لمزيد من المعلومات: ali.ma@wecistanche.com

الرجاء النقر هنا للجزء 2

Yasaman Alaghbanda، b، c، Janine L. Kwapisa، b، d، Alberto J. Lópeza، b، c، André O. Whitea، b، c، 3، Osasumwen V. Aimiuwua، b، c، 1، Amni Al- Kachaka، b، c، 2، Kasuni K. Bodinayakea، b، c،

نيكول سي أوباروغوا ، ب ، ج ، ريتشارد دانجا ، ب ، د ، مريم أستاراباديا ، ب ، ج ، 4 ، دينا ب.ماثيوزا ، ب ، ومارسيلو إيه وودا ، ب ، ج ، د

a301 معمل أبحاث قريشي ، قسم البيولوجيا العصبية والسلوك ، مركز

علم الأعصاب للتعلم وذاكرة، جامعة كاليفورنيا ، إيرفين ، إيرفين ، كاليفورنيا ، 92697 مركزًا للبيولوجيا العصبية للتعلم وذاكرة(CNLM) ، ايرفين ، كاليفورنيا ، 92697 ج

مركز إيرفاين لعلم الأعصاب للإدمان (ICAN) ، جامعة كاليفورنيا ، إيرفين ، كاليفورنيا ، معهد 92697d لـذاكرةالإعاقات والاضطرابات العصبية ، جامعة كاليفورنيا ، إيرفين ،

انقر لفوائد Cistanche tubulosa والآثار الجانبية لتحسين الذاكرة

الملخص

هيستون ديستيلاسز (HDACs) عبارة عن إنزيمات معدلة للكروماتين تم تورطها كمنظمين سلبيين قويين لـذاكرةالعمليات. لقد ثبت أن HDAC3 يلعب دورًا محوريًا في الذاكرة طويلة المدى لموقع الكائن بالإضافة إلى انقراض الكوكايين المرتبطذاكرة، ولكن من غير الواضح ما إذا كانت هذه الوظيفة تعتمد على مجال نزع الأسيتيل من HDAC3. هنا ، اختبرنا ما إذا كان مجال نزع الأسيتيل في HDAC3 له دور في موقع الكائنذاكرةتكوين وانقراض الذكريات المرتبطة بالكوكايين. باستخدام متحولة نقطة ميتة ديستيلاز لـ HDAC3 ، وجدنا أن منع نشاط HDAC3 نزع الأسيتيل بشكل انتقائي في الحصين الظهري عزز الذاكرة طويلة المدى لموقع الكائن ، ولكن لم يكن له أي تأثير على تكوين الذاكرة المرتبطة بالكوكايين. عندما تم حقن هذا الفيروس المتحور النقطي من HDAC3 في قشرة ما قبل الحلف ، فقد فشل في التأثير على الكوكايين المرتبطذاكرةتشكيل - تكوين. فيما يتعلق بالانقراض ، لم يكن لإضعاف مجال HDAC3 deacetylase في القشرة تحت الحوفية أي تأثير على الانقراض ، ولكن لوحظ تأثير الانقراض الميسر عندما تم تسليم الفيروس المتحول النقطي إلى الحصين الظهري. تشير هذه النتائج إلى أن مجال نزع الأسيتيل لـ HDAC3 يلعب دورًا انتقائيًا في مناطق معينة من الدماغ تقوم على المدى الطويل.ذاكرةتشكيل موقع الكائن وكذلك المرتبطة بالكوكايينذاكرةالتكوين والانقراض.

الكلمات الدالة

ذاكرة طويلة المدى علم التخلق. الكروماتينية؛ موقع الكائن تفضيل المكان المشروط الحصين الظهري

مقدمة

هيستون أستلة هي آلية مدروسة جيدًا لتعديل الكروماتين وتشارك في تنظيم التعبير الجيني المطلوبذاكرة. أظهرت العديد من الدراسات أن أستلة هيستون متورطة على المدى الطويلذاكرةتشكيل (تمت مراجعته على سبيل المثال في Levenson and Sweatt، 2006؛ McQuown and Wood، 2011؛ ​​Gräffand Tsai، 2013؛ Peixoto and Abel، 2013؛ Penney and Tsai 2014). يتم إجراء أسيتيل الهيستون بواسطة هيستون أسيتيل ترانسفيرازات وهستون ديسيتيلاسز (HDACs) ، والتي تسهل بشكل عام وتقمع التعبير الجيني ، على التوالي (Jenuwein and Allis 2001 ؛ Kouzarides ، 2007). Histone deacetylase 3 (HDAC3) هو الأكثر تعبيرًا من الدرجة الأولى HDAC في الدماغ ، وهذا HDAC المحدد هو منظم سلبي قوي لعمليات التعلم والذاكرة (Kwapis et al. ، 2017 ؛ Malvaez et al. ، 2013 ؛ McQuown et al. ، 2011 ؛ Rogge et al. ، 2013). أظهر مختبرنا أن HDAC3 يلعب دورًا مهمًا في تحديد موقع الكائن وتكوين الذاكرة المرتبطة بالخوف (McQuown et al. ، 2011 ؛ Kwapis et al. ، 2017) باستخدام معالجات HDAC3 الخاصة باللوزة والحصين. لقد أظهرنا أيضًا أن تثبيط HDAC3 يسهل انقراض سلوك البحث عن المخدرات بطريقة تمنع العودة (Malvaez et al. ، 2013). استخدمت تجارب الانقراض في Malvaez et al (2013) مثبط HDAC3 انتقائيًا بشكل منهجي ، وبالتالي لم نتمكن من تحديد مناطق الدماغ الأكثر أهمية بالنسبة لتعديل الانقراض المعتمد على HDAC 3-.

HDAC3 نفسه له نشاط فعال لنزع الأسيتيل (Guenther et al. ، 2002 ؛ Lahm et al. ، 2007 ؛ Zhang et al. ، 2002) ، وهو يرتبط بـ HDAC4 / HDAC5 من خلال التفاعلات مع ضاغط مستقبلات مستقبلات الطاقة النووية (NCoR) تشكل معقدًا مثبطًا وظيفيًا متعدد البروتينات (Guenther et al. ، 2001 ؛ Fischle et al. ، 2002 ؛ Alenghat et al. ، 2008). تتمثل إحدى الأفكار في أن هذه المجمعات متعددة البروتينات قد تكون مطلوبة من أجل نزع الأسيتيل لأن HDAC4 لديه نشاط تحفيزي ضئيل أو معدوم على ركائز أسيتيل ليسين الكنسي (لام وآخرون ، 2007). لقد ثبت أن HDAC4 يعدلذاكرةمستقلة عن مجال نزع الأسيتيل (Sando et al. ، 2012). خارج مجال التعلم وذاكرة، HDAC 3- التعبير الجيني بوساطة في الأنسجة الأخرى لا يتطلب بالضرورة وظيفة إنزيمية HDAC3 (صن وآخرون ، 2013) ، مما يشير إلى أنه ربما لا يكون نشاط ديستيلاز من HDAC3 مطلوبًا لتكوين الذاكرة. حتى وقت قريب ، لم يتم اختبار نشاط ديستيلاز HDAC3 في تكوين الذاكرة بشكل مباشر. أظهر Kwapis وزملاؤه (2017) أن النشاط الإنزيمي لـ HDAC3 مطلوب بالفعل للأشكال المعتمدة على اللوزةذاكرةتشكيل - تكوين.

أظهرت الدراسات السابقة أن الإدارة النظامية لمثبط HDAC3 يمكن أن تسهل تشكيل موقع الكائنذاكرة(OLM) وكذلك انقراض سياق الكوكايين المرتبطذاكرة(مالفيز وآخرون ، 2013). ومع ذلك ، ما إذا كان نشاط نزع الأسيتيل من HDAC3 مطلوبًا لموقع الكائنذاكرةOLM في الحصين ، وانقراض الذاكرة المرتبطة بسياق الكوكايين في القشرة تحت الحوفية لا تزال غير واضحة. في الدراسة الحالية ، استهدفنا على وجه التحديد نشاط ديستيلاز لـ HDAC3 في تكوين الذاكرة المعتمد على الحصين وكذلك في الحصين الظهري (DH) والقشرة الحوفية (PrL) والقشرة الحوفية (IL) فيما يتعلق باكتساب وانقراض تفضيل المكان المشروط بالكوكايين ، أو سياق الكوكايين المرتبطذاكرةالعمليات.

المواد والأساليب

المواضيع

تمت الموافقة على جميع الإجراءات من قبل جامعة كاليفورنيا ، لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية في إيرفين وكانت متوافقة مع إرشادات المعاهد الوطنية للصحة. كان عمر الفئران من 8 إلى 12 أسبوعًا وكان بإمكانها الوصول إلى الطعام والماء في أقفاص منزلها مع الحفاظ على الأضواء في دورة مظلمة / فاتحة لمدة 12 ساعة. تم إجراء الاختبار السلوكي خلال الجزء الخفيف من الدورة. كانت الموضوعات عبارة عن فئران بالغة من الذكور C57BL / 6J لتجارب AAV-HDAC3 (Y298H) -v5. بالنسبة لتجربة حذف flox HDAC3 ، تم الحفاظ على الفئران Hdac3flox / flox والنوع البري Hdac3 plus / plus على خلفية C57BL / 6J (Mullican et al. ، 2011). باختصار ، تم إنشاء هذه الفئران في مختبر الدكتور ميتش لازار بجامعة بنسلفانيا (فيلادلفيا ، بنسلفانيا) مع مواقع loxP المرافقة لـ exon 4 إلى exon 7 من جين Hdac3 ، وهي منطقة مطلوبة للنشاط التحفيزي للإنزيم (Mullican et آل ، 2011).

المخدرات

تم شراء Cocaine-HCl من Sigma-Aldrich (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية) وتم إذابته في محلول ملحي (0. 9٪ كلوريد الصوديوم). يُعبر عن Cocaine-HCl بوزن الملح. لتدريب الكوكايين- CPP في تجارب الاستحواذ ، تم إذابة الكوكايين- حمض الهيدروكلوريك إلى تركيز نهائي قدره 0. 5 مجم / مل وتم إعطاؤه بحجم 10 مل / كجم من وزن الجسم ، مما أدى إلى جرعة نهائية قدرها 5 ملغم / كغم. لتدريب الكوكايين- CPP في تجربة الانقراض ، تم إذابة الكوكايين- حمض الهيدروكلوريك إلى تركيز نهائي قدره 2 مجم / مل وتم إعطاؤه بحجم 10 مل / كجم من وزن الجسم ، مما أدى إلى جرعة نهائية قدرها 20 مجم / كجم. تم إعطاء الكوكايين حمض الهيدروكلوريك والمحلول الملحي داخل الصفاق (IP).

جراحة

تم تحريض الفئران بنسبة 4 في المائة من الأيزوفلورين في الأكسجين والحفاظ عليها عند 1.5-2. 0 في المائة طوال مدة الجراحة. تم حقن الحيوانات باستخدام AAV-HDAC3 (Y298H) -v5 أو AAV- EV (ناقل فارغ) (Kwapis وآخرون ، 2 0 17). لتجارب DH ، تم حقن 1 µlofvirus ثنائيًا. بالنسبة لتجارب ما قبل الحوض وتحت الحجرة ، تم غرس 3 ميكرولتر من الفيروس بشكل ثنائي. تم استخدام التألق المناعي لتأكيد التعبير عن HDAC3 (Y298H). تم إنزال إبر الحقن إلى الإحداثيات المرغوبة بمعدل 0. 2 مم / 15 ثانية. تم حقن الفيروس بمعدل 6 ميكرولتر / ساعة بعد {{2 0} دقيقة من الوصول إلى عمق الهدف. بعد التسريب ، تُترك إبر الحقن في مكانها لمدة 2- دقيقة للسماح للفيروس بالانتشار. تم بعد ذلك رفع المحاقن 0. 1 مم والسماح لها بالجلوس لمدة دقيقة أخرى قبل إزالتها ببطء (0. 1 مم / 15 ثانية). تم خياطة الشق وسمح لمدة أسبوعين للتعبير الفيروسي الكامل قبل السلوك. تم حقن الفيروسات بمضخات قياس 28 مزدوجة (DH: 3 مم من المركز إلى المركز ؛ PrL / IL: 0. 8 مم من المنتصف إلى المركز) متصلة بأنابيب PE5 0 ومتصلة بـ Hamilton Syringes مثبتة على مضخات التسريب. كانت إحداثيات DH هي: AP ، −2.0mm ؛ ML ، ± 1.5 مم ؛ DV ، −1.5 ملم نسبة إلى بريجما. كانت إحداثيات PrL: AP ، بالإضافة إلى 1.9 مم ؛ ML ، ± 0.4 مم ؛ DV ، 2.2 مم نسبة إلى برجما. كانت إحداثيات IL هي: AP ، بالإضافة إلى 1.5 ؛ ML ، ± 0.4 مم ؛ DV ، 3.2 ملم نسبة إلى بريجما.

إنتاج AAV

تم تضخيم HDAC3 من النوع البري من حصين الماوس (كدنا) واستنساخه في pAAV-IRES-hrGFP المعدل (Agilent) ، تحت سيطرة مروج CMV و intron-globin. لإنشاء طفرة نقطية ، تم إنشاء استبدال نوكليوتيد واحد في إكسون 11 لتوجيه إنتاج بقايا هيستيدين بدلاً من التيروزين في الحمض الأميني 298 (بلازميد MW92). بالنسبة لعنصر التحكم في المتجهات الفارغة ، لم يكن تسلسل ترميز HDAC3 موجودًا ، ولكن بقيت جميع العناصر الأخرى (البلازميد MW87). تم صنع الفيروس المرتبط بالغدة (AAV) بواسطة Penn Vector Core (جامعة بنسلفانيا) من البلازميدات الموصوفة أعلاه وتم نمذجه باستخدام AAV 2.1. كان العيار النهائي لـ AAV-HDAC3 (Y298H) 6.48 × 1012 GC / mL وكان العيار النهائي لـ AAV-EV 1.35 × 1013 GC / mL.

تألق مناعي

في التجارب السلوكية الموضحة في الأشكال 2-7 ، تم تأكيد التسريب الفيروسي لكل حيوان مشمول في تحليلات السلوك بواسطة الكيمياء الهيستولوجية المناعية. تم التخلص من الفئران عن طريق خلع عنق الرحم وتمت إزالة أدمغتها وتجميدها في الأيزوبنتان المثلج. تم جمع شرائح 2 0 ميكرومتر في جميع أنحاء IL / PrL أو DH ، وتم إذابتها على الشرائح ، وتم تخزينها عند −8 0 درجة حتى الاستخدام. لتحليل التألق المناعي ، تم إصلاح الشرائح بنسبة 4 في المائة لامتصاص العرق لمدة دقيقة واحدة 0 ونفاذية في 0.01 في المائة تريتون X -100 في 0.1 مليون PBS لمدة 15 دقيقة. تم منع الشرائح بعد ذلك لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة في مصل ماعز طبيعي بنسبة 8 في المائة (جاكسون) ، وتم تحضينها طوال الليل عند 4 درجات في الجسم المضاد الأولي (HDAC3 clone Y415 antibody: 1: 250 ؛ Abcam). في اليوم التالي ، تم تحضين الشرائح لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة باستخدام تخفيف الماعز المضاد للأرانب Alexa 488 (1: 1 000 تخفيف ، Invitrogen) في الظلام متبوعًا إما بحضانة DAPI لمدة 15- دقيقة (1: 10000 ، Invitrogen ؛ DH). بالنسبة للتجارب التي تم فيها استخدام صبغة نيوروتريس باللون الأحمر الفلوريسنت (1:50 NeuroTrace 530/615 ؛ Life Technologies) ، تم تحضين الشرائح لمدة 50 دقيقة في درجة حرارة الغرفة متبوعة بغسلتين في 0.01 بالمائة Triton-X -100 لـ 5 دقائق ثم يغسل مرتين في برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق. تم تغطية الشرائح باستخدام وسط تركيب VectaShield Antifade (مختبرات المتجهات).

تم الحصول على جميع الصور باستخدام برنامج أوليمبوس ماسح ضوئي VS11 0 بهدف أحادي اللون 20 × (فتحة عددية 0.75) باستخدام برنامج ماسح ضوئي VS110. تم تمثيل جميع مجموعات العلاج في كل شريحة وتم التقاط جميع الصور الموجودة على الشريحة في نفس وقت التعرض. تم قياس شدة الوسم المناعي باستخدام ImageJ عن طريق أخذ عينات من الكثافة الضوئية في طبقة خلية CA1 المقيسة إلى الخلفية.

RT-PCR الكمي

تم إجراء RT-PCR الكمي في الوقت الحقيقي للتحقق من تعبير V5 وتنظيم تعبير wildtype Hdac3mRNA بعد ضخ AAV-HDAC3 (Y298H) (التجربة 1) كما هو موضح سابقًا (López et al. ، 2016 ؛ White et al. ، 2016). للتجربة 1 ، تم جمع لكمات 1 مم في DH من 500 شريحة ميكرومتر في منطقة التعبير الفيروسي (أو منطقة مكافئة في الفئران EV) كما أكده التألق المناعي. تم تخزين جميع الأنسجة عند درجة حرارة -80 درجة حتى المعالجة.

تم عزل الحمض النووي الريبي باستخدام RNeasy Minikit (Qiagen) وتم إنشاء cDNA باستخدام مجموعة Transcriptor First Strand cDNA Synthesis (Roche Applied Science). تم استخدام المواد الأولية التالية ، المشتقة من مكتبة Roche Universal ProbeLibrary: Hdac3right primer، 5'- ttcaacgtgggtgatgactg -3 '؛ Hdac3left التمهيدي ، 5'- ttagctgtgttgctccttgc -3 '؛ مسبار ، ctgctccc ؛ Hdac 3- v5right primer، 5'-tggagattctcgagggtaagc -3 '؛ Hdac 3- v5left primer، 5'- atgccacccgtagatctgg -3 '؛ مسبار ، ctctcctc. تم ربط كل مجسات لهذه الجينات المستهدفة بصبغة FAM. تم استخدام Glyceraldehyde -3- نازعة هيدروجين الفوسفات (Gapd) كجين مرجعي لجميع فحوصات RT-qPCR. بالنسبة إلى Gapd ، استخدمنا البادئات التالية: left primer، 5'atggtgaaggtcggtgtga -3 '؛ التمهيدي الصحيح ، 5- aatctccactttgccactgc -3 '؛ مسبار ، tggcggtattgg. تم ربط Gapdprobe بـ LightCycler Yellow 555. تسمح الأصباغ غير المتداخلة والمخمد على الجين المرجعي بتعدد الإرسال في آلات Roche LightCycle 480 II (Roche Applied Sciences). تم تطبيع جميع القيم لمستويات تعبير Gapd. تم إجراء التحليل والإحصاءات باستخدام خوارزميات Roche الخاصة وبرنامج REST 2009 بناءً على طريقة Pfaffl (Pfaffl 2001 ؛ Pfaffl et al. ، 2002).

مهام OLM و ORM

ل OLM والتعرف على الأشياء الجديدةذاكرة(ORM) ، وبيانات التعود (المسافة المقطوعة خلال جلسات التعود الفردية) ، والتدريب ، ومقاطع فيديو الاختبار التي تم جمعها باستخدام أي برنامج لتحليل السلوك المتاهة. تم إجراء التدريب والاختبار لـ OLM و ORM كما هو موضح سابقًا (López et al. ، 2016 ؛ McQuown et al. ، 2011 ؛ Vogel-Ciernia et al. ، 2013 ؛ Vogel-Ciernia and Wood ، 2014). قبل التدريب ، تم التعامل مع الفئران لمدة 1-2 دقيقة لمدة 4 أيام وتم تعويدها على الجهاز التجريبي لمدة 5 دقائق إلى غرفة OLM لمدة 6 أيام متتالية في غياب الأشياء. أثناء تجربة التدريب ، تم وضع الفئران في الجهاز التجريبي بجسمين متطابقين (OLM: أكواب 100 مل ، قطر 2.5 سم ، ارتفاع 4 سم ؛ ORM: علب التوابل وحوامل الشموع الزجاجية) وسُمح لها باستكشاف هذه الأشياء لمدة 3 دقائق ، والتي لا تؤدي إلى المدى القصير أو الطويلذاكرة. لقد أظهرنا سابقًا أن فترة التدريب لمدة 3 دقائق غير كافية لإنشاء اختبار LTM في 24 ساعة (Haettig et al. ، 2011 ، 2013 ؛ López et al. ، 2016 ؛ McQuown et al. ، 2011 ؛ Stefanko et al. ، 2009) . بعد أربع وعشرين ساعة ، تم اختبار احتباس الحيوانات لمدة 5 دقائق. بالنسبة لـ OLM ، تم وضع نسخة واحدة من الكائن المألوف في نفس المكان أثناء تجربة التدريب ، وتم وضع نسخة واحدة من الكائن المألوف في منتصف الصندوق. بالنسبة لـ ORM ، تم وضع نسخة واحدة من الكائن المألوف وكائن جديد في نفس الموقع أثناء تجربة التدريب. تم تسجيل جميع تجارب التدريب والاختبار بالفيديو وسجلها يدويًا من قبل الأفراد المكفوفين عن العلاجات الحيوانية. تم تحليل مقاطع الفيديو من أجل الاستكشاف الكلي للأشياء بالإضافة إلى مؤشر التمييز (DI) [(الوقت المستغرق في استكشاف هدف جديد يقضيه في استكشاف كائن مألوف) / (إجمالي الوقت في استكشاف كلا الجسمين) × 100 بالمائة]. تم استخدام جميع مجموعات ومواقع الكائنات بطريقة متوازنة لتقليل التحيزات المحتملة التي تعزى إلى تفضيل مواقع أو كائنات معينة.

جهاز تفضيل المكان المشروط

تم إجراء تكييف تفضيل المكان كما هو موضح سابقًا في دراساتنا (Malvaez et al. ، 2011 ؛ Rogge et al. ، 2013 ؛ White et al. ، 2016). باختصار ، تم التعامل مع الفئران لمدة دقيقة واحدة كل يوم لمدة 3 أيام قبل بدء التجربة (الأيام 1-3). تم إجراء إجراء CPP لجميع التجارب باستخدام بروتوكول متوازن وغير متحيز. تم تقييم تفضيلات خط الأساس لكل تجربة من خلال وضع الحيوانات في المقصورة المركزية لجهاز تفضيل المكان والسماح بالوصول المجاني إلى جميع المقصورات لمدة 15 دقيقة (الاختبار المسبق ؛ اليوم 4). بدأت مرحلة التدريب بعد يوم واحد من الاختبار التمهيدي. تم إجراء التكييف على مدار الأيام الأربعة اللاحقة مع إغلاق أبواب المقصلة ، وبالتالي حصر الحيوانات في أحد الجزئين الخارجيين لجهاز CPP لمدة 30 دقيقة (الأيام 5-8). تم استخدام تصميم غير متحيز بحيث تم إعطاء نصف الحيوانات الكوكايين قبل وضعها في المقصورة المتقلب والنصف الآخر تلقى الكوكايين قبل وضعه في حجرة بيضاء في يوم التدريب 1 (CS plus). في اليوم التالي ، تم عكس العلاج والمقصورة لكل حيوان (يوم التدريب 2) ، تم حقن الفئران بمحلول ملحي قبل وضعها في المقصورة البديلة (CS−). تم تغيير الحقن لجلسات التكييف اللاحقة. لتجارب الاستحواذ الموضحة في التين. 3-5 ، تلقت الحيوانات ما مجموعه دقيقتين 30- من الاقتران مع الكوكايين في حجرة واحدة ودقيقتين 30- من الاقتران مع محلول ملحي في الأخرى. بعد ثمانية وأربعين ساعة من جلسة التكييف الأخيرة ، تم تقييم التفضيل (15 دقيقة ؛ ما بعد الاختبار 1 ؛ اليوم 10) في جميع الحيوانات كما هو موضح أعلاه في حالة خالية من المخدرات. لتجارب الانقراض الموضحة في التين. 6-7 ، خضعت الحيوانات للتكييف متبوعًا بالاختبار اللاحق 1 48 ساعات بعد آخر جلسة تكييف كما هو موضح أعلاه. بعد أسبوعين من التسريب الفيروسي في DH أو IL ، خضعت الحيوانات لاختبارات تفضيل متكررة خالية من الأدوية يوميًا (15 دقيقة ؛ الاختبارات اللاحقة 2-5 ؛ الأيام 25-28). تم حساب درجة CPP على أنها الوقت (الأوقات) التي تم قضاؤها في مقصورات مقترنة بالكوكايين (CS plus) مطروحًا منها (CS plus). تم تحليل الوقت المستغرق في كل من المقصورات الخارجية الكبيرة بواسطة برنامج آلي من مقاطع فيديو MPEG باستخدام برنامج EthoVision 3.1 (Noldus Technology ؛ انظر Malvaez et al. ، 2011).

تحليل احصائي

تم استخدام Graphpad Prism 7.02 (برنامج GraphPad) لجميع التحليلات الإحصائية.

تم تحليل التعود باستخدام ANOVA ثنائي الاتجاه لمقارنة المسافة الإجمالية المقطوعة عبر جلسات التعود. تم تحليل بيانات التدريب والاختبار باستخدام اختبار الطالب t لمقارنة إما الاستكشاف أو DI بين حيوانات التحكم وحيوانات الاختبار. تم تحليل بيانات الاختبار أيضًا باستخدام اختبار t أحادي الطرف يقارن قيم DI بالصفر لتحديد ما إذا كان قد لوحظ تمييز كبير أم لا. تم تحليل تجارب CPP باستخدام تحليل التباين ثنائي الاتجاه (ANOVAs) متبوعًا باختبارات Bonferroni مع درجات التفضيل (PS) في الاختبارات كمتغيرات داخل الموضوعات والنمط الجماعي / الجيني (ناقل فارغ مقابل Y298H نقطة متحولة ؛ Hdac3 plus / plus مقابل. Hdac3flox / flox). تم استخدام هذا الاختبار الإحصائي لإجراء مقارنات محددة عند ملاحظة تفاعلات مهمة و / أو تأثيرات المجموعة الرئيسية. تم تحليل بيانات الاختبار أيضًا باستخدام اختبار t أحادي الطرف لمقارنة قيم PS بالصفر لتحديد ما إذا كان قد لوحظ تفضيل كبير أم لا. لتجارب الانقراض ، تم إجراء اختبارات الطالب أولاً لتحديد ما إذا كانت الحيوانات قد شكلت تفضيلًا كبيرًا في الاختبار اللاحق 1 قبل التسريب الفيروسي. تم الحصول على قيم RT-qPCR كما هو موضح أعلاه. تم تقييم الاختلافات في قيم RT-qPCR من خلال اختبارات t للطالب. لجميع التحليلات ، كانت قيمة 0. 05 مطلوبة للدلالة.