الجزء 1: يمنع إشنكوسايد إطلاق الغلوتامات عن طريق قمع Ca2 المعتمد على الجهد بالإضافة إلى دخول وبروتين كيناز سي في محطات العصب القشري المخي للجرذان

جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com

تشنغ وي لو 1 ، 2 ، تزو يو لين 1 ، 2 ، شو كوي هوانغ 1 وسو جين وانغ 3 ، *

الملخص:

قد يشارك نظام الجلوتامات في تأثيرات العلاجات الوقائية العصبية.إشيناكوسايد، جليكوسيد فينيلثانويد مستخرج من عشب صيني طبيهيربا سيستانش، له تأثيرات اعصاب. حققت هذه الدراسة في آثارإشنكوسايدعلى 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين في النهايات العصبية القشرية المخية للجرذان (المشابك). يثبط Echinacoside Ca2 plus - المعتمد ، ولكن ليس Ca2 plus - المستقل ، 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين بطريقة تعتمد على التركيز. قلل Echinacoside أيضًا 4- الزيادة التي يسببها أمينوبيريدين في تركيز Ca2 زائد السيتوبلازم الخالي من السيتوبلازم ولكنه لم يغير إمكانات الغشاء المشبكي. تم منع التأثير المثبط لإشنكوسايد على 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين بواسطة o-conotoxin MVIIC ، وهو مانع واسع الطيف لقنوات Cav2.2 (نوع N) و Cav2.1 (نوع P / Q) ، ولكنها كانت غير حساسة لمادة Ca2 بالإضافة إلى مثبطات الإطلاق داخل الخلايا dantrolene و 7- كلورو -5- (2- كلوروفينيل) -1 ، 5- ثنائي هيدرو -4 ، 1- benzodiazepine -2 (3H) -one (CGP37157). علاوة على ذلك ، قلل إشيناكوسيد 4- الفسفرة التي يسببها أمينوبيريدين لبروتين كيناز سي ، وألغت مثبطات بروتين كيناز سي تأثير إشيناكوسيد على إفراز الغلوتامات. وفقًا لهذه النتائج ، نقترح أن التأثير المثبط لإشنكوسايد على إطلاق الغلوتامات المستحث يرتبط بانخفاض Ca2 بالإضافة إلى الدخول المعتمد على الجهد والقمع اللاحق لنشاط بروتين كيناز سي.

الكلمات الدالة:إشنكوسايد. إطلاق الغلوتامات محطات العصب القشري المخي. قنوات Ca2 plus المعتمدة على الجهد ؛ بروتين كيناز سي

1 المقدمة

إشيناكوسايدهو جليكوسيد فينيليثانويد رئيسي موجود فيهيرباسيستانشوهو دواء صيني تقليدي معروف يستخدم لعلاج النسيان والعجز الجنسي والإمساك المزمن [1].إشيناكوسايديمتلك العديد من الأنشطة الحيوية مثل مضادات الأكسدة ، ومضادات الانتفاخ ، ومضادات السرطان ، وحماية الكبد ، والتعديل المناعي [2-4]. والجدير بالذكر أن إشنكوسايد له تأثيرات اعصاب. على سبيل المثال ، يمكن أن يحمي من الإجهاد التأكسدي أو السمية العصبية التي يسببها السم العصبي في الخلايا العصبية القشرية الأولية للجرذان ، وخلايا الورم الأرومي العصبي SH-SY5Y ، وخلايا ورم القواتم (PC12) [5-8]. علاوة على ذلك ، يخفف إكينكوسايد تلف الدماغ ويحسن الوظيفة الإدراكية في النماذج الحيوانية لمرض باركنسون ومرض الزهايمر وانسداد الشريان الدماغي الأوسط [9-12]. ومع ذلك ، فإن الآلية التي من خلالهاإشنكوسايديحث على حماية الأعصاب ليست مفهومة بالكامل.

الحماية العصبية هي عملية معقدة للحفاظ على بنية الخلايا العصبية ووظيفتها عند التعرض للإهانات السامة. يعتبر الحد من سمية الجلوتامات آلية محتملة تشارك في الحماية العصبية للدماغ. الغلوتامات ، وهو ناقل عصبي مثير للأحماض الأمينية ، له دور حاسم في العديد من وظائف الدماغ [13]. ومع ذلك ، فإن فرط نشاط مستقبلات الغلوتامات تحت تركيزات عالية من الغلوتامات يسبب Ca2 بالإضافة إلى الحمل الزائد داخل الخلايا ، وخلل في الميتوكوندريا ، وإنتاج الجذور الحرة ، وموت الخلايا العصبية [14 ، 15]. تتورط هذه العملية المرضية في العديد من اضطرابات الدماغ بما في ذلك نقص التروية الدماغية وإصابات الدماغ الرضحية والصرع وأمراض التنكس العصبي [16 ، 17]. ومن ثم ، فإن المثبطات التي تمنع انتقال الغلوتامات فيزيولوجية مرضية تعتبر من الأدوية الوقائية العصبية المحتملة. ومن الأمثلة البارزة على ذلك مضادات مستقبلات الغلوتامات [18 ، 19]. ومع ذلك ، فشلت التجارب السريرية لهذه الأدوية بسبب قلة الفعالية والآثار الجانبية غير المرغوب فيها أو حتى السامة للخلايا [20 ، 21]. بالإضافة إلى الحصار المباشر لمستقبلات الجلوتامات ، قد يكون تثبيط إطلاق الغلوتامات استراتيجية فعالة لحماية الأعصاب. يمكن للعديد من المواد الواقية للأعصاب (مثل ميمانتين وريلوزول) أن تقلل من إفراز الغلوتامات في أنسجة دماغ الفئران [22-24].

بالنظر إلى دور الغلوتامات في السمية الإثارة والتطبيق الوقائي العصبي لإشنكوسايد ، استخدمت الدراسة الحالية أطرافًا عصبية معزولة (متشابكة) تم تنقيتها من قشرة دماغ الفئران للتحقيق في تأثير إشيناكوسيد على إطلاق الغلوتامات واستكشاف المزيد من الآليات المحتملة. يعد تحضير طرف العصب المعزول نموذجًا راسخًا لدراسة التنظيم قبل المشبكي لإطلاق الناقل العصبي بواسطة الأدوية في غياب أي تأثيرات ما بعد المشبكي [25]. باستخدام هذا النموذج ، قمنا بتقييم تأثير إشنكوسايد على إطلاق الغلوتامات ، وإمكانات الغشاء ، ونشاط قبل المشبك Ca2 زائد في ux ، ونشاط بروتين كيناز سي. وفقًا لمراجعتنا للأدبيات ، هذا هو التقرير الأول الذي يوثق الآلية التي من خلالها يمنع إكينكوسايد إطلاق الغلوتامات الذاتية على مستوى ما قبل المشبكي.

2. النتائج

2.1. إشيناكوسايديمنع 4- إطلاق الغلوتامات المستحث بأمينوبيريدين من محطات العصب القشري المخي للجرذان عن طريق تقليل خروج الخلايا الحويصلية

يوضح الشكل 1 التأثير المعتمد على التركيز لإشنكوسايد على 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين من متشابك القشرة المخية للجرذان المنقى. في السينابتوسومات المحتضنة بـ 1 ملي مولار من CaCl2 ، أثار 1 ملي مولار 4- أمينوبيريدين إطلاق غلوتامات بمقدار 7.4 ± {{1 {2 0}}}. 1 نانومول / ملغ / 5 دقائق ، والذي تم تقليله بنسبة 1 و 5 و 1 0 و 30 و 50 ميكرون إشنكوسايد إلى 6.5 ± 0.2 و 5.8 ± 0.3 و 4.8 ± 0.2 ،

4.1 ± 0. 1 ، أو 2.3 ± 0. 4 نانومول / ملغم / 5 دقائق ، على التوالي (فهرنهايت (5،24)=67. 1 ، ص=0. 000). كانت قيمة IC50 للتثبيط بوساطة إشيناكوسيد لإفراز الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين 4- ، المشتق من منحنى الاستجابة للجرعة ، 24 ميكرومتر. علاوة على ذلك ، أثار إطلاق الغلوتامات بمقدار 1 ملي مولار 4- أمينوبيريدين في محلول خالٍ من Ca2 plus يحتوي على 300 ميكرومتر إيثيلين جلايكول ثنائي (-إيثر أمينو إيثيل) -N ، N ، N / ، N / -tetraacetic acid (EGTA) كان 2. 1 0. 2 نانومول / ملغ / 5 دقائق (فهرنهايت (2،12)=310. 65 ، صفحة=0. 000) ،

وهذا المكون المستقل Ca2 بالإضافة إلى 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين لم يتأثر بـ 2 0 uM echinacoside (1.8 ± 0. 2 nmol / mg / 5 min؛ p {{1) 0}}. 58 ؛ الشكل 1). في synaptosomes التي عولجت بـ 0. 5 دقائق ؛ فهرنهايت (2،12)=249. 518 ، ص=0. 000). في وجود Ba -lomycin A1 ، فشل 2 0 um echinacoside في منع إطلاق الغلوتامات (2.1 ± 0.2 nmol/mg/5 min ؛ p=0. 94 ؛ الشكل 1). على النقيض من ذلك ، زاد 10 ميكرومتر من DL-threo-beta-benzyl-oxyaspartate (DL-TBOA ، مثبط امتصاص الغلوتامات) [27] ، 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين إلى 11.8 ± 0.4 نانومول / ملغ / 5 دقائق ( ر (8)=-11. 31 ، ص=0. 000). حتى في وجود DL-TBOA ، فإن 20 uM echinacoside يثبط 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين بشكل ملحوظ (7.7 ± 0.2 نانومول / ملغ / 5 دقائق ؛ F (2،12)=87. 23، p=0. 000 ؛ الشكل 1).

2.2 يشيناكوسيد يقلل من تركيز Ca2 الخلوي بالإضافة إلى أنه لا يغير إمكانات الغشاء المشبكي

إزالة الاستقطاب Synaptosome الناجم عن 1 ملي مولار 4- أمينوبيريدين أدى إلى زيادة تركيز Ca2 بالإضافة إلى تركيز (ع=0. 000 ؛ الجدول 1). لم يؤثر استخدام 20 ميكرون إشنكوسايد بشكل كبير على تركيز الكالسيوم القاعدي زائد (t (8)=0. 06، p=0. 95) ولكنه قلل بشكل ملحوظ 4- الزيادة التي يسببها أمينوبيريدين في Ca2 بالإضافة إلى التركيز (t (10)=6. 16، p=0. 000). بالإضافة إلى ذلك ، زادت 1 مم 4- aminopyridine في 3 '، 3' ، 3'-dipropylthiadicarbocyanine يوديد [disc3 (5)] uorescence (p=0. 000). لم تغير إضافة 20 ميكرون إشنكوسايد إمكانات غشاء الراحة (t (8)=0. 976، p=0. 36) أو تغير بشكل ملحوظ 4- زيادة الأمينوبيريدين بوساطة في DiSC3 (5) uorescence (t (8)=-0. 014 ، p=0. 99 ؛ الجدول 1).

2.3 يمكن أن ترتبط قنوات Ca2 Plus المخفضة من خلال قنوات Cav2.2 (N-type) و Cav2.1 (p/q-type) مع تثبيط 4-

يوضح الشكل 2 أن 2 uM o-conotoxin MVIIC ، وهو مانع للقنوات من النوع N- و P / Q- بالإضافة إلى Ca2 بالإضافة إلى 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين من 7.4 ± 2}}. 2 إلى 2. 0 ± 0. 1 نانومول / مجم / 5 دقائق (طن (9)=25. 35 ، ص=0. 000). في وجود O-conotoxin MVIIC ، كان تأثير 20 ميكرون إشنكوسايد على 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين غير مناسب (1. 8 2 ± زائد 0.2 نانومول / مجم / 5 دقائق ؛ تي (8)=1. 06 ، ص=0 32). دانترولين (10 ميكرومتر) ، وهو مثبط لإطلاق الكالسيوم داخل الخلايا من الإندوبلازم

شبكية [28] ، انخفاض 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين (5.6 ± 0. 3 نانومول / ملغ / 5 دقائق ؛ فهرنهايت (2،14) {{1 0}}. 95 ، ص=0. 000). ومع ذلك ، في ظل وجود دانترولين ، لا يزال بإمكان 20 ميكرومتر إشنكوسايد تثبيط إطلاق الغلوتامات بشكل ملحوظ (3.3 ± 0.2 نانومول / ملغ / 5 دقائق ؛ ص=0. 000). وقد لوحظت نتائج مماثلة باستخدام 100 أم 7- كلورو -5- (2- كلوروفيني) -1 ، 5- ثنائي هيدرو -4 ، 1- بنزوثيازيبين -2 (3H) -one (CGP37157) ، مانع نفاذ الغشاء لمبادلة Na plus / Ca2 plus للميتوكوندريا. في أكثر من الاستعدادات المشبكية التي تم فحصها ، 20 ميكرون إشنكوسايد مع 100 ميكرومتر CGP37157 قلل 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين بنسبة 48.3 بالمائة ± 5.2 بالمائة (F (2،13)=136. 79، p {{ 49}}. 000) ، على غرار التثبيط بواسطة إكينكوسايد وحده (46.2 بالمائة ± 2.3 بالمائة ؛ ص=0. 89 ؛ الشكل 2).

2.4 إشيناكوسايديمنع 4- إفراز الغلوتامات المستحث بأمينوبيريدين عن طريق الإشارة من خلال بروتين كيناز سي

كما هو موضح في الشكل 3 ، 10 أم 2- [1- (3- ثنائي ميثيل أمينوبروبيل) إندول -3- يل] -3- (إندول -3- يل) مالييميد (GF109203X) ، وهو مثبط عام لبروتين كيناز سي [29] ، يقلل 4- إطلاق الغلوتامات المستحث بأمينوبيريدين (F (2،13)=19. 46 ، ص=0. {{17) }}). في السينابتوسومات المعالجة بـ GF109203X ، قلل 20 ميكرومتر إشنكوسايد 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين بنسبة 5.5 بالمائة ± 1.8 بالمائة فقط (ص=0 89) ، أقل من ذلك بواسطة إشيناكوسيد وحده (42.4 بالمائة ± 2.3 في المئة ؛ ع=0. 000). تم الحصول على نتائج مماثلة باستخدام 5،6،7 ، 13- tetrahydro -13- methyl -5- oxo -12 H-indolo [2، 3- a] pyrrolo [3 ، 4- ج] كاربازول -12- بروبانينتريل (Go6976) ، انتقائي للأشكال الإسوية Ca2 بالإضافة إلى بروتين كيناز سي (، الأول ، الثاني ، ص) [29]. في وجود 3 ميكرومتر Go6976 ، قلل 20 ميكرومتر من إشنكوسايد إطلاق الغلوتامات بنسبة 11.9 بالمائة ± 2.9 بالمائة (ص=0. 59) ، مما يدل على انخفاض كبير مقارنة بذلك بواسطة إشيناكوسيد وحده (42.4 بالمائة 2.3 بالمائة ؛ ص {{ 65}}. 000 ؛ الشكل 3). على النقيض من ذلك ، فإن 3 uM rottlerin ، وهو مثبط Ca2 زائد بروتين كيناز C6 المستقل [30] ، لم يغير بشكل مؤثر 4- aminopyridine (1 مم) - إطلاق الغلوتامات المحرض (ص=0. 45). ومع ذلك ، في وجود rottlerin ، تسبب 20 uM echinacoside بفعالية في تثبيط متوسط ​​قدره 37.1 بالمائة ± 5.6 بالمائة من الإطلاق (F (2،13)=19. 72، p=0. {{88} }}) ، مشابه لذلك الذي أجراه إيكينكوسايد وحده (ص=0. 41 ؛ الشكل 3). بالإضافة إلى ذلك ، مثبط كيناز البروتين المنشط بالميتوجين 2- (2- أمينو -3- ميثوكسيفينيل) -4 H -1- benzopyran -4- واحد) (PD98059 ) (50 ميكرومتر) ومثبط بروتين كيناز A N - [2- (p-bromocinnamylamino) ethyl] -5- isoquinolinesulfonamide (H89) (100 UM) يقلل 4- إطلاق الغلوتامات الذي يسببه أمينوبيريدين (ص=0. 000). حتى في وجود PD98059 أو H89 ، قلل 20 ميكرون إشنكوسايد بشكل فعال من الإطلاق (F (2،13)=52. 3 ، ص=0. 000 ؛ الشكل 3).

يوضح الشكل 4 أن 1 ملي مولار 4- أمينوبيريدين زاد من فسفرة بروتين كيناز سي في السينابتوسومات (تي (4)=-6. 871 ، ص=0. 002). عندما تمت معالجة synaptosomes باستخدام 20 uM echinacoside لمدة 10 دقائق قبل إضافة 4- aminopyridine ، انخفض 4- الفسفرة المستحث بالأمينوبيريدين لبروتين كيناز C بشكل كبير (F (2،6)=29 .202 ، ص=0. 001).

2.5 لا يشتمل التثبيط بوساطة إشيناكوسايد لإطلاق الغلوتامات على مستقبلات حمض جاما أمينوبوتيريك من النوع A (GABAA)

في الشكل 5 ، تمت مقارنة تأثير إشنكوسايد على 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين في غياب أو وجود SR95531 (أحد مضادات مستقبلات GABAA). بالإضافة إلى ذلك ، لم يغير 100 أوم SR95531 بشكل ملحوظ إطلاق 4- أمينوبيريدين (1 مم) من الغلوتامات المحرض. في SR 95531- synaptosomes المعالجة ، أدى تطبيق 20 uM echinacoside إلى تثبيط بنسبة 43٪ على 4- إطلاق الغلوتامات المستحث بأمينوبيريدين (F (2،12)=42. 63، p { {18}}. 000) ، والذي لم يكن مختلفًا بشكل كبير عن التثبيط الناتج عن إشيناكوسيد وحده (40 بالمائة ؛ ص=0. 000). تم الحصول على نتيجة مماثلة مع مضادات مستقبل GABAA أخرى ، bicuculline (50 ميكرومتر). كان الإطلاق الذي تم قياسه في وجود البيكوكولين وإكينكوسايد مختلفًا بشكل كبير عن الإطلاق الذي تم الحصول عليه في وجود البيكوكولين وحده (ص=0. 000).

3. مناقشة

في هذه الدراسة،إشنكوسايد، مركب نشط في هرباسيستانش، يمنع 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين في أطراف عصب القشرة الدماغية للجرذان. الآليات الأساسية المحتملة لـإشنكوسايديتم إجراء مزيد من التحقيق في التثبيط بوساطة لإطلاق الغلوتامات ومناقشته هنا.

3.1 الآليات الكامنة وراء تثبيط إشيناكوسايد بوساطة إطلاق الغلوتامات

يتكون إطلاق الغلوتامات الناتج عن 4- أمينوبيريدين من مكونين: مكون Ca2 زائد معتمد من الناحية الفسيولوجية ، والذي يتم إنتاجه من خلال طرد الحويصلات المشبكية المحتوية على الغلوتامات ؛ ومكون Ca2 زائد مستقل ، والذي ينشأ من إزالة الاستقطاب لفترات طويلة مما يتسبب في حدوث تحول غشاء محتمل بوساطة حالة ناقل الغلوتامات المستقرة نحو الاتجاه الخارجي ، مما يؤثر على الجلوتامات العصاري الخلوي ef ux [31]. هنا ، لاحظنا أن إشنكوسايد لم يثبط بشكل كبير 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين في وجود وسط خالٍ من الكالسيوم 2 زائد (Ca2 بالإضافة إلى إطلاق مستقل). علاوة على ذلك ، تم منع التثبيط الملحوظ بوساطة إشيناكوسيد 4- لإفراز الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين بشكل فعال بواسطة ba lomycin A1 (الذي يستنفد محتوى الغلوتامات في الحويصلات المشبكية) ، ولكن ليس بواسطة DL-TBOA (الذي يثبط بشكل غير انتقائي كل الأحماض الأمينية المثيرة. أنواع ناقلة). تشير هذه النتائج إلى أن إشنكوسايد يؤثر على الإفراز الخلوي المعتمد على Ca2 plus لإطلاق الغلوتامات دون التأثير على Ca2 plus-indentosolic f ef ux of glutamate من خلال عكس ناقل الغلوتامات الغشائي البلازمي في العصب. في المحطات المشبكية ، يعمل تثبيط قناة Na plus أو تنشيط قناة K plus على استقرار استثارة الغشاء وبالتالي تقليل دخول Ca2 بالإضافة إلى إطلاق الناقل العصبي [32،33]. لذلك ، فإن الآلية المحتملة الكامنة وراء تثبيط إطلاق الغلوتامات بوساطة إشيناكوسيد تتضمن تقليل استثارة المشابك العصبية. ومع ذلك ، لا يمكن الدفاع عن هذا الاحتمال على أساس ملاحظتين: (1) 4- إزالة الاستقطاب المحتمل للغشاء الناجم عن أمينوبيريدين ، المقاس باستخدام الصبغة الحساسة المحتملة للغشاء ، لم يتأثر DiSC3 (5) بإضافة إشيناكوسيد ؛ و (2) لم يؤثر إكينكوسايد على 4- إطلاق الكالسيوم الذي يسببه أمينوبيريدين بالإضافة إلى إطلاق الغلوتامات المستقل ، وهو أحد مكونات الإطلاق التي تعتمد على إمكانات الغشاء فقط [31]. إذا لم يكن التأثير ناتجًا عن تثبيط استثارة متشابك ، فقد يتجلى من خلال تقليل نشاط Cav2.2 (نوع N) و Cav2.1 (P / Q-type) Ca2 plus بالإضافة إلى إفراز الغلوتامات في النهايات العصبية [34 - 36]. باستخدام fura -2 ، نوضح أن إشنكوسايد يقلل بشكل ملحوظ من 4- زيادة تركيز الأمينوبيريدين في تركيز الكالسيوم. بالإضافة إلى ذلك ، تُظهر بياناتنا أن التأثير المثبط لإشنكوسايد على 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين انخفض من 42.4 بالمائة 2.3 بالمائة إلى 12.1 بالمائة 3.9 بالمائة بعد التعرض لمانع من Cav2.2 (نوع N) و Cav2 .1 (P / Q-type) قنوات Ca2 plus. علاوة على ذلك ، لاحظنا أن إشنكوسايد استمر في تثبيط 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين في وجود مثبطات إطلاق Ca2 plus داخل الخلايا. تشير هذه النتائج إلى أن القمع المتزامن لـ Cav2.2 (نوع N) و Cav2.1 (نوع P / Q) Ca2 بالإضافة إلى نشاط القناة هو الآلية المحتملة الكامنة وراء تثبيط إطلاق الغلوتامات بوساطة إشيناكوسيد. ومع ذلك ، فإن التنشيط المشترك لـ Cav2.2 (نوع N) و Cav2.1 (نوع P / Q) Ca2 بالإضافة إلى نشاط القناة لا يمكن أن يمنع عمل إشنكوسايد تمامًا. وبالتالي ، قد تشارك أنواع أخرى غير محددة من قنوات Ca2 plus أو مسارات أخرى قبل المشبكي في التثبيط. على سبيل المثال ، توجد مستقبلات GABAA في مستوى ما قبل المشبكي ، وقد ثبت أن تنشيطها يثبط Ca2 plus in ux وإطلاق الغلوتامات [37]. في هذه الدراسة ، لم تمنع مضادات مستقبلات GABAA SR95531 و bicuculline تثبيط إفراز الغلوتامات بوساطة إشيناكوزيد ، مما يشير إلى أن مستقبلات GABAA لا تشارك في تقليل نشاط قناة Ca2 المعتمد على الجهد وفي تثبيط إطلاق الغلوتامات لاحقًا. ينشط دخول Ca2 plus عبر قنوات Ca2 plus المعتمدة على الجهد العديد من كينازات البروتين المرتبطة بإفراز الغلوتامات في الأطراف العصبية بما في ذلك بروتين كيناز المنشط بالميتوجين ، وبروتين كيناز C ، وبروتين كيناز أ. تثبيط بوساطة لإطلاق الغلوتامات ؛ ومع ذلك ، فإن مثبط بروتين كينيز PD98059 أو مثبط بروتين كيناز أ H89 كان غير فعال. علاوة على ذلك ، انخفض 4- الفسفرة المستحثة بالأمينوبيريدين لبروتين كيناز سي في السينابتوسومات بعد المعالجة المسبقة باستخدام إشنكوسايد بتركيز فعال لتثبيط إطلاق الغلوتامات. لذلك ، قد يشتمل مسار الإشارات لتثبيط إطلاق الغلوتامات بوساطة إشيناكوسيد على بروتين كيناز ج.يعد بروتين كيناز سي نظامًا مهمًا للإشارات داخل الخلايا موجود على مستوى ما قبل المشبك وله دور حاسم في خروج الخلايا العصبية. على سبيل المثال ، العديد من البروتينات المشبكية المشاركة في حركة الحويصلة المشبكية أو التجنيد وإخراج الخلايا ، مثل ركيزة C كيناز الغنية بالألانين ، يتم فسفرتها بواسطة بروتين كيناز سي [38،39]. يمكن زيادة عملية الفسفرة هذه عن طريق دخول Ca2 زائد المحفز لإزالة الاستقطاب ، مما يسهل إطلاق الغلوتامات [40]. ومن ثم ، يمكننا التكهن بشكل معقول بأن التأثير المثبط لإشنكوسايد على Ca2 بالإضافة إلى الإدخال المرصود هنا قد يقلل من نشاط بروتين كيناز C وبالتالي إطلاق الغلوتامات.

الرجاء النقر هنا للجزء 2