نشاط متعدد الاتجاهات لباكوتشيول ضد الآليات الخلوية لشيخوخة الوجه - الدليل التجريبي لنهج العلاج الشامل الجزء 1

خلاصة

موضوعي: شيخوخة الجلد هي عملية متعددة العوامل تنطوي على تكوين أنواع الأكسجين التفاعلية ، والتهابات متتالية مع انخفاض قابلية خلايا البشرة والجلد ، مما يؤدي إلى تلف المصفوفة خارج الخلية. يجب أن تعالج طرق العلاج التجميلية الجلدية الفعالة هذه السمات المميزة في نهج شامل. هنا ، حددنا ملف النشاط المقابل لـ bakuchiol ، وهو Meroterpene مشتق من النبات ، في مجموعة من الدراسات في المختبر وخارج الجسم الحي وفي الجسم الحي وقارنناه مع الريتينول ، الذي يعتبر حاليًا المعيار الذهبي في مستحضرات التجميل الموضعية المضادة للشيخوخة.

يمكن أن يزيد الجليكوزيد من cistanche أيضًا من نشاط SOD في أنسجة القلب والكبد ، ويقلل بشكل كبير من محتوى lipofuscin و MDA في كل نسيج ، ويزيل بشكل فعال العديد من جذور الأكسجين التفاعلية (OH- ، H₂O₂ ، إلخ) والحماية من تلف الحمض النووي الناتج عن ذلك. بواسطة OH- الجذور. جليكوسيدات Cistanche phenylethanoid لديها قدرة قوية على إزالة الجذور الحرة ، وقدرة تخفيض أعلى من فيتامين C ، وتحسن نشاط SOD في تعليق الحيوانات المنوية ، وتقليل محتوى MDA ، ولها تأثير وقائي معين على وظيفة غشاء الحيوانات المنوية. يمكن أن يعزز عديد السكاريد القارص نشاط SOD و GSH-Px في كريات الدم الحمراء وأنسجة الرئة للفئران المسنة تجريبياً الناتجة عن D-galactose ، وكذلك تقليل محتوى MDA والكولاجين في الرئة والبلازما ، وزيادة محتوى الإيلاستين ، تأثير الكسح الجيد على DPPH ، وإطالة وقت نقص الأكسجة في الفئران الشائخة ، وتحسين نشاط SOD في مصل الدم ، وتأخير التنكس الفسيولوجي للرئة في الفئران الشائخة تجريبياً مع التنكس المورفولوجي الخلوي ، أظهرت التجارب أن Cistanche لديه قدرة جيدة على مضادات الأكسدة وله القدرة على أن يكون دواءً لمنع وعلاج أمراض شيخوخة الجلد. في الوقت نفسه ، يتمتع إشنكوسايد في Cistanche بقدرة كبيرة على البحث عن الجذور الحرة لـ DPPH ويمكنه البحث عن أنواع الأكسجين التفاعلية ، ومنع تدهور الكولاجين الناجم عن الجذور الحرة ، وله أيضًا تأثير إصلاح جيد على تلف أنيون الثايمين الجذور الحرة.

انقر فوق مضادات الأكسدة Cistanche Tubulosa

【لمزيد من المعلومات: george.deng@wecistanche.com / WhatApp: 86 13632399501】

طُرق: تم تحليل القدرة المضادة للأكسدة وقوة الباكوتشول والريتينول عن طريق قياس تخفيض 2،2′-ثنائي فينيل -1- بيكريل هيدرازيل (DPPH) عن طريق تحلل الامتصاص والتحليل الطيفي للرنين المغزلي للإلكترون ، على التوالي. التأثيرات على البروستاغلاندين E2 (PGE2) ، عامل مثبط هجرة البلاعم (MIF) ، عامل نمو الأرومة الليفية 7 (FGF7) ، نوع الكولاجين الأول والسابع (COL1A1 ، COL7A1) ، مستويات الفبرونيكتين (FN) وكذلك استقلاب التيرازوليوم القابل للذوبان في الماء 1 (WST -1) في الخلايا الليفية الجلدية البشرية. تم تقييم تجديد البشرة باستخدام نموذج التئام الجروح في المختبر. تم تحليل مستويات بروتين FN خارج الجسم الحي بعد العلاج بتركيبة تحتوي على باكوتشيول أو ريتينول أو مركبة باستخدام سائل نفطة شفط. تم تحديد تحسن حالة الجلد في الجسم الحي في دراسة مقارنة منقسمة الوجه بعد تطبيق الباكوتشيول أو المركبات.

نتائج: على عكس الريتينول ، أظهر باكوتشيول فعالية عالية في مضادات الأكسدة. انخفضت مستويات PGE2 و MIF بشكل ملحوظ بواسطة كل من الباكوتشيول والريتينول. باكوشيول ولكن ليس الريتينول زاد بشكل كبير من مستويات البروتين FGF7. تم زيادة مستويات التمثيل الغذائي لـ WST -1 بشكل ملحوظ بواسطة الباكوتشول والريتينول. أدى تطبيق Bakuchiol و retinol إلى زيادة كبيرة في مستويات البروتين COL1A1 و COL7A1 و FN. أظهرت الجروح المكملة بالباكوشيول وليس الريتينول زيادة كبيرة في تجدد البشرة. سريريًا ، أظهرت المناطق المعالجة بتركيبة تحتوي على الباكوتشيول زيادة ذات دلالة إحصائية في قيم بروتين FN بعد 4- أسبوع من الاستخدام مقارنة بالمناطق غير المعالجة والمناطق المعالجة بالمركبة.

خاتمة: توفر هذه البيانات دليلاً على الفعالية متعددة الاتجاهات للباكوشيول ضد السمات الخلوية لشيخوخة الجلد. يشترك ملف نشاطه في بعض السمات المشتركة مع الريتينول ولكنه يوضح العديد من التأثيرات الإيجابية غير المعروفة حتى الآن في دراساتنا ، وهي تحفيز مكون المصفوفة خارج الخلية الحرج FN ، وتجديد البشرة المتسارع والتئام الجروح.

الكلمات الدالة

مضاد للشيخوخة ، باكوتشيول ، ادعاء إثبات في الجسم الحي / خارج الجسم الحي / في المختبر ، الريتينول ، فيزيولوجيا الجلد / الهياكل

مقدمة

تتميز البشرة المسنة بالتجاعيد ، والتصبغ غير المتساوي ، وخشونة الجلد ، والتراخي. هذه العلامات السريرية هي نتيجة التغيرات الهيكلية والتمثيل الغذائي التي تسببها عمليات الشيخوخة الداخلية والخارجية. تُعزى الشيخوخة الجوهرية إلى عوامل تشمل قصر التيلومير ، والالتهاب المزمن ، وطفرات الحمض النووي الفردي في الميتوكوندريا ، والجذور الحرة [1]. تشتمل البشرة المسنة كذلك على تقليل أنظمتها المضادة للأكسدة [2]. أيضًا ، ينخفض ​​معدل تكاثر الخلايا بسبب عملية الشيخوخة البيولوجية التي تؤدي إلى فقدان بنية الجلد ووظيفته. تحدث الشيخوخة الخارجية في المقام الأول عن طريق الإشعاع فوق البنفسجي والتأثيرات البيئية. تؤدي هذه الإهانات إلى تلف الجلد الذي يعزز التدهور الزمني ويسرع شيخوخة الجلد. يفقد جلد الإنسان أيضًا قدرته على التعامل مع الحالات الالتهابية خلال الشيخوخة ، مما يؤدي إلى حالة مزمنة من الالتهابات.

يعتبر التطبيق الموضعي للريتينويدات مثل حمض الريتينويك أو الشبكية أو الريتينول بمثابة المعيار الذهبي السريري للعلاج الفعال لمكافحة الشيخوخة [3 ، 4]. تم وصف الآليات الجزيئية للريتينويدات على نطاق واسع [5-10]. تقلل الرتينويدات الموضعية بشكل فعال من العلامات المرئية للشيخوخة مثل التجاعيد أو التراخي أو الخشونة [4 ، 11] وتقلل من تصبغ الجلد التالف ضوئيًا بما في ذلك الشبكية الحية والنمش الشعاعي [12]. ومع ذلك ، فإن العلاج الموضعي بالريتينويدات يمكن أن يؤدي إلى جفاف الجلد وتهيجه المعتمد على التركيز [13]. نظرًا لأن تطبيق الريتينول يسبب تفاعلات ضائرة طفيفة مقارنةً بالريتينويدات الأخرى مثل حمض الريتينويك [6 ، 14] ، فهو فعال على نطاق واسع في العلاج التجميلي لشيخوخة الوجه.

على عكس الريتينول الذي تم استخدامه في منتجات العناية بالبشرة منذ عام 1984 [15] ، لم يكتسب الباكوتشيول الاهتمام إلا مؤخرًا كمركب موضعي مضاد للشيخوخة. باكوتشيول هو ميروتيربين (الشكل 1) مشتق من بذور Psoralea corylifolia. لقد تم استخدامه في الطب الهندي والصيني التقليدي لعدة قرون [16 ، 17] وهو جيد التحمل [18]. تم اقتراح باكوتشيول لإظهار وظائف شبيهة بالريتينول ، كما هو الحال في نموذج بديل للجلد ، تظهر كلتا المادتين أنماط تعبير جيني متشابهة في المختبر [19] وتحسنًا في التلف الضوئي الجلدي في الجسم الحي [20]. ومن ثم ، فقد تمت الإشارة إليه أيضًا على أنه نظير ريتينويد وظيفي مشتق من النبات [21]. أظهرت دراسات أخرى مضادات الأكسدة [19 ، 22-24] ، المضادة للالتهابات [19 ، 25-27] ، المضادة للبكتيريا [28] بالإضافة إلى التأثيرات المضادة للتكاثر والأورام [29 ، 30] من الباكوتشيول.

لتحسين وتأخير عمليات شيخوخة الجلد متعددة العوامل بشكل فعال ، يجب معالجة الآليات الخلوية المختلفة في نهج متكامل. يعدل Bakuchiol أهدافًا مختلفة في وقت واحد مما يجعله مركبًا واعدًا في هذا الصدد. نظرًا لأن الضغوط المؤكسدة والالتهابية مرتبطة ارتباطًا وثيقًا بشيخوخة الجلد ، فإن الوقاية منها عن طريق الباكوتشيول قد تعزز حالة الجلد بشكل عام. ومع ذلك ، فقد تم مؤخرًا تقييم جودة الأدلة العلمية الحالية بشكل نقدي [31]. في هذا السياق ، حددنا القدرات (1) المضادة للأكسدة و (2) المضادة للالتهابات للباكوتشيول والريتينول وفحصنا قدرتها على تحسين التمثيل الغذائي الخلوي وتوليف عامل النمو 7 الذي تم تلخيصه على أنه (3) نشاط الخلية. قمنا أيضًا بتحليل ما إذا كان الباكوتشيول والريتينول يؤثران على التعبير عن بعض مكونات ECM (4) وتحسين (v) تجديد البشرة وإعادة تكوين النسيج الطلائي. أخيرًا ، أجريت دراسة في الجسم الحي للتحقق من قدرة الباكوتشيول السريرية المضادة للشيخوخة في جلد الإنسان.

المواد والأساليب

مواد الاختبار

تم الحصول على Bakuchiol من Sytheon Ltd (Boonton ، نيو جيرسي ، الولايات المتحدة). تم شراء الريتينول من Sigma-Aldrich (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة). لتجارب زراعة الخلايا ، تم تخفيف كلا المادتين حديثًا في DMSO (ميرك ، دارمشتات ، ألمانيا). بالنسبة إلى محاليل مخزون DMSO ، كان التركيز المطبق لمواد الاختبار 1000- أضعاف أعلى تركيز مطبق في زراعة الخلية 0. 1٪ DMSO في الوسائط أو المخزن المؤقت. تم إجراء مزيد من التخفيفات باستخدام الوسائط أو المخزن المؤقت مع 0. 1 بالمائة DMSO. ومن ثم ، تم إجراء جميع تجارب زراعة الخلايا في وجود 0. 1٪ DMSO. بالنسبة للدراسات المجراة ، تمت صياغة الريتينول الموضعي في نفس السيارة مثل الباكوتشيول.

دراسات في المختبر

تحديد القدرة المضادة للأكسدة

باكوتشيول ، الريتينول (كلاهما مطبق بتركيز نهائي 100 ميكرومتر) ، أو الترولوكس القياسي العالي (ميرك ، التركيز النهائي 25 ميكرومتر) تم تخفيفه في DMSO. باختصار ، تمت إضافة 30 ميكرولتر من هذه المركبات (10- أضعاف تركيز أعلى من تركيز الفحص النهائي) إلى 96- لوح قاع مسطح جيدًا. بعد ذلك ، تمت إضافة 270 ميكرولتر من 39 ميكروغرام / مل DPPH (Merck ، المخفف في خليط 1: 1 ماء / إيثانول) بسرعة إلى كل بئر مما أسفر عن تركيز نهائي بنسبة 10 بالمائة DMSO. كعنصر تحكم ، تم تحضين محلول DPPH مع DMSO الذي يفتقر إلى مواد الاختبار. علاوة على ذلك ، تم إجراء الضوابط الفارغة عن طريق احتضان الباكوتشول أو الريتينول بالماء / الإيثانول (1: 1) أو فقط خليط الماء / الإيثانول (1: 1) المحتوي على 10 بالمائة DMSO في غياب DPPH. بعد 10 و 30 و 60 دقيقة ، تم قياس الامتصاصية عند 524 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة ميكروية متعدد الأوضاع Spark (Tecan ، Männedorf ، سويسرا). تم طرح إشارات الضوابط الفارغة.

تحديد القوة المضادة للأكسدة

تم زرع بذور HDFs في {0} أطباق جيدة مع 150 000 خلايا / بئر في وسط 2 مل يحتوي على 10 بالمائة من مصل العجل وحضنت لمدة 24 ساعة. بعد ذلك ، تم التخلص من الوسط القديم ، وعولجت الخلايا بوسط يحتوي على 2 في المائة من مصل العجل والباكوشيول أو الريتينول بتركيز نهائي قدره 10 ميكرومتر. تم تكميل HDFs الضابطة بـ 0.1 بالمائة DMSO التي تفتقر إلى الباكوتشول أو الريتينول. تم إجراء الضوابط الفارغة عن طريق احتضان وسيط بدون خلايا. بعد 24 ساعة ، تم نقل الوسيط المُكيف إلى أعمدة دوران مُكثِّف بروتين Vivaspin (5000 ميجاواط ؛ Sartorius ، Göttingen ، ألمانيا) وتركز تقريبًا 10- أضعاف. تمت موازنة أحجام جميع المواد الطافية المتوسطة عن طريق إعادة إضافة التدفق خلالها. تم تحليل مستويات بروتين FGF7 للوسط المكيف المركز باستخدام مجموعة ELISA المتاحة تجاريًا باتباع إرشادات الشركة المصنعة (Bio-Techne GmbH). تم إجراء القياسات باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية سبارك (Tecan). تم طرح الإشارات التي تم الحصول عليها من عناصر التحكم الفارغة وتم تطبيع مستويات البروتين FGF7 إلى إجمالي عدد الخلايا التي تم تحديدها باستخدام عداد الخلية (Sceptre ، Merck).

تحديد استقلاب WST -1

تم زرع بذور HDFs في {0} أطباق جيدة مع 3000 خلية / بئر في وسط 100 ميكرولتر يحتوي على 10 بالمائة من مصل العجل وحضنت لمدة 24 ساعة. تم التخلص من الوسط المستنفد ، وعولجت الخلايا بوسط 100 ميكرولتر يحتوي على ريتينول أو باكوتشيول بتركيز نهائي قدره 1 ميكرومتر أو 10 ميكرومتر ، على التوالي. تم تكميل HDFs الضابطة بـ 0.1 بالمائة DMSO التي تفتقر إلى الباكوتشول أو الريتينول. كعنصر تحكم إضافي ، عولجت الخلايا بنسبة 10 بالمائة من triton-X (Merck). تم إجراء الضوابط الفارغة عن طريق احتضان وسيط بدون خلايا. بعد 72 ساعة ، تم تلوين الخلايا باستخدام كاشف تكاثر الخلايا المتاح تجاريًا WST -1 وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة (Merck). تم قياس الامتصاصية عند 450 و 620 نانومتر باستخدام قارئ الصفيحة الميكروية Tecan infinity M200 (Tecan). تم استخدام الفرق في هذه القياسات للتحليل. تم طرح إشارات الضوابط الفارغة.

تحديد مستويات البروتين COL1A1 و COL7A1

تم زرع بذور HDFs في {0} أطباق جيدة مع 10  000 خلايا / بئر في وسط 100 ميكرولتر يحتوي على 10 بالمائة من مصل العجل وحضنت لمدة 24 ساعة. تم تخفيف باكوتشيول أو الريتينول في وسط 100 ميكرولتر بدون مصل العجل ، واستكمل إلى الوسط الحالي بتركيز نهائي قدره 1 ميكرومتر أو 10 ميكرومتر ، على التوالي. تمت إضافة عنصر التحكم بوسط خالٍ من المصل 100 ميكرولتر ينتج عنه تركيز بنسبة 0.1 في المائة DMSO يقابل معالجة الريتينول والباكوتشيول. كمعيار عالي ، تم تطبيق 10 نانوغرام / مل عامل النمو المحول- (TGF-) و 11 ميكروغرام / مل أسكوربات الصوديوم (كلاهما ميرك). تم إجراء الضوابط الفارغة عن طريق احتضان وسيط بدون خلايا. بعد 4 ساعات ، تم تحليل مستويات البروتين COL1A1 و COL7A1 للوسط المكيف باستخدام مجموعات ELISA المتاحة تجاريًا باتباع إرشادات الشركة المصنعة (Novus Biologicals ، Littleton ، كولورادو ، الولايات المتحدة). تم إجراء القياسات باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية سبارك (Tecan). تم طرح إشارات الضوابط الفارغة. تم تطبيع مستويات البروتين COL1A1 و COL7A1 إلى إجمالي كمية بروتين محلول الخلية التي تم تحديدها باستخدام مجموعة مقايسة حمض البيسينشونينيك المتاحة تجاريًا (Thermo Fisher Scientific) وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة. كان الشرط الأساسي لاستخدام النتائج هو رد الفعل الإيجابي للخلايا على TGF عالي المستوى وأسكوربات الصوديوم.

لتحليل مستويات بروتين COL7A1 بعد فترة حضانة ممتدة ، تم زرع بذور HDF في 96- أطباق جيدة تحتوي على 3000 خلية / بئر في وسط 100 ميكرولتر يحتوي على 10 بالمائة من مصل العجل. تم إجراء جميع المعالجات والضوابط والتحليل على النحو الموصوف أعلاه باستثناء أن الباكوتشيول والريتينول تم استخدامهما فقط بتركيز نهائي قدره 10 ميكرومتر. تم حصاد الخلايا عندما تم الوصول إلى التقارب الفرعي ، على وجه الخصوص ، بعد 72 أو 96 ساعة.

تحديد مستويات البروتين FN

تم زرع بذور HDFs في {0} أطباق جيدة مع 10 000 خلايا / بئر في وسط 100 ميكرولتر يحتوي على 10 بالمائة من مصل العجل وحضنت لمدة 24 ساعة. تم استبدال الوسط القديم بوسط يحتوي على 2 في المائة من مصل العجل والباكوشيول أو الريتينول بتركيز نهائي قدره 10 ميكرومتر. تمت إضافة عنصر التحكم بـ 0.1 بالمائة من DMSO الذي يفتقر إلى الباكوتشول أو الريتينول. تم إجراء الضوابط الفارغة عن طريق احتضان وسيط بدون خلايا. بعد 24 ساعة ، تم تحليل مستويات بروتين FN للوسط المكيف باستخدام مجموعة ELISA المتاحة تجاريًا باتباع إرشادات الشركة المصنعة (R&D Systems ، Minneapolis ، Minnesota ، الولايات المتحدة). تم إجراء القياسات باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية سبارك (Tecan). تم طرح إشارات الضوابط الفارغة. تم تطبيع مستويات البروتين FN إلى إجمالي كمية بروتين الخلية المحللة التي تم تحديدها على النحو المذكور أعلاه.

تحديد تجديد البشرة في نموذج التئام الجروح في المختبر

أجريت التجارب على النحو الموصوف سابقاً [34]. لعلاج نماذج التئام الجروح ، تم تخفيف الباكوتشول أو الريتينول في DPBS وإضافته بتركيز نهائي قدره 1 0 0 ميكرومتر إلى منطقة الجرح (5 ميكرولتر لكل جرح). تم تكميل الجروح المرجعية بنفس الكمية من DPBS التي تحتوي على 0.1 بالمائة DMSO بدون باكوتشول أو ريتينول. تركت الجروح الإضافية دون علاج كعنصر تحكم إضافي. تم تحضين نماذج التئام الجروح لمدة 43 ساعة عند 95 بالمائة من الرطوبة و 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون و 37 درجة. بعد ذلك ، تم تجميد العينات بشكل مفاجئ في الأيزوبنتان المبرد مسبقًا بالنيتروجين السائل ، وتخزينها عند -80 درجة. تم تقييم إعادة الاندمال الظهاري في أقسام الكريوستات المصبوغة بالهيماتوكسيلين والأيوزين عن طريق قياس طول البشرة المجددة باستخدام مجهر Leica DMLS (10 ×) وكاميرا Leica MC 170 HD CCD وبرنامج Leica LAS V4.9 (Leica Microsystems ، فتسلار ، ألمانيا). تم إجراء القياس الكمي بطريقة أعمى.

في الدراسات المجراة الأول والثاني

لكل من الدراسات التي أجريت في الجسم الحي ، لوحظت توصيات الإصدار الحالي من إعلان هلسنكي والمبادئ التوجيهية للمؤتمر الدولي لمواءمة الممارسات السريرية الجيدة باعتبارها قابلة للتطبيق على دراسة مستحضرات التجميل. تمت الموافقة على بروتوكول الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات المستقلة في فرايبورغ (رمز فقي 08/2610). في كلتا الدراستين ، قدم جميع المتطوعين موافقة خطية ومستنيرة. كان لدى الأشخاص بشرة صحية ، وينتمون إلى جلد فيتزباتريك من النوع الأول إلى الثالث ، وكانت البداية ، أو تغيير الأدوية الهرمونية معيارًا للاستبعاد.

خلال فترة شرط مسبق لمدة {{0} يوم وطوال فترة الدراسة بأكملها ، طُلب من الأشخاص الامتناع عن التعرض للأشعة فوق البنفسجية في مناطق الاختبار. تم حظر الأنشطة التي تعزز العرق قبل 24 ساعة من التقييمات المجدولة.

أظهر أحد المحققين التطبيق الصحيح للتركيبات باستخدام كمية تتوافق مع نظام العناية بالبشرة المعتاد للأشخاص.

الدراسة الأولى: تحديد الجسم الحي السابق لمستويات بروتين FN

من بين 52 من الإناث اللائي تم تسجيلهن في هذه الدراسة التي تسيطر عليها المركبات ، أكمل 33 شخصًا الدراسة ، وتم تضمين بيانات 31 شخصًا (30-64 عامًا ، متوسط ​​العمر: 50.9 عامًا) في تحليل البيانات. حدثت حالات التسرب بسبب -2 جائحة السارس لأسباب شخصية (13 شخصًا) وكذلك بسبب تفاعلات عدم التوافق (خمسة موضوعات ناجمة عن علاج الريتينول). تسببت تفاعلات عدم التوافق بوساطة الريتينول بالإضافة إلى مشكلات أخذ العينات في أعداد مختلفة من الأشخاص الذين تم اختبارهم لكل حالة (انظر النتائج للحصول على التفاصيل).

قبل سبعة أيام من التقييمات المجدولة ، تم حظر استخدام منتجات العناية بالبشرة والمنظفات والصابون على الساعدين. في يوم الدراسة الأول ، تم إنشاء أربع مناطق اختبار على الساعدين الداخليين. في منطقتين للاختبار ، تم تطبيق صيغتين من فيروم لاحتواء {{0}. 5 في المائة باكوتشيول أو 0.15 في المائة ريتينول ، على التوالي. في رأي نشرته اللجنة العلمية لسلامة المستهلك في عام 2016 ، اعتبر تركيز الريتينول المطبق علاجًا تجميليًا [35]. في منطقتي الاختبار الأخريين ، تم استخدام السيارة المقابلة ، أو تُركت المنطقة دون علاج. تم تبديل تحديد المواقع العلاج. بعد 4 أسابيع من التطبيق مرتين يوميًا لتركيبات الاختبار ، عاد المتطوعون إلى معهد الاختبار. في كل منطقة اختبار ، تم إنشاء ثلاث بثور شفط (قطرها 7 مم) كما هو موصوف سابقًا [36 ، 37]. باختصار ، تم وضع أكواب نفطة ماصة مصنوعة خصيصًا على مناطق الاختبار وتم استخدام فراغ من 550-850 ملي بار. بعد حوالي 90-150 دقيقة ، عندما تكونت بثور الشفط ، تم تحرير الفراغ ، وتم شفط السائل من البثرة باستخدام إبرة قياس 24-. تم تجميد السوائل على الفور عند -80 درجة على الجليد الجاف حتى التحليل. تم قياس مستويات بروتين FN في عينات سائل نفطة الشفط باستخدام مجموعة ELISA المتاحة تجارياً (أنظمة R&D). تم إجراء القياسات باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية سبارك (Tecan). تم تطبيع مستويات FN إلى مستويات البروتين الكلية لعينات سائل الشفط التي تم تحديدها على النحو المذكور أعلاه.

الدراسة الثانية: في الجسم الحي تحديد تحسن حالة الجلد

في المجموع ، تم تسجيل 43 متطوعة في دراسة مقارنة الوجه المنقسمة التي تسيطر عليها السيارة. وفقًا للتقييمات الطبية ، أظهر المشاركون أنواعاً مختلفة من البشرة (البشرة الجافة والعادية والدهنية والمختلطة). أكمل 34 شخصًا (39-66 عامًا ، متوسط ​​العمر: 56.2 عامًا) الدراسة وتم تضمينها في التحليل. نتجت حالات التسرب عن مشاكل فنية وعدم امتثال (ثمانية مواضيع) ، بالإضافة إلى تفاعلات عدم التوافق (موضوع واحد ، ناتج عن العلاج بالمركبة والباكوشيول).

قبل أسبوعين من بدء الدراسة وخلال فترة الدراسة بأكملها ، طُلب من المتطوعين الامتناع عن استخدام منتجات التسمير الذاتي أو علاجات تجميل الوجه المكثفة (مثل إزالة طبقات الجلد السطحية). خلال 10- فترة التكييف المسبق وطوال فترة الدراسة ، طُلب من الأشخاص الامتناع عن إجراء مكياج دائم ، وعلاجات الرموش والحواجب ، وأقنعة العين ، والبقع. قبل ثلاثة أيام من التقييم الأول ، طُلب من الأشخاص الامتناع عن استخدام منتجات العناية بالوجه. في المساء الذي يسبق التصنيف المقرر ، طُلب من الأشخاص التوقف عن تطبيق مستحضرات التجميل المزخرفة.

في الأيام السبعة الأولى من 10- مرحلة التهيئة المسبقة ، تلقى الأشخاص مرطبانًا يحتوي على كريم مركب الدراسة (يفتقر إلى أي معلومات عن المحتوى) وقاموا بتطبيقه مرتين يوميًا على وجوههم بالكامل. في الأساس ، أجرى المتطوعون تقديرًا ذاتيًا. على وجه الخصوص ، قاموا بتقييم المظهر العام لبشرة وجههم بصريًا من خلال ملاحظة نضارتها وإشراقها بالإضافة إلى أي علامات لشيخوخة الجلد. تم تطبيق مقياس تناظري بصري يتراوح من 1 (مرهق جدًا ، قديم العمر) إلى 1 0 (جديد جدًا ، لا توجد علامات على تقدم سن البشرة). بعد ذلك ، تلقى الأشخاص مرطبان كريمي معتمين يحتويان على فيروم (السيارة التي تحتوي على 0.5 في المائة من الباكوتشيول) أو السيارة ، على التوالي ، دون أي تحديد للمحتوى. خلال فترة الدراسة التي استمرت 12 أسبوعًا ، تم علاج جانب واحد من الوجه مرتين يوميًا باستخدام الفيروم بينما تم علاج جانب الوجه الآخر مرتين يوميًا بالمركبة. تم تغيير تخصيص المعالجات لمواقع الاختبار. بعد 12 أسبوعًا من الاستخدام المنتظم ، أجرى المتطوعون مرة أخرى التقييم الذاتي كما سبق ذكره.

تحليل احصائي

تم إجراء التحليلات الإحصائية باستخدام Microsoft Excel لـ Office 365 (شركة Microsoft ، ريدموند ، واشنطن ، الولايات المتحدة) ، حزمة برامج SAS لنظام التشغيل Windows V9.4 (SAS Institute GmbH ، Heidelberg ، ألمانيا) ، و GraphPad Prism V8 (برنامج GraphPad ، سان دييغو) ، كاليفورنيا، الولايات المتحدة).

تم تقييم التوزيع الطبيعي للبيانات باستخدام اختبار شابيرو ويلك. إذا تم تأكيد التوزيع الطبيعي ، تم إجراء تحليل قياس متكرر للتباين (RM-ANOVA) مع مقارنة زوجية لاحقة. إذا تم رفض فرضية الحالة الطبيعية ، تم تقييم رتب البيانات الأصلية المحولة من Blom باستخدام RM-ANOVA مع مقارنة زوجية لاحقة ، أو تم تقييم البيانات الأصلية باستخدام اختبار تصنيف علامة Wilcoxon. تم إجراء جميع الاختبارات الإحصائية على الوجهين عند مستوى دلالة ألفا=0. 05.

نتائج

دراسات في المختبر

تحديد التأثيرات المضادة للأكسدة

لتحليل (1) التأثيرات المضادة للأكسدة للباكوشيول والريتينول ، أجرينا فحصين مختلفين باستخدام DPPH كجزيء كاشف.

القدرة المضادة للأكسدة

تم تحديد القدرة المضادة للأكسدة عن طريق قياس انخفاض DPPH عن طريق اضمحلال امتصاصه. أظهر Trolox عالي المستوى قدرة مضادة للأكسدة مرتفعة بشكل ملحوظ بالنسبة لعنصر التحكم (p =0. 0000 لجميع النقاط الزمنية المشار إليها) للتحقق من القياس المناسب (الشكل 2 أ). حول التحكم ، تم أيضًا تقليل الامتصاص في العينات المعالجة بالباكوشيول بشكل كبير في جميع النقاط الزمنية التي تم فحصها (10 min: p=0. 0003 و 30 و 60 دقيقة: p=0. 0000 ) مما يدل على زيادة القدرة المضادة للأكسدة. في المقابل ، لم يظهر الريتينول أي قدرة كبيرة على مضادات الأكسدة مقارنة بالسيطرة.

【لمزيد من المعلومات: george.deng@wecistanche.com / WhatApp: 86 13632399501】