حاملات النانو Niosomal لتحسين توصيل الجلد لمادة الكيرسيتين مع وظائف مضادة للتيروزيناز ومضادات الأكسدة

خلاصة:

هدفت هذه الدراسة إلى فحص مادة الفلافونويد الفعالة ذات القدرات الواعدة للتبييض ومضادات الأكسدة ، وتصميم niosomes محملة بالفلافونويد لتحسين قابليتها للذوبان والاستقرار والاختراق. في المختبر تم إجراء تجارب لمضاد التيروزيناز و 1 ، 1- ثنائي فينيل -2- بيكريل هيدرازيل (DPPH) لاستكشاف قدرات التبييض ومضادات الأكسدة للعديد من مركبات الفلافونويد ، بما في ذلك كيرسيتين ، مورين ، فيستين ، ميريستين ، روتين و breviscapine.

تمت دراسة الموصلية واللزوجة وحجم الجسيمات للصيغة القائمة على Span {0} RH 40- لحويصلات الفاعل بالسطح غير الأيونية (niosomes) بنسب كتلة مختلفة لتحديد الصيغة الأكثر ملاءمة. تم تمييز النوسومات المحملة بالأدوية من حيث الحجم ، وإمكانات زيتا ، والتشكل ، وكفاءة الحبس. تمت دراسة الثبات الضوئي ، الذوبان ، سلوك الإطلاق ، اختراق الدواء خارج الجسم الحي ، واحتباس الجلد. أظهرت النتائج أن الكيرسيتين يتمتع بقدرات كبيرة على التبييض ومضادات الأكسدة وأن Span 60- RH40 بنسبة كتلة 9:11 تشكل نيوزومات كروية أو بيضاوية تبلغ 97.6 ± 3.1 نانومتر مع نطاق محتمل من زيتا يبلغ 31.1 ± 0.9 مللي فولت ، والعقار كفاءة فخ تصل إلى 87.3 ± 1.6 في المائة. حسَّنت Niosomes بشكل ملحوظ قابلية ذوبان الكيرسيتين وثباته الضوئي.

علاوة على ذلك ، مقارنة بمحلول الكيرسيتين ، تتمتع شحوم الكيرسيتين بمزايا الإطلاق المستمر والاختراق المحسن عبر الجلد ، مع احتباس الجلد 2.95 مرة أعلى من محلول كيرسيتين.

مضادات الأكسدة هي أي مادة يمكن أن تمنع بشكل فعال تفاعل أكسدة الجذور الحرة بتركيزات منخفضة. يمكن أن تكون آلية عملها هي العمل بشكل مباشر على الجذور الحرة ، أو استهلاك المواد بشكل غير مباشر التي يسهل تكوين الجذور الحرة لمنع المزيد من التفاعلات. بينما ينتج جسم الإنسان حتمًا الجذور الحرة ، فإنه ينتج أيضًا بشكل طبيعي مواد مضادة للأكسدة تقاوم الجذور الحرة لمواجهة الهجمات التأكسدية للجذور الحرة على الخلايا البشرية. أثبتت الدراسات أن نظام مضادات الأكسدة في جسم الإنسان هو نظام له وظائف كاملة ومعقدة يمكن مقارنتها بجهاز المناعة. كلما كانت قدرة الجسم المضادة للأكسدة أقوى ، كانت صحية وطول عمرها. في بحثنا ، وجدنا أن Cistanche deserticola له أيضًا تأثير مضاد للأكسدة. Cistanche deserticola غني بالسكريات ، الفلافونويد ، القلويات ، جليكوسيدات الفلافونويد ، أحماض الفلافون ، ومكونات أخرى ، وهذه المواد لها تأثيرات قوية مضادة للأكسدة. يمكنهم مقاومة الإجهاد التأكسدي وتقليل تلف الخلايا عن طريق التقاط الجذور الحرة وتقليل تفاعلات الأكسدة وزيادة نشاط إنزيم مضادات الأكسدة ، وبالتالي لعب دور مضاد للأكسدة.

انقر فوق المنتج الملحق cistanche deserticola

الكلمات الدالة:

مضاد للتيروزيناز. مضادات الأكسدة. نيوسومات. الثبات الضوئي. الولادة عبر الجلد.

1 المقدمة

يتم توزيع الفلافونويد على نطاق واسع في الفواكه والخضروات والأعشاب ، ولها أنشطة بيولوجية واسعة النطاق ، بما في ذلك مضادات الفيروسات ومضادات الالتهابات ومضادات السرطان ومضادات الأكسدة ومضادات التيروزيناز [1،2]. في الآونة الأخيرة ، حظي البحث عن مثبط جديد آمن للتيروزيناز باهتمام كبير في مجال مستحضرات التجميل ، لأن بعض المثبطات المعروفة ، مثل حمض الكوجيك والهيدروكينون والكورتيكوستيرويدات ، قد تؤدي إلى مشاكل صحية ، مثل التهاب الجلد وتهيج الجلد. ، والتوازن ، والسمية الخلوية ، وسرطان الجلد [3]. نظرًا لسميتها المنخفضة وأنشطتها الكبيرة كمضادات الأكسدة ومضادات التيروزيناز ، فقد اجتذبت مركبات الفلافونويد اهتمامًا كبيرًا كعوامل تبييض طبيعية محتملة وعوامل مضادة للأكسدة لاستخدامها في منتجات العناية بالبشرة [4-6].

ومع ذلك ، تحتوي مركبات الفلافونويد على العديد من الهياكل المختلفة ، بما في ذلك التكوينات المختلفة مع نفس النواة الأم ، ولكن لا يزال من غير الواضح أي أنواع الهياكل التي تمتلك قدرات قوية ضد التيروزيناز ومضادات الأكسدة. بالإضافة إلى ذلك ، فإن معظم مركبات الفلافونويد لديها قابلية منخفضة للذوبان في الماء وقابلية للذوبان في الدهون ، كما أن شحوم الدهون المعتدل وانخفاض الوزن الجزيئي من العوامل المعروفة لتعزيز الاختراق بشكل أفضل. عامل مهم آخر يؤثر على فعالية المكونات هو الحواجز البيولوجية للجلد نفسه ، مثل الطبقة القرنية. على الرغم من أن الطرق الفيزيائية والكيميائية ، بما في ذلك الرحلان الشاردي ، والموجات فوق الصوتية ، والإبر الدقيقة ، وأنظمة الحقن بدون إبرة ، ومعززات الاختراق ، يمكن أن تعزز تغلغل المكونات النشطة من خلال الطبقة القرنية ، إلا أن هذه الطرق يمكن أن تكون غازية ، وتهيج الجلد ، وتكون باهظة الثمن.

من ناحية أخرى ، ظهرت بعض أنظمة توصيل المكونات النشطة الجديدة بوساطة الناقل ، بما في ذلك المستحلب ، والمذيلات ، والحويصلات ، وسيكلودكسترين ، لتعزيز فعالية المكونات الحالية ، خاصة تلك التي تعاني من ضعف قابلية الذوبان والتوافر البيولوجي. تلقت الحويصلات مزيدًا من الاهتمام للتسليم عبر الجلد. من بين الحويصلات ، تكون الانتقالات عبارة عن جسيمات شحمية جيدة التشوه مع نفاذية محسنة عن طريق الجلد ويمكن أن تحسن قابلية الدواء للذوبان والاستقرار. تتكون الانتقالات من نسبة محددة من الفسفوليبيد والمواد الخافضة للتوتر السطحي ، في حين أن الدهون الفوسفورية باهظة الثمن وسهلة التأكسد.

لذلك ، فإن البحث عن حويصلات أخرى مستقرة وقابلة للاستبدال هو موضوع بحث مثير للاهتمام. Niosomes عبارة عن أنظمة حويصلية غير أيونية خافضة للتوتر السطحي ، تم الإبلاغ عنها لأول مرة في عام 1979 عند تطبيقها في صناعة مستحضرات التجميل [7] ، ولكن منذ ذلك الحين تمت دراستها كنظام لتوصيل الأدوية في المستحضرات الصيدلانية [8-13]. تتشابه الخصائص الفيزيائية وتقنيات التحضير وهياكل الجسيمات إلى حد كبير مع تلك الموجودة في الجسيمات الشحمية. ومع ذلك ، فإن niosomes لها أيضًا مزايا في توصيل الأدوية عبر الجلد ، مثل إطلاق الدواء المستمر ، والتغلغل الأفضل ، واحتباس الجلد العالي [14] ، وهي أقل تكلفة في التحضير ، وأكثر استقرارًا [15]. لذلك ، يمكن تطبيق niosomes في صناعة مستحضرات التجميل [16-18].

تم تحضير حويصلات الفاعل بالسطح المبكرة باستخدام المواد الخافضة للتوتر السطحي الأيونية [19-22]. أشارت دراسات السمية الشاملة على المواد الخافضة للتوتر السطحي إلى أن المواد الخافضة للتوتر السطحي الكاتيونية هي الأكثر سمية ، تليها المواد الخافضة للتوتر السطحي الأنيونية ، في حين أن المواد الخافضة للتوتر السطحي غير الأيونية هي الأقل سمية. ومن ثم ، مع الأخذ في الاعتبار السلامة والتطبيقات الصناعية ، فإن استخدام الجسيمات الشحمية التي تشتمل على المواد الخافضة للتوتر السطحي غير الأيونية يعد خيارًا أفضل للتسليم عبر الجلد. نظرًا لهيكل الطبقات الثنائية البرمائية ، فإن نطاق مقياس توازن الماء - المحبة للدهون (HLB) من 4 إلى 8 سيكون أسهل لتشكيل niosomes من [14،23،24].

لذلك ، فإن المواد الخافضة للتوتر السطحي غير الأيونية مع قيم HLB المختلفة ستكون أسهل لتكوين الجسيمات. Span و Tween و Brij هي مواد خافضة للتوتر السطحي غير أيونية شائعة الاستخدام لتحضير الجسيمات الشحمية [15 ، 25 - 34]. المواد الخافضة للتوتر السطحي غير الأيونية ذات السلاسل الهيدروكربونية الطويلة بدون روابط مزدوجة هي مرشحة مؤهلة لأنه يمكن تكوين نوسومات مستقرة مع إمكانية زيادة تحميل الدواء. تم استخدام Span60 ، مع قيمة HLB منخفضة ، على نطاق واسع لتشكيل niosomes [15،29،31،33،34]. المواد الخافضة للتوتر السطحي غير الأيونية ذات قيم HLB العالية ، مثل Tween20 و Tween60 و Tween80 و Brij35 و Brij58 ، لا تشكل بسهولة niosomes بمفردها أو بدون كمية مثالية من الكوليسترول [28،35،36] ، بسبب حجمها الضخم المحبة للماء رؤوس وسلاسل هيدروكربونية قصيرة. لذلك ، فهي قادرة فقط على تكوين niosomes مع إضافة الكوليسترول أو عند صياغتها مع مواد أخرى خافضة للتوتر السطحي [10،27،31،37-39]. Cremophor RH40 هو ماء بدرجة عالية وله سمية منخفضة ، ويستخدم على نطاق واسع في تركيبات الأدوية التي تؤخذ عن طريق الفم ، ولكن لا توجد تقارير تشير إلى استخدام Cremophor RH40 في صياغة الجسيمات الشحمية.

في هذه الدراسة ، قمنا بفحص مركبات الفلافونويد التي تتمتع بتأثيرات تبييض جيدة ومضادات للأكسدة ، وبحثنا عن Span 60- RH40 ، وهو نظام خافض للتوتر السطحي غير أيوني بنسب دهون مختلفة لتكوين الجسيمات العصبية. تم تمييز النيوزومات المحملة بالكيرسيتين من حيث حجم الحويصلة ، وإمكانات زيتا ، وكفاءة التغليف ، والمجهر الإلكتروني للإرسال (TEM) ، كما تم فحص قابليتها للذوبان والثبات الضوئي. بالإضافة إلى ذلك ، تم استخدام الفئران للتحقيق في الاختراق عبر الجلد للنيوزومات المحملة بالكيرسيتين.

2. النتائج

2.1. تثبيط تيروزيناز للفلافونويد

من المعروف أن مركبات الفلافونويد تمتلك مجموعات هيدروكسيل متعددة (الشكل 1) مهمة لنشاط مضاد التيروزيناز. تم الإبلاغ عن أن عدد مجموعات الهيدروكسيل وموضعها بالإضافة إلى وجود شقوق السكر مرتبطان بتثبيط التيروزيناز. في الجدول 1 ، أظهر Myricetin عدم وجود نشاط مضاد للتيروزيناز لأنه يشكل بسهولة روابط هيدروجينية قوية بين الجزيئات والتي قد تعيق عملية إزالة معدن ثقيل باستخدام التيروزيناز. لم يظهر روتين وبريفيسكابين أي نشاط واعد مضاد للتيروزيناز ، في حين أظهر كيرسيتين ، مورين ، وفيستين نشاطًا مضادًا للتيروزيناز أكثر بكثير من أربوتين ، وهو عامل مبيض شائع يستخدم في مستحضرات التجميل.

2.2. نشاط مضادات الأكسدة للفلافونويد

Flavonoids can scavenge free radicals as antioxidants by donating a hydrogen atom. The antioxidant activity of flavonoids is related to the number of hydroxyl groups and their structure. This includes (i) the presence of an ortho-hydroxyl group in the B ring; (ii) the presence of a C2-C3 double bond in the C ring; (iii) or the presence of a C-3 hydroxyl group [40–42]. As shown in Table 2, the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity of the six compounds is in the following order: quercetin = fest in>myricetin=morin> rutin> BHT ≈ breviscapine. يمتلك الكيرسيتين والفيستين أقوى قدرة على الكسح الجذري.

2.3 صياغة Niosomes

2.3.1. موصلية نظام Span 60- RH40

تعتبر الانتقالات غير مستقرة لأنها تتكون أساسًا من الدهون الفوسفورية التي يمكن أن تتأكسد بسهولة ، مما يتسبب في تسرب الدواء. تم تحديد Niosomes كبديل للانتقالات في الولادة عبر الجلد. على الرغم من أن العديد من المواد الخافضة للتوتر السطحي غير الأيونية يمكن أن تشكل نيوسومات [15،26،28] ، فإن المواد الخافضة للتوتر السطحي غير الأيونية ذات سلاسل الهيدروكربون غير المشبعة تكون أقل ثباتًا من المواد الخافضة للتوتر السطحي غير الأيونية ذات السلاسل الهيدروكربونية المشبعة [37]. لذلك ، في هذه الدراسة ، اخترنا Span60 و RH40 ، وكلاهما لا يمتلك روابط مزدوجة ، لتكوين niosomes لتحسين استقرارهما.

أجريت قياسات التوصيلية لتحديد سلوك تجميع المواد الخافضة للتوتر السطحي غير الأيونية في محلول مائي. زادت موصلية Span 60- RH40 المشتتة في الماء تدريجيًا من نسبة كتلة من 4:16 إلى 9:11 ، ثم استقرت بين نسب الكتلة من 9:11 إلى 13: 7 وانخفضت من 13: 7 إلى 16 : 4 (الشكل 2 أ). قد تقترح نقطتا توقف تغييرات في البنية المجهرية للركام. كما هو مبين في الشكل 3 ، عند نسبة الكتلة 9:11 ، بدأت تتشكل الجسيمات.

2.3.2. حجم نظام Span 60- RH40

حجم الجسيمات هو المؤشر المهم لتقييم جسيمات النانومتر. يمكن أن يعكس قياس حجم نظام Span 60- RH40 بنسب كتلة مختلفة من الفاعل بالسطح التغيير في البنية المجهرية للركام في النظام. كما هو موضح في الشكل 2 ب ، في البداية ، كان الحجم الكلي صغيرًا نسبيًا وثابتًا عند نسبة الكتلة من 4:16 إلى 9:11. بعد ذلك ، زاد الحجم الكلي بشكل كبير عند نسبة الكتلة من 9:11 إلى 13: 7 ، ثم زاد بشكل حاد باستمرار عند نسبة الكتلة من 13: 7 إلى 16: 4 ، والتي كانت تصل إلى ~ 1 ميكرومتر. تم تأكيد الانتقال الهيكلي التلقائي للركام Span60 / RH40 بشكل أكبر من خلال الحجم الكلي المقترن بالموصلية واللزوجة.

2.3.3. لزوجة نظام Span 60- RH40

قدمت لزوجة نظام Span 60- RH40 الموضح في الشكل 2 ج التغييرات المقابلة. أولاً ، كانت لزوجة نظام Span 60- RH40 منخفضة وثابتة عند نسبة الكتلة من 4:16 إلى 9:11. بعد ذلك ، عند نسبة الكتلة من 9:11 إلى 13: 7 ، تغيرت اللزوجة بشكل كبير ، مع زيادة اللزوجة ثم تناقصها بعد ذلك. كما حدثت الموصلية والحجم الذي تمت مناقشته أعلاه أيضًا بالتوافق مع التغييرات في نطاق نسبة الكتلة هذا من Span 60- RH40. بعد ذلك ، عند نسبة الكتلة من 13: 7 إلى 16: 4 ، زادت اللزوجة بشكل حاد.

2.4 الحجم ، وإمكانات زيتا ، وعلم التشكل ، وكفاءة انحباس الكيرسيتين - نيوسومات

تم تحميل Quercetin بواسطة Span 60- RH40 niosomes ثم تم تجانسه مع شريط 1500. كما هو مبين في الجدول 3 ، كان القطر الهيدروديناميكي للجسيمات الفارغة والجسيمات الشحمية الكيرسيتين 146.4 ± 5.4 نانومتر و 97.6 ± 3.1 نانومتر ، على التوالي.

تمت دراسة إمكانات زيتا لفهم الشحنات السطحية للنيوزومات. كانت إمكانات زيتا للنيوزومات الفارغة و Quercetin-niosomes −41.2 ± 0 .6 mV و −31.1 ± 0 .9 mV ، على التوالي (الجدول 3). أظهرت صورة TEM في الشكل 4 ب أن نيوسومات كيرسيتين كانت كروية أو بيضاوية. كانت كفاءة احتباس الجسيمات الشحمية الكيرسيتين 87.3 ± 1.6 بالمائة ، وهي أعلى من تلك الموجودة في نطاق 48.4 بالمائة إلى 78.4 بالمائة في الأعمال السابقة [37،43،44]. يمكن أن تُعزى زيادة كفاءة احتباس الدواء إلى التقارب بين الأدوية والطبقات الثنائية للجيوسومات [45].

2.5 الذوبان في الماء وقابلية ذوبان التوازن للكيرسيتين

كما هو مبين في الشكل 5 ، كانت قابلية ذوبان الكيرسيتين في الماء منخفضة للغاية. لم يكن للذوبان فرق معنوي (P> 0. 0 5) في محلول الفوسفات برقم هيدروجيني مختلف عن ذلك الموجود في الماء. أظهرت نتيجة قابلية ذوبان التوازن للكيرسيتين أن كيرسيتين كان مكونًا عالي الذوبان في الدهون. كما هو موضح في الشكلين 6 و 7 ، ظلت قابلية الذوبان في توازن الكيرسيتين مستقرة في نسب مختلفة من الماء / ن أوكتانول ولكنها انخفضت عند درجة الحموضة 8.0 لأن بنية كيرسيتين تغيرت في ظل الظروف الأساسية ، مما تسبب في زيادة قابلية الذوبان في الماء.

ومع ذلك ، فإن ضعف ذوبان الكيرسيتين في الماء كان مقصورًا على تطبيقه. استنادًا إلى الجدول 4 ، تحسنت قابلية ذوبان الكيرسيتين في المواد الخافضة للتوتر السطحي التي تمت مناقشتها أدناه ، خاصةً في 0. 6 بالمائة Tween8 0 (P <0. 05). ومع ذلك ، تم تحسين قابليته للذوبان بشكل أكبر عن طريق تحميله في niosomes. تم تحميل Quercetin (300 ميكروغرام / مل) في niosomes وكان التغليف العالي لـ Span 60- RH40 noisome 87.3 ± 1.6 بالمائة ، وبالتالي ، كانت قابلية ذوبان كيرسيتين في niosomes 261.9 ± 4.8 ميكروغرام / مل ، والتي كانت {{ 17}} أضعاف أعلى من الماء (P <0.05).

2.6. الثبات الضوئي لـ Quercetin-Niosomes

الكيرسيتين لديه ثبات ضوئي ضعيف ويتحلل بسرعة تحت التعرض لأشعة الشمس أو الأشعة فوق البنفسجية [46-48] ، ربما بسبب خضوع كيرسيتين للأكسدة الضوئية عند التعرض للأشعة فوق البنفسجية [49]. ومع ذلك ، فإن الثبات الضوئي ضروري لكي تظهر كيرسيتين أنشطتها. كما هو مبين في الشكل 8 ، حسنت niosomes بشكل فعال من الثبات الضوئي لـ Quercetin وظلت عند 88.06 بالمائة بعد 10 أيام من التعرض لإضاءة قوية. تمت حماية Quercetin من الإشعاع فوق البنفسجي لأنه كان مغلفًا في طبقات ثنائية من Niosomes. جزيئات 2019 ، 24 ، x لـ PEER REVIEW 8 من 18 تعرض لإضاءة قوية. تمت حماية Quercetin من الإشعاع فوق البنفسجي لأنه كان مغلفًا في طبقات ثنائية من Niosomes.

2.7. في سلوك إطلاق المختبر من كيرسيتين نيوسومات

تم فحص وسيط الإطلاق المناسب للحفاظ على ظروف الحوض ، وبالتالي تم تقييم قابلية ذوبان الكيرسيتين في الوسائط المختلفة. توضح النتائج الواردة في الجدول 5 أن الكيرسيتين لديه قابلية ذوبان أعلى في Tween8 0 المائي وأن قابليته للذوبان تزداد تدريجيًا مع زيادة تركيز Tween8 0. زادت قابلية ذوبان الكيرسيتين إلى 76.07 ± 3.11 ميكروغرام / مل في الظروف الحمضية. لذلك ، بالنظر إلى الرقم الهيدروجيني للجلد البشري ، تم اختيار 0.8 في المائة من توين 80 (درجة الحموضة 5.0) كوسيلة إطلاق لدراسة سلوك إطلاق الكيرسيتين الحر وكيرسيتين-نيوسومات.

كما هو موضح في الشكل 9 ، مقارنةً بـ quercetin-niosomes ، تم إطلاق الكيرسيتين الحر بشكل أسرع في وسط الإطلاق ، مما يدل على أن للجسيمات تأثير إطلاق مستمر. يقلل الإطلاق المستمر من وقت التطبيق ، ويقلل من السمية ، ويحافظ على تركيز الدواء الفعال.

2.8 نفاذ الجسم الحي ودراسات الاحتفاظ بالجلد

تم استخدام حل {0}. 6 بالمائة Tween8 0 كوسيط إطلاق اختراق في هذه الدراسة. في دراستنا لاختراق exvivo ، لا يمكن تحديد الكيرسيتين في وسيط إطلاق الاختراق ، والذي أوضح أن كيرسيتين لم يخترق الأدمة ويصل إلى وسط الإطلاق ، ولكن الجسيمات العصبية حسنت بشكل ملحوظ احتباس الجلد للكيرسيتين (P <0. { {2 0}} 5). كما هو مبين في الجدول 6 ، احتباس جلد كيرسيتين - نيوسومات (1.92 زائد 0. 74 ميكروغرام / سم؟) ، كيرسيتين - نيوسوم -1 بالمائة بروبانديول (2.34 زائد 0. 40 ميكروغرام / سم؟) ، وكيرسيتين - تحويلات (2.53 زائد 0.40 ميكروغرام / سم-) كانت أعلى بكثير مقارنة مع كويرسيتين بروبانديول (0.65 زائد 0.10 ميكروغرام / سم 2) (P <0.05).

3. مناقشة

حددت الدراسات السابقة أن مجموعة الهيدروكسيل الحر في الموضع C -3 لعبت دورًا مهمًا في تثبيط إنزيم التيروزيناز [50-52]. على العكس من ذلك ، 3- قد تعيق O- جليكوسيدات ارتباطها بالمواقع النشطة للتيروزيناز وقد تكون السبب في عدم إظهار روتين أي نشاط مضاد للتيروزيناز. في المقابل ، كان لجزء السكر الموجود في الموضع C -7 تأثير ضئيل على نشاط مضاد التيروزيناز ولم يمنع عملية إزالة معدن ثقيل باستخدام التيروزيناز [51].

ومع ذلك ، فإن وجود مجموعة هيدروكسيل إضافية في الموضع C {0}} من الحلقة B زاد من تثبيط إنزيم التيروزيناز [53،54]. لم يُظهر Breviscapine نشاطًا مضادًا للتيروزيناز لأنه يفتقر إلى مجموعة C -3 هيدروكسيل ومجموعة C -30 هيدروكسيل والتي قد يكون لها تأثير على نشاط مضاد التيروزيناز بدلاً من وجود 7- س- جليكوسيدات. عند تحليل العلاقة بين التركيب والنشاط للكيرسيتين والمورين ، لاحظنا أن قيمة IC50 للمورين تبلغ حوالي 1/3 من قيمة الكيرسيتين والفرق الوحيد بين بنية الكيرسيتين والمورين هو موضع مجموعات الهيدروكسيل في الحلقة B.

لذلك ، فإن وجود مجموعات o-dihydroxyl في الحلقة B زاد من نشاط مضاد التيروزيناز. كانت قيمة IC50 للفيستين حوالي 1/20 من قيمة الكيرسيتين والفرق الوحيد بين بنية الكيرسيتين والفيستين هو أن فيستين هو عدم وجود مجموعة هيدروكسيل C -5 في الحلقة A. تلعب مجموعة الهيدروكسيل في الموضع C -5 أيضًا دورًا مهمًا في زيادة نشاط تثبيط إنزيم التيروزيناز ، حيث إنها قد تخلب Cu2 plus في الموقع النشط للتيروزينيز مع كاربونيل في الموضع C -4 [50 ]. يمتلك كيرسيتين مجموعات هيدروكسيل حرة ، ليس فقط في الموضعين C -3 و C -5 من الحلقة C ولكن أيضًا في الموضع C -30 من الحلقة B. وهكذا ، يُظهر الكيرسيتين تثبيطًا أقوى بكثير للتيروزيناز مقارنةً بالفلافونويدات الأخرى.

لا تحتوي مركبات الفلافونويد على نشاط واعد مضاد للتيروزيناز فحسب ، بل تمتلك أيضًا نشاطًا قويًا مضادًا للأكسدة. يحتوي كيرسيتين على مجموعة هيدروكسيل C -5 إضافية ؛ ومع ذلك ، فإن كلاً من الكيرسيتين والفيزيتين لهما نفس القدرة المضادة للأكسدة ، مما يشير إلى أن مجموعة C -5 هيدروكسيل كان لها تأثير ضئيل على إزالة الجذور. يمتلك Myricetin المزيد من مجموعات الهيدروكسيل في الحلقة B ، لكنه لم يُظهر نشاطًا مضادًا للأكسدة أقوى من الكيرسيتين أو fisetin. قد يكون هذا بسبب أن الميريسيتين يمكن أن يشكل روابط هيدروجينية قوية بين الجزيئات ويقلل من التبرع بذرة الهيدروجين.

وبالمثل ، أظهر المورين قدرة مضادة للأكسدة أقل من كيرسيتين وفيستين بسبب تكوين هيدروكسيل الحلقة B ، والذي أوضح أن o-dihydroxyl في الحلقة B مهم لزيادة قدرة الكسح الجذري. ومع ذلك ، كان للروتين والبريفيسكابين قدرات أقل بكثير من مضادات الأكسدة لأن الروتين يحتوي على جليكوسيدات في الموضع C -3 مما ينتج عنه عائق فاصل. يحتوي Breviscapine على مجموعة هيدروكسيل واحدة في الحلقة B ويحتوي على عدد أقل من مجموعات الهيدروكسيل المجانية. وبالتالي ، فإن النتائج في هذه الورقة تشير إلى أن تكوين هيدروكسيل الحلقة B كان مهمًا للقدرة المضادة للأكسدة للفلافونيدات ، في حين أن الحلقة A كان لها تأثير ضئيل على قدرة الكسح الجذري. بالإضافة إلى ذلك ، فإن حجب أو إزالة مجموعة الهيدروكسيل في الموضع C -3 قد يقلل من قدرة الفلافونويد على الكسح الجذري.

Span60 و RH40 غير قادرين على التأين. لذلك ، يبدو أن الشحنات تنشأ من التفاعل بين مجموعات الرأس المحبة للماء في Span60 و RH40 التي تشكل روابط هيدروجينية [55] ، عندما تتشكل الركام المشحون بين المحبة للدهون Span60 و RH40 المحبة للماء.

لذلك ، قد تكون الموصلية ناتجة عن مزيج من Span60 و RH40. زادت الموصلية في البداية ، ربما لأن إضافة Span60 ، التي ترتبط بـ RH40 ، تشكل المذيلات المختلطة المشحونة. أدت زيادة Span60 أيضًا إلى زيادة عدد الركام المشحون وزيادة الموصلية تدريجياً. حدثت نقطة توقف عند نسبة الكتلة 9:11. يشير التغيير المفاجئ إلى أن البنية المجهرية للركام قد تتغير وقد تتشكل الجيوب الأنفية. انخفضت الموصلية بشكل طفيف في وقت لاحق وظلت ثابتة نسبيًا ، مما قد يشير إلى تكوين النوسومات ، حيث تم إرفاق الشحنات. حدثت نقطة توقف أخرى عند نسبة الكتلة 13: 7 وانخفضت الموصلية بشكل حاد ، ومع ذلك ، زاد حجم الركام مع الزيادة في Span60 ، ربما بسبب التجمعات الكثيفة من niosomes متعدد الطبقات الأكبر ووجود راسب أبيض [56 ، 57] ، مما تسبب في انخفاض الركام المشحون مجانًا.

تم تأكيد الانتقال الهيكلي التلقائي لمجموعات Span 60- RH40 من خلال الحجم الكلي المقترن بالتوصيل واللزوجة. عندما كان الكسر الكتلي لـ RH40 هو السائد ، كان الحجم الكلي ثابتًا نسبيًا وصغيرًا. كان للنظام لزوجة تشبه الماء وقد تتشكل المذيلات المختلطة. مع زيادة جزء الكتلة من Span60 ، زادت مقاومة الماء للنظام ، وزادت اللزوجة والحجم الكلي. قد يؤدي زيادة Span60 إلى تكوين niosomes. ومع ذلك ، مع زيادة أخرى في Span60 ، زادت اللزوجة والحجم أيضًا بشكل حاد بسبب وجود عدد كبير من النيوزومات متعددة الطبقات ، مما تسبب في تكوين الراسب. تم التحقق أيضًا من تكوين niosomes بواسطة TEM (الشكل 3).

عندما كان تركيز Span60 منخفضًا ، كان لنظام Span 60- RH40 لزوجة تشبه الماء وكان الحجم الكلي صغيرًا نسبيًا ، مما يدل على تكوين المذيلات المختلطة. من نسبة الكتلة 9:11 إلى 13: 7 ، زادت لزوجة وتعكر النظام في وقت واحد. قد يكون التغيير الواضح في اللزوجة مرتبطًا بانتقال الميسيل إلى مادة صاخبة صلبة ولزجة ، حيث يتم تغليف المواد الخافضة للتوتر السطحي بإحكام وتشكيل طبقات ثنائية ؛ كانت هذه الملاحظة متوافقة مع الأدبيات [57 ، 58]. بين نسب الكتلة 13: 7 و 16: 4 ، ازدادت اللزوجة بشكل ملحوظ ، ربما بسبب وجود العديد من النيوزومات الأكبر حجماً التي تسبب تكوين الراسب.

ومن المثير للاهتمام ، أن نوسومات كيرسيتين لها أحجام أصغر من النيوزومات الفارغة ، والتي كانت من خلال الدراسات المنشورة سابقًا [43]. لقد تم توضيح أنه إذا تم دمج الجزيئات التي تظهر تقاربًا جيدًا مع المواد الخافضة للتوتر السطحي المكونة للنيوزومات داخل الطبقات الثنائية ، فسيؤدي ذلك إلى تقليل حجم الحويصلة. قد تكون هذه الملاحظة ناتجة عن تأثير الانجذاب القوي للأدوية والجراثيم في تثبيت الصفائح المختلفة معًا ، مما يجعل الغشاء أكثر صلابة [14]. كانت القيمة المطلقة لإمكانات زيتا لـ quercetin-liposomes أقل من تلك الموجودة في الجسيمات الشحمية الفارغة (الجدول 3). قد يكون هذا بسبب تفاعل الكيرسيتين مع المجموعة الرئيسية من المواد الخافضة للتوتر السطحي التي تحيد الشحنات السالبة على سطح الجيوب الأنفية. تم الإبلاغ عن هذه الملاحظة أيضًا سابقًا ؛ أن الأدوية يمكن أن تقلل من الشحنات السطحية السلبية [59].

لقد قررنا أن كيرسيتين غير قابل للذوبان في الماء وعازل الفوسفات. في الدراسات السابقة ، للحفاظ على حالة مغاسل للأدوية ضعيفة الذوبان في وسط إطلاق الاختراق ، غالبًا ما تستخدم المذيبات ، بما في ذلك الكحول والمواد الخافضة للتوتر السطحي ، [14] ، لذلك ، 0. تم ​​استخدام محلول توين 80 بنسبة 6 بالمائة متوسط ​​إطلاق الاختراق للحفاظ على حالة الحوض.

ومع ذلك ، بالنظر إلى الفعالية ، بالنسبة للعناية بالبشرة وعلاج الأمراض الجلدية ، فإنه أكثر فعالية وأمانًا لحجز المكونات أو الأدوية في أعماق الجلد بدلاً من الدخول في الدورة الدموية. في دراستنا ، على الرغم من أن كيرسيتين لم يخترق الأدمة إلى الوسط ، فقد أظهرت تجارب الاحتفاظ بالجلد أنه مقارنة بالكيرسيتين الحر ، حسنت النيوزومات تغلغل كيرسيتين في البشرة.

لذلك ، قد تكون Niosomes نظام توصيل واعدًا لأغراض التجميل وعلاج الأمراض الجلدية. كيرسيتين قابل للذوبان في الدهون بدرجة عالية وقد حدت قابليته المنخفضة للذوبان في الماء من تطوره وتطبيقه. لم تعمل النوسومات المحملة بالكيرسيتين على تحسين قابلية الذوبان في الماء فحسب ، بل أدت أيضًا إلى تحسين امتصاص الكيرسيتين عبر الجلد. كان لدى Quercetin-niosomes 3- زيادة في احتباس الجلد فوق محلول كيرسيتين-بروبانديول. بعد إضافة 1 في المائة من propanediol ، وهو مُحسِّن الاختراق ، إلى الصيغة الأصلية لـ Span 60- Niosomes RH40 ، تحسن امتصاصه عبر الجلد ، مقارنةً بنقل الكيرسيتين.

4. المواد والطرق

4.1 مواد

تم شراء Quercetin و morin و فيستين و myricetin و rutin و breviscapine من DATIAN Biology Co (Shanxi ، الصين) ، -arbutin من Beijing Brilliance Biochemical Co ، Ltd (بكين ، الصين) ، و 1 ، 1- diphenyl {{ 3}} picrylhydrazyl (DPPH) من شركة Guangzhou Qiyun Bio-Technology Co (قوانغتشو ، الصين). تم شراء فوسفات ثنائي هيدروجين الصوديوم وفوسفات هيدروجين ثنائي الصوديوم وثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) وكحول الإيثيل المطلق من مصنع DAMAO الكيميائي (تيانجين ، الصين). تم شراء Span60 من شركة Tianjin Kemiou Chemical Reagent Co، Ltd (Tianjin ، الصين) ، و Cremophor RH40 من Guangzhou Jiefu Trading Co، Ltd (قوانغتشو ، الصين). تم استخدام الفئران الذكور Sprague-Dawley (200 ± 20 جم) وتزويدها من قبل مركز تجارب الحيوانات في قوانغدونغ (قوانغتشو ، الصين). تم الاحتفاظ بالجرذان تحت درجة حرارة ورطوبة وظروف إضاءة قياسية ، مع اتباع نظام غذائي قياسي للقوارض والماء. تمت الموافقة على البحث من قبل لجنة أخلاقيات الحيوانات التجريبية بجامعة قوانغدونغ الصيدلانية (رقم SPF2017120 ، قوانغتشو ، الصين).

4.2 نشاط تثبيط تيروزيناز في المختبر للفلافونويد

تم إجراء مقايسة تثبيط التيروزيناز بناءً على دراسة سابقة مع تعديلات طفيفة [2]. تم تحديد نشاط تثبيط التيروزيناز باستخدام مقياس الطيف الضوئي عن طريق مراقبة تكوين الدوباكروم عند 493 نانومتر. يحتوي نظام التفاعل ، كما هو موضح في الجدول 7 ، على 0. 5 مل من تركيزات مختلفة من مركبات الفلافونويد ، بما في ذلك أربوتين ، وكيرسيتين ، ومورين ، وفيستين ، وروتين ، وبريفيسكابين ، و 0. 5 مل من التيروزيناز (12 0 وحدة / مل في محلول الفوسفات ، الأس الهيدروجيني 6.8) ، والتي تم دمجها مع 1.5 مل من محلول الفوسفات المؤقت (الرقم الهيدروجيني 6.8). بعد الحضانة عند 30 درجة مئوية لمدة 10 دقائق ، تمت إضافة 0.5 مل من L- التيروزين إلى الأنظمة. تم تحضين أنظمة التفاعل عند 30 ْم لمدة 20 دقيقة وتم تحديد الامتصاص عند 493 نانومتر. تم استخدام أربوتين كعنصر تحكم إيجابي. تم التعبير عن درجة تثبيط العينة بتركيز تثبيط بنسبة 50 بالمائة (IC50).

4.3 في نشاط مضادات الأكسدة المختبرية للفلافونويد

تم قياس نشاط مضادات الأكسدة للفلافونويدات بمعدل التبييض لـ DPPH ، الذي أبلغ عنه Blois [6 0]. في شكله الجذري ، يمتص DPPH بطول موجة يبلغ 515 نانومتر ، لكن امتصاصه يتناقص عند تقليله بمضاد للأكسدة أو مركب جذري. تم تقييم نشاط الكسح الجذري لمركبات الفلافونويد DPPH وفقًا للطريقة التي وصفها روي يانغ ، مع بعض التعديلات [61]. باختصار ، تم خلط 5 مل من DPPH (3 0 ميكروغرام / مل) مع 0.1 مل من كحول الإيثيل المطلق و 0.1 مل من العينات بتركيزات مختلفة. بعد ذلك ، تم تحديد امتصاص المخاليط عند 515 نانومتر. تم حساب نشاط الكسح الجذري لـ DPPH على النحو التالي:

4.4 صياغة Niosomes

استنادًا إلى الأبحاث السابقة والأوراق المنشورة التي أظهرت أن Span60 هو عامل خافض للتوتر السطحي شائع يستخدم لتشكيل الجسيمات [15،27،31] ، قمنا بتصميم نظام صياغة للمواد الخافضة للتوتر السطحي غير الأيونية باستخدام Span60 و RH40 بنسب كتلة مختلفة. تم فحص الموصلية واللزوجة والحجم كمؤشرات لتحديد النسبة المناسبة للمواد الخافضة للتوتر السطحي غير الأيونية المكونة للجسيمات الشحمية.

كانت نسب الكتلة لـ Span6 0 و RH4 0 التي تم فحصها هي 4:16 ، 6:14 ، 8:12 ، 9:11 ، 10:10 ، 12: 8 ، 13: 7 ، 14: 6 15: 5 و 16: 4 (الوزن الإجمالي: 2 جم). تمت إذابة Span60 عند 80 درجة مئوية ثم خلطها مع RH40 بواسطة محرك لمدة دقيقتين. بعد ذلك ، تم ترطيب المخاليط بـ 100 مل من الماء عند 80 درجة مئوية لمدة 10 دقائق ، على التوالي. الموصلية (DDS -11 مقياس توصيل ، Shanghai Ridao Scientific Instruments Co.، Ltd. ، شنغهاي ، الصين) ، اللزوجة (مقياس اللزوجة Ubbelode ، 0.4–0.5 مم ، Shanghai Liangjing Glass Instrument Factory ، شنغهاي ، الصين) ، والحجم تم قياس (Nano-ZS90، Malvern، Malvern، UK) لأنظمة الفاعل بالسطح غير الأيونية في درجة حرارة الغرفة.

4.5 إعداد وتقييم النيوزومات المحملة بالكيرسيتين

4.5.1. تحضير النيوزومات المحملة بالكيرسيتين

بناءً على صورة TEM لنظام Span {0} RH40 (الشكل 3) و Span60 و RH40 بنسبة كتلة 9:11 ، يبدو أن النيوزومات الكروية أو البيضاوية تتشكل. لذلك ، تم تحضير النيوزومات المحملة بالكيرسيتين بنسبة كتلة Span60 / RH40 تبلغ 9:11 باستخدام جهاز تحريك مغناطيسي. تم إذابة Span60 (0.9 جم) و RH40 (1.1 جم) وكيرسيتين (30 مجم) معًا. بعد ذلك ، تمت إضافة 100 مل ماء نقي عند 80 ْم إلى الخليط وترطيبه لمدة 10 دقائق. تم تشكيل النيوزومات المحملة بالكيرسيتين ثم تبريدها إلى درجة حرارة الغرفة. تم الحصول على نيوسومات واضحة من خلال المعالجة باستخدام التجانس عالي الضغط عند 1500 بار.

4.5.2. الحجم ، وإمكانات زيتا ، ومورفولوجيا النيوزومات المحملة بالكيرسيتين

تم قياس حجم وإمكانات زيتا للنيوزومات الفارغة والنيوزومات المحملة بالكيرسيتين باستخدام Malvern Zetasizer (ZS90 plus MPT -2 ، Malvern ، Malvern ، المملكة المتحدة). تميزت مورفولوجيا niosomes المحملة بالكيرسيتين بالمجهر الإلكتروني النافذ. تم إيداع عينات كيرسيتين-نيوسومات على شبكة نحاسية وبعد دقيقة واحدة ، تمت إزالة العينة الزائدة بورق الترشيح. تم استخدام TEM لمراقبة العينات بعد تلطيخ سلبي بحمض الفوسفوتونجستيك.

4.5.3. كفاءة فخ المخدرات

تم تحديد كفاءة حبس الدواء للنيوزومات المحملة بالكيرسيتين باستخدام تقنية الطرد المركزي minicolumn. تم تحضير Minicolumn باستخدام مشتت Sephadex G50 المائي في حقنة 5 مل ، والتي تم طردها مركزيًا لمدة 30 ثانية عند 900 دورة في الدقيقة. تم أخذ قسامة من niosomes محملة بالكيرسيتين (400 ميكرولتر) في العمود الصغير وتم جمع الأجزاء المزودة باستخدام الطرد المركزي عند 1500 دورة في الدقيقة لمدة 3 دقائق. تم تخفيف المزلقات إلى 10 مل بالميثانول والدوامة ، وتم حقن 10 ميكرولتر من العينات التي تم ترشيحها في كروماتوجرافيا سائلة عالية الأداء (HPLC). بعد ذلك ، تمت تصفية الكيرسيتين الحر بالطرد المركزي مع 25 مل من 80 بالمائة من الميثانول ، وتم تحديد محتوى الكيرسيتين بواسطة HPLC.

4.6 الذوبان في الماء وقابلية ذوبان التوازن للكيرسيتين

تم قياس قابلية ذوبان الكيرسيتين في الماء باستخدام 15 مل من الماء النقي ، ومخازن الفوسفات بقيم مختلفة من الأس الهيدروجيني (الرقم الهيدروجيني 5. 0 ، 6. 0 ، 6.8 ، 7.4 ، 8. 0) ، والكيرسيتين الزائدة ، وتوضع في قوارير. تم رج القوارير لمدة 24 ساعة في حمام مائي 37 درجة مئوية وتم تحديد المادة الطافية بواسطة HPLC بعد الطرد المركزي.

تم إجراء قابلية ذوبان توازن الكيرسيتين باستخدام نظام n-octanol-water مع نسب n-octanol / ماء 1: 1 ، 1: 2 ، 1: 3 ، 1: 4 ، 1: 5 ، 1: 6 ، 1: 7 و 1: 8. بعد ذلك ، تم تحضير 70 ميكروغرام / مل من محلول كيرسيتين بواسطة محلول n-octanol المشبع بالماء وأخذ 1 مل من 70 ميكروغرام / مل من محلول كيرسيتين في ثماني قوارير ثم 1 مل ، 2 مل ، 3 مل ، 4 مل ، 5 مل تمت إضافة 6 مل و 7 مل و 8 مل من الماء النقي إلى قوارير خاصة.

تمت دراسة قابلية ذوبان الكيرسيتين المتوازن في أنظمة n-octanol-buffer بقيم مختلفة من الأس الهيدروجيني. تم اختيار نسبة n-octanol-buffer عند 1: 2 بناءً على نتيجة قابلية ذوبان الكيرسيتين في نظام n-octanol-water. تمت إضافة حجم 2 مل من 7 0 ميكروغرام / مل من محلول كيرسيتين و 4 مل من محلول الفوسفات المشبع بالأوكتانول في قيم مختلفة من الأس الهيدروجيني إلى القوارير وتم اهتزاز القوارير لمدة 24 ساعة في درجة حرارة 37 درجة مئوية. حمام الماء. بعد ذلك ، تم أخذ 0.2 مل من محلول كيرسيتين في طبقة n-octanol وتم تخفيفه إلى 5 مل (حوالي 2.8 ميكروغرام / مل) باستخدام الطور المتحرك (الميثانول -1 بالمائة من حامض الفوسفوريك=60: 40). تم تحديد العينات بواسطة HPLC. تم تخفيف محلول quercetin n-octanol القياسي (70 ميكروغرام / مل) وتحديده كما هو موصوف أعلاه.

4.7 الثبات الضوئي لـ Quercetin-Niosomes

تمت إضافة محلول ميثانول كيرسيتين (3 0 0 ميكروغرام / مل) إلى قوارير شفافة ووضعها تحت أشعة الشمس. بعد ذلك ، تم تحديد محتوى الكيرسيتين بواسطة HPLC في 0 و 12 و 24 و 36 و 48 و 6 0 و 72 ساعة. تم تقسيم Quercetin-niosomes إلى قوارير شفافة ووضعها داخل حجرة اختبار ثبات الضوء (PTOP -500 B، Zhejiang TOP Instrument Co.، Ltd.، Zhejiang، الصين) بإضاءة تبلغ 4500 ± 500 LX لمدة 10 أيام. تم أخذ عينة 0.2 جم من دهون كيرسيتين في الأيام 0 و 5 و 10 ، وتم إذابتها في 10 مل من الإيثانول. تم تحديد العينات بواسطة HPLC بعد الطرد المركزي والترشيح باستخدام غشاء مرشح 0.22 ميكرومتر. تم تقييم الثبات الضوئي من خلال النسبة المئوية لما تبقى من كيرسيتين في أوقات تشعيع مختلفة ، مقارنة بالعينات غير المكشوفة.

4.8 دراسة الإصدار المختبري

4.8.1. قابلية ذوبان الكيرسيتين في وسط إطلاق مختلف

تم التحقق من قابلية ذوبان الكيرسيتين في وسائط إطلاق مختلفة ، بما في ذلك {{0}}. 1 بالمائة ، 0. 2 بالمائة ، 0. 3 بالمائة ، 0. 4 بالمائة و {{1 {13}}}. 6 بالمائة و 0. 8 بالمائة توين 8 0 محلول مائي ، بالإضافة إلى 0. 2 بالمائة ، 0.4 بالمائة ، و 0.6 بالمائة SDS محلول مائي. تم وضع محلول مائي سعة 15 مل من Tween80 و SDS بتركيزات مختلفة وكيرسيتين زائد في كل قارورة. رجت القوارير في حمام مائي 32 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. بعد 24 ساعة ، تم طرد 5 مل من المعلق عند 3000 دورة في الدقيقة لمدة 15 دقيقة وتم تخفيف 0.2 مل من المادة الطافية إلى 2 مل وتم تحديدها باستخدام HPLC.

4.8.2. الافراج عن المخدرات عن طريق غسيل الكلى

أوضحت دراسة قابلية ذوبان الكيرسيتين الواردة في الجدول 5 أن المحلول المائي 0. 8 بالمائة توين 8 0 (الرقم الهيدروجيني 5. 0) يفي بظروف الحوض ويتوافق مع قيمة الرقم الهيدروجيني لجلد الإنسان. لذلك ، تم التحقيق في سلوكيات إطلاق الكيرسيتين الحر وكيرسيتين-ليبوسومات في المحلول المائي 0 .8 في المائة توين 80 (درجة الحموضة 5.0).

تمت معالجة كيس الغسيل (8 000 - 14 ، 0 0 0 قطع بالوزن الجزيئي) باستخدام 2 بالمائة NaHCO3 و 1 مليمول / مل من محلول EDTA. تمت إضافة 10 مل من (300 ميكروغرام / مل) Quercetin-niosomes ومحلول quercetin-propanediol في أكياس الديالة وتم وضعها في أوعية إذابة تحتوي على 1000 مل من 0.8 بالمائة Tween80 (درجة الحموضة 5.0) محلول مائي عند 32 درجة مئوية. تم وضع أوعية الذوبان على محرك مغناطيسي بسرعة 100 دورة في الدقيقة. تم سحب وسيط الإطلاق (2 مل) عند 1 و 2 و 4 و 6 و 8 و 10 و 12 و 24 ساعة واستبداله بوسط تحرير فارغ (2 مل). تم سحب 2 مل من وسط الإطلاق المسحوب بالطرد المركزي عند 3000 دورة / دقيقة لمدة 15 دقيقة وترشيحها. تم تحديد كمية الكيرسيتين المفرج عنهم بواسطة HPLC.

4.9 نفاذ المخدرات في الجسم الحي ودراسات احتباس الجلد

تم التضحية بالجرذان عن طريق خلع عنق الرحم ، وحلق شعر البطن ، ثم تم فصل جلد البطن ووضعه في محلول ملحي فسيولوجي. بعد ذلك ، تمت إزالة الأنسجة تحت الجلد (العضلات ، والدهون ، والأوعية الدموية) باستخدام مقص جراحي وملقط مرقئ ثم تخزينها في 4 درجات مئوية مع محلول ملحي فسيولوجي لمزيد من التحقيق.

دراسات التخلل والاحتفاظ بالجلد الدوائي لـ quercetin-niosomes ، و quercetin- niosomes -1 بالمائة propanediol ، و quercetin-transferomes (المكون من phospholipid و Tween8 0 بنسبة كتلة 9:11) ، وكيرسيتين مجاني تم إجراء محلول -propanediol للتحقيق في توصيلها عبر الجلد باستخدام جهاز الانتشار عبر الجلد TK -20 B بمساحة انتشار فعالة تبلغ 2.99 سم ​​2. بعد ذلك ، تم اختيار محلول 0 .6٪ Tween8 0 كوسيط إصدار الاختراق. تم وضع أنسجة الجلد بين خلية الانتشار وخلية المستقبل ، وتم وضع 4 مل من مستحضرات كيرسيتين (تعادل 120 ميكروجرام من كيرسيتين) على الجلد. 0. تم سحب وسيط الاختراق (0.5 مل) من خلية المستقبل عند 1 و 2 و 4 و 6 و 8 و 10 و 12 و 24 ساعة مع استبدال وسط اختراق جديد (0.5 مل). تم تخفيف وسائط الاختراق المسحوبة في نقاط زمنية مختلفة إلى 7 مل بالميثانول وتم تحديدها بواسطة HPLC بعد الطرد المركزي والترشيح.

بعد تجربة التخلل ، تم إجراء تجربة احتفاظ الجلد بالمخدرات. بعد 24 ساعة ، تم عزل أنسجة الجلد ، ثم تم قصها بالكامل في 7 مل ميثانول بعد غسل الكيرسيتين على السطح باستخدام الماء المقطر واستخلاصها لمدة 4 0 دقائق بالموجات فوق الصوتية. بعد ذلك ، تم تدوير العينات وطردها ، وتم تحليل المادة الطافية باستخدام HPLC بعد الترشيح من خلال غشاء مرشح ميليبور 0.22 ميكرومتر.

4.10. طريقة HPLC

كان العمود التحليلي Dimark C18 (150 مم × 4.6 ، 5 ميكرومتر). تتكون المرحلة المتنقلة من ميثانول و 1 في المائة H3PO4 (60:40 ، حجم / حجم). تم ضبط معدل التدفق على 1 مل / دقيقة عند 30 درجة مئوية وحجم حقن 10 ميكرولتر. تم الكشف عن ذروة كيرسيتين عند 363 نانومتر.

4.11. تحليل احصائي

يتم التعبير عن البيانات على أنها متوسط ​​التجارب - الانحراف المعياري (SD) وتم تحليلها باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) ، متبوعًا باختبار Tukey متعدد المقارنة اللاحق. تعتبر الفروق الإحصائية التي تنتج P <0. 05 ذات دلالة إحصائية.

5. الاستنتاجات

قمنا بفحص الكيرسيتين ، وهو فلافونويد طبيعي يمتلك قدرة قوية على التبييض ومضادات الأكسدة ، وصياغة الجسيمات الشحمية باستخدام نظام الفاعل بالسطح غير الأيوني لتحسين قابلية الكيرسيتين للذوبان ، واستقرار الضوء ، وقدرة اختراق الجلد.

الكاتب الاشتراكات:

وضع المفاهيم ، WC و XL ؛ المنهجية ، مرحاض. برنامج ، YH ؛ التحقق من الصحة BL و YH و ZC ؛ التحليل الرسمي ، BL ؛ تحقيق ، JY ؛ الموارد ، HX ؛ معالجة البيانات ، BL ؛ الكتابة - إعداد المسودة الأصلية ، BL ؛ كتابة - مراجعة وتحرير، XL؛ التصور ، مرحاض ؛ الإشراف ، XL ؛ اقتناء التمويل ، XL

التمويل:

لم يتلق هذا البحث أي تمويل خارجي.

تضارب المصالح:

الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح.

مراجع

1 - شيكارا ، ن. كور ، ر. جاجلان ، س. شارما ، ر. جات ، واي. Panghal ، A. المركبات النشطة بيولوجيا والتطبيقات الدوائية والغذائية من Syzygium cumini - مراجعة. وظيفة الغذاء. 2018، 9، 6096. [CrossRef] [PubMed]

2 - كارول لوبيز دي ديكاستيلو كارول لوبيز بوستوس ، ف. فالنزويلا ، العاشر ؛ لوبيز-كاربالو ، ج. Vilariño ، JM ؛ Galotto ، MJ Chilean berry ، Ugni molinae ، Turcz. مستخلص الفاكهة والأوراق مع خصائص مثيرة للاهتمام من مضادات الأكسدة ومضادات الميكروبات ومثبطات التيروزيناز. الدقة الغذائية. كثافة العمليات 2017 ، 102 ، 119-128.

3. Chiari، ME؛ فيرا ، مارك ألماني ؛ بالاسيوس ، SM ؛ Carpinella، MC Tyrosinase النشاط المثبط لـ 6- فلافانون بديل isoprenoid معزول من Dalea elegans. بيورج. ميد. تشيم. 2011 ، 19 ، 3474-3482. [CrossRef] [PubMed]

4. سيرات جلالة الملك ؛ Rezali، MF؛ Ujang ، Z. عزل وتحديد الكسح الراديكالي وتثبيط التيروزيناز للبوليفينول من Tibouchina semidecandra. J. أجريك. الغذاء تشيم. 2010 ، 58 ، 10404-10409. [CrossRef] [PubMed]

5. شيونغ ، زيونغ ؛ ليو ، دبليو. تشو ، إل. Chen، J. Mushroom (Agaricus bisporus) تم تثبيط بوليفينول أوكسيديز بواسطة apigenin: التحليلات متعددة الأطياف ومحاكاة الالتحام الحسابية. الغذاء تشيم. 2016 ، 203 ، 430-439. [CrossRef] [PubMed]

6. Yan-Zhen، Z .؛ دا فو ، سي. جينج ، د. Guo، R. التأثير البديل على نشاط الكسح الراديكالي لأبيجينين. جزيئات 2018 ، 23 ، 1989.

7. Handjani-Vila، RM؛ ريبير ، أ. روندوت ، ب. Vanlerberghie، B. تشتت الأطوار الصفائحية للدهون غير الأيونية في مستحضرات التجميل. كثافة العمليات J. كوزميت. علوم. 1979 ، 1 ، 303-314. [CrossRef] [PubMed]

8. يوشيدا ، ح. لير ، سم ؛ كوك ، دبليو. Junginger ، HM ؛ فيرهوف ، جي سي ؛ Bouwstra، JA Niosomes لإعطاء الأدوية الببتيدية عن طريق الفم. J. التحكم. الإصدار 1992، 21، 145–153. [CrossRef]

9. Uchegbu، IF؛ مزدوج ، JA ؛ كيلاند ، LR ؛ تورتون ، جا. Florence، AT نشاط Doxorubicin Niosomes ضد خط خلايا سرطان المبيض وثلاثة في نماذج ورم فيفو فأر. J. الهدف المخدرات. 1996 ، 3 ، 399-409. [CrossRef]

10 - الصرة ، ع. بوسيلا ، أ. أحمد ، م ؛ محروس ، جنرال موتورز Proniosomes كحامل أدوية لتوصيل كيتورولاك عبر الجلد. يورو. J. فارم. بيوفارم. 2005 ، 59 ، 485-490. [CrossRef]

11. هونج ، م. Zhu، S. جيانغ ، واي. تانغ ، جي ؛ Pei ، Y. استهداف الورم بكفاءة من الجسيمات الشحمية المبيضة المحملة بالهيدروكسي كامبتوثيسين المعدلة مع الترانسفيرين. J. التحكم. الإصدار 2009 ، 133 ، 96-102. [CrossRef] [PubMed]

12. تافانو ، إل. موزالوبو ، ر. Picci ، N. ؛ de Cindio، B. التغليف المشترك لمضادات الأكسدة في ناقلات الدهون: دراسات إطلاق الجهاز الهضمي لتطبيقات التغذية. تصفح الغروانية. واجهة بيولوجية 2014 ، 114 ، 82-88. [CrossRef] [PubMed]

13. سهرابي ، س. حائري ، أ. محبوبي أ. مرتضوي ، أ. Dadashzadeh ، S. Chitosan niosomes moxifloxacin المضمنة في هلام: نظام هجين فعال مضاد للميكروبات لعدوى الحروق. كثافة العمليات J. بيول. ماكرومول. 2016 ، 85 ، 625-633. [CrossRef] [PubMed]

14. كومار ، ن. Goindi، S. حويصلات الفاعل بالسطح غير الأيونية المصممة إحصائيًا للإيصال الجلدي للإيتراكونازول: التوصيف والتقييم في الجسم الحي باستخدام نموذج معياري لعدوى سعفة القدم. كثافة العمليات J. فارم. 2014 ، 472 ، 224-240. [CrossRef] [PubMed]

15 - سيركويرا كوتينهو ، سي. دوس سانتوس ، إب ؛ المنصور ، CR Niosomes كنظم توصيل بالنانو في المجال الصيدلاني. كريت. القس هناك. المخدرات كار. النظام. 2016 ، 33 ، 195. [CrossRef]

16. يه ، مي ؛ هوانغ ، HC ؛ لياو ، ج. هوانغ ، مولودية ؛ هوانغ ، KF ؛ Hsu، FL Dermal التسليم عن طريق niosomes من مستخلص الشاي الأسود كعامل واق من الشمس. كثافة العمليات J. ديرماتول. 2013 ، 52 ، 239-245. [CrossRef] [PubMed]

17- مانكوني ، م. سينيكو ، سي. فالنتي ، د. لوي ، جي ؛ Fadda ، AM Niosomes كحاملات للتريتينوين. أولا إعداد والخصائص. كثافة العمليات J. فارم. 2002 ، 234 ، 237-248. [CrossRef] 18. Manconi، M .؛ فالنتي ، د. سينيكو ، سي. لاي ، ف. لوي ، جي ؛ Fadda ، AM Niosomes كناقلات ل tretinoin: II. تأثير التضمين الحويصلي على الثبات الضوئي تريتينوين. كثافة العمليات J. فارم. 2003 ، 260 ، 261-272. [CrossRef]

19. Kunitake، T .؛ تاكاهاتا ، واي. غشاء اصطناعي ثنائي الطبقة. جيه. تشيم. شركة 1977 ، 99 ، 3860–3861. [CrossRef]

20. برادي ، جي. إيفانز ، د. كشار ، ب. نينهام ، الحويصلات العفوية BM. جيه. تشيم. شركة 1984 ، 106 ، 4279-4280. [CrossRef]

21. كالر ، إي. مورثي ، أ. رودريغيز ، ب. Zasadzinski، J. تكوين الحويصلة العفوية في الخلائط المائية للمواد الخافضة للتوتر السطحي أحادية الذيل. العلوم 1989، 245، 1371–1374. [CrossRef] [PubMed]

22. Kaler، EW؛ هيرينجتون ، كوالالمبور ؛ مورثي ، أ. Zasadzinski ، JAN سلوك المرحلة وهياكل مخاليط من المواد الخافضة للتوتر السطحي الأنيونية والكاتيونية. J. فيز. تشيم. 1992 ، 96 ، 6698-6707. [CrossRef]

23 - Uchegbu، IF؛ Vyas، SP الحويصلات القائمة على الفاعل بالسطح غير الأيونية (niosomes) في توصيل الدواء. كثافة العمليات J. فارم. 1998 ، 172 ، 33-70. [CrossRef]

24. Mahale، NB؛ ثكار ، ب. مالي ، RG ؛ والونج ، د. Chaudhari ، SR Niosomes: أنظمة حويصلية مستقرة غير أيونية مستدامة الإطلاق - نظرة عامة. حال. علوم واجهة الغروانية. 2012، 183–184، 46–54. [CrossRef] [PubMed]

25- أودوبا ، إن. ؛ شاندرابراكاش ، كانساس ؛ Umadevi ، P. ؛ Pillai، GK Formulation and Evaluation of Methotrexate Niosomes. تطوير المخدرات. كومون. 1993 ، 19 ، 12. [CrossRef]

26 - Uchegbu، IF؛ Florence ، AT حويصلات الفاعل بالسطح غير الأيونية (niosomes): الكيمياء الفيزيائية والصيدلانية. حال. علوم واجهة الغروانية. 1995 ، 58 ، 1-55. [CrossRef]

27. Yoshioka، T .؛ ستيرنبرغ ، ب. Florence، AT تحضير وخصائص الحويصلات (niosomes) من السوربيتان الأحادي الاسترات (Span 20 و 40 و 60 و 80) وثلاثي السوربيتان (Span 85). كثافة العمليات J. فارم. 1994 ، 105 ، 1-6. [CrossRef]

28. مانوسروي ، أ. Wongtrakul ، P. ؛ مانوسروي ، ياء ؛ ساكاي ، ح. سوغاوارا ، ف. يواسا ، م. Abe، M. توصيف الحويصلات المحضرة بمختلف المواد الخافضة للتوتر السطحي غير الأيونية الممزوجة بالكوليسترول. تصفح الغروانية. الواجهة الحيوية 2003 ، 30 ، 129-138. [CrossRef]

29. Alsarra، IA تقييم البروتيازوم كإستراتيجية بديلة لتحسين توصيل بيروكسيكام عبر الجلد. J. Microencapsul. 2009 ، 26 ، 272-278. [CrossRef]

30. شارما ، س. داس ، أ. داسغوبتا ، أ. لي ، ويم ؛ كيم ، جو ؛ أوه ، DH ؛ كيم ، د. كيم ، شبيبة ؛ يو ، بي ؛ تشوي ، HG ؛ وآخرون. صياغة وتقييم المينوكسيديل في المختبر لتحسين توصيل الجلد. كثافة العمليات J. فارم. 2009 ، 377 ، 1–8.

31. Junyaprasert، VB؛ سينغ ، ب. Suksiriworapong ، J. ؛ Chantasart، D. الخصائص الفيزيائية والكيميائية وتغلغل الجلد لـ Span 60 / Tween 60 niosomes من حمض الإيلاجيك. كثافة العمليات J. فارم. 2012، 423، 303. [CrossRef] [PubMed]

32. مانوسروي ، أ. خانرين ، ص. Lohcharoenkal ، W. ؛ جوتز ، ف. مانوسروي ، دبليو. Manosroi ، J. تعزيز الامتصاص عبر الجلد من خلال جلد الفئران من الجاليديرمين المحملة في الجسيمات الشحمية. كثافة العمليات J. فارم. 2010 ، 392 ، 304-310. [CrossRef] [PubMed]

33- عودة ، ش. فتح الله ، د. Fetih ، G. ؛ البدرى ، م. شاكيل ، F. Niosomes كنظام توصيل الأدوية عبر الجلد للسيليكوكسيب: دراسات في المختبر وفي الجسم الحي. بوليم. ثور. 2016 ، 73 ، 1229-1245. [CrossRef]

34. مانوسروي ، أ. جانتراوت ، ص. Manosroi، J. النشاط المضاد للالتهابات للهلام الذي يحتوي على نيوسومات مرنة جديدة محاصرة مع ديكلوفيناك ثنائي إيثيل الأمونيوم. كثافة العمليات J. فارم. 2008، 360، 156–163. [CrossRef] [PubMed]

35. شاهيوالا أ. Misra، A. دراسات في التطبيق الموضعي لنيميسوليد عادة. J. فارم. فارم. علوم. 2002 ، 5 ، 220-225. [PubMed]

36. بارداختي ، أ. فارشوساز ، ياء ؛ Rouholamini ، A. في المختبر دراسة لجسيمات بولي أوكسي إيثيلين ألكيل إيثر لتوصيل الأنسولين. كثافة العمليات J. فارم. 2007 ، 328 ، 130-141. [CrossRef] 37. عبد الباري ، ج. الجندي ، ن. جنتاميسين مغلف نيوسوم للولادة الخاضعة للرقابة في العين. أبس فارمسسيتيك 2008 ، 9 ، 740-747. [CrossRef] [PubMed]

38. وضّاع عباد ، ش. يو ، ف. مونييندو ، ذ م م ؛ وانغ ، ياء ؛ Lv ، H. ؛ Zhou ، J. صياغة وتوصيف وحركية نوسومات مورين هيدرات المحضرة من مختلف المواد الخافضة للتوتر السطحي غير الأيونية. كثافة العمليات J. فارم. 2013 ، 456 ، 446-458. [CrossRef]

39. ميشرا ج. سوين ، ياء ؛ ميشرا ، أيه كيه التحقيق في التغيرات المعتمدة على درجة الحرارة للترطيب البيني ولزوجة توين 20: الكوليسترول (1: 1) غشاء نيوسوم باستخدام Fisetin كمسبار جزيئي نيون. فيز. تشيم. تشيم. فيز. 2018 ، 20 ، 13279-13289. [CrossRef]

40. Procházková، D .؛ Boušová، I .؛ Wilhelmová، N. خصائص مضادات الأكسدة و prooxidant للفلافونيدات. Fitoterapia 2011 ، 82 ، 513-523. [CrossRef]

41- Cherrak، SA ؛ مختاري سليمان ، ن. بروكيش ، ف. بنسينان ، ب. تشيربونيل ، أ. مرزوق ، ح. الحبيري ، M. في مضادات الأكسدة المختبرية مقابل خصائص أيونات المعدن المستخلبة للفلافونويدات: دراسة في التركيب والنشاط. بلوس وان 2016 ، 11 ، e0165575. [CrossRef] [PubMed]

42. Amic، D.؛ دافيدوفيتش أميتش ، د. بيسلو ، د. راستيجا ، ف. لوسيك ، ب. Trinajstic و N. SAR و QSAR للنشاط المضاد للأكسدة للفلافونويد. بالعملة. ميد. تشيم. 2007 ، 14 ، 827-845. [CrossRef] [PubMed]

43. ماتشادو، ND؛ فرناندو ، سو ؛ دي روسي ، ر. قام فرنانديز ، MA بتعديل Cyclodextrin niosomes لتغليف المركبات المحبة للماء. محامي RSC 2018 ، 8 ، 29909-29916. [CrossRef]

44. عمران ، م. شاه ، م. الله ، ف. الله ، س. الهيسي ، AMA ؛ نواز ، و. أحمد ، ف. صادق أ. علي ، I. حوامل شحمية شحمية أساسها جليكوسيد لتحسين أداء Cefixime داخل الجسم الحي. كثافة العمليات J. فارم. 2016 ، 505 ، 122-132. [CrossRef] [PubMed]

45. Hao، Y .؛ تشاو ، ف. لي ، ن. يانغ ، واي. لي ، ك. دراسات حول تغليف عالٍ للكولشيسين بواسطة نظام مزعج. كثافة العمليات J. فارم. 2002 ، 244 ، 73-80. [CrossRef]

46. ​​Anandam، S. Selvamuthukumar، S. تصنيع cyclodextrin nanosponges لتوصيل Quercetin: الخصائص الفيزيائية والكيميائية ، والاستقرار الضوئي ، والتأثيرات المضادة للأكسدة. جيه ماتر. علوم. 2014 ، 49 ، 8140-8153. [CrossRef]

47. Lv، X .؛ ليو ، تي. ما ، ح. تيان ، واي. لي ، إل. لي ، زي. جاو ، م. تشانغ ، ياء ؛ تانغ ، زي.إعداد المستحلبات الدقيقة المعتمدة على الزيت الأساسي لتحسين قابلية الذوبان واستقرار درجة الحموضة والثبات الضوئي وتغلغل الجلد في مادة الكيرسيتين. AAPS PharmSciTech 2017 ، 18 ، 3097-3104. [CrossRef]

48. قزي ، ج. جريج ، أ. أويزوفا ، إل. فورمينتين ، إس. Greige-Gerges، H. النتائج الجديدة لتغليف Quercetin وحفظه باستخدام cyclodextrins ، الجسيمات الشحمية ، والمخدرات في cyclodextrin-in-liposomes. غرواني مائي غذائي 2018 ، 81 ، 328-340. [CrossRef]

49. Smith، GJ؛ تومسن ، SJ ؛ ماركهام ، ك. أنداري ، سي ؛ كاردون ، د. الثبات الضوئي لـ 5- هيدروكسي فلافون ، فلافونولس ، جليكوسيداتها ، ومركباتها المصنوعة من الألومنيوم. J. فوتوشيم. فوتوبيول. كيم. 2000 ، 136 ، 87-91. [CrossRef]

50. كوبو ، أنا ؛ Kinsthori، I. Flavonols من زهرة الزعفران: نشاط التيروزينيز المثبط وآلية التثبيط. J. أجريك. الغذاء تشيم. 1999 ، 47 ، 4121-4125. [CrossRef]

51. Kim، YJ؛ Uyama ، H. مثبطات التيروزيناز من المصادر الطبيعية والاصطناعية: الهيكل وآلية التثبيط ومنظور المستقبل. خلية. مول. علوم الحياة. 2005 ، 62 ، 1707-1723. [CrossRef] [PubMed]

52. Kim، D .؛ بارك ، ياء ؛ كيم ، ياء ؛ هان ، سي ؛ يون ، ياء ؛ كيم ، ن. سيو ، ياء ؛ لي ، سي.فلافونويدس كمثبطات لتيروزيناز الفطر: دراسة تبريد مضان. J. أجريك. الغذاء تشيم. 2006 ، 54 ، 935-941. [CrossRef] [PubMed]

53. Fan، M.؛ تشانغ ، جي ؛ هو ، العاشر. شو ، العاشر ؛ Gong ، D. Quercetin كمثبط للتيروزيناز: النشاط التثبيطي ، التغيير التوافقي ، والآلية. الدقة الغذائية. كثافة العمليات 2017 ، 100 ، 226-233. [CrossRef] [PubMed]

54. Didem ¸Söhreto ˘glu Suat، S .؛ بوراك ، ب. Özel، A. تثبيط التيروزيناز ببعض مركبات الفلافونويد: النشاط التثبيطي ، الآلية عن طريق الدراسات المخبرية والسيليكو. بيورج. تشيم. 2018 ، 81 ، 168–174. [CrossRef] [PubMed]

55. Gopinath، D .؛ رافي ، د. كروة ، ر. راو ، ب. شاشانك ، أ. Rambhau ، D. حركية الدواء لزيدوفودين بعد تناول جرعة في الوريد لمستحضر نيوسوم جديد خالي من الكوليسترول. Arzneimittelforschung 2011 ، 51 ، 924-930. [CrossRef] [PubMed]

56. Ghosh، S. غاتاك ، سي. بانيرجي ، سي. ماندال ، إس. كوتشليان ، ياء ؛ Sarkar، N. الانتقال التلقائي للميسيل - الحويصلة - الميسيل في مزيج من الخافض السطحي الكاتيوني والسائل الأيوني الشبيه بالخافض السطحي: قالب حويصلي صغير غير شحمي يستخدم في دراسة الاسترخاء الدوراني والمذيبات. لانجموير 2013، 29، 10066–10076. [CrossRef]

57. Sakai، T .؛ إيكوشي ، ر. توشيدا ، ن. Kagaya ، M. تشكيل حويصلة مستقرة ديناميكيًا حراريًا وانتقال الحويصلة إلى الميسيل للفاعل السطحي الأنيوني أحادي الذيل في الماء. J. فيز. تشيم. ب 2013 ، 117 ، 5081. [CrossRef]

58. Ghosh، S. موندال ، إس. بان ، أ. ميترا ، RK ؛ Ghosh، S. Soft Matter 2018 ، 14 ، 4185-4193.

59. موخيرجي ، ب. ؛ باترا ، ب. Layek ، ب. Mukherjee ، A. الإطلاق المستمر للأسيكلوفير من الجسيمات الشحمية النانوية والجسيمات الشحمية النانوية: دراسة في المختبر. كثافة العمليات J. نانوميد. 2007 ، 2 ، 213-225.

60. Blois، MS قرارات مضادات الأكسدة عن طريق استخدام جذر حر مستقر. طبيعة 1958 ، 181 ، 1199-1200. [CrossRef]

61. روي، واي. ينج ، جي ؛ ويكسين ، دبليو. تشين ، هـ. هو Z. جيا ، أ. قدرة الفينولات المضادة للأكسدة في زهور الكاميليا nitidissima Chi وتحديدها بواسطة HPLC Triple TOF MS / MS. بلوس وان 2018 ، 13 ، e0195508.

توفر العينة:

عينات من المركبات غير متوفرة من المؤلفين.

© 2 0 19 بواسطة المؤلفين. مرخص MDPI ، بازل ، سويسرا. هذه المقالة عبارة عن مقال مفتوح الوصول يتم توزيعه بموجب شروط وأحكام ترخيص Creative Commons Attribution (CC BY) (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).

تم الاستلام: 2 أبريل 2019 ؛ مقبول: 21 يونيو 2019 ؛ تاريخ النشر: 24 يونيو 2019

For more information:1950477648nn@gmail.com