الجزء الثاني|تركيبة عشبية صينية ، Tonic The Kindney ، تعمل على تحسين ضمور العضلات عن طريق تنظيم عملية مراقبة جودة الميتوكوندريا في 5/6 من الفئران المصابة بالكلية.
Mar 10, 2022
Dongtao Wang1،3، Jianping Chen2، Xinhui Liu1، Ping Zheng1، Gaofeng Song1، Tiegang Yi1،2 & Shunmin Li1
ضمور العضلاتهو أحد المضاعفات الخطيرة لأمراض الكلى المزمنة (كد). يلعب عدم تنظيم عملية مراقبة جودة الميتوكوندريا (MQC) ، بما في ذلك التكاثر الحيوي للميتوكوندريا ، وإضعاف ديناميكيات الميتوكوندريا والحث على تنشيط الميتوفاجي ، دورًا مهمًا في التوسط في هزال العضلات. هدفت هذه الدراسة إلى ملاحظة آثار ديكوتيون جيان-بي-يي-شين (JPYS) علىضمور العضلاتفي الفئران CKD واستكشاف آليتها المحتملة على تنظيم عمليات MQC. تم تخصيص 5/6 فئران nephrectomized بشكل عشوائي إلى مجموعتين: مجموعة CKD ومجموعة JPYS. إلى جانب ذلك ، كانت الفئران التي يديرها الشام عبارة عن مجموعة صورية. تم علاج جميع الفئران لمدة 6 أسابيع. أظهرت النتائج أن تناول مغلي JPYS يمنع فقدان وزن الجسم ، وفقدان العضلات ، وانخفاض حجم الألياف العضلية ، وتدهور البروتين العضلي ، وزيادة تخليق البروتين العضلي. بالإضافة إلى ذلك ، زاد ديكوتيون JPYS من محتوى الميتوكوندريا وبروتينات التكوّن الحيوي وخفّض بروتينات الالتهام الذاتي والتلوث. علاوة على ذلك ، زاد ديكوتيون JPYS من بروتينات اندماج الميتوكوندريا ، مع تقليل بروتينات الانشطار الميتوكوندريا. في الختام ، زاد ديكوتيون JPYS من محتوى الميتوكوندريا والتكوين الحيوي ، وأعاد التوازن بين الانشطار والاندماج ، وثبط مسار الالتهام الذاتي-الليزوزوم (ميتوفاجي). بشكل جماعي ، أظهرت بياناتنا أن مغلي JPYS مفيد لضمور العضلاتفي CKD ، والتي قد تترافق مع تعديل عملية MQC.
للمزيد من المعلومات أرجو الأتصال:joanna.jia@wecistanche.com
يمنع Cistanche tubulosaالكلىمرض، انقر هنا للحصول على العينة
مناقشة
تم تحديد العديد من المستخلصات الخام والمركبات النشطة المعزولة من الطب الصيني التقليدي وأظهرت فعالية ممتازة ، خاصة في مكافحة الالتهاب وتحسين الاضطرابات الأيضية لأنواع مختلفة منأمراض الكلى. ضمور العضلاتهو من المضاعفات الخطيرة لمرضى الكلى المزمن ، والتي تتميز بفقدان تدريجي للبروتينات العضلية. هذه النتيجة السلبية تقلل إلى حد كبير من نوعية الحياة والبقاء 16 ، 34. أهم سماتضمور العضلاتانخفاض كبير في وزن الجسم وفقدان كتلة العضلات ، مما يعني وجود حالة استقلابية مرتبطة بمرض الكلى المزمن والتي تستهدف العضلات على وجه التحديد. باعتباره TCM ، برز ديكوتيون JPYS كعامل علاجي محتمل للعلاجضمور العضلاتوزيادة كتلة العضلات. للتحقيق في مكافحة-ضمور العضلاتتأثير مغلي JPYS وآليته المحتملة ، في هذه الدراسة ، تم إجراء 5/6 فئران CKD التي يسببها استئصال الكلية ، وأظهرت النتائج أن مغلي JPYS منع بشكل كبير فقدان وزن الجسم ، وفقدان كتلة العضلات ، وانخفاض حجم الألياف العضلية ، وتحلل البروتين العضلي ، إلى جانب تثبيط UPS و FoxO3a. علاوة على ذلك ، يمكن أن يزيد ديكوتيون JPYS من محتوى الميتوكوندريا والتكوين الحيوي ، ويعيد التوازن بين الانشطار والاندماج ، ويمنع تنشيط الالتهام الذاتي والميتوفاجي. تعتمد كتلة العضلات الهيكلية على التوازن الديناميكي بين تخليق البروتين وتدهوره. والعملية مترابطة بإحكام 35. أظهرت النتائج الحالية أن مغلي JPYS كان قادرًا على زيادة تخليق البروتين وفي نفس الوقت منع انهيار العضلات في الفئران CKD. لاستكشاف آليات الخط السفلي لتأخير تدهور البروتين بواسطة مغلي JPYS ، قمنا بفحص مسارات تدهور البروتين.
شجعت زيادة Atrogin -1 و MuRF -1 انتشار البروتينات الهيكلية وتدهور البروتينات الهيكلية بوساطة 26 S ، مما أدى إلى زيادة تدهور بروتين العضلات ، وبالتالي ساهم في هزال العضلات في دراساتنا السابقة 36 ، 37. البروتينات المنتشرة بسرعة تدهورت بواسطة البروتيازوم 20S بما في ذلك أنشطة الكيموتريبسين وأنشطة تشبه التربسين ، والتي تؤدي إلى البروتينات المترافقة Ub إلى ببتيدات صغيرة. في هذه الدراسة ، أظهرت النتائج التي توصلنا إليها أن مغلي JPYS يمنع ارتفاع بروتينات الأتروجين -1 و MuRF -1 والأنشطة الشبيهة بالكيموتريبسين والتريبسين في عضلات CKD. حددت الدراسات السابقة أن علاج TCM (Zhimu-Huangbai Herb-Pair) يثبط تعبير Atrogin -1 و MuRF1 في الدنف الناجم عن السرطان في عضلات الفئران. تشير هذه النتائج إلى أن مغلي JPYS يمكن أن يمنع تدهور بروتين العضلات عن طريق تثبيط تنشيط UPS في فئران CKD.
يمكن فسفرة FoxO3a بواسطة Akt في عدة مواقع ، والتي تعمل كسقالة داخل السيتوبلازم ، ويتم عزلها داخل العصارة الخلوية ، مما يجعلها غير قادرة على الارتباط بمحفزات الجينات المستهدفة في النواة لتنظيم نسخها. أظهرت دراسة سابقة أن تنشيط FoxO3a في العضلات يؤدي إلى زيادة نسخ هذه retrogenes مثل Atrogin -1 و MuRF1 ويحفز تحلل البروتين للتأثيرضمور العضلات40. أظهرت نتائجنا أن مغلي JPYS زاد بشكل كبير من مستويات الفسفرة في FoxO3a ، مما أدى إلى إضعاف مستوى بروتين FoxO3a الكلي في عضلات فئران CKD. أفادت دراسة سابقة أن علاج TCM (Zhimu-Huangbai Herb-Pair) قلل من التعبير عن إجمالي بروتين FoxO3 في عضلات مرضى السكري. تم الإبلاغ عن أن FoxO3a النشط بشكل أساسي يتسبب في نسخ أتروجين -1 وضمور العضلات، في حين تم منع تثبيط تنشيط FoxO3aضمور العضلاتفي الجسم الحي وفي المختبر 40. بالاقتران مع النتائج التي توصلنا إليها ، خلصنا إلى أن مغلي JPYS يمكن أن يقلل بكفاءة من تدهور البروتين في العضلات الهيكلية ، ربما من خلال تثبيط عوامل النسخ FoxO3a.
قدرةالهيكل العظمي والعضلاتللتكيف مع الاضطرابات الخلوية يعتمد بشكل كبير على التكوين الحيوي للميتوكوندريا. لقد ثبت مؤخرًا أن كمية الميتوكوندريا العضلية تنخفض مع CKD41, 42، والتي كانت متوافقة مع نتائجنا ، وتم منع التخفيض بواسطة مغلي JPYS. تشمل الخطوات الرئيسية لعملية التكوُّن الحيوي للميتوكوندريا إشارات الأحداث التي تؤدي إلى تنظيم نسخ الجينات النووية ، مثل NRF1 ، الذي يتم التوسط فيه أساسًا بواسطة PGC -1 43. أظهرت النتائج التي توصلنا إليها أن بروتينات التولد الحيوي للميتوكوندريا تبدو خاضعة للتنظيم المنخفض في عضلة CKD كما يتضح من محتوى PGC السفلي -1 والبروتينات المستهدفة NRF -1 ، والذي تم تثبيته بواسطة مغلي JPYS. يزيد التعبير المفرط عن PGC -1 في العضلات الهيكلية من محتوى الميتوكوندريا والقدرة على التأكسد من خلال تعديلها لمجموعة كبيرة من الجينات المشاركة في التمثيل الغذائي 44 ، 45. علاوة على ذلك ، تميل مستويات PGC -1 إلى الانخفاض في حالات الهزال العضلي 46 ، 47 والإفراط في التعبير العضلي عن PGC -1 يخفف من فقدان العضلات هذا. بشكل جماعي ، أشارت بياناتنا إلى أنه من الممكن أن يعزز مغلي JPYS التعبير عن PGC -1 / NRF1 والتكوين الحيوي للميتوكوندريا اللاحقة في عضلات كد.
يعد الالتهام الذاتي / الميتوفاجي آلية استتبابية محفوظة بدرجة عالية تُستخدم للتحلل وإعادة التدوير ، من خلال الآلية الليزوزومية للسيتوبلازم السائب ، والبروتينات طويلة العمر ، والميتوكوندريا ، والعضيات. يتم التحكم في انتقائية التخفيف من خلال البروتينات PINK1 و Parkin و BNIP3L. PINK1 فسفوريلات يوبيكويتين في Ser65 لبروتينات غشاء الميتوكوندريا الخارجي (OMM) ومجال يوبيكويتين الشبيه بالباركن. بمجرد الفسفرة ، يعزز Parkin إشارة الميتوفاجي عن طريق توليد المزيد من سلاسل يوبيكويتين على بروتينات OMM التي يمكن أن تكون ركائز إضافية لـ PINK1. تم تثبيت BNIP3L على OMM ، ويتفاعل مع LC3II المعالج ، والذي يمكن أن يعزز عزل الميتوكوندريا داخل البلعمة الذاتية للتحلل9. في دراستنا ، أظهرت النتائج أن علامات البلعمة الذاتية LC3II و p62 ، وعلامات الميتو- phagic PINK1 و Parkin قد زادت بشكل كبير في عضلة CKD ، وقد تأخر هذا بواسطة مغلي JPYS. أظهرت الدراسات الحديثة أن الالتهام الذاتي ، بما في ذلك التهاب البلعوم ، غالبًا ما يتم تحفيزه في نماذج متعددة منضمور العضلات، مثل إزالة التعصيب و CKD37, 50. بشكل جماعي ، أشارت نتائجنا إلى تحسن ديكوتيون JPYSضمور العضلاتمن خلال تثبيط مسارات الالتهام الذاتي والميتوفاجي.
تم الإبلاغ عن الميتوكوندريا لتكون عضيات ديناميكية للغاية تخضع لحركة مستمرة من خلال الانشطار والاندماج. يُعتقد أن اندماج الميتوكوندريا يسمح بتبادل محتواها بما في ذلك الحمض النووي للميتوكوندريا (mtDNA) والبروتينات ، وبالتالي الحفاظ على جودة الميتوكوندريا وسلامة mtDNA ، يُعتقد أن اندماج الميتوكوندريا يمنع تراكم المكونات التالفة والمعيبة من خلال إعادة توزيع محتواها بما في ذلك الحمض النووي للميتوكوندريا (mtDNA) ، والدهون ، والمستقلبات ، والبروتينات ، في حين يسمح الانشطار الميتوكوندريا للميتوكوندريا بفصل الميتوكوندريا التالفة بشدة والمختلة وظيفيًا عن طريق ميتوفاجي52. في هذه الدراسة ، أوضحنا أن بروتين الاندماج Mfn -2 و OPA -1 خضعان للتنظيم المنخفض في عضلة CKD ، وتم منع هذا التغيير بواسطة مغلي JPYS. يلعب Mfn2 و OPA -1 دورًا مهمًا في الحفاظ على سلامة mtDNA ، ويمكن أن يؤدي تنظيمهما الخافض إلى الانشطار الميتوكوندري وكذلك تجزئة الميتوكوندريا والتفتت. وفقًا لدور في اندماج الميتوكوندريا ، تم ربط الانشطار
إزالة الميتوكوندريا المتضررة بشدة من خلال تحريض الميتوفاجي. في الواقع ، أظهرت نتائجنا أن تعبير Fis -1 والإسقاط -1 أدى إلى زيادة عضلة CKD وتم منع ذلك بواسطة ديكوتيون JPYS ، والذي كان متسقًا مع نتائجنا 50 ، 54. لذلك ، نتائج الدراسة الحالية الإشارة إلى أن ديناميكيات الميتوكوندريا المعدلة للاندماج والانشطار JPYS decoction عن طريق زيادة تعبير Mfn2 و OPA -1 ، وفي الوقت نفسه تقليل تعبير Fis -1 والإسقاط -1.
في الختام ، تُظهر الدراسة الحالية أن علاج مغلي JPYS لمدة 6- أسبوعًا يحافظ على وزن الجسم ، ويمنع فقدان كتلة العضلات ويقلل حجم الألياف العضلية ، ويؤدي إلى تدهور بروتين العضلات ، جنبًا إلى جنب مع تثبيط FoxO3a و UPS في الفئران المصابة بمرض الكلى المزمن. علاوة على ذلك ، خفّف ديكوتيون JPYS من الاضطرابات الناجمة عن CKD لعمليات QMC ، عن طريق زيادة التكوّن الحيوي للميتوكوندريا ، واستعادة التوازن بين الانشطار والاندماج ، وتثبيط مسار الالتهام الذاتي والليزوزوم (ميتوفاجي). تشير هذه النتيجة إلى استراتيجية واعدة يمكن أن يمنعها تحسين خلل التنظيم في عمليات MQC وعلاجهاضمور العضلاتفي كد.
أكتيوسيد فيcistancheلها تأثيرات جيدة علىالكلى
المواد والأساليب
تكوين مغلي JPYS.
المواد النباتية: Astragali Radix (Lot. 150621 ؛ جذور Astragalus Membranaceus (Fisch.) Bge. var. Mongolic (Bge.) Hsiao) ، Atractylodis Macrocephalae Rhizoma (Lot. 141230 ؛ جذور Atractylodes macrocephala Koidz.) ، Dioscoreae Rhizoma (Lot. 150615 ؛ جذور ديوسكوريا مقابل طنب.) ، Cistanches Herba (Lot. 150621 ؛ أعشاب منCistanche DeserticolaYC Ma) ، Amomi Fructus Rotundus (Lot. 150617 ؛ ثمار Amomum kravanh Pierre ex Gagnep.) ، Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma (Lot. 150626 ؛ جذور وجذور سالفيا ميلتوريزا Bge.) ، Rhei Radix et Rhizoma (Lot. 150104 ؛ جذور وجذور Rheum palmatum L.) و Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Praeparata cum Melle (Lot. 150615 ؛ جذور وجذور Glycyrrhiza uralensis Fisch.) تم شراؤها من Shenzhen Huahui Pharmaceutical Co. ، Ltd (شنتشن ، الصين). تمت المصادقة على المواد النباتية بواسطة الدكتور Jianping Chen بناءً على خصائصها المورفولوجية. تم الاحتفاظ بعينات القسيمة في قسم الأدوية ومستشفى شينزن للطب الصيني التقليدي بأرقام 2010015Z و 2010024ZZ و 2010037Z و 2040056Z و 202086Z و 2010006Z و 2010040Z و 2010008ZZ على التوالي. تم التحقق من ضمان مراقبة الجودة لجميع المواد وفقًا لدستور الأدوية الصيني (لجنة دستور الأدوية الصيني ، 2015). Astragali Radix (30 جم) ، Atractylodis Macrocephalae Rhizoma (10 جم) ، Dioscoreae Rhizoma (30 جم) ،سيستانش هربا(10 جم) ، Amomi Fructus Rotundus (10 جم) ، Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma (15 جم) ، Rhei Radix et Rhizoma (10 جم) ، و Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Praeparata cum Melle (6 جم) تم وزنها واستخراجها في الغليان ماء (1.2 لتر) مرتين لمدة ساعة. بعد الطرد المركزي ، تم تجفيف المادة الطافية تحت ضغط مخفض إلى مسحوق ، وتم تخزينها عند -80 درجة. قبل المعالجة ، تمت إعادة إذابة المسحوق بماء Milli-Q ودوامة في درجة حرارة الغرفة للحصول على مستخلص JPYS.
قبل معالجة المستخلص على الحيوانات ، تم توحيد مستخلص JPYS كيميائيًا. تم تطوير بصمة HPLC عند 260 نانومتر لمستخلص JPYSF (الشكل 8): تم استخدام معيار مرجعي فردي لتأكيد يجب تحديد العديد من المكونات الكيميائية من المستخلص عن طريق تحليل HPLC ، مثل danshensu الصوديوم ،إشنكوسايد, أكتيوسيدو calycosin {{0} Ob-glucoside و salvianolic acid B و formononetin و rhein. الى جانب ذلك ، فإن الحد الأدنى من المتطلبات لمبالغإشنكوسايدو salvianolic acid B و rhein يجب ألا يقل عن 1.2mg / g و 5.7 mg / g و 0. 2mg / g من المستخلص المجفف. كان ناتج الاستخراج أقل من 32.59 ± 1.1 بالمائة (وزن / وزن ، متوسط ± SD ، ن =3). وصل المقتطف المستخدم هنا إلى المتطلبات المذكورة أعلاه.
سيستانشيمكن أن يخففمرض كلوي
حيوانات تجريبية.
كانت البروتوكولات التجريبية والتغذية متوافقة مع الإرشادات الصحية الوطنية وتمت الموافقة عليها من قبل جامعة قوانغتشودواء صينيلجنة رعاية الحيوان المؤسسية واستخدامه. تم شراء ذكور فئران Sprague – Dawley من مركز حيوانات مختبر قوانغدونغ الطبي (GDMLAC ، الصين) ، رقم الإذن SCXK (YUE) 2013-0002 بوزن 190-220 جم. كانت الحيوانات تحت درجة حرارة الغرفة التي يتم التحكم فيها (20 ± 1 درجة) وفي حالة رطوبة لمدة 12 / {{6} ساعة دورة مظلمة فاتحة ، وكان عليها الوصول إلى الماء والطعام بالشهرة الإعلانية. تم تحفيز CKD عن طريق استئصال الكلية من خطوتين 5/6 كما هو موضح سابقًا. باختصار ، تضمنت جراحة الكلى الأولى الكي الكهربائي للكلى اليسرى باستثناء منطقة 2- مم حول النقير. تم إجراء جراحة الكلى الثانية بعد أسبوع واحد عن طريق الربط المزدوج للنقير الكلوي بخياطة الحرير والاستئصال الجراحي للكلية اليمنى. وتتكون جراحة الشام من تخدير ، وفتح شق جراحي لكشف الكلى ، وإغلاق جدار البطن.
إدارة الأدوية.
بعد 16 أسبوعًا من العملية ، كانت مستويات Scr في مجموعة استئصال الكلية 5/6 أعلى بكثير من تلك الخاصة بالمجموعة الصورية (p<0.05). ten,="" the="" 5/6="" nephrectomy="" group="" was="" randomly="" divided="" into="" two="" groups:="" ckd="" group="" (5/6="" nx,="" n="10):" ckd="" rats="" were="" treated="" with="" distilled="" water="" and="" jpys="" group="" (5/6="" nx+jpys="" decoction,="" n="10):" ckd="" rats="" that="" were="" orally="" administrated="" a="" dose="" of="" 10.89="" mg/kg="" of="" jpys="" decoction="" daily.="" the="" sham-operated="" rats="" were="" also="" treated="" with="" distilled="" water.="" te="" drugs="" were="" administered="" for="" 6="" weeks.="" all="" rats="" used="" in="" this="" study="" received="" humane="">
المعلمات البيوكيميائية.
بعد 6 أسابيع من العلاج ، تم التضحية بالجرذان مع بنتوباربيتال الصوديوم وتم جمع عينات الدم على الفور. تم الكشف عن الفهارس البيوكيميائية في المصل Scr و BUN و ALB باستخدام محلل الكيمياء الحيوية الأوتوماتيكي من روش.
الدراسات المورفولوجية (تلطيخ HE ، SDH). تم تلوين أقسام العضلات المشلولة المستعرضة (6 مم) بالهيماتوكسيلين والأيوزين (HE) بما يتماشى مع المعايير. تم بعد ذلك قياس منطقة المقطع العرضي للألياف العضلية (CSA) بالطريقة كما ذكرنا سابقًا. تم قياس مساحة المقطع العرضي للألياف لما يقرب من 100 ألياف عضلية مجاورة في كل قسم لكل فأر باستخدام برنامج Image J 1.32 j (المعاهد الوطنية للصحة ، بيثيسدا ، دكتوراه في الطب ، الولايات المتحدة الأمريكية).
تم تلطيخ الأجزاء المجمدة من عضلة TA بنزع هيدروجين السكسينات (SDH ، المركب II من السلسلة التنفسية) لقياسات نشاط SDH وتصنيف نوع الألياف إلى I (مؤكسد بطيء) ، IIa (حال السكر التأكسدي السريع) ، أو IIb (سريع التأكسد) حال السكر) وفقًا لبروتوكول موصوف مسبقًا. باختصار ، تم السماح للمقاطع أولاً بالوصول إلى درجة حرارة الغرفة وتم ترطيبها باستخدام PBS (الرقم الهيدروجيني 7.4). كانت الأقسام
ثم تم تحضينها في محلول يحتوي على nitroblue tetrazolium (1.5 ملي مولار) ، وسكسينات الصوديوم (13 0 ملي مولار) ، وميثوسلفات الفينازين (0. 2 ملي مول) ، وأزيد الصوديوم (0. 1 ملي مولار) ) لمدة 6 {{3 0}} دقائق. تم بعد ذلك غسل المقاطع العرضية 3 مرات في برنامج تلفزيوني ، وتجفيفها في 75 في المائة (30 ثانية) ، و 90 في المائة (30 ثانية) ، و 100 في المائة (10 دقائق) من الإيثانول وتغطيتها بمزيج من 50 في المائة (حجم / حجم) جلسرين و 2.5 في المئة (وزن / حجم) ثلاثي إيثيلين ديامين في 0.01 م PBS. تم التقاط صور العضلات باستخدام مجهر (Nikon Eclipse Ti-SR ، اليابان) وتم ترقيمها كصور ذات مستوى رمادي على برنامج التصوير NIS-Elements المدعوم بالكمبيوتر الإصدار 4.10 (Eclipse Ti-SR ، Nikon Corporation ، طوكيو ، اليابان) . كانت قيمة المستوى الرمادي للصفر تعادل 100 بالمائة من انتقال الضوء (بالمائة T) ، وقيمة 255 كانت تعادل 0 بالمائة T. تم تحديد قيمة الكثافة الضوئية لجميع ألياف العضلات بناءً على الصور ذات المستوى الرمادي (Scion Image، Scion، Frederick، MD) وتصنيفها إلى ثلاث مجموعات ، I (بالمائة T: 100-80 بالمائة) ، IIa (بالمائة T: 60-40 بالمائة) و IIb (بالمائة T: 20–0 بالمائة).
تحليل البنية التحتية (المجهر الإلكتروني للإرسال ، TEM).
كانت الإجراءات التفصيلية لـ TEM للعضلات كما تم الإبلاغ عنها سابقًا. باختصار ، تم إصلاح أجزاء من TA العضلات بحجم 1 مم 3 في 2.5 في المائة من الجلوتارالدهيد تليها التثبيت اللاحق في 1 في المائة من حمض الأسميك لفحوصات الفحص المجهري الإلكتروني. تم استخدام برنامج Image J لتحليل الصور التي تم جمعها بواسطة EM (JEM -1400 ، JEOL Ltd. ، طوكيو ، اليابان) تحت x12 ، 000 التكبير. تم تحديد محتوى الميتوكوندريا من خلال تحديد عدد وحجم (القطر الأدنى) لكل ميتوكوندريا لكل حقل. تم تحليل ما مجموعه 20 حقلاً لكل حالة من خلال الاستفادة من Image J sofware56.
تخليق البروتين وتدهور البروتين.
تم قياس تخليق البروتين وتدهور البروتين في المختبر باستخدام دمج {{0} C phenylalanine (Phe) وإطلاق التيروزين كما هو موضح سابقًا 57-59.
قياس الأنشطة البروتينية.
تم قياس تي كيموتريبسين والنشاط الشبيه بالتريبسين لبروتيازوم 20 إس في المختبر في عضلة الساق كما وصفنا سابقًا.
النشاف الغربي.
تم تجانس أنسجة عضلات عضلات الفخذ المجمدة في مخزن مؤقت للتحلل كما ذكرنا سابقًا. تم فصل بروتينات العصارة الخلوية على هلام SDS-PAGE بنسبة 10 بالمائة ثم نقلها إلى غشاء PVDF (مختبرات Bio-Rad ، هرقل ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة). تم حظر مواقع الارتباط غير المحددة للغشاء في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة مع 5 في المائة من الحليب المجفف الخالي من الدسم في محلول ملحي مخزّن من Tris مع توين (TBST) ثم تم تحضينها طوال الليل عند 4 درجات مع الأجسام المضادة الأولية. بعد الغسل باستخدام TBST ، تم تحضين الأغشية بأجسام مضادة ثانوية لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة مع الرج. بعد الغسيل ، تم اكتشاف شرائط البروتين وتحليلها باستخدام نظام التصوير ChemiDoc ™ MP (مختبرات Bio-Rad ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة). تم التعبير عن النتائج على أنها كثافة بصرية متكاملة بالنسبة إلى GAPDH. p-AMPK (1: 1000 ، # 2535) ، p-FoxO3a (1: 1000 ، # 13129) ، SQSTM1 / p62 (1: 1000 ، # 5114) ، Mitofusin -2 (1: 1000 ، # 9482) ، FoxO3a (1: 1000، # 2497)، DRP1 (1: 1000، # 8570)، Cox IV (1: 1000، # 4844)، BNIP3L / Nix (1: 1000، # 12396) Beclin -1 ( 1: 1000 ، # 3495T) والأجسام المضادة AMPK (1: 1000 ، # 5831) كانت من Cell Signaling Technologies (Danvers ، MA ، US). الأجسام المضادة LC3 I / II (1: 1000 ، ab58610) ، باركين (1: 1000 ، ab77924) و PINK1 (1: 1000 ، ab23707) كانت من Abcam (كامبريدج ، المملكة المتحدة). كان الجسم المضاد ATP5B (1: 1000 ، ARP 48185_ T100) من شركة Aviva Systems Biology (سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة). كان الجسم المضاد MuRF1 (1: 1000 ، GTX110475) من جين تكس (سان أنطونيو ، تكساس ، الولايات المتحدة). كانت الأجسام المضادة Fis1 (1: 100 ، sc -98900) و NRF -1 (1: 100 ، sc -33771) من سانتا كروز Biotechnology (كاليفورنيا ، الولايات المتحدة). كان OPA1 (1: 1000 ، 612606) من شركة BD Biosciences (سان خوسيه ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة). أتروجين -1 (1: 1000 ، AP2041) كان من ECM Biosciences (فرساي ، كنتاكي ، الولايات المتحدة). PGC -1 (1: 2000 ، NBP 1-04676) كان من شركة Novus Biological (كولورادو ، الولايات المتحدة). كان GAPDH (1: 1000 ، 60004-1- Ig) من Proteintech (شيكاغو ، إلينوي ، الولايات المتحدة).
الإحصاء التحليلات.
تم تحليل البيانات باستخدام SPSS 16. 0 (SPSS Inc.، Chicago، IL، USA). تظهر النتائج على أنها تعني ± SD. تم تحليل البيانات الموزعة بشكل طبيعي بواسطة ANOVA أحادي الاتجاه متبوعًا باختبار الفرق الأقل أهمية (LSD) ، بينما تم تحليل البيانات دون التوزيع الطبيعي باستخدام اختبار Games-Howell. تم اعتبار الفروق ذات دلالة إحصائية لـ P <0.>
سيستانشيستطيع التحسنوظائف الكلى
References
1. تشين ، ديري كوينet al. تظهر تعبيرات الجينات والبروتينات وعملية التمثيل الغذائي إشارات الأكسدة والاختزال النشطة ، ويرتبط مسار wnt / -catenin بخلل التمثيل الغذائي في المرضى الذين يعانون من أمراض الكلى المزمنة.Reفعلx Biol.12 ، 505-521 ، دوى: 10.1016 / j. redox.2017.03.017 (2017).
2. تشين ، ل.et al. دور تنشيط محور RAS / Wnt / beta-catenin في التسبب في إصابة خلايا podocyte واعتلال الكلية tubulointerstitial.الفصلem Biol Interact273 ، 56-72 ، دوى: 10.1016 / j.cbi.2017.05.025 (2017).
3. تشاو ، YYet al. التحقيق الأيضي داخل الكلى لأمراض الكلى المزمنة وآلية TGF-beta1 في الفئران المستحثة بالأدينين باستخدام UPLC Q-TOF / HSMS / MS (E).J. Proteome Res. 12, 2692–2703 (2013).
4. تشين ، هـ.et al. رؤى الأيض في إشارات الأكسدة والاختزال النشطة واختلال التمثيل الغذائي للدهون في تطور مرض الكلى المزمن.Rايدوx Biol. 10, 168–178 (2016).
5. تشين ، ديري كوينet al. ربط بين النمط الظاهري وأيض الأحماض الدهنية في أمراض الكلى المزمنة المتقدمة.Neفتاهrol. Dial. Trاsplاt. دوى: 10.1093 / ndt / gfw415 (2017).
6. Zhao، YY، Liu، J.، XL، C.، Bai، X. & Lin، RC دراسة الأيض البولي على التغيرات البيوكيميائية في نموذج تجريبي للفشل الكلوي المزمن بواسطة الأدينين على أساس UPLC Q-TOF / MS.Cليn. Chim. Acta 413, 642–649 (2012).
7. Kovesdy، CP & Kalantar-Zadeh، K. لماذا يرتبط إهدار الطاقة بالبروتين بالوفيات في أمراض الكلى المزمنة؟Semiغروبية in نيفrology29 ، 3-14 ، دوى: 10.1016 / j.semnephrol.2008.10.002 (2009).
8. Wang، XH & Mitch، WE آليات الهزال العضلي في أمراض الكلى المزمنة.Nature reviews. Neفتاهrology10 ، 504-516 ، دوى: 10.1038 / nrneph.2014.112 (2014).
9. Romanello، V. & Sandri، M. Mitochondrial Quality Control and Muscle Mass صيانة.Frعلىtiers in فتاهysiology6 ، 422 ، دوى: 10.3389 / fphys.2015.00422 (2015).
10. Tian، T.، Chen، H. & Zhao، YY الاستخدامات التقليدية ، الكيمياء النباتية ، الصيدلة ، علم السموم ومراقبة الجودة في Alisma Orientale (Sam.) Julep: مراجعة.J Etحنوفهاrmacol158 ، 373-387 ، دوى: 10.1016 / j.jep.2014.10.061 (2014).
11. Zhong ، Y. ، Menon ، MC ، Deng ، Y. ، Chen ، Y. & He ، JC التطورات الحديثة في الطب الصيني التقليدي لأمراض الكلى.Am. J. Kiدنيy Dis.66 ، 513-522 ، دوى: 10.1053 / j.ajkd.2015.04.013 (2015).
12. Zhao، YY الاستخدامات التقليدية ، الكيمياء النباتية ، الصيدلة ، الحرائك الدوائية ومراقبة الجودة للبطاطس المقلية Polyporus umbellatus (Pers.): مراجعة.J Etحنوفهاrmacol 149, 35–48 (2013).
13. وانج ، م.et al. يسلط علم الأيض الضوء على النشاط الحيوي الدوائي والآلية الكيميائية الحيوية للطب الصيني التقليدي.الفصلem Biol Interact. 273 ، 133-141 ، دوى: 10.1016 / j.cbi.2017.06.011 (2017).
14. تشاو ، YYet al. دراسة التمثيل الغذائي للدواء عن أمراض الكلى المزمنة والتأثير العلاجي للإرجون بواسطة UPLC-QTOF / HDMS.PLoS Oشمال شرق23، e115467، doi: D - NLM: PMC4275224 EDAT - 2014 / 12 / 24 06: 00 MHDA - 2016 / 03 / 02 06: {{11} } CRDT - 2014 / 12 / 24 06: 00 PHST - 2014 / 06/24 [تم استلام] PHST - 2014 / 11/23 [تم قبول] AID {{ 22}}. 1371 / journal.pone.0115467 [doi] AID - PONE-D -14-23166 [pii] PST - epublish (2014).
15. ب رونالدو ، ب. وساندري ، M. الآليات الخلوية والجزيئيةضمور العضلات. Disعصامse mقصيدةls & mecهانisms6 ، 25-39 ، دوى: 10.1242 / dmm.010389 (2013).
16. بودين ، كارولاينا الجنوبيةet al. تحديد ليغازات يوبيكويتين المطلوبة للهيكل العظميضمور العضلات. Science294 ، 1704-1708 ، دوى: 10.1126 / العلوم .1065874 (2001).
17. Gomes ، MD ، Lecker ، SH ، Jagoe ، RT ، Navon ، A. & Goldberg ، AL Atrogin -1 ، وهو بروتين F-box خاص بالعضلات يتم التعبير عنه بشدة أثناءضمور العضلات. الإجراءات من ال وطني الأكاديمية من علوم من ال متحد تنص على من أمريكا 98، 14440–14445 ، دوى: 10.1073 / المقالي .251541198 (2001).
18. Youle، RJ & Narendra، DP آليات التخفيف.Nature rإيفiews. Molecular ceليرة لبنانية biology12 ، 9-14 ، دوى: 10.1038 / nrm3028 (2011).
19. سانشيز ، إيه إم ، كانداو ، آر بي ، برناردي ، عوامل النسخ H. FoxO: أدوارهم في الحفاظ على التوازن العضلي الهيكلي.مليرة لبنانيةular و molوحدة نقدية أوروبيةlar الحياةe الشوريiencإس: CMLS71 ، 1657–1671 ، دوى: 10.1007 / ثانية 00018-013-1513- ض (2014).
20. Barbieri، E.et al. التأثير متعدد الاتجاهات للتمرينات البدنية على ديناميات الميتوكوندريا في شيخوخة العضلات الهيكلية.Oxiداtiهاء mإدiciشمال شرق و الخلوية lالعمر2015 ، 917085 ، دوى: 10.1155/2015/917085 (2015).
21. Cannavino، J.، Brocca، L.، Sandri، M.، Bottinelli، R. & Pellegrino، MA PGC 1- alpha over expression تمنع التغيرات الأيضية والنعليةضمور العضلاتفي الفئران المؤخرة تفريغها.ال Jourغl of فيزiology592 ، 4575-4589 ، دوى: 10.1113 / Physiol.2014.275545
22. Lira، VAet al. ينظم أكسيد النيتريك و AMPK بشكل تعاوني PGC -1 في خلايا العضلات والهيكل العظمي.ال Jourغl of فتاهysiology588 ، 3551–3566 ، دوى: 10.1113 / Physiol.2010.194035 (2010).
23. Zhuang، P.et al. عكسعضلةتلاشيبواسطة زوج الأعشاب Zhimu و Huangbai عن طريق تنشيط IGF -1 / Akt وإشارة الالتهام الذاتي في مخبأ السرطان.SفوقRTive care in cاcer: oوما يليهاicial jourغl of tهو Multiغtiعلىl Associatiعلى of SفوقRTive كاليفورنياre in يستطيعcer24 ، 1189-1198 ، دوى: 10.1007 / ثانية 00520-015-2892-5 (2016).
24. دونغ ، واي.et al. تعمل حبيبات Bufei Jianpi على تحسين العضلات الهيكلية والخلل الوظيفي في الميتوكوندريا في الفئران المصابة بمرض الانسداد الرئوي المزمن.BMC complementary و alterغtive mediciشمال شرق15 ، 51 ، دوى: 10.1186 / ثانية 12906-015-0559- × (2015).
25. كيشيدا ، ي.et al. Go-shajinki-Gan (GJG) ، دواء عشبي ياباني تقليدي ، يحمي من ساركوبينيا في الفئران المتسارعة للشيخوخة.دكتوراهytomedicine: interغtiعلىl jourغl of فتاهytotherا ف بy و فتاهytأوفاrmacology22 ، 16-22 ، دوى: 10.1016 / ي. مقفى.2014.11.005 (2015).
26. Zhang، J.et al. عكسعضلةتلاشيبواسطة زوج عشب Zhimu-Huangbai عبر مسار إشارة Akt / mTOR / FoxO3 في الفئران المصابة بداء السكري التي يسببها الستربتوزوتوسين.PloS علىe9 ، e100918 ، دوى: 10.1371 / journal.pone.0100918 (2014).
27. Zhang، ZHet al. يكشف تحليل الدهون والأيض المتكامل عن تأثير واقي للكلية وآلية كيميائية حيوية لـ Rheum Officinale في الفشل الكلوي المزمن.الشوريi. Rالجيش الشعبي.6 ، 22151 ، دوى: 10.1038 / srep22151 (2016).
28. Zhao، YYet al. Ergosta -4 ، 6،8 (14) ، 22- تضاريس -3- معزولة عن Polyporus umbellatus ، تمنع الإصابة الكلوية المبكرة في جرذان اعتلال الكلية الناجم عن حمض الأرستولوكيك.J فاrm فاrmacol63 ، 1581-1586 ، دوى: 10.1111 / j. 2042-7158. 2011.01361.x (2011).
29. Zhao، YYet al. توفر الدراسة الأيضية المعتمدة على الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الأداء للتأثير العلاجي للطبقة السطحية لبوريا كوكوس على مرض الكلى المزمن الناجم عن الأدينين رؤية جديدة لآلية مكافحة التليف.PLoS One8 ، e59617 ، دوى: 10.1371 / journal.pone.0059617 (2013).
30. Zhao، YYet al. تأثير Agosta -4، 6،8 (14)، 22- tetra -3- واحد (واحد) على جرذ الفشل الكلوي المزمن الناجم عن الأدينين: دراسة التمثيل الغذائي في الدم على أساس سائل فائق الأداء اللوني / قياس الطيف الكتلي عالي الحساسية مقترنًا بخوارزمية MassLynx i-FIT.Cليn. الفصلim. Acta413 ، 1438-1445 ، دوى: 10.1016 / j.cca.2012.06.005 (2012).
31. Zhao، YYet al. دراسة الأيض البولي حول التأثيرات الوقائية لـ Agosta -4، 6،8 (14)، 22- tetra -3- واحد على الفشل الكلوي المزمن في الجرذان باستخدام UPLC Q-TOF / MS ورواية تقنية جمع البيانات MSE.Process Biochem47 ، 1980-1987 ، دوى: 10.1016 / ي. procbio.2012.07.008 (2012).
32. Zhang، ZHet al. رؤى الأيض في أمراض الكلى المزمنة والتأثير التعديلي للراوند ضد التليف النبيبي الخلالي.الشوريi. Rالجيش الشعبي.، 14472 ، دوى: 10.1038 / srep14472 (2015).
33. Zhao، YY، P.، L.، Q.، CD، L.، FY & Bai، X. التنميط الأيضي الكلوي للإصابة الكلوية المبكرة والتأثيرات الوقائية للكلى لبوريا كوكوس البشرة باستخدام UPLC Q-TOF / HSMS / MSE.J فاrm Biomإد Aغl81-82 ، 202-209 ، دوى: 10.1016 / j.jpba.2013.03.028 (2013).
34. Singla، R.، Gupta، Y. & Kalra، S. التأثيرات العضلية الهيكلية لمرض السكري.JPMA. ال Jourغl of tهو بنسلفانياkistا Mإدical Associaتيعلى 65, 1024–1027 (2015).
35. Stitt، TNet al. يمنع مسار Te IGF -1 / PI3K / Akt التعبير عنعضلةتلاشيubiquitin ligases المستحثة عن طريق تثبيط عوامل نسخ FOXO.Molوحدة نقدية أوروبيةlar مليرة لبنانية 14, 395–403 (2004).
36. وانغ ، DTet al. تساهم مكملات الأحماض الكيتونية في التنظيم الأعلى لمسار Wnt7a / Akt / p70S6K والتنظيم السفلي لأنظمة موت الخلايا المبرمج و ubiquitin-proteasome في عضلات الفئران المصابة بالكلوم 5/6.ال British jourغl of نوآرitiعلى111 ، 1536-1548 ، دوى: 10.1017 / S0007114513004091 (2014).
.Oxiداtiهاء medicine و ceليرة لبنانيةular lاونجإيفity2015 ، 684965 ، دوى: 10.1155/2015/684965 (2015).
38. Tawa، NE Jr.، Odessey، R. & Goldberg، AL Inhibitors of the proteasome تقلل من تحلل البروتين المتسارع في ضمور عضلات الهيكل العظمي للجرذان.تي Jourغl of cليnical inهاءstiالجاtiعلى100 ، 197-203 ، دوى: 10.1172 / JCI119513 (1997).
39. كالنان ، DR & Brunet ، كود A. Te FoxO.Oncogene27 ، 2276-2288 ، دوى: 10.1038 / يوم 2008.21 (2008).
40. ساندري ، م.et al. تحفز عوامل نسخ Foxo أتروجين اليوبيكويتين ligase المرتبط بالضمور -1 وتسبب الهيكل العظميعضلةتلاشي. Ceليرة لبنانية 117, 399–412 (2004).
41. تاماكي ، م.et al. يقلل مرض الكلى المزمن من الميتوكوندريا العضلية ويمارس القدرة على التحمل وتفاقمها بواسطة البروتين الغذائي من خلال تعطيل البيروفات ديهيدروجينيز.Kiدنيy interغtiعلىl85 ، 1330-1339 ، دوى: 10.1038 / ki.2013.473 (2014).
42. Yokoi، H. & Yanagita، M. انخفاض حجم العضلات في مرض الكلى المزمن: دور الميتوكوندريا في العضلات الهيكلية.Kidney interغtiعلىl85 ، 1258-1260 ، دوى: 10.1038 / ki.2013.539 (2014).
43. Hood، DA Invited Review: الانقباض الناجم عن النشاط الحيوي للميتوكوندريا في العضلات الهيكلية.Jourغl of تطبيقليإد physiology 90, 1137–1157 (2001).
44.لين ، ج.et al. يدفع المنشط المشترك النسخي PGC -1 ألفا إلى تكوين ألياف عضلية بطيئة النتوء.Nature418 ، 797-801 ، دوى: 10.1038 / nature00904 (2002).
45. Wu، Z.et al. آليات التحكم في التكوُّن الحيوي للميتوكوندريا والتنفس من خلال المُنشِّط المُولِّد للحرارة PGC -1.مليرة لبنانية98، 115–124، doi: 10.1016 / S 0092-8674 (00) 80611- X (1999).
46. Adhihetty ، PJ ، O'Leary ، MF ، Chabi ، B. ، Wicks ، KL & Hood ، DA تأثير إزالة التعصيب على موت الخلايا المبرمج بوساطة الميتوكوندريا في العضلات الهيكلية.Jourغl of تطبيقليed فتاهysiology102 ، 1143-1151 ، دوى: 10.1152 / J Appl Physiol.00768.2006 (2007).
47. Baker، DJ، Betik، AC، Krause، DJ & Hepple، RT لا يوجد انخفاض في القدرة التأكسدية للعضلات الهيكلية مع تقدم العمر في الفئران المقيدة السعرات الحرارية على المدى الطويل: التأثيرات مستقلة عن سلامة الحمض النووي للميتوكوندريا.ال jourغls of جنرال الكتريكrعلىtology. حد ذاتهاries A, Biological علوم و طبي علوم 61, 675–684 (2006).
48. زشنر ، س.et al. يزيل النقص الكلي للعضلات الهيكلية PGC -1 اختلالات الميتوكوندريا من تحديد نوع الألياف وحساسية الأنسولين.Ceليرة لبنانية metابوليsm12 ، 633-642 ، دوى: 10.1016 / j.cmet.2010.11.008 (2010).
49. ميزوشيما ، إن ، وكوماتسو ، م. الالتهام الذاتي: تجديد الخلايا والأنسجة.Ceليرة لبنانية147 ، 728-741 ، دوى: 10.1016 / j.cell.2011.10.026 (2011).
50. Kang، C.، Yeo، D. & Ji، LL يعمل تثبيت العضلات على تنشيط التخفيف ويعطل ديناميكيات الميتوكوندريا في الفئران.Actaعلم وظائف الأعضاء 218 ، 188-197 ، دوى: 10.1111 / apha.12690 (2016).
51. تشان ، دي سي اندماج وانشطار الميتوكوندريا في الثدييات.Annual rإيفiew of ceليرة لبنانية و deهاءlمرجع سابقmental biology22، 79-99، doi: 10.1146 / year.cell bio.22.010305.104638 (2006).
52. Benard ، G. & Karbowski ، M. اندماج وانقسام الميتوكوندريا: التنظيم والدور في حيوية الخلية.حد ذاتهاmiغروبية in مليرة لبنانية & dحواءlمرجع سابقmental biology 20, 365–374 (2009).
53. Zhao، J.et al. ينشط FoxO3 بشكل متناسق تدهور البروتين عن طريق مسارات البلعمة الذاتية / الليزوزومية والبروتوزومية في ضمور خلايا العضلات.Ceليرة لبنانية metابوليsm6 ، 472-483 ، دوى: 10.1016 / j.cmet.2007.11.004 (2007).
54. Romanello، V.et al. يساهم انشطار الميتوكوندريا وإعادة تشكيلها فيعضلةتلاشي. تي EMBO jourغl29 ، 1774-1785 ، دوى: 10.1038 / emboj.2010.60 (2010).
55. Sun، H.et al. يحسن Astragaloside IV إصابة الكلى في الفئران ديسيبل / ديسيبل.علمي reصRTs6 ، 32545 ، دوى: 10.1038 / srep32545 (2016).
56. Barreto، R.et al. يرتبط الدنف المرتبط بالعلاج الكيميائي باستنفاد الميتوكوندريا وتفعيل ERK1 / 2 و p38 MAPKs.Oncotarجنرال الكتريكt7 ، 43442-43460 ، دوى: 10.18632 / oncotarget.9779 (2016)
57. Voltarelli، FA & de Mello، MA Spirulina عزز بروتين العضلات والهيكل العظمي في الفئران النامية.الاتحاد الأوروبيropean jourغl of نوآرitiعلى47 ، 393-400 ، دوى: 10.1007 / ثانية 00394-008-0740-9 (2008).
58. Rannels، DE، Kao، R. & Morgan، HE. تأثير الأنسولين على دوران البروتين في عضلة القلب.تي Jourغl of biologiكاليفورنياl تشيmiشارعy 250, 1694–1701 (1975).
59. Waalkes، TP & Udenfriend، S. طريقة قياس الفلور لتقدير التيروزين في البلازما والأنسجة.تي Jourغl of lابوratoراي و cليniكاليفورنياl mإدiciشمال شرق 50, 733–736 (1957).