الجزء 1 يشيناكوسيد يحث الفئران على الشريان الرئوي عن طريق فتح قنوات NO-cGMP-PKG-BKCa وتقليل مستويات Ca2 زائد داخل الخلايا

كيف يحفز اشيناكوسيد الاسترخاء الوريدي؟

Xiang-Yun GAI1، 2، 3، Yu-hai WEI4، Wei ZHANG2، Ta-na WUREN2، Ya-ping WANG2، Zhan-Qiang LI2، Shou LIU2، Lan MA2، Dian-Xiang LU2، Yi ZHOU1، 2، Ri- لي GE1، 2، * 1 قسم الصيدلة ، كلية علوم الحياة والصيدلة الحيوية ، جامعة شنيانغ الصيدلانية ، شنيانغ 110016 ، الصين ؛ 2 مركز أبحاث لطب المرتفعات ، كلية الطب بجامعة تشينغهاي ، شينينغ 810001 ، الصين ؛ 3 كلية الصيدلة ، جامعة تشينغهاي للقوميات ، شينينغ 810007 ، الصين ؛ 4 مكتب تشينغهاي لفحص الدخول والخروج والحجر الصحي ، شينينغ 810001 ، الصين

هدف:يمكن أن يؤدي تضيق الأوعية الرئوية المستمر كما حدث على ارتفاعات عالية إلى ارتفاع ضغط الدم الرئوي (PH). الغرض الرئيسي من هذه الدراسة هو التحقيق في تأثير vasorelaxantإشنكوسايد(ECH) ، جليكوسيد فينيليثانويد من عشب التبت Lagotis brevituba Maxim وCistanche tubulosa، على الشريان الرئوي وآليته المحتملة.

طُرق:تم تعليق الحلقات الشريانية الرئوية التي تم الحصول عليها من ذكور فئران Wistar في غرف أعضاء مملوءة بمحلول Krebs-Henseleit ، وتم قياس التوتر المتساوي القياس باستخدام محول طاقة. تم قياس مستويات Ca2 زائد داخل الخلايا في خلايا العضلات الشريانية الشريانية الرئوية المستزرعة (PASMCs) باستخدام Fluo 4- AM.

نتائج: إيك(30-300 ميكرولتر / لتر) شرايين رئوية مسترخية للجرذان تم التعاقد عليها مسبقًا بواسطة النورادرينالين (NE) بطريقة تعتمد على التركيز ، ويمكن ملاحظة هذا التأثير في كل من البطانة السليمة وحلقات التعرية البطانية ، ولكن مع استجابة قصوى أقل بكثير و a EC50 أعلى في حلقات التعرية البطانية. تم حظر هذا التأثير بشكل كبير بواسطة L-NAME و TEA و BaCl2. ومع ذلك ، لم تمنع IMT و 4- AP و Gliإيك- الاسترخاء الناجم. في ظل ظروف خالية من الكالسيوم زائد خارج الخلية ، تم تقليل الحد الأقصى للانكماش إلى 24.54 بالمائة ± 2.97 بالمائة و 10.60 بالمائة ± 2.07 بالمائة في الحلقات المعالجة بـ 100 و 300 ميكرولتر / لتر من ECH ، على التوالي. في ظل ظروف تدفق الكالسيوم خارج الخلية ، تم تقليل الحد الأقصى للانكماش إلى 112.42 بالمائة ± 7.30 بالمائة و 100.29 بالمائة ± 8.66 بالمائة و 74.74 بالمائة ± 4.95 بالمائة في الحلقات المعالجة بـ 30 و 100 و 300 ميكرولتر / لتر من ECH ، على التوالي. بعد تحميل الخلايا بـ Fluo 4- AM ، كان متوسط ​​شدة التألق أقل في الخلايا المعالجةإيك(100 ميكرولتر / لتر) من مع NE.

استنتاج: إيكيمنع الانكماش الناجم عن NE للشريان الرئوي عند الفئران عن طريق تقليل مستويات الكالسيوم زائد داخل الخلايا ، ويحث على الاسترخاء من خلال مسار NO-cGMP وفتح قنوات K plus (BKCa و KIR).

الكلمات الدالة:عشب التبتإشنكوسايد؛ ارتفاع ضغط الشريان الرئوي؛ ارتفاع عالي؛ توسع الأوعية. رقم؛ BKCa ؛ KIR. حلقة الشريان خلايا العضلات الملساء الشريانية الرئوية.

للمزيد من المعلومات أرجو الأتصال:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola له العديد من التأثيرات ، انقر هنا لمعرفة المزيد

مقدمة

يمكن أن يؤدي تضيق الأوعية الرئوية المستمر كما يحدث على ارتفاعات عالية إلى ارتفاع ضغط الدم الرئوي (PH) والتضخم الإنسي [1] ، والتي تم تحديدها على أنها السبب الرئيسي لتضخم البطين الأيمن وفشل القلب [2]. الأفراد الذين يعيشون على ارتفاعات عالية ، إما بشكل مؤقت أو دائم ، قد يعانون من ارتفاع ضغط الدم الرئوي الخفيف إلى المعتدل ، وقد يعاني الأشخاص الذين لديهم قابلية أكبر للإصابة بنقص الأكسجة تضيق الأوعية الرئوية بشكل مبالغ فيه ، مما يؤدي إلى العديد من الأمراض المرتفعة التي ترتبط بمراضة ووفيات كبيرة ، مثل الوذمة الرئوية وأمراض القلب في المرتفعات [3].إشيناكوسايد(ECH) (الشكل 1) هو أجليكوسيد الفينيثانويدتوجد في مجموعة متنوعة من الأعشاب الصينية مثل عشب التبت Lagotis brevituba Maxim وCistanche tubulosa[4 ، 5]. Lagos brevituba Maxim هو نوع من Lagotis spp ينتمي إلى Scrophulariaceae وينمو على نطاق واسع على ارتفاع يزيد عن 3000 متر في هضبة تشينغهاي - التبت.إيكله العديد من الخصائص الدوائية المرغوبة ، مثل مضادات الأكسدة ، المضادة للالتهابات ، حماية الأعصاب ، حماية الكبد ، وخصائص أكسيد النيتريك (NO) الراديكالية الكاسحة [6]. يمكن أن يؤدي أيضًا إلى الاسترخاء المعتمد على البطانة في حلقات الأبهر الصدري للجرذان وعلاج أمراض القلب والأوعية الدموية [7]. ومع ذلك ، على حد علمنا ، لم تكن هناك دراسة تبحث في آثاره على توتر الأوعية الدموية في الشرايين الرئوية. أهداف هذه الدراسة هي كما يلي: (1) لاستكشاف ما إذا كانت ECH تحفز توسع الأوعية في المختبر في الشرايين الرئوية للفئران التي تم التعاقد عليها مسبقًا مع النورادرينالين (NE) ، وما إذا كان هذا التأثير ، إن وجد ، يعتمد على البطانة أو يعمل مباشرة على العضلات الملساء الوعائية ؛ (2) للتحقيق في تأثير ECH على تدفق الكالسيوم خارج الخلية وإطلاق الكالسيوم داخل الخلايا في خلايا العضلات الشريانية الرئوية الملساء (PASMCs) ؛ و (3) لتحديد المسارات الممكنة وقنوات K plus المشاركة في الاسترخاء الناجم عن ECH.

المواد والأساليب

الكواشف

تم توفير ECH من قبل الدكتور Peng-fei TU من جامعة بكين (بكين ، الصين) ، بدرجة نقاء تزيد عن 98 بالمائة وفقًا لما تحدده الكروماتوجرافيا السائلة عالية الأداء. تم شراء ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) من شركة Solar Science & Technology Co، Ltd (بكين ، الصين) ؛ NE ، أستيل كولين (ACh ، أكبر من أو يساوي 99 بالمائة) ، إندوميثاسين (IMT) ، Nω -Nitro-L- أرجينين ميثيل إستر هيدروكلوريد (L-NAME) ، كلوريد رباعي إيثيل الأمونيوم (TEA) ، كلوريد الباريوم (BaCl2) ، {{ 9}} aminopyridine ({{1 {21}}} AP) ، و glibenclamide (Gli) من شركة Sigma Chemical Co (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية) ؛ وسط النسر المعدل من Dulbecco (DMEM) ، ومصل الأبقار الجنيني (FBS) ، والتريبسين من Gibco BRL Co ، Ltd (Gaithersburg ، MD ، الولايات المتحدة الأمريكية) ؛ الفأر المضاد للفأر الأولي للعضلات الملساء (-SMA) والأجسام المضادة الثانوية المضادة للفأر من Boshide Biotech Co ، Ltd (ووهان ، الصين) ؛ مؤشرات فلو الكالسيوم (Fluo 4- AM) من Invitrogen Corp (كارلسباد ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) ؛ وجميع الأملاح غير العضوية من شركة Beijing Chemical Reagent Co، Ltd (بكين ، الصين). تم إذابة IMT في DMSO وتم إذابة 5 بالمائة NaH2PO4 و Gli و Fluo 4- AM و ECH في DMSO ، وتم إذابة جميع الكواشف الأخرى في Krebs-Henseleit (KH) أو محلول PBS. أظهرت التجارب الأولية أن DMSO عند أقل من 0.1 بالمائة (حجم / حجم) لم يكن له أي تأثير على تطور التوتر للحلقات الشريانية الرئوية المعزولة.

حيوانات تجريبية

تمت الموافقة على جميع الإجراءات والبروتوكولات من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان بكلية الطب بجامعة تشينغهاي. تم شراء ذكور فئران ويستار ، التي يتراوح عمرها بين 6 و 8 أسابيع ، ووزنها 250-300 جرام ، من مركز الحيوان بجامعة لانتشو (لانتشو ، الصين) وتم الحفاظ عليها على نظام غذائي معمل قياسي وماء الصنبور بالشهرة عند درجة حرارة محيطة تبلغ 22 ± 2 درجة ورطوبة نسبية 45 في المئة - 55 في المئة خلال التجارب.

نضح الشريان الرئوي في المختبر

إعداد حلقات الشرايين الرئوية الفئران

تم تخدير الفئران التي يبلغ وزنها 25 0 - 300 جرام عن طريق الحقن داخل الصفاق من بنتوباربيتال الصوديوم (40 مجم / كجم) ، ثم تمت إزالة قلوبهم ورئتيهم وغمرهم على الفور في محلول KH المثلج الذي يحتوي على (مليمول / لتر) : 118 NaCl ، 4.7 KCl ، 2.5 CaCl2 ، 1.2 MgSO4 · 7H2O ، 1.2 KH2PO4 ، 25 NaHCO3 ، و 11.1 جلوكوز (pH 7.4). تم تشريح الشرايين الرئوية (قطرها 0.7-1.5 مم) خالية من النسيج الضام المحيط والمظانية ثم تم تقطيعها إلى حلقات يبلغ طولها حوالي 2-3 مم. تم تعليق الحلقات في غرف أعضاء مملوءة بـ 10 مل من محلول KH عند 37 درجة وتم تسخينها بالغاز بنسبة 95 بالمائة من O2-5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون [8] ، وتم قياس التوتر المتساوي القياس باستخدام محول طاقة (JH -2 ، Space Medico - المعهد الهندسي ، بكين ، الصين)

تقييم نشاط حلقة السفينة وتقييم وظيفة البطانة

تم السماح بحلقات السفينة لتتوازن لمدة ساعتين تحت شد أساسي قدره 400 مجم ، وخلال هذه الفترة تم تغيير محلول KH كل 15 دقيقة ؛ ثم تمت إضافة 1 ميكرولتر / لتر من NE إلى الغرفة لتقييم نشاط كل حلقة عن طريق الكشف عن نسبة الانكماش. قبل وبعد البروتوكول التجريبي ، تم قياس نسبة الانكماش (الشكل 2 أ و 2 ب). تمت إزالة البطانة في بعض الحلقات عن طريق فرك السطح الداخلي بسلك فولاذي ناعم ، وتم تقييم السلامة نوعياً بواسطة درجة الاسترخاء التي تسببها ACh (10 ميكرولتر / لتر) في النسبة المئوية لهجة الانقباض التي يسببها NE (1 ميكرولتر / لتر). إذا كان الاسترخاء مع ACh أكبر من 80 في المائة ، فإن البطانة تظل في حالة جيدة ؛ إذا كان الاسترخاء أقل من 30 في المائة ، فإن البطانة تحطمت (الشكل 2 أ و 2 ب) [9].

العزلة وثقافة الفئران PASMCs

تم عزل الشرايين الرئوية البعيدة من الفصوص الرئوية للجرذان ، وتمت إزالة البطانة والبرانية بعناية. بعد أن تم تقطيع الأنسجة إلى قطع {0} مم ، تمت إضافتها إلى القوارير على الفور ، والحفاظ عليها عند 37 درجة و 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون في حاضنة مرطبة لمدة أربع ساعات تقريبًا ، ثم تمت زراعتها باستخدام DMEM عالي الجلوكوز مكمل بـ 20 بالمائة FBS ، 100 وحدة / مل من البنسلين ، و 100 وحدة / مل من الستربتومايسين لمدة خمسة أيام تقريبًا. تم استبدال نصف وسائط الثقافة بوسائط جديدة عندما ظهرت الخلايا. عندما وصلت الخلايا إلى 80 في المائة من التقاء ، تم حصادها مع 0.125 في المائة من التربسين وزرعها في القوارير (نسبة 1: 2) التي تحتوي على نسبة عالية من الجلوكوز DMEM مع 10 بالمائة FBS ، و 100 وحدة / مل من البنسلين ، و 100 وحدة / مل من الستربتومايسين . تم استخدام الخلايا المكونة من ثلاثة إلى ثمانية مقاطع لجميع التجارب.

تحديد PASMCs عن طريق الكيمياء المناعية

كانت PASMCs إيجابية للتلطيخ الكيميائي المناعي عندما لوحظت سمات "التل والوادي" النموذجية. تم زرع الخلايا في 6- ألواح بئر ذات أغطية زجاجية. عندما وصلت الخلايا إلى 80 في المائة من التقاء ، تم تثبيتها في بارافورمالدهيد بنسبة 4 في المائة ، وتم حظرها بنسبة 3 في المائة من بيروكسيد الهيدروجين لمدة 15 دقيقة ، ثم تم تحضينها باستخدام الجسم المضاد الأولي للفأر المضاد للفئران -SMA طوال الليل عند 4 درجات. بعد غسلها ثلاث مرات في برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقائق ، تم تحضين الخلايا بجسم مضاد ثانوي مضاد للفأر الماعز في درجة حرارة الغرفة لمدة 45 دقيقة ، وغسلها مرة أخرى ثلاث مرات في برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقائق ، وتم تصورها باستخدام ديامينوبنزيدين.

الكشف عن تركيز الكالسيوم داخل الخلايا في الفئران PASMCs

تم زرع بذور PASMCs في {0} أطباق جيدة مع أغطية زجاجية. عندما وصلت الخلايا إلى 8 0 في المائة من التقاء ، تم استبدال وسائط الثقافة بـ DMEM الخالي من المصل. بعد أربع وعشرين ساعة ، تم تحميل الخلايا بـ 7 ميكرو مول / لتر فلو 4- صباحًا عند 37 درجة لمدة 3 0 دقيقة في جو رطب بنسبة 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون. تم غسل الصبغة المتبقية بمحلول ملح متوازن من هانكس (HBSS) يحتوي على التالي (مليمول / لتر): 1.26 CaCl2 ، 0 .49 MgCl2 · 6H2O ، 0 .41 MgSO4 · 7H2O ، 5.33 KCl ، 0.44 KH2PO4 ، 4.17 NaHCO3 ، 137.93 NaCl ، 0.34 Na2HPO4 ، و 5.56 D-Glucose ، بدون الفينول الأحمر. تعرضت الخلايا المحملة بـ Fluo 4- AM لواحد من ثلاثة شروط علاجية: (1) المجموعة الضابطة (مجموعة con) ، حيث تم تحضين الخلايا باستخدام DMEM الخالي من المصل ؛ (2) مجموعة NE ، حيث تم تحضين الخلايا باستخدام DMEM الخالي من المصل مع 1 ميكرولتر / لتر من NE لمدة 10 دقائق ؛ و (3) مجموعة NE plus ECH (100 ميكرو مول / لتر) (مجموعة NE بالإضافة إلى ECH100) ، حيث تم تحضين الخلايا باستخدام DMEM الخالي من المصل مع 1 ميكرولتر / لتر من NE لمدة 10 دقائق و 100 ميكرو مول / لتر من ECH لمدة 20 دقيقة. تمت ملاحظة كثافة الإسفار وتصويرها بواسطة المجهر الفلوري (IX71 ، أوليمبوس ، طوكيو ، اليابان) [11]. تم جمع ستة مجالات للرؤية (200 ×) لكل عينة. تم قياس تركيز الكالسيوم داخل الخلايا عن طريق قياس متوسط ​​شدة التألق باستخدام برنامج Image Pro-Plus 6.0.

تحليل احصائي

تم التعبير عن البيانات على أنها المتوسط ​​± SD. عندما تم تقييم فرق مناسب وكبير من خلال اختبار Dunnett أو اختبار Student-Newman-Keuls لإجراء مقارنات متعددة بعد تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA). مستوى احتمالية P<0.05 was="" considered="">

النتائج: تأثيرات ECH على الشريان الرئوي المعزول

في بداية التجربة ، لم يكن للإضافة التراكمية لـ ECH من 30 إلى 300 ميكرولتر / لتر أي تأثير معنوي على التوتر الأساسي للشريان الرئوي. بعد وصول تضيق الأوعية الناجم عن NE إلى هضبة ، تمت إضافة ECH بشكل تراكمي (30-300 ميكرولتر / لتر) إلى البطانة السليمة (E plus ، الشكل 2C) أو حلقات التعرية البطانية (E- ، الشكل 2C). في حلقات البطانة السليمة ، أدت الإضافة التراكمية لـ ECH إلى توسيع الأوعية بطريقة تعتمد على التركيز ، مع حد أقصى

نسبة استرخاء أمي تبلغ 89.22 بالمائة ± 0. 32 بالمائة عند 3 0 0 ميكرو مول / لتر و EC50 51.60 ± 0.57 ميكرو مول / لتر (الشكل 2 أ و 2 ج). وبالمثل ، في حلقات التعرية البطانية ، قامت ECH أيضًا بتوسيع الأوعية بطريقة تعتمد على التركيز ، ولكن مع استجابة قصوى أقل بكثير تبلغ 67.72٪ ± 1.69٪ (P<0.01 vs="" intact="" endothelium="" rings)="" and="" a="" higher="" ec50="" of="" 108.51±2.8="" μmol/l=""><0.01 vs="" intact="" endothelium="" rings,="" figure="" 2b="" and="" 2c).="" the="" sustained="" plateau="" of="" the="" high-contraction="" percentage="" induced="" by="" ne="" (1="" μmol/l)="" after="" the="" experimental="" protocol="" indicated="" that="" the="" rings="" pretreated="" with="" ech="" (30–300="" μmol/l)="" had="" good="" activity="" (figure="" 2a="" and="">

آثار ECH على إطلاق الكالسيوم داخل الخلايا وتدفق الكالسيوم خارج الخلية

تم تعريض الحلقات المغطاة بالبطانة إلى 1 ميكرولتر / لتر من NE حتى تم الوصول إلى الحد الأقصى من الانكماش. في ظل ظروف خالية من Ca2 plus خارج الخلية ، تمت موازنة الحلقات في محلول Ca2 plus-free KH الذي يحتوي على 0. 2 مليمول / لتر من EGTA قبل بدء التجارب. بعد ثلاث عمليات غسل باستخدام Ca2 plus - ومحلول KH الخالي من EGTA ، تم تحضين الحلقات مسبقًا بـ ECH (30 و 100 و 300 ميكرولتر / لتر) لمدة 20 دقيقة ثم إعادة تعريضها لـ 1 ميكرو مول / لتر من NE. أنتجت الحلقات

الانقباضات غير المستديمة التي عادت بسرعة إلى خط الأساس ، مقارنة بالتقلصات الأولية التي يسببها NE ، والتي كانت بمثابة مرجع. كان الحد الأقصى لتقلص عنصر التحكم 33.27 بالمائة ± 2.94 بالمائة (الشكل 3 أ و 3 هـ) ولكن تم تقليله بشكل كبير إلى 24.54 بالمائة ± 2.97 بالمائة و 10.60 بالمائة ± 2.07 بالمائة في الحلقات المعالجة بـ 100 و 300 ميكرو مول / لتر من ECH ، على التوالي (P<0.01 vs="" control="" group;="" figure="" 3c–3e).="" under="" extracellular="" calcium="" influx="" conditions,="" 2.5="" mmol/l="" cacl2="" was="" added="" to="" the="" chamber="" when="" the="" curve="" reached="" a="" plateau.="" the="" control="" group="" produced="" sustained="" contractions,="" with="" a="" maximum="" contraction="" of="" 139.89%±7.38%="" (figure="" 3a="" and="" 3e);="" but="" the="" maximum="" contraction="" was="" significantly="" reduced="" to="" 112.42%±7.30%,="" 100.29%±8.66%,="" and="" 74.74%±4.95%="" in="" rings="" pretreated="" with="" 30,="" 100,="" and="" 300="" μmol/l="" of="" ech,="" respectively=""><0.01 vs="" control="" group;="" figure="" 3b–3e).="" under="" these="" conditions,="" the="" maximal="" effect="" caused="" by="" ech="" was="" more="" pronounced="" with="" 300="" μmol/l="" than="" with="" 100="" or="" 30="" μmol/l=""><0.01 vs="" 30="" or="" 100="" μmol/l="" ech="" group).="" different="" concentrations="" of="" ech="" all="" shortened="" the="" platform="" of="" sustained="" contraction,="" which="" was="" induced="" by="" extracellular="" calcium="" influx="" at="" different="" levels="" (figure="">

أدوار مثبطات مختلفة في توسع الأوعية الشريان الرئوي الناجم عن ECH

تم التحقيق في إرخاء الأوعية الدموية للشريان الرئوي الناجم عن ECH في وجود أو عدم وجود المثبطات التالية: L-NAME (مثبط eNOS) ، IMT (مثبط انزيمات الأكسدة الحلقية) ، TEA (مثبط قناة K plus المنشط ذو التوصيل الكبير Ca2 بالإضافة إلى K plus المنشط) ، BaCl2 ( مقوم داخلي K بالإضافة إلى مثبط القناة) ، 4- AP (مثبط قناة K زائد المعتمد على الجهد) ، و Gli (مثبط قناة K بالإضافة إلى ATP). تم التعاقد على الحلقات إلى أقصى حد باستخدام 1 ميكرولتر / لتر من NE ، ثم L-NAME (1 0 0 ميكرو مول / لتر) ، IMT (10 ميكرولتر / لتر) ، TEA (1 ملي مول / لتر) تمت إضافة BaCl2 (1 مليمول / لتر) أو 4- AP (1 مليمول / لتر) أو Gli (10 ميكرو مول / لتر) على التوالي. بمجرد الوصول إلى هضبة جديدة ، تمت إضافة ECH بطريقة تراكمية من 30 إلى 300 ميكرولتر / لتر. يوضح الشكل 4. منحنيات التركيز والاستجابة في وجود مثبطات مختلفة. تم حظر تأثير ECH على الحلقات الشريانية الرئوية المتعاقد مع 1 ميكرو مول / لتر من NE بشكل كبير بواسطة L-NAME (100 ميكرو مول / لتر) ، TEA ( 1 مليمول / لتر) و BaCl2 (1 مليمول / لتر) ، بأقصى درجات ارتخاء 64.41 بالمائة ± 3.20 بالمائة و 84.38 بالمائة ± 0.70 بالمائة و 75.27 بالمائة ± 0.93 بالمائة على التوالي (P<0.01 vs="" the="" control="" group="" of="" 89.22%±0.32%),="" and="" the="" values="" of="" ec50="" were="" increased="" to="" 197.32±2.75="" μmol/l,="" 91.42±2.11="" μmol/l,="" and="" 115.49±1.75="" μmol/l,="" respectively=""><0.01 vs="" the="" control="" group="" of="" 51.60±0.57="" μmol/l)="" (table="" 1).="" however,="" imt="" (10="" μmol/l),="" 4-ap="" (1="" mmol/l),="" and="" gli="" (10="" μmol/l)="" did="" not="" inhibit="" the="" ech-induced="" relaxation="" (figure="" 4="" and="" table="" 1).="" to="" validate="" the="" effects="" of="" these="" inhibitors="" on="" ech-induced="" relaxation,="" the="" rings="" precontracted="" with="" 1="" μmol/l="" of="" ne="" were="" treated="" with="" l-name="" (100="" μmol/l),="" imt="" (10="" μmol/l),="" tea="" (1="" mmol/l),="" bacl2="" (1="" mmol/l),="" 4-ap="" (1="" mmol/l),="" and="" gli="" (10="" μmol/l).="" after="" a="" new="" plateau="" was="" reached,="" ech="" was="" added="" to="" the="" chamber="" at="" a="" single="" concentration="" of="" 300="" μmol/l="" rather="" than="" in="" a="" cumulative="" manner.="" the="" maximum="" relaxation="" was="" reduced="" to="" 56.33%±0.90%,="" 82.21%±0.92%,="" and="" 72.16%±0.76%="" following="" the="" addition="" of="" l-name,="" tea,="" and="" bacl2,="">

تحديد الفئران PASMCs

At low magnification, spindle cells were densely packed, and almost all the cells were stained positively for PASMCs (the PASMC purity was >95 في المائة) (الشكل 6 أ). لوحظت الخيوط العضلية الملطخة باللون البني بوضوح في السيتوبلازم بتكبير عالٍ (الشكل 6 ب).

سيستانشإشنكوسايديمكن أن تقاومموت الخلايا المبرمج

تأثير ECH على تركيز الكالسيوم داخل الخلايا في الفئران PASMCs

أدى NE (1 ميكرول / لتر) إلى زيادة تركيز الكالسيوم داخل الخلايا بشكل ملحوظ (ن =6 ، ف<0.01 vs="" the="" control="" group)="" in="" rat="" pasmcs,="" and="" ech="" could="" decrease="" the="" mean="" fluorescence="" intensity="" (n="6,"><0.01 vs="" the="" ne="" group)="" (figure="">