الجزء 2: تأثير Acteoside كواقي للخلايا لإنتاج كلب مستنسخ

جي هاي لي 1 ، جو لان تشون 1 ، كيون جونغ كيم 1 ، أون يونغ كيم 1 ، دونغ هي كيم 1 ، بو ميونغ لي 1 ، كيل وو هان 1 ، كانغ صن بارك 1 ، كيونغ بون لي 2 ، مين كيو كيم 1 *

اتصال:joanna.jia@wecistanche.com

الرجاء النقر هنا للجزء 1

الرجاء النقر هنا للجزء 3

أكتوسيدفيcistancheلديه الكثيرصحةفوائد

تحليل احصائي

تم تحليل البيانات باستخدام إحصائيات IBM SPSS (SPSS Inc. ، Chicago ، IL USA) عن طريق اختبار ANOVA أحادي الاتجاه واختبار Tukey للفرق المهم بصدق. تم اعتبار الفروق ذات دلالة إحصائية عندما كانت قيمة P أقل من 0. 05.

نتائج

تأثير أكتيوسيد على مزامنة دورة الخلية

تأثيرأكتيوسيدتم التحقيق في مزامنة دورة الخلية باستخدام فرز الخلايا المنشطة الفلورية (FACS) (الجدول 1). تم علاج الأرومات الليفية الجنينية النابية بتركيزات مختلفة منأكتيوسيد(1 0 ، 3 0 ، 50 ميكرومتر) لفترات مختلفة (24 ، 48 ، 72 ساعة) ، وتم فصل الخلايا إلى مرحلة G0 / G1 ومرحلة S ومرحلة G2 / M بواسطة FACS. تمت مقارنة نتائج FACS مع تلك الخلايا المتزامنة عن طريق تجويع المصل وتثبيط الاتصال. أدى تجويع المصل إلى أعلى معدل لمزامنة دورة الخلية (88.2 بالمائة) في مرحلة G0 / G1 مقارنةً بتثبيط التلامس (84.6 بالمائة) وأكتيوسيدالعلاج (80.8-84.5 في المائة).أكتوسيدتسبب العلاج لمدة 24 ساعة في مزامنة دورة الخلية G 0 / G1 بأقل كفاءة (8 0. 8 و 81.1 و 82.0 بالمائة).أكتوسيدكان الأكثر فاعلية في إحداث مزامنة دورة الخلية G 0 / G1 بتركيز 30 ميكرومتر ومدة علاج تبلغ 48 ساعة (84.5 بالمائة). ومع ذلك ، لم يكن هناك فرق كبير بين التركيزات ومددأكتيوسيدالعلاج في تحريض تزامن دورة الخلية G1 / G 0. شاملة،أكتيوسيدلم يظهر العلاج أي فرق معنوي مقارنة بتجويع المصل وتثبيط التلامس من حيث مزامنة دورة الخلية G {0} / G1. لم يكن هناك أيضًا اختلاف في مزامنة دورة الخلية في المرحلة S بين المجموعات الثلاث. بالإضافة إلى ذلك ، كانت نسبة الخلايا التي تم القبض عليها في المرحلة G2 / M مماثلة لتلك الموجودة في الخلايا التي تم القبض عليها في المرحلة G0 / G1.

الجدول 1. تأثير تثبيط التلامس ، تجويع المصل ، وأكتيوسيدالعلاج على تزامن دورة الخلية في الأرومات الليفية الجنينية.

الشكل 1. مستويات ROS في الأرومات الليفية الجنينية. مزامنة دورة الخلية عن طريق (أ) تثبيط التلامس ، (ب) تجويع المصل ، و (ج) 30 ميكرومتر علاج أكتيوزيد لمدة 48 ساعة. تُظهر الرسوم البيانية مستويات ROS المكتشفة في الأرومات الليفية الجنينية.

تأثير أكتيوسيد على ROS وموت الخلايا المبرمج

تأثيرأكتيوسيدعلى ROS بواسطة FACS باستخدام carboxy-H2DCFDA ، وهو مؤشر الإجهاد التأكسدي الذي يتم تنشيطه في الخلايا عندما تزيل الإسترات مجموعات الأسيتات بين الخلايا (الشكل 1). تم اكتشاف أنواع الأكسجين التفاعلية عند مستويات أقل في الخلايا المعالجة بالإكتيوزيد مقارنة بالخلايا المتزامنة عن طريق تجويع المصل أو تثبيط التلامس. كان مستوى ROS أقل بشكل ملحوظ في مجموعة العلاج بأكتيوسيد (42.8 بالمائة) مقارنة بمجموعتي تثبيط التلامس والتجويع في المصل (54.3 و 99.5 بالمائة على التوالي) (الجدول 2).

لفهم تأثيرأكتيوسيدعلى بقاء الخلية وموتها ، تم التحقيق في موت الخلايا المبرمج في الخلايا بعد تحريض تزامن دورة الخلية. كان معدل البقاء على قيد الحياة للخلايا المعالجة بأكتيوسيد (94.8 ± 1.2 بالمائة) أعلى بكثير من كل من مجموعات تثبيط التلامس والتجويع في المصل (87.3 ± 0. 5 بالمائة) (الشكل 2 د). معدلات موت الخلايا المبرمج في مجموعة تجويع المصل

(52.1 ± 5.3 بالمائة) كانت أعلى بكثير من تلك الموجودة في مجموعات تثبيط التلامس ومعالجة الأكتوزيد (الشكل 2E). كانت نسبة موت الخلايا المبرمج التي لوحظت في مجموعة تثبيط التلامس 10.6 في المائة ، والتي كانت أيضًا أعلى بكثير من مجموعة العلاج بأكتيوسيد (4.2 في المائة) (الشكل 2E). بالإضافة إلى ذلك ، كان هناك نخر أقل في الخلايا المعالجة بالاكتوزيد مقارنة بتلك الموجودة في مجموعة تثبيط التلامس (الشكل 2F).

سيستانشيمكن أن يعزز أكتيوسيد الصحراءحصانةوتقليلموت الخلايا المبرمج

تأثير أكتيوسيد على التطور المختبري لأجنة نقل نواة الكلاب

للتحقيق في تأثير الأكتيوسايد في تطور الجنين باستخدام تقنية نقل نواة الخلية ، تم نقل الخلايا المانحة النووية إلى البويضات المنواة للكلاب بعد مزامنة دورة الخلية بواسطةأكتيوسيد. كما هو مبين في الجدول 3 ، لم تكن هناك فروق ذات دلالة إحصائية في التطور المبكر للجنين من النواة

الجدول 2. التحديد الكمي لـ ROS

الشكل 2. معدلات بقاء الخلية ، موت الخلايا المبرمج ، ونخر الأرومات الليفية الجنينية. الخلايا المبرمج في تثبيط التلامس (أ) ، تجويع المصل (ب) و (ج) 30 ميكرومترأكتيوسيدتم تحديد العلاج لمدة 48 ساعة بواسطة FACS ؛ التحليل الكمي لنتائج FACS لبقاء الخلية (D) وموت الخلايا المبرمج (E) ونخر (F). تم تكرار هذه التجربة أربع مرات بشكل مستقل. (ص<>

خلايا مانحة مع طرق مزامنة مختلفة لدورة الخلية إما لتثبيط التلامس أو علاج أكتيوزيد. ومع ذلك ، فإن أجنة SCNT النابية هي فقط التي تمت هندستها باستخدام الخلايا المانحة النووية التي تمت مزامنتها في المرحلة G 0 / G1 مع Acteoside التي تم تطويرها بعد 10- مرحلة جنين الخلية.

إنتاج كلب مستنسخ باستخدام خلايا مزروعة بهاأكتيوسيد

تم نقل 57 أجنة كلاب مستنسخة تم إنتاجها باستخدام خلايا مانحة مثبطة للتلامس جراحياً إلى قنوات البيض لـ 6 متلقين. لم ينتج أي من المتلقين الستة ذرية

الجدول 3. التطوير المختبري لأجنة النقل النووي للكلاب.

الجدول 4. إنتاج كلب مستنسخ بواسطة تقنية نقل نطاقات الخلايا الجذعية.

أو حتى حملت. تم أيضًا نقل ثمانية وثلاثين أجنة كلاب مستنسخة تم إنتاجها من خلايا مانحة عولجت بالأكتيوسيد جراحيًا إلى قنوات البيض لثلاثة متلقين. تم تأكيد الحمل في إحدى الأمهات البديلات الثلاث ، اللواتي أنجبن في النهاية ، بعملية قيصرية ، لجرو سليم وزنه 354 جم (الجدول 4 والشكل 3). لتحديد أصل الجينوم ، تم إجراء تضخيم الأقمار الصناعية باستخدام جينات الكلب المستنسخ. السواتل المكروية عبارة عن سلاسل متكررة قصيرة ترادفية تستخدم في شاشات الجينوم لتتبع الوراثة وتحليل الارتباط في العائلات. تم استخدام سبع علامات سواتل دقيقة لتحديد أصل الجينوم في الكلب المستنسخ (الجدول 5). يمتلك الكلب المستنسخ وخلايا المتبرع المستخدمة لاستنساخ الكلب نفس علامات الأقمار الصناعية الدقيقة ، في حين أن المتبرع بالبويضات والبديل يتقاسم الأليلات الجزئية فقط (الجدول 5). في اختبار النسب الأمومي ، كان للكلب المستنسخ والبويضة المتلقية تسلسلات متطابقة من الحمض النووي للميتوكوندريا (mtDNA) ، مما يدل على أن mtDNA للكلب المستنسخ مشتق من متبرع البويضات (الجدول 6).

أكتيوسيدفي cistanche

مناقشة

يعد التزامن لدورة الخلايا المانحة عاملاً هامًا لتحسين كفاءة نقل نواة الخلية الجسدية [43]. معدل تطور الأجنة باستخدام تقنية نقل نواة الخلية ، وكفاءة استنساخ الإنتاج الحيواني

الشكل 3. الكلب المستنسخ: (أ) الموجات فوق الصوتية للجنين في حويصلة الجنين بعد 32 يومًا من نقل الجنين. (ب) البيجل المستنسخ في عمر شهرين.

أكتيوسيدفيcistancheيمكن مكافحة الشيخوخة