يخفف مورين الأفلاتوكسين ب 1- من إصابات الكبد والكلى عن طريق تثبيط إطلاق الفخاخ غير الخلوية ، والإجهاد التأكسدي والاستجابات الالتهابية في الكتاكيت

للمزيد من المعلومات الرجاء الاتصالtina.xiang@wecistanche.com

نبذة مختصرةالأفلاتوكسين B1 (AFB1) هو مستقلب ثانوي ينتجه Aspergillus favus و Aspergillus الطفيلية ، ويتواجد بشكل أساسي في الحبوب والفول السوداني والذرة والمحاصيل الأخرى ، مما يعرض الدواجن للخطر وصحة الإنسان والبيئة. Morin ، مركب فلافونويد مستخلص من نباتات Moraceae ، يمتلك مضادات الأكسدة ومضاد للبكتيريا ومضاد التهابتأثيرات. ومع ذلك ، ما إذا كان المورين له تأثير وقائي على AFB 1- المستحثكبدوتلف الكلىفي الكتاكيت لم يتم الإبلاغ عنها على وجه التحديد. في هذه الدراسة ، أكدنا بشكل أساسي التأثير الوقائي للمورين على التسبب في تلف الكبد والكلى الذي يسببه AFB 1- في الكتاكيت وتوضيح آليته. وجد أن المورين يمكن أن يقلل بشكل كبير من المؤشرات الكيميائية الحيوية للكبد من ألانين aminotransferase (ALT) ، الأسبارتات aminotransferase (AST) ، ومؤشرات الكلى لمستويات الكرياتينين (CRE) واليوريا النيتروجين (BUN). وفي الوقت نفسه ، أظهر فحص الأنسجة المرضية أن المورين قد خفف بشكل فعال من AFB 1- تسبب في تلف الكبد ، بما في ذلك اضطراب خلايا الكبد ، والتورم ، وتسلل الخلايا الالتهابية ، وتخفيف تلف الكلى بشكل فعال ، بما في ذلك نخر الخلايا الكلوية ، والتقشير ، والتفريغ. أظهر المزيد من التحقيق في آليته أن المورين أعاق بشكل كبير 1- إطلاق الفخاخ خارج الخلية المتغايرة (HETs) ، وخفض مستوى مالونديلديهيد (MDA) ولكنه زاد من مستويات ديسموتاز الفائق (SOD) ، الجلوتاثيون بيروكسيديز (GSH- Px) ، والكتلاز (CAT) في الجسم الحي. علاوة على ذلك ، أظهر التحليل الكمي في الوقت الحقيقي PCR (qRT-PCR) أن المورين أيضًا قلل بشكل كبير 1- تعبيرات الرنا المرسال التي يسببها عامل نخر الورم (TNF-) ، والإنترلوكين -6 (I {{10} }) وإنترلوكين -1 (IL -1) ، سينثاس أكسيد النيتريك المحرض (iNOS) ، انزيمات الأكسدة الحلقية -2 (COX -2) ، caspase -1 ، caspase { {16}} و caspase -11. في الختام ، أكدت جميع النتائج أن المورين يمكن أن يحمي AFB 1- تسبب في تلف الكبد والكلى عن طريق منع إطلاق HETs وتنظيم الإجهاد التأكسدي وتثبيط الاستجابة الالتهابية ، مما يشير إلى أن يمكن استخدام المورين كدواء محتمل للوقاية من التسمم الفطري وعلاجه في صناعة تربية الدواجن.

الكلمات الدالة: مورين ، أفلاتوكسين ب 1 ، مصائد غير خلوية خارج الخلية ، استجابة التهابية ، الإجهاد التأكسدي

المقدمة

الأفلاتوكسين هو نوع من المستقلبات الثانوية ذات السمية العالية والوزن الجزيئي المنخفض الذي تنتجه الفطريات مثل Aspergillus flavus و Parasitic aspergillus و aspergillus النوعي ، والتي لها سمية قوية ، وطفرات ، ومسببة للسرطان ، ومن بينها الأفلاتوكسين B1 (AFB1) لديه أقوى سمية (Rawal et al ، 2010) ، كان تلوث AFB1 مرتبطًا بسلامة التغذية والإنتاج الحيواني وسلامة الغذاء ، بل إنه يهدد صحة الإنسان. وبالتالي ، من المهم حل تلوث AFB1 في الأعلاف والمشاكل المتبقية في الحيوانات ومنتجات الماشية. يشكل التعرض للأفلاتوكسينات أثناء الحمل تهديدًا لصحة الجنين ، والذي يمكن أن ينتقل من الأم إلى الجنين من خلال دم الحبل السري ولبن الثدي (Denning et al. ، 1990). تم الإبلاغ عن أن مستوى AFB1 في مصل اليرقان مع 6- نقص هيدروجيناز الفوسفوجلوكوز عند الأطفال حديثي الولادة ، ووجد أن 58 بالمائة من الأطفال حديثي الولادة و 75 بالمائة من الأمهات كانت نتيجة اختبارهم إيجابية (رأفت وآخرون ، 2021). باعتباره أهم مادة مسرطنة في الخلايا الكبدية ، فإن مادة AFB1 هي السبب الرئيسي لسرطان الخلايا الكبدية (HCC) في العالم ، وقد وجدت الدراسات أن AFB1 وفيروس التهاب الكبد B (HBV) يعملان جنبًا إلى جنب لتعزيز حدوث سرطان الكبد (Rushing and Selim ، 2019) ) .AFB 1- مستحثالاكسدةمن أهم الطرق التي يتم بها ممارسة سميتها (عبد الوهاب وعلي ، 2003). ولكن لا يزال يتعين التحقيق في الآليات الأعمق الكامنة وراء التسمم بالأفلاتوكسي والأدوية الأكثر فعالية للوقاية والعلاج.

Morin (التركيب الكيميائي موضح في الشكل 1) ، هو نوع من الصبغة الطبيعية المستخرجة من نباتات Moraceae ، والتي تنتمي إلى مركبات الفلافونويد ولها خصائص بيولوجية ، بما في ذلك مضادات الالتهاب (Wei et al) ، (Li et al ، 2020) ، ومضادات الأكسدة 2015) ، ومضاد للبكتيريا (Wei et al ، 2015) ، ومضادات التصلب (Zhou et al ، 2017) ، وانخفاض نسبة السكر في الدم ومضاد الإجهاد ، وقد استخدم على نطاق واسع في العلاج السريري لأمراض القلب التاجية والسكري والسرطان. تم الإبلاغ عن أن المورين يمكن أن يمارس تأثيرات مضادة للجراثيم على Staphylococcus aureus و Bacillus و Micrococcus flavus عن طريق التدخل في تخليق الحمض النووي البكتيري وتثبيط نشاط الأدينوزين ثلاثي الفوسفات (ATPase) (Xu وآخرون ، 2001). تظهر بعض الدراسات أن المورين يمكن أن يثبط TLR4 / NF-xB وينشط مسارات إشارات Nrf2 و HO لحماية الحادة التي يسببها LPSاصابة الكبدفي الفئران (Tian et al ، 2017). يمكن للمورين أيضًا تحسين تليف الكبد الناجم عن نترات ثنائي إيثيل الأمونيوم في الفئران عن طريق تعديل نقل إشارة Hippo / YAP و TGF - 1 / Smad (Perumal et al ، 2017). في الوقت الحاضر ، يُذكر أن مجموعة متنوعة من المركبات مثل الفيتامينات A و Cand E (Alpsoy and Yalvac ، 2011) والأوجينول ، يمكن أن تقاومالاكسدةاستجابة AFB1. ومع ذلك ، كعقار تقليدي مضاد للأكسدة ، يمكن أن يلعب المورين أيضًا دورًا وقائيًا في الكبد وإصابة في الكلىفي الكتاكيت المصابة بالأفلاتوكسيات لم يتم الإبلاغ عنها.

مصائد العدلات خارج الخلية (NETs) هي خط دفاع الجسم الأول ضد مسببات الأمراض الخارجية الموجودة في السنوات الأخيرة. الشبكات هي بنية شبكة مع الحمض النووي كهيكل عظمي وتم تعديله بواسطة هيستون سيترولين 3 (citH3) والإيلاستاز (وي وآخرون ،

2019b) ، مع تأثيرات مضادة للجراثيم (Brinkmann et al. ، 2004) ، ومضادة للفيروسات (Saitoh et al ، 2012) ، ومضادة للطفيليات (Wei et al ، 2016). تمتلك المصائد غير الخلوية خارج الخلية (HETs) وظيفة مماثلة للشبكات ، باستثناء أن HETs لا تحتوي على تعبير عن myeloperoxidase (MPO) (Chuammitri et al. ، 2009). لقد ثبت أن N. canine يمكن أن يحفز إطلاق شبكات الكلاب في المختبر لمقاومة العدوى (Wei et al ، 2016). تم التأكيد أيضًا على دراسة يمكن أن تقلل من اندفاعات الجهاز التنفسي في مبروك الأبامكتين (AVM) عن طريق تثبيط تنشيط مسار إشارات PI3K-ERK ، وبالتالي تثبيط إطلاق الشبكات في الكارب (Zheng et al ، 2020). على غرار أبامكتين ، يعتبر المورين دواءً علاجيًا معترفًا به ، سواء كان تأثيره العلاجي مرتبطًا بإفراز الشبكات ، فهذا يتطلب منا مزيدًا من الاستكشاف.

لذلك ، تم في دراستنا دراسة آلية المورين على إصابات الكبد والكلى التي تسببها AFB 1- في الكتاكيت ، وتم استكشاف آثارها الوقائية. من المتوقع توفير أساس تجريبي للتنفيذ السريري البيطري للمورين وتوفير بيانات ومراجع تجريبية للوقاية من التسمم بالسموم الفطرية ومكافحتها.

المواد والطرق الكواشف والمواد

AFB1 (A6636 ، نقاء أكبر من أو يساوي 98 بالمائة ، Sigma-Aldrich [Shang-hail Trading Co.، Ltd. ، شنغهاي ، الصين). تم شراء Morin (نقاء أكبر من أو يساوي 98 في المائة) من شركة Chengdu Pusi Biological Co.، Ltd. (تشنغدو ، الصين). تم الحصول على مجموعة AST و ALT و BUN و CRE من معهد الهندسة البيولوجية في Nanjing Jiancheng (Nanjing ، الصين). تم الحصول على مجموعة GSH-Px SOD و CAT و MDA من معهد الهندسة البيولوجية في Nanjing Jiancheng (Nanjing ، الصين). تم الحصول على مجموعة RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit من مزيج Thermo.qPCR الرئيسي من شركة Roche (مانهايم ، ألمانيا).

إنشاء نماذج حيوانية

تم شراء 25 كتكوتًا عمرها يومًا واحدًا من مزرعة فوشان للتربية (فوشان ، قوانغدونغ) ، وتم إطعام الكتاكيت بشكل تكيفي ليوم واحد. بدأ إنشاء نموذج الصيصان المصابة في اليوم الثاني. تم تقسيم فراخ الاختبار بشكل عشوائي إلى 5 مجموعات: مجموعة التحكم ، مجموعة AFB1 (5 مجم / كجم) ، مجموعة العلاج بالمورين (20 مجم / كجم ، 40 مجم / كجم ، 80 مجم / كجم). تم حقن المجموعة داخل الصفاق مع المورين للوقاية وتم حقنها مرة أخرى بعد 16 ساعة. تم جمع الدم بعد 24 ساعة ، وقتلت الكتاكيت وأخذت أنسجة الكبد والكلى. تم إجراء كل تنفيذ التجربة وفقًا لإرشادات لجنة أخلاقيات أبحاث الحيوان بجامعة فوشان (FSUeae2019112501).

الكشف عن HETs في مصل الدم

كان الدم الذي تم جمعه ثابتًا ، وطرده مركزيًا عند 12 ، 000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق ، وتم استخلاص المصل العلوي وتخفيفه 5- بصبغة TE ، ثم تمت إضافة نفس الكمية من Pico Green. أخيرًا ، تمت ملاحظة النتائج التجريبية باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية مضان.

الكشف عن ALT و AST في مصل الدم

تم قياس مستويات ALT و AST في مصل الدم باستخدام العدة وتم الكشف عن النتائج التجريبية بطول موجة 510 نانومتر بواسطة قارئ الصفيحة الدقيقة.

الكشف عن BUN و CRE في مصل الدم

تم فحص مستويات CRE و BUN في مصل الدم مع المجموعات المقابلة وتم الكشف عن النتائج التجريبية بطول موجة يبلغ 510 نانومتر بواسطة قارئ الصفيحة الدقيقة.

التقييم المرضي لأنسجة الكبد والكلى

تم تثبيت عينات أنسجة الكبد والكلى التي تم جمعها في 10٪ فورمالين. بعد ذلك ، تم تجفيف الأنسجة ، ودمجها ، وتلطيخها بالهيماتوكسيلين ويوزين (ويت آل ، 2021). أخيرًا ، تم استخدام مجهر هجين دوار لمراقبة التغيرات المرضية.

الكشف عن نشاط أوكسيديز ونشاط إنزيم مضادات الأكسدة

تم الكشف عن مستويات Oxidase MDA وأكسيداز GSH-Px و SOD و CAT المضاد للأكسدة مع المجموعات المقابلة (Guo et al ، 2021). من بين ، تم قياس SOD و CAT بالمصل ، وتم قياس MDA و GSH-Px بأنسجة الكبد. بالإضافة إلى ذلك ، نحتاج إلى استخدام كواشف TBD للتحليل الكمي لتركيز البروتين في العينات (Cao et al. ، 2020).

التحليل الكمي في الوقت الحقيقي PCR

تم استخدام QRT-PCR للكشف عن تعبير mRNA لـالتهاباتالعوامل TNF-a و IL -1 و IL -6 والوسيط الالتهابي COX -2 و iNOS و caspase إشارات المسار-way العوامل الرئيسية caspase -1 و caspase {{6} } و caspase -11. تم استخدام أداة CFX Connect Real-Time System لتقدير مضان PCR في الوقت الحقيقي. تم العثور على بادئات الجين المستهدف في الجدول 1. يعتمد اكتشاف qRT-PCR نظام Roche 25 ميكرولتر ، وكانت الحالة 50 درجة ، دقيقتان ؛ 95 درجة ، 10 دقائق ؛ 95 درجة ، 15 ثانية ؛ 60 درجة ، الستينيات ، ما مجموعه 40 دورة. GAPDH كمرجع داخلي ، وكانت طريقة معالجة البيانات المستخدمة 2- AACT (Qianru et al. ، 2021).

تحليل احصائي

تم حساب جميع البيانات بواسطة برنامج GraphPad Prism 5. 0 باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) مع اختبار Tukey للمقارنة المتعددة. اعتبرت الفروق بين المجموعات ذات دلالة إحصائية عند مستويات P<>

النتائج

تغير وزن الجسم ومعامل الكبد في الصيصان

تم تسجيل وزن جسم كل كتكوت وحساب معامل الكبد (معامل الكبد=وزن الكبد / وزن الجسم] × 100). أظهرت النتائج أن معدل نمو وزن الجسم في مجموعة علاج المورين (20 مجم / كجم ، 80 مجم / كجم) قد زاد بشكل ملحوظ مقارنة بمجموعة AFB1 (الشكل 2 أ) ، مما يؤكد أن المورين له تأثير معين على وزن فراخ. ومع ذلك ، فإن معامل الكبد لكل مجموعة من الكتاكيت لم يتغير بشكل ملحوظ (الشكل 2 ب).

Morin يقلل بشكل كبير من مستويات ALT و AST في المصل

ALT و AST مؤشرات لتلف الكبد. أظهرت البيانات أن AFB1 يعزز بشكل كبير مستويات ALT و AST ، بينما أظهر المورين اتجاهًا معاكسًا تمامًا مقارنةً بـ AFB1 (الشكل 3 أ و ب) ، مما يشير مبدئيًا إلى أن المورين له تأثير مفيد على إصابة الكبد التي يسببها AFB 1- في الكتاكيت .

يخفف Morin بشكل كبير من AFB 1- الذي يسبب تلف الكبد في الكتاكيت

لتأكيد تأثيرات المورين على AFB 1- الذي تسبب في إصابة الكبد ، تم إجراء فحص الأنسجة المرضية. كما هو مبين في الشكل 4 ، تورم خلايا الكبد الناجم عن علاج AFB1 ، والتفتت ، وتسلل الخلايا الالتهابية في الكبد ، ولكن المورين (20،40 ، 80 مجم / كجم) خفف بشكل فعال من تلف أنسجة الكبد ، مما أكد كذلك أن المورين لديه تأثير مخفف على AFB 1- تسبب في تلف الكبد في الصيصان.

Morin يقلل بشكل كبير من مستويات BUN و CRE في المصل

BUN و CRE كمؤشرين مهمين لإصابة الكلى ، وجدنا أن AFB1 زاد بشكل كبير من مستويات BUN و CRE مقارنة بمجموعة التحكم ، بينما أظهر المورين اتجاهًا معاكسًا تمامًا مقارنةً بـ AFB1 (الشكل 5A و B) ، والذي يشير أيضًا بشكل مبدئي إلى أن المورين لديه تأثير مفيد على AFB 1- تسبب في إصابة الكلى في الكتاكيت.

Morin يخفف بشكل كبير AFB 1- يسبب إصابة الكلى في الكتاكيت

لتأكيد تأثيرات المورين على AFB 1- الذي تسبب في إصابة الكلى ، تم إجراء فحص الأنسجة المرضية. أظهرت كلية مجموعة العلاج AFB1 نخرًا لخلايا الكلى وتقشيرًا وتفريغًا ، بينما خففت مجموعة علاج المورين ، مع زيادة تركيز المورين (20،40،80 مجم / كجم) بشكل فعال من إصابة أنسجة الكلى (الشكل 6) ) ، والذي أكد أيضًا أن المورين له تأثير مخفف على AFB 1- الذي تسبب في إصابة الكلى في الكتاكيت.

مورينانخفاض ملحوظ في مستوى HETs المستحث بـ AFB 1- في المصل

لاستكشاف الآلية الكامنة وراء حماية المورين على إصابة الأنسجة التي يسببها AFB 1- ، تم الكشف عن HETs المنطلق في المصل بواسطة Pico Green. تم جمع عينات الدم للكشف عن مستوى HETsمصل. أشارت النتيجة التجريبية إلى أن AFB1 تسبب بشكل ملحوظ في توليد HETs في مصل الدم ، بينما أعاق المورين بشكل كبير توليد HETs مقارنة بمجموعة AFB1 (الشكل 7). وبالتالي ، أكدنا أولاً أن مادة AFB المخففة من مورين 1- تسببت في إصابة الكبد والكلى عن طريق منع إطلاق HETs.

يخفف Morin بشكل ملحوظ 1- من الإجهاد التأكسدي في الكتاكيت

تم الإبلاغ عن أن الإجهاد التأكسدي هو آلية حاسمة في التأثيرات السامة لـ AFB1 ، تم اكتشاف وظيفة المورين على AFB 1- التي تسبب الإجهاد التأكسدي. أشارت النتيجة إلى أن AFB1 أضاف بشكل ملحوظ مستوىأوكسيديز MDA ، مع تقليل مستويات الإنزيم المضاد للأكسدة GSH-Px و SOD و CAT بشكل ملحوظ. ومع ذلك ، بالمقارنة مع AFB1 ، خفف المورين بشكل فعال من عدم التوازن بين أوكسيديز والإنزيمات المضادة للأكسدة (الشكل 8).

لاستكشاف الآلية الكامنة وراء حماية المورين على إصابة الأنسجة التي يسببها AFB 1- ، تم الكشف عن HETs المنطلق في المصل بواسطة Pico Green. تم جمع عينات الدم للكشف عن مستوى HETs

قام Morin بتثبيط مستويات الرنا المرسال لـ AFB 1- الوسائط الالتهابية المستحثة والعوامل الالتهابية في الكبد

الالتهاباتالاستجابة هي آلية مهمة في التأثيرات السامة لـ AFB1 ؛ تم فحص تأثير المورين على AFB 1- تسبب في استجابات التهابية. تم استخدام تحليل qRT-PCR للكشف عن تعبير الوسطاء الالتهابيين COX -2 و iNOS والعوامل الالتهابية TNF-. إيل -1. إيل -6. أشارت النتائج التجريبية إلى أن AFB1 حسّن بشكل ملحوظ مستويات التعبير عن هذه السيتوكينات ، بينما منع المورين بشكل ملحوظ التعبير عن هذه السيتوكينات (الشكل 9).

تسبب Morin بشكل ملحوظ في تثبيط AFB 1- في تعبير mRNA عن Caspase -1 و Caspase -3 و Caspase -11

تم الإبلاغ أيضًا عن مسار إشارات كاسباس في عملية الإجهاد التأكسدي والاستجابات الالتهابية. يمكن أن يتسبب ROS في تلف غشاء الميتوكوندريا ، مما يؤدي إلى تدفق السيتوكروم ج ، وتفعيل مسار إشارات كاسباس. لذلك ، اكتشفنا تعبير mRNA للعوامل الرئيسية لمسار إشارات كاسباس. أكدت النتيجة أن AFB1 زاد بشكل ملحوظ من تعبير الرنا المرسال لكل من caspase -1 و caspase -3 و caspase -11 ، بينما قلل المورين بشكل ملحوظ من التعبير عن هذه العوامل (الشكل 10).

نقاش

AFB1 هو أكثر السموم الفطرية سمية ، وهو السبب الرئيسي لداء الرشاشيات. كان هناك الكثير من الدراسات حول سمية AFB1 ، بما في ذلك السمية الكبدية والسمية العصبية والسرطنة. الكبد ، باعتباره العضو الرئيسي لإزالة السموم والموقع الرئيسي لتحول استقلاب المادة في الحيوانات ، معرض بشكل كبير لتلف AFB1 ، والذي يتوسطه أساسًا 4 آليات: نظام إنزيم السيتوكروم P450 (CYP450) والميتوكوندريا والجهاز المناعي والجذور الحرة . بعد دخول AFB1 إلى الجسم ، يتم امتصاصه من الاثني عشر في الجهاز الهضمي ويدخل الكبد من خلال الوريد البابي ، حيث يتحول إلى AFBO بواسطة CYP1A2 و CYP3A4 في المرحلة الأولى من نظام إنزيم التمثيل الغذائي CYP450 في خلايا الكبد (Yang et al 2013). العملية المذكورة أعلاه هي السبب الأكثر أهمية الذي يجعل AFB1 يسبب اضطرابات في الجسم وينتج عنه تأثيرات سمية ومسرطنة. يمكن لـ AFB1 أيضًا تحفيز موت الخلايا المبرمج للكبد عن طريق زيادة تنظيم التعبير عن مستقبلات الموت F AS و TNFR1 ، وتقليل تنظيم التعبير عن المستقبلات المضادة للخلايا XIAP و Bcl -2 (Mughal et al. ، 2017). ، لقد أكدنا أن AFB1 يمكن أن يسبب تلفًا في الكبد والكلى في الكتاكيت وتم توضيح الآلية بشكل أولي.

Morin هو نوع من الفلافونويد الطبيعي ، الذي له تركيبة طبيعية مضادة للأكسدة. يحتوي الكينون المتكون من الأكسدة على نشاط مضاد للأكسدة قوي ، والذي يمكن أن يحمي الأحماض الدهنية غير المشبعة على غشاء الخلية من الأكسدة (Xie et al ، 2003). أكدت الدراسات أن المورين يمكن أن يلعب دورًا وقائيًا معينًا في تلف الكبد الناجم عن IFOS في الفئران عن طريق تثبيط الإجهاد التأكسدي. التهاب وكذلك موت الخلايا المبرمج (Ozdemir et al2020). يمكن أن يخفف Morin أيضًا من التهاب الضرع الناجم عن LPS عن طريق تثبيط PI3K / AKT و MAPK و NF-kB. ومسارات إشارات NLRP3 (جيانغ وآخرون 2020). ومع ذلك ، فإن التأثيرات الوقائية ذات الصلة للمورين على AFB 1- التي تسببت في حدوث ضرر تظل مجهولة. لذلك ، استكشفت هذه التجربة بشكل أساسي التأثيرات الوقائية للمورين على AFB 1- التي تسببت في تلف الكبد والكلى وأوضحت آليتها.

بناءً على تقييم أكثر دقة لجرعة وتأثيرات المورين ، تم اختيار الحقن داخل الصفاق. علاوة على ذلك ، كانت طريقة الإعطاء مع المورين متوافقة مع تلك الموجودة في الفئران والجرذان (Jiang et al..2020 ؛

خامشاي وآخرون ، 2020). أولاً ، تم فحص مستويات AST و ALT و BUN و CRE في مصل الدم للتأكد من أن نموذج السمية AFB1 قد تم إنشاؤه بنجاح. تمت زيادة مؤشرات تلف الكبد والكلى لمجموعة AFB1 بشكل ملحوظ ، بينما أعاقت مجموعات الموران بشكل ملحوظ التعبير عن هذه الإنزيمات ، والتي أكدت بشكل أولي دور الموران في الحماية من AFB 1- الذي تسبب في تلف الكبد والكلى في الكتاكيت. في الوقت نفسه ، وجدنا أنه على الرغم من عدم وجود اختلاف ملحوظ في مؤشر الكبد بين المجموعات ، فقد تحسن معدل نمو الوزن بشكل ملحوظ في مجموعة العلاج بالمورين (20 مجم / كجم ، 80 مجم / كجم) ، مما يؤكد تأثير مورين على وزن الكتاكيت. علاوة على ذلك ، أكد الفحص التشريحي المرضي أن المورين يخفف بشكل فعال AFB 1- تسبب في اضطراب خلايا الكبد وتورم وتسلل الخلايا الالتهابية ونخر الخلايا الكلوية والتقشير والتفريغ ، مما أكد أيضًا التأثيرات الوقائية للمورين على تلف الكبد والكلى في الكتاكيت . بعد ذلك ، بحثنا في الآلية الوقائية للمورين ضد AFB 1- الذي تسبب في إصابة الكبد والكلى في الكتاكيت.

NETs ، باعتبارها خط الدفاع الأول عن المناعة الفطرية ، هي سيف ذو حدين للكائن الحي. من ناحية ، يلعب دورًا مهمًا في دفاع الجسم ضد مسببات الأمراض. من ناحية أخرى ، سوف يتسبب في تلف الأنسجة ويساهم في تكوين بعض الأمراض ، مثل تصلب الشرايين والتخثر (Moschonas and Tselepis ، 2019). أكدت الدراسة أن الشبكات والهيستونات تلعب دورًا مهمًا في إصابة الخلايا الظهارية للثدي البقري (BMEC) ، كما أن تثبيط تكوين الشبكات المفرطة يمكن أن يخفف من الإصابة المرتبطة بالتهاب الضرع (وي وآخرون 2019 أ). لقد وجدنا أيضًا أن AFB1 يمكن أن يتسبب في تلف الكبد والكلى في الكتاكيت عن طريق تحفيز إطلاق HET. سواء كان التأثير الوقائي للمورين على AFB1 تسبب في إصابة الكتاكيت مرتبطًا بـ HETs هو أيضًا هدف مهم من تجربتنا. تعمل HETs باعتبارها الاستجابات المناعية الفطرية الحيوية للدجاج ، وأفضل وقت للكشف عن HETs في المصل هو خلال 24 ساعة ، وبالتالي تم اختيار توقيت الدراسة. لقد وجد أن المورين قلل بشكل كبير من تكوين HETs في المصل ، وقد تم التأكيد لأول مرة على أن المورين قد تسبب في إصابة الكتاكيت عن طريق تثبيط إطلاق HET.

في عملية التمثيل الغذائي الطبيعية للجسم ، يكون الأكسدة في حالة توازن ديناميكي ، ولكن عندما يتجاوز إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) في الجسم كميات مضادات الأكسدة ، يحدث الإجهاد التأكسدي. يرتبط الإجهاد التأكسدي بالعديد من أمراض الكبد ، مثل مرض التكاثر الليفي الكبدي ، ومرض الكبد الكحولي ، ومرض الكبد الدهني غير الكحولي (Cichoz-Lach and Michalak ، 2014). MDA هو المنتج النهائي لأكسدة الدهون التي تنتجها ROS ، ويمكن أن تعكس بشكل مستقل درجة الضرر الذي يلحق بنظام الغشاء ودرجة هجوم الجذور الحرة على الخلايا ، لذلك فهي تعتبر علامة جيدة لتقييم الإجهاد التأكسدي (Wang et al ، 2019). SOD هو إنزيم محدد مضاد للأكسدة يقوم بإزالة أنيون الأكسيد الفائق في الجذور الحرة لـ ROS ، والذي يرى بشكل غير مباشر قدرة الجسم على إزالة الجذور الخالية من الأكسجين ، وله وظيفة بالغة الأهمية في دراسة إصابة الكبد (Zhang et al..2018) . GSH-Px هو مؤشر مهم لقياس حالة الأكسدة في الخلايا ، والتي يمكنها مواجهة سمية جذور الأكسجين عن طريق توفير H plus مباشرة ، وتقليل

الضرر التأكسدي للكبد. توجد CAT في أنسجة الحيوانات المختلفة ، وخاصة في الكبد بتركيزات عالية ، والتي يمكن أن تكسر بشكل فعال بيروكسيد الهيدروجين إلى ثاني أكسيد الكربون والماء لحماية الخلايا من الأكسدة (Alfonso-Prieto et al. ، 2009). أشارت النتيجة إلى أن AFB1 خفض بشكل ملحوظ مستويات إنزيمات مضادات الأكسدة GSH-Px و SOD و CAT ، كما أدى إلى زيادة مستوى الإنزيمات المضادة للأكسدة MDA ، بينما أظهرت مجموعة المورين اتجاهًا معاكسًا ، مما أدى بشكل فعال إلى التخفيف من عدم التوازن بين أوكسيديز والإنزيمات المضادة للأكسدة ، مما يشير إلى أن المورين يمكن أن يمنع بشكل فعال AFB 1- تسبب الإجهاد التأكسدي.

يُذكر أن ROS يمكن أن يتسبب في التعبير عن السيتوكينات الالتهابية وتنشيط العامل النووي كابا ب (NF-xB) ومسارات كيناز البروتين المنشط بالميتوجين (MAPK) (لي وآخرون 2014). عادة ما يشكل بروتين NF-xB homo / heterodimers من p65 و p50 وهو في حالة غير نشطة في السيتوبلازم بسبب تكوين مركب Trimer مع البروتين المثبط IkB (Pantano et al. ، 2006). بعد أن يتم تحفيزها من قبل العامل الممرض ، يتم فصل IkB عن القاطع ، ويتعرض ثنائى NF-kB لتسلسلات التوطين النووي (NLS) ، والتي تدخل بسرعة النواة من السيتوبلازم وترتبط بتسلسلات محددة على الحمض النووي النووي ، مما يعزز نسخ الجينات ذات الصلة (Zhang and Ghosh، 2001) .TNF- هو أهم السيتوكينات المؤيدة للالتهابات المشاركة في تنشيط NF-B ، مما يؤدي إلى التعبير عن IL -18، IL -6، COX -2 و iNOS ووسطاء تحريضيون آخرون (Rajendran et al 2018). أظهرت نتائجنا أن AFB1 عزز بشكل كبير تعبير الرنا المرسال للعوامل الالتهابية TNF- و IL -1 و IL -6 والوسطاء الالتهابيين COX -2 و iNOS ، لكن مجموعة المورين أعاقت التعبير بشكل كبير من هذه العوامل ، مما يشير إلى أن المورين يمكن أن يثبط بشكل فعال الاستجابة الالتهابية التي يسببها AFB 1- في الكتاكيت.

أظهرت الدراسات أن الإجهاد التأكسدي هو أحد العوامل المحفزة على موت الخلايا المبرمج (Chandra et al. ، 2000) ، وأن العديد من المواد التي تحفز موت الخلايا المبرمج هي بشكل عام مؤكسدات أو محفزات في عملية التمثيل الغذائي المؤكسد للخلايا. قد يؤدي تنشيط NF-kB إلى نسخ جينات العامل proapoptotic أو تثبيط التعبير عن البروتينات المضادة للاستماتة. وفي الوقت نفسه ، فإن مسار إشارات كاسباس والاستجابة الالتهابية مترادفتان. يلعب Caspase -1 دورًا مهمًا في Il -1 الإفراز و caspase -11 وهو تجانس بين caspase البشرية الالتهابية -4 وأفراد العائلة caspase -4 caspase {{9 }} (Van Opdenbosch and Lamkanfi، 2019). أكدنا أن AFB1 يعزز بشكل ملحوظ تعبير caspase -1 و caspase -3 و caspase -11 ، بينما قلل المورين بشكل كبير من التعبير عن هذه العوامل ، مما يؤكد أن المورين يمكن أن يمنع بشكل فعال تنشيط تسبب AFB 1- في إحداث مسار إشارات caspase في الكتاكيت.

بناءً على النتائج المذكورة أعلاه ، أكدنا أن المورين يمكن أن يخفف بشكل فعال من AFB 1- الذي يتسبب في تلف الكبد والكلى في الكتاكيت ، والذي يمكن أن يوفر الأساس التجريبي والمرجع النظري للتطبيق العملي للمورين. في البحث التالي ، يجب اختيار طريقة التغذية بالمورين ، مثل مياه الشرب ، وهناك حاجة لمزيد من الكتاكيت والدجاج الأكبر سنًا لتأكيد تأثير المورين في تربية الدواجن.

استنتاج

Morin ، كمركب طبيعي موجود بشكل شائع في الأدوية العشبية الصينية والمكملات الغذائية ، تم بحثه بشكل كامل والتأكد من سلامته وحصل على نتائج مرضية. أثبتت تجاربنا أيضًا أن المورين يمكن أن يخفف بشكل فعال من AFB 1- الذي يتسبب في تلف الكبد والكلى عن طريق تثبيط إطلاق HETs والإجهاد التأكسدي والاستجابة الالتهابية. لذلك ، تُظهر هذه الدراسة أن المورين لديه القدرة على أنه مادة مضافة للأعلاف لحماية الكبد وأطفال الدواجن ، ومنع المواد الضارة في الأعلاف ، وتحسين أداء الدواجن.