankanoside E (6) ، تم عزلها من المستخلص الميثانولي لهذا الدواء العشبي مع 16 مركبًا معروفًا بما في ذلك 12 monoterpenes (7-18). تتناول هذه الورقة عزل وتركيب مكونات المونوتربين الجديدة (1-6).

Cistanche tubulosa

المستخلص الميثانولي من السيقان المجففةCistanche tubulosa(26.8 بالمائة من هذا الدواء العشبي) تعرض لعمود كروماتوجرافي في الطور الطبيعي وعكس الطور و HPLC متكرر لإعطاء kankanosides A (1 ، 0. 0 {{1 0 }} 54 بالمائة) ، ب (2 ، 0. 0 3 0 بالمائة) ، ج (3 ، 0. 0 0 27 بالمائة) ، د (4 ، {{4 0}}. 0 0 15 بالمائة) ، كانكانول (5 ، 0. 0 { {66}} 34 بالمائة) ، و kankanoside E (6 ، 0. 0 27 بالمائة) مع mussaenosidic acid19) (7 ، 0. 0 20 بالمائة) ، geniposidic acid19) (8، 0.030٪)، 8- epiloganic acid7) (9، 0.033٪)، gluroside19) (10، 0.14٪)، antirrhide20) (11، 0.0079٪)، ajugol19) (12، 0.011) في المئة) ، بارتسيوسيد 19) (13 ، 0.21 في المئة) ، 6- ديوكسيكاتالبول 19) (14 ، 0.11 في المئة) ، أرجول 21) (15 ، 0.0030 في المئة) ، سيستانين 22،23) (16 ، 0.0040 في المئة) ، رابطة الدول المستقلة تاكلورين 22) ( 17، 0.0035 بالمائة)، (2E، 6Z) -8- bD-glucopyranosyloxy -2 ، 6- ثنائي ميثيل -2 ، 6- octadienoic acid24) (18، 0.0028 بالمائة ) ، D mannitol25) (4.19 ص ercent) ، uridine25) (0.0069 بالمائة) ، (3R) -3- هيدروكسي -2- بيروليدينون 26،27) (0.0020 بالمائة) ، (3R) -3- هيدروكسي -1- ميثيل { {97}} بيروليدينون 27) (0.0059 بالمائة).

تم الحصول على بنية Kankanoside A (1) Kankanoside A (1) كمسحوق غير متبلور وعرض دوران بصري سلبي ([a] D 25 1 0 7.4 درجة في MeOH). أظهر طيف الأشعة تحت الحمراء 1 نطاق امتصاص عند 1647 سم 1 يمكن تخصيصه لوظيفة الأوليفين بالإضافة إلى نطاقات امتصاص قوية عند 341 0 و 1076 سم 1 مما يدل على وجود جزء جليكوسيد. في القصف الذري السريع الموجب والسالب (FAB) -MS لـ 1 ، لوحظت قمم أيونات شبه جزيئية عند m / z 369 (M Na) و 345 (MH) ، وكشف تحليل FAB-MS عالي الدقة عن الجزيئية الصيغة 1 لتكون C16H26O8. التحلل المائي الحمضي لـ 1 مع 1.0 M من حمض الهيدروكلوريك (HCl) المحرّر D-glucose ، والذي تم تحديده بواسطة تحليل HPLC باستخدام كاشف الدوران البصري. أظهر 13C-NMR (الجدول 2) أطياف 1 ، والتي تم تعيينها بواسطة تجارب NMR المختلفة ، 28) إشارات يمكن تخصيصها لميثيلين [d 1.31 (s ، 10- H3) ، 1.51 (br s ، {{47} } H3)] ، اثنان من الميثيلين [d 1.49 ، 2.02 (كلاهما م ، 6 أ- و 6 ب-ه) ، 1.64 ، 1.67 (كلاهما م ، 7 ب- و 7 أ-ه)] ، اثنان من الميثيلين [د 2.21 (يوم ، ج 2.7 ، 9.5 هرتز ، 9- ارتفاع) ، 2.71 (م ، 5- ارتفاع)] ، ومجموعة أسيتال ب غير مشبعة [اليوم 5.33 (يوم ، J 2.7 هرتز ، 1- ارتفاع )، 5.95 (br s، 3- H)] مع جزء b-glucopyranosyl [d 4.62 (d، J 7.9 Hz، 1 -H)]. كما هو مبين في الشكل 1 ، أشارت تجربة التحليل الطيفي للارتباط 1 H - 1H (1 H - 1 H COZY) في 1 إلى وجود هياكل جزئية مكتوبة بخطوط عريضة. في تجربة الارتباطات المتعددة النواة غير المتجانسة (HMBC) على 1 ، لوحظ وجود ارتباطات طويلة المدى بين البروتونات والكربونات التالية (3- H ، 1 -H و 1- C ؛ 11- H3 و 3- ج ؛ 3- H و 5- H و 6- H2 و 9- H و 11- H3 و 4- ج ؛ 11- H3 و 5- ج ؛ 10- H3 و 7- ج ؛ 1- H ، 7- H2 ، 9- H ، 10- H3 و 8- C ؛ 10- H3 و 9- C ؛ 7- H2 و 10- ج) كما هو موضح في الشكل 1. أعطى التحلل المائي الإنزيمي لـ 1 مع b-glucosidase aglycon ، kankagenin a (1a) كما هو موضح في الشكل 3. كشفت المقارنة بين طيف 13C NMR لـ 1 مع طيف 1a عن تحول الارتباط بالجليكوزيل حول الموضع 1- في 1 [1: دي سي 94.1 (1- ت) ، 134.6 (3- ت) ، 53.3 (9- ج) ؛ 1a: dC 92.9 (1- C) ، 135.3 (3- C) ، 54.7 (9- C)]. وبالتالي ، تم أيضًا توضيح اتصال جزء bD-glucopyranosyl في 1 ليكون في الموضع 1- من 1 أ. بعد ذلك ، تميزت البنية المجسمة النسبية لـ 1 بتجربة التحليل الطيفي للتحسين النووى Overhauser (NOESY) ، والتي أظهرت ارتباطات NOE بين أزواج البروتون التالية (1- H و 10- H3 ؛ 3- H و 11- H3 ؛ 5- H و 6b-H ، 9- H ؛ 6b-H و 7b-H ؛ 7a-H و 10- H3 ؛ 7b-H و {{ 190}} H) كما هو مبين في الشكل 2. وأخيرًا ، تم تحديد التكوين المطلق للموضع 1- في 1 من خلال تطبيق قاعدة تغيير الارتباط بالجليكوزيل 13C NMR لـ 1،1 -disaccharide ، 29) الذي تم العثور عليه تم تأكيد الحفاظ على البنية الفراغية للوضع 1- في 1 في 1 أ من خلال مقارنة تحليل 1 H-NMR بما في ذلك تجربة NOESY. تم العثور على قيم إزاحة الارتباط بالجليكوزيل [Dd 1.2 جزء في المليون (1 -C) و 0.9 جزء في المليون (1- C) ، في بيريدين- d5] لتكون مميزة لتركيبة R ، Rhemiacetal ، والتي تتوافق مع البنية المجسمة المطلقة لـ 1 كما هو مبين في الشكل 3. وبالتالي ، تم تحديد التكوين المطلق في الموضع 1- من 1 ليكون تكوين S ، وتم توضيح البنية المجسمة المطلقة لـ 1 كما هو موضح.

تم عزل هياكل Kankanosides B (2) و C (3) Kankanoside B (2) أيضًا كمسحوق غير متبلور مع دوران بصري سلبي ([أ] D 26118.7 درجة في MeOH). أظهر طيف الأشعة تحت الحمراء 2 نطاقات امتصاص عند 341 0 و 1647 و 85 سم 1 {{5 {{8 0}}} 85 سم 1 تُعزى إلى وظائف الهيدروكسيل والأولفين والإيثر. تم تحديد الصيغة الجزيئية C15H24O10 من 2 بواسطة قمم الأيونات شبه الجزيئية في الأيونات الموجبة FAB-MS وبواسطة FAB-MS عالية الدقة. التحلل المائي الحمضي لـ 2 مع 1.0 M HCl المحررة D-glucose ، والذي تم تحديده بواسطة تحليل HPLC باستخدام كاشف الدوران البصري. أظهر الجدول 2) الأطياف 28) من 2 إشارات قابلة للتخصيص لمثيلين اثنين [d 1.40 (DDD ، J 5.2 ، 7.3 ، 13.5 هرتز ، 6a-H) ، 2.52 (DDD ، J 7.0 ، 9.2 ، 13.5 هرتز ، 6b-H) ، 3.85 ، 3.99 (كلاهما d ، J 11.9 هرتز ، 10- H2)] ، أربع ميثينات [d 2.21 (يوم ، J 6.4 ، 8.6 هرتز ، 9- ارتفاع) ، 2.83 (متر ، 5- H) ، 4.02 (يوم ، J 5.2 ، 7.0 هرتز ، 7- ارتفاع) ، 5.49 (يوم ، J 6.4 هرتز ، 1- ارتفاع)] ، وزوج سيسوليفين [اليوم 4.95 (يوم ، J 4.0 ، 6.1 هرتز ، 4- ارتفاع) ، 6.22 (يوم ، J 1.8 ، 6.1 هرتز ، 3- ارتفاع)] ، جنبًا إلى جنب مع جزء b-glucopyranosyl [d 4.72 (d ، J 7.9 هرتز ، 1 - ح)]. كانت إشارات البروتون والكربون في بيانات 1 H و 13 C-NMR لـ 2 مشابهة لتلك الخاصة بـ 6- deoxycatalpol (14) ، باستثناء الإشارات الناتجة عن 7- و 8- المواقف. كما هو مبين في الشكل 1 ، أشارت تجربة 1 H - 1 H COZY في 2 إلى وجود هياكل جزئية مكتوبة بخطوط غامقة ، وفي تجربة HMBC ، لوحظت ارتباطات طويلة المدى بين أزواج البروتون والكربون التالية ({{ 122}} H و 1 -H و 1- C ؛ 1- H و 3- C ؛ 10- H2 و 7- C ؛ 1- H و 7- H و 9- H و 10- H2 و 8- C ؛ 7- H و 10- H2 و 9- ج ؛ 7- ح و 10- ج). تتميز البنية المجسمة النسبية لـ 2 بتجربة NOESY ، والتي أظهرت ارتباطات NOE بين أزواج البروتونات التالية (1- H و 10- H2 ؛ 3- H و 4- H ؛ 5- H و 6b-H و 9- H و 6b-H و 7- H و 7- H و 9- H) كما هو موضح في الشكل 2. أخيرًا ، أسفرت المعالجة القلوية لـ 14 مع 5 في المائة من هيدروكسيد البوتاسيوم المائي (KOH) عن 2 و 19 ، 32) بحيث تم توضيح البنية الفراغية لـ 2.

تم عزل Kankanoside C (3) كمسحوق غير متبلور مع دوران بصري سلبي ([أ] D 26 34. 0 درجة في MeOH). في الأيونات السالبة FAB-MS لـ 3 ، لوحظ زوج من قمم أيونات النظائر شبه الجزيئية عند m / z 399 و 4 0 1 (MH). تم تحديد الصيغة الجزيئية لـ 3 لتكون C15H25ClO1 0 عن طريق قياس FAB-MS عالي الدقة. التحلل المائي الحمضي لـ 3 مع 1.0 M HCl محرر D-glucose ، والذي تم تحديده بواسطة تحليل HPLC باستخدام كاشف الدوران البصري. أظهر الجدول 2) الأطياف 28) من 3 إشارات قابلة للتخصيص لثلاثة ميثيلين [d 1.70 (br dd ، J ca.3 ، 13 هرتز ، 4a-H) ، 2.70 (br dd ، J ca.6 ، 13 هرتز ، 4b-H) ، 1.68 (br d، J ca. 13 Hz، 6a H)، 2.44 (m، 6b-H)، 4.01، 4.04 (كلاهما d، J 11.3 هرتز، 10- H2)]، خمس ميثيل [d 2.47 (يوم ، J 2.5 ، 7.9 هرتز ، 9- ارتفاع) ، 2.61 (م ، 5- ارتفاع) ، 3.94 (br s ، 7- ارتفاع) ، 5.10 (br d ، J ca. 3 هرتز ، 3- ارتفاع) ، 5.48 (يوم ، جي 2.5 هرتز ، 1- ارتفاع)] وشققة ب-جلوكوبيرانوسيل [اليوم 4.60 (دي ، جي 8.0 هرتز ، 1 -H)]. كانت إشارات البروتون والكربون في أطياف 1 H- و 13 C-NMR من 3 قابلة للتركيب على 2 ، باستثناء الإشارات الناتجة عن الموضعين 3- و 4-. تم توضيح مواضع bD-glucopyranosyl ووظيفة الكلور في 3 من تجارب H-H COZY و HMBC كما هو موضح في الشكل 1. وبالتالي ، تم بناء الهيكل المستوي 3 ليكون كما هو موضح. تم تحديد البنية المجسمة النسبية لـ 3 بواسطة تجربة NOESY ، حيث لوحظت ارتباطات NOE بين أزواج البروتونات التالية (1- H و 3- H ، 10- H2 ؛ 3- H و 4a-H ؛ 4b-H و 5- H ؛ 5- H و 6b-H ، 9- H ؛ 6b-H و 7- H ؛ {{121} } H و 9- H) كما هو موضح في الشكل 2.

تم عزل هياكل Kankanoside D (4) و Kankanol (5) Kankanoside D (4) كمسحوق غير متبلور مع دوران بصري سلبي ([a] D 25 3 0. 6 درجة في MeOH). أظهر طيف الأشعة تحت الحمراء 4 نطاق امتصاص عند 1655 سم 1 يمكن إرجاعه إلى وظيفة الأوليفين ونطاقات امتصاص قوية عند 341 0 و 1078 سم 1 مما يوحي ببنيته الجليكوسيدية. في الأيونات الموجبة FAB-MS من 4 ، لوحظت ذروة أيون شبه جزيئي عند m / z 341 (M Na). تم تحديد الصيغة الجزيئية C15H26O7 لـ 4 بواسطة قياس FAB-MS عالي الدقة. تم الحصول على التحلل المائي الحمضي لـ 4 مع 1.0 M HCl المحررة D- الجلوكوز ، 8،10-12،15-18) بينما تم الحصول على (R) - الانتفاخ (4a) 33،34) عن طريق التحلل الأنزيمي لـ 4 مع ب-جلوكوزيداز. أظهر 1 H-NMR (الجدول 3 ، CD3OD) وأطياف 13C-NMR (الجدول 4) من 4 إشارات قابلة للتخصيص لميثيل [d 1.69 (s ، 10- H3)] ، ثلاثة ميثيلينات [d 1.41 ، 2.06 (كلاهما م ، 4- ارتفاع 2) ، 1.51 ، 2.01 (كلاهما م ، 6 أ- و 6 ب-ه) ، 2.23 (م ، ج -8 ، 15 هرتز ، 7 أ-ه) ، 2.37 (ش ي ي) ، J ca. 8، 15 Hz، 7b-H)] ، ميثين [d 2.90 (م ، 5- H)] ، واثنان من الميثيلينات اللتان تحملان وظيفة أكسجين {d [3.56 (DDD، J 2.8، 7.4 ، 13.2 هرتز) ، 3.97 (DDD ، J 4.9 ، 8.0 ، 13.2 هرتز) ، 3- H2] ، 4.04 ، 4.18 (كلاهما d ، J 12.2 هرتز ، 1- H2)} مع a b- جزء الجلوكوبيرانوزيل [d 4.25 (d ، J 7.7 هرتز ، 1 -H)]. تم توضيح موضع جزء bD-glucopyranosyl في 4 بواسطة تجربة HMBC ليكون موضع 3- (الشكل 1). بناءً على هذا الدليل ، تم تحديد البنية المجسمة المطلقة لـ 4 لتكون كما هو موضح.

تم الحصول على Kankanol (5) كمسحوق غير متبلور مع دوران بصري إيجابي ([أ] D 25 11.1 درجة). أظهر التأين الكيميائي (CI) -MS لـ 5 زوجًا من قمم أيونات النظائر عند m / z 221 و 223 بسبب أيون شبه جزيئي (MH). كشف قياس CI-MS عالي الدقة لـ 5 أن الصيغة الجزيئية هي C9H13ClO4. أظهر 1 H-NMR (الجدول 1 ، CD3OD) و 13 C-NMR (الجدول 2) الأطياف 28) من 5 وجود الوظائف التالية: ثلاثة ميثيلين [d 1.6 0 (DDD ، J 2.5 ، 5.5 ، 13.1 هرتز ، 4a-H) ، 1.80 (br dd ، J ca. 3 ، 13 هرتز ، 4b H) ، 1.83 (br d ، J ca 12 هرتز ، 6a-H) ، 2.57 (م ، 6b-H) ، 3.75 ، 3.88 (كلاهما d ، J 9.2 Hz ، 10- H2)] ، خمس ميثان [d 2.76 (dd ، J 4.3 ، 8.0 هرتز ، 9- ارتفاع) ، 2.50 (م ، 5- H)، 3.80 (br s، 7- H)، 5.17 (br d، J ca. 3 Hz، 3- H)، 5.26 (d، J 4.3 Hz، 1- H) ]. تم تأكيد البنية المستوية لـ 5 بواسطة تجارب H-1 H COZY و HMBC. أي أن تجربة 1 H - 1 H COZY في 5 أشارت إلى وجود الهياكل الجزئية المكتوبة بخطوط غامقة ، وفي تجربة HMBC ، لوحظت الارتباطات طويلة المدى كما هو موضح في الشكل 1. كانت البنية المجسمة النسبية 5 تم تحديده من خلال تجربة NOESY ، حيث لوحظت ارتباطات NOE بين أزواج البروتون التالية (1- H و 9- H ؛ 3- H و 4a-H ؛ 4b-H و {{ 93}} H و 5- H و 6b-H و 9- H و 6b-H و 7- H و 7- H و 9- H) كما هو موضح في الشكل 2. بمقارنة بيانات 1 H و 13 C-NMR لـ 5 مع تلك الخاصة بـ 14 أ ، والتي تم الحصول عليها بمعالجة 14 مع 5 في المائة من حمض الهيدروكلوريك المائي كما هو موضح في الرسم البياني 1 ، 35) موضع الكلور تم دعم المجموعة في 5 لتكون في الموضع 3-. علاوة على ذلك ، أعطى الأسيتلة 5 مع أنهيدريد الخل (Ac2O) والبيريدين 3 ، 7- أكسيد (5 أ) ، بينما أعطى 14 أ ثنائي الأسيتات (14 ب) تحت نفس حالة الأسيتيل. قادنا هذا الدليل أيضًا إلى تأكيد موضع وظيفة الكلور ليكون الموضع 3 ب (الرسم البياني 3). وبالتالي ، تم تحديد البنية المجسمة لـ 5 لتكون كما هو موضح.

تم عزل بنية Kankanoside E (6) Kankanoside E (6) كمسحوق غير متبلور مع دوران بصري سلبي ([a] D 25 2 0. 0 درجة في MeOH). أظهر طيف الأشعة تحت الحمراء 6 نطاقات امتصاص عند 3410 ، 1647 ، 1085 سم 1 تُعزى إلى وظائف الجليكوسيد والكاربونيل ، بينما أظهر طيف الأشعة فوق البنفسجية الخاص به أقصى امتصاص عند 211 نانومتر (log e 4.63) ، مما يشير إلى وجود حمض كربوكسيل غير مشبع ب. تتميز الصيغة الجزيئية C16H28O8 لـ 6 بالأيونات الموجبة والسالبة FAB-MS وقياس MS عالي الدقة. التحلل الحمضي لستة د-جلوكوز متحررة ، 8،10-12،15-18) بينما (2E ، 6R) -8- هيدروكسي -2 ، 6- ثنائي ميثيل - 2- حمض أوكتانويك (6 أ) 36) عن طريق التحلل الأنزيمي لـ 6 مع ب-جلوكوزيداز. يشير 1 H-NMR (الجدول 3 ، CD3OD) و 13 C-NMR (الجدول 4) الأطياف 28) من 6 إلى وجود (2E ، 6R) -8- هيدروكسي -2 ، 6- ثنائي ميثيل -2- جزء حمض الأوكتانويك [d 0.95 (d ، J 6.4 هرتز ، 10- H3) ، 1.30 ، 1.48 (كلاهما م ، 5- H2) ، 1.45 ، 1.70 (كلاهما م ، { {70}} H2) ، 1.65 (م ، 6- ارتفاع) ، 1.81 (ث ، 9- ارتفاع 3) ، 2.22 (2 س ، م ، 4- ارتفاع 2) ، 3.61 ، 3.94 (كلاهما م ، 8- H2) ، 6.78 (يوم ، J 1.2 ، 7.3 هرتز ، 3- ارتفاع)] مع جزء bD-glucopyranosyl [d 4.26 (d ، J 7.6 Hz ، 1 -H)] . بمقارنة إشارات الكربون في طيف 13C-NMR للعدد 6 مع إشارات 6 أ ، لوحظ تحول الارتباط بالجليكوزيل حول 8- الموضع 6. كما تم تأكيد موضع ارتباط الجلوكوزيد من خلال تجارب HMBC كما هو موضح في الشكل 1. نتيجة لذلك ، تم توضيح البنية المجسمة المطلقة لـ 6 لتكون (2E ، 6R) -8- ب- D-glucopyranosyloxy -2 ، 6- ثنائي ميثيل -2- حمض أوكتانويك.

فوائد استخراج cistanche

تجريبي

تم استخدام الأدوات التالية للحصول على البيانات المادية: دورات محددة ، Horiba SEPA -300 مقياس الاستقطاب الرقمي (l 5 cm) ؛ أطياف الأشعة فوق البنفسجية ، مطياف شيمادزو للأشعة فوق البنفسجية -1600 ؛ أطياف الأشعة تحت الحمراء ، مطياف شيمادزو FTIR -8100 ؛ EI-MS و CI-MS ومطياف الكتلة عالي الدقة CI-MS و JEOL JMS-GCMATE ؛ FAB-MS ومطياف الكتلة MS عالي الدقة ، JEOL JMS-SX 102A ؛ 1 طيف H-NMR ، مقياس طيف JEOL EX -270 (270 ميجاهرتز) و JNM-LA500 (500 ميجاهرتز) ؛ أطياف 13C-NMR و JEOL EX -270 (68 ميجاهرتز) و JNM-LA500 (125 ميجاهرتز) مع رابع ميثيل سيلان كمعيار داخلي ؛ وكاشف HPLC ، Shimadzu RID -6 معامل انكسار و SPD - 10 كاشفات Avp UV-VIS. تم استخدام عمود HPLC ، YMC-Pack ODS-A (250 4.6 مم id) ، و (250 20 مم id) للأغراض التحليلية والتحضيرية ، على التوالي.

تم استخدام الشروط التجريبية التالية للكروماتوغرافيا: الفصل اللوني لعمود هلام السيليكا في المرحلة العادية ، هلام السيليكا BW -200 (Fuji Silysia Chemical، Ltd.، Aichi، Japan، 15 {{1 {14}}}} - 35 0 شبكة) ؛ كروماتوغرافيا عمود هلام السيليكا للطور العكسي ، Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia Chemical، Ltd.، Aichi، Japan، 100-200 شبكة) ؛ TLC ، ألواح TLC المطلية مسبقًا مع هلام السيليكا 60F254 (Merck ، 0.25 مم) (المرحلة العادية) وهلام السيليكا RP - 18 F254S (Merck ، 0.25 مم) (الطور العكسي) ؛ HPTLC ذو المرحلة العكسية ، ألواح TLC المطلية مسبقًا مع هلام السيليكا RP -18 WF254S (Merck ، 0.25 مم) ؛ وقد تم الكشف عن طريق الرش بنسبة 1 في المائة Ce (SO4) 2-10 في المائة H2SO4 مائي متبوعًا بالتسخين.

المواد النباتية

تم شراء السيقان المجففة لـ Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT في أورومتشي بمقاطعة شينجيانغ بالصين في يناير 2005 عبر شركة Eishin Trading Co.، Ltd. والأدوية الإثنولوجية. عينة قسيمة (2005.01. شينجيانغ -01) من هذا النبات مسجلة في ملف في مختبرنا.

الاستخراج والعزلة

السيقان المجففة من C. tubulosa (5. 0 كجم) تم تجفيفها واستخلاصها ثلاث مرات بالميثانول تحت التدفق الراجع لمدة 3 ساعات. قدم تبخير المذيب تحت ضغط منخفض المستخلص الميثانولي (134 0 جم ، 26.8 بالمائة من هذا الدواء العشبي). تم إخضاع المستخلص الميثانولي (16 0 جم) إلى عمود كروماتوجرافي لعمود هلام السيليكا في الطور الطبيعي [3.2 كجم ، CHCl3 – MeOH – H2O (1 0: 3: 1 → 7: 3: 1 ، أقل طبقة → 6: 4: 1) MeOH] لإعطاء ستة كسور [الأب. 1 (5. 0 4 ز) ، الاب. 2 (9.84 جم) ، الاب. 3 (7.8 0 ز) ، الاب. 4 (13.28 جم) ، الاب. 5 (113.6 {{1 0 4}} ز) ، والاب. 6 (7.61 جم)]. تم فصل الكسر 1 (5. 00 جم) عن طريق الفصل اللوني لعمود هلام السيليكا ذو الطور المعكوس [15 0 جم ، MeOH – H2O (40 6: 6 0 → 5 {{ 162}}: 5 0 → 6 0: 4 0، v / v) → MeOH] للحصول على الكسور الخامسة [Fr. {{5 0}} (83 {{2 0 1}} مجم) ، الأب. 1-2 (59 0 مجم) ، الاب. 1-3 (18 0 مجم) ، الاب. 1-4 (124 مجم) ، وأب. 1-5 (32 0 0 مجم)]. الاب. تم فصل {{6 0} (83 0 مجم) بشكل أكبر بواسطة HPLC [MeOH – H2O (1 0: 90، v / v)] لإعطاء kankanol (5، 20 mg ، 0.0034 بالمائة) ، أرجول (15 ، 18 مجم ، 0.0030 بالمائة) ، السيستانين (16 ، 24 مجم ، 0.0040 بالمائة) ، الأب. 1-1-2 (62 مجم) ، والذي تم فصله عن طريق HPLC [MeOH – H2O (2: 98، v / v)] لإعطاء (3R) -3- هيدروكسي -2- بيروليدينون (0.0020 بالمائة ) و (3R) -3- هيدروكسي -1- ميثيل -2- بيروليدينون (0.0059 بالمائة). الاب. تمت تنقية 1-2 (590 مجم) بواسطة HPLC [MeOH – H2O (35: 65، حجم / حجم) و CH3CN - H2O (20: 80، حجم / حجم)] لإعطاء السيستانكلورين (17، 21 مجم، 0.0035 نسبه مئويه ). تعرض الكسر 2 (9.72 جم) لعمود كروماتوجرافي لعمود هلام السيليكا ذي الطور العكسي [290 جم ، MeOH – H2O (20: 80 - 30: 70 - 40: 60 - 60:40 ، v / v) → MeOH] إلى f ford سبعة كسور [الاب. 2-1 (1986 مجم) ، الاب. 2-2 (1563 مجم) الاب. 2-3 (3931 مجم) ، الاب. 2-4 (375 مجم) ، الاب. 2-5 (486 مجم) ، الاب. 2-6 (460 مجم) وأب. 2-7 (336 مجم)]. الاب. تم فصل 2-1 (466 مجم) بواسطة HPLC [MeOH – H2O (5: 95، v / v)] لإعطاء اليوريدين (0.0069 بالمائة). الاب. تم فصل 2-2 (535 مجم) بواسطة HPLC [MeOH – H2O (10: 90، v / v)] لإعطاء مضاد للجلد (11 ، 15 مجم ، 0.0079 بالمائة) و ​​6- deoxycatalpol (14 ، 214 ملغ ، 0.11٪). الاب. تم فصل 2-3 (535 مجم) بواسطة HPLC [MeOH – H2O (20: 80 ، حجم / حجم)] لتجهيز الجلوروسايد (10 ، 110 مجم ، 0.14 بالمائة) وبارتسيوسيد (13 ، 164 مجم ، 0.21 بالمائة) . الاب. تم فصل 2-4 (375 مجم) بواسطة HPLC [MeOH – H2O (30: 70، v / v)] لإعطاء kankanosides A (1 ، 32 مجم ، 0.0054 بالمائة) و ​​D (4 ، 9 مجم ، 0.0015 بالمائة ). الاب. تم فصل 2-6 (460 مجم) أيضًا بواسطة HPLC [MeOH – H2O (45: 55، v / v)] لتوفير kankanoside E (6 ، 161 مجم ، 0.027 بالمائة) و ​​(2E ، 6Z) {{192 }} bD-glucopyranosyloxy -2 ، 6- dimethyl -2 ، 6- octadienoic acid (18، 17 mg، 0.0028٪). تعرض الكسر 3 (7.60 جم) لكروماتوجراف عمود جل السيليكا ذي الطور العكسي [230 جم ، MeOH – H2O (20: 80 - 40: 60 - 50: 50 - 60: 40 ، ت / ت) ← MeOH] لإعطاء الكسور الخماسية [الأب. 3-1 (2652 مجم) ، الاب. 3-2 (593 مجم) ، الاب. 3-3 (3610 مجم) ، الاب. 3-4 (190 مجم) وأب. 3-5 (336 مجم)]. الاب. تمت تنقية 3-1 (480 مجم) بواسطة HPLC [MeOH – H2O (10: 90، حجم / حجم)] لإعطاء كانكانوسيد ب (2 ، 19 مجم ، 0.018 بالمائة) ، حمض جينيبوسيدك (8 ، 32 مجم ، 0.030 في المائة) ، وأجوجول (12 ، 12 مجم ، 0.011 في المائة). تعرض الجزء 4 (13.10 جم) لكروماتوجرافيا عمود هلام السيليكا ذات الطور المتغير [390 جم ، MeOH – H2O (10: 90 - 20: 80 - 30: 70 - 40: 60 - 50: 50 ، ت / ت) → MeOH] لإعطاء سبعة كسور [الأب. 4-1 (6114 مجم) ، الاب. 4-2 (430 مجم) الاب. 4-3 (1058 مجم) ، الاب. 4-4 (170 مجم) ، الاب. 4-5 (2595 مجم) ، الاب. 4-6 (1635 مجم) وأب. 4-7 (1064 مجم)]. الاب. تم فصل 4-2 (430 مجم) عن طريق HPLC [MeOH – H2O (5: 95، v / v)] لتحمل 2 (70 مجم ، 0.012 بالمائة) و ​​kankanoside C (3 ، 16 مجم ، 0.0027 بالمائة) . الاب. تم فصل 4-6 (1058 مجم) أيضًا بواسطة HPLC [MeOH – H2O (15: 85، v / v)] إلى حمض موسينيديك (7 ، 116 مجم ، 0.020 بالمائة) و ​​8- حمض epiloganic (9 ، 193 مجم ، 0.033 بالمائة). تعرض الكسر 5 (15.15 جم) لعمود كروماتوجرافي لعمود هلام السيليكا ذي الطور العكسي [455 جم ، MeOH – H2O (0: 100 - 10: 90 - 20: 80 - 40: 60 - 50: 50 ، ت / ت) → MeOH ] لإعطاء سبعة كسور [الأب. 5-1 (9311 مجم) ، الاب. 5-2 (1114 مجم) ، الاب. 5-3 (306 مجم) ، الاب. 5-4 (347 مجم) ، الاب. 5-5 (1620 مجم) الاب. 5-6 (1453 مجم) وأب. 5-7 (1106 مجم)]. الاب. تمت بلورة 5-1 (9311 مجم) من MeOH لإعطاء D-mannitol (3337 مجم ، 4.19 بالمائة).

تم تحديد المركبات المعروفة (7-18) من خلال مقارنة بياناتها المادية ([أ] D ، IR ، 1 H-NMR ، 13C-NMR ، MS) مع القيم المبلغ عنها 1،7،19-24،26،27) أو تلك العينات التجارية. 25) Kankanoside A (1): مسحوق غير متبلور ، [أ] D 25 107.4 درجة (c 1.50 ، MeOH). أيون إيجابي عالي الدقة FAB-MS: Calcd لـ C16H26O8Na (M Na) 369.1525 ؛ تم العثور عليها 369.1522. IR (KBr): 3410 ، 2940 ، 1647 ، 1076 سم 1. 1 H-NMR (500 MHz، CD3OD and pyridine-d5) d: الوارد في الجدول 1. 13C-NMR (125 MHz، CD3OD and pyridine-d5) d C: يرد في الجدول 2. الأيون الموجب FAB-MS: m / ض 369 (M Na). الأيونات السالبة FAB-MS: m / z 345 (MH).

Kankanoside B (2): مسحوق غير متبلور ، [أ] D 26 118.7 درجة (ج 0. 10 ، MeOH). أيون إيجابي عالي الدقة FAB-MS: Calcd لـ C15H24O10Na (M Na) 387.1267 ؛ تم العثور على 387.1261. IR (KBr): 3410 ، 2940 ، 1647 ، 1085 سم 1. 1 H-NMR (500 MHz، CD3OD) d: الواردة في الجدول 1. 13C-NMR (125 MHz، CD3OD) d C: مذكورة في الجدول 2. أيون موجب FAB-MS: m / z 387 (M Na). الأيونات السالبة FAB-MS: m / z 363 (MH).

Kankanoside C (3): مسحوق غير متبلور ، [أ] د 26 34. 0 درجة (ج 1. 00 ، MeOH). FAB-MS عالي الدقة للأيونات السالبة: Calcd لـ C15H24ClO10 (MH) 399.1058 ؛ تم العثور على 399.1077. IR (KBr): 3410 ، 2964 ، 1159 ، 1078 ، 1048 ، 949 سم 1. 1 H-NMR (500 MHz، CD3OD) d: الواردة في الجدول 1. 13C NMR (125 MHz، CD3OD) d C: مذكورة في الجدول 2. الأيونات السالبة FAB-MS: m / z 399، 401 (MH).

Kankanoside D (4): مسحوق غير متبلور ، [أ] D 25 3 0. 6 درجة (c 0.50 ، MeOH). FAB-MS ذات الأيونات الموجبة عالية الدقة: Calcd لـ C15H26O7Na (M Na) 341.1204 ؛ تم العثور على 341.1210. IR (KBr): 3410 ، 2940 ، 1655 ، 1078 ، 1040 سم 1. 1 H-NMR (500 MHz، CD3OD) d: مذكورة في الجدول 3. 13C-NMR (125 MHz، CD3OD) d C: مذكورة في الجدول 4. أيون موجب FAB-MS: m / z 341 (M Na). الأيونات السالبة FAB-MS: m / z 317 (MH).

كانكانول (5): مسحوق غير متبلور ، [أ] D 25 11.1 درجة (c 1.40 ، MeOH). CI-MS عالي الدقة: Calcd لـ C9H14ClO4 (MH) 221.0580 ؛ تم العثور عليها في 221.0582. IR (KBr): 3399 ، 3004 ، 1165 ، 1096 ، 1059 ، 1048 ، 955 سم 1. 1 H- NMR (500 MHz، CD3OD) d: الواردة في الجدول 1. 13C-NMR (125 MHz، CD3OD) d C: مذكورة في الجدول 2. CI-MS m / z (بالمائة): 221 (MH) (5 ) و 223 (MH) (2) و 185 (88) و 167 (100) و 149 (71) و 57 (49).

Kankanoside E (6): مسحوق غير متبلور ، [أ] D 25 2 0. 0 درجة (ج 2. 00 ، MeOH). أيون إيجابي عالي الدقة FAB-MS: Calcd لـ C16H28O8Na (M Na) 371.1682 ؛ تم العثور عليها 371.1690. الأشعة فوق البنفسجية [MeOH ، نانومتر (سجل هـ)]: 215 (4.16). IR (KBr): 3410 ، 2940 ، 1647 ، 1085 ، 1043 سم 1. 1 H-NMR (500 MHz، CD3OD) d: مذكورة في الجدول 3. 13C-NMR (125 MHz، CD3OD) d C: مذكورة في الجدول 4. أيون موجب FAB-MS: m / z 371 (M Na). الأيونات السالبة FAB-MS: m / z 347 (MH).

فوائد استخراج cistanche

التحلل الحمضي من 1-4 و 6 مع 1 م حمض الهيدروكلوريك

تم تسخين محلول من 1-4 أو 6 (كل 1.5 مجم) في 1 مولار حمض الهيدروكلوريك (0. 5 مل) تحت التكثيف الراجع لمدة 3 ساعات. بعد التبريد ، يُسكب خليط التفاعل في ماء جليدي ومعادلته باستخدام Amberlite IRA -400 (شكل OH) ، وتتم إزالة الراتنج بالترشيح. بعد ذلك ، تم استخلاص ناتج الترشيح باستخدام EtOAc. تم إخضاع الطبقة المائية لتحليل HPLC في الظروف التالية: عمود HPLC ، مستشعر Ka LC NH {{1 0} ، 4.6 مم معرف 250 مم (Tokyo Kasei Co.، Ltd. ، طوكيو ، اليابان) ؛ الكشف ، الدوران البصري [Shodex OR -2 (Showa Denko Co.، Ltd. ، طوكيو ، اليابان)] ؛ المرحلة المتنقلة ، CH3CN - H2O (75: 25 ، ت / ت) ؛ معدل زميل 0.8 مل / دقيقة ؛ درجة حرارة العمود ، درجة حرارة الغرفة. تم التعرف على الجلوكوز D الموجود في الطبقة المائية من خلال مقارنة وقت الاحتفاظ به والدوران البصري مع تلك الخاصة بعينة أصلية: tR 12.3 دقيقة (دوران بصري إيجابي)

التحلل المائي الأنزيمي لـ 1 و 4 و 6 مع ب-جلوكوزيداز

تمت معالجة محلول من 1 (7.7 مجم) في H2O (1.5 مل) باستخدام b-glucosidase (5. 0 مجم ، من اللوز ، شركة الخميرة الشرقية ، طوكيو ، اليابان) وتم تقليب المحلول عند 37 درجة لمدة 3 د. بعد إضافة EtOH إلى خليط التفاعل ، تمت إزالة المذيب تحت ضغط مخفض وتنقية المادة المتبقية بواسطة HPLC [MeOH - H O (55: 45 ، حجم / حجم)] لتزويد kankagenin أ (1 أ ، 2.3 مجم ، 56 بالمائة) . من خلال إجراء مماثل ، (R) -rotundiol33،34) (4a، 1.2 mg، 69 بالمائة) و ​​(2E، 6R) -8- هيدروكسي -2 ، 6- ثنائي ميثيل {{30} } حمض الأوكتانويك 36) (6 أ ، 6.8 مجم ، 62 بالمائة) تم الحصول عليها من 4 (3.5 مجم) و 6 (20.4 مجم) على التوالي.

Kankagenin a (1a): مسحوق أبيض ، [أ] D 25 18.4 درجة (ج 0. 20 ، MeOH). عالية الدقة EI-MS: Calcd لـ C10H16O3 (M) 184.1099 ؛ تم العثور عليها في 184.1106. IR (KBr): 3410 ، 2940 ، 1684 سم 1. 1 H-NMR (500 MHz، CD3OD) d: الواردة في الجدول 1. 13C-NMR (125 MHz، CD3OD) d C: مذكورة في الجدول 2. EI MS: m / z (بالمائة): 184 (M، 37) ، 95 (100).

معالجة قلوية لـ 14 مع 5 بالمائة من KOH المائي

تم تقليب محلول من 14 (23. 0 مجم) في 5 بالمائة من KOH مائي (1. 0 مل) عند 8 0 درجة لمدة ساعتين. تمت معادلة خليط التفاعل باستخدام Amberlite HCR-W2 (على شكل H). إعادة نقل المذيب من المرشح تحت ضغط منخفض يوفر بقايا ، تمت تنقيتها بواسطة HPLC [MeOH – H2O (5: 95 ، حجم / حجم)] لإعطاء 2 (4.0 مجم ، 16 بالمائة) و ​​1932) (10.5 مجم ، 43 في المائة).

المعالجة الحمضية لـ 14 مع 5٪ من حمض الهيدروكلوريك المائي

تم تقليب محلول من 14 (25. 0 مجم) في 5 بالمائة من حمض الهيدروكلوريك المائي (2. 0 مل) عند درجة حرارة الغرفة لمدة 3 ساعات. يُسكب خليط التفاعل في ماء مثلج ويستخلص خليط التفاعل بالكامل باستخدام EtOAc. تم غسل مستخلص EtOAc على التوالي باستخدام NaHCO3 مائي مشبع ومحلول ملحي ، ثم تم تجفيفه فوق مسحوق MgSO4 اللامائي وترشيحه. أدت إزالة المذيب من المرشح تحت ضغط منخفض إلى توفير مادة متبقية ، والتي تم فصلها بواسطة HPLC [MeOH – H2O (2 0: 80، v / v)] لإعطاء 14 أ (4.0 مجم ، 25 بالمائة).

14a

مسحوق أبيض ، [أ] D 2 0 21.5 درجة (c 0.30 ، MeOH). CI-MS عالي الدقة: Calcd لـ C9H14ClO4 (MH) 221.0580 ؛ تم العثور عليها في 221.0587. IR (KBr): 3410 ، 2962 ، 1365 ، 1152 ، 1055 ، 945 سم 1. 1 H-NMR (500 MHz، CD3OD) d: الواردة في الجدول 1. 13C-NMR (125 MHz، CD3OD) d C: مذكورة في الجدول 2. CI-MS: m / z (بالمائة): 221 (MH) ( 7) ، 223 (MH) (3) ، 203 (M H2O) (97) ، 205 (M H2O) (33) ، 185 (7) ، 167 (12) ، 159 (32) ، 121 (27) ، 110 (48) و 95 (64) و 85 (100) و 67 (56) و 57 (65).

أستلة 5 و 14 أ

تمت معالجة محلول من 5 (2.5 مجم) في بيريدين (0. 5 مل) باستخدام أنهيدريد الخل (Ac2O ، 0. 4 مل) وتم تقليب الخليط عند درجة حرارة الغرفة لمدة 12 ساعة. يُسكب خليط التفاعل في ماء مثلج ويستخلص خليط التفاعل بالكامل باستخدام EtOAc. تم غسل مستخلص EtOAc على التوالي باستخدام 5 في المائة من حمض الهيدروكلوريك المائي ، و NaHCO3 مائي مشبع ، ومحلول ملحي ثم يجفف فوق مسحوق MgSO4 اللامائي ويرشح. أدت إزالة المذيب من المرشح تحت ضغط منخفض إلى توفير المادة المتبقية ، والتي تمت تنقيتها بواسطة HPLC [MeOH – H2O (35: 65 ، حجم / حجم)] لإعطاء 5 أ (2.3 مجم ، 77 بالمائة). من خلال إجراء مماثل ، تم أيضًا تحضير وتنقية 14 ب (2.7 مجم ، 87 بالمائة) بواسطة HPLC [MeOH – H2O (55: 45 ، حجم / حجم)] من 14 أ (2.1 مجم).

5a

مسحوق أبيض ، [أ] D 2 0 1.8 درجة (ج 0.18 ، MeOH). CI MS عالي الدقة: Calcd لـ C11H15O5 (MH) 227.0919 ؛ تم العثور على 227.0925. IR (KBr): 2962 ، 1734 ، 1374 ، 1258 ، 1237 ، 1169 ، 1103 ، 1053 ، 947 سم 1. 1 H-NMR (500 MHz، CD3OD) d: الوارد في الجدول 1. 13C-NMR (125 MHz، CD3OD) d C: يرد في الجدول 2. CI-MS m / z (بالمائة): 227 (MH) (28 ) ، 209 (M H2O) (4) ، 184 (3) ، 166 (45) ، 149 (22) ، 138 (38) ، 122 (44) ، 94 (31) ، 85 (100) ، 57 (34) ).

14b

مسحوق أبيض ، [أ] D 2 0 23.7 درجة (ج 0.06 ، MeOH). CI-MS عالي الدقة: Calcd لـ C13H18ClO6 (MH) 305.0792 ؛ تم العثور على 305.0790. IR (KBr): 1744 ، 1376 ، 1243 ، 1231 ، 1001 ، 941 سم 1. 1 H-NMR (500 MHz، CD3OD) d: الواردة في الجدول 1. 13C-NMR (125 MHz، CD3OD) d C: مذكورة في الجدول 2. CI-MS: m / z (بالمائة): 305 (MH) ( 2) ، 307 (MH) (1) ، 263 (MH C2H3O) (6) ، 265 (MH C2H3O) (3) ، 245 (30) ، 203 (8) ، 185 (100) ، 167 (7) ، 149 (33) و 121 (26) و 95 (15) و 85 (37) و 57 (93).

شكر وتقدير

تم دعم هذا البحث من خلال برنامج 21st COE ، ومشروع الحدود الأكاديمية ، ومنحة مساعدة للبحث العلمي من وزارة التعليم والثقافة والرياضة والعلوم والتكنولوجيا في اليابان. يشكر المؤلفون الأستاذ Xiaoguang Jia في معهد شينجيانغ للأدوية التقليدية الصينية والأثنولوجية في أورومتشي ، الصين ، لتحديد المواد النباتية.

فائدة cistanche

المراجع والملاحظات

1) كوباياشي هـ ، أوجوتشي هـ ، أو تاكيزاوا إن ، أو مياس ت. ، أوينو أ ، أوسمانغاني ك ، أحمد م ، تشيم. فارم. الثور ، 35 ، 3309 - 3314 (1987).

2) Xinjiang Science and Technology Press، "Culture Techniques of Xinjiang Staple Medicinal Plants،" Xinjiang Institute of Traditional Chinese and Ethnologic Medicines Ed.، 2004، pp. 84-88.

3) Du N.، Zhou P.، Wang J.، Liu C.، Li W.، Zhongguo Yaoke Daxue Xue bao، 24، 46-48 (1993).

4) Xue D.، Zhongguo Zhongyao Zazhi، 22، 170–171 (1997).

5) Song Z.، Mo S.، Chen Y.، Tu P.، Li W.، Zhao Y.، Zheng J.، Zhongguo Zhongyao Zazhi، 25، 728-730 (2000).

6) Song Z.، Tu P.، Zhao Y.، Zheng J.، Zhongcaoyao، 31، 808-810 (2000).

7) Yoshizawa F.، Deyama T.، Takizawa N.، Usmanghani K.، Ahmad M.، Chem. فارم. الثور ، 38 ، 1927-1930 (1990).

8) ماتسودا هـ. ، موريكاوا ت. ، تاو ج. ، أويدا ك. ، يوشيكاوا م ، تشيم. فارم. الثور ، 50 ، 208-215 (2002).

9) موريكاوا ت. ، ماتسودا هـ ، توجوتشيدا آي ، أويدا ك. ، يوشيكاوا م ، ج. نات. Prod.، 65، 1468–1474 (2002).

10) تاو جيه ، موريكاوا ت ، توجوتشيدا آي ، أندو س ، ماتسودا هـ ، يوشيكاوا م ، بيورج. ميد. كيم ، 10 ، 4005-4012 (2002).

11) موريكاوا ت. ، تاو ج. ، أندو س ، ماتسودا هـ. ، يوشيكاوا م ، ج. نات. Prod.، 66، 638–645 (2003).

12) تاو جيه ، موريكاوا ت ، أندو س ، ماتسودا هـ ، يوشيكاوا م ، تشيم. فارم. الثور ، 51 ، 654 - 662 (2003).

13) ماتسودا هـ. ، موريكاوا ت. ، شيه هـ. ، يوشيكاوا م. ، بلانتا ميد. ، 70 ، 847-855 (2004).

14) صن ب ، موريكاوا ت ، ماتسودا هـ ، توتراكول س ، هاريما س ، يوشيكاوا م ، ج. Prod.، 67، 1464–1469 (2004).

15) موريكاوا ت ، صن ب ، ماتسودا هـ ، وو إل جيه ، هاريما س ، يوشيكاوا م ، تشيم. فارم. الثور ، 52 ، 1194-1199 (2004).

16) Xie H.، Wang T.، Matsuda H.، Morikawa T.، Yoshikawa M.، Tani T.، Chem. فارم. الثور ، 53 ، 1416-1422 (2005).

17) موريكاوا ت. ، شيه هـ ، ماتسودا هـ. ، يوشيكاوا م ، ج. نات. همز ، 69 (2006) في الصحافة.

18) موريكاوا ت. ، شيه هـ ، ماتسودا هـ ، وانج ت. ، يوشيكاوا م ، تشيم. فارم. الثور ، 54 ، 506-513 (2006).

19) كوباياشي هـ. ، كاراساوا هـ ، مياس ت. ، فوكوشيما س. ، كيم. فارم. Bull.، 33، 3645–3650 (1985).

20) Otsuka H.، Phytochemistry، 33، 617-622 (1993).

21) Zhao W.، Yang G.، Xu R.، Qin G.، Phytochemistry، 41، 1553-1555 (1996).

22) كوباياشي هـ. ، كاراساوا هـ ، مياسي ت. ، فوكوشيما س. ، كيم. فارم. الثور ، 32 ، 1729-1734 (1984).

23) Xu Z.، Yang S.، Yang J.، Lu R.، Zhongcaoyao، 30، 244–246 (1999).

24) وانغ إس جيه ، بي واي إتش ، هوا إتش إم ، تشين. تشيم. Lett.، 12، 343–344 (2001).

25) تم تحديد تلك المركبات المعروفة من خلال مقارنة بياناتها الفيزيائية مع العينات التي تم الحصول عليها تجاريًا.

26) Pires R.، Burger K.، Tetrahedron، 53، 9213-9218 (1997).

27) Kamal A.، Ramana KV، Ramana AV، Babu AH، Tetrahedron: Asymmetry، 14، 2587–2594 (2003).

28) تم تعيين أطياف 1 H- و 13 C-NMR من 1-6 والمركبات ذات الصلة (19 ، 1 أ ، 5 أ ، 14 أ ، 14 ب) بمساعدة التحسين غير المشوه عن طريق نقل الاستقطاب (DEPT) ، مطياف ارتباط مرشح الكم المزدوج ( DQF COZY) ، وتجارب التماسك الكمي المتعدد غير المتجانس (HMQC) ، وتجارب الاتصال المتعدد النوى غير المتجانس (HMBC).

29) نيشيزاوا م ، كوداما س ، ياماسي واي ، كايانو ك ، هاتاكياما س ، يا مادا هـ ، كيم. فارم. الثور ، 42 ، 982-984 (1994).

30) يوشيكاوا م ، أويدا ت ، ماتسودا هـ ، ياماهارا ج. ، موراكامي إن ، تشيم. فارم. الثور ، 42 ، 1691 - 1693 (1994).

31) ماتسودا هـ. ، شيمودا هـ ، أويمورا ت. ، أويدا ت. ، ياماهارا ج. فارم. Bull.، 47، 1753–1758 (1999).

32) دامتوفت س. ، جنسن س ، نيلسن بج ، كيمياء نباتية ، 24 ، 2281 - 2283 (1985).

33) واتانابي ك. ، تاكادا واي ، ماتسو ن. ، نيشيمورا هـ. ، بيوسي. التكنولوجيا الحيوية. Biochem.، 59 ، 1979-1980 (1995).

34) Takikawa H.، Yamazaki Y.، Mori K.، Eur. J. Org. كيم ، 229-232 (1998).

35) Kitagawa I. ، Fukuda Y. ، Taniyama T. ، Yoshikawa M. ، Chem. فارم. الثور ، 39 ، 1171-1176 (1991).

36) Yamaguchi K. ، Shinohara C. ، Kojima S. ، Sodeoka M. ، Tsuji T. ، Biosci. التكنولوجيا الحيوية. Biochem.، 63، 731–735 (1999).