arلغة
الصفحة الرئيسية / معرفة / المحتوى

معرفة

الجزء 2: زرع مستخلص بياض الدجاج المستحث بـ PBMCs الأرانب كعلاج لإصابة نقص التروية الكلوية وضخه في الأرانب

Mar 07, 2022

للمزيد من المعلومات الرجاء الاتصال:tina.xiang@wecistanche.com

انقر فوق الرابط أدناه للحصول على الجزء 1

https://www.xjcistanche.com/news/part-1-transplantation-of-chicken-egg-white-ex-54616513.html

effects of cistanche：adrenal support supplement2

انقر لمعرفة المزيد من المعلومات. حول تحسين الكلى

نتائج

1. وضع العلامات الناجحة على PBMCs مع CFSE

أظهر ثنائي أسيتات كربوكسي فلورسين وإستر سكسينيميديل (CFSE) - PBMCs المسمى بـ PBMCs مضانًا أصفر وأخضر تحت مجهر مضان ، كما هو موضح في Eig 1B. بعد مواجهة DAPI ، أظهرت جميع الخلايا مضانًا أزرقًا ، كما هو موضح في الشكل 1 أ ، وأظهر تحليل التداخل في تلطيخ التألق أن الخلايا تم تصنيفها بنجاح ، كما هو موضح في Eig 1C.

CFSE-labeled PBMCs display yellow-green fluorescence. The background is black, and the cells show yellowgreen fluorescence. A. DAPI shows blue fluorescence. B. CFSE-labeled PBMCs display yellow-green fluorescence. C. Overlap between blue fluorescence and yellow-green fluorescence. All the cells are labeled with yellow-green fluorescence. D. The expression of the pluripotency-related genes NANOG, OCT4, and SOX2 was significantly increased after induction, whereas the expression of the somatic cell gene LMNA was decreased after induction. A statistical analysis showed that the two groups were significantly different (n = 3, p = 0.003). The difference in the somatic cell gene LMNA between the two groups was not statistically significant. E-M. Flow cytometry analyses of noninduced and induced PBMCs. E, F and G: OCT4-PE; H, I and J: SSEA-4-PE; and K, L and M: NANOG-PE. E, H and K: isotype control; F, I and L: noninduced PBMCs; and G, J and M: induced PBMCs. After induction, the proportion of cells positive for multipotency-related factors was significantly increased.

2. تحديد PBMCs بعد الاستقراء

2.1. مستويات التعبير النسبي لجينات الخلايا الجسدية والمتعلقة بتعدد القدرات في PBMCs غير المستحث والمستحث.تمت زيادة تعبير NANOG و OCT4 و SOX2 بشكل كبير في PBMCs المحفز بمستخلص بياض بيض الدجاج ، وانخفض التعبير عن جين الخلية الجسدية LMNA (الشكل 1D) ، مما يشير إلى أن الخلايا تمايزت إلى خلايا متعددة القدرات. أظهر التحليل الإحصائي أن المجموعتين كانتا مختلفتين بشكل كبير (ن =3 ، ص =0. 003). تم تحريض الخلايا ثلاث مرات ، وتم تضمين ثلاث مكررات بيولوجية في الدراسة. لم يكن الاختلاف في جين الخلية الجسدية LMNA بين المجموعتين ذا دلالة إحصائية.

2.2 كان عامل تعدد القدرات للـ PBMCs المستحث أعلى بكثير من عامل PBMCs غير المستحث.. من بين الخلايا غير المستحثة ، {{0}}. 0 كان 81 بالمائة موجبًا لـ OCT 4- PE ، بينما 99.3 بالمائة من الخلايا المستحثة كانت إيجابية لـ OCT 4- PE . كانت النسب المئوية للخلايا المستحثة وغير المستحثة الإيجابية لـ SSEA -4- 1. 0 8 بالمائة و 16.5 بالمائة على التوالي. علاوة على ذلك ، 0. 495 بالمائة من الخلايا غير المستحثة كانت موجبة لـ NANOG-PE ، بينما وجد أن 95.8 بالمائة من الخلايا المستحثة كانت موجبة لـ NANOG-PE (الشكل 1E -1 M). كانت النسب المئوية لخلايا التحكم في النظائر الموجبة لـ OCT 4- PE و SSEA -4- PE و NANOG-PE 0.546 بالمائة و 0.401 بالمائة و 0.249 بالمائة على التوالي.

2.3 أسفرت التحليلات المناعية الكيميائية عن نتائج إيجابية لـ PBMCs المستحث.أظهرت التحليلات الكيميائية الهيستوكيميائية المناعية لـ OCT4 و NANOG أن PBMCs المستحث ، ولكن ليس PBMCs غير المستحث ، عبرت عن هذه العلامات (الشكل 2 أ -2 د). يظهر الشكل 2A و 2 C PBMCs غير المستحث ، ويظهر الشكل 2B و 2 D PBMCs المستحثة. بالإضافة إلى ذلك ، يظهر تعبير OCT4 في الشكل 2A و 2 B ، ويظهر الشكل 2C و 2D تعبير NANOG.

2.4 أسفرت تحليلات اللطخة الغربية عن نتائج إيجابية للـ PBMCs المستحث.وفقًا لنتائج اللطخة الغربية ، تم التعبير عن OCT4 في PBMCs المستحث ولكن ليس في PBMCs غير المستحث (EFig 2E).

2.5 كانت أطوال التيلومير النسبية أطول بشكل ملحوظ في PBMCs المستحث.استنادًا إلى نتائج PCR الكمية ، فإن التيلوميرات المستحثة لـ PBMCs (1.838 0 7 ± 0. 84756) كانت أطول بكثير من تلك الخاصة بـ PBMCs غير المستحث (1 ± 0.08307) (Eig 2E ، تعني ± الانحرافات المعيارية ، n =5، p =0. 013) ، مما يشير إلى أن الخلايا تمايزت إلى خلايا جذعية شابة. زادت أطوال التيلومير النسبية في الواقع بعد عدم التمايز.

effects of cistanche improve immunity (9)

3. تم إنخفاض مستويات نيتروجين اليوريا والكرياتينين في مجموعة المعالجة بالخلايا المستحثة

كانت مجموعة التحكم في النموذج تحتوي على نيتروجين يوريا يبلغ 22.1 مليمول / لتر ومحتوى كرياتينين يبلغ 452 ميكرومول / لتر. بعد ثلاث جولات من الزرع بالخلايا المستحثة ، كان محتوى نيتروجين اليوريا 7 مليمول / لتر ، وكان محتوى الكرياتينين 74 ميكرو مول / لتر ؛ كانت هذه القيم مماثلة للمستويات العادية. ظلت المستويات في مجموعة العلاج بالخلايا غير المستحثة مرتفعة (الشكل 2G). أظهر التحليل الإحصائي فروق ذات دلالة إحصائية بين نتائج المجموعات الأربع (ص=0. 031).

4. انخفض تركيز البروتين في البول في المجموعة المستحثة

كان تركيز البروتين البولي في المجموعة الضابطة في النموذج 8.17 مجم / مل. بعد العلاجات الثلاثة ، كان تركيز البروتين البولي في المجموعة المستحثة 4.35 مجم / مل ، وهو مشابه للمستوى الطبيعي. ومع ذلك ، ظل محتوى البروتين البولي للمجموعة غير المستحثة مرتفعًا عند 7.96 مجم / مل (الشكل 2H). أظهر التحليل الإحصائي فروق ذات دلالة إحصائية بين النتائج المتحصل عليها من المجموعات الأربع (ص =0. 001).

Fig 2. Immunohistochemical analysis of noninduced and induced PBMCs. A and C show noninduced PBMCs. B and D show induced PBMCs. The primary antibody used to obtain the results shown in A and B was OCT4, and that used to obtain the results displayed in C and D was NANOG. E. Western blot analyses of noninduced and induced PBMCs. A primary antibody against OCT4 was used and detected by ECL. The results showed that OCT4 is expressed in induced PBMCs but not in noninduced PBMCs. The internal reference was GAPDH. F. Quantitative PCR analysis of the relative telomere length. The relative telomere length was significantly increased in PMBCs induced with the egg white extract, which indicated that the cells became younger (mean±standard deviation, n = 5, �p = 0.013). G. Serum urea nitrogen levels in the four groups after administration of the three treatments (mean±standard deviation, n = 10). A statistical analysis showed significant differences among the results of the four groups (p = 0.031). H. Serum creatinine levels in the four groups after administration of the three treatments (mean±standard deviation, n = 10). A statistical analysis showed significant differences among the results of the four groups (p = 0.041). I. Quantitative analysis of the urinary protein concentrations in the four groups after administration of the three treatments (mean ± standard deviation, n = 10). A statistical analysis showed significant differences among the results of the four groups (p = 0.001).

5. تم الكشف عن الخلايا المصنفة في المجموعة المستحثة

كما هو موضح في الشكل 3 أ -3 د ، تم توزيع العديد من الخلايا الفلورية في كليتي مجموعة معالجة الخلايا المستحثة ، بينماأنسجة الكلىمن المجموعات الثلاث الأخرى لم تعرض أي خلايا فلورية. التفسير المحتمل هو أن الخلايا المستحثة يتم نقلها إلى الكلية المصابة لإصلاح الضرر. يشير توزيع PBMCs المسمى الفلورسنت في أقسام الكلى المجمدة إلى أن هذه الخلايا كانت متورطة في إصلاح الكلى المصابة.

6. أظهر هيكل الكلى للمجموعة المستحثة النمط الظاهري الطبيعي

بناءً على نتائج تلطيخ الهيماتوكسيلين إيوزين (HE) ، تضرر هيكل كليتي الأرانب في مجموعة التحكم في النموذج. بعد العلاج بالخلايا المستحثة ، فإنكلويأظهرت بنية الأنسجة النمط الظاهري الطبيعي. في المقابل ، استمر تلف أنسجة الكلى في مجموعة العلاج بالخلايا غير المستحثة (الشكل 3E -3 H). تظهر درجة النخر الأنبوبي الحاد (ATN) في الشكل 3I.

7. تم تقليل IOD من مجموعات الخلايا المستحثة بشكل كبير

تم استخدام برنامج Image-Pro Plus 6. 0 (Media Cybernetics، Inc.، Rockville، MD، USA) لإجراء تحليل كيميائي مناعي للكثافة الضوئية التراكمية (IOD). لكل مجموعة ، تم اختيار ستة حقول تكبير على الأقل 0 0 بشكل عشوائي من كل قسم ، وتم التقاط الصور. حاولنا عرض مجال الرؤية بأكمله للتأكد من أن كل صورة لها نفس الخلفية. تم استخدام برنامج Image-Pro Plus 6.0 لتحديد نفس اللون البني كمعيار موحد للحكم على التلوين الإيجابي في جميع الصور. تم تحليل كل صورة لتحديد IOD للتلوين الإيجابي. تمت زيادة IOD بشكل كبير في مجموعة التحكم في النموذج ، في حين تم تقليل IODs للتحكم الطبيعي ومجموعات الخلايا المستحثة وتقليلها بشكل كبير ، على التوالي. لم يتم تقليل IOD لمجموعة العلاج بالخلايا غير المستحثة بشكل ملحوظ مقارنةً بمجموعة التحكم في النموذج (الشكل 3). أظهر التحليل الإحصائي فروق ذات دلالة إحصائية بين نتائج المجموعات الأربع (ص =0. 001).

Fig 3. Observations of labeled cells in frozen kidney sections. A. No labeled cells were observed in the normal control group. B. No labeled cells were observed in the model control group. C. Labeled cells were observed in the induced cell treatment group. D. No labeled cells were observed in the noninduced cell treatment group. E-H. HE staining of kidneys from the four groups after administration of the three treatments revealed structural changes. E. A normal kidney structure was observed in the normal control group. F. Large amounts of renal tubular necrosis at the edge of the renal cortex and disappearance of the epithelial cell nucleus, as indicated by the yellow arrow, were observed in the model control group. Some of the tubules exhibited slight calcification, as indicated by the green arrows. The numbers of mesangial cells were decreased, and telangiectasia appeared, as indicated by the black arrows. G. A normal kidney structure was observed in the induced cell treatment group. A small amount of renal tubular necrosis was observed at the edge of the renal cortex. Epithelial cell nuclei disappeared, as shown by the black arrow. H. Focal mononuclear cell infiltrates were observed in the noninduced cell treatment group, as indicated by the black arrow. The number of renal tubular epithelial cell nuclei was decreased, and cellular degeneration, cell body swelling, and light cytoplasmic staining were observed, as indicated by the yellow arrows. I. Acute tubular necrosis (ATN) score (mean±standard deviation, n = 3). A statistical analysis showed significant differences among the results of the four groups (p = 0.032). � indicates p<0.05 compared with the induced group. J: TGF-β immunohistochemical analysis (mean±standard deviation, n = 3). A statistical analysis showed significant differences among the results of the four groups (p = 0.022). � indicates p<0.05 compared with the model group.

8. تحسن التليف في المجموعة المستحثة

لوحظ ترسب كبير من ألياف الكولاجين في مجموعة التحكم في النموذج ، وحدث تليف خطير. تم تحسين هذا التليف أو القضاء عليه في مجموعة العلاج بالخلايا المستحثة ، بينما لا يزال التليف الشديد يُلاحظ في المجموعة المعالجة بالخلايا غير المستحثة (Eig 4A -4 D).

9. لم يلاحظ سماكة الغشاء القاعدي في المجموعة المستحثة

تمت زيادة سماكة الغشاء القاعدي الكبيبي والغشاء القاعدي للمحفظة الكلوية والغشاء الخلالي النبيبي بشكل كبير في مجموعة التحكم في النموذج. في مجموعة المعالجة الخلوية المستحثة ، لم يظهر الغشاء القاعدي أي سماكة ملحوظة ، بينما كانت الأغشية القاعدية السميكة لا تزال تُلاحظ في مجموعة معالجة الخلايا غير المستحثة (الشكل 4E -4 H). تظهر درجات سمك الغشاء القاعدي في الشكل 4I.

Masson's trichrome staining of kidney sections from the four groups after the three treatments. A. The normal control group showed no obvious collagen fiber deposition or fibrosis. B. The model control group showed a large number of collagen fibers, hyperplasia, and severe fibrosis. C. The treatment with the induced cells improved or eliminated the fibrosis observed in the model control group. D. In the noninduced cell-treated group, a large number of collagen fibers, hyperplasia, and severe fibrosis were observed. E-G. Renal PAS staining of the four groups after the three treatments. E. Significant thickening of the basement membrane was not observed in the normal control group. F. Significant thickening of the glomerular basement membrane, basilar membrane of the renal capsule, and tubular basement membrane was observed in the model control group. G. After treatment, significant thickening of the basement membrane was not observed in the induced cell treatment group. H. A thicker basement membrane was observed in the noninduced cell treatment group. I. Basement membrane thickness score (mean±standard deviation, n = 3). A statistical analysis showed significant differences among the results of the four groups (p = 0.024). � indicates p<0.05 compared with the model group. J. Renal tissue immunofluorescence results. The immunofluorescence results showed that the transplanted cells exhibited green and red fluorescence at the same time, which indicated that the transplanted cells had differentiated into tubular epithelial cells (TECs).

10. الخلايا المزروعة متباينة في الخلايا الطلائية الأنبوبية

أظهرت نتائج الفلورة المناعية أن الخلايا المزروعة أظهرت تألقًا أخضر وأحمرًا في نفس الوقت ، مما يشير إلى أن الخلايا المزروعة تم تمايزها إلى خلايا طلائية أنبوبية (TECs) (الشكل 4J).

11. تم زيادة المواد المحددة في المجموعة النموذجية وانخفضت بعد العلاج

في وضع الأيونات السالبة ، كانت المادتان اللتان أظهرتا مستويات متزايدة بشكل ملحوظ في مجموعة التحكم في النموذج هما 2'-deoxy-D-ribose و N-acetylglucosamine 1- phosphate (الشكل 5 أ). انخفضت مستويات هذين المركبين بشكل ملحوظ بعد العلاج بالخلايا المستحثة مقارنة بالمستويات الموجودة في مجموعة التحكم في النموذج (الشكل 5 أ). في وضع الأيونات الموجبة ، مستويات ثلاث مواد (D-pinitol ، lysyl-glycine ، و glutamyl -asparagine) بشكل ملحوظ في مجموعة التحكم في النموذج (الشكل 5 ب) ، وانخفضت مستويات هذه المواد الثلاثة بشكل ملحوظ بعد العلاج بالخلايا المستحثة مقارنة بتلك الموجودة في مجموعة التحكم في النموذج (الشكل 5 ب)

Results of the metabolomics analysis. A: The results obtained in the negative ion mode showed significantly increased levels of two substances in the model control group compared with the normal control group (mean ±standard deviation, n = 5). B: In the positive ion mode, the levels of three substances were significantly increased in the model control group compared with the normal control group (mean±standard deviation, n = 5). � indicates p = 0.035 compared with the model group. In the positive ion mode, the levels of three substances were significantly decreased in the induced cell treatment group compared with the model control group (mean±standard deviation, n = 5). � indicates p = 0.041 compared with the model group.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0244160.g005

في وضع الأيونات السالبة ، زادت مستويات المادتين المحددتين في المجموعة النموذجية وانخفضت بعد العلاج ، مما يشير إلى وجود علاقة ذات مغزى بين مستويات المادتين.

في وضع الأيونات الموجبة ، زادت مستويات المواد الثلاثة المحددة في مجموعة التحكم في النموذج وانخفضت بعد العلاج ، مما يشير إلى وجود ارتباطات ذات مغزى بين مستويات هذه المواد الثلاثة.

12 - لوحظت تغيرات كبيرة في استقلاب بيريميدين ومسارات التخليق الحيوي للفينيل ألانين والتيروزين والتربتوفان

في وضع الأيونات السالبة ، تم اكتشاف تغيير كبير في مسار التمثيل الغذائي للبيريميدين بين مجموعة التحكم في النموذج ومجموعة التحكم العادية (Eig6A). بالإضافة الى،

لوحظت تغييرات كبيرة في هذا المسار في مجموعة معالجة الخلايا المستحثة مقارنة بمجموعة التحكم في النموذج (الشكل 6 ب) ، والتي أشارت إلى أن مسار استقلاب البيريميدين هو مسار متغير بشكل كبير. في تحليل وضع الأيونات الإيجابية ، تم تغيير مسارات التخليق الحيوي للفينيل ألانين والتيروزين والتربتوفان بشكل كبير في مجموعة التحكم في النموذج مقارنة بمجموعة التحكم العادية (الشكل 6 ج) ، وتم تغيير هذه المسارات بشكل كبير في مجموعة معالجة الخلايا المستحثة مقارنة مع مجموعة التحكم في النموذج. مجموعة التحكم النموذجية (Eig 6D) ، والتي أشارت إلى أن طرق مسار التخليق الحيوي للفينيل ألانين والتيروزين والتربتوفان هي مسارات ذات مغزى. في الشكل 6 ، يشير لون الفقاعة الأغمق والحجم الأكبر إلى اختلاف أكثر أهمية. كما يتضح من الأسهم في الشكل 6 أ و 6 ب ، فإن الاختلاف في مسار استقلاب بيريميدين كبير ، وكما يتضح من الأسهم في الشكل 6 ج و 6 د ، فإن الاختلافات في مسارات التخليق الحيوي للفينيل ألانين والتيروزين والتربتوفان كبيرة.

Analysis of metabolic pathways in the four groups after treatment.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0244160.g006


effects of cistanche：relieve adrenal fatigue2

مناقشة

بَصِيرالكلىالإصابة الناجمة عن نقص التروية - ضخه هو مرض سريري شائع ، ومعدل وفيات المرضى الذين يعانون من إصابات الكلى الحادة ما يقرب من 30 في المائة إلى 50 في المائة بسبب إجراءات العلاج المحدودة [14]. أثناء نقص التروية ، يؤدي تنشيط الإنزيمات إلى تدمير الهيكل الخلوي ، وتلف غشاء الخلية ، وتدهور الحمض النووي ، مما يؤدي في النهاية إلى نخر الخلية وموت الخلايا المبرمج [15]. كما ينشط نقص التروية - ضخه البروتينات التكميلية ، السيتوكينات ، والكيموكينات ، من بين الجزيئات الأخرى ، والآليات الكامنة وراء الإصابة بنقص التروية - ضخه لها أهمية كبيرة [16]. بالإضافة إلى ذلك ، تعزز الخلايا الجذعية المزروعة هجرة وتوظيف الخلايا الجذعية الكلوية المتبقية إلى موقع الإصابة وتحفز تمايزها في TECs ، ولكن الآلية الدقيقة غير واضحة [17].

معدل وفيات المرضى المصابين بإصابة نقص التروية - ضخه مرتفع بسبب نقص العلاج السريري الفعال [18]. تتطلب الحالة علاجًا بديلاً كلويًا طويل الأمد أو مدى الحياة أوزرع الكلى[19]. إن الآلية المرضية الفيزيولوجية لإصابة نقص التروية - ضخه معقدة للغاية وتنتج عن تفاعلات عديدة بين الخلايا الالتهابية والخلايا البطانية الوعائية والسيتوكينات [20]. في السنوات الأخيرة ، أصبحت الخلايا الجذعية الوسيطة محورًا للأبحاث حول إصابة نقص التروية - ضخه [21] وقد ثبت أنها تحسن من نقص التروية الناجم عن ضخهإصابة كلوية. كما هو مبين في الدراسات التي تستخدم نماذج نقص التروية - ضخه ، تلعب الخلايا الجذعية الوسيطة دورًا مهمًا في تنظيم المناعة ، والمشاركة في إعادة بناء الأوعية الدموية [22] ، وإصلاح البيئة المكروية الكلوية عن طريق إفراز عوامل مضادة للبكتيريا ، والعوامل الانقسامية ، والعوامل المسببة للأوعية. كشفت دراسة حديثة باستخدام الخلايا الجذعية من أصول مختلفة أن الخلايا الجذعية متعددة القدرات تحفز أنواعًا أخرى من الخلايا الجذعية [22]. نعتقد أن الخلايا المستحثة من المرجح أن تكون خلايا جذعية متوسطة لأنها أكثر نضجًا من الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات.

بعد زرع الخلايا الجذعية المحفزة ، تتفاعل الجزيئات المعبر عنها على سطح الخلايا الجذعية المحفزة متعددة القدرات مع الخلايا التائية لتنظيم نشاطها البيولوجي. يمكن للخلايا التائية الإفلات من جهاز المناعة بعد التلف وتقليل شدة الاستجابة المناعية في الأنسجة المحيطة ، وبالتالي تلعب هذه الخلايا دورًا في حماية وظيفة الأنسجة التالفة إلى حد ما [23]. نجحنا في إنشاء نموذج أرنب للتليف الخلالي الكلوي وأثبتنا أن زرع الخلايا الجذعية الذاتية المستحثة يمكن أن يصلح تلف الكلى في غضون 8 أسابيع [24]. توفر الخلايا الجذعية بيئة مكروية مفيدة لإصلاح الضرر الظهاري الأنبوبي الكلوي [24]. في هذه التجربة ، بعد إعطاء ثلاث علاجات أسبوعية متتالية ، تمت استعادة مستويات الكرياتينين في الدم ومستويات نيتروجين اليوريا في مجموعة العلاج بالخلايا المستحثة إلى نفس المستوى الذي لوحظ في المجموعة الضابطة العادية ، في حين أن المستويات في العلاج بالخلايا غير المستحثة والتحكم في النموذج تم رفع المجموعات بشكل ملحوظ.

كما يتضح من Haynesworth et al. [25] ، تفرز الخلايا الجذعية الوسيطة مجموعة متنوعة من عوامل النمو وعوامل تحفيز المستعمرات وجزيئات الالتصاق والإنترلوكينات (IL -6 ، IL -7 ، IL -8 ، I {{5 }} و IL -14 و IL -15) ، والتي تعزز الانقسام من TEC الكلوي وإصلاح الأنسجة وبالتالي تمنع ارتفاع تركيزات نيتروجين الكرياتينين واليوريا.

في هذه الدراسة ، تم الكشف عن مستويات التعبير عن عوامل تعدد القدرات SSEA -4 ، و NANOG ، و OCT4 في PBMCs المستحث بواسطة قياس التدفق الخلوي ، وكشفت النتائج أن PBMCs غير متمايزة في خلايا متعددة القدرات. أظهر التحليل الكمي لـ PCR أن التيلوميرات في PBMCs المستحثة كانت أطول بكثير من تلك الموجودة في PBMC غير المستحث ، واستنادًا إلى أدلتنا ، فإن PBMCs التي تم الحصول عليها من الدم المحيطي للأرانب تتمايز في الخلايا الجذعية متعددة القدرات بعد العلاج بمستخلصات بياض الدجاج وتظهر خصائص جذع اللحمة المتوسطة الخلايا [9] ، والتي تسمح لها في نهاية المطاف بالمشاركة في إصلاح الإصابة الكلوية. أظهرت الدراسات أن خلايا بيض الثدييات ومستخلصات خلايا بيض Xenopus يمكنها إعادة برمجة الخلايا الجسدية [6،7]. أظهر بحثنا السابق أن مستخلص بيض الدجاج يمكنه أيضًا إعادة برمجة الخلايا الجسدية [5،9]. بيضة الدجاج هي أكبر خلية بيضة ، وبالتالي فإن قدرتها على إعادة برمجة الخلايا الجسدية ستعمل على تقدم الأبحاث البيولوجية للخلية. تعد خطوات إعادة البرمجة التي يسببها مستخلص خلية بويضة الثدييات وخطوات إعادة البرمجة التي يسببها مستخلص خلية بيض Xenopus مرهقة ، ويصعب الحصول على المستخلصات ؛ ومع ذلك ، فإن بيض الدجاج هو أكبر خلايا البيض ، وبالتالي يمكن الحصول على كمية كبيرة من مستخلص بياض بيض الدجاج. إذا تم تنفيذ الإجراء بطريقة معقمة ، فلن يحتاج المستخلص الناتج إلى الترشيح والتعقيم. يمكن الحفاظ على نشاط المستخلص جيدًا. كررنا تجربة الحث باستخدام التركيزات النهائية لمستخلص بياض بيض الدجاج بنسبة 10 في المائة ، و 20 في المائة ، و 30 في المائة ، و 40 في المائة ، و 50 في المائة للحث على PBMCs (انظر Sl إلى S3 Figs). مع زيادة تركيز مستخلص بياض بيض الدجاج ، زاد المعدل الإيجابي لعامل تعدد القدرات تدريجياً ، وتم الحصول على أعلى معدل إيجابي بتركيز نهائي قدره 50٪. ومع ذلك ، فإن تركيز مستخلص بياض بيض الدجاج أعلى من 50 في المائة سيؤثر على نمو الخلايا. استخدمنا الأنزيم البروتيني ، و DNase ، و RNase لتحليل البروتين ، والحمض النووي ، والحمض النووي الريبي في مستخلص بياض البيض ، على التوالي ، ثم أجرينا تجربتنا التعريفي. وجدنا أن مستخلص بياض البيض الذي تم الحصول عليه بعد تحلل البروتين لم يعد لديه القدرة على إعادة برمجة الخلايا ، كما أن مستخلص بروتين الدجاج الذي تم الحصول عليه بعد تحلل الحمض النووي الريبي (DNA) والحمض النووي الريبي (RNA) لا يزال لديه القدرة على إعادة برمجة الخلايا. لذلك ، أكدت هذه النتائج أن الدور الرئيسي للمستخلص يلعبه مكون البروتين (النتائج غير معروضة).

قمنا أيضًا بتحليل عينات دم الحيوانات بعد أسبوع واحد من العلاج. ومع ذلك ، فإن الاختلاف بين المجموعات الأربع لم يكن كبيرا. وبالتالي ، فإننا نعرض النتائج التي تم الحصول عليها للمجموعات الأربع فقط بعد ثلاث علاجات. يشير توزيع PBMCs المسمى الفلورسنت في أقسام الكلى المجمدة إلى أن هذه الخلايا كانت متورطة في إصلاح الكلى المصابة. أظهر تلطيخ HE ضررًا في بنية الكلى في مجموعة التحكم في النموذج. بعد العلاج بالخلايا المستحثة ، أظهرت الكلى بنية طبيعية ، بينما لوحظ تلف بنية الكلى في مجموعة العلاج بالخلايا غير المستحثة. بعد ثلاث علاجات ، أظهر تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان لأقسام الكلى من المجموعات الأربع ترسبًا كبيرًا لألياف الكولاجين وتليفًا خطيرًا في مجموعة التحكم في النموذج. تم تحسين هذا التليف أو القضاء عليه من خلال العلاج بالخلايا المستحثة ، بينما لا يزال التليف الشديد ملاحظًا في مجموعة العلاج بالخلايا غير المستحثة ، وأظهر تحليل الأيض الكلوي للمجموعات الأربع التي أجريت في وضع الأيونات السالبة زيادة ملحوظة في مستويات 2'- deoxy-D-ribose و N-acetylglucosamine 1- فوسفات في مجموعة التحكم في النموذج مقارنة بمجموعة التحكم العادية ، وانخفضت مستويات هذه المواد بشكل ملحوظ في مجموعة معالجة الخلايا المستحثة مقارنة بمجموعة التحكم في النموذج. في وضع الأيونات الموجبة ، زادت مستويات خمس مواد بشكل كبير في مجموعة التحكم في النموذج مقارنة بمجموعة التحكم العادية ، وانخفضت مستويات ثلاثة من هذه المواد الخمسة بشكل كبير في مجموعة معالجة الخلايا المستحثة مقارنة بمجموعة التحكم في النموذج .

الآليات الرئيسية المفترضة الكامنة وراء الإصلاح الملحوظ للكلية والانخفاض المصاحب في الاستجابة الالتهابية مذكورة أدناه. ① تتمايز PBMCs المستحثة إلى TECs أو تندمج مع الخلايا الباقية لتعزيز إصلاح أنسجة الكلى مباشرة. توفر التأثيرات التآزرية للسيتوكينات المختلفة بيئة مكروية جيدة لإصلاح أنسجة الكلى [26]. بعد ثلاث عمليات زرع من PBMCs المستحثة ، عادت وظيفة الكلى والمؤشرات المرضية إلى المستويات الطبيعية ، واستمرت هذه المستويات الطبيعية حتى نهاية التجربة ، مما يشير إلى أن الخلايا الجذعية متعددة القدرات المزروعة عززت بشكل فعال إصلاح بنية ووظيفة الأنسجة الكلوية.

على الرغم من أن الآلية المحددة التي من خلالها تعزز PBMCs المستحثة الإصلاح الهيكلي والوظيفي للكلية لم يتم فهمها بالكامل بعد ، فإن نتائج هذه الدراسة تشير إلى أن الزرع الوريدي للـ PBMCs المستحث يعزز الإصلاح بعد إصابة الكلى الحادة. توفر هذه النتائج مرجعا قيما للباحثين الذين يدرسون وظيفة الخلايا الجذعية متعددة القدرات في تجديد الكلى التالفة وفي العلاج السريري لأمراض الكلى الحادة والمزمنة.

باختصار ، زرع الخلايا الجذعية المستحث متعدد القدرات له أهمية كبيرة لإصلاح الخلايا المتني في النماذج الحيوانية للفشل الكلوي وأمراض الكلى الأخرى.

effects of cistanche：improve kidney function3.jpg

الاستنتاجات

أدى علاج PBMCs مع مستخلص بياض بيض الدجاج إلى زيادة كبيرة في التعبير عن الجينات والبروتينات المرتبطة بتعدد القدرات ، مما يشير إلى أن الخلايا قد انفصلت عن الخلايا الجذعية متعددة القدرات. وبالتالي ، فإن PBMCs المستحثة غير متمايزة في الخلايا الجذعية متعددة القدرات ويمكن استخدامها في العلاجإصابة في الكلى. هناك حاجة إلى بحث مستقبلي لتحديد الجزيئات الرئيسية في مستخلص بياض بيض الدجاج وبالتالي تحسين كفاءة الحث.

مراجع

1. Yuan X و Li D و Chen X و Han C و Xu L و Huang T وآخرون. تحمي الحويصلات خارج الخلية من الخلايا اللحمية اللحمية متعددة القدرات المشتقة من الخلايا الجذعية التي يسببها الإنسان (hiPSC-MSCs) من نقص التروية الكلوية / إصابة إعادة التروية عن طريق توصيل بروتين النوعية (SP1) وتنشيط النسخ من sphingosine kinase 1 وتثبيط التنخر. ديس موت الخلية. 2017 ؛ 8 (12): 3200. Epub 2017/12/14. https://doi.org/10. 1038 / ثانية 41419-017-0041-4 [pii]. PMID: 29233979 ؛ PubMed Central PMCID: PMC5870585.

2. فهمي س.س. ، سليمان أ. م ، الأنصاري م ، الحميد ، محسن هـ. الفعالية العلاجية لزراعة الخلايا الجذعية الوسيطة للحبل السري للإنسان ضد نقص التروية الكلوية / إصابة إعادة التروية في الجرذان. خلية الأنسجة. 2017 ؛ 49 (3): 369-75. Epub 2017/05/10. S 0040-8166 (16) 30171-9 [pii] https://doi.org/10.1016/j.tice. 2017.04.006 PMID: 28476205.

3. Hu H ، Zou C. الخلايا الجذعية الوسيطة في إصابة نقص التروية الكلوية - ضخه: منظورات بيولوجية وعلاجية. تحليل الخلايا الجذعية بالعملة. 2017 ؛ 12 (3): 183-7. Epub 2016/10/27. https://doi.org/10. 2174 / 1574888X11666161024143640 [pii]. PMID: 27781940.

4. Zhou L و Song Q و Shen J و Xu L و Xu Z و Wu R وآخرون. مقارنة بين جزء الأوعية الدموية اللحمية الدهنية البشرية والخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من الدهون للتخفيف من إصابة نقص التروية الكلوية / إعادة التروية. مندوب علوم .2017 ؛ 7: 44058. Epub 2017/03/10. https://doi.org/10.1038/srep44058 [pii]. بميد: 28276451 ؛ PubMed Central PMCID: PMC5343423.

5. Ruan GP ، Wang JX ، Pang RQ ، Yao X ، Cai XM ، Wang Q ، et al. يحافظ العلاج باستخدام مستخلصات بياض الدجاج أو البيض الكامل على بقاء خلايا الطحال وتمايزها. تكنولوجيا الخلايا. 2012 ؛ 64 (5): 541-51. Epub 2012/02/22. https://doi.org/10.1007/s10616-012-9431-8 PMID: 22350684 ؛ PubMed Central PMCID: PMC3432533.

6. Miyamoto K و Tsukiyama T و Yang Y و Li N و Minami N و Yamada M et al. تحفز المقتطفات الخالية من الخلايا من بويضات الثدييات جزئيًا إعادة البرمجة النووية في الخلايا الجسدية. بيول ريبرود. 2009 ؛ 80 (5): 935-43. Epub 2009/01/24. https://doi.org/10.1095/biolreprod.108.073676 [pii]. PMID: 19164171.

7. Alberio R، Johnson AD، Stick R، Campbell KH. إعادة النمذجة النووية التفاضلية للخلايا الجسدية للثدييات بواسطة خلية البويضة Xenopus laevis وسيتوبلازم البيض. الدقة خلية الخبرة. 2005 ؛ 307 (1): 131-41. Epub 2005/06 / 01. S 0014-4827 (05) 00088-1 [pii] https://doi.org/10.1016/j.yexcr.2005.02.028 PMID: 15922733.

8. Hansis C، Barreto G، Malory N، Niehrs C. إعادة البرمجة النووية للخلايا الجسدية البشرية بواسطة مستخلص بيض Xenopus يتطلب BRG1. كور بيول. 2004 ؛ 14 (16): 1475 - 1480. Epub 2004/08/25. https://doi.org/10. 1016 / j.cub.2004.08.031 [pii]. بميد: 15324664.

9. Ruan GP، Yao X، Shu J، Liu JF، Pang RQ، Pan XH. تعمل مستخلصات بياض الدجاج على تعزيز تعبير OCT4 و NANOG ونمو التيلوميرات في خلايا 293T. خلية مول بيول (Noisy-le-grand). 2017 ؛ 63 (7): 59-65. Epub 2017/08/26. https://doi.org/10.14715/cmb/2017.63.7.10 PMID: 28838341.

10. اتحاد الزهراني. يحسن الميلاتونين الإمكانات العلاجية للخلايا الجذعية المشتقة من اللحمة المتوسطة ضد إصابة نقص التروية الكلوية وضخه في الفئران. Am J Transl Res. 2019 ؛ 11 (5): 2887-907. Epub 2019/06/21. بميد: 31217862 ؛ PubMed Central PMCID: PMC6556638.

11. Lee KW و Kim TM و Kim KS و Lee S و Cho J و Park JB وآخرون. إصابة نقص التروية الكلوية - ضخه في نموذج القرد المصاب بمرض السكري والاختبار العلاجي للخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من نخاع العظام البشري. J داء السكري الدقة. 2018 ؛ 2018: 5182606. Epub 2018/08/30. https://doi.org/10.1155/2018/5182606 PMID: 30155487 ؛ PubMed Central PMCID: PMC6092988.

12. Xie LB، Chen X، Chen B، Wang XD، Jiang R، Lu YP. التأثير الوقائي للخلايا الجذعية الوسيطة للنخاع العظمي المعدلة باستخدام كلوثو على إصابة نقص التروية الكلوية وضخه. رن فشل. 2019 ؛ 41 (1): 175-82. Epub 2019/04/04. https://doi.org/10.1080/0886022X.2019.1588131 PMID: 30942135 ؛ PubMed Central PMCID: PMC6450585.

13. Zhu G و Pei L و Lin F و Yin H و Li X و He W وآخرون. تحمي Exosomes من الخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من نخاع العظام البشري من نقص التروية الكلوية / إصابة إعادة التروية عن طريق نقل miR -199 a -3 p. J خلية فيسيول. 2019 ؛ 234 (12): 23736–49. Epub 2019/06/11. https://doi.org/10.1002/jcp.28941 PMID: 31180587.

14. شين ب ، ليو جي ، زانغ ف ، وانغ واي ، تشين واي ، زهو ، وآخرون. الجسيم الخارجي الإيجابي CCR2 المنطلق من الخلايا الجذعية الوسيطة يثبط وظائف البلاعم ويخفف من الإصابة بنقص التروية / الإصابة الكلوية التي يسببها ضخ الدم. كثافة الخلايا الجذعية. 2016 ؛ 2016: 1240301. Epub 2016/11/16. https://doi.org/10.1155/2016 / 1240301 PMID: 27843457 ؛ PubMed Central PMCID: PMC5098097.

15. Ying MK ، Chen ZM ، Wang YC ، Feng S ، Lin C ، Chen FF ، et al. [تأثير الخلايا الجذعية اللحمية المتوسطة الكلوية بعد إصابة نقص التروية الكلوية - ضخه في الفئران]. Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2016 ؛ 96 (20): 1573–7. Epub 2016/06/09. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2016.20.006 PMID: 27266685


قد يعجبك ايضا