الجزء 1 ليبوزوم فينيليثانول جليكوسيد يمنع تنشيط HSC المستحث بـ PDGF عبر تنظيم مسار إشارات FAK / PI3K / Akt

شي لي زانغ 1 ، لونغ ما 1 ، جون تشاو 2 ، شو بينغ يو 1 ، شياو تينغ ما 1 ، شياو يان يي وتاو ليو 1 ، *

1 قسم علم السموم ، كلية الصحة العامة ، جامعة شينجيانغ الطبية ، منطقة شينجيانغ أويغور ذاتية الحكم ، طريق شينيى رقم 393 ، أورومتشي 830011 ، الصين

2 مختبر رئيسي لطب الأويغور ، معهد المواد الطبية في شينجيانغ ، منطقة شينجيانغ أويغور ذاتية الحكم ، مقاطعة تيانشان ، شارع شينهوا الجنوبي رقم 140 ، أورومتشي 830004 ، الصين

للمزيد من المعلومات أرجو الأتصال:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola له العديد من التأثيرات ، انقر هنا لمعرفة المزيد

الملخص: Cistanche tubulosaهو دواء عشبي صيني تقليدي يستخدم على نطاق واسع لتنظيم المناعة ، وجليكوسيدات فينيلثانويد(CPhGs) هي من بين المكونات الأساسية المسؤولة عن هذا النشاط. ومع ذلك ، فإن تطبيق CPhGs يتأثر سلبًا بضعف امتصاصها وانخفاض استخدامها عن طريق الفم. يعتبر توصيل الأدوية المستهدف اتجاهًا هامًا لتطوير المستحضرات الصيدلانية. أشارت الدراسات السابقة إلى أن CPhGs يمكن أن تمنع توصيل مسارات الإشارات في TGF-p1 / smad وتمنع تنشيط الخلايا النجمية الكبدية (HSCs). كان الهدف من هذه الدراسة هو تقييم تأثير التليف الكبدي للجسيمات الشحمية CPhG عن طريق تثبيط تنشيط HSC ، وتعزيز موت الخلايا المبرمج ، وعرقلة دورة الخلية ، وقمع توصيل مسارات الإشارات في كيناز الالتصاق البؤري (FAK) / فوسفاتيديلينوسيتول -3- كيناز (PI3K) / بروتين كيناز ب (Akt) ، وتحديد أنها في نشاط وقائي للكبد في المختبر. أظهرت دراسات التحرر في المختبر أن الجسيمات الشحمية CPhG لها تأثير إطلاق مستمر مقارنةً بـ CPhGs. تم تثبيط تكاثر HSC بعد العلاج باستخدام الجسيمات الشحمية CPhG (29.45 ، 14.72 ، 7.36 ^ جم / مل) ، مع قيم IC البالغة 42.54 Rg / mL في اختبار MTT. تركيزات مختلفة من الجسيمات الشحمية CPhG يمكن أن تمنع انتشار HSC ، وتعزيز موت الخلايا المبرمج ، ومنع دورة الخلية. أظهرت طريقة MTT تثبيطًا واضحًا لتكاثر HSC بعد علاج CPhG الجسيمي وعامل النمو المأشوب المشتق من الصفائح الدموية- BB (rrPDGF-BB). تم تقليل مستويات الكولاجين -1 ، ومثبط الميتالوببتيداز 1 (TIMP -1) ، وأكتين العضلات الملساء (a-SMA) ، و PI3K / Akt الفسفوري ، ومصفوفة metalloproteinase -1 (MMP { {23}}) ، عن طريق المعالجة المسبقة بتركيزات مختلفة من الليبوزومات CPhG. علاوة على ذلك ، يمكن أن يقلل 29.45 Rg / mL من الجسيمات الشحمية CPhG من التعبير عن بروتين FAK وبروتين PI3K و Akt الفسفوري في اتجاه مجرى FAK عن طريق الإفراط في التعبير عن جين FAK. تشير هذه التجربة إلى أن الجسيمات الشحمية CPhG قد تمنع تنشيط HSCs عن طريق تثبيط FAK ثم تقليل التعبير عن Akt / PI3K الفسفوري ، وبالتالي توفير رؤى جديدة في تطبيق CPhGs لتليف الكبد.

الكلمات الدالة: جليكوسيدات فينيلثانويدالجسيم الشحمي. الخلايا النجمية الكبدية الانتشار؛ موت الخلايا المبرمج. دورة الخلية؛ FAK / PI3K / Akt ،

يمكن أن تؤدي العوامل ، مثل TGF-p1 والكحول والسموم والتنكس الدهني ، إلى تنشيط الخلايا الجذعية السرطانية. يمكن أن يؤدي PDGF أيضًا إلى تنشيط HSCs [4]. في الوقت الحاضر ، تشمل الاستراتيجيات العلاجية التي تستهدف الخلايا الجذعية السرطانية لمنع تليف الكبد تثبيط تنشيط الخلايا الجذعية السرطانية وتكاثرها ودورة الخلية ، بالإضافة إلى تحفيز موت الخلايا المبرمج HSCs [5].

Cistanche tubulosa(عائلة Orobanchaceae) ، وهو نبات طفيلي ، يزرع على نطاق واسع في المنطقة الجنوبية من شينجيانغ في الصين.C. tubulosaوقد ثبت أنه يقدم أنشطة مختلفة ، بما في ذلك تعزيز مناعة الكائن الحي ، وتحسين القدرة على التحمل ، وتغذية الكلى ، وعلاج العجز الجنسي ، وزيادة الذكاء ؛

1 المقدمة

كما أن لديها خصائص مضادة للأكسدة ومضادة للشيخوخة [6]. يحتوي هذا النبات على جليكوسيدات فينيلثانويد (CPhGs) ، إيريديويد ، وعديد السكاريد ، منها CPhGs هي بعض الأنواع النشطة بيولوجيًا الرئيسية النشطة [7]. في دراسة سابقة ، وجدنا أن CPhGs يمكن أن تمنع توصيل مسارات الإشارات في TGF-p1 / smad ، وتمنع تنشيط HSCs ، وتمارس تأثيرات وقائية على التليف الكبدي الناجم عن الألبومين البقري في الفئران [7،8]. ومع ذلك ، فإن CPhGs لديها قابلية جيدة للذوبان في الماء وقابلية منخفضة للذوبان في الدهون وتتأثر بعوامل خارجية مثل الحموضة وإنزيمات التحلل ، مما يقلل من استقرار وفعالية CPhGs [9]. بعد الإعطاء داخل المعدة ، تكون مركبات CPhG غير مستقرة في الجهاز الهضمي للفئران ، ويمكن أن يحدث التحلل المائي لروابط الجليكوزيد بسهولة. كان التوافر البيولوجي الفموي للفئران فقط 0. 83 بالمائة ، لذلك من الصعب تحديد دوره العلاجي [10]. لذلك ، يجب أن نجد دواء مضادًا للتليف مؤمنًا وفعالًا ومستدامًا ومستهدفًا لـ HSCs لتحسين فعاليتها العلاجية. توفر أنظمة توصيل الأدوية بالجسيمات النانوية استراتيجية بديلة للتغلب على أوجه القصور هذه بسبب مزاياها ، بما في ذلك القدرة العالية على تحميل الدواء وطول الدورة الدموية [11]. لديهم صلة قوية بالكبد ويمكنهم توصيل الأدوية مباشرة إلى الخلايا من خلال الالتقام الخلوي والاندماج. يتم توزيع الجسيمات الشحمية غير المعدلة بشكل رئيسي في الأنسجة أو الأعضاء التي طورها الجهاز الشبكي البطاني (RES) ولها وظيفة الاستهداف السلبي للكبد [12]. لذلك ، تم تحضير الجسيمات الشحمية CPhG عن طريق تشتت الغشاء والتغليف الثانوي لتوفير تأثير مضاد للتليف. في هذه الدراسة ، كنا نهدف إلى التحقيق في آثار الجسيمات الشحمية CPhG على تكاثر HSC ، وموت الخلايا المبرمج ، ودورة الخلية ، وكذلك آلياتها.

2. النتائج

2.1. الخصائص الفيزيائية لـ CPhG Liposome

كانت الخواص الفيزيائية للجسيمات الشحمية CPhG المحضرة كما يلي: كان حجم الجسيمات (216.7 ± 3.47) نانومتر ، وكانت جهد زيتا (-55 .6 ± 1.3) مللي فولت. كما هو مبين في الشكل 1 ، كانت الجسيمات مستديرة الشكل ومغلفة بسماكة موحدة على السطح ، وكان توزيع حجم الجسيمات منتظمًا. كانت كفاءة تحميل وتغليف الأدوية للجسيمات الشحمية CPhG (3.71 ± 0. 32) في المائة و (38.46 士 7.85) في المائة.

2.2. إطلاق في المختبر من CPhG Liposomes و CPhGs

تم حساب معدل الإطلاق التراكمي المقدر ورسمه كدالة للوقت للجسيمات الشحمية CPhG و CPhGs (الشكل 2). في الدراسة الحالية ؛ تم تطبيع معدل إطلاق CPhGs بعد 12 ساعة إلى 100 في المائة ، في حين أن معدل إطلاق الجسيمات الشحمية CPhG كان قريبًا من 100 في المائة بعد 24 ساعة ، وزاد معدل إطلاق مركبات CPhG بمرور الوقت. تم تحليل البيانات باستخدام نماذج ملائمة مختلفة لآليات التحرير الخاضعة للرقابة ، بما في ذلك معادلات الترتيب الصفري ، من الدرجة الأولى ، ومعادلات هيغوتشي. المعادلات المجهزة ومعاملات الارتباط لنماذج الإصدار الثلاثة موضحة في الجدول 1.

أفضل نموذج يناسب CPhGs و CPhG liposomes هي Higuchi ومعادلات الدرجة الأولى. لم تظهر دراسة التحرر في المختبر للجسيمات الشحمية CPhG أي تأثير انفجار. تم اختيار دالة التوزيع الأنسب لحساب معاملات الذوبان T50 (الذوبان 50 بالمائة). تظهر النتائج أن متوسط ​​وقت الاحتفاظ بالجسيمات الشحمية CPhG أطول من متوسط ​​زمن احتفاظ CPhGs ، وأن T50 من الجسيمات الشحمية CPhG هي 9.39 ساعة. مقارنة بـ 1.69 ساعة لـ CPhGs ، تُظهر الجسيمات الشحمية CPhG تأثير إطلاق مستمر واضح (الجدول 2).

لقد درسنا أولاً التأثيرات السامة للخلايا للجسيمات الشحمية CPhG على HSCs مع اختبار MTT في المختبر. تعرضت HSCs لتركيزات مختلفة من الجسيمات الشحمية CPhG ، تتراوح من 0 إلى 117.79 ميكروغرام / مل لمدة 24 ساعة. قللت الجسيمات الشحمية CPhG من صلاحية HSCs بطريقة تعتمد على الجرعة ، وكانت قيمتها IC50 42.535 (على سبيل المثال / مل. تأثير الجسيمات الشحمية CPhG (29.45 ، 14.72 ، و 7.36 ^ جم / مل) على الخلايا عند 24 ، يظهر 48 و 72 ساعة في الشكل 3. بعد العلاج مع الجسيمات الشحمية CPhG ، تم منع انتشار HSCs بشكل كبير في نقاط زمنية مختلفة (الشكل 3).

تم الكشف عن إطلاق اللاكتات ديهيدروجينيز (LDH) من HSCs بعد 24 ساعة من العلاج بتركيزات مختلفة من الجسيم الشحمي CPhG. النتائج موضحة في الجدول 3. لم يكن لـ HSCs تعامل مع الجسيمات الشحمية CPhG أي تأثير كبير على إطلاق LDH.

2.4 تحفز الجسيمات الشحمية CPhG موت الخلايا المبرمج HSCs وتوقف دورة الخلية

تعرضت HSCs للجسيمات الشحمية CPhG (29.45،14.72،7.36 ميكروغرام / مل) لمدة 24 ساعة ، وتم إجراء تلطيخ مزدوج في الملحق V-FITC / PE للكشف عن موت الخلايا المبرمج عن طريق قياس التدفق الخلوي ، كما هو موضح في الشكل 4 أ. زاد موت الخلايا المبرمج الكلي للخلايا إحصائيًا مقارنة بالمجموعة الضابطة (p <0. 05).="" بعد="" 24="" ساعة="" من="" العلاج="" على="" hscs="" لكل="" مجموعة="" جرعة="" ،="" يمكن="" أن="" تحفز="" الجسيمات="" الشحمية="" cphg="" (29.45="" جم="" مل)="" موت="" الخلايا="" المبرمج="" المتأخر="" في="" hscs="" ،="" وكانت="" النسبة="" المئوية="" للخلايا="" الأبوطوزية="" المتأخرة="" أعلى="" من="" تلك="" الموجودة="" في="" الخلايا="" الأبوطوزية="" المبكرة.="" كانت="" نسبة="" الخلايا="" المبرمجة="" المبكرة="" أعلى="" بكثير="" من="" الخلايا="" المبرمجة="" المتأخرة="" في="" الجسيم="" الشحمي="" cphg="" (14.72="" و="" 7.36|^="" جم="" مل)="" -="" المجموعات="" المعالجة.="" تشير="" هذه="" النتائج="" بوضوح="" إلى="" أن="" الجسيمات="" الشحمية="" cphg="" تحفز="" موت="" الخلايا="" المبرمج="" للكبد="" ،="" خاصة="" في="" المراحل="" المتأخرة="" من="" الخلايا="" الجذعية="" السرطانية.="" بالإضافة="" إلى="" ذلك="" ،="" يزداد="" موت="" الخلايا="" المبرمج="" الكلي="" مع="" جرعة="" الجسيمات="" الشحمية="" cphg.="" تشير="" هذه="" النتائج="" إلى="" أن="" الجسيمات="" الشحمية="" cphg="" يمكن="" أن="" تمنع="" تنشيط="" hscs="" والتليف="" الكبدي="" عن="" طريق="" تحفيز="" موت="" الخلايا="" المبرمج="" لـ="">

لتحديد تأثير الجسيمات الشحمية CPhG على دورة الخلية من HSCs ، تم علاج HSCs مع الجسيمات الشحمية CPhG بتركيزات 29.45 و 14.72 و 7.36 昭 / مل لمدة 24 ساعة ، وتحليلها عن طريق قياس التدفق الخلوي (الشكل 4 ب). أظهرت النتائج أن نسبة الخلايا في المرحلة G 0 / G1 قد زادت بشكل ملحوظ (p <{{1 0}.="" 05)="" ،="" بينما="" كانت="" النسبة="" المئوية="" للخلايا="" في="" المرحلة="" s="" بشكل="" ملحوظ="" مخفضة="" (p=""><0.05). علاوة="" على="" ذلك="" ،="" انخفضت="" نسبة="" الخلايا="" في="" طور="" g2="" m="" بشكل="" كبير="" عند="" مقارنتها="" بمجموعة="" التحكم=""><0.05). taken="" together,="" these="" results="" exhibit="" the="" cell="" cycle="" modulatory="" activity="" of="" the="" cphg="" liposomes="" in="" hscs,="" which="" may="" relate="" to="" their="" anti-proliferative="" and="" apoptosis-inducing="">

2.5 دراسة عن آلية (آليات) عمل الجسيمات الشحمية C PhG في المختبر

2.5.1. تمنع الجسيمات الشحمية CPhG انتشار HSCs عن طريق تحفيز rrPDGF-BB

لمزيد من التحقيق في آثار الجسيمات الشحمية CPhG على الانتشار الذي يحفزه rrPDGF-BB من HSCs ، تم إجراء اختبار MTT لقياس جدوى HSCs التي عولجت بتركيزات محددة مسبقًا من الجسيمات الشحمية CPhG لمدة 24 و 48 و 72 ساعة ( الشكل 5).

بعد 24 ساعة من العلاج باستخدام HSCs المحفز بواسطة rrPDGF-BB و 29.45 و 14.721 و 7.36 ميكروغرام / مل من الجسيمات الشحمية CPhG ، كانت معدلات بقاء الخلايا في كل مجموعة جرعة 67.5 بالمائة و 75.3 بالمائة و 89.2 بالمائة على التوالي. بعد 48 ساعة ، كانت نسبة البقاء على قيد الحياة 49.2 في المائة و 58.6 في المائة و 73.5 في المائة على التوالي في الخلايا
من كل مجموعة جرعة. بعد 72 ساعة من العلاج ، كانت معدلات بقاء الخلايا في كل مجموعة جرعة 45.3 في المائة و 59.2 في المائة و 79.2 في المائة على التوالي. أظهرت النتائج أن الجسيمات الشحمية CPhG لها تأثير مثبط كبير على HSCs المحفز بواسطة rrPDGF-BB ، وأصبح هذا التأثير المثبط أكثر وضوحًا مع زيادة الجرعة. يُقترح أن التأثير المثبط للجسيمات الشحمية CPhG على HSCs يساهم في نشاط مكافحة انتشار CPhGliposomo.

2.5.2. تمنع الجسيمات الشحمية CPhG تنشيط HSC في المختبر

تنتج HSCs في مساحة Disse مكونات ECM مثل الكولاجين -1 ، (s-SMA ، والكولاجين 3.العوامل الأخرى التي تنظم تطوير ECMs ، مثل MMPs و TIMPs ، يتم إنتاجها أيضًا بواسطة HSCs [5]. لمزيد من التحقيق في الآليات التي يسببها oi rrPDGF-BB في HSCs ، قمنا بتقييم التعبير عن البروتينات المرتبطة بـ ECM ، بما في ذلك الكولاجين -1 ، و Cosma ، و collagen III ، و MMP -1 ، و TIMP {{8} }. يوضح الشكل 6 أ أن مجموعات الجسيمات الشحمية CPhG (29.45 ، 14.72 ، 7. 36 4 جم / مل) يمكن أن تقلل مستويات تعبير مرنا للكولاجين -1 ، و a-SMA ، و TIMP {{18} } وزيادة مستوى تعبير mRNA لـ MMP -1 أكثر من مجموعة rrPDGF-BB.

الشكل 6. تأثيرات الجسيمات الشحمية CPhG على تعبيرات الكولاجين -1 و a-SMA و TIMP -1 و MMP -1 في HSCs. (أ) تعبير mRNA للكولاجين -1 و a-SMA و TIMP -1 و MMP -1 في HSCs (اختبار RT-PCR). (ب) التعبير البروتيني عن الكولاجين {{1 0}} و a-SMA. أ ، المجموعة الضابطة ؛ B ، المجموعة المعالجة rrPDGF-BB ؛ C ، المجموعة المعالجة rrPDGF-BB plus CPhG liposome 29.45 جم / مل ؛ D ، rrPDGF-BB plus CPhG liposome 14.72 (_ مجموعة معالجة ig / mL ؛ E ، rrPDGF-BB بالإضافة إلى CPhG liposome 7. 3 6 g / m L معالجة د المجموعة ؛ يتم التعبير عن البيانات كمتوسط ​​土 SD. ** p <0. 01="" ،="" تختلف="" اختلافًا="" كبيرًا="" مقارنة="" بمجموعة="" hscs="" المنشط="" rrpdgf-bb.="" #="" p=""><0.05 ،="" تختلف="" اختلافًا="" كبيرًا="" عن="" مجموعة="" التحكم.="" 6-="" أكتين="" تم="" استخدامه="" كعنصر="" تحكم="">

كما رفعت الجسيمات الشحمية CPhG مستويات mRNA لـ MMP -1. تم التعبير عن مستويات a-SMA والكولاجين -1 بشكل كبير في HSCs المنشط rrPDGF-BB. في المقابل ، خفضت الجسيمات الشحمية CPhG مستويات a-SMA والكولاجين -1 (الشكل 6 ب). يقلل الجسيم الشحمي CPhG من زيادة الكولاجين -1 وتعبير a-SMA عبر rrPDGF-BB ، خاصة عند التركيز العالي (29.45 ^ جم / مل).

2.53 CPhG Liposomes تمنع مسار إشارات PI3K / Akt

PI3K / Akt هو مسار مهم لتوصيل الإشارات بوساطة مستقبلات التيروزين كيناز. يعمل مسار الإشارات PI3K / Akt كمستشعر استجابة للمنبهات خارج الخلية ويتوسط الإشارات الخلوية ، وبالتالي يلعب دورًا حاسمًا في موت الخلايا المبرمج وتكاثرها من خلال التأثير على نشاط جزيئات المستجيب المصب [13]. من أجل التحقق مما إذا كان مسار PI3K / Akt يشارك في تأثيرات مكافحة انتشار الجسيمات الشحمية CPhG على HSCs ، تم فحص مستويات التعبير والفسفرة لـ PI3K / Akt عن طريق تحليل اللطخة الغربية. أظهرت النتائج أن مستويات p-PI3K و p-Akt انخفضت باستمرار في HSCs بعد 24 ساعة من العلاج مع الجسيمات الشحمية CPhG ، مما يشير إلى أن تأثيرات مكافحة انتشار الجسيمات الشحمية CPhG ضد HSCs مرتبطة بإلغاء تنشيط مسار PI3K / Akt ، كما هو موضح في الشكل 7.

2.5.4. يمكن لـ CPhG Liiposomes تنظيم التعبير عن بروتينات مسار PI3K / Akt في HSCs من rrPDGF-BB بوساطة FAK overexpression Plasmid

FAK هو جين مهم ينظم مسار إشارات PI3K / Akt. يمكن أن يؤدي FAK المنشط إلى فسفرة PI3K ، مما يؤدي أيضًا إلى فسفرة Akt. يتوسط FAK في نقل الإشارة لمستقبلات البروتين كيناز التيروزين ، والإنتغرين ، والمسارات الأخرى للخلايا ، والتي تعد نقطة التقاء ومحور العديد من المسارات داخل الخلايا أثناء تنشيط الخلايا الجذعية السرطانية. لذلك ، تكهننا

أن الجسيمات الشحمية CPhG قد تثبط نشاط مسار إشارات PI3K / Akt عن طريق إعاقة تنشيط FAK. أكدنا لاحقًا هذه الفرضية من خلال إظهار الإفراط في التعبير عن جين FAK.

(pEX {0} NC) بالإضافة إلى مجموعة CPhG liposome 29.45 Lg / mL انخفضت بشكل ملحوظ (p <0.01).

النشاف الأسترن بأجسام مضادة أولية محددة. ** p <0. 01="" ،="" تختلف="" اختلافًا="" كبيرًا="" مقارنةً="">

مجموعة التحفيز rrPDGF-BB بالإضافة إلى مجموعة PEX -3- FAK. plus p <0. 0="" 5="" ،="" تختلف="" بشكل="" ملحوظ="" مقارنة="" بالمجموعة="" المعالجة="" بـ="" rrpdgf-bb.="" &="" p=""><0.01 ،="" تختلف="" اختلافًا="" كبيرًا="" مقارنةً="" بتحفيز="">

بالإضافة إلى مجموعة pEX -3- NC. -وقد استخدم الأكتين باعتبارها الرقابة الداخلية.

يمكن cistanche المضادة للسرطان

3. مناقشة

لقد ثبت أن CPhGs لديها مجموعة متنوعة من الأنشطة البيولوجية ، بما في ذلك النشاط المضاد للالتهابات [14،15] ، النشاط المضاد لهشاشة العظام [16،17] ، تأثير مهدئ [18] ، نشاط مضاد للتعب [19] ، تأثير وقائي للأعصاب [ 20] ، والنشاط الوقائي للكبد [21 ، 22]. يانغ وآخرون. وجدت أنه مقتطف منC. tubulosaيمكن أن يؤخر بشكل كبير تقدم تليف الكبد الكيميائي التجريبي عن طريق تثبيط تخليق الكولاجين وتقليل الإجهاد التأكسدي [22]. ومع ذلك ، فإن فعالية CPhGs

المواد الواقية من الحرارة محدودة بسبب ضعف نفاذية وتوافرها الحيوي [23]. لذلك ، من الضروري توسيع تطبيق CPhGs من خلال تطوير نظام توصيل فعال للتغلب على هذه النكسات.

في السنوات الأخيرة ، أكدت كل من الأبحاث الدوائية والبحوث السريرية أن استخدام الجسيمات النانوية كناقلات للأدوية يمكن أن يحسن فعالية الدواء في الجسم الحي. الجسيمات الشحمية هي بعض من أهم الجسيمات النانوية [24].

يمكن استخدام الجسيمات الشحمية كناقلات للأدوية لتوصيل الأدوية المضادة للالتهابات والأدوية المضادة للسرطان والمضادات الحيوية والأدوية المضادة للفطريات وفئات أخرى مختلفة من الأدوية بنجاح [25]. يمكن للجسيمات الشحمية أيضًا تحسين استقرار الدواء ، وزيادة قابلية الذوبان في الأدوية ، وتعزيز التوافق الحيوي [26]. من ناحية أخرى ، أظهرت الدراسات أن نظام توصيل الدواء للجسيمات النانوية الصلبة (في نطاق 10-1000 نانومتر) يمكن أن يركز 8 0 في المائة من جرعة الدواء في الكبد ، مما يمكّن الدواء من الدخول خلايا الكبد [27]. جينغ تشو وآخرون. وجد أن الجالانين-الجسيمات الشحمية تمتلك تأثيرات استهداف الكبد الجيدة [28]. لذلك ، يمكن استخدام تأثير الاستهداف السلبي للأدوية الصينية النانوية في علاج أمراض الكبد أو أمراض أخرى. يبلغ حجم الجسيمات الشحمية CPhG المحضرة في هذه الدراسة ، والتي لها درجة معينة من استهداف الكبد ، (216.7 ± 3.47) نانومتر. سلوك إطلاق الدواء هو خاصية مهمة لأنظمة توصيل الأدوية النانوية. نظرًا لأن CPhGs لها قابلية جيدة للذوبان في الماء ، يتم استخدام محلول PBS المؤقت (الرقم الهيدروجيني=6. 0) كوسيط الإطلاق. من منحنى الإطلاق ، يمكن ملاحظة أنه قبل ساعتين ، كانت النسبة المئوية لإطلاق الجسيمات الشحمية CPhG أقل من 40 في المائة ، ولم يحدث إطلاق مفاجئ ، وكان هناك تأثير إطلاق مستمر معين مقارنة بإطلاق مركبات CPhG. من معادلة منحنى الإطلاق المجهزة ، فإن إطلاق الجسيمات الشحمية CPhG في محلول المخزن المؤقت للفوسفات عند الرقم الهيدروجيني=6 0 يتوافق مع معادلة Higuchi.

cistancheيستطيعمكافحة موت الخلايا المبرمج

في أمراض الكبد المزمنة ، يؤدي التنشيط المستمر لـ HSCs إلى تليف الكبد [29]. لذلك ، فإن تثبيط التنشيط ، والتكاثر ، ودورة الخلايا في الخلايا الجذعية السرطانية ، أو إحداث موت الخلايا المبرمج HSC ، قد يكون نقطة انطلاق جديدة للعلاج المستهدف لتليف الكبد [30-33]. لقد وجدت العديد من الدراسات أن موت الخلايا المبرمج هو المفتاح لعكس التليف الكبدي من خلال تعزيز موت الخلايا المبرمج [34]. يعتمد تطور تليف الكبد على تنشيط الخلايا الجذعية السرطانية ، والتي قد توفر إمكانية تثبيط تنشيط HSC والحث على موت الخلايا المبرمج لمنع أو علاج تليف الكبد [35 ، 36]. LDH هو إنزيم في العصارة الخلوية الخلوية ، والذي يتم إطلاقه في وسط المزرعة عند تلف غشاء الخلية. لهذه الأسباب ، أجرينا دراسات في المختبر حول معدلات بقاء الخلية ، ومحتوى LDH في الخلايا ، وموت الخلايا المبرمج ودورة الخلايا في الخلايا الجذعية السرطانية المعرضة للجسيمات الشحمية CPhG. أظهرت النتائج أن الجسيمات الشحمية CPhG تثبط بشدة حيوية وانتشار الخلايا الجذعية السرطانية وتزيد من نسبة الخلايا المبرمج بطريقة تعتمد على التركيز. علاوة على ذلك ، تشير نتائج دورة الخلية إلى أن الجسيمات الشحمية CPhG يمكن أن تحفز إيقاف دورة الخلية في المرحلة G1. تظهر النتائج أن مفتاح الجسيمات الشحمية CPhG لمنع وعلاج التليف الكبدي هو تنظيم تكاثر الخلايا ، وموت الخلايا المبرمج ، ودورة الخلية. بالمقارنة مع مجموعة التحكم الفارغة ، فإن محتوى LDH بين كل مجموعة له اتجاه متزايد تدريجياً. ومع ذلك ، لم يكن هناك فرق كبير (p> 0. 05) ، مما يشير إلى أنه على الرغم من انخفاض نشاط الخلايا الجذعية السرطانية المتأثرة بالجسيمات الشحمية CPhG ، فإن معظم أغشية الخلايا تظل سليمة. إن تثبيط تكاثر الخلايا الجذعية السرطانية بواسطة الليبوزومات CPhG لا يرجع إلى سمية الأدوية للخلايا.

PDGF هو العامل الأكثر أهمية الذي يؤثر على انتشار HSCs. تنتمي مستقبلات PDGF (PDGF-Ra and -p) إلى عائلة مستقبلات التيروزين كيناز. يرتبط PDGF-AA حصريًا بـ PDGF-Ra ، بينما ترتبط سلاسل PDGF-B مع كل من PDGF-Ra و -p وتتحول إلى ثنائيه [37]. بعد ربط ligand بـ PDGF-R ، تتضاءل المستقبلات ، مما يؤدي لاحقًا إلى فسفرة بقايا التيروزين الداخلية وتنشيط العديد من مسارات الإشارات النهائية ، مما يؤدي في النهاية إلى تكاثر وترحيل HSCs المنشط. تؤدي هذه العملية إلى إنتاج وترسب مفرط للكولاجين وغيره من ECMs ، وبالتالي تعزيز تطور وتطور تليف الكبد [38]. بريتكوف وآخرون. أظهر أن الإفراط في التعبير الكبدي عن PDGF-BB يؤدي إلى تكاثر HSC وتليف الكبد [39]. في دراستنا ، استخدمنا rrPDGF-BB كمحفز لتنشيط الخلايا الجذعية السرطانية ، ويمكن أن تمنع كل مجموعة من الجسيمات الشحمية CPhG المداواة تكاثر الخلايا الجذعية السرطانية وتقدم علاقة واضحة للجرعة والتأثير. يُقترح أن التأثير المثبط للجسيمات الشحمية CPhG على الخلايا الجذعية السرطانية يساهم في نشاط مكافحة انتشار الجسيمات الشحمية CPhG.

يرتبط تنشيط الخلايا الجذعية السرطانية بالعديد من التغييرات في أنماط التعبير الجيني للخلايا. على وجه الخصوص ، ترتبط التغييرات في التعبير الجيني للكولاجين -1 و a-SMA بخصائص التليف في الخلايا الجذعية السرطانية المنشطة [40]. MMPs هي ببتيدات تعتمد على الزنك وتلعب دورًا مهمًا في تحلل جميع مكونات بروتين ECM في ظل الظروف الفسيولوجية والمرضية. تتوسط MMPs و TIMPs في تخليق وتدهور ECM ، على التوالي. يمكن أن تعزز MMPs تدهور ECM. يحدد التوازن الدقيق بين MMPs و TIMP حدوث تليف الكبد [29]. بالمقارنة مع مجموعة rrPDGF-BB ، زاد تعبير TIMP -1 ، و a-SMA ، والكولاجين -1 في مجموعات الجسيمات الشحمية CPhG بشكل ملحوظ ، بينما انخفض تعبير MMP -9. عكس علاج الجسيمات الشحمية CPhG بشكل ملحوظ التعبيرات غير الطبيعية التي يسببها rrPDGF-BB في HSCs. تشير هذه البيانات إلى أن الجسيمات الشحمية CPhG ربما تمنع توليد ECM من خلال استعادة التوازن بين MMPs و TIMPs ، وبالتالي زيادة مستويات MMP -1 وتقليل التعبير عن TIMP -1 و a-SMA و الكولاجين -1 ويحتمل أن يعزز تدهور المصفوفة خارج الخلية.

FAK هو نوع من مركب الالتصاق البؤري. يمكن لـ PDGF أيضًا تنشيط FAK من خلال التفاعل مع بروتين ECM من خلال Integin [41]. يوفر مجمع الالتصاق البؤري مستشعرًا مباشرًا لسلامة البيئة خارج الخلية. يؤدي تنشيط FAK إلى تنشيط PI3K. لقد ثبت أن PI3K متورط في تكاثر عدة أنواع من الخلايا [42]. تم إظهار دوره الحاسم في HSCs من خلال استخدام مثبطات PI3K الخاصة LY294002 و wortmannin لمنع الانقسام الناجم عن PDGF والتحول الكيميائي دون التأثير على مستقبلات PDGF [43]. يتم تجنيد PI3K في مستقبلات PDGF الفسفورية ، والتي تنشط بروتين كيناز C (PKC) ، Akt ، و p70S6 كينازات (p70S6K) [44]. تم الإبلاغ عن استخدام FAK السالب السلبي (Ad-FAKCD) لمنع نشاط FAK وتثبيط تنشيط PI3K الناجم عن انتشار PDGF و HSCs بعد علاج PDGF [45]. لذلك ، افترضنا أن مسار FAK / PI3K / Akt هو هدف محتمل للجسيمات الشحمية CPhG.

توضح نتائجنا أنه بالمقارنة مع تحفيز rrPDGF-BB بالإضافة إلى مجموعة FAK X -3- ، تم تقليل مستويات التعبير البروتيني لـ FAK و PI3K الفسفوري و Akt الفسفوري في تحفيز rrPDGF-BB بالإضافة إلى X -3- FAK بالإضافة إلى مجموعة CPhG liposome 29.45 Lg / mL. تظهر هذه النتائج أن علاج CPhG liposome 29.45 Lg / mL يمكن أن يقلل من التعبير عن بروتين FAK وبروتينات PI3K و Akt الفسفورية في اتجاه مجرى FAK.

مع تعميق البحث في الكيمياء والصيدلة للأدوية الصينية التقليدية ، تم العثور على المزيد والمزيد من المكونات النشطة للأدوية الصينية التقليدية وتأكيدها. يُعرف باكليتاكسيل وأرتيميسينين وأدوية أخرى على نطاق واسع كأدوية علاجية من الدرجة الأولى للأمراض ذات الصلة في جميع أنحاء العالم. ومع ذلك ، في الوقت نفسه ، وجد أنه على الرغم من أن التأثير الدوائي في المختبر للعديد من المكونات الطبية الصينية قوي جدًا ، إلا أنها تعاني من ضعف قابلية الذوبان في الماء ، وعمر نصف قصير ، واستقرار ضعيف ، وتوافر حيوي منخفض ، وآثار جانبية سامة ، والعديد من الآثار الجانبية السامة. مشاكل أخرى تحد بشدة من تطبيقاتها الطبية والسريرية. يعد نظام توصيل الأدوية النانوية نظامًا جديدًا لتوصيل الأدوية مع إمكانات كبيرة للتطوير وهو نقطة ساخنة في أبحاث الصيدلة الحديثة. إن تطبيقه في البحث والتطوير لأشكال جديدة من الأدوية الصينية التقليدية لا يحسن الأشكال التقليدية للأدوية الصينية فحسب ، بل يحسن أيضًا التأثير العلاجي للأدوية الصينية التقليدية إلى حد معين ويزيد من استقرار الأدوية في الجسم الحي. علاوة على ذلك ، يتم امتصاص الجسيمات الشحمية غير المعدلة في الغالب بواسطة RES ، اعتمادًا على حجم الجسيمات وخصائص السطح وعوامل أخرى. كما أنها تستهدف الكبد بشكل سلبي. من أجل تحسين كفاءة استهداف الكبد للجسيمات الشحمية العادية ، يمكن زيادة تركيز الأنسجة المستهدفة عن طريق ربط روابط محددة أو مجموعات وظيفية محددة.

لذلك ، في البحث المستقبلي ، يجب أن نولي أهمية للخصائص الفيزيائية والكيميائية لاستخراج وتنقية CPhG ، مثل الذوبان ، والاستقرار ، والحموضة ، والقلوية ، وكذلك دراسة الصيدلة الحيوية والحركية الدوائية. يجب علينا إنشاء نظرية تصميم صياغة فريدة ، ومنصة تقنية إعداد ، وطريقة تقييم جودة لمجموعات CPhG ، وكذلك تطوير مجموعة متنوعة من أنظمة تحميل الأدوية النانوية لمجموعات CPhG ، لضمان استخدام CPhGs بأكبر قدر ممكن من الدقة. سيكون الاستفادة الكاملة من هذه المزايا هو اتجاه بحثنا المستقبلي.